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Los Organismos Modificados

Genticamente (OMG)
1. Los OMG
Organismos Modificados Genticamente

Los organismos modificados genticamente (OMG), son


organismos en cuyo genoma se ha incorporado, de forma estable,
un segmento de ADN extrao, utilizando tcnicas de Ingeniera
Gentica

Insercin en el genoma
Plsmidos integrativos
recombinacin
1. Los OMG
EJEMPLOS DE OMG
1.1. Que son los OMG?

- Para introducir uno o varios genes nuevos


- Modificar la funcin de un gen propio

- Planta transgnica muestra una nueva caracterstica


- Gen se comporta y se transmite a la descendencia como uno gen ms
1. Los OMG
Utilidad de los Organismos Modificados Genticamente

Que sus productos tengan una vida


Resistencia a plagas de
comercial ms larga
insectos

Maz Bt
Flavr Svr Lepidpteros

Resistencia a herbicidas Tengan mejores cualidades


nutritivas

Arroz dorado
Soja Roundup Ready -caroteno (Vitamina A)
Transferencia de genes a plantas

Vectores basados en el plsmido pTi de


Agrobacterium tumefaciens

Virus vegetales y vectores derivados

Introduccin de DNA desnudo


1. Los OMG
1.3. Cmo se hace una planta transgnica?
Principal tcnica para desarrollar plantas transgnicas

- Agrobacterium tumefaciens
- Transferir parte de su material gentico al genoma de las plantas

- El ADN que transfiere la bacteria se utiliza como vector

Secuencia
de inters
Plsmido Ti

Agrobacterium tumefaciens
Procedimiento para obtener una planta transgnica
1. Los OMG
Propagacin y estudios ense campo
1.3. Cmo hace una planta transgnica?

- Crecimiento de plntulas en medio selectivo


- Propagacin en campo
Agrobacterium tumefaciens

-Bacteria Gram-negativa
- Infecta dicotiledoneas
- Provoca tumores de agalla
(crown gall)
PLSMIDO T

- Regin transferida (20kb)


Plsmido Ti onc: oncogenes
200kb ops: sntesis de opina
noc

Virulencia
Transferencia
del T DNA
(SST-IV)
Regin para transferencia a otras bacterias
VARIEDAD DE GENES vir

Sistema de dos componentes

Similar a conjugacin
TRANSFERENCIA DEL DNA-T POR
CONJUACIN
PRODUCCIN DE PROTENAS EN LA CLULA
VEGETAL
PRODUCCIN DE OPINAS

-Genes con promotores eucariticos


-Seales de poliadenilacin en 3
Virus de plantas como vectores
-Virus de DNA
- Caulimovirus (cadena doble)
- Geiminivirus (Cadena sencilla)

-Virus de RNA

- Regulacin diferente (ncleo,


citoplasma)
VIRUS DE PLANTAS COMO VECTORES

- Ventajas frente a Agrobacterium:

- El virus es directamente infeccioso

- Se pueden infectar monocotiledoneas.

- Inconvenientes:

- Son agentes patgenos que debilitan a las plantas

- Su genoma no se integra en el de la planta, como sucede con


Agrobacterium.
Virus como vectores de transformacin vegetal

Caulimovirus
-Virus del mosaico de la coliflor (CaMV):
Genoma de dsDNA, 8kb
- dicotiledoneas
- Infecciones sistmicas.
- Expresin a gran escala en semanas
Solo da cabida a fragmentos muy pequeos

Virus de RNA
- Filamentosos, sin limitaciones de tamao
- Virus del mosaico de la cebada, mosaico del tomate
Modelos vegetales

Arabidopsis thaliana
Arroz

Nicotiana tabacum
Patata
Medicago truncatula
Proyectil de DNA para plantas

He He
Pistola de cidos nucleicos
1. Los OMG
1.4. Riesgos potenciales asociados

Riesgos potenciales asociados a los OMG

Riesgos para la salud

Toxicidad de las protenas codificadas por los genes


ajenos introducidos en las plantas transgnicas
Alergenicidad del nuevo material introducido o de los
compuestos que puedan derivarse de la nueva expresin
gnica
Transmisin de los genes de resistencia a antibiticos a las
bacterias de la flora intestinal

Riesgos para la salud

Dispersin incontrolada de la descendencia de la planta


transgnica
Introduccin de resistencia de los agentes patgenos de la
variedad transgnica
Mtodos de deteccin de OMG
basados en el ADN

www.sistemasgenomicos.com
3. Mtodos de deteccin de OMG
3.1. Deteccin cualitativa
3.1. 2. Anlisis cualitativo de OMG

Anlisis electrofortico
El resultado se realiza mediante electroforesis en gel de agarosa

POSITIVO NEGATIVO
3. Mtodos de deteccin de OMG
3.1. Deteccin cualitativa
3.1. 2. Anlisis cualitativo de OMG

Reaccin de screening

La mayor parte de las plantas modificadas genticamente, contienen


los mismos elementos reguladores:
P-35S (del CaMV)
T-NOS (de A. tumefaciens)

P35S Gen de Inters TNOS

Con reacciones de PCR que permitan detectar P-35S y NOS, se


detectan ms del 95% de los OMG
Podremos decir si un alimento contiene o no un OMG (pero no
identificarlo)
3. Mtodos de deteccin de OMG

Deteccin cuantitativa
3.2. Deteccin cuantitativa
3.2. 1. Introduccin a la Q-PCR

Con el fin de verificar si el etiquetado de un alimento cumple


con la legislacin vigente, es necesario disponer de mtodos
cuantitativos de deteccin que permitan conocer la cantidad
de OMG que contiene un alimento
Se basa en una cuantificacin exacta de la cantidad de material
transgnico presente en una muestra
Varios mtodos:
Determinacin semicuantitativa
PCR competitiva
Real Time PCR
ANIMALES TRANSGNICOS
PROTEINA VERDE FLUORESCENTE

Medusa (Aequorea Victoria).


EXPRESIN DE GFP EN E. coli
Eduardo Kac y Alba.

2000-2010
Alba, la coneja fluorescente
Bioarte
ANIMALES TRANSGNICOS

MAMFEROS: Ratn, Rata, Conejo, Vacuno, Cerdo,


Oveja y Cabra.

AVES: Pollos y Codorniz.

PECES: Salmn, Trucha, Tilapia, Carpa, Pez gato, Pez


Medaka y pez Dorada
TCNICAS OBTENCIN ANIMALES
TRANSGNICOS

- Microinyeccin de ADN en ncleo de ovocito

- Microinyeccin o electroporacin de ADN en citoplasma de


cigoto (vulo fecundado)

- Transfeccin de gametos y clulas totipotenciales (vectores


viriales)

- Co-inyeccin en ovocitos de una mezcla de cabezas de


espermatozoides y ADN exgeno
MICROINYECCIN DE OVOCITOS
Leche medicinal
Fines de la transgnesis animal

- Mejora de caracteres productivos

- Resistencia a enfermedades

- Animales transgnicos como biorreactores para la sntesis de


protenas de alto valor (protenas teraputicas): Las "granjas
farmacuticas" o "granjas moleculares"

-Donacin de rganos: Xenotransplantes


Modelos animales de enfermedades humanas
(ratones knockout)
Ovejas
- Ovejas producen 1 mg/ml de 1-antitripsina . 63-
35mg/ml (Wright., 1991)
Enfisema hereditario-a 1-antitripsina 2mg/ml
- 549 cigotos-----113 nacieron------5 transg. (1
cordero y 4 ovejas)

- Ovejas productoras de Factor IX de


coagulacin
- Prevencin de la hemofilia
Tracy
Cabras

-Las cabras son excelentes biorreactores, producen 4


L/dia de leche.

- Ebert et al., 1991 produjo cabras que expresaban el gen


humano activador tisular de plasmingeno (AtPH),
precursor de la plasmina (anticoagulante)

- 2-3 mg/ml en la leche y se recupera con 98% de pureza


Vacas

- Las vacas producen 10.000 L/ao, 35 g protena/L de leche por lo que se


convierten en poderosos biorrecactores de protenas humanas.

- 1991 la Universidad de Leiden, Gene Pharming Europe y el Instituto de


produccin Animal de Zeist obt. Vacas transgnicas

- Gen humano de lactoferrina (inmunidad innata)

- Inyectaron 1.154 proncleos. 981 sobrevivieron. 129 embriones se


transfirieron a vacas. 21 preadas. 16 gestantes. 1 macho y una
hembra (mosaico).

- Knockout del gen beta-lactoglobulina de la vaca (alergias por consumo


de leche)
EMPRESAS TRANSGENIA ANIMAL
TRABAJO DE INGENIERA GENTICA
EMPRESA

Alexion Pharmaceuticals Inc. Crea cerdos genticamente con corazones, riones, hgados y
New Haven, Connecticut, pulmones aptos para los trasplantes. Estos rganos podran probarse
EE.UU. en personas en un par de aos. Estudia las tcnicas aplicadas a la
oveja Dolly y a los monos de Oregn en la clonacin de cerdos.

Novartis AG Est desarrollando cerdos transgnicos para producir riones y


Suiza corazones para trasplantes. Tiene inters en las tcnicas de clonacin

Nextran Inc. Desarrolla cerdos transgnicos para hacer corazones, riones y


Princenton, New Jersey, pulmones para trasplantes. No tiene inters en las tcnicas de
EE.UU. clonacin

Genzyme Transgenic Corp. Produce protenas teraputicas en cabras creadas genticamente para
Framingham, Massachusetts tratar el cncer, trauma y otras enfermedades humanas. No tiene
inters en las tcnicas de clonacin.

PPL Therapeutics PLC Est de acuerdo en obtener licencia para la tcnica de clonar ovejas
Reino Unido para hacer protenas teraputicas en leche animal
1. Los OMG
1.3. Cmo se hace una planta transgnica?

En contacto con la
superficie de la
clula, Agrobacterium
puede transferir su
ADN a la clula
vegetal

El ADN con el gen de


inters se incorpora de
forma estable a los
cromosomas de la clula
vegetal, de modo que se
transmitir a las siguientes
generaciones
DNA-T

noc
El opern vir
vir pTiC58

acc tra1 tra2


DNA-T
Desarrollo del tumor Sntesis y liberacin
de opinas

Catabolismo
Regin de de las opinas
virulencia

Origen de
replicacin
3. Mtodos de deteccin de OMG
3.1. Deteccin cualitativa
3.1. 2. Anlisis cualitativo de OMG

Deteccin de variedades transgnicas

Es posible detectar la variedad de OMG, si se utilizan cebadores


especficos para cada transgen

Soja RR Maz NK603

Maz Bt176 Maz T25

Maz Bt11 Maz Ga21

Maz Mon810 Maz Mon809/810

Maz Starlink Maz Bt10

P35S Gen de Inters TNOS

Si no tenemos una idea previa de lo que andamos buscando, es


necesario realizar una batera completa de reacciones con todos los
cebadores disponibles
3. Mtodos de deteccin de OMG
3.1. Deteccin cualitativa
3.1. 2. Anlisis cualitativo de OMG

Etapas del anlisis cualitativo

Extraccin y purificacin de ADN genmico


Cuantificacin
Amplificacin mediante PCR de secuencias
comunes a varios transgnicos (P-35S y/o
T-NOS: screening) o en la deteccin de
zonas especficas en cada evento
Visualizacin de los fragmentos amplificados
mediante electroforesis en gel de agarosa
Verificacin frente a controles positivos y
controles negativos
3. Mtodos de deteccin de OMG
3.1. Deteccin cualitativa
3.1. 2. Anlisis cualitativo de OMG
Amplificacin por RT-PCR

Las reacciones de PCR se realizan por duplicado


Debido a la sensibilidad del anlisis, existe un alto riesgo de
contaminacin. Para evitar esto es necesario utilizar controles en
todos los anlisis:
Control Endgeno: Se trata de un gen especfico del organismo
que se analiza. Este control permite certificar que se ha extrado
correctamente el ADN objeto de anlisis
Control de PCR: Consiste en un tubo de ensayo que no
contiene ningn tipo de muestra. La ausencia de este
control podra dar lugar a falsos positivos
Control Negativo: Se trata de una reaccin que se lleva a cabo
sobre ADN extrado de un organismo vegetal, no MG. El objetivo
es asegurar que no se ha producido ningn tipo de
contaminacin durante la fase de PCR
3. Mtodos de deteccin de OMG
3.1. Deteccin cualitativa

Deteccin cualitativa

En los ltimos aos, los mtodos de anlisis de ADN basados en la


PCR han ganado importancia dentro del anlisis de alimentos
La tcnica de PCR es un mtodo muy sensible para la deteccin de
alimentos transgnicos, ya que permite localizar especficamente
cualquier gen del que se conozca su secuencia
En los alimentos transgnicos, hay secuencias exgenas
introducidas mediante manipulacin gentica y que no se encuentran
en el producto natural

Se pueden usar cebadores especficos para amplificar cualquiera de


estas secuencias
Si detectamos la presencia de este ADN en un alimento, sabremos
que alguno de sus ingredientes contiene OMG
OBJETIVOS: APLICACIONES
producir cantidades ilimitadas de:

*Substancias de las que nunca se haba dispuesto con


anterioridad

*Productos que se obtenan en pequeas cantidades

*Abaratamiento de los costos de produccin

*Mayor seguridad en los productos obtenidos

*Nuevas materias primas, ms abundantes y menos


caras
La Biotecnologa ha aplicado estas
tcnicas experimentales de transgnesis
y ya hoy se estn estableciendo las
primeras granjas farmacuticas en las
que se cran ovejas, cabras, vacas o
cerdos transgnicos que producen en su
leche protenas teraputicas humanas
( Velander et al., 1997).
Efecto deseado y
Especie Gen introducido Pas
comentarios
Crecimiento
potenciado y
Tilapia AFP Salmn GH eficiencia en funcin Canad, Reino Unido
del alimento;
herencia estable
Crecimiento
Tilapia GH de tilapia potenciado y Cuba
herencia estable
Gen productor de
Produccin de
insulina modificado
Tilapia insulina humana Canad
proveniente de
para diabticos
tilapia
Gen lisosoma de Resistencia a
trucha arco iris y gen enfermedades, an Estados Unidos,
Salmn
pleurocidina de en etapa de Canad
lenguado desarrollo
Resistencia a las
Rbalo listado Genes provenientes enfermedades,
Estados Unidos
(Striped Bass) de insectos primeras etapas de
investigacin
Crecimiento
potenciado y
GH de locha del eficiencia en funcin
Locha del fango fango + genes del alimento;
China, Corea, Rep.
(Mud Loach) promotores de locha aumento del
y ratn crecimiento entre 2 y
30 veces; transgen
hereditario
1. Los OMG
Marcadores de resistencia para la seleccin
1.3. Cmo clulas
se hace una planta transgnica?

vegetales recombinantes
Gen de resistencia a
herbicida o antibitico Gen de Inters

Promotor (P35S) Terminador (TNos)

Vector lanzader

- 95% de variedades transgnicas contienen secuencias reguladoras de la


transcripcin P35S Y TNOS (virus del mosaico de la coliflor)
- Marcador resistencia de plantas (compuesto anticloroplastos)
1. Los OMG
1.4. Riesgos potenciales asociados

Hasta la fecha, no hay ningn estudio cientfico que


demuestre la existencia de efectos nocivos, si bien
todava hay investigaciones en marcha

Ante la alarma social y el rechazo de los OMG por parte de la


ciudadana, la Unin Europea ha establecido la legislacin ms
estricta a nivel mundial en lo que se refiere a su liberacin
intencionada, comercializacin y consumo