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Apuntes de Microbiologa Facultad de Ciencias Biolgicas

Universidad de Concepcin

Afinidad Tintorial, Morfologa y Estructura Bacteriana

Afinidad tintorial
Debido a la dificultad para observar las clulas bacterianas en forma directa, se emplean procedimientos de tincin que
establecen un mayor contraste entre la bacteria y el medio circundante.
Las clulas bacterianas tienen afinidad por los colorantes bsicos de la anilina (violeta de genciana, safranina, azul de
metileno). Estos colorantes se unen a compuestos qumicos electronegativos de la clula bacteriana (compuestos
cidos), debido a que la parte cromfora del colorante es electropositiva. De esta manera, todas las clulas bacterianas
se observan del mismo color cuando se someten a la accin de uno solo de estos colorantes. Estas tinciones se
denominan simples porque no establecen diferencias entre grupos de bacterias y tienen escasa aplicacin, porque
solamente permiten distinguir la forma y agrupacin de las clulas bacterianas.

Tincin de Gram
Existen algunos procedimientos de tincin que diferencian
grupos de bacterias, lo que se traduce en el color diferente con
que se observan despus de teidas. Estas tinciones se
denominan diferenciales y tienen gran aplicacin en el estudio e
identificacin de las bacterias. La ms empleada de ellas es la de
tincin de Gram que diferencia los dos grupos ms importantes
de bacterias: Gram positivas y Gram negativas.
Mediante este procedimiento las bacterias se someten,
secuencialmente, a las siguientes etapas: tincin con violenta
genciana (60 segundos), fijacin del colorante con solucin de
yodo (lugol, 60 segundos), decoloracin con alcohol etlico (30
segundos) y tincin de contraste con safranina (20 segundos).
Las bacterias responden de dos formas diferentes a este
procedimiento de tincin:
Uno es que las bacterias Gram positivas se observan de
color azul/violeta oscuro, ya que el alcohol etlico no
elimina el violeta de genciana con que ellas se han
teido y, por lo tanto, no pueden teirse
posteriormente con safranina.
Por otro lado, las bacterias Gram negativas se observan
de color rosado porque el tratamiento con alcohol les
hace perder el violeta de genciana y luego pueden
teirse con el colorante de contraste (safranina).
La diferente afinidad tintorial de ambos grupos de bacterias se basa en las diferencias de la estructura de envoltura de
ambos grupos de microorganismos. El grosor y la estructura de la envoltura de las bacterias Gram positivas impiden la
salida del complejo formado entre el colorante y el yodo. Cuando los cultivos de bacterias Gram positivas envejecen
suelen perder su Gram positividad y se empiezan a observar como Gram negativas. Otras bacterias, por ejemplo
Mycobacterium, se tien muy difcilmente por este procedimiento. Por ello deben emplearse tinciones especiales para
su observacin, como la tincin de Ziehl-Neelsen, que es tambin una tincin con carcter diferencial. Como resultado
de la observacin de preparaciones teidas mediante estas tinciones al microscopio, se obtienen valiosas conclusiones
en el estudio de las bacterias: forma celular, agrupacin, afinidad tintorial.

Tipos de observaciones microscpicas


Observacin en fresco: en este caso se coloca una suspensin bacteriana efectuada en caldo, agua o suero
fisiolgico estril en el portaobjetos, se cubre la preparacin con cubreobjetos y se observa con aumento x10 o
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x40, sin inmersin, disminuyendo la iluminacin. Mediante este procedimiento puede observarse la movilidad
bacteriana.
Fondo oscuro: se utiliza un condensador especial que enva la luz de la lmpara de tal manera que no entra
directamente a la preparacin. Los rayos luminosos son refractados por los microorganismos observndose
como cuerpos brillantes sobre un fondo oscuro.
Contraste de fases: mediante esta tcnica, que requiere una adaptacin especial en el microscopio, se aumenta
el contraste entre la clula bacteriana y el medio en que se encuentra
Microscopia electrnica: existen varios procedimientos que permiten observar la clula bacteriana con
extraordinario aumento (microscopia de transmisin, de barrido, etc.)
Epifluorescencia: en este caso se tien las bacterias con un colorante fluorescente (naranja de acridina) y se
observa bajo la luz ultravioleta. Las bacterias se observan con fluorescencia verde intensa.
Inmunofluorescencia: en este caso, la preparacin de bacterias se trata con anticuerpos marcados con un color
fluorescente y especfico para ellas. Bajo la luz UV las bacterias se observan dibujadas de color verde intenso.
Esta tincin, a diferencia de la epifluorescencia, no solamente permite visualizar las bacterias, sino que tambin
las identifica, porque la tincin es positiva solamente cuando la bacteria ha reaccionado con su anticuerpo
especifico.

Morfologa celular bacteriana


Las clulas bacterianas presentan una morfologa tpica que facilita su
identificacin. Las bacterias se agrupan de acuerdo a esta propiedad en:
Clulas cocceas: en este caso, las clulas bacterianas son
esfricas o aproximadamente esfricas. Reciben el nombre de
cocos y su nombre cientfico termina generalmente en coccus.
Clulas bacilares: las clulas son alargadas, pudiendo presentar
diferencias ente una especie bacteriana y otra (bacilos gruesos,
delgados, filamentosos, de extremos rectos, redondeados,
aguzados, de borde paralelos o no, etc.)
Clulas curvas: las clulas son alargadas y se curvan en el espacio, siguiendo un eje de torsin imaginario.
Pueden construir una curva incompleta (forma de coma) o varias curvas (formas helicoidales)
Clulas filamentosas: algunas bacterias producen ramificaciones filamentosas (Actinomycetales) a partir de de
las cuales se separan clulas individuales.

Agrupacin
Despus de su divisin, las clulas bacterianas suelen quedar unidas de forma caracterstica, dando origen a la
agrupacin celular bacteriana, que tambin es ayuda en la identificacin de las especies.
Las principales agrupaciones de las clulas cocceas son:
Diplococos: pares de clulas
Estreptococos: cortas o largas cadenas de clulas
Estafilococos: racimos de clulas
Ttradas: cuatro clulas permanecen unidas formando un cuadrado
Paquetes (sarcina): paquetes cuboidales e clulas, tridimensionales
Las principales agrupaciones de las clulas bacilares son:
Diplobacilos: pares
Estreptobacilos: cadenas de clulas
Empalizada: conjunto de clulas unidas por sus bordes ms largos
Letra china: las clulas forman ngulos, unas con otras

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Estructura celular
Los componentes de la clula bacteriana son los siguientes:

Material nuclear (cuerpo nuclear o nucleoide)


Como hablamos de una clula procaritica, el cuerpo nuclear no se
encuentra rodeado de membrana y contiene algunas protenas del tipo de
las histonas. Esta formado por una doble hebra de ADN, de gran longitud,
que se considera como un solo y largo cromosoma de forma circular, en el
sentido de que est covalentemente cerrado en sus extremos. Constituye
alrededor del 2 a 3% del peso seco bacteriano y se encuentra muy enrollado,
ya que su largo es aproximadamente 1000 veces el dimetro de la clula que
lo contiene. En ocasiones el ADN nuclear se asocia al borde interno de la
membrana citoplasmtica. A lo largo de este cromosoma se encuentran los
genes que codifican todas las propiedades de la bacteria (genotipo)

Estructuras citoplasmticas
En algunas bacterias existen estructuras membranosas relacionadas con
propiedades especificas (fotosntesis, metano gnesis, etc.). Tambin pueden existir grnulos citoplasmticos que
cumplen funciones nutricias o energticas (volutina, lpidos, glicgeno, etc.)
En el citoplasma se encuentra tambin una gran cantidad de ribosomas, de un peso de 70S y formados por dos
subunidades: 30S y 50S. Estas subunidades estn formadas por protenas que cumplen funciones enzimticas o
estructurales en el ribosoma. En los ribosomas se efecta la sntesis de las protenas, cuando las subunidades 30S y 50S
se asocian, junto a varios factores, y reciben a los ARN de transferencia que llevan los aminocidos especficos para la
sntesis de la cadena peptdica.

Membrana citoplasmtica (MC)


En las bacterias Gram negativas se denomina
tambin membrana interna (MI). Tiene la
estructura tpica de las membranas biolgicas,
formada por una bicapa de fosfolpidos
(fosfatidilglicerol), en la cual se insertan protenas
que cumplen variadas funciones, como transporte
electrnico, transporte de sustancias, sntesis de
compuestos, excrecin enzimtica, receptores de
la quimiotaxis, etc. La MC constituye una barrera
osmtica que retiene metabolitos e iones
excluyendo molculas grandes, a menos que la
clula contenga mecanismos especiales para su
internacin. La electroforesis de MC demuestra la
presencia de ms de 100 protenas diferentes. Si
esta membrana de desorganiza, los componentes
elementales de la membrana pueden re-
ensamblarse formando vesculas (liposomas) que mantienen las funciones de la membrana. Es posible que esta vesculas
se formen al revs, es decir, dejando hacia adentro las protenas que normalmente miran hacia afuera y viceversa.

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Peptidoglicano (PG)
Es un compuesto hidrocarbonado altamente polimerizado formado con algunos aminocidos en forma de una corta
cadena peptdica. Est estructurado en forma de hebras interconectadas a travs de sus aminocidos, que forman
uniones peptdicas. Esto da origen a una estructura rgida y firme que protege a la clula de su elevada presin osmtica.
El PG, al parecer, otorga tambin la forma a la clula (coco o bacilo). Cada hebra est formada por unidades de N-
acetilglucosamina y acido N- acetilmurmico, que se repiten alternadamente.
En las bacterias Gram positivas existen, adems, otros compuestos hidrocarbonados: cidos teicoicos y teicurnicos, que
se interconectan tambin con el PG.
El PG es susceptible a algunas enzimas degradativas como la lisozima, presente en la saliva, clara de huevo, lgrimas, etc.
Su actividad hidroltica se ejerce sobre la unin NAG-MUR y el resultado es la degradacin del PG y la formacin de una
estructura celular osmosensible, denominada protoplasto cuando deriva de una clula Gram positiva y esferoplasto
cuando deriva de una Gram negativa. Ambas estructura se lisan rpidamente, a menos que el medio externo posea una
presin osmtica elevada (sacarosa al 20%) en el cual pueden mantenerse viables. Algunas formas celulares sin PG que
existen naturalmente se denominan Formas L. Existen algunas especies bacterianas que no poseen PG, o poseen un PG
rudimentario.

Membrana externa (ME)


Esta membrana est tambin conformada por fosfolpidos y protenas, pero se diferencia de la MC porque:
- La capa externa de fosfolpidos esta reemplazada por molculas de lipopolisacridos (LPS)
- Los polisacridos tienen mayor peso que los fosfolpidos y las protenas, y por lo tanto las vesculas formadas a
partir de la ME son ms pesadas y pueden ser separadas por centrifugacin de las derivadas de la MC
- La ME no tiene las funciones de la MC, pero realiza otras, como la fijacin de sustancias de bajo peso molecular.
Molculas grandes como lisozima son excluidas por la ME y no pueden ejercer su actividad degenerativa sobre
el PG. De all que la lisozima no tenga accin directa sobre bacterias Gram negativas. El paso de compuestos
qumicos a travs de la ME se realiza a travs de protenas denominadas porinas, que forman poros hidroflicos.
- Otras funciones de la ME son la adherencia a superficies mediante protenas, la resistencia a compuestos
antibacterianos, recepcin de fagos, etc.

Lipopolisacrido
Este compuesto se denomina tambin endotoxina y se encuentra solamente en la envoltura de las bacterias Gram
negativas. Se inserta en la ME por su extremo hidrofbico y es responsable de un conjunto de efectos biolgicos en las
infecciones causadas por bacterias Gram negativas (de all el nombre endotoxina). Est formado por tres partes:
Lpido A (LA), inserto en la ME
Core o centro, formado por hidratos de carbono
Antgeno O, que constituye la parte ms externa
El LA es el responsable de los efectos biolgicos caractersticos de la endotoxina entre los que se encuentran la
pirogenecidad, activacin del sistema complemento por la va alterna, activacin de la coagulacin, alteraciones de la
presin sangunea, leucopenia, leucocitosis, alteraciones de la glicemia y fosfatemia, etc. El antgeno O posee radicales
hidrocarbonados, los que inducen la formacin de anticuerpos especficos para cada especie bacteriana, los que se
utilizan para identificar bacterias por reacciones de aglutinacin.

Espacio periplsmico (EP)


Es el espacio ubicado entre la MC y la ME y contiene un conjunto de enzimas degradativas (fosfatasas, -lactamasas). Las
protenas periplsmicas pueden liberarse al medio externo mediante el procedimiento denominado shock osmtico que
consiste en someter a las clulas bacterianas, secuencialmente, a un medio hipertnico y luego bruscamente hipotnico.

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Cpsula y glicoclix
Son producidos consecuencia de la acumulacin externa de compuestos, generalmente hidrocarbonados. La cpsula
protege a la clula de la fagocitosis. Generalmente poseen una estructura hidrocarbonada, con poder antignico (con
excepciones), de tal manera que se producen anticuerpos protectores que facilitan la fagocitosis (opsonizacion). Por otra
parte, el glicoclix favorece la adherencia a superficies slidas o tejidos.

Flagelos
Son estructuras largas, de naturaleza proteica (flagelina), formados por subunidades, que producen la movilidad
bacteriana. Pueden tener diferente nmero y ubicacin en la superficie de la clula. Las bacterias que tienen un solo
flagelo en su extremo se denominan montricas y aquellas que tienen flagelos rodeando todo su contorno se
denominan pertricas. Por ser antgenos, los flagelos inducen la formacin de anticuerpos en los organismos infectados,
por lo cual se les conoce tambin con el nombre de antgenos H. esta propiedad se utiliza en bacteriologa para la
identificacin de especies bacterianas mviles.
Se insertan en la clula mediante un gancho y dos o cuatro discos (en bacterias Gram positivas y negativas,
respectivamente). El crecimiento flagelar se produce por adicin de subunidades de flagelina en el pice del flagelo. El
movimiento flagelar se produce gracias a la energa aportada por la fuerza protn-motriz, como respuesta a la presencia
de sustancias atractantes o repelentes. En la movilidad participan algunas protenas que sufren intensa metilacin como
respuesta a las sustancias quimiotcticas. Las bacterias mviles responden tambin a cambios de pH y de concentracin
de sales (osmotaxis).

Fimbrias (Pili)
Son estructuras proteicas rgidas y extracelulares, de menor tamao que los flagelos. Algunas participan en la adherencia
bacteriana (Pili comn y otros) y en el proceso de transferencia de material gentico por conjugacin (Pili sexual). La
adherencia favorecida por las fimbrias es un factor importante en la produccin de procesos infecciosos. Tambin estn
formadas por un conjunto de subunidades proteicas.

Espora (endospora)
Algunas bacterias en determinadas circunstancias, como frente a carencia de C, N o P, dan origen a la espora. Esta se
caracteriza por:
- Alta resistencia a agentes ambientales (calor, desecacin, colorantes, etc.)
- Presencia de dipicolinato de calcio
- Presencia de protenas especiales
- Ausencia de agua
- Refractariedad a la tincin
- Mantencin indefinida en forma latente
El proceso de esporulacin se inicia en ambientes desfavorables para la bacteria. Por el contrario, la germinacin de la
espora da origen a la misma clula madre y se produce cuando las condiciones son favorables nuevamente.
La esporulacin permite la supervivencia indefinida de la bacteria en el medio ambiente. La forma y la posicin de la
espora en la clula son caractersticas de cada especie.
En la esporulacin se produce, en primer trmino, una divisin
asimtrica, con invaginacin de una doble capa de MC, con PG, lo
que va a constituir el septum de la espora. Finalmente este septum
engloba al material nuclear, el cual se rodea de diversas capas que
le dan la estructura final a la espora.
Esta posee los siguientes componentes:
Membrana
Corteza, formada por un PG caracterstico
Cubierta, formada por una protena de estructura similar a
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la queratina
Exosporio, componente suelto, externo, de composicin lipoproteica.

En la germinacin se produce primero la activacin de la espora, ya sea por un trauma trmico, disminucin del pH, etc.
Probablemente esta etapa se relaciona con el dao en la envoltura externa, hacindole perder su impermeabilidad. En
seguida se produce la germinacin, que requiere agua y un agente germinante (alanina, Mn). Luego se activan algunas
enzimas degradativas del PG de la espora y finalmente se libera la clula madre desde el interior en la endospora.
Esta estructura, por su resistencia a los agentes ambientales, juega un rol epidemiolgico de importancia. Existen
bacterias patgenas que esporulan y que se mantienen en el medio ambiente en forma esporulada. Una vez que
penetran al organismo, ya sea por heridas o picaduras, germinan liberando a la clula vegetativa que se multiplica
activamente in vivo, dando origen a la enfermedad.

Fisiologa bacteriana

Generalidades
Todos los microorganismos, sean estos eucariontes o procariontes, requieren nutrientes para vivir y reproducirse. Al
mismo tiempo, necesitan de una fuente de energa para llevar adelante procesos tan importantes como el movimiento,
el transporte y la sntesis.
Para estudiar las bacterias en el laboratorio estas deben ser cultivadas en un ambiente especial que contenga todos los
elementos que ellas necesitan y las condicione fsicas adecuadas para su desarrollo ptimo. Este ambiente nutricio es el
que se denomina medio de cultivo y para establecer su adecuada composicin es imprescindible conocer los elementos
nutricios que requieren las bacterias y las principales fuentes de donde ellas las obtienen. A travs de estos estudios se
ha logrado establecer que los requerimientos nutricionales de las bacterias, en general, son bastante complejos y que,
adems, existen variados grupos bacterianos con requerimientos diferentes que van desde los ms elementales a los
ms complejos. Estas ltimas bacterias son las ms exigentes para su desarrollo y entre ellas estn las que viven y/o
afectan en el organismo humano.

Requerimientos nutricionales

Carbono: El carbono es uno de los elementos bsicos de la estructura orgnica de los microorganismos y por lo tanto
todo medio de cultivo debe contener una fuente de carbono fcilmente asimilable por las bacterias. Las bacterias se
clasifican de acuerdo con el tipo de carbono que pueden utilizar. Las denominadas autotrficas pueden utilizar el dixido
de carbono como nica fuente. Si estas bacterias obtienen su energa a partir de la luz son, adems, foto-auttrofas y si
la obtienen de la oxidacin de compuestos qumicos, son quimio-auttrofas.
Por otro lado, las bacterias heterotrficas requieren compuestos orgnicos como fuente de carbono, por ejemplo de
azcares y, en ciertos casos, de protenas o pptidos. La capacidad de degradar azcares es ampliamente utilizada en
bacteriologa para estudiar las propiedades bacterianas y para identificar especies. Generalmente se emplean medios
de cultivo slido o liquido que llevan un azcar (sacarosa, dulcitol, rafinosa) y un colorante. El ataque y degradacin
enzimtica del azcar conduce a la disminucin del pH por produccin de cidos (en ocasiones de cido y gas), lo cual
hace virar el colorante en cuestin de tal manera que la degradacin del hidrato de carbono puede visualizarse a simple
vista. Existen diversos estudios que han llevado al conocimiento del porcentaje de cepas de cada especie bacteriana
(especialmente de bacilos Gram negativos) que son capaces de degradar cada azcar y esto puede ser usado en la
identificacin. Por ejemplo, las cepas de Shigella nunca degradan la lactosa.

Nitrgeno: Las bacterias son extremadamente variables en sus requerimientos de nitrgeno. Algunos tipos utilizan
nitrgeno atmosfrico, otras utilizan compuestos inorgnicos de nitrgeno y otros requieren nitrgeno de compuestos
orgnicos como protenas, urea, etc. La urea es utilizada en ciertos medios de cultivo para investigar la sntesis de ureasa
bacteriana. La degradacin de protenas es un proceso metablico ms complejo que puede conducir a la putrefaccin

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con liberacin de molculas de un olor caracterstico. Los medios de cultivo generalmente contienen protenas semi-
hidrolizadas enzimticamente (peptonas).

Azufre: Algunas bacterias requieren compuestos orgnicos de azufre, por ejemplo para la sntesis de aminocidos
sulfurados como cistena y metionina. Otras son capaces de oxidar compuestos inorgnicos de azufre y algunas pueden,
incluso, utilizar azufre elemental.

Fsforo: El fsforo lo proporcionan usualmente las sales del cido fosfrico y es un elemento que utilizan las bacterias
en cantidades relativamente ms elevadas, ya que el fsforo es un constituyente importante de los cidos nucleicos,
fosfolpidos, ATP, etc. Por esta razn, los medios de cultivo son suplementados con este elemento.

Minerales: Las bacterias requieren varios iones inorgnicos, tales como sodio, potasio, calcio, magnesio, manganeso,
hierro, zinc, cobre y cobalto, como cofactores de enzimas. El hierro, en especial, es un elemento indispensable que
condiciona, en gran parte, el parasitismo de las bacterias en el organismo humano. Por ejemplo, Fe 2+ es requerido por
enzimas tales como citocromos, catalasas y succino deshidrogenasa.

Factores de crecimiento: Estas son molculas complejas que las bacterias no pueden sintetizar y, por esta razn, deben
ser obtenidas del medio externo. Aunque todas las bacterias requieren vitaminas en sus procesos metablicos normales,
algunas son capaces de sintetizar sus requerimientos. Otras no crecen a menos que se les proporcione una o ms
vitaminas ya preformadas. Este es el caso de vitaminas del complejo B, de vitamina K (especialmente para bacterias
anaerobias). Existen otros factores de crecimiento cuya exigencia depende de la especie bacteriana en cuestin. En base
a los requerimientos de estos factores las bacterias se consideran ms o menos exigentes en su desarrollo. De esta
manera, una bacteria muy exigente debe cultivarse en un medo muy rico en factores de crecimiento.

Agua: Todos los organismos vivos requieren agua para sus funciones metablicas y para el crecimiento. En el caso de las
bacterias, todos los nutrientes deben estar en solucin para que puedan penetrar en el organismo. Por el contrario, la
ausencia de agua conduce a la detencin del metabolismo. Por esta razn, la eliminacin brusca del agua celular es un
procedimiento (liofilizacin) empleado para mantener viables las bacterias por largo tiempo. La reintegracin del agua
permite cultivar nuevamente a estos microorganismos.

Factores fsicos
Adems de una nutricin adecuada, existen varios otros factores que influyen en la velocidad de la reproduccin
bacteriana. Algunos de estos factores son:

Temperatura
Todos los procesos metablicos dependen de reacciones qumicas y estn influenciadas por la temperatura, al igual que
el crecimiento bacteriano. Las variaciones de temperatura pueden alterar tambin ciertos procesos metablicos como
las reacciones enzimticas, cambiando su velocidad. Por esta razn, el cambio de temperatura dentro de lmites
aceptables, permite acelerar o retardar el crecimiento de una bacteria. La temperatura que permite el crecimiento ms
rpido en un periodo de tiempo corto se conoce como temperatura optima de crecimiento.
Las bacterias se agrupan en tres categoras de acuerdo al intervalo de temperatura que permite su crecimiento ptimo.
Estos grupos son:
Psicrfilas: crecen, aproximadamente, entre 0 y 30C
Mesfilas: crecen, aproximadamente, entre 25 y 40C
Termfilas: crecen, aproximadamente, a 50C o ms

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Acidez o alcalinidad (pH)


Para la mayora de las bacterias, el pH ptimo de crecimiento se encuentra entre 6.5 y 7.5 y se catalogan como bacterias
neutras. Sin embargo, algunas especies pueden crecer en condiciones muy cidas y estas corresponden a las bacterias
acidfilas (pH 2 a 4). Otras pueden desarrollarse en condiciones muy alcalinas y son las bacterias basfilas (pH 8 - 9)

Tensin de oxigeno y CO2


Los principales gases que afectan el crecimiento bacteriano son el oxigeno y el dixido de carbono. Las bacterias
muestran una amplia variedad de respuestas al oxigeno libre y en relacin a esto se clasifican en:
Aerobias: organismos que requieren de oxigeno (procesos respiratorios)
Anaerobias: no crecen en presencia de oxigeno. Existen bacterias aerotolerantes, que pueden vivir en presencia
de bajas concentraciones de oxigeno. Las bacterias anaerobias no tienen algunas enzimas que estn presentes
en las aerobias, lo que puede explicar su requerimiento anaerbico. Entre estas enzimas se encuentran la
catalasa y la superxido dismutasa.
Anaerobias facultativas: crecen tanto en condiciones aerbicas como anaerbicas.
Microaerfilas: crecen mejor en presencia de pequeas cantidades de oxigeno (entre 1 y 15%)

Concentracin de sal
Las bacterias tambin suelen clasificarse de acuerdo a sus requerimientos de concentracin de NaCl. Los grupos son:
Halfilos obligados: microorganismos que para crecer necesitan concentraciones elevadas de NaCl.
Halfilos facultativos: microorganismos que crecen en presencia de concentraciones altas o bajas de NaCl.

Energa
De acuerdo a la fuente de energa, las bacterias se clasifican en:
Fototrficas: utilizan la luz solar como fuente de energa y para este objeto deben contener pigmentos similares
a la clorofila de los vegetales (bacterioclorofila).
Quimiotrficas: emplean la energa que se libera intracelularmente a partir de los procesos de oxidacin de
compuestos nutricios, procesos de oxido-reduccin. La mayor parte de las bacterias pertenecen a este grupo, de
manera que pueden ser cultivadas en ausencia de luz.

Crecimiento bacteriano
La clula bacteriana en un medio de cultivo adecuado aumenta de tamao gracias al incremento equilibrado de todos
sus componentes. Cuando esto ocurre la clula puede dividirse. Las bacterias se reproducen por divisin o fisin binaria,
reproduccin que se da en diferentes planos, dando origen a
agrupaciones diferentes (racimos, cadenas, pares, etc.)
La divisin transversal de la clula bacteriana no solo es un proceso de
divisin de una clula madre en dos clulas hijas, sino que representa
una separacin continua entre clulas hijas con respecto de la clula
madre. As, si se parte de una sola bacteria, el incremento de la
poblacin se lleva adelante en forma exponencial. El intervalo de tiempo
requerido para que la clula se divida o bien para que la clula se
duplique se conoce como tiempo de generacin (TG). No todas las
especies tienen el mismo TG.

Cuando se inocula una sola bacteria en un medio adecuado y se produce la multiplicacin a ritmo constante, al graficar
el log10 del nmero de clulas versus el tiempo de incubacin se obtiene la curva de crecimiento bacteriano. Algunas de
las caractersticas de las fases de la curva de crecimiento bacteriano son:

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Adaptacin (A): periodo de reajuste fisiolgico (sntesis de enzimas), no hay aumento de la poblacin, las clulas
sufren cambios en su composicin qumica y aumentan de tamao
Exponencial (B): las clulas se duplican a ritmo constante, las actividades metablicas se mantienen constantes,
las bacterias son ms susceptibles a los agentes antibacterianos
Estacionaria (C): acumulacin de productos txicos y agotamiento de los nutrientes, algunas clulas mueren
mientras otras se dividen, el nmero de clulas viables se mantiene constante
Declinacin (D): mueren ms clulas de las que se dividen, la tasa de muerte se hace exponencial

Espora bacteriana

Las esporas son estructuras pequeas, muy resistentes y metablicamente inactivas. No forman parte del ciclo
reproductivo de la bacteria, sino que son formas de supervivencia producidas en respuesta a la privacin de nutrientes
y ausencia de agua. El proceso de formacin de la espora (esporulacin) se inicia, por lo general, como consecuencia del
agotamiento de los carbohidratos. Es un proceso complejo que consta de las siguientes etapas:
1. Divisin abortiva de la clula. El ADN se replica y se
distribuye en dos regiones de la misma clula.
2. La membrana citoplasmtica se invagina y se
separan las copias de ADN. La localizacin de la
espora en desarrollo, dentro de la clula (pre-
espora), es caracterstica de cada especie. En algunas
se encuentra en el centro de las clulas, en otras en
los polos.
3. La pre-espora queda rodeada de dos membranas.
Entre ambas se deposita una capa gruesa de
peptidoglicano, que constituye la corteza (cortex)
4. La membrana externa forma la envoltura externa de
la espora, compuesta de una protena del tipo
queratina. Adems, en algunas especies, las esporas
estn rodeadas por una envoltura adicional
denominada exosporio.

Propiedades estructurales de la espora


Aunque la espora contiene todos los elementos que forman la clula vegetativa, en ella se encuentran compuestos
diferentes que cumplen algunas funciones relacionadas con la resistencia. Contribuyen a esta propiedad la presencia de
envolturas impermeables y el bajo contenido de agua. La espora contiene una alta concentracin de acido dipicolinico,
que no se encuentra en la clula madre, y una mayor concentracin de calcio, especialmente en la forma de dipicolinato
de calcio. Contiene, adems, algunos aminocidos sulfurados como cistena y metionina.

Resistencia
Las esporas son muy resistentes a los agentes fsicos y qumicos, a la desecacin y a agentes desinfectantes. Existen
diferencias en las resistencias de esporas de diferentes microorganismos.
La espora puede permanecer en estado latente por periodos muy largos, pero es capaz de germinar (germinacin de la
espora) rpidamente en presencia de nutrientes y de agua. Este periodo se caracteriza porque la espora pierde su
refringencia y su resistencia al calor, absorbe agua, se rompe la cubierta externa y crece una nueva clula vegetativa. En
resumen, una clula da origen a una espora y esta, al germinar, da origen a una nueva clula.

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Gentica bacteriana

La gentica bacteriana es una de las disciplinas microbiolgicas de mayor desarrollo en los ltimos aos y tiene una
enorme importancia, tanto en el estudio de los fenmenos genticos en si, como en sus aplicaciones tecnolgicas. Entre
estas pueden mencionarse las metodologas de ingeniera gentica, que han permitido en la actualidad la obtencin de
sustancias qumicas como la insulina, algunas hormonas, etc., gracias al metabolismo de bacterias en las cuales se ha
introducido la informacin gentica correspondiente para la sntesis de estos compuestos. Para lograr todos estos
avances ha sido necesario conocer los fundamentos de la codificacin gentica en las bacterias, sea sta cromosomal o
extracromosomal (plsmidos y transposones), como tambin los procesos por los cuales varan en forma estable las
propiedades de la clula bacteriana. Estos cambios se asocian a dos propiedades de la clula bacteriana: el genotipo y el
fenotipo.
El genotipo representa el total de las caractersticas hereditarias de la clula, que pueden o no expresarse en
determinadas circunstancias, es decir, una bacteria puede no manifestar una determinada propiedad pero poseer la
codificacin gentica correspondiente capaz de ser expresada en otras circunstancias.
El fenotipo, por otra parte, representa el conjunto de propiedades expresadas u observadas en un determinado
ambiente. Hasta nuestros das, las bacterias han sido estudiadas mediante el anlisis de sus fenotipos, lo que permiti
identificar gneros, especies y cepas, mediante metodologas generales, comnmente de tipo bioqumico.

Variacin gentica de las bacterias


Una de las caractersticas de todas las formas de vida, desde el punto de vista gentico, es la estabilidad o semejanza
entre las caractersticas de la descendencia y de los padres. Las bacterias tambin transmiten caractersticas a su
descendencia. El hecho de que se puedan identificar especies, e incluso cepas bacterianas, implica que estas son capaces
de transmitir la informacin gentica de generacin en generacin, con gran precisin. Sin embargo, existe una
variabilidad o cambio que puede expresarse en la descendencia en determinadas circunstancias. Los fenmenos de
variacin gentica permiten a las especies adaptarse a los ms variados medio ambientes y por esta razn forma parte
del proceso evolutivo de las especies.
Los procesos de variacin gentica que conducen a cambios estables en una o ms propiedades de las bacterias son la
mutacin y la transferencia de genes.

Mutacin
Es el cambio en la secuencia de nucletidos de un gen, lo que da origen a un nuevo rasgo gentico o a un fenotipo
alterado. Una clula que muestra los efectos de una mutacin se denomina mutante. Las mutantes poseen ciertas
caractersticas de las cuales las ms importantes son:
- espontneas en su aparicin
- ocurren al azar
- aparecen con frecuencias bajas y fijas (en relacin a la propiedad mutada y a la bacteria que sufre el proceso
gentico).
Las mutaciones bacterianas espontneas pueden ocurrir a un ritmo variable (frecuencia de mutacin 10-6 a 10-10). La
mayora de las mutaciones suelen ocurrir durante las replicaciones del ADN. Algunas se producen como resultado de
daos producidos por la luz ultravioleta o los rayos X. Como estos agentes forman parte del medio ambiente son
probablemente responsables de muchas mutaciones espontneas. Sin embargo, es posible aumentar artificialmente la
frecuencia de mutacin mediante agentes fsicos y qumicos que se denominan mutgenos. Las mutaciones obtenidas
con el uso de mutgenos son inducidas y se diferencian de las mutaciones espontneas solamente en la frecuencia.
Existen dos tipos de productos qumicos mutagnicos. Los primeros son compuestos que pueden reaccionar
qumicamente con el ADN, por ejemplo, el acido nitroso. El segundo tipo comprende anlogos de bases nucleotdicas,
que se intercalan en el ADN, reemplazando a las bases normales. Por ejemplo, 5-Bromouracilo, 2-Aminopurina, etc.

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Apuntes de Microbiologa Facultad de Ciencias Biolgicas
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Tipos de mutantes bacterianas


Entre las mutantes bacterianas podemos mencionar las siguientes:
- Mutantes resistentes a antibiticos y metales pesados.
- Mutantes que tienen una capacidad fermentadora alterada, aumentada o reducida.
- Mutantes con necesidades nutricionales deficientes (auxotrficas) que requieren, para su crecimiento, de un
medio de cultivo ms completo que aquel en el cual crecen las clulas no mutantes.
- Mutantes que muestran cambio en la forma de la colonia o en la capacidad de producir pigmento.
- Mutantes que presentan cambios en la estructura de su superficie y en la composicin de la clula bacteriana.
- Mutantes que son resistentes a las accin de los bacterifagos.
- Mutantes termosensibles.
- Mutantes que presentan algn cambio en sus caractersticas morfolgicas, prdida de capacidad de producir
cpsulas, flagelos, etc.

Transferencia de material gentico (horizontal)

La recombinacin bacteriana es la formacin de un nuevo genotipo por redistribucin de los genes despus de un
intercambio gentico. En las bacterias, la recombinacin gentica es el resultado de tres tipos de transferencia de genes:

Transformacin
Es la captacin de ADN soluble por una clula bacteriana. Este
se obtiene de una clula dadora, por lisis natural de ella o bien
por extraccin qumica. Las clulas bacterianas receptoras
deben estar en estado de competencia. Este estado consiste
en variaciones de la envoltura celular que permiten la
penetracin del ADN soluble. El proceso de transformacin o
captacin de ADN libre se observa en microorganismos del
gnero Bacillus, Haemophilus y Neisseria.
Despus de la lisis bacteriana sale al medio ADN libre, pero es
susceptible a la degradacin por nucleasas. An mas, solo una
pequea parte de las clulas de una poblacin son competentes y, para que el ADN transformado se exprese, es
necesario que provenga de un microorganismo homlogo y con ello disminuye la diseminacin de informacin entre
organismos diferentes.
El fenmeno de transformacin ha resultado til para estudios genticos con bacterias en el laboratorio, para conocer
los mapas genticos de los cromosomas bacterianos. Esta metodologa es frecuentemente utilizada en los procesos de
manipulacin gentica. Este tipo de transformacin fue posible gracias al hallazgo de que algunas especies bacterianas
podran volverse competentes al modificar sus propiedades de superficie. En el caso de Escherichia coli, el aumento de la
fuerza inica del medio y la elevacin de la temperatura, modifican las propiedades de permeabilidad de la membrana y
as la bacteria puede captar el ADN.

Transduccin
Es el proceso en el cual hay transferencia de genes de una bacteria a otra por medio de bacterifagos. Algunos fagos
pueden integrar su ADN al cromosoma bacteriano mantenindose all en estado latente (profago). Cuando esta bacteria
con el ADN viral integrado en su cromosoma (bacteria lisognica) entra en el ciclo ltico (en el cual el profago se activa
para proseguir su ciclo natural de reproduccin, espontneamente o por induccin con agentes como la luz UV) una
pequea parte del cromosoma bacteriano puede quedar, errneamente, ensamblado en el interior del fago. Cuando
este fago infecta otra bacteria, el fragmento del cromosoma bacteriano procedente de la primera clula bacteriana es
inyectado como si se tratara del ADN viral. Sin embargo, este fragmento cromosmico se convertir en parte integrante

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permanente del cromosoma de la bacteria infectada, la cual


adquirir las propiedades que codifica el ADN exgeno
recibido por parte del fago.
Este proceso proporciona un instrumento adecuado para
desarrollar cepas bacterianas con propiedades establecidas
artificialmente, para conocer los mapas de cromosomas
bacterianos y para otros muchos experimentos genticos de
importancia biotecnolgica.

Conjugacin
La conjugacin consiste en la transferencia de ADN que ocurre entre clulas
que estn en contacto fsico. Este proceso puede ocurrir tanto en bacterias
Gram negativas como en bacterias Gram positivas, an cuando ambos
procesos son diferentes. En este fenmeno gentico se distinguen dos tipos
de clulas: dadoras, a partir de las cuales se transfiere el ADN y receptoras,
que son aquellas en las cuales se instala y replica este ADN. El ADN
extracromosomal que se transfiere, total o parcialmente, constituye
diferentes entidades genticas extracromosomales, algunas de las cuales
pueden, momentneamente, formar parte del cromosoma. Cada una de ellas
contiene una determinada secuencia de genes que le permiten replicar en
forma autnoma, sincronizadamente o no con la replicacin del cromosoma.
Adems estos genes tienen la informacin para que el ADN promueva su
propia transferencia. No son esenciales para la reproduccin de la clula que
los posee, pero aportan informacin gentica adicional que, en ciertos casos,
les permitir sobrevivir en un medio ambiente adverso, como es, por ejemplo,
el que presentan metales pesados antibacterianos.

Elementos genticos extracromosomales


Plsmidos
Los plsmidos son trozos circulares de ADN capaces de replicarse autnomamente
en el citoplasma de la clula bacteriana y a menudo codifican propiedades que son
necesarias para la sobrevivencia en ciertos ambientes.
Algunas de las propiedades determinadas por genes plasmidiales son:
- Sntesis de Pili, mediante el cual se produce la unin fsica entre dos clulas
Gram negativas.
- Resistencia a sustancias antibacterianas. Los plsmidos que confieren resistencia a los antibiticos se denominan
plsmidos o factores R. El factor R est formado por un elemento llamado factor de transferencia de resistencia
(RTF) que constituye la mayor parte del plsmido y contiene los genes necesarios para el proceso de
transferencia. Adems, contiene uno o ms elementos genticos separados denominados determinantes r, que
llevan a los genes de resistencia.
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- Resistencia a metales pesados, muy frecuentes en la naturaleza. Estos plsmidos suelen contener,
simultneamente, genes que determinan resistencia a compuestos antibacterianos como antibiticos.
- Resistencia a la luz UV.
- Virulencia. Algunos plsmidos contienen genes cuyos productos contribuyen a virulencia bacteriana. Por
ejemplo, existen plsmidos con genes que codifican la sntesis de productos relacionados con la invasividad
bacteriana en los tejidos, de compuestos quelantes de hierro (siderforos), de fimbrias que condicionan
algunas propiedades importantes como la adhesividad tisular de las bacterias, de hemolisinas, enterotoxinas,
otras exotoxinas, etc.
- Produccin de sustancias antimicrobianas. Algunos plsmidos codifican una clase especial de agentes
antimicrobianos llamados bacteriocinas, que son sustancias proteicas activas solo contra otras cepas
bacterianas de la misma especie.
- Actividades metablicas. Existen plsmidos que acarrean conjuntos de genes que determinan vas metablicas.
Por ejemplo, genes que participan en la degradacin de tolueno, acido saliclico, octano, etc.
Las propiedades ms importantes codificadas por plsmidos, desde el punto de vista mdico, son la resistencia a
antibiticos y los factores de virulencia, incluida la produccin de toxinas.

Elementos transponibles
Son segmentos de ADN que pueden insertarse en una molcula de ADN y tambin separarse de ella. Estos
elementos pueden transferirse de un sitio cromosmico a otro, de un cromosoma a un plsmido o viceversa.
Existen dos variedades de elementos transponibles: las secuencias de insercin que tienen la informacin
gentica mnima para la transposicin y los transposones que tienen las caractersticas de poseer otros genes
adems de los necesarios para la transposicin. Estos genes pueden codificar propiedades de inters clnico,
como por ejemplo la resistencia a antibiticos. Las principales propiedades de los transposones son:
- Incapacidad de replicarse autnomamente. Por esta razn, deben estar integrados en otra unidad de replicacin
gentica, como es el ADN de una fago de un plsmido o del cromosoma bacteriano.
- El transposn puede integrarse en varios sitios del ADN del husped.
- Los transposones pueden codificar una variedad de importantes propiedades como resistencia a antibacterianos
y a metales pesados, propiedades metablicas, etc.

Microbiota normal

Se denomina microbiota normal al conjunto de microorganismos que viven de forma habitual en un cuerpo sano. Los
lugares donde se encuentran pueden ser muy variados y en ellos desarrollan tareas beneficiosas para el ecosistema
general del cuerpo. Estas tareas incluyen la participacin en los procesos de digestin de alimentos y de sntesis de
vitaminas en el intestino, la produccin del pH cido de la vagina o la proteccin competitiva frente a patgenos.
Por consiguiente, en la mayora de los casos, la interaccin entre la microbiota normal y el ser humano es beneficiosa;
pero pueden producirse circunstancias en que esto cambie y la microbiota se torne patgena oportunista.
Los tratamientos con antibiticos de amplio espectro o la accin antisptica de algunos productos de limpieza (jabones,
por ejemplo) pueden alterar la microbiota normal lo que, en ocasiones, deja la puerta abierta para el desarrollo de
procesos infecciosos oportunistas que pueden llegar a ser graves.
La microbiota normal puede inducir una respuesta inmune en los tejidos que facilita el control de los microorganismos.
La microbiota normal se adquiere al momento de nacer y posee una composicin que es variable en el tiempo producto
del paso de los aos y de los cambios en la alimentacin.
La importancia de la microbiota normal radica en la capacidad de producir la estimulacin del sistema inmune,
produciendo bajas cantidades de IgA, principalmente. Participa en la exclusin competitiva con organismo extraos que
intenten ingresar al organismo; esto, produciendo bacteriocinas y antibiticos, compitiendo por los nutrientes y por los
receptores del hospedador. Tambin juega un rol importante en la nutricin y el metabolismo humano, en el proceso de
deconjugacin de las sales biliares y hormonas sexuales, en la sntesis de vitamina K y del complejo B.

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Zona Gram positivas Gram negativas Otros


Piel Staphylococcus
Corynebacterium
Propionilbacterium acnes
Orofaringe Streptococcus Neisseria Mycoplasma
-hemoltico Haemophillus Espiroquetas
Difteroides Bacteroides
Corynebacterium
Vagina Streptococcus Bacteroides Mycoplasma
Lactobacillus
Intestino Enterococcus Enterobacterias
grueso Micrococcus Bacteroides
Lactobacillus Pseudomonas
Clostridium

Perdida de la relacin de equilibrio entre la microbiota normal y su hospedador

La interaccin de los microorganismos con el hombre no siempre es beneficiosa o inocua sino que tambin puede ser
una interaccin patognica. Esto puede ser debido a la actividad de microorganismos intrnsecamente patgenos o a la
de microorganismos patgenos oportunistas de la microbiota normal o de otras poblaciones bacterianas que, por
heridas o por descenso de las defensas inmunitarias, llegan a colonizar sitios no permitidos, desarrollando all su accin
patgena.
El trmino infeccin refiere nicamente al desarrollo de un microorganismo dentro de un husped, el de enfermedad
hace referencia, tambin, a la respuesta del husped al crecimiento y factores de virulencia de un microorganismo.
La infeccin puede adquirir varios grados:
- Colonizacin: es el grado mnimo de la infeccin. Las bacterias colonizan las mucosas y se multiplican all sin que
haya una respuesta clnica o inmune por parte del husped. (Por ejemplo, la presencia de estafilococos
potencialmente patgenos en la cavidad nasal).
- Infeccin inaparente: en la que el husped no muestra una respuesta clnica especfica, pero s se observa una
respuesta inmune. Es una infeccin asintomtica o sub-clnica.
- Enfermedad infecciosa: en la que se producen sntomas clnicos y respuesta inmune.

La infeccin sub-clnica suele producirse cuando ocurre el contagio por un nmero pequeo de microorganismos o estos
son poco virulentos; la enfermedad se produce cuando los microorganismos son muy virulentos o su nmero es mayor
de forma que interfieren con los mecanismos de resistencia del husped.

La enfermedad infecciosa y la sub-clnica siguen una evolucin similar. Sin embargo, en ocasiones se pueden producir
infecciones crnicas en las que el husped se convierte en un portador asintomtico del patgeno (por ejemplo, el caso
de la fiebre tifoidea).

Postulados de Koch
Las infecciones se caracterizan por su especificidad. Esto es, cada microorganismo patgeno produce una infeccin
determinada causando un cuadro clnico caracterstico. La especificidad de la infeccin se comprueba mediante los
postulados de Koch, que permiten identificar el agente etiolgico de un proceso infeccioso.
Los postulados son los siguientes:

1. El microorganismo debe encontrarse en todos los casos de la enfermedad.


2. Debe aislarse y obtenerse como cultivo puro a partir de las lesiones.
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3. Debe reproducir la enfermedad cuando se inocula, a partir de un cultivo puro, en un animal de experimentacin
susceptible (modelo animal)
4. Debe aislarse el mismo microorganismo en cultivo puro a partir de las lesiones producidas en el animal.
5. El microorganismo debe inducir una respuesta inmune con la aparicin de anticuerpos especficos, en la sangre del
hombre o animal infectado, que puedan demostrarse por pruebas serolgicas.

Microorganismos patgenos primarios


Son los patgenos verdaderos o estrictos. Tienen la capacidad de colonizar, de producir enfermedad en huspedes
normales sanos en los que superan las barreras de defensa normales.
Son los patgenos clsicos: Staphylococcus aureus, Streptococcus del grupo A, Neisseria gonorrhoeae, Salmonella,
Shigella, Brucella, Corynebacterium diphteriae, Vibrio cholerae, etc.

Estos patgenos se caracterizan porque:


- Proceden de una fuente exgena y es necesario adquirirlos por contagio.
- Su accin patgena es debida principalmente a factores dependientes del mismo propio microorganismo
(factores de virulencia)
- Producen un cuadro clnico ms o menos especfico de la enfermedad lo que facilita el diagnstico.

Microorganismos patgenos secundarios u oportunistas


Son capaces de colonizar el organismo slo cuando fallan sus defensas y cambian sus condiciones ecolgicas. Por tanto,
las condiciones alteradas del husped son el factor determinante de las enfermedades infecciosas producidas por
patgenos oportunistas.
A este grupo pertenecen muchos microorganismos de la microbiota normal o ambiental tales como Klebsiella,
Enterobacter, Serratia, Proteus, Pseudomonas, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus del grupo D.

Estos patgenos se caracterizan porque:


- En general proceden de una fuente endgena (microorganismos de la microbiota normal o externa que se han
integrado como parte de la microbiota normal por un periodo de tiempo antes de desencadenar la
enfermedad).
- Su accin patgena es debida principalmente a las condiciones deficitarias del husped.
- Producen un cuadro clnico atpico que se aade al estado que presenta el enfermo lo que dificulta el
diagnstico.

Patgenos intracelulares y extracelulares


En relacin con su interaccin con las clulas, las bacterias pueden agruparse en tres clases (los virus son todos
patgenos intracelulares):
- Las bacterias extracelulares se multiplican en los espacios intercelulares y son eliminados con facilidad por los
fagocitos. Slo producen enfermedad si pueden escapar de la accin de stos (cpsulas) o si el husped tiene el
sistema inmune deficitario. Son ejemplos Staphylococcus, Neisseria, Clostridium, Cryptococcus.
- Las bacterias intracelulares facultativas se multiplican en el medio extracelular y, si son fagocitadas, desarrollan
mecanismos para inhibir la digestin y pueden permanecer vivas largo tiempo en el interior del fagocito o
invadir, desde l, otras clulas. Por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis, Listeria, Brucella.
- Las bacterias intracelulares obligadas slo pueden multiplicarse en el interior de las clulas. Por ejemplo:
Mycobacterium leprae.

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Patogenicidad microbiana

El hombre est continuamente expuesto a una amplia variedad de microorganismos del ambiente. Sin embargo, solo
una pequea proporcin de ellos son capaces de interaccionar con el husped para producir infeccin y enfermedad. La
capacidad de los microorganismos para causar enfermedad se define como patogenicidad. Esta propiedad es
caracterstica de cada especie bacteriana. Por otro lado, dentro de una especie bacteriana existen cepas con diferentes
grados de patogenicidad y es lo que se denomina virulencia. Por lo tanto, la virulencia proporciona una expresin
cuantitativa de la patogenicidad o de la posibilidad de causar enfermedad. En algunas especies bacterianas, las cepas
avirulentas mantienen su capacidad antignica, con lo cual son capaces de inducir una respuesta inmune, de tal manera
que son utilizadas en la preparacin de vacunas; por ejemplo la vacuna BCG (clulas vivas atenuadas de Mycobacterium
bovis), vacuna Sabin (cepas de polivirus vivo avirulentas).
La caracterstica esencial de la mayora de las infecciones es la multiplicacin exitosa de un microorganismo en un
husped. A menudo, este proceso es beneficioso para ambas partes. Por ejemplo, despus del nacimiento, el ser
humano est expuesto a una gran variedad de microorganismos, lo que lleva al establecimiento de la flora microbiana
normal, que estimula constantemente su sistema inmune. Los seres humanos que sufren estas infecciones permanecen,
con frecuencia, asintomticos o presentan signos sub-clnicos, pero en general salen beneficiados.
En los ltimos aos, el nmero de infecciones causadas por microorganismos, que anteriormente se consideraban no
patgenos, ha aumentado. La mayora de estos microorganismos pertenece a la microbiota humana normal. Estas
infecciones se producen en individuos cuyos factores defensivos estn alterados por otras enfermedades o por una
prolongada terapia inmunosupresora o de tratamiento con antibiticos.
Tales microorganismos son llamados patgenos oportunistas (baja probabilidad de causar infeccin en un hospedero
sano) para distinguirlos de los patgenos primarios, que pueden causar enfermedad en individuos que no tienen ningn
factor predisponente.
El trmino de enfermedad infecciosa se aplica a la aparicin de signos y sntomas debidos al dao y a alteraciones
fisiolgicas asociadas con ella. Por lo tanto, un microorganismo patgeno es aquel capaz de producir una enfermedad.
Sin embargo, no todos los microorganismos patgenos tienen igual probabilidad de causar enfermedad en una misma
poblacin de huspedes susceptibles. Para causar la enfermedad infecciosa un microorganismo patgeno debe:
- Penetrar en el husped
- Desarrollar su metabolismo y multiplicacin en los tejidos del husped
- Resistir a las defensas del husped
- Producir dao en el husped

Cada uno de estos procesos


es complejo y deben
cumplirse todos ellos para
que se produzca
enfermedad. El cmo se
lleva a cabo cada uno de
estos procesos esenciales,
as como los mecanismos
que determinan la
especificidad de tejido y de
husped, constituyen lo que
en conjunto se denomina
Patogenicidad Microbiana.
El primer paso en el proceso
de patogenicidad es la
interaccin entre husped

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y parsito. Actualmente, se considera que la adherencia de los microorganismos a las superficies o tejidos del husped
es altamente especfica y esencial para los pasos posteriores del proceso patognico. Para lograr este objetivo, el
microorganismo infectante debe emplear propiedades quimiotcticas y estructuras adhesivas, o adhesinas, que
intervienen en la fijacin a receptores especficos de la clula eucariota. Los microorganismos preexistentes y la
microbiota normal compiten en el establecimiento de un nuevo microorganismo, sirviendo por lo tanto como una
barrera defensiva inespecfica.
Para algunas bacterias, la fijacin a una superficie mucosa constituye su destino final, ya que permanecen all ejerciendo
su poder patgeno por contacto celular y/o elaboracin de toxinas, que actan sobre las clulas adyacentes o distantes.
Sin embargo, para muchos otros microorganismos el proceso de fijacin representa solo el establecimiento inicial para,
posteriormente, penetrar e invadir los tejidos del husped. Para sobrevivir a las barreras defensivas, los
microorganismos poseen factores de virulencia, los que en algunos casos son verdaderas toxinas que matan, lesionan o
alteran la funcin de la clula. En cambio, hay otros factores de virulencia que proporcionan una proteccin sin ser
directamente nocivos para las clulas del husped.
Los mecanismos normales de defensa del husped constituyen el siguiente y ms difcil conjunto de obstculos que
debe enfrentar el microorganismo patgeno. Algunos de los mecanismos ms conocidos para contrarrestar estas
defensas incluyen la presencia de una cpsula con propiedades anti-fagocitarias y la elaboracin de toxinas y enzimas
microbianas que actan sobre las clulas del sistema inmune del husped y destruyen las barreras anatmicas. Adems,
los microorganismos pueden emplear otros mecanismos para evitar las defensas del husped que consisten en la
sntesis de proteasas especficas para las inmunoglobulinas, en mecanismos de secuestros del hierro o en recubrirse
con protenas del husped para evadir al sistema inmune. La variacin antignica y la invasin intracelular son otras
estrategias comunes empleadas con xito por los microorganismos patgenos para evitar su deteccin inmunolgica.
El resultado de los sucesos descritos est determinado por el grado de adaptacin del patgeno y por la naturaleza de la
relacin que ha establecido con el husped. Para cumplir con esto, la bacteria posee los denominados factores de
virulencia, que corresponden a estructuras bacterianas o productos extracelulares sintetizados por las bacterias que
permiten su establecimiento en un husped particular y estimulan su potencial para causar enfermedad.

Factores de virulencia bacterianos


Factores de adherencia
Una vez que la bacteria entra en un husped, debe adherirse a alguna clula o
tejido. Si esto no curre, podra ser fcilmente eliminada por algn mecanismo de
defensa inespecfico como el mucus u otros fluidos que cubren las superficies
tisulares, los movimientos peristlticos, el proceso de miccin, la tos, etc.
La adhesin bacteriana es un fenmeno altamente especfico. Actualmente se
sabe que las bacterias presentan adhesin preferente a algunos tejidos, lo que
se conoce como especificidad tisular.
Las estructuras bacterianas responsables del fenmeno de adherencia se
denominan adhesinas y entre ellas se encuentran fimbrias, glicoclix, protenas
de membrana externa, cidos lipoteicoicos y receptores de fibronectina. La
identificacin y purificacin de estas adhesinas microbianas ha permitido la
produccin de vacunas que pueden inducir en el husped una proteccin
duradera. Sin embargo, para ser efectivas, los anticuerpos producidos por stas deben ser liberados cerca del tejido
susceptible y ser capaces de bloquear la fijacin bacteriana. Estos puntos constituyen los dos obstculos ms
importantes en los esfuerzos para producir vacunas anti-adhesinas que sean realmente efectivas. Por otro lado, la
adherencia bacteriana puede ser bloqueada por antibiticos.

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Factores de diseminacin e invasin celular


La diseminacin e invasin tisular son procesos esenciales para la mayora de las bacterias, para su establecimiento en el
husped y para la produccin de enfermedad. Para esto, las bacterias producen enzimas que degradan los tejidos del
husped.
- Colagenasa: enzima proteoltica que acta degradando el colgeno, principal protena del tejido conectivo
fibroso. Esto promueve la diseminacin de las bacterias en los tejidos.
- Coagulasa: enzima sintetizada por las cepas de Staphylococcus aureus que produce la coagulacin del plasma.
Esto contribuye a la formacin de mallas de fibrina alrededor de la lesin que ayuda a la persistencia de los MO
en los tejidos, ya que los protege de la fagocitosis.
- Hialuronidasas: enzimas que hidrolizan el cido hialurnico, un constituyente del tejido conectivo. Son
producidas por muchas bacterias (Staphylococcus, Streptococcus y anaerobias) y favorecen su diseminacin a
travs de los tejidos.
- Fibrinolisinas: enzimas que tambin se denominan estreptoquinasas, debido a que muchas cepas de
Streptococcus hemolticos la producen. Su funcin es disolver el plasma coagulado y por lo tanto ayudar en la
diseminacin de los Streptococcus en los tejidos.
- Hemolisinas: enzimas del tipo lecitinasas, cuyo principal sustrato es la fosfatidilcolina. Tambin se denominan
hemolisinas ya que tienen la capacidad de destruir los glbulos rojos.
- Leucocitidinas: enzimas que destruyen leucocitos. Estos productos actan a distancia y, por lo tanto, pueden
proteger a la bacteria antes que los fagocitos tomen contacto con ellas. Las principales bacterias productoras de
leucocitidinas son aquellas altamente invasivas, como por ejemplo, Pseudomonas sp., Staphylococcus sp.,
Streptococcus pyogenes (grupo A), especies de Clostridium (productores de gangrena gaseosa), etc.

Factores que permiten vencer las barreras defensivas del husped

1. Factores anti-fagocitarios: existen diferentes formas por las cuales las bacterias pueden evitar el proceso de
fagocitosis propiamente tal o la muerte dentro del fagocito.

- Escape a la ingestin: el principal mecanismo que evita


que ocurra la fagocitosis es la presencia de una
estructura denominada cpsula. Esta estructura (con
excepcin de la cpsula de Bacillus anthracis, que es un
polipptido) es de naturaleza polisacrida, pudiendo
contener cido hialurnico (Streptococcus pyogenes y
grupo C), o cido silico (Neisseria meningitidis).
Adems, otras especies bacterianas presentan
polisacridos complejos como es el caso de
Streptococcus pneumoniae y Klebsiella pneumoniae.
La mayora de estas estructuras anti-fagocitarias
presentan heterogeneidad antignica. Por ejemplo, existen ms de 80 tipos capsulares de S. pneumoniae y ms
de 60 tipos de protena capsulares en S. pyogenes. Los anticuerpos formados contra un tipo de factor anti-
fagocitario protegen al husped especficamente contra un antignico. Por lo tanto, en esos casos la inmunidad
que se obtiene es homotpica.

- Escape a la muerte intracelular: algunas bacterias como Mycobacterium tuberculosis y Chlamydia trachomatis,
viven y crecen dentro de las clulas como polimorfonucleares, macrfagos o monocitos. El mecanismo
empleado por estas bacterias es evitar la fusin entre lisosomas y fagosomas, lo cual se debe a una modificacin
de la membrana de los fagosomas. Los microorganismos contribuiran a esta modificacin mediante la secrecin
de compuestos o tambin por la presencia de algunos compuestos que son parte de su estructura. Otros
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microorganismos producen enzimas tales como catalasa, peroxidasa y superxido dismutasa que les permiten
resistir la accin de molculas txicas que se producen durante los procesos de fagocitosis.

2. Variacin antignica: algunas bacterias u otros microorganismos tienen la capacidad de cambiar


frecuentemente los antgenos de superficie. Los factores que controlan estos cambios no estn del todo
dilucidados, pero se involucra principalmente a los fenmenos de mutacin o arreglos de genes (lo que se
traduce en un cambio de la expresin gentica). Est claro que estos cambios en la forma antignicas permiten a
los microorganismos evadir los sistemas defensivos del husped. De los ejemplos de variabilidad antignica, el
ms estudiado a nivel molecular es el que presenta Neisseria gonorrhoeae. Este microorganismo cambia algunas
protenas de la membrana externa, las cuales junto con las fimbrias participan en el proceso de adherencia. Por
otro lado, esta variabilidad se ha relacionado con la capacidad de este microorganismo para colonizar otros
sitios anatmicos y transmitirse de un husped a otro, tal vez con receptores celulares diferentes para la
adhesin bacteriana; lo que estara favoreciendo el establecimiento y la colonizacin en nuevos individuos.

3. Resistencia al suero: este mecanismo se refiere a la proteccin contra los componentes antimicrobianos del
complemento presente en el suero. La manera ms efectiva para protegerse es prevenir su activacin. La
bacteria realiza esto de diferentes maneras: por ejemplo, la pared celular de Staphylococcus aureus es un buen
activador del complemento, pero sta, al recubrirse por una cpsula, previene la activacin; otro ejemplo es la
cpsula, rica en cido silico, presente en cepas de Streptococcus grupo B y de Escherichia coli que tambin
inhibe la activacin del complemento por la va alterna.
Otro mecanismo de resistencia al suero es el que se observa en
las cepas de meningococos. Este consiste en recubrir la superficie
celular con IgA, clase de inmunoglobulina que no activa la
cascada del complemento. Por otra parte, algunos bacilos Gram
negativos, como Salmonella sp. o E. coli, resisten la accin del
complemento produciendo cambios en la longitud de las cadenas
de antgeno O del lipopolisacrido. Es as como cepas con
cadenas de antgeno O de mayor longitud (cepas lisas) no
permiten que el complejo de ataque del complemento se una a la
membrana citoplasmtica. En cambio, en las cepas con cadenas
cortas de antgeno O, o bien en cepas que no lo presenten (cepas
rugosas), el complejo de ataque del complemento alcanza su sitio
receptor, presente en la membrana citoplasmtica, produciendo
la lisis bacteriana.

4. Proteasas de IgA1: algunas bacterias producen esta enzima que hidroliza la forma A1 de la inmunoglobulina A,
principal anticuerpo presente en las superficies mucosas, y por lo tanto constituye un factor de virulencia muy
importante en bacterias patgenas tales como Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Haemophilus
influenzae, Streptococcus pneumoniae y algunas cepas de Bacteroides melaninogenicus. La produccin de esta
enzima permite a estas bacterias inactivar el primer anticuerpo presente en las mucosas y, por lo tanto, eliminar
este mecanismo defensivo del husped.

Factores de competencia por nutrientes


Las bacterias patgenas y no patgenas deben competir por los nutrientes. De los nutrientes esenciales, el hierro es el
ms estudiado.
Los humanos y los animales tienen abundantes cantidades de hierro, pero este se encuentra principalmente dentro de
las clulas en la forma de hemoglobina o mioglobina y por lo tanto no est disponible para las bacterias. Las bacterias
necesitan, para crecer, alrededor de 0.4 4 mol/L de hierro, por lo que han desarrollado mecanismos para obtenerlo

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para su metabolismo esencial. Uno de los principales sistemas corresponde a los denominados siderforos, que
corresponden a complejos sistemas con elevada afinidad por el hierro.
Entre los siderforos ms estudiados tenemos las enterobactinas (sintetizadas por E. coli y alguna otras
enterobacterias) y el ferricromo (sintetizado por algunos hongos). La produccin de siderforos responde a la baja
concentracin de hierro en el ambiente. Una vez que el siderforo capta el hierro, ste es internalizado en la clula
bacteriana a travs de protenas especficas presentes en la membrana externa, las cuales tambin son sintetizadas bajo
condiciones de baja concentracin de hierro.

Toxinas bacterianas

Algunos microorganismos producen sustancias txicas denominadas toxinas. La capacidad de un microorganismo para
producirlas y su potencia son factores muy importantes en la produccin de una enfermedad.
Las toxinas bacterianas pueden ser clasificadas en dos grupos: exotoxinas, toxinas secretadas hacia el medio externo, y
endotoxinas, estructura bacteriana correspondiente al lipopolisacrido, presente en las bateras Gram negativas. Las
principales diferencias entre estos dos tipos de toxinas son:

Exotoxinas Endotoxinas
Secretada por bacterias Gram positivas y Gram negativas Forma parte de estructuras de bacterias Gram negativas
Polipptidos Lipopolisacridos (LPS)
Relativamente inestable a la temperatura de 60C Relativamente estable a la temperatura
Generalmente antignica. Estimula la produccin de Estimula la formacin de anticuerpos no protectores
antitoxinas
Generalmente se puede transformar en toxoide No se transforma en toxoide
Poder txico elevado Toxicidad relativamente baja
No produce fiebre Produce fiebre

Exotoxinas
Las exotoxinas se presentan en muchas formas. Existe, sin embargo, un modelo estructural al cual se ajustan varias
exotoxinas importantes, entre ellas: toxina del clera, toxina diftrica, toxina tetnica, toxina de Shiga, etc. Segn el
modelo A-B, estas toxinas estn formadas por una subunidad de fijacin (B) y una fraccin enzimtica (A), que es
responsable de los efectos txicos que provoca cuando ha penetrado en la clula.
Otros criterios para clasificar las toxinas se basan en la clula o tejido sobre los cuales actan (por ejemplo,
enterotoxinas, neurotoxinas, leucotoxinas, citotoxinas), en su mecanismo de accin (por ejemplo, toxinas que ribosilan
el ADP, toxinas que actan sobre la adenilato ciclasa, etc.), en sus efectos biolgicos ms importantes (toxina
dermonecrtica, toxina hemoltica, etc.)
Actualmente se conocen varias enfermedades causadas por la produccin de toxinas, podemos encontrar las siguientes:

Enfermedad Especie bacteriana Actividad txica


Botulismo Clostridium botulinum Neurotoxina, parlisis muscular
Clera Vibrio cholerae Prdida de liquido desde el intestino delgado, vmitos
Intoxicacin alimentaria Staphylococcus aureus Nuseas, vmitos, diarreas
Difteria Corynebacterium diphteriae Parlisis nerviosa, inhibicin de sntesis proteica
Disentera bacilar Shigella dysenteriae Disturbios neurolgicos, diarrea
Ttanos Clostridium tetani Neurotoxina, contraccin muscular espasmdica
Tos convulsiva Bordetella pertussis Tos paroxstica

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Endotoxinas
Las endotoxinas son lipopolisacridos complejos presentes en la membrana
externa de bacterias Gram negativas y que son liberados cuando la bacteria es
lisada. Estn formados por tres fracciones: lpido A, polisacrido central y
antgenos O. De estos tres elementos, el que presenta actividad toxica es el
lpido A, por lo tanto, esta molcula es la responsable de los efectos biolgicos
caractersticos de la endotoxina. Cuando se inyecta endotoxinas a animales o
humanos se produce una serie de eventos, entre ellos fiebre, leucopenia,
hipoglicemia, hipotensin, activacin del factor C3 del complemento,
coagulacin intravascular diseminada y, finalmente, puede llegar a producir la
muerte puesto que se produce una disfuncin orgnica total.

Cocceas Gram positivas

Gnero Staphylococcus
El gnero comprende numerosas especies de amplia distribucin en la naturaleza, comportndose algunas de ellas
como patgenos muy importantes para el hombre produciendo infecciones agudas de una elevada incidencia.
Estas bacterias son cocos Gram positivos que se agrupan formando racimos y se caracterizan por una alta resistencia,
poco comn en bacterias no esporuladas, a agentes fsicos y qumicos, lo que explica su larga sobrevivencia en el medio
ambiente, hecho que hay que tener en cuenta en la prevencin de las infecciones estafiloccicas especialmente a nivel
hospitalario.
En el laboratorio son de fcil cultivo, pues no son bacterias exigentes, por lo que no requieren de medios mejorados
para su desarrollo.

Taxonoma
La taxonoma del genero es bastante compleja e incluye un importante nmero de especies (ms de 50), distribuidas en
diferentes hospedadores y en diferentes regiones anatmicas de un mismo hospedador. Las especies ms relevantes del
gnero son:
- Staphylococcus aureus
- Staphylococcus epidermidis
- Staphylococcus saprophyticus
Las caractersticas diferenciales ms importantes entre estas tres especies se anotan en el siguiente cuadro:

S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus


Produccin de coagulasa + - -
Fermentacin de la manita + - -
Produccin de toxina alfa + - -
Necesidad de biotina - + -
Presencia de protena A + - -
Sensibilidad a la novobiocina S S R

Staphylococcus aureus
Este microorganismo, a pesar de todos los adelantos de las ciencias biomdicas, incluyendo el desarrollo de variados y
potentes antibiticos, sigue siendo agente de importantes y severos cuadros clnicos en el hombre y es causa
permanente de preocupacin para el cuerpo mdico de cualquier pas. Se trata de una bacteria particularmente bien
dotada por la naturaleza, con un importante y variado arsenal de elementos ofensivos y defensivos. Su capacidad
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patgena es multipotencial, vale decir, no reside nicamente en algn componente estructural o en alguna sustancia
extracelular producida por esta bacteria, sino que su agresividad es el resultado de la accin conjunta de componentes
celulares (estructurales) y de sustancias excretadas que hacen del S. aureus uno de los parsitos ms exitosos que afecta
al hombre.

Componentes estructurales
- Cpsula (antgenos capsulares SSA y SPA): La presencia de capsula no es comn a todas las cepas de S. aureus,
pero las que la poseen (cepa Smith) adquieren un mecanismo defensivo contra la fagocitosis.
- Protenas: se han descrito tres protenas, la protena A, la B y la D. De estas, la ms importante es la protena A
que tiene capacidad de unirse a las IgG por su fragmento Fc, alterando de esta manera, la funcin de estos
anticuerpos y disminuyendo su accin antibacteriana.
- cidos teicoicos: estas bacterias poseen diversos cidos teicoicos que son importantes para mantener su
integridad y que adems juegan un rol en los mecanismos patognicos de los Staphylococcus.
- Plsmidos: la presencia de uno o ms plsmidos constituye un hecho de gran importancia clnica y
epidemiolgica, pues codifican resistencia para varios antibiticos y su transmisin de una cepa a otra
contribuye a difundir y elevar la resistencia a los antibiticos.

Sustancias extracelulares que se relacionan con el poder patgeno


- Coagulasa: esta sustancia tiene la capacidad de coagular el plasma y esta propiedad definen a las cepas como S.
aureus.
- Toxina o hemolisina : es responsable de la lisis de glbulos rojos humanos y de otras especies. Adems, tienen
efecto dermonecrtico.
- Toxinas exfoliativas: de las cuales existen el tipo A y el tipo B. Son producidas por ciertas cepas o fagotipos de S.
aureus y son responsables del dao que presentan los nios afectados por el sndrome de la piel escaldada.
- Toxinas del sndrome del shock toxico: producidas tambin por determinadas cepas de S. aureus.
- Enterotoxinas (A, B, C, C2, D, E): responsables de cuadros de intoxicacin alimentaria.
- Leucocidinas: sustancias que actan sobre leucocitos polinucleares y los transforma en glbulos de pus. Acta
en conjunto con la toxina .
- -lactamasas: la mayora de las cepas de S. aureus han adquirido la capacidad de producir estas enzimas que los
protege en forma efectiva de ciertos antibitico -lactmicos como bencilpenicilina y ampicilina
- Los S. aureus tambin producen hialuronidasa (factor de difusin) y estafiloquinasa7, ambas en cantidades no
significativas, proteasas, lipasa, gelatinasa y fosfatasa.

Cuadros clnicos que producen en el hombre


A nivel de piel produce fornculos, abscesos e imptigos que son lesiones localizadas, purulentas y necrticas. Tambin
a nivel de piel, el sndrome de la piel escaldada que suele presentarse en nios menores como consecuencia de la
colonizacin de ciertas regiones de su cuerpo por cepas de S. aureus que tienen la propiedad de producir dos potentes
toxinas, las llamadas toxinas exfoliativas A y B, las cuales difunden a travs de la sangre y llegan a la piel, donde su accin
produce el desprendimiento de la parte superior de la piel, dejando extensas zonas con el aspecto de quemaduras.
Los cuadros de onfalitis y de heridas quirrgicas infectadas se presentan con mayor frecuencia en el ambiente
hospitalario y son causadas por cepas endmicas de estos recintos.
Tambin puede afectar el aparato respiratorio, dando origen a faringitis, sinusitis, neumonas, cuadros de otitis
frecuente en nios. Se agrega tambin otros cuadros como meningitis y osteomielitis, particularmente difcil de tratar
por la ubicacin del microorganismo en el tejido seo, de mala circulacin.
Por la produccin y accin de sus diferentes enterotoxinas, es uno de los ms importantes causantes de cuadros de
intoxicacin alimentaria, que se producen cuando se consume algn alimento lcteo o derivado, el cual ha sido
contaminado con cepas de S. aureus productor de enterotoxinas. Estas toxinas se absorben a nivel intestinal y despus
de un periodo de incubacin de algunas horas aparecen los sntomas como vmitos y diarreas intensas.

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El sndrome del shock toxico aparece generalmente en mujeres jvenes como consecuencia del empleo de tampones
vaginales durante la menstruacin. El verdadero taponamiento que se produce en el canal vaginal favorece la
multiplicacin de cepas de S. aureus capaz de producir las toxinas o protenas que acarrean el desencadenamiento del
sndrome caracterizado por un alza de temperatura, hipotensin, cefalea, mialgias profundas, diarreas y vmitos
profusos, rash cutneo polimorfo y descamacin de la piel, entre otros.

Los Staphylococcus coagulasa negativos (S. epidermidis y S. saprophyticus) pueden ejercer un rol patgeno en ciertos
pacientes si se dan las condiciones favorables para la multiplicacin de estos microorganismos. As, pueden producir
endocarditis, infecciones urinarias e infecciones de tejidos en contactos con prtesis.

Aislamiento e identificacin
Como se trata de una bacteria que induce mayormente infecciones purulentas (bacteria pigena), las muestras que con
mayor frecuencia llegan al laboratorio son muestras de pus; tambin pueden recibirse muestras de secreciones, LCR,
orina y otras, dada la amplia posibilidad de S. aureus de infectar diferentes rganos y tejidos. Para el aislamiento se
utiliza generalmente agar sangre y un medio selectivo como el agar Chapman. Las cepas de S. aureus son amarillas oro y
deben coagular el plasma citratado para ser considerados e informados como tales. La tincin de Gram debe mostrar
cocos Gram positivos agrupados en racimos.

Tratamiento
- No productores de -lactamasas: Constituyen la minora. En este caso las drogas de eleccin son penicilina G o V
y como alternativas cefalosporina, eritromicina, vancomicina, ciprofloxacina.
- Productores de -lactamasas: Son la mayora, el tratamiento debe hacerse con penicilinas resistentes a -
lactamasas (cloxacilina y otros), como drogas de alternativa: cefalosporinas, imipenem, vancomicina, amoxicilina
+ acido clavulnico, eritromicina, lincomicina.
- Meticilino resistentes: Estas son las cepas que estas causando mayores problemas de tratamiento,
especialmente en el ambiente hospitalario. Muestran un amplio espectro de resistencia. El antibitico que ms
se emplea es la vancomicina, asociada o no a gentamicina. Se puede emplear adems ciprofloxacina y
sulfametoxazol-trimetoprim.

Epidemiologa
Es una bacteria ubicua y cosmopolita que forma parte de la microbiota normal de individuos (nariz, piel, cuero
cabelludo, orofarnge y tracto urogenital). Se transmite de persona a persona por contacto directo y tambin por
fmites (ropas). Es muy resistente a agentes qumicos y fsicos pudiendo permanecer largo tiempo en el ambiente. Se le
ha aislado del polvo de las habitaciones y de las ropas. Los grupos de riesgo son pacientes hospitalizados con
traumatismos o sometidos a ciruga o instrumentalizados, los pacientes tratados con antimicrobianos que alteran la
microbiota normal y los lactantes y nios menores (SPEE).

Epidemiologa de Staphylococcus coagulasa negativos


Son ubicuos y cosmopolitas. Pueden sobrevivir en superficies secas largo tiempo. Forman parte de la microbiota normal
de individuos (nariz, piel, cuero cabelludo, orofarnge y tracto urogenital). La transmisin se produce por inoculacin de
microorganismos durante la implantacin de una vlvula cardaca artificial y a travs de dispositivos protsicos,
catteres, prtesis articulares. El grupo de riesgo corresponde a pacientes hospitalizados portadores de catteres o
prtesis.

Profilaxis
- Lavado de manos minucioso y cobertura de las superficies cutneas expuestas.
- Aseo prolijo de habitaciones y fmites dentro del hospital.
- Desinfeccin y limpieza de heridas.

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Gnero Streptococcus
Se trata de bacterias con morfologa esfrica o ligeramente ovalada que se pueden agrupar en forma de diplococos,
cadenas cortas o cadenas largas, dependiendo de las condiciones en las que se ha desarrollado. Son Gram positivos,
exigentes para su cultivo, por lo que requieren medios mejorados; generalmente adicionados de sangre u otros lquidos
orgnicos. Obtienen su energa, especialmente, de glucosa, la que metabolizan con produccin de abundante cido
lctico, lo que rpidamente acidifica el medio e induce la autolisis de los Streptococcus. En medios slidos (agar sangre),
las colonias son pequeas, no pigmentadas y en algunos casos, francamente hemolticas.
Poseen una escasa resistencia a los factores ambientales, especialmente la disecacin, por lo que su supervivencia en el
ambiente extra-corporal es muy corta (a diferencia de los Staphylococcus), por lo tanto su transmisin se efecta,
principalmente, por mecanismos directos.

Clasificacin
Segn patrn de hemolisis, es la ms antigua y sencilla. Se basa en la accin de los Streptococcus sobre el agar
sangre en el cual han sido sembrados. As se tiene:
- Streptococcus -hemolticos: son aquellos en los cuales las colonias estn rodeados de un halo verdoso, por esto
se les llama tambin Streptococcus viridans.
- Streptococcus -hemolticos: en este caso, las colonias estn rodeadas de un halo claro, transparente, debido a
la lisis completa de los glbulos rojos contenidos en el medio.
- Streptococcus -hemolticos: son aquellos que no tienen ninguna accin sobre la sangre, por lo que se les
denomina inertes.

Clasificacin de Lancefield, clasificacin serolgica basada en la presencia de un componente estructural de los


Streptococcus, el llamado polisacrido C, que es antignico y diferente para cada cierto nmero de
Streptococcus.
De acuerdo a esta clasificacin, se han agrupado en 18 grupos que se designan con letras maysculas de la A a la
H y de la L a la U. los ms importantes para el hombre son:
- Grupo A: Streptococcus pyoegenes
- Grupo B: Streptococcus agalactiae
- Grupo D: en este grupo existe una subdivisin
o Subgrupo enterococo: Streptococcus faeciens, Streptococcus faecalis.
o Subgrupo no enterococo: Streptococcus bovis

Streptococcus -hemolticos Grupo A (Streptococcus pyogenes)

Componentes estructurales
- Cpsula de cido hialurnico: como toda estructura capsular, posee accin antifagocitaria. Qumicamente es
indiferenciable del hialuronato que constituye el cemento intercelular del tejido conectivo, lo que explica su
escaso o nulo poder antignico.
- Protena M: importante factor de virulencia de los Streptococcus pyogenes. Juega tres importantes roles: es
antifagocitaria, constituyen las fimbrias que facilitan la adherencia a las clulas susceptibles y es antignica. Su
composicin qumica vara entre las diferentes cepas y por lo tanto varia su carcter antignico (ms de 80
serotipos o variedades de protenas M)
- Carbohidrato C: llamado tambin carbohidrato grupo especifico, ya que permite separar a los Streptococcus -
hemolticos en grupos. Es un antgeno insoluble y para realizar la determinacin de grupo debe extraerse con
formamida.
- cido lipoteicoico: se ubica a nivel de las fimbrias. Favorece la fijacin del microorganismo a las clulas de la
mucosa bucal.

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- Peptidoglicn: reacciona en forma cruzada con el de muchas otras bacterias y produce varios de los efectos
biolgicos de la endotoxina de bacterias Gram negativas como fiebre, lisis de glbulos rojos, necrosis drmica y
cardaca y aumento de la resistencia no especfica.
- Protenas T y R: llamadas protenas asociadas a M, porque solo se encuentran presentes en cepas ricas en
protenas M. son antignicas y sus anticuerpos aparecen en la sangre de pacientes afectados de fiebre
reumtica.

Productos extracelulares
- Hemolisinas o estreptolisinas: la mayora de los Streptococcus de los grupos A, C y G producen dos hemolisinas,
la estreptolisina O (SLO) y la estreptolisina S (SLS). La primera es oxgeno lbil, antignica y es responsable de la
-hemlisis que las colonias desarrollan en la profundidad del agar sangre. Es leucotxica e induce la formacin
de anticuerpo, la antiestreptolisina O (ASTO). En cambio, la estreptolisina S es oxigeno estable, no es antignica
y es la responsable de las zonas de -hemlisis producidas en la superficie del agar sangre.
- Estreptoquinasa o fibrinolisina: esta sustancia es un activador del sistema fibrinoltico de la sangre, que cataliza
la conversin de plasmingeno en plasmina, la que digiere la fibrina y otras protenas. Es antignica, favorece la
difusin de estas bacterias, impidiendo la formacin de barreras de fibrina alrededor del foco de multiplicacin.
- Difosforopiridina nucleotidasa (DNPasa): posee efecto txico sobre los leucocitos que fagocitan a los
Streptococcus. Es antignica.
- Desoxirribunocleasa o estreptodornasa: esta enzima degrada el DNA (DNAasas). Se describen 4 tipos
inmunolgicamente diferentes (A, B, C, D). son capaces de despolimerizar el DNA altamente viscoso que se
acumula en forma de pus denso como resultado de la desintegracin de leucocitos polinucleares.
- Hialuronidasa: su sustrato est presente en la capsula de acido hialurnico. Sin embargo, solo ciertas cepas del
grupo A producen la enzima y ellos nunca forman capsula.
- Toxinas eritrgenas (escarlatinosas): se conocen al emnos 3 tipos antignicamente diferentes (A, B, C). son los
responsables del rash presente en los enfermos de escarlatina.
- Toxinas pirognicas: se han descrito 4 (A, B, C, D), son protenas extracelulares producidas por Streptococcus
pyogenes. A este grupo de sustancias se les ha relacionado con casos fatales de infecciones estreptoccicas y
con el sndrome de shock toxico.

Cuadros clnicos que producen en el hombre


- Faringoamigdalitis: es la ubicacin ms frecuente del Streptococcus grupo A. el cuadro clnico se caracteriza por
inflamacin de la zona afectada, dolor, fiebre alta, dolores musculares intensos y adenitis. A partir de este foco,
puede difundir al odo medio produciendo otitis, a la mastoides produciendo mastoiditis e incluso a ese nivel
puede originar un cuadro de osteomielitis y posteriormente llegar al cerebro y causar una meningitis. Tambin,
diseminndose de la regin amigdaliana, el germen puede infectar los senos paranasales, bajar al rbol
respiratorio inferior y originar bronquitis, bronconeumona o neumona.
- Escarlatina: este cuadro se origina por la multiplicacin de Streptococcus lisognicos a nivel del aparato
respiratorio superior. Ah, adems de la inflamacin caracterstica de una faringoamigdalitis, el Streptococcus
produce las toxinas eritrgenas que al difundir por va sangunea, van a originar el tpico rash cutneo por su
accin sobre los capilares, seguido por una descamacin de la piel.
- Infecciones de la piel
o Imptigo: lesiones superficiales no muy difundidas que aparecen a nivel de la cara y extremidades;
o Erisipelas: es ms seria, es una enfermedad aguda, febril, en que aparecen en la piel placas rojas,
rodeados de bordes netos y de rpida difusin.
- Infecciones sistmicas: Meningitis, endocarditis, peritonitis.
- Infecciones invasivas: Sndrome de shock txico estreptoccico
- Secuelas no supurativas
o Enfermedad o fiebre reumtica y Glomerulonefritis aguda

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Aislamiento e identificacin
- Las muestras deben ser sembradas rpidamente por la escasa resistencia de los Streptococcus al medio
ambiente.
- Las siembras deben hacerse en medios mejorados que contengan sangre, de preferencia de cordero. Las
siembras deben hacerse en superficie y en profundidad (para observar la accin de las SLS y SLO)
- Las colonias sospechosas que muestren una -hemolisis deben ser sometidas a una tincin Gram.
- Si se trata de colonias con -hemolisis, pequeas y constituidas por cocos Gram positivos agrupados en cadenas,
se puede suponer que se trata de un Streptococcus -hemoltico grupo A.
- Para una comprobacin rpida, se realiza el test de bacitracina que si es positivo de acuerdo con Maxted, con un
94 96% de probabilidad se tratara de un Streptococcus -hemoltico grupo A.

Tratamiento
Favorablemente, los Streptococcus -hemoltico grupo A, poseen una sensibilidad a un amplio rango de antibiticos. La
droga de eleccin sigue siendo la penicilina G y la penicilina V, en casos de alergia se recomienda la eritromicina, aunque
ocasionalmente algunas cepas pueden ser resistentes a ella. Como drogas de alternativa pueden emplearse
cefalosporinas, vancomicina, clindamicina. Se debe recalcar la importancia de un tratamiento precoz de las infeccines
para eliminarlos rpidamente del organismo.
Para evitar la recurrencia de la enfermedad reumtica se debe establecer lo que se llama profilaxis secundaria mediante
la quimioprofilaxis continua. La manera ms simple y eficaz de realizarla es mediante la inoculacin de 1 2 millones de
unidades de penicilina benzatina una vez al mes. Debera mantenerse hasta los 18 o 20 aos de edad.

Streptococcus pneumoniae
Cocos Gram positivos lanceolados y que por lo general crecen en pares (diplococos), presenta cpsula polisacrida,
sobre todo en productos patolgicos. Pertenece al grupo de Streptococcus viridans. En cultivo en medios lquidos puede
formar cadenas.
En medio de cultivo las caractersticas de las colonias son:
- Mas grandes que la mayora de los Streptococcus viridans.
- Presenta colonias lisas (S) o rugosas (R).
- Son solevantadas, luego umbilicadas por autolisis.
- Las del tipo III son ms grandes y mucosas que las de los otros tipos.

Cuadros clnicos en el hombre


Habitante normal o frecuente de las vas respiratorias superiores del hombre. El 30 70% de las personas lo albergan sin
que cause problemas. Producen en el hombre:
- Sinusitis, otitis, meningitis, neumona lobar, bronconeumonas.
Los cuadros ms importantes son los dos ltimos y los factores que favorecen su produccin serian:
- Aspiracin de material de las vas respiratorias.
- Inhibicin del reflejo de la tos.
- Dao al epitelio ciliado vibrtil por alcoholismo, anestesia, enfriamiento o por accin viral (Influenza, Sarampin)

Diagnostico y tratamiento
La muestra para el diagnostico puede ser: secrecin nasal, secrecin tica, LCR o desgarro. Con la muestra se puede
efectuar: examen directo con coloracin de Gram, reaccin de hinchamiento capsular, inoculacin experimental en
laucha blanca o cultivo.
Para el tratamiento, la penicilina es muy efectiva a concentraciones de 0,02 0,05 g/mL. Esta acta fijndose y
bloqueando las enzimas responsables de la sntesis de la pared bacteriana.

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Cocceas Gram negativas

Gnero Neisseria
Estos microorganismos son cocos Gram negativos de forma arrionada que se agrupan en pares, con los lados
adyacentes planos o cncavos, inmviles y no esporulados. Como los gonococos y los menigococos pueden sufrir rpida
autolisis, se observa variacin en la forma y el tamao en los cultivos viejos.
Son muy lbiles al medio ambiente, son muy sensibles a las variaciones de temperatura, a la desecacin, a la luz solar y a
los desinfectantes. Producen enzimas autoliticas responsables de su lisis in vitro.

Neisseria gonorrhoeae
Es el agente etiolgico de la gonorrea, enfermedad de transmisin sexual que afecta las mucosas del tracto
genitourinario inferior y con menor frecuencia las mucosas del recto, faringe y las conjuntivas. La infeccin se expresa
clnicamente como uretritis, cervicitis, salpingitis, conjuntivitis neonatal y diversas complicaciones sistmicas.

Factores de virulencia
- Pili: los gonococos poseen Pili de naturaleza proteica que se extienden desde la superficie celular, su presencia
es esencial para la fijacin inicial del gonococo a las mucosas humanas, son antifagocitarias, evitan la
destruccin por neutrfilos. Las cepas recin aisladas forman los tipos de colonias P+ y P++, en que los
microorganismos tienen numerosos pili. Luego de 24 horas de incubacin comienzan a predominar las colonias
P-, en que las clulas carecen de pili. Los microorganismos sin Pili son avirulentos. El desplazamiento entre las
colonias P+, P++ y P- se conoce como variacin de fase y esta mediada cromosmicamente.
- Protena Por: es la principal protena de membrana externa, funciona como una porina a travs de la cual entran
algunos compuestos aninicos a la celula. Evita la formacin del fagolisosoma en neutrfilos y/o disminuye el
estallido oxidativo. Posee variacin antignica.
- Protena Opa: participa en la adherencia intercelular de los gonococos y de la fijacin de estos a la superficie
celular del hospedador. En contraste con la protena Por, la protena Opa puede variar en cantidad o estar
ausente en una cepa en particular. Posee variacin antignica.
- Protena Rmp: se encuentra asociada con la protena Por. Induce la formacin de anticuerpos que neutralizan la
accin de los anticuerpos bactericidas contra Por y LOS.
- Tbp1 y Tbp2: protenas especficas asociadas con el empleo y transporte de hierro. Receptores para transferrina.
- Proteasas de IgA1: sintetizan una proteasa extracelular que hidroliza la forma A1 de la inmunoglobulina A,
protege a los microorganismos de los anticuerpos secretorios en las superficies mucosas.
- Lipooligosacrido (LOS): produce respuesta inflamatoria, gatilla la liberacin de TNF.

Cuadros clnicos ms importantes


N. gonorrhoeae es un parsito estricto de la especie humana. Con la excepcin de la transmisin perinatal, la
transmisin se produce por contacto directo con una persona infectada.

- Infeccin genital en los hombres: la uretritis aguda es la manifestacin predominante de la gonorrea en el


hombre. El periodo de incubacin es de 2 a 7 das, los sntomas principales son secrecin uretral purulenta y
disuria. El 95% de los hombres presenta sintomatologa aguda, y una pequea proporcin se mantiene
asintomtica. El proceso puede extenderse hasta el epiddimo. La infeccin puede adquirir un estado crnico.
- Infeccin genital en las mujeres: el sitio primario de la infeccin es el crvix, aunque los gonococos se recuperan
con frecuencia de la vagina, uretra y recto. Las infecciones locales son asintomticas en aproximadamente el
30% de los casos. Los sntomas sobresalientes son los de cervicitis y/o uretritis, incluyendo aumento de la
secrecin vaginal y disuria. Un 10 20% de los casos presenta infeccin genital ascendente con salpingitis,
pudiendo causar infertilidad, embarazos ectpicos y enfermedad inflamatoria pelviana.

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- Infeccin neonatal: las madres infectadas pueden transmitir la N. gonorrhoeae a sus hijos durante el parto. La
oftalmia neonatal es la manifestacin ms comn, que puede producir ceguera si no se trata.

Diagnostico
La toma de muestra debe efectuarse en lo posible en el mismo laboratorio. El aislamiento por cultivo debe utilizarse
siempre que sea posible para determinar la susceptibilidad antimicrobiana.
- Examen microscpico: la tincin de Gram es una prueba muy sensible y especfica para detectar la infeccin
gonoccica en hombres con uretritis purulenta. La presencia de diplococos Gram negativos en el interior de
leucocitos polimorfonucleares permite efectuar el diagnostico. En la gonorrea cervical los resultados negativos
deben confirmarse mediante cultivo. Para el diagnostico de infecciones rectal y farngea la tincin de Gram
carece de sensibilidad, el diagnostico de este tipo de infeccin debe hacerse por cultivo.
- Cultivo: debe efectuarse de inmediato en medios apropiados como agar chocolate. Las muestras obtenidas del
cuello uterino, del recto y faringe deben sembrarse solamente en medios selectivos. La incubacin se hace en un
ambiente hmedo y con una presin de CO2 de 5 a 10% durante 48 horas a 37C. A las colonias desarrolladas se
les hace el test de la oxidasa (oxidasa +) o pruebas bioqumicas.
La seleccin de los sitios anatmicos para cultivo depende del sndrome clnico y de los sitios expuestos. La uretra en
hombres heterosexuales; en homosexuales activos deben examinarse los sitios sintomticos y el recto; en la mujer,
muestras endocervicales y rectales.

Tratamiento
La droga de eleccin es la ceftriaxona, que es efectiva en todos los sitios infectados y tambin en mujeres embarazadas.
Como inconveniente se presenta el alto costo y la necesidad de administracin intramuscular.
La penicilina G procaina mas probenecid no es efectiva para las infecciones debidas a N. gonorrhoeae productora de -
lactamasa o cepas con resistencia a la penicilina mediada por cromosoma.
Las quinolonas son muy activas, incluyendo las cepas con resistencia a la penicilina o a la tetraciclina mediada por
plsmidos o cromosomas.
Se recomienda tambin el uso de tetraciclina para erradicar la infeccin coexistente ms comn que es la infeccin por
clamidias. Las tetraciclinas estn contraindicadas durante el embarazo.

Neisseria meningitidis
Neisseria meningitidis o meningococo puede colonizar la nasofaringe humana en forma asintomtica o causar
infecciones clnicas. Es una bacteria propia del hombre, que es su nico reservorio. Es el agente causal de la meningitis
epidmica y meningococcemia.
Los meningococos se clasifican en serogrupos en base a la composicin qumica del polisacrido capsular. Se ha descrito
13 serogrupos. Los serogrupos A, B, C, Y y W135 se asocias a la enfermedad meningoccica. Los grupos ms importantes
en clnica son los grupos A, B y C. Los grupos A, C, Y y W135 son buenos inmungenos, el grupo B es un inmungeno muy
pobre.

Estructuras de superficie
- Cpsula: es antifagocitaria, protege a los meningococos de la fagocitosis, es antignica, induce la formacin de
los anticuerpos opsonizantes, importantes en la inmunidad.
- Pili: actan en la adherencia a los receptores de las clulas epiteliales humanas.
- Protenas de membrana externa: las protenas del meningococo son anlogas a las protenas del gonococo y
permiten su clasificacin en serotipos. Una clase de protenas actan como porinas, otras actan en la
adherencia.
- Siderforos: protenas especificas que captan hierro.
- Proteasa de IgA: enzima que protege a los microorganismos de la accin de la IgA.

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- Lipooligosacrido (LOS): responsable de los efectos txicos que se observan en la enfermedad meningoccica, al
fragmentarse la membrana se libera la endotoxina al espacio extracelular produciendo alteraciones vasculares.

Cuadros clnicos
Las manifestaciones clnicas son variadas, pueden ir desde una bacteriemia hasta enfermedad fulminante y muerte en
pocas horas. Pueden producirse variaciones de estas manifestaciones en el paciente durante la evolucin de la
enfermedad. Las lesione petequiales constituyen un precursor comn de esta infeccin.

- Meningitis: se inicia en forma brusca con cefalea, fiebre, signos menngeos con un lquido cefalorraqudeo
turbio. En los lactantes y en nios pequeos, muchas veces, los nicos sntomas son fiebre y vmitos. La
confusin y rigidez de la nuca se observa aproximadamente en la mitad de los pacientes con meningitis
meningoccica. Se requiere un tratamiento rpido para disminuir la mortalidad y las secuelas de esta
enfermedad.

- Meningococcemia: la septicemia meningoccica con o sin compromiso menngeo es un cuadro grave con una
gran mortalidad. La alta resistencia al suero de los meningococos puede producir colapso vascular y shock. Se
observa coagulacin intravascular diseminada, que se debe a la gran cantidad de endotoxina en los tejidos y en
la circulacin. En todos los casos de meningococcemia se debe considerar la posibilidad de shock, el que
requiere de un tratamiento especfico.

Diagnostico de laboratorio
Las muestra mas utilizadas en el diagnostico de la infeccin meningoccica son el LCR y la sangre. Para el diagnostico de
portadores se emplean muestras de secrecin nasofarngea. El LCR se emplea para frotis y cultivo.
- Frotis: los frotis de LCR para tincin Gram deben ser fijados rpidamente para evitar la autolisis. Al examen
directo se observan diplococos Gram negativos en el interior de neutrfilos polimorfonucleares y en ubicacin
extracelular.
- Cultivo: las muestras de LCR o muestras obtenidas por puncin de lesiones cutneas y mucosas con petequias se
siembran en agar chocolate; las muestras que provienen de reas contaminadas con microbiota normal se
inoculan en medio selectivo de Thayer-Martin y se incuban de inmediato en una atmsfera hmeda con 5 a 10%
de CO2 durante 24 a 48 horas y a 37C. A las colonias sospechosas se les hace la prueba de oxidasa, pruebas
bioqumicas y test serolgicos con sueros especficos.

Tratamiento y quimioprofilaxis
La droga de eleccin es la penicilina G por va intravenosa o intramuscular. En personas alrgicas a la penicilina se usa
cloranfenicol por va intravenosa. Las cefalosporinas de tercera generacin son muy eficaces y se emplean cuando no se
puede utilizar el tratamiento convencional. Tambin ayudan las quinolonas.
La penicilina es ineficaz para eliminar el estado de portador; la rifampicina y la minociclina erradican el estado de
portador rpidamente.
La quimioprofilaxis se administra a las personas que tienen mayor riesgo de infeccin. Se ha demostrado que los
contactos intra-domiciliarios son de alto riesgo.
- Vacunas: se emplea vacunas para la prevencin de la infeccin meningoccica en la poblacin de alto riesgo. Las
vacunas son preparadas con polisacrido capsular especfico de grupo. En los pases en desarrollo se usa esta
vacuna en zonas de epidemia.
Las vacunas actuales incluyen un producto tetravalente que contiene los polisacridos de los grupos A, C, Y y W135, que
se administra a la poblacin de alto riesgo mayor de dos aos. Las vacunas meningoccicas son poco inmunognicas en
nios menores de dos aos, y por falta de una vacuna contra el grupo B, se recomienda la quimioprofilaxis para la
prevencin de los casos secundarios de enfermedad meningoccica en las guarderas.

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Moraxella catarrhalis
Es un diplococo Gram negativo, oxidasa positiva, aerbica, comensal del tracto respiratorio superior y del tracto genital
femenino. Es un patgeno de pacientes inmunodeprimidos y hospitalizados.

Enfermedades que produce


Clnicamente estas bacterias son conocidas por causar otitis media, bronquitis, sinusitis y laringitis. En pacientes
ancianos fumadores pesados crnicos con EPOC, la M. catarrhalis est asociada con bronconeumona, tambin como
exacerbaciones del EPOC subyacente. La frecuencia ms alta de colonizacin por M. catarrhalis parece ocurrir
aproximadamente a los 2 aos de edad, con una sorprendente diferencia en las tasas de colonizacin entre nios y
adultos (muy alta a muy baja). La prioridad de las investigaciones actuales incluyen ensayos para encontrar
una vacuna eficaz para este organismo genotpicamente diverso, tambin para determinar los factores envueltos en la
virulencia y su resistencia al complemento. El lipooligoscarido es considerado un posible factor de virulencia.

Diagnstico
La muestra ms importante es el esputo. Coloracin de Gram negativa. No oxida carbohidratos, a diferencia de
Neisseria.

Tratamiento
Las opciones de tratamiento incluyen el uso de antibiticos o el abordaje mediante tratamiento expectante. La gran
mayora de los aislamientos de casos clnicos de este organismo producen -lactamasas y son resistentes a penicilina. Se
ha reportado resistencia a sulfametoxazol-trimetoprim y tetraciclina. Es susceptible a quinolonas, la mayora de las
cefalosporinas, de segunda y tercera generacin, eritromicina y amoxicilina + cido clavulnico.

Bacilos Gram negativos

Generalidades
Existe un nmero elevado de bacilos Gram negativos que corresponden a especies bacterianas que ocasionan problemas
infecciosos en la especie humana. Estos microorganismos tienen hbitats diferentes y variados mecanismos de
patogenicidad, lo que dificulta un tanto su estudio sistematizado. Desde un punto de vista morfolgico y de condiciones
de cultivo, estas bacterias renen las siguientes caractersticas:

Propiedades morfolgicas y celulares


- Forma bacilar o coco-bacilar
- Presencia de flagelos pertricos (Enterobacteriaceae) o montricos (Pseudomonas)
- Presencia de fimbrias (comunes, Pili sexual, fimbrias P)
- Lipopolisacrido (lpido A con propiedades endotoxicas)
- Estructuras polisacridas externas a la clula importantes en fenmenos de adherencia ambiental y tisular
(cpsula, glicoclix)

Propiedades nutricionales
- Fcil desarrollo en medios corrientes
- Propiedades bioqumicas caractersticas de gneros o especies

Estructura antignica
- Antgeno O (lipopolisacrido en todas las especies). Varios determinantes antignicos. Antigenicidad del lpido A
- Antgeno H (flagelar). Varios determinantes antignicos y, en ocasiones, variacin de fase antignica flagelar
- Antgenos capsulares (antgenos K)
- Antgenos fimbriales
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- Antgenos de protenas de membrana externa


- Antgenos de protenas enzimticas (enterotoxinas)

Propiedades genticas
Al respecto, los genes de estas bacterias pueden estar ubicados en el cromosoma o en estructuras genticas
extracromosomales. La importancia de estos genes radica en la codificacin de:
- Sntesis de fimbrias
- Toxinas
- Protenas de membrana externa con participacin en la patogenicidad bacteriana
- Resistencia a agentes antibacterianos (-lactamasas, enzimas inactivantes de aminoglicsidos, etc.)

Propiedades patognicas
- Adherencia
- Invasividad basada en citotoxinas (capacidad para penetrar y destruir clulas y posteriormente avanzar hacia las
clulas vecinas)
- Enterotoxigenicidad (basada en la actividad de enterotoxinas termolbiles o termoestables, que incrementan la
produccin de AMPc y GMPc, respectivamente)
- Capacidad necrotizante de tejidos
- Lipopolisacrido, con la actividad biolgica de su lpido A
- Capacidad antifagocitaria de la cpsula

Bacilos Gram negativos fermentadores oxidasa negativos

Familia Enterobacteriaceae
Esta familia se encuentra constituida por un conjunto de gneros que incluye, a su vez, distintas especies con las
propiedades ya descritas. Se trata de una familia de bacilos Gram negativos sin agrupacin, fermentadores de glucosa,
anaerobios facultativos no productores de oxidasa, de una amplia distribucin y que tienen importancia patognica para
el hombre y algunos animales, afectando diferentes rganos y tejidos; otras son bacterias comensales y, por ltimo,
otras son fitopatgenas.

Estructura antignica
Ya se han mencionado anteriormente las propiedades antignicas generales de los bacilos Gram negativos. Esta
antigenicidad tiene consecuencias importantes:
- Permite identificar especies bacterianas en el laboratorio, cuando se cuenta con los sueros especficos para cada
antgeno
- Conduce a cierto grado de inmunidad en el individuo que forma anticuerpos contra estos antgenos
- Permite efectuar reacciones serolgicas pesquisando la tasa de anticuerpos, con el objeto de colaborar con el
diagnostico de la enfermedad.
Por lo general, las estructuras antignicas de estas bacterias estn formadas por complejos antignicos. Esto significa
que cada estructura antignica posee varios determinantes, cada uno con una especificidad diferente.

Antgenos flagelares (antgeno H)


Estn constituidos por los antgenos de las subunidades de flagelina que forman los flagelos. En ciertas especies de esta
familia, las bacterias que constituyen una cepa pueden tener dos estados antignicos, que se denominan fases
antignicas. Esto significa que el cultivo est formado por dos tipos de clulas, cada una de las cuales posee flagelos en
los cuales existe un antgeno diferente. Esto tiene importancia cuando se investigan los antgenos flagelares, porque la
reaccin negativa a algunos de ellos puede deberse a que la fase antignica respectiva no se encuentra expresada en ese
instante. Por lo general, los antgenos flagelares de la Fase I se denominan con letras minsculas, en tanto los de la Fase
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II se denominan con nmeros. La importancia de los anticuerpos antiflagelares es que inmovilizan las clulas en el
organismo infectado. Al mismo tiempo, durante el proceso infeccioso, el organismo, produce anticuerpos antiflagelares
que pueden ser titulados para diagnosticar la enfermedad.

Antgenos somticos (antgeno O)


El lipopolisacrido (LOS) presenta el antgeno O en la parte externa de la clula. Est formado por unidades repetitivas
de hidratos de carbono que constituyen los determinantes especficos de este complejo antignico. Aunque el lpido A
tambin tiene propiedades antignicas, este se encuentra inserto en la membrana citoplasmtica y por lo tanto, es difcil
que reaccione con sus anticuerpos en la clula intacta. Durante el proceso infeccioso, tambin se producen anticuerpos
anti O que pueden ser titulados por reacciones de aglutinacin. Por lo tanto, en algunas enfermedades (ej. fiebre
tifoidea) el titulo o tasa de anticuerpos anti H y anti O permiten diagnosticar la enfermedad.

Antgenos fimbriales
Los anticuerpos que se producen contra las fimbrias son de mucha importancia en cuanto a la proteccin que producen
en las etapas iniciales de la enfermedad infecciosa.

Antgenos de envoltura (antgenos K)


Estos corresponden a compuestos qumicos que rodean total o parcialmente a la clula bacteriana y constituyen
verdaderas cpsulas o microcpsulas, de naturaleza polisacrida, que juegan un rol de importancia en la proteccin de
las bacterias frente a la fagocitosis.

Antgenos extracelulares
Algunas sustancias que son producidas por las clulas son excretadas al exterior y, cuando se comportan como
antgenos, inducen la sntesis de anticuerpos. Esto ocurre, por ejemplo, con toxinas o enzimas de carcter extracelular
(enterotoxinas)

Poder patgeno (virulencia)


Adherencia: La adherencia se produce a travs de algunas subunidades proteicas de las fimbrias y los receptores
celulares. Tambin participan algunas protenas de membrana externa y un producto de naturaleza hidrocarbonada y de
elevada polimerizacin, el glicoclix. Que protege a las clulas contra las defensas orgnicas y contra agentes
antibacterianos.

LPS: Las bacterias Gram negativas aerobias poseen un LPS tpico, cuyo lpido A produce un determinado conjunto de
sntomas en el organismo como fiebre, leucopenia, alteracin de la coagulacin, activacin del complemento,
alteraciones de la presin arterial por liberacin de sustancias vasoactivas, alteraciones del metabolismo de glcidos y
hormonas, etc. Esta es la denominada actividad endotxica de los bacilos Gram negativos.

Cpsula: La proteccin que otorgan las estructuras de envoltura en los bacilos Gram negativos contra la fagocitosis les
permite multiplicarse hasta constituir poblaciones bacterianas numerosas que pasan a ser incontrolables por las
defensas orgnicas.

Toxinas: Los bacilos Gram negativos producen un conjunto de sustancias toxicas o con algn tipo de actividad
enzimtica que contribuye a su patogenicidad o virulencia.
- Hemolisinas y : se describe con frecuencia la actividad hemoltica de cepas de Escherichia coli, gracias a la
sntesis de o -hemolisina. Aun cuando estas enzimas pueden actuar sobre leucocitos, no se tiene certeza
acerca de su rol en la patogenicidad.
- Enterotoxinas: Estas son molculas extracelulares producidas por varias especies de bacilos Gram negativos,
pero especialmente por E. coli y Vibrio cholerae. Se describen actualmente dos tipos de enzimas de este tipo: LT

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(termolbil) y ST (termoestable). Las toxinas LT pueden ser codificadas plasmidialmente (E. coli) o
cromosomalmente (V. cholerae).

Las toxinas LT se encuentran formadas por una subunidad A que posee la actividad toxica y que a su vez est compuesta
por dos pptidos unidos por un puente disulfuro hidrolizable en el organismo y por cinco subunidades que forman la
subunidad B y permiten la unin de la toxina a las clulas sobre las que acta.
El mecanismo de accin de las toxinas LT y ST es muy similar, aun cuando actan sobre dos compuestos diferentes. La
LT acta en el sistema que sintetiza AMPc. La ST acta sobre el sistema que sintetiza GMPc. Ambos compuestos
participan en la regulacin del transporte inico y de agua a nivel de la mucosa intestinal. Como consecuencia final se
produce una elevada excrecin de agua en el intestino y esto se manifiesta como diarrea acuosa.

Citotoxinas: Actan directamente sobre las clulas epiteliales produciendo una alteracin e inflamacin de la mucosa
intestinal. Son producidas por E. coli enteroinvasiva y por Shigella sp. La actividad de estas toxinas afecta a las clulas
llamadas Vero y por esta razn se denominan verotoxinas. Ellas favorecen la profundizacin del proceso infeccioso a
capas profundas del tejido intestinal, con lo cual se desencadena una inflamacin intensa, existe exudado, sangre y
leucocitos en cantidad apreciable.

Plsmidos de virulencia: Algunos elementos genticos extracromosomales codifican estructuras o sustancias


importantes en la patogenicidad. Por ejemplo, codifican la sntesis de factores de colonizacin e incluso las
enterotoxinas. Estas bacterias se caracterizan por poseer plsmidos de resistencia a antibiticos.

Aislamiento e identificacin
Los bacilos Gram negativos son de fcil desarrollo, aislndose sin problemas en medios selectivos. Posteriormente se
identifican por:
- Sus propiedades bioqumicas
- Su estructura antignica O y H

Procesos infecciosos
- Infeccin entrica
- Infeccin del tracto urinario
- Infeccin de heridas quirrgicas
- Procesos pigenos
- Meningitis
- Infecciones respiratorias
- Fiebre tifoidea y paratifoidea
- Gastritis, ulcera gstrica y probablemente cncer gstrico

Gnero Escherichia
Estos microorganismos renen todas las caractersticas descritas para el grupo de fermentadores no productores de
oxidasa. Constituyen parte de la microbiota normal del intestino humano y de los animales. Por eta razn, su
investigacin en aguas y alimentos, en forma cuantitativa, sirve como referencia para establecer el nivel de
contaminacin de estos productos con deposiciones, lo cual constituye la denominada colimetra.
Pueden causar los siguientes cuadros clnicos
- Procesos pigenos
- Meningitis neonatal: se ha observado que las cepas responsables de esta enfermedad producen antgenos de
envoltura K1.
- Infeccin respiratoria

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- Infeccin del tracto urinario: es el principal agente etiolgico de esta infeccin. El recuento de bacterias en la
orina se denomina bacteriuria y cuando el nivel sobrepasa las 100.000 ufc/mL se habla de bacteriuria verdadera
(infeccin urinaria). Cuando es inferior a 10.000 ufc/mL se habla de bacteriuria de contaminacin.

Escherichia coli uropatognica


Es un bacilo Gram negativo. Causa el 90 % de las infecciones urinarias en individuos con vas urinarias estructuralmente
normales.
Enfermedad urinaria por Escherichia coli uropatognica:
- En individuos de sexo masculino causa infeccin cuando existen condiciones predisponentes
- Se manifiesta como cistitis, prostatitis y pielonefritis.
- En las mujeres la cistitis es bastante ms frecuente, como factores de riesgo de estas tenemos el embarazo (los
cambios de pH conducen a disminucin de flora lactobacilar y aumento de la flora coliforme), asociacin con
mala higiene. El origen de la infeccin es endgeno, es fecal (asociado a mala higiene)
- La cistitis no tratada se puede diseminar por va ascendente y causar pielonefritis y desde ah alcanzar la
circulacin y producir septicemia, shock endotxico, falla multiorgnica y muerte.

Factores de patogenicidad
- Los ms importantes son las fimbrias tipo 1, las fimbrias tipo P (la prdida de ellas se asocia a prdida de
uropatogenicidad), adhesinas no fimbriales y hemaglutinina.

Cepas de Escherichia coli diarreognicas


E. coli enteropatgena EPEC (DI 1010): estos agentes etiolgicos pertenecen solamente a serotipos de E. coli que
afectan a poblacin infantil, provocando diarrea. La patogenicidad de este microorganismo se relaciona con su
capacidad para adherirse fuertemente a las clulas de la mucosa intestinal, con posterior destruccin
(adherencia y borrado) de las microvellosidades y del citoesqueleto. Participan de la destruccin, las adhesinas
BFP y la intimina (los anticuerpos contra la intimina son los que confieren proteccin al husped). La diarrea
producida por ECEP se debe a la prdida de capacidad de absorcin tras el efecto de adherencia y borrado de las
microvellosidades. La diarrea por ECEP est acompaada por malestar general, vmitos, fiebre y heces con
mucus.

E. coli enterotxica ETEC (108 1010): coloniza el intestino pero no produce invasin. Elabora 2 tipos de
enterotoxinas (LT y ST) que actan en la mucosa intestinal. La toxina LT (inactivable por ebullicin) estimula el
aumento de AMPc en las clulas de la mucosa intestinal, lo que lleva a una acelerada excrecin de sodio,
cloruro y bicarbonato hacia el lumen intestinal. La toxina ST ejerce efectos similares pero tras el aumento de
GMPc. ETEC presenta fimbrias tipo 1 (codificadas por genes) y fimbrias que contienen los antgenos del factor de
colonizacin (CFA) que se codifican en plsmido. ETEC es causa importante de diarrea infantil en pases
desarrollados y en vas de desarrollo. Es una diarrea acuosa que se autolimita en unos das. Puede presentar
tambin fiebre, nauseas, vmitos y dolor abdominal; hay una caracterstica perdida de fluido intestinal. La
diarrea por ETEC no requiere tratamiento antibitico pero si debe controlarse con administracin de sales de
rehidratacin oral y dieta hipofermentativa. En casos de deshidratacin severa se requiere administracin
parenteral de agua y electrlitos. Los individuos adultos inmunolgicamente vrgenes para ETEC son susceptibles
a la infeccin, de ah que las cepas de ETEC sean la causa ms frecuente de diarrea del viajero (se produce
cuando un individuo viaja de pas industrializado a pas donde ETEC es endmica y se contagia con agua o
alimentos contaminados)

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E. coli enteroinvasiva EIEC (DI 108): esta cepa invade la mucosa intestinal. Coloniza el intestino grueso. Se
encuentra ntimamente relacionada con Shigella. La patogenicidad se asocia a la presencia de un plsmido
codificante de los factores de invasividad. Causa una enfermedad disentrica (fiebre, sangre y pus en materia
fecal)

E. coli enterohemorrgica EHEC (DI 10 100): estas cepas no son invasivas pero producen diarrea con sangre y
ausencia de leucocitos. Coloniza el colon transverso y ascendente. Se adhiere a los enterocitos y destruye las
microvellosidades (similar a ECEP). Elabora una fuerte citotoxina (Shiga-like) que causa el Sndrome Urmico
Hemoltico (10 % de los infectados). Aparece en forma de brotes epidmicos. El principal reservorio es el tracto
intestinal de bovinos. La transmisin se produce por la ingestin de alimentos contaminados con la materia fecal
de estos animales. La carne mal cocida (picada) es el vehculo de transmisin ms importante; la leche, los jugos
de frutas no pasteurizados y vegetales crudos tambin dan origen a brotes epidmicos. El tratamiento del
sndrome urmico comprende: hemodilisis, transfusin de eritrocitos y plaquetas y en casos graves trasplante
renal.

E. coli enteroagregativa EAEC: son cepas no invasivas que se adhieren al epitelio del intestino delgado
produciendo un aumento en la secrecin de mucus y llevando a la produccin de diarreas acuosas persistentes.

E. coli difusamente adherente DAEC: cepas que producen diarrea acuosa en nios entre 1 y 5 aos. Producen
alargamiento de las microvellosidades intestinales.

Gnero Shigella
Estas bacterias tienen gran importancia patognica, siendo agente etiolgicos de diversos cuadros diarreicos. Se
reconocen 4 especies: Grupo A Shigella dysenteriae, Grupo B Shigella flexneri, Grupo C Shigella boydii, Grupo D Shigella
sonnei.
Son bacilos Gram negativos, inmviles, fermentadores de glucosa sin produccin de gas pero que no fermentan lactosa.
Son patgenos primarios que no forman parte de la microbiota normal. Su reservorio es exclusivamente humano,
aislndose muy raramente del medio ambiente. El cuadro clnico ms caracterstico e importante que ocasionan es la
disentera bacilar, una infeccin localizada y ulcerativa del colon que se caracteriza por: frecuente evacuacin de
deposiciones, fiebre, dolor abdominal, deposicin mucosa y en ocasiones sanguinolenta. Debe recordarse que este
cuadro clnico, aunque no tan agudo, puede ser causado por E. coli enteroinvasiva (EIEC), con una fisiopatologa muy
similar y por otros microorganismos como Campylobacter, Plesiomonas, Salmonella, Vibrio y Aeromonas.
La enfermedad es altamente transmisible porque se inicia con la penetracin de un nmero de clulas bacterianas que
puede ser relativamente bajo (DI 100 - 200 clulas)

Varias propiedades relacionadas con la virulencia son codificadas por distintos plsmidos. El LPS de tipo liso es
codificado por un plsmido de elevado peso. Cuando este plsmido se pierde, la cepa vira hacia un tipo de LPS rugoso.
El proceso de entrada celular en la invasin tambin esta codificado plasmidialmente. Se han descrito algunos
polipptidos, ubicados en la membrana externa, que son codificados por genes extracromosomales que favorecen la
entrada de Shigella a las clulas intestinales. Por ltimo, para la infeccin de las clulas adyacentes se requieren algunas
protenas de membrana externa que son tambin codificadas por plsmidos.
El resultado final del proceso es la formacin de una zona de clulas destruidas que constituye la ulceracin
caracterstica de la infeccin.

Enfermedades que produce


Shigelosis: es una enfermedad disentrica, produce diarrea y calambres dolorosos durante la defecacin. Al comienzo
son heces acuosas y voluminosas pero a medida que la infeccin avanza se vuelven escasas, mucosas y sanguinolentas.
La fiebre se presenta en la mitad de los casos y la enfermedad es autolimitada, los casos mortales son raros. Se asocia a
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pobres condiciones sanitarias y mal nutricin. Su corto periodo de incubacin favorece la diseminacin de la poblacin
en contacto directo y la va fecal-oral de transmisin a travs de manos sucias y fmites. Muchos de los casos se
producen por ingestin de alimentos o agua contaminada.

Diagnstico
- Se sospecha en individuos con diarrea asociada a fiebre, toxemia u otro signo sistmico. La presencia de sangre y
pus en materia fecal presume esta infeccin.
- La prueba diagnstica definitiva es por el aislamiento del agente etiolgico en cultivo (MacConkey). Las muestras
son por hisopado rectal y coprolgico.

Tratamiento
Es sensible a combinaciones sulfametoxazol-trimetoprim, tetraciclina y quinolonas. Se debe asegurar una adecuada
rehidratacin oral y parenteral. Siempre es aconsejable hacer antibiograma debido a que existen cepas multi-resistentes
por adquisicin de plsmidos de E. Coli.

Gnero Salmonella
Son bacilos Gram negativos similares a otras enterobacterias. Presentan movilidad, no fermentan la lactosa y producen
sulfuro de hidrgeno a partir de aminocidos azufrados. Est compuesto por un conjunto de especies que tienen,
siempre, carcter patgeno para alguna especie animal. Desde este punto de vista, las especies de Salmonella pueden
agruparse en:
- Especies patgenas exclusivas sobre humanos: S. typhi, S. paratyphi, S. hirschfeldii, S. schotmelleri
- Especies patgenas exclusivas de animales: S. pullorum, S. gallinarum
- Especies patgenas para humanos y animales: S. typhimurium, S. enteritidids

Agrupacin
Se basa en la estructura antignica O y H de cada cepa. En este esquema, se han estructurado grupos de especies que
poseen un determinado antgeno O comn. Dicho antgeno est ausente en el resto de los grupos, por lo cual caracteriza
al grupo en cuestin. Adems de este determinante antignico, las especies tienen poseen otros que pueden
encontrarse en cepas de ms de un grupo. Dentro de los grupos, las especies se diferencian por la estructura antignica
de sus flagelos y, en ocasiones, por la presencia de antgenos de superficie como es el antgeno Vi.
Por lo tanto, la especie queda antignicamente definida como: parcelas antignicas O/parcelas antignicas H.

Enfermedades causadas por Salmonella


En el hombre, las especies de Salmonella pueden ocasionar
- Fiebres entricas (fiebre tifoidea y fiebres paratifoideas)
- Enterocolitis
- Cuadros septicmicos
- Meningitis, endocarditis y pericarditis, arteritis, osteomielitis, abscesos.

Fiebre tifoidea: es producida por Salmonella typhi, no tiene reservorio animal, por lo que la infeccin se origina a travs
de individuos enfermos o portadores de la bacteria. Se transmite (fecal-oral) a travs de la ingestin de alimentos o
aguas contaminadas por los enfermos. En general se adquiere de reas endmicas, en zonas carentes de agua potable y
red cloacal. Los sntomas aparecen a los 10 das de ingerida la bacteria y la fiebre aparece con un patrn cclico, luego de
una semana aparece la diarrea o la constipacin. Puede aparecer hepatomegalia y esplenomegalia. Complicaciones de
esta entidad son abscesos en el cerebro, huesos, riones, articulaciones y vlvulas cardacas. Tambin la infeccin,
hiperplasia y necrosis de folculos intestinales linfticos es una complicacin que puede aparecer. Luego de desaparecer
los sntomas, el paciente puede seguir excretando Salmonellas hasta un mes ms tarde.

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Diagnstico
Toma de muestra por sangre (hemocultivo), coprocultivo y urocultivo.

Bacilos Gram negativos no fermentadores

Pseudomonas aureginosa
Es similar a otros Gram negativos, es una bacteria aerobia estricta con un metabolismo muy verstil. Las colonias
aparecen tras 18 horas de incubacin y presentan brillo metlico. En cultivo en agar sangre son -hemolticos y en un
medio lquido sin agitacin generan una pelcula mucosa en la superficie del medio (avidez de la bacteria por el aire). Se
cultivan en medios selectivos como las enterobacterias, pero no fermentan azucares y son oxidasa positivos. Es
productora de pigmentos (diferencia con enterobacterias) que otorgan coloracin azul (piocianina) a las colonias; la
combinacin de los mismos otorga el caracterstico color verde de las colonias de P.aeruginosa.

Factores de patogenicidad
- Fimbrias y adhesinas no fimbriales
- Neuraminidasa
- Productos extracelulares: Exotoxina A, exotoxina S, elastasas, proteasa alcalina, leucocidinas, enterotoxinas,
formal-metionil pptidos y pigmentos, que contribuyen a la invasin de los tejidos, favorecen la produccin de
lesiones hemorrgicas y necrosis tisular.
- Endotoxinas, como todo Gram negativo presenta LPS, produce CID, sndrome de distrs respiratorio del adulto y
shock endotxico.

Enfermedades que produce


- Actualmente, raramente causa infecciones a individuos sanos de la comunidad pero es un patgeno de alta
incidencia en el medio hospitalario (8 a 14 % de infecciones intrahospitalarias).
- Como es un patgeno oportunista los individuos con severas inmunodeficiencias presentan mayor riesgo. Son
particularmente frecuentes en pacientes con quemaduras graves extensas, pacientes con fibrosis qustica (FQ) y
los que tienen granulocitopenia (secundaria a leucemia o tratamiento inmunosupresor), tambin aquellos
pacientes que se encuentran bajo AMR o utilizan sondas urinarias y catteres.
- Pseudomonas aeruginosa tiene la capacidad de sobrevivir y proliferar en medios acuosos, por lo que puede
conservarse en humidificadores, respiradores. Se lo ha observado en soluciones para conservar lentes de
contacto o algunos desinfectantes. Pseudomonas aureginosa puede provocar abscesos cutneos e infecciones
respiratorias. De menor relevancia encontramos dermatitis y perionixis en nadadores, conjuntivitis y queratitis,
otitis externa y media, meningitis secundaria, colitis necrotizante y abscesos intestinales.

Diagnstico
- Se asla habitualmente de materiales respiratorios como esputo (pacientes con FQ u otra enfermedad de base),
sangre, piel neurotizada por quemaduras, orina (sonda vesical) y otros materiales.
- Se desarrolla en medios de Levine y MacConkey, con formacin de colonias no fermentadoras y produccin de
compuestos voltiles que le dan al cultivo un aroma frutal caracterstico. Existe un agar con Cetrimida que
permite el desarrollo selectivo de P. aeruginosa.

Tratamiento
- Es muy resistente a penicilina, ampicilina, cefalotina, tetraciclinas, cloranfenicol, sulfonamidas y estreptomicina.
- Las cefalosporinas de 3 generacin (cefotaxima, ceftazidima y cefoperazona), se utilizan con xito en
infecciones que no revisten severidad. La combinacin de ellas con un aminoglucsido (gentamicina,
tobramicina o amikacina), como el uso de fluorquinolonas, se recomiendan para las infecciones severas,
especialmente en los neutropnicos.

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Apuntes de Microbiologa Facultad de Ciencias Biolgicas
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Gnero Acinetobacter
Acinetobacter es un gnero de bacterias Gram negativas que pertenece al Phylum Proteobacteria. Las especies
de Acinetobacter son bacilos estrictamente aerobios no fermentadores, no mviles, oxidasa negativos que se presentan
en pares al microscopio. Se distribuyen ampliamente en la naturaleza, son importantes en el suelo y contribuyen a su
mineralizacin.
Acinetobacter es tambin una importante fuente de infeccin en los hospitales para los pacientes debilitados. Son
capaces de sobrevivir en diversas superficies (tanto hmedas como secas) en el mbito hospitalario. Ocasionalmente
son aislados de los productos alimenticios y algunas cepas son capaces de sobrevivir sobre diversos equipos mdicos e
incluso sobre la piel humana sana.
Muchas cepas de A. baumannii son multiresistentes a antibiticos, contenidos en su pequeo genoma, aislando islas de
ADN extrao (significa transmisin gentica desde otros organismos) y de otros materiales citoplasmticos y genticos;
todo motiva su mayor virulencia. Acinetobacter no tiene flagelos.

Generalidades
Las especies del gnero Acinetobacter presentan predominantemente una morfologa de tipo cocobacilo. Los bacilos
predominan en los medios fluidos, especialmente durante el inicio del crecimiento. Sin embargo, la morfologa puede
ser variable en los especmenes teidos en el laboratorio, por lo que no se puede usar para identificar Acinetobacter de
las otras causas de infeccin.
La mayora de las cepas de Acinetobacter, excepto algunas de A. lwoffii, crecen bien sobre el agar MacConkey. Aunque
oficialmente se clasifican como no fermentantes de la lactosa, a menudo pueden fermentar parcialmente la lactosa
cuando crecen sobre el agar MacConkey.
Las diferentes especies de este gnero se pueden identificar usando FLN (Desnitrificacin Fluorescente de la Lactosa)
para determinar la cantidad de cido producido por el metabolismo de la glucosa.

Acinetobacter baumannii
Cocobacilo ancho Gram negativo oxidasa negativo que se desarrolla como aerobio estricto. Crece como saprfito ubicuo
en la naturaleza y en el entorno hospitalario. Sobrevive en las superficies hmedas, como los equipos de terapia
respiratoria, y en las superficies secas como la piel del ser humano (esta ltima caracterstica es rara en los bacilos Gram
negativos). Estas bacterias forman tambin parte de la microbiota bucofarngea normal de un pequeo nmero de
individuos sanos, y pueden crecer hasta alcanzar un nmero elevado durante la hospitalizacin.
Son patgenos oportunistas que pueden producir infecciones en los aparatos respiratorio y urinario y en las heridas;
tambin pueden causar septicemia. Los sujetos con riesgo de contraer una infeccin por estas bacterias son los que
reciben antibiticos de amplio espectro, los que se encuentran en fase postoperatoria quirrgica, o los sometidos a
ventilacin mecnica. El tratamiento de las infecciones por A. baumannii es problemtico porque son, a menudo,
resistentes a los antibiticos. El tratamiento especfico debe orientarse por las pruebas de sensibilidad in vitro, pero el
tratamiento emprico frente a las infecciones graves sera un -lactmico (ej. ceftacidima, imipenem) y un
aminoglicsido.

Transmisin y prevalencia
Entra al cuerpo por heridas abiertas, catteres, tubos de respiracin. Usualmente infecta a los inmunodeprimidos, como
los heridos, ancianos, nios con enfermedades del sistema inmune, trasplantados. Su colonizacin no representa
ninguna amenaza para los sanos, aunque trabajadores de atencin de la salud colonizados y visitantes de hospital
pueden llevar la bacteria a barrios vecinos y a otras instalaciones mdicas. El nmero de infecciones
hospitalarias causadas por A. baumannii se ha incrementado en aos recientes; al igual que la mayora de los patgenos
nosocomiales (MRSA, VRSA, VRE, etc.)

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Importancia clnica
Las especies de Acinetobacter se consideran, en general, no patognicas para los individuos sanos. Sin embargo, varias
especies persisten en los entornos hospitalarios y causan infecciones graves que ponen en peligro la vida de los
pacientes inmuncomprometidos. El espectro de resistencia a los antibiticos de estos organismos, junto con sus
capacidades de supervivencia las hacen una amenaza seria para los hospitales, tal como se documenta por los brotes
recurrentes incluso en los pases desarrollados. La mayora de las infecciones ocurren en individuos
inmunocomprometidos, siendo la cepa A. baumannii la segunda bacteria no fermentante ms frecuentemente aislada
en muestras humanas.
Un factor importante para su potencial patgeno es, probablemente, una eficiente transferencia horizontal de genes,
aunque este mecanismo de momento slo ha sido observada y analizada en Acinetobacter baylyi, una especie que vive
en el suelo que nunca se ha asociado con infecciones.
Acinetobacter es frecuentemente aislado en infecciones nosocomiales y es especialmente frecuente en las unidades de
cuidados intensivos, donde tanto los casos espordicos como los epidmicos y endmicos son comunes. A baumannii es
una causa frecuente de neumona nosocomial, sobre todo asociada a la ventilacin mecnica. Puede causar otras
infecciones, incluidas infecciones de la piel y de las heridas, bacteriemia y meningitis. A. baumannii puede sobrevivir en
la piel humana o superficies secas por semanas.

Tratamiento
Las especies de Acinetobacter son resistentes, naturalmente, a muchos tipos de antibiticos, incluida
la penicilina, cloranfenicol y a menudo los aminoglicsidos. Se ha informado de la resistencia a fluoroquinolonas durante
la terapia y esto tambin ha dado lugar a un aumento de resistencia a otras clases de drogas a travs del reflujo activo.
Ms preocupante es el aumento de la resistencia a los carbapenem, que deja muy pocas opciones de tratamiento si bien
se han conseguido algunos xitos con polimixina B, as como el uso de nuevas combinaciones de antibiticos. Las
especies de Acinetobacter son inusuales en el sentido de que son sensibles al sulbactam. Esta sustancia se usa
normalmente para inhibir la lactamasa bacteriana, pero ste es un ejemplo de las propiedades antibacterianas del
sulbactam.
La institucin de medidas estrictas de control general de infecciones, como el monitoreo bacteriolgico de la higiene de
manos, puede bajar la tasa de infecciones hospitalarias.

Bacterias Anaerobias

Las bacterias anaerobias estrictas se pueden caracterizar en base a la cantidad de oxgeno que pueden tolerar para
crecer satisfactoriamente. Las diferentes especies de microorganismos anaerobios presentan graduaciones en sus
requerimientos de oxigeno que van desde aquellos que son anaerobios estrictos (ej. bacterias metanognicas que
requieren menos de 0,003% de oxigeno), hasta los aerotolerantes que crecen en presencia de concentraciones
relativamente elevadas de oxigeno (6%).

Fundamento de la anaerobiosis
La toxicidad que ofrece el oxigeno para las bacterias anaerobias es la incapacidad de estos microorganismos para
inactivar el radical superxido proveniente de la reduccin parcial del oxigeno. Este radical es producido por
flavoprotenas de carcter reductor y, una vez producido, es metabolizado mediante una enzima especfica, la
superxido dismutasa. Las bacterias aerobias poseen estas enzimas y adems la catalasa, lo que les permite
desarrollarse en presencia de superxido y perxido de hidrogeno. Tambin se ha demostrado la presencia de
superxido dismutasa en algunas bacterias anaerobias, pero en cantidades pequeas que probablemente son
insuficientes para protegerlos. Otro factor de importancia es el potencial de oxido-reduccin (Eh) del ambiente en el
cual se encuentran las bacterias anaerobias y que se expresa en mili voltios (mV). Bacterias anaerobias pueden crecer en
presencia de abundante cantidad de aire, pero a un bajo Eh, mediante procedimientos elctricos.

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Factores que favorecen la infeccin anaerbica


- La alteracin fsica de las barreras orgnicas naturales es ms importante que la disminucin de las defensas
orgnicas. En los individuos inmunocomprometidos las infecciones anaerbicas tienen menor frecuencia que en
el resto de los pacientes.
- Deficiente aporte sanguneo tisular y, por lo tanto, bajo aporte de oxigeno.
- Necrosis tisular, lo que disminuye el Eh.
- Empleo clnico de antibiticos aminoglicsidos, lo que parece favorecer el desarrollo de los microorganismos
anaerobios y eliminan los aerobios susceptibles
- Disminucin de la efectividad de la fagocitosis en el ambiente anaerbico
- Asociacin bacteriana aerbica/anaerbica infectante. Esto puede deberse a:
o Disminucin del Eh por las bacterias facultativas
o Aporte de metabolitos esenciales para los anaerobios

Mecanismos patognicos
Adherencia: Tanto Bacteroides como Fusobacteroium han demostrado capacidad para aglutinar eritrocitos, lo que se ha
relacionado con estructuras fimbriales. Tambin se ha demostrado la capacidad de estas bacterias para adherirse a
clulas de epitelios.
Cpsula: Algunas especies de anaerobios poseen estructuras capsulares que han sido observadas al microscopio, fijando
las preparaciones con rojo de retenio, lo que indica su naturaleza acidica hidfrocarbonada. Otras especies forman
compuestos menos definidos en la envoltura en forma de glicoclix. Estas estructuras pueden jugar diversos roles en el
proceso infeccioso, entre ellos: proteccin contra la fagocitosis, formacin de abscesos, inhibicin de la migracin de
fagocitos.
Enzimas degradativas: Entre ellas se pueden mencionar: colagenasa, IgA proteasa, IgG proteasa, IgM proteasa,
hialuronidasa, fibrinolisina, neuraminidasa, heparinasa, ADNasa. No todas las especies producen todas las enzimas.
Exotoxinas: existen diversas toxinas producidas, en especial, por especies de Clostridium. Entre ellas se encuentran las
neurotoxinas tetnica y botulnica.

Factores que sugieren infeccin anaerbica


- Mal olor en el sitio de la infeccin
- Infeccin cercana a una mucosa con anaerobios normales
- Necrosis tisular
- Presencia de gas en la lesin
- Infeccin en presencia de antibiticos aminoglicsidos
- Cultivos bacteriolgicos negativos
- Infeccin posterior a mordeduras
- Decoloracin de las sangre
- Presencia de los grnulos de azufre en el pus(actinomicosis)
- Cuadro clnico caracterstico (mionecrosis)

Infecciones ms frecuentes producidas por bacterias anaerobias Gram positivas no esporuladas


Genero bacteriano Infeccin
Actinomyces Infecciones orales, actinomicosis (cervicofacial, torcica, abdominal, plvica, del SNC)
Propionibacterium Acn, infecciones oportunistas (pacientes con vlvulas cardiacas, prtesis articulares,
catteres)
Lactobacillus Endocarditis, septicemia en intestino delgado
Mobiluncus Vaginosis bacteriana

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Infecciones ms frecuentes producidas por bacterias anaerobias Gram negativas no esporuladas


Microorganismo Infeccin
Bacteroides Infecciones intra-abdominales (peritonitis, abscesos), infecciones ginecolgicas (endometritis,
abscesos, inflamacin plvica)
B. fragilis Infecciones cutneas y de tejidos blandos, gastroenteritis
Prevotella Infecciones ginecolgicas, infecciones orales
Porphyromonas Infecciones ginecolgicas, enfermedad periodontal, otras infecciones orales
Fusobacterium Neumona por aspiracin, sinusitis, otitis media crnica, abscesos pulmonar, absceso cerebral

Bacterias anaerobias esporuladas

Clostridium botulinum
Esta especie es estrictamente ambiental y produce las exotoxinas botulnicas en vegetales contaminados con los cuales
se han preparado conservas y que son mal mantenidos. Estas toxinas ocasionan el botulismo humano al ser ingeridas. Se
conocen 8 toxinas serolgicamente diferentes: A, B, C1, C2, D, E, F y G. Todas ellas, con excepcin de C2, son neurotoxinas
y las toxinas C1 y D son codificadas por fagos. La mayor parte de los casos de botulismo humano son producidos por las
toxinas A, B y E. Estas toxinas son termolbiles y debido a que se producen agregados con otras protenas bacterianas
pueden resistir la acidez gstrica y pasar al intestino delgado, donde son absorbidas produciendo la enfermedad.

Botulismo
Se produce a causa de la ingestin de cantidades muy pequeas de la toxina preformada en alimentos que han sido
contaminados con esporas. (0,5 g de toxina A es letal para humanos)
Estas germinan en el alimento y producen la toxina que se libera por lisis bacteriana. La toxina acta obre el organismo
humano inhibiendo la sntesis de acetilcolina a nivel de la unin de las neurona motoras con las clulas musculares. Esto
conduce a parlisis flccida por ausencia de contraccin muscular. La parlisis de los msculos respiratorios conduce a
muerte por asfixia. Generalmente, en las etapas iniciales de la enfermedad, existe dificultad visual, en el habla y disfagia.
En muy raros casos se puede producir botulismo a travs de las heridas.

Botulismo infantil
En el nio la enfermedad adquiere caractersticas diferentes. En ellos, la espora penetra por va oral, alcanzando el
intestino grueso, en el cual produce muy pequeas cantidades de toxina. La absorcin de la toxina a nivel del colon y no
del intestino delgado, como en el adulto puede explicar el que esta infeccin sea benigna. Tambin se ha relacionado el
botulismo infantil con la muerte sbita de nios. El tratamiento se efecta con la antitoxina correspondiente, pero la
frecuencia de muerte es elevada.

Clostridium tetani
Es el agente causal de ttanos, mucho ms frecuente que el botulismo. El microorganismo produce una neurotoxina
(tetanoespasmina) que acta a nivel del SNC. A partir el sitio de produccin de la toxina, esta debe avanzar hasta el
cerebro, all es fijada en ganglisidos compuestos por glicolpidos que contienen cido neuramnico, la unin de la toxina
a estos receptores es inhibida por neuraminidasas. La toxina acta en el organismo interrumpiendo la liberacin de
neurotransmisores en la sinapsis del sistema inhibidor de la contraccin de msculos opuestos. Esto conduce a la
contraccin sostenida. La toxina es codificada por ADN plasmidial en la bacteria.

Ttanos
La enfermedad se inicia con la introduccin de esporas, que viven en el suelo, por heridas cortopunzantes. Poco o largo
tiempo despus, la espora germina, produce un proceso inflamatorio de escasa magnitud en el lugar de la infeccin y
desde all libera su neurotoxina. Esta avanza hacia el SNC y empieza a ejercer su accin. En los recin nacidos la puerta
de entrada es frecuente en los restos del cordn umbilical, que suele tratarse con diferentes elementos contaminados.
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Los primeros msculos afectados son los de la mandbula, lo que produce la risa sardnica. En un estado ms avanzado,
la muerte se produce por parlisis de los msculos respiratorios. Al igual que el botulismo, esta enfermedad es difcil de
tratar y para ello debe administrarse la antitoxina los ms rpidamente posible antes que la toxina se fije, ya que a esta
altura no puede ser neutralizada. El tratamiento puede efectuarse con antitoxina preparada en equinos o en lo posible
obtenida de humanos hiperinmunizados, ya que produce menos posibilidades de reacciones de hipersensibilidad.
Debido a la pequea cantidad de toxina liberada en el enfermo, esta enfermedad no conduce a inmunidad natural
efectiva. El microorganismo puede ser aislado de las heridas a partir de las cuales se ha producido ttanos.
En la infancia de procede a la inmunizacin activa con el toxoide tetnico.

Clostridium perfringens
Este microorganismo se encuentra habitualmente en la tierra o polvo de las habitaciones y en el medio ambiente intra-
hospitalario. Es el agente causal de varios cuadros clnicos:
- Gangrena gaseosa
- Infeccin uterina seguida o no de bacteriemia
- Gastroenteritis
- Enteritis necrotizante

C. perfringens produce el siguiente conjunto de enzimas extracelulares que actan como toxinas: Lecitinasa (letal),
fosfolipasa, necrotizante (letal), proteinasa, Colagenasa, hemoltica (letal), hialuronidasa, DNAasa, neuraminidasa.

Clostridium difficile
Este microorganismo, presente en ciertos adultos y nios, produce una citotxina y una enterotoxina. La primera
ocasiona un proceso inflamatorio en el intestino grueso, con formacin de una pseudomembrana, la segunda ocasiona
abundante eliminacin de lquido. Se observa este cuadro clnico durante el tratamiento con diversos antibiticos, pero
en especial con lincosamidas y de ellas, especialmente, la clindamicina. Suele ser mortal y su tratamiento consiste en
eliminar al agente causal mediante otros antibiticos como los glicopeptdicos (vancomicina).

Diagnstico
Obtencin de las muestras: se debe tratar que estas no se contaminen con las bacterias de la microbiota normal. No es
conveniente efectuar cultivos anaerobios de muestras de secrecin vaginal, farngea, gingival, contenido gstrico,
contenido del intestino delgado, deposiciones, como as tambin de expectoracin y orina naturalmente eliminados.

Transporte y mantencin de las muestras: En lo posible, las muestras deben obtenerse en envases especiales en
ausencia de aire y deben mantenerse refrigeradas hasta su procesamiento, ya que el crecimiento ms rpido de las
bacterias facultativas puede enmascarar la presencia de anaerobios. Algunas muestras deben obtenerse con jeringas y
taponarse de inmediato pinchando tapones de goma para evitar la entrada de aire. En otros casos, la muestra puede
colocarse en un liquido reductor (tioglicolato de sodio). Excepcionalmente, pueden obtenerse muestras con trulas que
deben mantenerse en ausencia de aire, o bien, deben sembrarse de inmediato.

Observacin microscpica: La tincin de Gram es importante porque permite visualizar algunas caractersticas
fundamentales. Por ejemplo, la presencia de Clostridium es sugerida por su morfologa bacilar Gram positiva
caracterstica. Las formas fusiformes y la morfologa irregularmente teida de Bacteroides tambin son caractersticas.

Cultivo anaerbico: Este debe efectuarse en medios especialmente preparados de acuerdo con la microbiota anaerobia
que se desea investigar. Algunas bacterias requieren de factores de crecimiento en su aislamiento primario. El agregado
de algunos antibiticos permite que estos medios de cultivo sean tambin ms selectivos para algunos grupos. El
ambiente de incubacin anaerobio puede lograrse en cmaras especiales automatizadas o en sistemas de pequea

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escala en los que la reduccin se efecta mediante la adicin de agua. El sistema posee tambin un catalizador que
acelera la combinacin del hidrogeno con el oxigeno para formar agua.
Despus del aislamiento primario del microorganismo anaerobio deben efectuarse otras pruebas para su identificacin,
como por ejemplo, determinacin de propiedades bioqumicas, susceptibilidad a agentes antibacterianos, reacciones
serolgicas, entre otras.

Gnero Mycobacterium

El gnero Mycobacterium est formado por bacilos delgados rectos o ligeramente curvos, algunas veces desarrollan
filamentos ramificados que se rompen con facilidad dando origen a formas bacilares. Son relativamente impermeables a
varios colorantes bsicos, pero una vez teidos resisten la decoloracin alcohol-cido y son llamados bacilos alcohol-
cido resistentes (BAAR), propiedad que se debe a la presencia de lpidos y esteres de cido miclico de la pared celular,
esta caracterstica es importante en la identificacin rpida de las micobacterias (Tincin de Ziehl-Neelsen) en muestras
de casos sospechosos de enfermedad como lepra o tuberculosis. Al ser teidos al procedimiento Ziehl-Neelsen, lo hacen
generalmente en forma irregular, poseen grnulos de glucgeno, grnulos metacromticos, que contribuyen a dar el
aspecto de rosario y la tincin irregular de estos bacilos. Son inmviles, no esporulados, no capsulados. Son productores
de catalasa.

Caractersticas de cultivo
Son aerobios estrictos, crecen en medios de cultivos con glicerol u otro compuesto como fuente de carbono y energa,
emplendose tambin para el crecimiento inicial asparragina o mezclas de aminocidos. Las micobacterias presentan
una preferencia nutricional por los lpidos, razn por la cual se emplea la yema de huevo en los medios de cultivo (medio
de Lowenstein-Jensen). El pH optimo de crecimiento es de alrededor de 7, mientras que la temperatura optima es
variable y va desde 22C (micobacterias no tuberculosas), a 37C (M. tuberculosis y M. bovis).
Son microorganismos de crecimiento lento, el que est condicionado a la pared celular impermeable que impide el
transporte rpido de nutrientes a travs de la capa de lpidos. El tiempo de generacin del M. tuberculosis in vitro, bajo
condiciones optimas es de 14 15 horas y el desarrollo de colonias visibles tarda tres semanas o ms. El aislamiento de
micobacterias denominadas de crecimiento rpido requiere de una incubacin de 3 das o ms.

Estructuras
La pared de la clula micobacteriana tiene una barrera de lpidos, que est constituida en parte por un polmero de
arabinosa galactosa cido miclico, que se une al peptidoglicn por enlaces covalentes constituyendo el complejo
micolilarabinogalactam-peptidoglican y que est cubierto por una gran cantidad de lpidos libres y protenas. Los
cidos miclicos, que tienen largas cadenas de carbono ramificados, son los lpidos principales de la pared celular. Los
lpidos libres de las capas exteriores de la clula contienen: glicolpidos especie especficos, pptidoglicolipidos, LOS
conteniendo trehalosa y glicolpidos fenlicos. Un glicolpido complejo, cera D, es un adyuvante de la respuesta inmune.
La diferencia esencial con las otras bacterias es la presencia de esta pared celular rica en lpidos que le da a la clula sus
propias caractersticas de: acido resistencia, hidrofobicidad de la envoltura y lento crecimiento.
Muchas de las actividades biolgicas son asociadas o inducidas por la mayora de los lpidos de la pared:
- Activar macrfagos: los microorganismos activados tienen mayor capacidad para destruir micobacterias y otros
microorganismos.
- Adyuvante: cuando se inyectan junto a antgenos, estimulan la produccin de anticuerpos al antgeno.
- Induce la formacin de granulomas que es la lesin inicial de la tuberculosis.
Las protenas estimulan la respuesta inmune celular del paciente. Hay numerosos antgenos proteicos que pueden
sensibilizar a los linfocitos DTH despertando distintas reacciones en el organismo, algunas son protectoras y otras
potencialmente dainas.
Los polisacridos de las micobacterias pueden producir hipersensibilidad inmediata.

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Virulencia
Su virulencia se relaciona con su capacidad de sobrevivir y multiplicarse en los macrfagos, aunque sean fagocitados, los
bacilos resisten las propiedades destructivas de los macrfagos alveolares y se multiplican intracelularmente a menos
que estn activados. Este proceso daa tejidos cuando es activada la inmunidad mediada por clulas. La habilidad del
bacilo tuberculoso para despertar una respuesta inmune inapropiada ha surgido como un importante aspecto del
mecanismo de virulencia. Los determinantes de virulencia aumentan su sobrevida en los macrfagos.

Clasificacin de micobacterias patgenas para humanos


No tuberculosas
Complejo M. tuberculosis
De crecimiento lento De crecimiento rpido
M. tuberculosis Complejo avium M. abscesus
M. leprae M. kansasii M. chelonae
M. africanum M. marinum M. fortuitum
M. bovis M. ulcerans M. mucogenicum
M. bovis (cepa BCG) (ocasional) otras

Tuberculosis

La TBC es una enfermedad crnica transmisible causada por M. tuberculosis y M. bovis. La fuente de infeccin son los
pacientes bacilferos, los que son positivos al examen directo. La localizacin de los bacilos en el organismo va a
depender de la puerta de entrada. La inhalacin producir tuberculosis pulmonar, que es la forma ms frecuente. La
ingestin de bacilos M. bovis, presente en la leche no pasteurizada proveniente de animales enfermos, producir
tuberculosis intestinal.
M. tuberculosis es un parsito obligado que infecta al hombre y otras especies de mamferos. Sin embargo, el hombre es
el nico reservorio del microorganismo.

Patogenia
La va de infeccin consiste en la inhalacin de partculas infectadas que llegan al alveolo pulmonar. La consecuencia de
la interaccin entre el bacilo y el husped es un fenmeno complejo siendo determinado, en parte, por la virulencia de
la cepa, la cantidad de bacilos y la resistencia especfica e inespecfica del husped.
El hombre presenta un rango de respuestas. La infeccin inicial en un individuo tuberculino negativo produce, en la
mayora, una lesin que se limita, pero en algunos casos la enfermedad progresa, probablemente debido a un gran
inoculo o la baja resistencia del paciente. La inmunidad mediada por clulas juega un papel importante en el desarrollo
de los sntomas de la enfermedad.

Primoinfeccin tuberculosa
Es la primera infeccin, generalmente se produce en la edad infantil y casi siempre asienta en los pulmones. Con
frecuencia, es el resultado de la inhalacin de gotitas o polvo que contienen la expectoracin de individuos afectados.
Los bacilos fagocitados se multiplican y terminan por destruir las clulas fagocitarias. Se produce, posteriormente, un
ciclo de fagocitosis por lo macrfagos y linfocitos que migran al foco de infeccin y finalmente producen la destruccin
celular. Las micobacterias migran y el bacilo se disemina por la va linfohemtica hasta que se desarrolla la
hipersensibilidad del tejido y la inmunidad mediada por clulas. Los macrfagos que han sido activados por linfoquinas,
producidas por los linfocitos T, inhiben el crecimiento intracelular de los bacilos, pueden mantenerse en dormancia por
un prolongado tiempo.

Prueba de tuberculina
La reaccin frente a la inyeccin intradrmica de los antgenos extrados del M. tuberculosis, permite diferenciar en
forma prctica a los individuos que han sido infectados de los no infectados.
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Se emplea el Derivado Proteico Purificado (PPD) de un extracto de cultivos de bacilos tuberculosos. Una reaccin PPD
positiva no significa enfermedad, solo detecta hipersensibilidad retardada y no indica la presencia de enfermedad activa;
indica que el individuo ha sido infectado con una micobacteria y se ha sensibilizado sus antgenos. La reaccin de
tuberculina tiene utilidad en diagnstico en los nios no vacunados con BCG y que son menores de 4 aos.
Una reaccin de tuberculina puede hacerse negativa en el curso de algunas infecciones virales, en enfermedades
anergizantes y por la accin de drogas inmunosupresoras.

Reaccin de la tuberculina PPD. Tcnica: intradermorreaccin de Mantoux


Consiste en la introduccin intradrmica, en la cara externa del tercio superior del antebrazo, de 0,1 mL de PPD. La
lectura se realiza a las 72 horas, por palpacin midiendo su dimetro y se informa en mm de maduracin.

a. 0-4 mm, no reactor No infectados y falsos negativos


b. 5-9 mm, reactores dbiles Infectados por M. tuberculosis, reacciones cruzadas, vacunados por BCG
c. 10-14 mm, reactores francos Infectados, pacientes TBC, vacunados con BCG, reacciones cruzadas
d. Ms de 15 mm, reactores intensos Infectados o enfermos TBC

Tuberculosis de tipo adulto


La TBC pulmonar de tipo adulto es la manifestacin ms frecuente, la ms contagiosa y la principal causa de muerte por
esta enfermedad. Puede tener su origen en la reactivacin endgena de un foco tuberculoso dormido o ser causada por
una reinfeccin exgena, que al producirse en un individuo previamente infectado, pero en un punto diferente de su
inmunidad, determina una enfermedad progresiva. Se caracteriza por ser una lesin de tipo productivo, con formacin
de tubrculo, presentar necrosis (hipersensibilidad retardad), localizada (LT sensibilizados), es bacilfera y requiere
tratamiento. Es insidiosa. Los sntomas sistmicos son inespecficos, luego se presenta fiebre, sudoracin nocturna, baja
de peso, tos y expectoracin.

Baciloscopa
Es el examen bsico, es fcil de realizar, es rpido y econmico, pero su sensibilidad no es muy buena. Se necesita tener
100.000 bacilos por mL de expectoracin para tener baciloscopas consistentemente positivas. Al examen directo de
expectoracin, teido por tincin de Ziehl-Neelsen, los bacilos aparecen como bacilos rojos ligeramente curvos sobre un
fondo azul.
La observacin microscpica debe cumplir dos objetivos: determinar si hay BAAR y establecer su nmero aproximado. El
recuento de los bacilos proporciona un informe sobre la extensin de la lesin en enfermos no tratados, tambin da una
medida de la eficacia del tratamiento. El nmero de bacilos se relaciona con la gravedad de la enfermedad y con el grado
de contagiosidad.

Informe de la Baciloscopa
Negativa (-) : No se encuntran BAAR en 100 campos observados
Positiva (+) : Menos de un BAAR por campo, en promedio, en 100 campos observados
Positiva (++) : Entre 1 y 10 BAAR por campo, en promedio, en 50 campos observados
Positiva (+++) : Ms de 10 BAAR por campo, en 20 campos observados

Cultivo
Es una tcnica de mayor sensibilidad que la baciloscopa, si existe entre 500 y 1000 bacilos por mL de expectoracin, el
cultivo es positivo.
Las muestras deben ser descontaminadas y concentradas para sembrarlas en los medios de cultivo slidos. El medio de
Lowenstein-Jensen es uno de los ms usados en clnica. Para detectar microorganismos, es necesario la incubacin
durante tres semanas o ms, para que aparezcan las colonias.

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Tecnologa Mdica
Apuntes de Microbiologa Facultad de Ciencias Biolgicas
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Deteccin molecular
Existen tcnicas que permiten tener resultados en plazos breves. Entre estos, estn los mtodos de cultivo radiomtrico,
las tcnicas inmunolgicas y las tcnicas de recombinacin de cidos nucleicos; que es un mtodo de alta sensibilidad y
especificidad y se hace el diagnstico de tuberculosis en pocos das. En ste mtodo se emplean frascos especiales con
medio de cultivo Middlebrook enriquecido, rico en acido palmtico, marcado con carbono 14.
- Tcnicas inmunolgicas: se pueden identificar anticuerpos dirigidos contra antgenos especficos de las
micobacterias o determinacin de antgenos micobacterianos. La tcnica de ELISA permite hacer el diagnostico
serolgico de la tuberculosis con una sensibilidad de 90% y una especificidad cercana al 100% en enfermos
bacilferos. La sensibilidad es menor en las tuberculosis extrapulmonares.

Tratamiento
El tratamiento de la TBC tiene 4 condiciones esenciales: debe ser asociado, prolongado, supervisado y gratuito.
Asociado: para evitar la seleccin de mutantes resistentes durante el tratamiento. La resistencia est relacionada con
grandes poblaciones de microorganismos. El mecanismo fundamental es mutacin y seleccin. La mutacin se produce
en ausencia de la droga. La aparicin de mutantes resistentes del M. tuberculosis, est en relacin directa con las
poblaciones bacterianas, irrumpe fcilmente cuando existen cavernas con grandes cantidades de bacilos.
Prolongado: como las micobacterias se multiplican lentamente, el tratamiento debe ser prolongado. Cuando los bacilos
se han establecido en los tejidos, ellos residen intracelularmente en monocitos, clulas reticuloendoteliales, clulas
gigantes.
Supervisado: por personal especializado, para asegurar la ingestin adecuada de las drogas y evitar el abandono del
tratamiento.

Esquemas de tratamiento en Chile


Esquema de 6 meses (enfermos nuevos)
o 2 meses intensivos con 4 drogas diarias: isoniacida, rifampicina, etambutol y pirazinamida.
o 4 meses intermitentes (2 veces por semana): isoniacida y rifampicina.
- Durante la quimioterapia se har 1 baciloscopa mensual, mientras el enfermo tenga expectoracin.
Otros esquemas:
6 meses con 3 drogas
10 y 18 meses con 5 drogas
Tratamientos especiales

Prevencin
Inmunoprofilaxis: se administra vacuna BCG a todos los recin nacidos con un peso superior a 2 Kg. Esta vacuna
es una cepa de M. bovis atenuada, que perdi su virulencia luego de prolongados cultivos in vitro. Se conserva
por lotes y liofilizada, posee una actividad biolgica estable. Se encuentra contraindicada en personas con
inmunodepresin.
Quimioprofilaxis: se utiliza isoniacida en personas PPD positivos entre los que se incluyen enfermos de SIDA y
portadores de VIH. Tratamiento con drogas inmunosupresoras. Trasplantados. Otras condiciones con alteracin
de la inmunidad celular. Se emplea en los pases de baja prevalencia de tuberculosis, donde hay individuos
antiguos con factores de riesgo que favorecen las reactivaciones endgenas.

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Agentes fsicos y qumicos antibacterianos

La presencia de microorganismos, tanto patgenos como saprfitos, es amplia en el medio ambiente, lo que permite la
fcil contaminacin de superficies, objetos, materiales, instrumentos, etc. En la piel de los individuos, con sus defensas
normales, tambin se encuentran microorganismos contaminantes que no producen dao. Sin embargo, por alteracin
de estas defensas mecnicas (piel, mucosas), por compromiso del estado general o bien por ubicacin de estas bacterias
en otros sitios orgnicos, puede llegar a producirse un proceso infeccioso.
La presencia de microorganismos puede producir infecciones de importancia cuando se encuentran, por ejemplo, en
instrumentos utilizados en procedimientos clnicos como intervenciones quirrgicas, en aquellos que se usan en limpieza
y curacin de heridas, en colocacin de sondas, etc.

- Contaminacin: es la presencia de microorganismos en la superficie de cuerpos, objetos, elementos inanimados


y/o reservorios.
- Infeccin: es la penetracin y multiplicacin de un agente microbiano en algn lugar del organismo humano o
animal.
- Sepsis: es la presencia y desarrollo de microorganismos.
- Asepsia: ausencia de microorganismos.
- Desinfeccin: es el proceso mediante el cual se eliminan los microorganismos en su estado vegetativo. Esto
significa que no se eliminan las esporas de las bacterias.
- Estril: es el trmino utilizado para indicar la total ausencia de microorganismos de cualquier tipo. Este trmino
es sinnimo de asptico.
- Esterilizacin: es el procedimiento por medio del cual se logra la eliminacin total de microorganismos, incluidas
las esporas, logrndose el estado estril.
- Desinfectante: es una gente qumico que se aplica sobre objetos inanimados, que produce la muerte de los
microorganismos, pero no eliminan las esporas.
- Antisptico: es una sustancia que inhibe o mata microorganismos. Este trmino es usado especialmente para
preparaciones aplicadas a tejidos vivos.
- Sanitizador: es una gente qumico que reduce el nmero de bacterias contaminantes a niveles bajos que no
representan peligro. Se asocian con la limpieza de ropa y utensilios para las comidas.

Mecanismos de accin
Los agentes fsicos y qumicos antibacterianos producen la inhibicin o la muerte de las bacterias por diversos
mecanismos. Estos agentes pueden actuar produciendo un dao a nivel de:
- ADN: radiaciones ionizantes, luz ultravioleta, agentes qumicos como colorantes.
- Membranas: agentes tensoactivos, calor (fusin de lpidos)
- Protenas: calor, alcohol, fenol, etc. (producen desnaturalizacin), halgenos, agua oxigenada, metales pesados,
etc. (inhiben enzimas)

Agentes fsicos
Radiaciones
- Rayos gamma: Corresponden a radiaciones de longitud de onda ms corta que la luz ultravioleta, lo que les
confiere un elevado poder de penetracin y, por lo tanto, un elevado poder de destruccin de microorganismos.
Se emplean en procesos industriales.
- Rayos X: son radiaciones de longitud de onda intermedia, entre luz ultravioleta y radiaciones gamma. Tienen
menor poder de penetracin.

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Calor
- Calor seco: La aplicacin de calor seco conduce a la oxidacin proteica y, por lo tanto, a la destruccin de los
microorganismos. Se necesitan elevadas temperaturas para lograr este efecto, por ejemplo 170C. este
procedimiento se emplea en los denominados hornos (Pupineles). Se utiliza para esterilizar instrumentos que no
pueden someterse a la humedad, que no son impermeables al agua y que pueden resistir sin problemas las altas
temperaturas. En el proceso de esterilizacin por calor seco se requieren tiempos de aplicacin relativamente
prolongados (90 minutos)

- Calor hmedo: En esto casos se emplea agua a ebullicin, o bien, vapor de agua a presin, mediante la cual es
posible lograr temperaturas por sobre 100C. El empleo de calor hmedo conduce rpidamente a la muerte
microbiana, por lo cual se requieren tiempos ms cortos en el proceso de esterilizacin (20 30 minutos). La
muerte de los microorganismos se produce por coagulacin proteica. El calor hmedo se aplica generalmente en
equipos denominados autoclaves.
o La tindalizacin consiste en someter el material a esterilizar en agua a ebullicin, por periodos
intermitentes, por ejemplo 60 minutos cada 24 horas, tres veces consecutivas. Entre cada calentamiento
se debe dejar el material a temperatura cercana a 37C para permitir la germinacin de las probables
esporas sobrevivientes.
o La pasteurizacin constituye un proceso en el cual se busca que el calor se ponga rpidamente en
contacto con toda la masa a calentar, por ejemplo, con lquidos en lminas muy delgadas.
1 pasteurizacin: 63C durante 30 minutos. No esteriliza.
2 pasteurizacin: 72C durante 15 segundos (HTST). No esteriliza.
3 pasteurizacin: 135 150C durante 1 2 segundos (UHT). Si esteriliza.

Frio: se usa especialmente en la industria alimenticia, en las cuales se aplica el congelamiento. Aunque no destruye gran
cantidad de microorganismos, la alternancia de congelacin descongelacin puede aumentar el nmero de clulas
bacterianas muertas.

Agente fsico Uso recomendado Limitaciones


Vapor fluyente o agua hirviente Destruccin de patgenos no formadores de No se puede garantizar que
esporas: ropa, ropa de cama y vajillas produzcan esterilizacin en una sola
exposicin
Calor hmedo (autoclave) Esterilizacin de instrumental, lienzos, Sin efecto contra organismos dentro
utensilios y bandejas de tratamientos, de materiales impermeables al vapor,
medios de cultivo y otros lquidos no se puede usar para artculos
sensibles al calor
Calor seco (Horno Pasteur) Para esterilizacin de materiales Destruyen los materiales que no se
impermeables o que se daan por la pueden someter a temperaturas
humedad como aceites, vidrios, elevadas por mucho tiempo
instrumentos cortantes, metales
Radiaciones (luz ultravioleta) Control de las infecciones transmitidas por Debe ser absorbida , no pasa a travs
el aire, desinfeccin de superficies del vidrio transparente u objetos
opacos, irrita los ojos y la piel, baja
penetracin
Radiaciones ionizantes Para la esterilizacin de material quirrgico Caro, requiere facilidades especiales
sensible al calor y otros materiales usados para su uso
en medicina

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Procedimientos mecnicos
- Filtracin: en este proceso se hace pasar una suspensin del lquido a esterilizar por membranas especiales
cuyos poros tienen un dimetro inferior al de la clula bacteriana. Para esto, se hace necesario aplicar vacio, o
bien presin, para hacer pasar el lquido. Todo esto requiere de equipos especiales de amplio uso en el
laboratorio actual. En la filtracin, las bacterias quedan retenidas en la membrana y el lquido pasa estril.
Existen diferentes tipos de membrana, con diferentes tamaos de poros, segn el tipo de microorganismo que
se desea eliminar. Este procedimiento tiene la ventaja de no someter el lquido a ningn tratamiento drstico
que pueda alterar su composicin qumica.
- Centrifugacin: la remocin de microorganismos puede lograrse, tambin, por centrifugacin. Si esta se efecta
a velocidades lo suficientemente elevadas, el lquido superior queda estril en los tubos.
- Rompimiento celular en prensa: existen equipos especiales que permiten someter a los microorganismos a una
elevada presin y luego producir una brusca descompresin que conduce a su rompimiento. Este proceso se
emplea para aislar estructuras celulares bacterianas, ms que para matar bacterias.
- Ultrasonido: los microorganismos se pueden someter a vibraciones ultrasnicas que conducen a la destruccin
celular con mucha rapidez, aunque el proceso libera mucho calor, lo que obliga a emplear condiciones de
refrigeracin durante su aplicacin.

Agentes qumicos

Se ha utilizado una amplia gama de productos qumicos con la finalidad de destruir los microorganismos o reducir su
cantidad. A estas sustancias se les conoce como antispticos si es que tienen uso tpico en el organismo humano y
desinfectantes si se aplican a objetos inanimados.

Agente Qumico Mecanismos de Accin


Compuestos fenlicos Dao de membrana citoplasmtica, desnaturalizacin de protenas
Alcoholes Desnaturalizacin de protenas, solubilizacin de componentes lipdicos
Halgenos Oxidacin de componentes esenciales
Metales pesados Combinacin con protenas
Amonios cuaternarios Desnaturalizacin de protenas, dao de membrana citoplasmtica

Los desinfectantes y antispticos poseen un espectro de actividad variable y no actan necesariamente sobre las
esporas bacterianas. As, el fenol, compuestos fenlicos, etanol, isopropanol y compuestos de amonio cuaternario son
activos sobre formas bacterianas vegetativas y virus con envoltura. En cambio, los iodforos y compuestos clorados
inactivan bacterias, esporas bacterianas y virus con y sin envoltura. Se encuentran por ejemplo:

Compuesto Usos Limitaciones


Fenol (solucin 5%) Desinfectante de superficies Toxico e irritante
Lysol Desinfectante de superficies Toxico
Hexaclorofeno Antisptico Cierta toxicidad
Etanol 79 90% Antisptico de piel, desinfectante de instrumentos Inflamable, irritante ocular y
respiratorio
Isopropanol 90% Desinfectante de instrumentos Inflamable, irritante ocular
Tintura de yodo Antisptico de piel Inactivado por materia orgnica
Povidona yodada Antisptico de piel Inactivado por materia orgnica
Hipoclorito de Sodio Desinfectante de agua, tiles de aseo, superficies Irritante, inactivado por materia
orgnica
Cloruro de Mercurio Desinfectante y antisptico Toxico
Nitrato de Plata Antisptico
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Amonios Cuaternarios Antispticos y desinfectantes, sanitizantes de Inactivado por materia orgnica


superficies y equipos

Agentes qumicos esterilizantes


Son tiles para esterilizar equipos y materiales que se destruyen a altas temperaturas y reas cerradas. Los principales
agentes utilizados son:
- Glutaraldehdo: destruye hongos, virus, bacterias y esporas bacterianas. Se utiliza en solucin al 2%, pero tiene
la desventaja de ser muy txico, produciendo irritacin ocular, nasal y de tracto respiratorio superior.
- Formaldehido: es un gas muy txico y sus vapores producen irritacin de mucosas. Se utiliza como formalina
(solucin acuosa de formaldehido al 37%) para esterilizar instrumentos que no se pueden someter a altas
temperaturas.
*ambos ejercen su accin microbiana debido a desnaturalizacin de protenas.

- Oxido de Etileno: debido a que es un gas altamente inflamable, se utiliza en mezcla con CO2 al 90% para prevenir
la ignicin. Efectivo para esterilizar materiales de uso mdico y de laboratorio que son termolbiles. Su
mecanismo de accin es por inactivacin de enzimas y otras protenas mediante alquilacin. Sus vapores son
irritantes oculares y de mucosas.

Compuestos antibacterianos

Son compuestos quimioteraputicos que tienen la propiedad de inhibir o matar microorganismos a muy bajas
concentraciones, expresadas en microgramos de compuesto por mililitro (g/mL o mg/L)
En los primeros aos, todos los antibiticos eran obtenidos en forma natural. En nuestros das, la produccin de estas
sustancias se ha diversificado, con lo cual se logra obtener compuestos de mayor pureza y a ms bajo costo.

Naturales
Algunos antibacterianos son sintetizados naturalmente por microorganismos (bacterias u hongos) que viven en el medio
ambiente. Estos microorganismos pueden ser aislados y utilizados para la produccin de estos compuestos.

Semisintticos
En estos casos el agente antibacteriano se obtiene naturalmente, se asla y purifica y, posteriormente, es modificado
qumicamente en el laboratorio, cambiando algunos de sus radicales sustituyentes para modificar ciertas propiedades,
sean stas de carcter antibacteriano, farmacocinticas, qumicas, etc. Este proceso deriva de dos factores
fundamentales:
- El conocimiento del ncleo qumico, comn a todos los antibacterianos de un determinado grupo, el cual les
otorga su propiedad antibacteriana.
- El conocimiento de la o las propiedades que cada radical que sustituye el ncleo le otorga al antibitico en
forma especial.

Sintticos
Algunos antibacterianos no existen en la naturaleza pero son sintetizados en el laboratorio y producidos en gran escala
por la industria. En otras ocasiones algunas molculas antibiticas naturales son tambin sintetizadas para obtenerlas a
ms bajo costo y con mayor pureza.

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Propiedades generales

Tipo de actividad (potencia de accin)


Ya se ha dicho que los antibacterianos inhiben o matan microorganismos. Estos efectos pueden ser visualizados en el
laboratorio, haciendo actuar concentraciones crecientes de antibacteriano sobre un cultivo de una cepa bacteriana
susceptible y efectuando recuentos de las clulas viables a intervalos de tiempo. En esta experiencia se podr observar
que a concentraciones relativamente bajas el nmero de clulas se mantiene constante en el tiempo (efecto
bacteriosttico), lo que indica que el microorganismo no se multiplica pero tampoco muere. En cambio, si la
concentracin se aumenta en forma significativa, las clulas empiezan a disminuir (efecto bactericida). En el laboratorio
se puede cuantificar la actividad bacteriosttica o bactericida de los antibiticos, determinando en forma experimental
la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) y la Concentracin Mnima Bactericida (CMB).

Espectro de actividad antibacteriana


Los agentes antibacterianos pueden actuar solamente sobre algunos microorganismos y se pueden diferenciar entre s,
precisamente, por las especies bacterianas que caen bajo su accin. Como propiedad general, las bacterias Gram
negativas son mas difcilmente afectadas por los antibacterianos debido a la mayor complejidad de la estructura que las
envuelve. El conjunto de especies bacterianas que pueden ser inhibidas por un agente antibacteriano constituye su
espectro de actividad antibacteriana. Generalmente, se acepta que los antibacterianos que actan solamente sobre
bacterias Gram positivas, o bien, solamente sobre bacterias Gram negativas, poseen reducido espectro antibacteriano.
En cambio, aquellos que pueden actuar sobre especies de ambos grupos de microorganismos poseen amplio espectro
antibacteriano.

Efecto antibacteriano sub-inhibitorio


Cuando se hacen actuar concentraciones inferiores a la correspondiente CMI sobre una bacteria, se pueden detectar
algunos efectos importantes en la clula:
- Disminucin de la velocidad de multiplicacin
- Alteraciones morfolgicas visibles por microscopia electrnica
- Inhibicin de la sntesis de adhesinas
- Inhibicin de la sntesis de algunas enzimas
El conjunto de estos efectos puede explicar algunas de las propiedades que ejercen los agentes antibacterianos cuando
se aplican a concentraciones muy bajas.

Efecto post-antibitico (EPA)


Este efecto consiste en la incapacidad de multiplicacin de clulas bacterianas que han sido tratadas con un
determinado antibitico cuando este compuesto es retirado de su medio ambiente, por ejemplo, por lavado. El EPA
tiene una duracin variable que depende tanto del antibitico mismo como de la bacteria afectada. As, algunos
antibiticos manifiestan un EPA relativamente prolongado (2 4 horas), como los aminoglicsidos sobre bacterias Gram
negativas.

Mecanismos de accin
Los agentes antibacterianos se clasifican, de acuerdo al mecanismo por el cual actan sobre la clula bacteriana, en
compuestos que conducen a:
- Inhibidores de sntesis de cidos nucleicos: existen antibiticos (como la rifampicina) que inhiben la sntesis de
ARN debido a que se unen a la enzima ARN polimerasa. Las quinolonas interfieren con la enzima ADN girasa,
esencial para la replicacin del ADN. Por otra parte, algunos compuestos (como el sulfametoxazol-trimetoprim)
inhiben la sntesis de cido flico, necesario para la sntesis de bases nitrogenadas.

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- Inhibidores de sntesis de protenas: puede ser inhibida en diferentes niveles y producir, finalmente, protenas
defectuosas y no funcionales, o bien, interrupcin de la sntesis proteica. Se encuentran, por ejemplo,
aminoglicsidos, macrolidas, tetraciclinas, cloranfenicol, lincosamidas, etc.
- Inhibidores de sntesis de peptidoglicn: este componente estructural es esencial para la viabilidad bacteriana y
su sntesis puede ser inhibida a diferentes niveles por antibiticos como -lactmicos, fosfomicina, bacitracina,
cicloserina, glicopeptdicos, etc. Para ejercer su accin, esto antibiticos requieren que las bacterias se
encuentren en activa multiplicacin y sntesis de peptidoglicn.

- Compuestos que alteran la membrana citoplasmtica: los compuestos que desorganizan esta estructura
producen cambios en su permeabilidad, permitiendo la salida de iones y otros elementos que conducen a la
muerte bacteriana. Un ejemplo son algunos antibacterianos polipeptdicos como las polimixinas que se
comportan como detergentes catinicos.

Resistencia bacteriana

Una cepa bacteriana es resistente a un determinado antibacteriano cuando la concentracin que alcanza dicho
compuesto en el sitio de infeccin es inferior a la concentracin mnima para inhibir la cepa (CMI). La resistencia de una
cepa bacteriana a un determinado agente antibacteriano puede ser: natural o intrnseca, porque sta propiedad es un
atributo de la especie a la cual pertenece la cepa, o adquirida, si cambian su comportamiento frente al uso de un
antibacteriano apareciendo luego como resistentes. La diferencia entre una cepa susceptible y una resistente (ambas de
la misma especie) frente a un antibacteriano se expresa por la CMI superior presentada por la cepa considerada
resistente.
Puede observarse que la resistencia bacteriana se encuentra expresada por la relacin entre la CMI y el nivel orgnico
del compuesto antibacteriano. En algunas cepas, el antibacteriano manifiesta una CMI que hace aparecer al
microorganismo como susceptible; sin embargo, se observa un notorio aumento de la CMB. Es decir, la CMI y la CMB se
disocian, con lo cual disminuyen las posibilidades de que el microorganismo sea muerto por el antibacteriano en el
organismo. Estas cepas, que se denominan como susceptibles por definicin (CMI normal), se denominan tolerantes y
suelen constituir serios problemas en infecciones en las cuales se requiere la muerte bacteriana.

Aparicin de cepas resistentes


Las cepas resistentes aparecen en la naturaleza mediante dos procesos.
- Seleccin de mutantes resistentes: todo cultivo de bacterias susceptibles contiene clulas mutantes resistentes
en una frecuencia baja y diferente frente a cada antibacteriano (10-6 para rifampicina, 10-10 para
aminoglicsidos). Al hacer actuar un antibacteriano, la presin selectiva que ejerce ste sobre la poblacin
susceptible puede seleccionar estas mutantes, las que darn origen a una cepa con menor susceptibilidad (CMI
aumentada)
- Transferencia gentica de resistencia: algunos genes que codifican resistencia estn ubicados en plsmidos o
transposones y pueden, por lo tanto, transferirse desde bacterias resistentes a bacterias susceptibles, dadas las
condiciones adecuadas para que ocurra este fenmeno gentico. Por lo general, estos genes codifican enzimas
que inactivan a antibacterianos (-lactamasas) o que los expulsan desde la clula bacteriana (resistencia a las
tetraciclinas)

Mecanismos de resistencia
Se describen diversos mecanismos por medio de los cuales las clulas pueden resistir la accin de antibacterianos. Entre
ellos se encuentran:

- Inactivacin enzimtica: los antibacterianos pueden ser hidrolizados, acetilados, fosforilados, etc., lo que llevar
al compuesto a perder su actividad. Los antibiticos -lactmicos son hidrolizados por diversas -lactamasas, los

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aminoglicsidos son acetilados, fosforilados o adenilados por enzimas inactivantes, el cloranfenicol es acetilado.
Generalmente, estas enzimas son codificadas por genes transferibles. Estas enzimas son generalmente
extracelulares en las bacterias Gram positivas y periplsmicas en las Gram negativas.
- Impermeabilidad celular: las bacterias Gram negativas pueden adquirir variados grados de impermeabilidad por
alteracin en sus porinas de la membrana externa.
- Disminucin de la afinidad de los antibacterianos por protenas u otro compuesto blanco: la bacteria puede
mutar y sintetizar protenas receptoras alteradas, an en un solo aminocido, con lo cual el antibacteriano
disminuye su afinidad por ella y no puede ejercer su accin apropiadamente. Esto se observa en protenas
ribosomales a las que se unen aminoglicsidos, macrolidas, lincosamidas; en ADN girasa a la cual se unen
quinolonas; en ARN polimerasa a la cual se une rifampicina, etc. La variacin por mutacin puede afectar a otras
estructuras celulares, como por ejemplo a algunas subestructuras del peptidoglicn.
- Eflujo: se presenta en cepas bacterianas resistentes que tienen la capacidad de expulsar el antibitico hacia el
exterior a travs de un mecanismo dependiente de energa. Este es el principal mecanismo de resistencia
bacteriana a tetraciclinas.

Asociaciones de antibacterianos
Los objetivos ms frecuentes de la administracin de dos o ms agentes antibacterianos son:

- Ampliar el espectro de accin: cuando no se conoce el agente etiolgico de la infeccin, especialmente ante la
necesidad de tratamientos urgentes, se administran asociaciones que cubran las posibilidades etiolgicas ms
frecuentes.
- Disminuir la posibilidad de seleccin de mutantes resistentes: la frecuencia de mutacin de dos antibacterianos
es significativamente inferior a la correspondiente a cada uno de ellos por separado.
- Obtencin de efecto antibacteriano sinrgico: los efectos que pueden obtenerse al asociar dos o ms
antibacterianos son: indiferencia, adicin, antagonismo y sinergia o potenciacin. Las posibilidades de
obtencin de cada efecto dependen de los antibiticos a asociar y del agente etiolgico. La asociacin de dos
antibacterianos de comportamiento bactericida conduce a sinergia (con mayor probabilidad); la asociacin de
uno bacteriosttico con otro bactericida ofrece riesgos de antagonismo.

Parmetros frecuentemente usados en la evaluacin de la actividad de los agentes antibacterianos

- Concentracin Mnima Antibitica (CMA): es la menor concentracin de antibacteriano que produce los
primeros efectos en las bacterias (alteracin morfolgica, velocidad de crecimiento, etc.)
- Concentracin Mnima inhibitoria (CMI): es la menor concentracin que produce la inhibicin visible del
crecimiento
- Muerte bacteriana: microbiolgicamente, se considera muerte bacteriana cuando se ha reducido la poblacin
en el menos el 99,9% o 3 log, es decir, queda 0,1% o menos de clulas vivas, las que pueden ser destruidas por
las defensas orgnicas.
- Velocidad de muerte bacteriana (curva de muerte): disminucin progresiva del nmero de clulas bacterianas
sometidas a la accin del agente antibacteriano.
- Concentracin Minina Bactericida (CMB): es la menor concentracin de antibitico que produce la muerte
bacteriana de un cultivo.
- Concentracin Mnima Bactericida en el tiempo (CMB/T): es la menor concentracin de agente antibacteriano
que produce la muerte del cultivo en el menor tiempo (horas o minutos)
- Tolerancia antibitica
o La bacteria presenta una CMI normal, correspondiente a una cepa susceptible, pero una CMB
anormalmente elevada (16 o 32 veces la CMI)
o La velocidad de muerte de la cepa tolerante es muy baja en relacin a la de una cepa no tolerante.

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- Efecto post-antibitico (EPA): tiempo en que no existe un desarrollo bacteriano de una cepa que fue tratada con
un antibacteriano que posteriormente fue retirado y separado de las clulas bacterianas.
- Efecto antibacteriano sub-inhibitorio: alteraciones producidas por concentraciones inferiores a la CMI en las
clulas bacterianas.
- Sinergia o potenciacin antibitica: potenciacin de la accin de antibacterianos en asociacin. Disminucin de
la CMI o CMB en uno de los dos compuestos asociados a o menos de la CMI del antibacteriano solo.
- Adicin antibitica: disminucin de la CMI de uno de los antibacterianos asociados a de la que presentan
aisladamente. Puede observarse que la diferencia con la sinergia es de tipo cuantitativo.
- Indiferencia antibitica: la CMI de cada antibacteriano es idntica a la que presentan cuando actan
aisladamente. Cada antibacteriano acta como si el otro no estuviera presente.
- Antagonismo antibitico: la CMI de cada antibitico asociado aumenta por sobre lo que presenta cuando acta
aisladamente, por lo tanto, la actividad de uno o ambos componentes disminuye.

Principales grupos de agentes antibacterianos

Antibiticos que inhiben la sntesis de cidos nucleicos


1. Quinolonas
- Se unen a la subunidad A de la ADN girasa o Topoisomerasa bacteriana, enzima responsable del sper-
enrollamiento del ADN, inhibiendo su replicacin. Son bactericidas.
- El cido nalidixico posee espectro reducido, siendo activo sobre bacterias Gram negativas. Las fluoroquinolonas
son antibacterianos de amplio espectro.
- El mecanismos de resistencia se debe a mutacin en el sitio blanco (ADN girasa)
2. Rifamicinas
- Se unen a la subunidad de la enzima ARN polimerasa e impide la iniciacin de la transcripcin de ADN a ARN.
Son bactericidas.
- Poseen amplio espectro de actividad.
- El mecanismo de resistencia se debe a mutacin del sitio blanco (ARN polimerasa)
3. Sulfametoxazol-trimetoprim
- Los componentes de esta asociacin inhiben dos enzimas que participan en la va biosinttica del cido
tetrahidroflico, esencial para la sntesis de bases pricas. La asociacin es bactericida.
- Es una asociacin que posee amplio espectro de actividad.
- El mecanismo de resistencia se debe a sntesis de enzimas blanco con menor afinidad por cada compuesto.

Antibiticos que inhiben la sntesis de peptidoglicn


1. -lactmicos
- Se unen a protenas enzimticas que participan en la sntesis de peptidoglicn, llamadas PBPs (Penicilin Binding
Proteins) o protenas que unen penicilina, por lo tanto, inhiben la formacin de este componente estructural
esencial. Son bactericidas.
- La gran mayora es de amplio espectro. Entre los agentes de reducido espectro se encuentra bencilpenicilina
(Gram positivos), cloxacilina (activa sobre Staphylococcus) y aztreonam (Gram negativas).
- El mecanismo de resistencia es principalmente debido a la hidrlisis por -lactamasas. En menor grado se debe a
la alteracin del sitio blanco (PBPs).
2. Glicopeptdicos
- Interrumpen la sntesis de peptidoglicn debido a que inhiben la elongacin de la cadena de este componente.
Sn bactericidas.
- Poseen espectro reducido, solo actan sobre bacterias Gram positivas, ya que debido a su gran tamao no
pueden penetrar la membrana externa.
- El mecanismo de resistencia es por alteracin del sitio blanco.

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Antibiticos que inhiben la sntesis de protenas


1. Aminoglicsidos
- Se unen en forma irreversible a la subunidad ribosomal 30S, conduciendo a la formacin de protenas
defectuosas, ya sea por interrupcin de la sntesis o por incorporacin de aminocidos incorrectos. Son
bactericidas.
- Poseen amplio espectro de actividad. No son activos sobre bacterias anaerobias.
- El principal mecanismo de resistencia es la modificacin enzimtica del antibitico por acetilasas,
adeniltransferasas y fosfotransferasas.
2. Tetraciclinas
- Se unen a la subunidad ribosomal 30S, bloqueando la fijacin del aminoacil-t-RNA al sitio A. son antibiticos
bacteriostticos.
- Son de amplio espectro, incluyendo Chlamydia, Mycoplasma y Ureaplasma.
- El principal mecanismo de resistencia es el eflujo, en que el antibitico es expulsado al exterior por un proceso
dependiente de energa.
3. Macrolidas
- Bloquean la transpeptidacin y/o translocacin por unin reversible a la subunidad 50S. son bacteriostticos.
- Accin principalmente sobre bacterias Gram positivas. Azitromicina posee un espectro ms amplio en bacterias
Gram negativas debido a una mejor penetracin a travs de la membrana externa.
- El mecanismo de resistencia es, principalmente, por modificacin del ARN 23S de la subunidad 50S, impidiendo
la unin del antibitico (mecanismo MLS). Otros mecanismos son impermeabilidad e inactivacin enzimtica del
compuesto.
4. Lincosamidas
- Se unen en forma reversible a la subunidad 50S, bloqueando la transpeptidacin. Son bacteriostticos.
- Su espectro de actividad es similar a macrolidas. Clindamicina posee, adems, actividad sobre bacterias
anaerobias.
- Mecanismo de resistencia tipo MLS, similar a macrolidas.
5. Cloranfenicol
- Se unen en forma reversible a la subunidad 50S, bloqueando la transpeptidacin. Son bacteriostticos.
- Posee amplio espectro de actividad.
- El mecanismo de resistencia es por acetilacin del antibitico.

Antibiticos que afectan la membrana citoplasmtica


- Actan como detergentes o tensoactivos catinicos y provocan una grave alteracin de la membrana celular,
modificando la permeabilidad y permitiendo el escape de aminocidos intracelulares, purinas, pirimidinas y
otras molculas fundamentales para la vida celular.
- Las polimixinas actan de este modo, interactuando sobre los fosfolpidos de la membrana celular
- La nistatina y la anfotericina B son activos frente a hongos, se unen a un grupo esterol de la membrana que
solamente contienen los microorganismos contra los cuales se utilizan estos ATB.
- Las bacterias ms susceptibles son las que tienen en su membrana un mayor contenido de fosfolpidos (Gram
negativas).
- La insensibilidad o resistencia est en relacin con la impermeabilidad de la pared celular para estos frmacos,
como el caso de las Gram positivas que tienen una pared celular muy gruesa.

Angelo Parra 2012


Tecnologa Mdica