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Reasentamiento y mutaciones asociadas con la aparicin y propagacin de la influenza estacional

resistente al oseltamivir Virus A / H1N1 en 2005-2009

Un aumento espectacular de la frecuencia de la mutacin H275Y en la neuraminidasa (NA), que


confiere resistencia al oseltamivir, ha sido detectado en los virus de la gripe estacional humana A /
H1N1 desde la temporada de influenza de 2007-2008. Los virus resistentes aparecieron en la
proporcin de 14,3% y rpidamente alcanzaron el 100% en Taiwn de septiembre a diciembre de
2008. Para explorar los mecanismos responsables de la aparicin y propagacin de los virus
resistentes, analizamos las secuencias completas del genoma de 25 virus recogidos durante 2005-
2009 en Taiwn, que fueron elegidos entre varios virus del clado, 1, 2A, 2B-1, 2B-2, 2C-1 y 2C-2 por
la clasificacin de las secuencias de hemaglutinina (HA). Nuestros datos revelaron que la variante
dominante, clade 2B-1, en la gripe 2007-2008 surgi a travs de un reorganizacin (reassortment) intra-
subtipo 4 + 4 entre los virus del clado 1 y 2.

La variante dominante adquiri sustituciones adicionales, incluyendo A206T en HA, H275Y y


D354G en NA, L30R y H41P en PB1-F2 y V411I y P453S en las protenas de la polimerasa bsica 2
(PB2) y posteriormente caus la epidemia de influenza 2008-2009 en Taiwn, acompaando a los
virus extendidos resistentes al oseltamivir. Tambin caracterizamos otros 3 + 5 reassortant que se
convirti en doble resistencia a oseltamivir y amantadina. La comparacin de los virus A / H1N1
resistentes al oseltamivir pertenecientes a varios clados en nuestro estudio destac que tanto el
reasentamiento como las mutaciones fueron asociado con la aparicin y propagacin de estos virus y
la mutacin especfica, H275Y, conferir a la resistencia antiviral, se adquiri en un mecanismo de
autostop durante los procesos evolutivos virales.

Introduccin

Los virus de la influenza causan epidemias anuales en muchas pandemias mundiales ocasionales.
Vacunas contra la gripe y medicamentos antivirales son dos medidas tiles para prevenir la influenza
y reduciendo el impacto de las epidemias. En la actualidad, ha habido dos clases de medicamentos
antivirales disponibles para prevenir y tratar enfermedad de la influenza: bloqueadores de los canales
inicos M2, adamantanos (amantadina y rimantadina), e inhibidores de neuraminidasa (oseltamivir,
zanamivir y peramivir). Desde la gripe 2005-2006 temporada, la mayora de los virus de influenza
humana A / H3N2 en todo el mundo se encontr que llevan S31N en la protena M2, confiriendo
resistencia al adamantano . En la temporada de 2007-2008, influenza estacional resistente al
oseltamivir A / H1N1 los virus portadores de H275Y (N1 numeracin) en la protena NA fueron
detectados en Europa y propagados a nivel mundial en ausencia de presin selectiva. Al final de la
temporada 2007-2008, el porcentaje medio de aislados resistentes a oseltamivir fue del 25% en
Europa, 12,3% en Estados Unidos, 26% en Canad, 12% en Hong Kong y 3% en Japn. Para la
temporada 2008-2009, la mayor parte los virus de la gripe estacional A / H1N1 han sido resistentes
oseltamivir. Emergencia y propagacin de virus antivirales plantean un reto en cuanto a las estrategias
para tratar y prevenir la gripe.

Hay tres factores clave que afectan los procesos evolutivos de los virus de la gripe resistentes a los
antivirales de su aparicin a la propagacin mundial. El primer factor es la frecuencia de mutantes
resistentes a frmacos que surgen de nuevo durante el tratamiento, segundo es la capacidad de superar
el obstculo de la aptitud viral causada por mutaciones resistentes y el ltimo es sustituir las cepas
existentes por mutaciones de reorganizacin (reassortment) y / o deriva. Basado en el ejemplo de
resistentes al adamantano A / H3N2 virus, estos virus han ocurrido de novo a una frecuencia alta en
aproximadamente 27-33% de los pacientes tratados y estos siguen siendo patgenos y transmisibles,
en comparacin con los virus de tipo salvaje. Los virus A / H3N2 resistentes a adamantano que
circulan por todo el 2005-2006 se generaron a travs de la reorganizacin y sustituciones adicionales.
En el ejemplo de oseltamivir-resistente virus de la gripe estacional A / H1N1, la frecuencia de los
virus resistentes a los frmacos que aparecieron durante los ensayos clnicos fue de 0,3 a 18% . Antes
de 2006, oseltamivir-resistente A / Los virus H1N1 se encontraron comprometidos para la
replicacin y transmisin in vitro e in vivo, en comparacin con la de tipo salvaje. En la temporada
de influenza 2007-2008, los virus A / H1N1 resistentes al oseltamivir probablemente su poblacin,
se hizo predominante y circul globalmente. En particular, los virus no difieren epidemiolgicamente
o clnicamente a partir de aislados susceptibles]. Por lo tanto, es un cuestin importante para la
comprensin de la evolucin de los virus antivirales que el (los) cambio (s) gentico (s) puede
conducir a la optimizacin de la permicion que un virus comprometido se convierta en predominante
y globalmente.

En este estudio, se determin la frecuencia de la H275Y mutacin en la NA para estudiar la relacin


estacional. virus de la gripe A / H1N1 resistente al oseltmivir en Taiwn y descubrieron que un
aumento dramtico de la frecuencia de la mutacin H275Y detectado desde septiembre de 2008. Por
lo tanto, hemos combinado datos de la vigilancia epidemiolgica de la influenza, as como de la
resistencia a oseltamivir pruebas y anlisis genticos completos de los virus durante 2005-2009 para
investigar los mecanismos responsables para la aparicin y propagacin de estos virus resistentes
Taiwn
Resultados

Aumento de la influenza estacional resistente al oseltamivir A / H1N1 en Taiwn desde septiembre


de 2008. Desde enero de 2005 hasta agosto de 2008, un total de 47 virus de la gripe A / H1N1 en
Taiwn se probaron para la presencia de H275Y sustitucin en la NA y slo dos (4,2%) aislados, A /
Taiwn / 0045/2006 y A / Taiwan / 3293/2008, fueron positivo para esta sustitucin. Sin embargo,
la frecuencia de los virus albergar H275Y comenz a aumentar a partir de septiembre de 2008 (2/14,
14,3%) y rpidamente alcanz el 100% (37/37) en diciembre (Fig. 1A). Debido a que los virus de la
gripe estacional A / H1N1 subtipo predominante en las dos estaciones sucesivas de influenza de 2007-
2008 y 2008-2009 en Taiwn (figura 1B), fue sorprendente que los virus de influenza A / H1N1
resistentes a oseltamivir surgieron y se propag rpidamente en la segunda temporada epidmica
(2008-2009). Evolucin variante de los virus estacionales de influenza A / H1N1 asociada con la
propagacin de la resistencia al oseltamivir De 2005 a 2009, tres epidemias de influenza en 2005-
2006, 2007-2008 y 2008-2009 en Taiwn fueron causados predominantemente por virus estacionales
de influenza A / H1N1 (Figura 1B). Entre el total de 1660 virus aislados durante este perodo, se
determin la parcial HA secuencias (HA1 dominio) de los 1585 virus. Los curvas epidemiolgicas
en relacin con varios virus del clade HA trazado en la figura 1C. En Taiwn, la epidemia de 2005-
2006 fue dominado por el clado 2A virus, acompaado de clado 1 y 2C-1 virus como variantes
menores. Adems, los virus del clado 2C-1, que se identificaron por primera vez en mayo de 2006,
continuaron bajos niveles en los aos siguientes (Fig. 1C). Los virus del clado 2B- 1 fueron detectados
por primera vez en abril de 2007 en Taiwn y Enero de 2008, seguido por la sustitucin transitoria
por el clado 2C-2 virus en septiembre de 2008. Otro reemplazo ocurri con virus del clado 2B-2, que
fueron detectados por primera vez en septiembre de 2008 y rpidamente se convirtieron en las cepas
predominantes a partir de diciembre de 2008 (Figura 1C)

Investigar la relacin entre la evolucin de la variante y la aparicin de los virus resistentes al


oseltamivir, se determin la prevalencia de la sustitucin de H275Y en varios virus clade en Taiwn
De los virus HA clade 1 y 2A, no se encontr ninguno llevan la sustitucin H275Y (0/5 y 0/9,
respectivamente, Tabla 1). Con respecto a los virus del clado 2B, 8 de 34 (23,5%) de clado 2B-1 virus
y todos los 130 clade 2B-2 virus fueron positivos para H275Y (Tabla 1). Entre los 22 clade 2C virus,
slo haba uno perteneciente al clado 2C-2 detectado con el H275Y (1/22, 4,5%, Tabla 1). Con base
en estas comparaciones, la alta prevalencia de los virus de la gripe estacional A / H1N1 de oseltamivir
durante la 2008-2009 en Taiwn fue causado principalmente por virus del clado 2B-2. Esto indica
que la aparicin y el predominio de este nuevo variante estuvo acompaada por la propagacin de la
resistencia a oseltamivir.
Figura 1. La frecuencia de la sustitucin de H275Y en genes de NA y la distribucin mensual de
aislamientos de influenza confirmada en Taiwn entre 2005 y 2009. (A) Se secuenciaron y analizaron
los genes NA de los virus A / H1N1 de influenza estacional aislados en Taiwn de 2005 a 2009 la
mutacin asociada con la resistencia a oseltamivir. El nmero de aislados ensayados y su relacin
H275Y se ilustran mediante una lnea negra y una barra blanca, respectivamente. La tasa de
positividad de H275Y subi rpidamente de 4,2% (2/47) antes de agosto a 100% (37/37) en diciembre
de 2008. (B) El nmero de influenza aislamientos y sus tasas de positividad. Los virus de la gripe
estacional A / H1N1 fueron los subtipos predominantes en el perodo 2005-2006, 2007-2008 y Las
epidemias de 2008-2009 y los virus de la gripe B fueron predominantes en 2006-2007. Los virus
estacionales A / H3N2 tambin co-circularon durante estos cuatro gripe. Desde julio de 2009, los
virus pandmicos H1N1 comenzaron a reemplazar a los virus de la gripe estacional y se convirtieron
en dominantes. (C) El cladebased epidemiolgicas de los virus estacionales de la gripe A / H1N1.
Los 1585 aislamientos se clasificaron en cuatro clados distintos: 1, 2A, 2B (2B-1 y 2B-2) y 2C (2C-
1 y 2C-2) de acuerdo con los anlisis filogenticos y las sustituciones de aminocidos de las
secuencias HA. Los principales virus en 2005-2006, Las temporadas 2007-2008 y 2008-2009 fueron
clado 2A, 2B-1 y 2B-2, respectivamente. Las especies menores de otros clados circularon durante
este perodo.

Anlisis de secuencia completa de la influenza estacional A / Virus H1N1

Veinticinco virus representativos aislados durante 2005-2009 en Taiwn, que fueron seleccionados
de diferentes virus HA clade (Tabla 2), ms tres resistentes al oseltamivir resistentes al virus de la
gripe A / H1N1 virus de otros pases, A / England / 494/2006, A / England / 594/2006 y A / Kansas /
UR06-0104 / 2007, y dos vacunas cepas A / Nueva Caledonia / 20/1999 y A / Brisbane / 59/2007
para el anlisis completo de secuencia (los ltimos cinco fueron obtenido de la base de datos NCBI),
y la filogentica se determinaron las topologas de cada uno de los segmentos del genoma. Las
topologas filogenticas de HA, NA, PB2 y PA genes fueron similar. En los rboles HA y NA, los
virus del clado 2B fueron ms estrechamente relacionado con el clado 2C que el 2A (Fig. 2A y Fig.
S1). En el PB2 y PA genes, clade 2A virus se agruparon con 2C en lugar que 2B (figura 2B y figura
S1). Por el contrario, la filogentica anlisis de PB1, NP, NS y M genes revel que el clado-2B los
virus clasificados por HA genes se desplazaron a clado 1 (Fig. 3 y Fig. S2), excepto para A / Taiwn
/ 2885/2008, cuyo gen M cay en clado 2 (figura 3B). El desajuste en estas topologas de rbol
fuertemente sugiere que los virus del clado 2B se generaron a travs de un 4 (PB1, NP, NS y M) +4
(HA, NA, PB2 y PA) reordenamiento entre los clados 1 y 2. Los 8 segmentos de clados 2A y 2C
fueron consistentemente en el clado 2, lo que indica que el reasentamiento no ha pero sucedi en estos
dos virus clade. Adems, los otros dos tipos de reorganizacin. El virus A / England / 594 / 2006
represent un evento de reordenamiento 6 + 2 entre el clado 1 y 2, es decir, sus segmentos PB2, PA,
PB1, NP, NS y M se localizaban en clado 1 y los segmentos HA y NA en el clado 2 (Tabla 2). Los
virus A / Taiwn / 2885/2008 represent un evento de reordenamiento 3 + 5 entre los clados 1 y 2.
Sus segmentos PB1, NP y NS se localizaron en los segmentos clade 1 y HA, NA, PB2, PA y M en el
clado 2 (Tabla 2).
Sustituciones de aminocidos asociadas con oseltamivir-resistant virus de la gripe estacional A /
H1N1

Para entender las diferencias genticas entre el oseltamivir-resistente y virus sensibles, sustituciones
de aminocidos de se compararon los virus representativos en el mismo clado HA. En clade 2B-1,
hubo slo un virus con H275Y, A / Taiwan / 3293/2008, identificado antes de mayo de 2008.
Sustitucin H275Y en la NA y ninguna sustitucin especfica fue encontrado por comparacin con el
tipo salvaje 2B-1 virus (Tabla 3). Cabe destacar que los otros cuatro virus clade 2B-1 con H275Y,
recogidas despus de octubre de 2008 durante la epidemia de 2008-2009, cinco sustituciones de
aminocidos adicionales situadas en tres genoma, incluyendo D354G en NA, L30R y H41P en PB1-
F2 y V411I y P453S en PB2 (Tabla 3). Entre los clados Virus 2B-2 en la temporada 2008-2009, todos
ellos cinco sustituciones en comparacin con el tipo salvaje 2B-1 virus.

Tambin se detectaron sustituciones adicionales en las posiciones 158, 200 y 202 en HA (numeracin
H1, referida a A / Nueva Caledonia / 20 / 1999 y la metionina de partida contada como 1, utilizada
en otras este estudio) y la posicin 642 en los genes PB1 (Tabla 3], que probablemente representaron
mutaciones de deriva y se asociaron menos con la propagacin de los virus del clado 2B-2. Para
investigar si estos sustituciones ocurrieron en los aislados globales, analizamos extensivamente los
92 virus pertenecieron al clado 2B en HA genes en todo el mundo durante 2006 a 2009 con el genoma
completo disponible en la base de datos de Recursos de Virus de la Influenza (Fig. 4 y Tabla S1).
Diferencias de sustituciones de aminocidos, especialmente aquellas entre el clado 2B-1 y 2B-2 se
centraron en y se muestra en la Fig. 4.

Las sustituciones, A206T en HA, D354G en NA, N642S en PB1, L30R y H41P en PB1-F2 y V411I
y P453S en PB2 fueron tambin altamente correlacionada con el H275Y en los genes de NA. Por lo
tanto, estas sustituciones generalizadas se observaron en los virus aislados tanto de Taiwn como del
mundo. Para los virus del clado 2C, el nico Se detect un aislado con H275Y, A / Taiwn /
2832/2008, y en octubre de 2008. Esto no haba adquirido ninguna , comparado con el virus de tipo
2C de tipo salvaje (Tabla 3). Tambin se analizaron las sustituciones S31N en M2, confiriendo
resistencia a la amantadina. Entre los virus representativos, el ocho virus en HA clados 1 y 2A no
tienen sustituciones S31N.

En el clado 2B, slo se encontr un aislado, A / Taiwan / 2885/2008 llevar la sustitucin S31N. Esta
doble resistencia a la amantadina y el oseltamivir result de la reasuncin 3 + 5 del virus (Tabla 2 y
Fig. 3B). En el clado 2C, todos los cinco aislamientos la sustitucin S31N en M2 (Tabla 2).
Figura 2. Relaciones filogenticas de los segmentos HA y PB2 de los virus de la influenza A / H1N1
en Taiwn. Los anlisis filogenticos se construyeron utilizando el mtodo de unin vecina con 1000
repeticiones de bootstrap. Se indican valores de ramificacin de ms de 75. Toda las filogenias se
arraigaron con la A / New Caledonia / 20/1999, que fue la cepa de la vacuna recomendada por la
OMS durante la gripe 2001-2007 estaciones. Las secuencias del genoma de A / Solomon Islands /
3/2006, A / Brisbane / 59/2007 y los aislamientos tempranos que llevan la sustitucin H275Y, A /
England / 494/2006, A / England / 594/2006 y A / Kansas / UR06-0104 / 2007, obtenidos de la base
de datos NCBI. Diferentes clados fueron mostrados por Colores diferentes.
Figura 3. Relaciones filogenticas de los segmentos PB1 y M de los virus de la influenza A / H1N1
en Taiwn. Los anlisis filogenticos se construyeron utilizando el mtodo de unin vecina con 1000
repeticiones de bootstrap. Se indican valores de ramificacin de ms de 75. Todas las filogenias
fueron arraigadas con el A / New Caledonia / 20/1999. Diferentes clados fueron mostrados por
diferentes colores.
La actividad de la neuraminidasa y el anlisis cuasi-especies del virus de la gripe estacional A / H1N1
275H, 275Y en el gen NA

Las concentraciones inhibidoras del 50% (IC50) para el oseltamivir se determinaron los 25 virus
representativos (Tabla 2). Entre los valores de IC50 de oseltamivir de los virus que codifican 275Y
estaban en el intervalo 139,9-821,7 nM, mientras que los valores de la 275H uno fueron de 0,26-1,15
nM. Adems, examinamos la posibilidad si los virus sensibles o resistentes probados por IC50
contenan quasiespecies de genotipos virales que se definieron como componentes de 275H y 275Y
poblaciones en un oseltamivir sensibles y resistente, por clonacin y secuenciacin de la PCR-
amplificado viral Secuencias NA. El virus sensible, A / Taiwan / 10092/2007, mostr todos los 275H
tipo (100%, 50/50) y tambin el virus resistente, A / Taiwan / 3293/2008, mostr todos los tipos 275Y
(100%, 50/50), indicando genotipos cuasi-especies no se detectaron en estos dos virus.
Discusin

En este estudio, se proporcion un anlisis exhaustivo de la virus de la influenza A / H1N1 recogidos


en Taiwn durante 2005-2009. Los datos combinados de la vigilancia de la epidemia de gripe,
resistencia a oseltamivir pruebas y anlisis gentico completo de los los virus circulantes durante
2005-2009 revel la evidencia de que la sustitucin epidemiolgica anual de varios virus de influenza
A / Variantes de H1N1 asociadas con la aparicin y virus de influenza A / H1N1 resistentes a
oseltamivir. A principios de 2007, Temporada de influenza 2008, influenza A / H1N1 resistente a
oseltamivir virus fueron detectados primero en Europa (14%, 59/437), principalmente Noruega (70%,
26/37). La frecuencia de resistencia a oseltamivir los virus en Europa aument al 24,3% (727/2992)
al final de Temporada de influenza 2007-2008. Estos virus exhibieron una NA H275Y sustitucin
(N1 numeracin), conferir resistencia a oseltamivir y surgi sin la presin antiviral [3, 7, 22, 24].
Durante abril a septiembre de 2008, la alta frecuencia de sustitucin H275Y fue detectado en
Sudfrica (225/225, 100%) y en Australia (93%, 71/76). En el mismo perodo, la alta frecuencia de
H275Y la sustitucin an no se ha detectado en los pases de Asia, incluyendo Hong Kong (17%,
97/583), Japn (14%, 1/7) y Taiwn (12% 2/17) (en este estudio y [24]]. En Japn, la proporcin de
los virus aumentaron del 0,4% (3/687) en la temporada 2007-2008 a 100% (745/745) en la temporada
2008-2009 [25]. En las Amricas, el frecuencias de virus A / H1N1 resistentes a oseltamivir aument
de 10.9% (111/1020, octubre de 2007-mayo de 2008) a 99,2% (649/654, octubre de 2008-marzo de
2009) en los Estados Unidos de Amrica

La frecuencia global de virus resistentes aument del 44% (Abril 2008-septiembre 2008) al 96%
(octubre 2008-marzo 2009) [9, 24]. Basado en la distribucin espacial y espacial de los virus de la
influenza A / H1N1 resistentes al oseltamivir, propagacin de la los virus resistentes parecan partir
de Europa y migrar al hemisferio sur, seguido por Norteamrica y Asia.

La emergencia y la rpida propagacin mundial ponen de relieve la continuidad de la vigilancia


antiviral resistente y la respuesta.

La reorganizacin del segmento del genoma contribuye al diversidad de la influenza y se asocia con
epidemias y pandemias de desastres. Los virus de la gripe A causaron cuatro pandemia de influenza
en 1918 (subtipo H1N1), 1957 (H2N2 subtipo), 1968 (subtipo H3N2) y 2009 (subtipo H1N1), y todos
esos virus surgieron a travs de un complejo reordenamiento entre subtipos eventos [26, 27]. Adems,
los reordenamientos intra-subtipo como la deriva antignica han demostrado ser un factor importante
proceso en la evolucin y las epidemias anuales de influenza humana Virus A / H1N1 y fueron
responsables de varios epidemias de gravedad inusual en la dcada de 1940 y 1950 [28]. En este
estudio, investigamos las historias evolutivas y epidemiologa de los virus estacionales de la gripe A
/ H1N1 en Taiwn. Durante 2005-2009, hubo cuatro epidemias de influenza en Taiwn y tres de los
cuatro fueron causados por el subtipo H1N1y predomin por diferentes variantes, incluyendo HA
clades 2A,2B - 1 y 2B - 2, respectivamente (Figura 1C). La variante epidmica El volumen de
negocios del clado 2A al 2B-1 durante 2005-2007 se efecto de las mutaciones de reasentamiento intra-
subtipo y de deriva (Cuadro 2 y 3). Las siguientes dos epidemias sucesivas de influenza de 2007-
2008 y 2008-2009 en Taiwn fueron predominante variantes 2B-1 y 2B-2, respectivamente, y fueron
antignicamente en relacin con A / Brisbane / 59/2007, la gripe A / Componente H1N1 de la gripe
2008-2009 y 2009-2010 vacuna para el hemisferio norte (datos no presentados y [29]). Estas dos
variantes tenan segmentos genticos similares y mutaciones importantes localizadas en HA, NA,
PB1, PB1-F2 y PB2 (Tabla 3). Adems, los virus non-reassortant clade 2C, que no poda llegar a ser
dominante y extenderse ampliamente como el clado 2B virus, tambin coexistan y circulaban
continuamente a actividad durante 2005-2009 en Taiwn. Estos resultados destac la importancia de
la reorganizacin del segmento genmico y deriva de genes superficiales e internos en el predominio
y la recurrencia epidmica anual de los virus de la influenza. La propagacin mundial de los virus de
la gripe antivirales ha sido observado para los subtipos H3N2 y H1N1. Reorganizacin genmica y
sustituciones adicionales tambin se han considerado importantes procesos evolutivos de aparicin y
propagacin de adamantane-resistant virus de la influenza A / H3N2 en 2005-2006 y un hitch-hiking
se utiliz el mecanismo para explicar la ocurrencia del S31N sustitucin en la protena M2 de esta
variante en particular [14]. En esto estudio, se observ que la propagacin mundial de oseltamivir
resistente virus de influenza A / H1N1 durante 2007-2009 fueron generados reassortment y
mutaciones de deriva, y el H275Y en la protena NA tambin pareca extenderse en un mecanismo
de autostop. Analizamos la phylogenetic rboles de los cuatro principios oseltamivir resistente a los
virus recogidos antes de enero de 2007 y los virus representativos aislados en Taiwn durante 2005-
2009. Las filogenias resultantes revelaron que cada segmento de A / Taiwan / 0045/2006 estaba
estrechamente relacionado con clade 2C y las de A / England / 494/2006 y A / Kansas / UR06-0104
/2007 se ubicaron en el clado 1 (Tabla 2). Cabe destacar que el clado 2B A / England / 594/2006,
cuyos genes PB2 y PA todava caen en el clado 1, represent otro evento de reorganizacin-un patrn
6 + 2 entre clade 1 y 2 (Tabla 2). Los datos sugieren que los virus resistentes antes de 2007 ocurrieron
espordicamente en clado 1 y clado 2, y se generaron nuevas variantes (clado 2B) a travs de eventos
de reordenamiento intra-subtipo entre estos dos clados paso a paso (6 + 2 a 4 + 4) durante 2006-2007
y adquirieron sustituciones adicionales en los procesos evolutivos. Durante la rotacin epidmica de
variantes dominantes del clado 2B-1 a 2B-2 virus en las dos temporadas de influenza de 2007-2008
y 2008-2009 en Taiwn, varias sustituciones importantes se detectaron sin genmica reassortment,
incluyendo A206T en HA, H275Y y D354G en NA, N642S en PB1, L30R y H41P en PB1-F2 y
V411I y P453S en PB2 (Tabla 3). Algunas de estas sustituciones deberan mejorar la fitness y
contribuir a la recurrencia epidmica. En los estudios previos, se encontr que el residuo 354 en la
protena NA se localizaba en la parte superior del neuraminidasa, el resto 206 era el receptor que se
una dominio de la protena HA1 y el residuo 453 fue el ncleo nuclear localizacin de la seal de la
PB2 [20, 30, 31]. Sin embargo, el papel de estos sustituciones en la epidemiologa de la gripe siguen
siendo estudiados. Era merece la pena mencionar que estas sustituciones no se observaron en
resistentes al oseltamivir, a excepcin de A206T en HA y D354G en NA. Estos resultados revelaron
que la sustitucin H275Y NA coincidentemente con las sustituciones ventajosas y hicieron autostop
con una variante dominante durante los procesos de evolucin, resultando en los virus resistentes
generalizados.

Algunas sustituciones R194G, V234M y R222Q de las protenas NA estaban implicados en la


amortiguacin de deficiencias en el plegamiento o neuraminidasa causada por la sustitucin H275Y
y restauracin viral aptitud [32]. En este estudio, todos los 25 virus en HA clades 1, 2A, 2B y 2C
alberg la sustitucin R194G, y los virus de la ltima tres clados tambin llevaron la sustitucin
V234M. Para el R222Q sustitucin, los virus del clado 2B y 2C han adquirido este sustitucin (Tabla
3). En general, tanto el clado 2B y 2C virus han adquirido suficientes cambios para superar los
obstculos H275Y. Sin embargo, los virus del clado 2C an no se observaron ampliamente como el
clado 2B virus, lo que indica que estos sustituciones, deficiencias de amortiguacin inducidas por el
H275Y sustitucin, eran necesarios pero no suficientes para virus resistentes al oseltamivir. Se sugiri
que cuando se gentica se estableci a travs de la reorganizacin y mutaciones, la mutacin H275Y
que confiere resistencia en la NA gene podra hitch-hike con otras mutaciones compensadoras en
otros lugares en el genoma para hacer un virus dominante oseltamivir resistente untado. Adems,
dado que los virus doblemente resistentes de clado 2B y 2C se han encontrado en Taiwn, y tambin
detectado en Hong Kong [33, 34], la posibilidad de propagacin mundial de mltiples virus resistentes
a los antivirales.
Figura 4. Cambios de aminocidos en diversas protenas entre los clados 2B-1 y 2B-2 en los 92
aislamientos globales. Sustituciones de aminocidos en las posiciones 158, 200, 202, 206 en HA, 275,
354 en NA, 642 en PB1, 30, 41 en PB1-F2 y 411, 453 en PB2 son representadas por varios colores.
Cada columna representa la posicin de aminocido indicada. Los aminocidos (se utilizan
abreviaturas de una letra) se indican con diferentes colores, como se muestra en la clave. Cada fila
representa un solo aislamiento y los 92 aislamientos analizados se muestran en esta figura en el orden
del tiempo de recogida. Los 92 nombres aislados son enumerados en la Tabla S1.