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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE


BIOTECNOLOGA

LABORATORIO DE BIORREACTORES

PRCTICA 2

Instrumentacin para el seguimiento y control de la


biorreaccin

EQUIPO: 4

INTEGRANTES:

Amado Snchez Flix Valentn.


Fernndez Coronado Rosa Evelia.
Garca Hernndez Juan Carlos.
Mendoza Ibarra Omar Federico.
Rivera Ascencio Antonio.
Rodrguez Jimnez Juan Carlos.

PROFESORES:

M. en C. Jons Martnez Limn.


M. en C. Leobardo Ordaz Contreras.

GRUPO: 3BM1

FECHA DE ENTREGA: 30 DE AGOSTO DE 2016


INTRODUCCIN

Un biorreactor o fermentador se define como aquel dispositivo que proporciona un medio


ambiente controlado que permite el crecimiento eficaz de las clulas y la formacin de un
producto. El medio ambiente adecuado que proporciona un biorreactor, tiene que tener
niveles ptimos de temperatura, pH, sustrato, sales, y oxgeno, para as convertir las
materias primas en productos especficos (metabolitos) de inters.

La importancia de la instrumentacin de un biorreactor radica en la necesidad de tener en


los cultivos un control que permita optimizar el proceso. La estrategia de control comienza
con la medicin de las variables que proveen un ambiente adecuado en un proceso de
fermentacin. Para poder registrar, analizar y controlar estas variables es necesario un
Sistema de Control.

Un sistema de control es un arreglo de componentes fsicos conectados de tal manera que


el arreglo pueda comandar, dirigir o regular, asimismo o a otro sistema. Estos sistemas
comandan, dirigen o controlan dinmicamente. Los sistemas de control se pueden
clasificar de dos formas: Control de lazo abierto y control de lazo cerrado, siendo este
ltimo el empleado en los equipos del laboratorio.

Un sistema de control de lazo cerrado es aquel en el que la seal de salida tiene efecto
directo sobre la accin de control. La diferencia entre la seal de entrada y la seal de
salida se la denomina seal de error del sistema; esta seal es la que acta sobre el sistema
de modo de llevar la salida a un valor deseado. En otras palabras el trmino lazo cerrado
implica el uso de accin de realimentacin negativa para reducir el error del sistema. En la
Figura I se muestra la relacin entrada-salida de un sistema de control de lazo cerrado.

Figura I Sistema de Control de Lazo Cerrado.

Un sistema de control, como se mostro en la figura anterior, cuenta de las siguientes


partes:

I. Sensor. Es quien lleva la seal de salida hasta el comparador. Es el dispositivo


que convierte la variable de salida, en otra variable manejable tal como
desplazamiento, presin, voltaje, que pueda usarse para comparar la salida con
la seal de entrada de referencia.
II. Medidor: Recibe la medida del valor de la propiedad que emite el sensor.
III. Controlador. Compara el valor real de la salida de una planta con la entrada de
referencia (valor deseado), determina la desviacin o error, y produce una
seal de control que reducir la desviacin a cero o a un valor pequeo. La
manera en la cual el controlador automtico produce la seal de control se
denomina accin de control.
Sin embargo, si se hace necesario el uso de una determinada fuerza para modificar el
estado de una vlvula, por ejemplo, se requerir de un transductor y de un actuador.

i. Transductor. Es un dispositivo que convierte una forma de energa en otra. Por


ejemplo, unos de los transductores ms comunes en las aplicaciones de los
sistemas de control es el potencimetro, que convierte una posicin mecnica
en tensin.
ii. Regulador o actuador. Es un dispositivo de potencia que produce la seal de
entrada a la planta de acuerdo con la seal o accin de control, a fin de que la
seal de salida se aproxime a la seal de entrada de referencia. Es el
componente fsico que permite ajustar o regular la variable que se inyecta a la
planta para corregir o mejorar la variable de salida.

Idealmente, los sensores deben de estar en lnea, para medir las propiedades fsicas del
cultivo, estos sensores deben ser esterilizables para asegurar la asepsia del proceso. Sin
embargo, no todas las mediciones pueden ser hechas en lnea, algunas medidas fuera de
lnea, requieren de tomar muestras y analizarlas, lo cual consume tiempo y hace lenta la
respuesta de control (biomasa, sustrato, metabolitos, etc.).

Los sensores de propiedades fsicas pueden ser monitoreados continuamente, y son la


temperatura, presin, poder de agitacin, velocidad de agitacin, viscosidad del medio,
flujo y concentracin de gases y fluidos, espuma, volumen y masa. Para la medicin de las
propiedades qumicas se utilizan electrodos esterilizables al vapor, de pH, redox, oxgeno
disuelto y CO2 (Vase Cuadro I).

Cuadro I Instrumentos de medicin en lnea.


En la Figura II, podemos observar los principales instrumentos de medicin en un
biorreactor.

Figura II Instrumentacin de un biorreactor.

Medicin y control de pH.

El pH es la concentracin (en rigor actividad) de iones H; En 1909, el dans Sren


Srensen propuso una alternativa para expresar la concentracin de H+. Srensen sugiri
que se empleara una trasformacin logartmica de la concentracin molar de protones a la
que llam pH y defini como:

1
= = [ + ]
[ + ]

Existen dos mtodos para medir el pH de una sustancia, el colorimtrico y el


potenciomtrico.

I. Mtodo Colorimtrico. Es el ms sencillo pero no el ms exacto. Est basado en


el uso de sustancias llamadas indicadores. Los indicadores de pH son cidos,
bases o sales orgnicas, cuyas molculas tienen un color cuando estn
disociadas y otro cuando estn protonadas.
II. Mtodo Potenciomtrico. Se basa en la medicin de la diferencia de potencial
generado en las llamadas pilas celdas de concentracin. Al introducir un
trozo de metal en una solucin del mismo, los iones metlicos de la solucin
tiende a depositarse en el slido y los tomos del slido tienden a pasar a la
solucin. Por el mismo diseo del sistema, la concentracin del metal en el
slido y la solucin son diferentes y por tal motivo, la cantidad de tomos que
entran y salen de la solucin es diferente, esto genera una diferencia de
potencial que es proporcional a la diferencia de concentracin. Midiendo las
diferencias de potencial en soluciones de concentracin conocida, se calibra el
aparato de medicin para despus determinar la concentracin de la solucin
problema, midiendo su potencial. No obstante, nos basaremos en este ltimo
mtodo para determinar el pH.
Para realizar la medicin de pH se emplean bsicamente dos tipos de sensores, los
sensores electroqumicos y los sensores pticos.

i. Sensores electroqumicos: Transducen la actividad qumica del ion de


hidrogeno en una seal elctrica. Los componentes bsicos de un sensor
electroqumico son un electrodo de trabajo (que detecta), un contra electrodo
y generalmente tambin un electrodo de referencia. Dentro de estos se
encuentran:
a. Electrodos de Ion Selectivo (ISE). Son electrodos que poseen una
membrana sensible, selectiva a un ion en particular. Cuando se
sumerge el electrodo selectivo en la muestra, en su membrana se
desarrolla un potencial debido a una reaccin selectiva y espontnea.
Para medir este potencial, adems del electrodo selectivo indicador, es
necesario un electrodo de referencia (Vase Anexo B).
b. Transistor de Efecto Campo Sensible a Iones (ISFET). Se trata de un
sensor que emplea un transistor MOSFET (Metal Oxide
Semiconductor Field Effect Transistor) al que se le ha modificado la
estructura de la puerta.
ii. Sensores pticos.
a. Resonancia Magntica Nuclear (RMN o NMR). Estudia los
ncleos atmicos alinendolos con un campo magntico
constante para posteriormente perturbar este alineamiento
mediante una onda de radiofrecuencia. Esta tcnica ha sido
ampliamente usada durante aos para medir el valor de pH en
sistemas biolgicos.
b. Espectroscopia del Infrarrojo Cercano. La radiacin infrarroja se
absorbe de diferente forma en funcin de la composicin qumica
y la estructura del material. Es posible utilizar esta tcnica
para medir el pH in vivo basndose en que el espectro de
absorcin de las protenas presentes en el tejido cambia en
funcin del valor de pH.

Medicin y control de temperatura.

El control de temperatura en un biorreactor es muy importante dados los procesos


qumicos y biolgicos que se llevan a cabo en su interior. Los sensores ms utilizados para
medir la temperatura son: Detectores Resistivos de Temperatura (RTD), termopares, y
termistores.

i. Detectores Resistivos de Temperatura (RTD). Son sensores de temperatura


que contienen una resistencia que cambia su valor conforme a la temperatura.
En un conductor, el nmero de electrones disponibles por la conduccin no
cambia apreciablemente con la temperatura. Pero si esta aumenta, las
vibraciones de los tomos alrededor de sus posiciones de equilibrio son
mayores, esto implica un coeficiente de temperatura positivo, es decir, un
aumento de la resistencia con la temperatura.
ii. Termopares. Es un sensor para medir la temperatura. Se compone de dos
metales diferentes, unidos en un extremo. Cuando la unin de los dos metales
se calienta o enfra, se produce una tensin que es proporcional a la
temperatura. Las aleaciones de termopar estn comnmente disponibles como
alambre.
iii. Termistores. Sensor que cambia su resistencia cuando la temperatura sufre un
cambio. Los sensores ms usados son los PTC y son resistencias hechas a base
de xidos de magnesio, cobalto, cobre y nquel. La principal ventaja de los
termistores es su gran cambio de salida por grado de cambio de temperatura
lo cual permite detectar cambios muy pequeos de temperatura.

Medicin y control de oxgeno disuelto.

Si es consumido ms oxgeno que el que se produce y/o capta en el sistema, la


concentracin de O2 caer, pudiendo alcanzar niveles por debajo de los necesarios para la
vida de muchos organismos.

La insuficiencia de O.D puede causar:

a. Muerte prematura del microorganismo.


b. Crecimiento lento.

La concentracin de O.D vara en funcin de la temperatura. Normalmente se utilizan dos


escalas de medicin: partes por milln (ppm) o porcentaje de saturacin (%).

Se pueden emplear dos tipos de sensor:

i. Sensor polarogrfico (Debe de aplicarse un voltaje para efectuar la medida).


ii. Sensor galvnico (La propia clula genera el voltaje suficiente para efectuar la
medida).

Los electrodos de oxigeno disuelto consisten en una clula de dos electrodos, una
membrana permeable al oxgeno y un electrolito. Los electrodos son un nodo de plata y
un ctodo de un metal noble, generalmente platino. Un electrolito, conteniendo KCl, debe
de unir al ctodo y el nodo. El oxigeno se difunde a travs de la membrana permeable
hacia el interior del electrodo donde se producen las siguientes reacciones:

2 + 22 + 4 4 ()

4 + 4 4 + 4 ()

Figura III Esquema de electrodo de O.D.


Medicin y control de espuma.

La formacin de espuma representa un problema serio en las fermentaciones ya que se


fomenta la contaminacin mermando el rendimiento u obstaculizando filtros.
Comnmente muchos medios de cultivo fomentan la formacin de espuma,
principalmente en los cultivos aerobios por la produccin de agentes espumantes como
protenas, polisacridos y cidos grasos. El control puede realizarse por mtodos
mecnicos, qumicos o una combinacin de los dos.

a. Mtodos mecnicos. Consisten de adaptaciones de discos rotatorios montados sobre


el eje principal de agitacin. Estos dispositivos aseguran una buena eliminacin de
espuma, con la desventaja de que consumen elevadas cantidades de energa, lo cual se
refleja en un incremento en los costos de produccin.
b. Mtodos qumicos. Se realizan con la ayuda de agentes antiespumantes (Vase Anexo
A) los cuales pueden ser suministrados de forma automtica. Algunos antiespumantes
son metabolizados por los microorganismos, por lo cual pueden ser considerados
como una fuente de carbono adicional.

Flujo de espumas en mallas perforadas

Se colocan mallas metlicas transversalmente a la direccin de flujo de la espuma,


utilizando 2 3 mallas de refinamiento. En este caso, el efecto de las mallas es el de refinar
la espuma, es decir, la disminucin del tamao de burbujas e incremento de la estabilidad.

Las mallas colocadas transversalmente al flujo de la espuma hacen que sta se acelere y
alcance su mxima velocidad en el centro de las mallas. El flujo cortante en los canales de
las mallas causa deformacin de las burbujas, las cuales toman una forma elipsoidal; estas
formas se hacen ms pronunciadas a medida que la espuma fluye a travs de las mallas.
Las mallas son efectivas en el refinamiento de la espuma cuando la velocidad de
deformacin generada, el tiempo de residencia y la relacin de drenaje exceden los
respectivos valores umbrales para la ruptura de las burbujas, dependiendo estos valores
de la viscosidad y tensin superficial de la solucin espumante, del tamao de las burbujas
y de la relacin entre la velocidad de deformacin actual y crtica.

Figura IV Flujo de espuma en mallas perforadas


Desestabilizacin y rompimiento de espumas por medios mecnicos.

Un rompedor mecnico de espuma utiliza un disco rotatorio para romper la espuma. En


este aparato, las burbujas se rompen por el efecto combinado de fuerzas de corte y fuerzas
de arrastre debido a la circulacin de aire causada por el movimiento del disco. Si se
colocan placas perforadas a la configuracin de disco rotatorio, la placa perforada ofrece
una restriccin al flujo de la espuma por la columna, causando una disminucin en la
retencin de lquido en la espuma y una mayor eficiencia en el rompimiento en
comparacin al sistema sin placa perforada, adems de una disminucin en el consumo de
potencia. O bien, si se sustituye la placa perforada por una placa fija que tiene slo un
orificio, la espuma colapsa por los cambios de presin a travs de la placa y por la fuerza
de corte entre el disco rotatorio y la placa fija.

Algunos tipos de rompedores de espumas (de rotor cnico, de dispersin de fluido,


agitador de dos paletas, agitador de turbina con seis aspas y de seis aspas con disco) y el
rompedor de disco rotatorio, se muestran en la Figura V.

Figura V a) Agitador rotativo de punta doblada, b) Agitador, c) Cesta centrifuga, d) Orificio.


OBJETIVO.

Objetivo General.

I. El alumno manejar los sistemas de medicin y control de variables de


operacin de biorreactores de tanques agitados, a travs de las
determinaciones en lnea de la temperatura, pH, oxgeno disuelto y
espuma.

MATERIALES.

Tabla II Material, Equipo y Reactivos.


Material Equipo Reactivos
Tanque de nitrgeno puro con Sistema de medicin y control de Solucin de NaOH al
vlvula de presin y flujo. temperatura. 0.5 N.
Vasos de precipitados de 250 Solucin de HCl al
Sistema de medicin y control de pH.
mL, 500 mL, 2000 mL. 0.5 N.
Sistema de medicin y control de oxgeno Antiespumante Mazu
Probetas de 1000 mL.
disuelto. al 10% v/v en agua.
Solucin proteica o
Mangueras de silicn. Sistema de medicin y control de espuma.
detergente.
DESARROLLO EXPERIMENTAL

Medicin y control del pH Medicin y control de la


temperatura

Establecer una velocidad de agitacin del Agregar al biorreactor 10 litros de agua a


biorreactor siguiendo las indicaciones del temperatura ambiente y establezca una
manual de operacin. velocidad de agitacin de 300 rpm.

Encender el equipo de medicin y control y


verificar que el valor de pH registrado sea el Verifique que las vlvulas del circuito de
mismo que el de la muestra tomada del circulacin del agua de enfriamiento a
biorreactor. travs de la chaqueta estn abiertas.

Ajustar el pH a un valor de 5 con una


disolucin de cido clorhdrico al 0.5 N y Encender el equipo de medicin y
establecer un Set Point de 5. control. Establezca en el controlador de
temperatura un valor de Set Point de 33C.

Acoplar el sistema de adicin de lcali.


Agregar al biorreactor 10 mL de una Encender la bomba de circulacin del
disolucin de cido clorhdrico al 0.5 N. agua y espera hasta que la temperatura
en el biorreactor alcance el Set Point.

Observe como el controlador enviar una


seal a la bomba peristltica para adicionar el
lcali. La bomba dejar de funcionar cuando
el pH alcance o sobrepase el Set Point.
Medicin del oxgeno disuelto Medicin y control de la
espuma

Agregar al biorreactor 10 L de agua a 25 C Agregar al biorreactor 10 L de agua y 2


y a una velocidad de agitacin de 300 rpm % de detergente a 25 C, a una velocidad
y un flujo de aire de 0.5 vvm. de agitacin de 250 rpm y un flujo de
aire de 0.15 vvm.

Encender el equipo y esperar 15 min, Incrementar la velocidad de agitacin


establecer el 100% del valor de saturacin. en intervalos de 50 rpm cada 10 min,
hasta llegar a 400 rpm y observe lo que
ocurre con la formacin de espuma.

Conectar un tanque de nitrgeno al


sistema de aire del biorreactor y haga pasar
un flujo que no sobrepase los 0.75 vvm. Estando a 400 rpm, incremente el flujo
de aire a 0.75 vvm, observe lo que
ocurre con la formacin de espuma.

Observe como el oxgeno disuelto baja en


el equipo de medicin. Conectar la bomba peristltica de
adicin de antiespumante y sumergir la
manguera en una solucin de
antiespumante Mazu al 10% en agua.

Cierre completamente el flujo de nitrgeno


y observe como el valor de oxgeno
disuelto volver a la normalidad. Elija una velocidad de agitacin y un
flujo de aire (alta formacin de espuma),
con objeto que el controlador envi la
seal de adicin de antiespumante.
RESULTADOS

A continuacin se muestra la disposicin para cada uno de los sistemas de medicin y


control empleados.

1. Medicin y control del pH.


Electrodo
de pH

Medidor y controlador
de pH
Actuador
(bomba)

Imagen I. Sistema de medicin y control del pH (Laboratorio).

2. Medicin y control de la temperatura.

Varilla metlica
(sensor)

Medidor y controlador
de temperatura

Bomba de agua
(actuador)

Imagen II. Sistema de medicin y control de la temperatura (Laboratorio).


3. Medicin del oxgeno disuelto.

Electrodo de oxgeno
disuelto (sensor)

Medidor de oxgeno
disuelto

Imagen III. Sistema de medicin y control del oxgeno disuelto (Laboratorio).

4. Medicin y control de la espuma.

Electrodo Medidor de espuma


(multmetro)
(sensor)

Antiespumante

Imagen IV. Sistema de medicin y control de espuma (Laboratorio).


ANLISIS DE RESULTADOS

Debido a la gran importancia de mantener los diversos parmetros controlados en


una biorreaccion, resulta una gran necesidad saber que los dispositivos que
contamos para realizar esta tarea sean adecuados y nos den la certeza y confianza
de que se est llevando correctamente el trabajo.

En cuanto al medidor de pH estos deben contar con un tiempo de respuesta


adecuado debido a la variabilidad de que se puede desarrollar en el medio, siendo
necesario registrar el cambio rpidamente y poder la sea al controlador y
actuador para devolverle la estabilidad al medio y poder continuar
adecuadamente, desafortunadamente el medidor controlador de pH con el que se
cuenta tiene ciertas desventajas ya que tardaba un poco en registrar el cambio
adems de que al actuar era difcil controlar el valor requerido ya que se
adicionaba mayor base de la necesaria, el medio est en constante cambio lo cual
puede generar alteraciones o retrasar la biorreaccion as como el producto de
inters, comparando nuestro medidor-controlador de pH con los siguientes
parmetros de uno utilzado en lnea hay cierta incertidumbre y error
considerables.

El antiespumante permite mantener a raya el nivel de espuma que se genera en la


biorreaccion debido a los microorganismos, el antiespumante ms usado es el
MAZU y durante el proceso experimental cumpli con su funcin, siendo su
desempeo adecuado ya que degradaba la espuma al contacto y se mantena
presente en el medio, no se prob en un medio pero sus caractersticas deberan
permitir que este no reaccione o produzca un cambio brusco en el ambiente
modificando ciertos parmetros

El oxgeno disuelto presente en el medio permitir las acciones metablicas en el


medio o una homogeneidad adecuada este sistema no introducir aire
contaminado entonces las precauciones a tomar en este sistema son extremas
La velocidad de respuesta del aparato debe ser rpida el del laboratorio tardaba en
dar el resultado o dar el cambio debido tal vez a lo antiguo de los aparatos

La temperatura que se controlaba con el paso de un fluido que realiza la


trasferencia de calor por un gradiente de temperaturas

El controlador de temperatura con el que cuenta en el laboratorio no es tan


moderno lo cual generara variaciones y un tiempo de respuesta algo tardado, la
transferencia de calor a travs de los intercambiadores de calor tambin es
tardado y puede generar algunas alteraciones al producto final.

CONCLUSIONES

Las conclusiones planteadas conforme a la experimentacin, anlisis y resultados


obtenidos en la prctica son los siguientes:

La Temperatura, es una de las variables de estado de mayor repercusin dentro de


los biorreactores, por consiguiente, es de gran importancia su medicin y control.

Existen diversos aparatos que permiten medir y controlar los parmetros de una
biorreaccin, la eleccin de estos se har con forme al presupuesto que se tenga,
as como a la precisin que se desee tener.

La contaminacin de una Biorreaccin es sumamente sencilla, as como los


cambios en el ambiente interno debido a las reacciones del microorganismo,
entonces controlando los diversos parmetros en un biorreactor asegura que el
proceso se mantenga en ptimas condiciones y se obtenga el producto final.
Los equipos empleados en el laboratorio son algo antiguos, por lo cual no tenemos
la certeza de que tan confiables son los valores que nos arrojan, adems de no
saber si se ha llevado a cabo su mantenimiento.

El material del que este hecho el sensor (generalmente metales) influyen en la


medida que tomemos y en la precisin de la misma, tenemos al Platino como el
mejor material para estos sensores.

REFERENCIAS CONSULTADAS

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http://www.bioquimica.dogsleep.net/Teoria/archivos/Unidad24.pdf

ANEXOS

I. Anexo A. Antiespumante Mazu (Propiedades).

i. Nombre qumico: Polydimethyl xii. Reactividad: Desconocida.


siloxane polymer with silica.
xiii. Estabilidad qumica: Producto
ii. Porcentaje en peso: 1-5 %. estable.

iii. Estado: Lquido. xiv. Posibilidad de reacciones


peligrosas: La polimerizacin
iv. Aspecto: Translcido. peligrosa no ocurrir.
v. Olor: Suave. xv. Condiciones que deben de
vi. Solubilidad en agua: Insoluble. evitarse: Calor excesivo y fuentes
de ignicin.
vii. Densidad de vapor: >1.
xvi. Materiales incompatibles: Evite el
viii. Viscosidad: 1500 Centipoise. contacto con agentes oxidantes
fuertes.
ix. pH: No disponible.
xvii. Productos de descomposicin
x. Densidad relativa: 1.01 (25 C). peligrosas: Dixido de carbono,
monxido de carbono, dixido de
xi. Punto de inflamacin: 200 C.
silicio, formaldehdo.
II. Anexo B.
a. Electrodos de Ion Selectivo (ISE).
b. Transistor de Efecto Campo Sensible a Iones (ISFET).

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