INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA

CURSO PRCTICO DE MTODOS DE ANLISIS

NOMBRE DE LA PRACTICA: Separacin de una mezcla de dos aminocidos

por cromatografa por intercambio inico.

ALUMNA: PREZ GARDUO PAOLA REMEDIOS

GRUPO: 41V1

SECCIN: 2

PROFESOR: Guillermina Rosas Sandoval

FECHA DE ENTREGA: 26 DE NOVIEMBRE DEL 2015

OBJETIVOS
 Emplear la tcnica de intercambio inico para la separacin de dos aminocidos.

Comprobar la separacin mediante una reaccin colorida y el perfil de elucin.

Objetivo personal. Mediante la separacin de la mezcla de aminocidos mencionar que

tipo de intercambiador inico se us para lograr su separacin si se conoce las cargas de
dichos aminocidos.

RESULTADOS
La siguiente tabla se obtuvo de la recoleccin de cada aminocido en fracciones de 3 mL donde se revelo previamente
con Ninhidrina al 0.2 % para poder leerse a las longitudes indicadas en el manual.

Tabla 1. Separacin de Prolina e Histidina

Volumen de elucin (ml) A400 A570 Volumen de elucin (mL) A400 A570
3 0.054 0.061 63 0.228 0.181
6 0.009 0.009 66 0.089 0.041
9 0.017 0.011 69 0.579 0.523
12 0.29 0.046 72 0.889 0.849
15 0.546 0.083 75 1.045 1.024
18 0.706 0.114 78 1.154 1.148
21 0.709 0.114 81 0.994 0.944
24 0.634 0.099 84 1.019 0.992
27 0.543 0.086 87 1.075 1.036
30 0.521 0.113 90 0.717 0.637
33 0.4 0.084 93 0.695 0.62
36 0.366 0.112 96 0.447 0.388
39 0.268 0.076 99 0.344 0.276
42 0.251 0.092 102 0.286 0.239
45 0.182 0.071 105 0.203 0.153
48 0.187 0.092 108 0.114 0.093
51 0.151 0.09 111 0.137 0.098
54 0.184 0.12 114 0.1 0.064
57 0.185 0.132 117 0.054 0.042
60 0.174 0.141 120 0.082 0.056
A partir de los datos de absorbancia obtenidos en las fracciones de 3 mL de cada tubo, se procedi
a construir el siguiente perfil de elucin:
A400 A570

Figura 1. Perfil de elucin de los aminocidos Histidina y Prolina a 400 y 570 nm. La lnea gruesa
representa la absorbancia a 400 nm y la lnea delgada la absorbancia de 570 nm.

Nota: la resina que se uso fue Amberlita IRC-50, un intercambiador catinico dbil constituido por
grupo carboxlico siendo el H+ el ion mvil que podr ser intercambiado.

a) Cul de los aminocidos eluyo primero? Explique porqu.

Prolina fue el aminocido que eluyo primero ya que a un pH de regulador de citratos de 5.2 su
carga neta es igual a 0 por lo que eluye con la fase mvil, mientas que la histidina que estaba en la
muestra por presentar una carga positiva se intercambia con el ion mvil del intercambiador
finalmente unindose al ion fijo por lo que queda en la resina.

b) Cul es la importancia de regular la velocidad de elucin, que pasa a altas y a bajas

velocidades?

La velocidad influye directamente en la separacin ya que a una velocidad ms alta hay menos
probabilidad que los analitos de la mezcla se separen correctamente, por lo que sera demasiado
deficiente, sin embargo a velocidades bajas puede producir que el analito que este
interaccionando con la resina es decir nuestra fase estacionaria no eluya, o que eluya muy poco,
adems de que el procesos sera ms tardado, por esa razn es necesario tener un control en la
velocidad de elucin.

c) Empleando las formas de los aminocidos y del grupo funcional intercambiador, haga un
esquema de cmo se produjo la separacin. Considere el cambio del pH en el medio.
El proceso fue el siguiente:
Datos Extras Histidina Prolina

Concentracin (mg/mL) 8 2

pKa1 1.80 1.95

PKa2 9.33 10.64

pKa3 6.04 ------

pI 7.68 6.29
DISCUSIN
CONCLUSIN
BIBLIOGRAFA
QUMICA ANALTICA, 6ta edicin, Gary D.Christian, 2009, Editorial McGraw Hill, pg. 622-624