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VALIDACIN Y CLCULO DE INCERTIDUMBRE PARA EL ENSAYO DE

NITRITOS Y NITRATOS EN EL LABORATORIO DE QUMICA


AMBIENTAL DE LA UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FLOR ANGELA HENAO GOMEZ

CDIGO 1130599796

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FACULTAD DE TECNOLOGA

QUMICA INDUSTRIAL

PEREIRA

2014
VALIDACIN Y CLCULO DE INCERTIDUMBRE PARA EL ENSAYO DE
NITRITOS Y NITRATOS EN EL LABORATORIO DE QUMICA AMBIENTAL DE
LA UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FLOR ANGELA HENAO GOMEZ

Trabajo de Grado para optar al ttulo de Qumica Industrial

DIRECTORA DEL PROYECTO

LINA MARA GARCA MORENO

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE PEREIRA

FACULTAD DE TECNOLOGA

QUMICA INDUSTRIAL

PEREIRA,

2014

2
Nota de aceptacin:

______________________
______________________
______________________
______________________
______________________

________________________________
Firma del presidente del jurado

_________________________________
Firma del jurado

_________________________________
Firma del jurado

3
DEDICATORIA

Dedico este trabajo de investigacin a quien me ha enseado a amar


con determinacin.

A mis padres, por la vida, por sus magnnimos esfuerzos en mi


educacin, en general en toda mi formacin,

A quienes siempre han brindado su apoyo en silencio, con voces


gritando un abrazo y una propagacin de fuerza, tensando la fortaleza
humana, tan propiamente.

4
Agradecimientos

Agradecimientos al Laboratorio de Qumica Ambiental de la Universidad


Tecnolgica de Pereira, por haberme abierto de las puertas de esta fuente de
conocimiento.

A todas aquellas personas que de uno u otro motivo han contribuido para
sacar esta enorme empresa adelante, como lo es poder llegar a la cima de esta
larga carrera con obstculos que es la educacin.

Agradezco a la Suprema Personalidad de Dios, por dejar siempre


prendida esa luz de esperanza y seguridad para este largo camino de vueltas y
revueltas.

5
Llegar una poca en la que una investigacin diligente
y prolongada sacar a la luz cosas que hoy estn
ocultas. La vida de una sola persona, aunque estuviera
toda ella dedicada al cielo, sera insuficiente para
investigar una materia tan vasta... Por lo tanto este
conocimiento slo se podr desarrollar a lo largo de
sucesivas edades. Llegar una poca en la que
nuestros descendientes se asombrarn de que
ignorramos cosas que para ellos son tan claras...
Muchos son los descubrimientos reservados para las
pocas futuras, cuando se haya borrado el recuerdo de
nosotros. Nuestro universo sera una cosa muy limitada
si no ofreciera a cada poca algo que investigar... La
naturaleza no revela sus misterios de una vez para
siempre.

(SENECA, Cuestiones naturales)

6
TABLA DE CONTENIDO

LISTA DE ANEXOS ................................................................................................. 9


LISTA DE ILUSTRACIONES ............................................................................... 100
LISTA DE TABLAS .............................................................................................. 101
RESUMEN ............................................................................................................. 12
ABSTRAC .............................................................................................................. 13
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................. 14
2. JUSTIFICACIN ............................................................................................. 16
3. OBJETIVOS.................................................................................................... 18
3.1. GENERAL................................................................................................. 18
3.2. ESPECFICOS .......................................................................................... 18
4. INTRODUCCIN ............................................................................................ 19
5. MARCO DE REFERENCIA ............................................................................ 20
5.1. DEFINICIONES ........................................................................................... 20
5.2. ESTADSTICA BSICA ............................................................................... 26
5.3. ANLISIS QUMICOS ................................................................................. 28
5.4. DESAFOS DE LA METROLOGA QUMICA .............................................. 28
5.5. TRAZABILIDAD ........................................................................................... 31
5.5.1. Elementos de la trazabilidad ................................................................. 31
5.5.2. Poltica sobre la Trazabilidad de las mediciones .................................. 32
5.5.3. Trazabilidad de las pruebas qumicas y biolgicas ............................... 32
5.6. RAZONES QUE JUSTIFICAN LA VALIDACION DE METODOS
ANALITICOS ...................................................................................................... 34
5.7. MTODOS SUCEPTIBLES DE SER VALIDADOS ..................................... 34
5.8. FASES EN EL DESARROLLO DE UN MTODO ANALTICO Y
CRITERIOS DE VALIDACIN...................................................................... 355
5.8.1. Definicin De Las Caractersticas De Prctica. .................................. 355
5.8.2. Caractersticas De Fiabilidad .............................................................. 355
5.9. DOCUMENTACIN DE LA VALIDACIN ............................................... 36
5.10. PROTOCOLO DE VALIDACIN ............................................................... 37

7
5.11. REALIZACION DE LA VALIDACION Y EVALUACION DE LOS
RESULTADOS ................................................................................................... 37
5.12. CERTIFICADO DE VALIDACIN ............................................................. 38
5.13. ARCHIVO .................................................................................................. 38
5.14. INCERTIDUMBRE .................................................................................... 38
6. METODOLOGIA .............................................................................................. 400
6.1 Revisin de metodologas analticas .......................................................... 400
6.1.1 Documentacin del ensayo de Nitrito .................................................. 400
6.1.2 Procedimiento Estndar de Operacin SOP. ....................................... 400
6.2 Elaboracin de matriz AMEF ...................................................................... 400
6.3 Definicin de los parmetros ...................................................................... 400
6.4 Ejecucin de actividades analticas: ........................................................... 400
6.4.1 Induccin a la actividad analtica, ........................................................ 400
6.4.2 Recoleccin, preparacin de muestras ................................................ 400
6.5 Procesamiento de datos: ............................................................................ 400
6.6 Anlisis de los resultados: .......................................................................... 411
7. RESULTADOS................................................................................................... 42
8. CONCLUSIONES .............................................................................................. 43
9. RECOMENDACIONES ...................................................................................... 44
10. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................. 45

8
LISTA DE ANEXOS

Anexo A . Puntos crticos del ensayo de Nitrito. ................................................... 46


Anexo B. AMEF Nitritos ....................................................................................... 48
Anexo C. PLAN DE VALIDACIN DEL ENSAYO DE NITRITO MEDIANTE EL
MTODO COLORIMETRICO. 4500 NO2- B. Standard Methods for the
examination of water and wastewater (DE 097)..................................................... 53
Anexo D. Resultados Validacin Nitritos. ............................................................... 59
Anexo E. Estimacin de La incertidumbre de medicin de Nitritos. .................... 691
Anexo F. Trazabilidad del ensayo de Nitritos ....................................................... 835
Anexo G. Puntos crticos del ensayo de Nitratos. .................................................. 87
Anexo H. AMEF Nitratos ........................................................................................ 90
Anexo I. PLAN DE VALIDACIN DEL ENSAYO DE NITRATOS MEDIANTE EL
MTODO DE ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA. 4500 NO3- B.
Standard Methods for the examination of water and wastewater (DE 097). .......... 93
Anexo J. Resultados Validacin Nitratos. .............................................................. 99
Anexo K. Estimacin de La incertidumbre de medicin de Nitratos. ................... 113

9
LISTA DE ILUSTRACIONES
Ilustracin 1 Ciclo del Nitrgeno. Tomado de (Romero) ........................................ 15
Ilustracin 2 Diagrama de Flujo de Validacion ....................................................... 36
Ilustracin 3 Diagrama Estimacion de la Incertidumbre ......................................... 39
Ilustracin 4 Diagrama de puntos criticos del ensayo de Nitritos ........................... 46
Ilustracin 5.Reaccion de la determinacion de Nitritos .......................................... 53
Ilustracin 6. Fuentes que aportan incertidumbre para el metodo de Nitritos ........ 72
Ilustracin 7 Contribuciones a la incertidumbre del analisis de Nitritos .................. 85
Ilustracin 8. Etapas del ensayo de Nitritos ........................................................... 85
Ilustracin 9 Diagrama de puntos criticos del ensayo de Nitratos ......................... 87
Ilustracin 10 Curva de Calibracin para determinar el rango Lineal de Nitratos.853
Ilustracin 11 Curva de Calibracin Final de Nitratos. ........................................ 904
Ilustracin 12 Fuentes que aportan incertidumbre para el metodo de Nitratos. ... 108
Ilustracin 13 Contribuciones a la incertidumbre del analisis de Nitratos ............ 111
Ilustracin 14. Etapas del ensayo de Nitratos ...................................................... 113

10
LISTA DE TABLAS

Tabla 1. Tabla de resultados de la validacin de Nitritos y Nitratos ....................... 42


Tabla 2. Reactivos (Nitritos) ................................................................................... 54
Tabla 3. Vidrios y Materiales (Nitritos) ................................................................... 54
Tabla 4. Criterios de aceptacion del metodo de Nitritos ......................................... 56
Tabla 5. Parmetros caractersticos para evaluar el mtodo de Nitritos..57
Tabla 6. Resultados patron 0,01mg N-NO2-/L (corrida 1)....................................... 59
Tabla 7. Resultados patrn 0,02mg N-NO2-/L (corrida 1) ...................................... 59
Tabla 8. Resultados patron 0,01mg N-NO2-/L (corrida 2) ...................................... 60
Tabla 9. Resultados patron 0,02mg N-NO2-/L (corrida 2). ..................................... 60
Tabla 10. Resultados estandar 0,02mg N-NO2-/L ................................................. 62
Tabla 11. Resulado de los estandares durante los siete dias de validacion. . ..... 903
Tabla 12.Consolidado de la validacion del ensayo de Nitritos ............................... 64
Tabla 13. Datos obtenidos bajo condiciones de repetibilidad intermedia ............... 65
Tabla 14. Datos obtenidos bajo condiciones de reproducibilidad .......................... 66
Tabla 15. Resultados obtenidos de los % de recuperacion de las muestras ......... 66
Tabla 16. Recopilacion de los resultados para la elaboracion de las cartas de
control .................................................................................................................... 69
Tabla 17.Incertidumbre estandar de los atomos de Na, N y O ............................. 76
Tabla 18 Datos para construir la curva de calibracion de Nitratos .... 78
Tabla 19.Datos para determinar el rango Lineal del metodo de Nitratos ............... 93
Tabla 20. Equipos (Nitratos) .................................................................................. 94
Tabla 21. Reactivos (Nitratos)................................................................................ 95
Tabla 22. Vidrios y Materiales (Nitratos) ................................................................ 95
Tabla 23. Criterios de aceptacion del metodo de Nitratos ..................................... 97
Tabla 24. Parmetros caractersticos para evaluar el mtodo deNitratos98
Tabla 25. Resultados patron 0,2mg N-NO3-/L para LC y LD .................................. 99
Tabla 26. Resultados estandar 0,2mg N-NO3-/L ................................................. 100
Tabla 27. Resultado de los estandares durante los siete dias de validacion. . .... 101
Tabla 28. Resultado de las muestras durante la validacion ................................. 102
Tabla 29. Consolidado de datos de la validacion ................................................. 102
Tabla 30. Datos obtenidos bajo condiciones de repetibilidad intermedia ............. 104
Tabla 31. Datos obtenidos bajo condiciones de reproducibilidad .................... 15105
Tabla 32. Resultados obtenidos de los % de recuperacion de las muestras ....... 105
Tabla 33. Recopilacion de los resultados para la elaboracion de las cartas de
control .................................................................................................................. 106
Tabla 34. Fuentes de incertidumbre para el analisis de Nitratos ......................... 107

11
RESUMEN

Para evaluar la calidad del agua, los nitratos y nitritos presentes en ella, indican el
grado de afectacin del lquido, con su presencia se modifican los procesos
qumicos y biolgicos que normalmente ocurren en las aguas naturales, lo que
trae consigo algunos efectos perjudiciales para los seres humanos tanto como
para otras especies.

El presente trabajo tiene como propsito realizar una revisin del protocolo
utilizado para la validacin de los mtodos analticos para la determinacin de
nitratos y nitritos en aguas naturales, mediante espectrometra ultravioleta-visible
(UV/VIS). Para validar estas tcnicas fue necesario establecer una evidencia
documental para el Laboratorio de Qumica Ambiental de la Universidad
Tecnolgica de Pereira.

Este trabajo tiene como objetivo general el Validar el clculo de incertidumbre,


determinar la trazabilidad para los ensayos de nitritos y nitratos en el Laboratorio
de Qumica Ambiental de la Universidad Tecnolgica de Pereira. En lo especfico:
Validar los ensayos de nitritos y nitratos a travs de la estimacin de los
parmetros caractersticos del ensayo, Estimar la incertidumbre de la medicin,
determinar la trazabilidad de los datos. En su metodologa este trabajo tuvo como
sus pasos la revisin de las metodologas analticas, en el ensayo de nitrito y
nitrato, la definicin de sus parmetros, la ejecucin de las actividades analticas,
el procesamiento de los datos, y el anlisis de los resultados para unas
conclusiones.

Los criterios utilizados que permiten obtener un alto grado de confiabilidad de los
datos generados, fueron uniformes y consistentes.

Tambin se estim la incertidumbre de medicin de la trazabilidad en los


resultados obtenidos.

Palabras clave: Nitratos, nitritos, trazabilidad, incertidumbre, validacin,


laboratorios, qumica, ambiental.

12
ABSTRAC

To assess water quality , nitrates and nitrites present in it , indicate the degree of
involvement of the liquid, with its presence of chemical and biological processes
that normally occur in natural waters are changed, which brings some detrimental
effects human beings as well as for other species.

This paper aims to conduct a review of the protocol used for the validation of
analytical methods for the determination of nitrate and nitrite in natural water by
ultraviolet - visible spectroscopy (UV / VIS ) . To validate these techniques was
necessary to provide documentary evidence to the Environmental Chemistry
Laboratory of the Technological University of Pereira.

This work has as main objective the Validate uncertainty calculation , the
traceability tests for nitrites and nitrates in the Environmental Chemistry Laboratory
of the Technological University of Pereira. In Specific: Validate assays nitrites and
nitrates through the estimation of the characteristic parameters of the test, estimate
the measurement uncertainty , the traceability of the data. methodology in this
study was reviewing his footsteps analytical methodologies in the assay of nitrite
and nitrate, the definition of its parameters, the performance of the analytical, data
processing , and analysis of the results for conclusions .

The criteria used to allow high degree of reliability of the data generated were
uniform and consistent.

Uncertainty of measurement traceability in the results was also estimated .

Keywords: nitrates, nitrites, traceability, uncertainty, validation, laboratory,


chemical, environmental.

13
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Los compuestos de nitrgeno se encuentran presentes y ampliamente distribuidos


en el ambiente, entre las variedades ms importantes que estn en el vital lquido,
H2O.Estos compuestos existen en diferentes estados de oxidacin, sin embargo,
en algunos sistemas naturales las principales formas son: NO3- , dixido de
nitrgeno NO2, nitrgeno molecular N2, amoniaco NH3, Nitrgeno Orgnico, xido
nitroso N2O3 y xido ntrico N2O5, intercambiables unos en otras y relacionadas
entre s como puede verse en el ciclo del nitrgeno que se muestra en la
Ilustracin 11

Si en una muestra se halla una alta concentracin de nitrgeno orgnico, lo cual


indica una polucin reciente por materia orgnica y representa un riesgo potencial
para la salud; por el contrario si se encuentra un alto contenido de nitratos esto
indica que la carga contaminante ha logrado estabilizarse, permitiendo que el agua
no presente riesgo alguno. Es en este sentido que la determinacin de
compuestos de nitrgeno se ha utilizado como un indicativo de contaminacin por
materia orgnica en aguas, tras la ausencia de pruebas bacteriolgicas que son
ms seguras.

Los nitritos presentan baja estabilidad, estos se oxidan fcilmente o se reducen, es


por esta razn que se presentan en menor concentracin en cuerpos de agua2.

En condiciones anaerbicas ocurre el proceso de denitrificacin mediante el cual


los nitratos se reducen hasta amoniaco. El exceso de nitratos y amonio en los
cuerpos de agua ocasiona eutrofizacin. Por otro lado, los nitratos formados en
exceso pueden ser transportados por percolacin a las aguas subterrneas.

Los nitratos descargados en los cuerpos de agua pueden oxidar la materia


orgnica produciendo N2 y CO2 y disminuyendo as la demanda qumica de
oxgeno (DBO) del agua. A su vez, el amonio, puede reaccionar con el oxgeno
disuelto para formar nitratos, aumentando la DBO del agua. El proceso de
nitrificacin transforma bicarbonatos en cido carbnico con lo cual reduce la
alcalinidad y el pH del agua.

1
Romero J ACUIQUIMICA: Anlisis qumico del agua Pg.73-85
2
RODIER, JAnlisis de Aguas: aguas natrurales, aguas residuales, agua de mar .Barcelona,
1981.(Rodier, 1981)

14
Ilustracin 1 Ciclo del Nitrgeno. Tomado de (Romero)

Lo anteriormente planteado seala claramente la necesidad de conocer las


concentraciones de los diferentes compuestos de nitrgeno en programas de
control de la contaminacin en los cuerpos de agua. Es debido a la importancia de
los nitratos y nitritos en el agua que el Laboratorio Ambiental de la Universidad
Tecnolgica de Pereira ha puesto a disposicin de la comunidad de la regin, el
soporte tcnico y logstico para la determinacin de nitratos y nitritos. En este
sentido es necesario recordar que el laboratorio asegura su competencia tcnica a
travs del mantenimiento y mejora de su sistema de calidad bajo la noma NTC
ISO 17025:2005, la cual trata de los Requisitos generales para la competencia
tcnica de laboratorios de ensayo y calibracin.

Es en este sentido que se busca realizar la validacin, calculo de incertidumbre y


determinacin de la trazabilidad para los ensayos de nitritos y nitratos en el
Laboratorio Ambiental de la UTP.

15
2. JUSTIFICACIN
Las mediciones en general y las mediciones analticas en particular, se utilizan
particularmente para tomar decisiones de diferentes tipos. Uno de ellos es la
relacin compra/venta o aceptacin/rechazo. La importancia de estas mediciones
radica en que deben ser realizadas de una manera confiable, lo cual no siempre
es evidente. El objetivo de la validacin de mtodos de medicin es el
establecimiento de una evidencia objetiva, documentada, que muestre y
demuestre con un alto grado de probabilidad que el mtodo utilizado es lo
suficientemente fiable para producir el resultado previsto dentro de los intervalos
definidos. Las organizaciones que realizan mediciones analticas deben tener
bien definido un sistema de control de calidad y los procedimientos de
aseguramiento de calidad3.

En este sentido la norma ISO/IEC 170254 entre sus elementos menciona:

5.4.5.1 la validacin es la confirmacin mediante examen y la aportacin de


evidencias objetivas que demuestren el cumplimiento de ciertos requisitos para el
uso especfico previsto.

5.4.5.2. el laboratorio debe validar los mtodos no normalizados, los mtodos


diseados/desarrollados internamente, los mtodos normalizados, utilizados fuera
de su campo de aplicacin previsto, y las ampliaciones y , modificaciones de
mtodos normalizados, con el fin de comprobar que son apropiados para el uso
previsto. La validacin debe ser todo lo extensa que sea necesaria para atender
las necesidades de la aplicacin o campo de aplicacin en cuestin. El laboratorio
debe registrar los resultados obtenidos, el procedimiento de validacin utilizado y
una declaracin sobre la idoneidad del mtodo para el uso que se pretende hacer
del mismo.

5.4.5.3. El rango y la exactitud de los valores que se pueden obtener con los
mtodos validados (por ejemplo incertidumbre de los resultados, lmite de
deteccin, selectividad del mtodo, linealidad, lmite de respetabilidad y/o
reproducibilidad, robustez frente a influencias externas y/o sensibilidad cruzada
frente a interferencias de la matriz de muestra/objeto de ensayo), evaluados para
su uso previsto, deben ser los adecuados para satisfacer las necesidades de los
clientes.

Segn lo planteado hasta ahora y teniendo en cuenta que el Laboratorio de


Qumica Ambiental de la Universidad Tecnolgica de Pereira se encuentra
acreditado por el Instituto de Hidrologa, meteorologa y Estudios Ambientales

3
Eurachem Guide The fitness for Purpose of Analytical Methods PP 1998 (Eurachem Guide,
1998)
4
Icontec, Norma Tcnica NTC-ISO/IEC colombiana 17025: Requisitos generales para la
competencia de los laboratorios de ensayo y calibracin (Icontec , 2005)

16
IDEAM, bajo la norma planteada (Icontec , 2005) y en coherencia con la filosofa
de continuo mejoramiento adoptada por el laboratorio, segn la demanda de los
usuarios se requiere ampliar el alcance de dicha acreditacin, cubriendo el
ensayo de nitritos y nitratos, para ello es necesario validar este mtodo de acuerdo
a los requerimientos de la norma (Icontec , 2005). Es en este sentido que radica la
importancia y el alcance de este trabajo.

17
3. OBJETIVOS
3.1. GENERAL

Validar y calcular la incertidumbre y trazabilidad para los ensayos de nitritos y


nitratos en el Laboratorio de Qumica Ambiental de la Universidad Tecnolgica de
Pereira.

3.2. ESPECFICOS
Validar los ensayos de nitritos y nitratos a travs de la estimacin de los
parmetros caractersticos del ensayo.
Estimar la incertidumbre de la medicin.
Determinar la trazabilidad de los datos.

18
4. INTRODUCCIN
Todas las actividades desarrolladas por una institucin como el Laboratorio de
Qumica Ambiental de la UTP deben ser sistemticas y planificadas para
responder adecuadamente a la confiabilidad de los datos entregados asegurando
su calidad. Este aseguramiento de la calidad debe describir las medidas que un
laboratorio usa para la gestin de calidad de sus operaciones. Esto se logra con
implementacin de un Sistema de Gestin de la Calidad acreditado bajo la Norma
NTC-ISO/IEC 17025.

Los requisitos generales para un laboratorio acreditado es producir datos tcnica y


legalmente vlidos, con el mayor nivel de calidad que sea posible. Es en ese
sentido es necesario que un laboratorio acreditado se asegure la calidad,
optimizando la confiabilidad del proceso de medicin. Por ello es importante
disear un protocolo para el aseguramiento de la calidad/control de calidad,
(Quality Assurance/Quality Control) QA/QC, por sus siglas en ingls. QA es un
plan del laboratorio donde se especifica como obtener los resultados con
precisin, mientras que QC son las acciones metodolgicas para que el proceso
de medicin est bajo control.

El laboratorio de Qumica Ambiental ya cuenta con un Sistema de gestin, por ello


es importante validar el clculo de incertidumbre, determinar la trazabilidad para
los ensayos de nitritos y nitratos.

Respondiendo a esta necesidad del IDEAM, en el presente trabajo se implementa


la metodologa para la determinacin de Nitratos y Nitritos en aguas, por el
Mtodo Espectrofotomtrico Emisin Ultravioleta. 4500 NO3- B. y el Mtodo
Colorimtrico. 4500 NO2- B, respectivamente.

19
5. MARCO DE REFERENCIA
5.1. DEFINICIONES5

Analito: sustancia contenida en la muestra sometida a anlisis.

Blanco: Muestra preparada para la lectura final, pero que no contiene analitos.
Puede ser un blanco de los reactivos.

Condicin de repetibilidad de medicin: Condicin de medicin, dentro de un


conjunto de condiciones, que incluye el mismo procedimiento de medicin,
mismos operadores, mismo sistema de medida, mismas condiciones de operacin
y mismo lugar, as como mediciones repetidas del mismo objeto o de un objeto
similar en un periodo corto de tiempo.

Cadena de trazabilidad: Secuencia de patrones de medida y calibraciones que


se usa para relacionar un resultado de medicin a una referencia establecida. La
cadena de trazabilidad metrolgica se usa para establecer la trazabilidad
metrolgica de un resultado de medicin.

Calibracin: Operacin que bajo condiciones especificadas, en una primera etapa


establece una relacin entre los valores de la magnitud y sus incertidumbres de
medida obtenidos de los patrones de medida y las correspondientes indicaciones
con sus incertidumbres asociadas, y, en una segunda etapa, usa esta informacin
para establecer una relacin que permita obtener un resultado de medicin a partir
de una indicacin.

Comparabilidad metrolgica de resultados de medicin: Comparabilidad de


resultados de medicin que son trazables metrolgicamente a la misma referencia

Condicin de precisin intermedia de medicin: Condicin de medicin, dentro


de un conjunto de condiciones, que incluye el mismo procedimiento de medicin,
mismo lugar y mediciones repetidas del mismo objeto u objetos similares por un
periodo amplio de tiempo, pero que puede incluir otras condiciones que puedan
introducir variaciones.

Condicin de reproducibilidad de medicin: condicin de medicin, de un


conjunto de condiciones, que incluye diferentes lugares, operadores, sistemas de
medida y mediciones repetidas de los mismos objetos u objetos similares.

Curva de calibracin: Expresin de la relacin entre una indicacin y el valor


medido correspondiente.

5
Vocabulario Internacional de Metrologa - Conceptos fundamentales y generales, y trminos
asociados (VIM)

20
Diagrama de calibracin: Expresin grfica de la relacin entre una indicacin y
el resultado de medicin correspondiente. Un diagrama de calibracin es la banda
del plano definido por el eje de las indicaciones y el eje de los resultados de
medicin, que representa la respuesta del instrumento para medir diferentes
valores.

Exactitud de medida: Proximidad de concordancia entre valores medidos de una


magnitud que son atribuidos al mensurando. El concepto exactitud de medida no
es un valor numrico dado, si no que se dice que una medida es ms exacta
cuando ofrece una incertidumbre de medida ms pequea.

Error aleatorio: Componente del error de medida que en mediciones repetidas


vara de manera impredecible. El error aleatorio es igual a la diferencia entre el
error de medida y el error sistemtico.

Error de medida: Diferencia entre un valor medido de una magnitud y un valor de


referencia

Error sistemtico de medida: Componente del error de medida que en


mediciones repetidas permanece constante o que vara de manera predecible El
error sistemtico y sus causas pueden ser conocidas o desconocidas. Puede
aplicarse una correccin para compensar un error sistemtico de medicin
conocido. El error sistemtico de medicin es igual a la diferencia entre el error de
medida y el error aleatorio.

Estabilidad de la muestra: Es un requerimiento bsico la demostracin de la


estabilidad de la muestra y de los patrones durante el tiempo comprendido entre
su preparacin y la finalizacin del anlisis, especialmente cuando se utilizan
equipos automticos en donde las muestra pueden permanecer horas antes de
ser analizadas

Incertidumbre de medida: Parmetro que caracteriza la dispersin de los valores


atribuidos a un mensurando, con base en la informacin usada. La incertidumbre
de medida incluye componentes provenientes de efectos sistemticos, tales como
componentes asociadas a correcciones y a los valores asignados de patrones de
medida, as como a la incertidumbre intrnseca. Algunas veces no se corrigen los
efectos sistemticos y en su lugar se tratan como componentes de la
incertidumbre.

Factor de cobertura: Nmero mayor que uno por el cual se multiplica una
incertidumbre estndar combinada de medida para obtener una incertidumbre
expandida de medida. Usualmente se usa el smbolo K para el factor de cobertura

21
Fiabilidad: Capacidad de un mtodo analtico para mantener durante periodos de
tiempo apropiados los criterios fundamentales de validacin. La fiabilidad indica
las prestaciones del mtodo para uso rutinario.6

Homogeneidad de varianzas: En muchos test estadsticos es necesario probar


previamente la homogeneidad de varianzas de las muestras mediante test
especficos (f de Snedecor, CochranBarlett, Levene, etc).7

Incertidumbre de una medida: Estimacin del intervalo dentro del cual se


encuentra el valor verdadero de la cantidad medida una vez efectuadas las
correcciones debidas a errores sistemticos.8

Intervalo, rango, amplitud o recorrido: Diferencia de magnitud entre la mayor y


menor concentracin de analito que puede determinarse satisfactoriamente con
adecuada linealidad, exactitud y precisin.9

Incertidumbre estndar de medida: Incertidumbre de medida expresada como


una desviacin estndar.

Incertidumbre estndar combinada de medida: Incertidumbre estndar de


medicin obtenida a partir de resultados de medicin de las magnitudes de
entrada en un modelo de medicin.

Incertidumbre expandida de medida: Producto de una incertidumbre estndar


combinada de medida y un factor numrico mayor que uno. La incertidumbre
expandida de medicin es denominada incertidumbre total .

Incertidumbre instrumental: Componente de la incertidumbre de medida que


proviene del instrumento para medir o del sistema de medida utilizado y que se
obtiene mediante su calibracin.

Intervalo de cobertura: Intervalo que contiene el conjunto de valores verdaderos


de un mensurando con una probabilidad declarada con base en la informacin
disponible .El intervalo de cobertura no necesita estar centrado en el valor medido
de la magnitud

La especificidad se utiliza como sinnimo de la selectividad aunque debera


reservarse para aquellas situaciones donde la respuesta obtenida solo se puede
producir con una nica entidad qumica.

6
Validacin de mtodos y determinacin de la incertidumbre de la medicin: Aspectos generales
sobre la validacin de mtodos. Santiago de Chile, 2010 (Instituto de Salud Pblica, 2010)
7
IDEM
8
IDEM
9
IDEM

22
Lmite de cuantificacin: Mnima cantidad de analito que puede determinarse
cuantitativamente con una adecuada exactitud y precisin.10

Lmite de deteccin: Mnima cantidad de analito que puede ser detectado


aunque no necesariamente cuantificado con precisin y exactitud. Valor medido,
obtenido por un procedimiento de medicin determinado, por el cual la
probabilidad de declarar falsamente la ausencia de un constituyente en un material
es , dada la probabilidad de declarar falsamente su presencia

Linealidad: Capacidad del mtodo para proporcionar resultados que son


directamente (o por medio de transformaciones matemticas) proporcionales a la
concentracin del analito en la muestra dentro de un rango establecido.

Material de referencia: Material suficientemente homogneo y estable con


relacin a una o ms propiedades, usado en calibracin, en la asignacin de un
valor a otro material, o en el aseguramiento de la calidad.

Material de referencia certificado: Material de referencia acompaado por los


documentos emitidos por una autoridad, con referencia a procedimientos vlidos
para obtener un valor de la propiedad especificada con incertidumbre y
trazabilidad.

Media aritmtica: Valor de centralizacin de una muestra o poblacin. Equivale a


la suma de todas las observaciones dividida por el nmero de las mismas.

Mensurando: Magnitud propuesta para medirse. La especificacin del


mensurando requiere la descripcin del estado del fenmeno, cuerpo o sustancia
a la cual est asociada la magnitud; incluye las componentes necesarias y las
entidades qumicas involucradas. Magnitud sujeta a medicin.

Mtodo Analtico: La adaptacin especifica de una tcnica analtica para un


propsito de medicin seleccionado.

Metrologa: Campo del conocimiento que trata de las mediciones. La metrologa


incluye todos los aspectos tericos y prcticos de las mediciones,
independientemente de la incertidumbre de la medida y del campo de aplicacin.
Principio de medida: Fenmeno que sirve como base de una medicin.

Mtodo de medida: Descripcin genrica de una organizacin lgica de


operaciones usadas en una medicin.

Modelo de medida: Relacin matemtica entre todas las magnitudes que


intervienen en una medicin.

10
IDEM

23
Muestra: Producto resultante de la operacin de muestreo.

Muestra real, analtica o problema: Muestra susceptible de ser analizada. No se


refiere a muestras de patrn de calibracin o de control de calidad.

Nivel de confianza: Probabilidad de que el conjunto de los valores verdaderos de


un mensurando est contenido en un intervalo de cobertura especificado

Patrn de medida: Realizacin de la definicin de una magnitud dada, con un


valor de la magnitud y una incertidumbre de medida declarados, usado como
referencia, Un patrn de medida se usa frecuentemente como una referencia para
resultados de medicin a otras magnitudes de la misma naturaleza, y por tanto
establecen la trazabilidad metrolgica, mediante calibracin, de otros patrones de
medida, instrumentos para medir o sistemas de medida.

Patrn primario de medida: Patrn de medida para el cual el valor de la


magnitud y la incertidumbre de medida se establecen mediante el uso de un
procedimiento primario de medicin. EJEMPLO: Patrn primario para la
concentracin de cantidad de sustancia preparado por disolucin de una cantidad
de sustancia conocida de un compuesto qumico en un volumen conocido de
solucin.

Patrn secundario de medida: Patrn de medida para el cual el valor de la


magnitud y la incertidumbre de la medida son asignados mediante calibracin con
respecto a un patrn primario de medida de una magnitud de la misma naturaleza.
La relacin puede obtenerse directamente entre el patrn primario y el patrn
secundario, o involucrar un sistema de medida intermedio calibrado por el patrn
primario y asignarle un resultado de medicin al patrn secundario.

Patrn de referencia: Patrn de medida designado para la calibracin de


patrones de medida de trabajo de magnitudes de una naturaleza dada, en una
organizacin dada o en un lugar dado

Patrn de trabajo: Patrn de medida usado rutinariamente para calibrar o


verificar instrumentos para medir o sistemas de medida. Un patrn de medida de
trabajo usualmente se calibra con respecto a un patrn de medida de referencia.
Otros trminos aplicables a este concepto son patrn de verificacin o patrn de
control.

Precisin de medida: Proximidad de concordancia entre valores medidos


obtenidos por mediciones repetidas de un mismo objeto, o de objetos similares,
bajo condiciones especificadas La precisin de una medicin usualmente se
expresa en forma numrica por medidas de la imprecisin, tales como la

24
desviacin estndar, la varianza o el coeficiente de variacin bajo las condiciones
especificadas de la medicin.

Precisin intermedia de medida: Precisin de una medida bajo un conjunto de


condiciones de precisin intermedia de medicin.

Procedimiento de medicin: Descripcin detallada de una medicin de acuerdo


a uno o ms principios de medida y a un mtodo de medida dado, con base en un
modelo de medida y que incluye los clculos para obtener un incertidumbre de
medida. Un procedimiento de medicin usualmente se documenta con suficiente
detalle para que un operador pueda realizar una medicin. Un procedimiento de
medicin se denomina a veces un procedimiento de operacin estndar,
abreviado SOP.

Procedimiento de medicin de referencia: Procedimiento de medicin aceptado


para producir resultados de medicin apropiados para su uso previsto, para
evaluar la veracidad de los valores medidos obtenidos a partir de otros
procedimientos de medicin para magnitudes de la misma naturaleza o por
caracterizacin de materiales de referencia.

Recuperacin: Se define como eficacia en el rescate del analito de la matriz de la


muestra. Es un parmetro que se debe estudiar durante el desarrollo del mtodo
analtico. La recuperacin ideal es del 100%.recuperaciones mayores indican
interferencias debidas a la matriz o errores determinados que deben eliminarse;
recuperaciones menores indican perdidas del analito durante las fases de
preparacin de la muestra. Cuando la recuperacin no es satisfactoria pero es
reproducible cabe la posibilidad de utilizar el mtodo analtico empleando un factor
de correccin que compense las prdidas de analito. De esta forma no se ve
afectada la exactitud.

Relacin seal-ruido, ruido de fondo: En sistemas instrumentales es la seal


residual o lnea de base registrada con concentracin cero de analito. Es decir, es
la seal ruido que proporciona un blanco.

Replicas y repeticiones: En el presente trabajo de grado se entiende como


replicas a los anlisis sucesivos de una muestra en las mismas condiciones
utilizando el mtodo analtico completo, desde la preparacin de la muestra hasta
la medicin final del analito.

Repetibilidad de medida: Precisin de una medida bajo un conjunto


decondiciones de repetibilidad de medicin.

Reproducibilidad de medida: Precisin de una medida bajo condiciones de


reproducibilidad de medicin.

25
Resultado de medicin: Conjunto de valores de una magnitud atribuidos a un
mensurando acompaados de cualquier otra informacin relevante disponible.

Selectividad: Capacidad de un mtodo analtico para medir y/o identificar


simultnea o separadamente los analitos de inters de forma inequvoca sin
interferencias de impurezas, productos de degradacin, compuestos relacionados
u otra sustancias presentes en la matriz. Capacidad del mtodo para producir una
respuesta para el analito de inters distinguible de todas las otras respuestas de
los dems componentes de una mezcla potencialmente compleja.

Sensibilidad: Capacidad de un mtodo analtico para detectar pequeas


concentraciones de analito.

Sesgo de medida: Error sistemtico de medida o su estimado, con respecto a un


valor de referencia.

Trazabilidad metrolgica: Propiedad de un resultado de medicin por la cual el


resultado puede ser relacionado a una referencia establecida mediante una
cadena ininterrumpida y documentada de calibraciones, cada una de las cuales
contribuye a la incertidumbre de medida. La trazabilidad metrolgica por s misma
no asegura que la incertidumbre de medida es adecuada o la ausencia de
equivocaciones.

Validacin: Verificacin de que los requisitos especificados son adecuados para


un uso determinado.

Verificacin: Aporte de evidencia objetiva de que un elemento satisface requisitos


especificados, para lo cual se toma en cuenta la incertidumbre de medida.

5.2. ESTADSTICA BSICA

Para los fines de una validacin, se utilizan normalmente ciertas mediciones


estadsticas, que nos ayudan a establecer si el mtodo se encuentra dentro de un
parmetro aceptable, normalmente se determinan las siguientes:11

Media: Conocida tambin como media aritmtica o promedio, es la cantidad total


de la variable (muestra o medida) distribuida a partes iguales entre cada
observacin. En trminos matemticos, es igual a la suma de todos sus valores
dividida entre el nmero de sumandos

11
Validacin de mtodos y determinacin de la incertidumbre de la medicin: Aspectos generales
sobre la validacin de mtodos. Santiago de Chile, 2010 (Instituto de Salud Pblica, 2010)

26

=

Siendo:
=Valor de una lectura.

=numero de lecturas

Desviacin estndar (s, S): Es el promedio de lejana de los valores obtenidos


(lecturas) respecto delpromedio.


=( )
=

Siendo:
= Valor de una lectura.
= Promedio de la totalidad de lecturas.
= Numero de lecturas

Coeficiente de Variacin (CV): Desviacin estndar dividida por la media.


Tambin es conocida como desviacin estndar relativa (RSD). El coeficiente de
variacin puede ser expresado en porcentaje:


% =

Siendo:
= desviacin estndar de las lecturas.
= promedio de la totalidad de lecturas.

Varianza: Es una medida de dispersin definida como el cuadrado de la


desviacin estndar.

=( )
=

Siendo:

= Valor de una lectura.


= Promedio de la totalidad de lecturas.
= Numero de lecturas

27
5.3. ANLISIS QUMICOS

El anlisis qumico resulta ser transversal a una amplia gama de actividades con
importantes implicancias sociales y econmicas. El obtener un resultado confiable
a partir de la aplicacin de un anlisis qumico, no es una tarea trivial debido a la
dependencia del resultado con la metodologa empleada, el tipo de muestra, su
concentracin, y en algunos casos, a la necesidad de aislar al analito de la matriz
de la muestra. Finalmente, que este resultado responda adecuadamente a las
necesidades de informacin requerida.

Por otro lado es necesario considerar que en la actualidad gran parte de los
resultados analticos son obtenidos a partir de mediciones instrumentales y que
por lo tanto, se requiere realizar previo a la medicin una adecuada calibracin del
instrumento en orden a obtener datos confiables y comparables. La interferencia
de la matriz en el proceso de medicin es otra dificultad a salvar. Para ello, se han
establecido herramientas que permiten establecer la comparabilidad y veracidad
de las mediciones; siendo estas:

(a) materiales de referencia y


(b) comparaciones interlaboratorio.

Ambas herramientas se han integrado en el proceso analtico de modo de


asegurar la calidad de los resultados.

Recordemos que un proceso analtico, consiste en un conjunto de procedimientos


realizados para solucionar un determinado problema analtico. Este consta de
varias etapas tales como: definicin del problema, eleccin del mtodo, ejecucin
del mtodo y medicin.12

5.4. DESAFOS DE LA METROLOGA QUMICA

Teniendo en consideracin los temas previamente tratados, queda de manifiesto


que existen reas que requieren de un mayor soporte y estudio, como as mismo
de su armonizacin. Dentro de estas reas podemos mencionar:

Medicin de la Incertidumbre. Se requiere establecer la incertidumbre como un


requerimiento de la trazabilidad y de estrategias para la estimacin de la
incertidumbre en mtodos de rutina y a lo largo de todo el proceso analtico. De all
que se deben mejorar el entendimiento de estrategias de estimacin de la
incertidumbre.

12
MATERIALES DE REFERENCIA Y COMPARACIONES INTERLABORATORIOS: Herramientas
para el control de la calidad en laboratorios de ensayo, Manuel A. Leiva-Guzmn. Ed. Aquaprint,
Santiago de Chile, 2006. (Leiva Guzmn, 2006)

28
Legislacin en metrologa. Se requiere avanzar en el desarrollo de un marco
legal que permita el desarrollo, diseminacin y aplicacin de la metrologa en el
mbito comercial de modo que las mediciones puedan ser defendibles no slo
cientficamente sino tambin, legalmente. Estos conceptos aparecen
generalmente en las legislaciones de algunos pases, pero no han sido adaptados
a las exigencias econmicas y sociales actuales.

Trazabilidad de las mediciones. No es claro que en el campo de los laboratorios


se cuente con procedimientos y mecanismos adecuados para establecer una
cadena de trazabilidad; lo que implica que no es claro el nivel de entendimiento de
este concepto. De este modo la difusin de la metrologa qumica resulta
fundamental.

Establecimiento de la Infraestructura de soporte a la Metrologa. Una


infraestructura bsica, reconocida mutuamente por las naciones, que permita
establecer, adecuadamente y unvocamente, la cadena de trazabilidad de las
mediciones, y que considere su sustentabilidad en el tiempo, es fundamental para
el desarrollo de la metrologa.

Comparaciones Interlaboratorios y/o Pruebas de aptitud. Existe consenso en


la actualidad que no hay mejor evaluacin de la conformidad de un laboratorio que
realizar una medicin, de all que algunos pases hayan incorporado este tipo de
pruebas a su sistema de acreditacin como una exigencia ms del mismo. Estas
evaluaciones no siempre tienen los mismos criterios de conformidad y la forma de
evaluar no siempre es la misma. Por lo anterior, es necesario unificar criterios
respecto del uso de este tipo de herramientas. Por otra parte, y dado que este tipo
de comparaciones se emplea para asignar valores a materiales de referencia
certificados, stos deben ser establecidos con criterios cientficos tcnicos y se
deben establecer claramente las limitaciones de este tipo de procedimientos.

Trazabilidad y comparabilidad de mtodos cualitativos. Existe una gran


cantidad de metodologas analticas que tienen su base en respuestas binarias
(SI/NO) en donde los conceptos de incertidumbre son algo difusos ya que el
soporte metrolgico es insuficiente. De all que su desarrollo es necesario y
fundamental para asegurar la trazabilidad y la comparabilidad de mediciones
realizadas con estos mtodos.

Desarrollo de materiales de referencia. El desarrollo de materiales de referencia


certificados con la menor incertidumbre y que aborden el gran nmero de
aplicaciones que son necesarios en diferentes reas sectoriales debe ser una
prioridad. De all que se requiera contar con materiales de referencia con matriz
acorde a las exigencias y realidades para cumplir con los requisitos de calidad de
las mediciones analticas de un pas y/o regin.

29
Desarrollo y validacin de mtodos primarios. En qumica resulta difcil
establecer mtodos primarios de medicin, dada las exigencias que stos deben
cumplir y slo se cuenta con pocas de estas metodologas. Los resultados que
proveen resultados son los que presentan una menor incertidumbre y son
directamente trazables al sistema internacional de medidas. Por lo anterior, resulta
importante el desarrollo y aplicacin de este tipo de metodologas.

Validacin de mtodos y el efecto de la matriz. Dada la complejidad del


proceso de medicin analtica que pase por sucesivas etapas hasta llegar al
proceso de medicin, las cuales pueden ser influenciadas por la naturaleza
qumica o fsica de la muestra y que resulta en mediciones inexactas e imprecisas
es un tema que no ha sido desarrollado an adecuadamente aunque existen
variadas aproximaciones para abordar este problema. As mismo la influencia del
efecto de la matriz en la validacin debe ser considerado de modo que la medicin
sea lo ms veraz posible y representativa de la muestra real.

El desarrollo de guas, normas y documentos relacionados con la trazabilidad y


metrologa son un indicativo que por un lado deja de manifiesto la necesidad de
extender el uso de conceptos y por otro, la necesidad de la armonizacin de
mtodos de validacin, uso de materiales de referencia y de buenas prcticas .(12)

Requerimientos de calidad

Con el uso de materiales de referencia y comparaciones interlaboratorios o


pruebas de aptitud se puede otorgar trazabilidad y comparabilidad a las
mediciones que realizan diferentes laboratorios. La interrogante inmediata que
surge de la aseveracin anterior es Si esta premisa es suficiente o se requieren
de otras herramientas? La experiencia y conocimiento actual nos permite
establecer que para controlar y asegurar la calidad de los resultados de
mediciones, nunca sern suficiente las medidas que se tomen y se deber
establecer una relacin de costo beneficio entre los requerimientos de informacin
y la certeza de la misma, toda vez que las mediciones siempre estn sujetas a un
grado de incertidumbre. Es as que se requiere tambin de armonizacin de los
sistemas y / o procesos de medicin a nivel nacional regional e internacional, que
aseguren el uso de:

Procedimientos armonizados de validacin de mtodos analticos que permitan


asegurar la comparabilidad de los parmetros tales como:

lmites de deteccin,
lmites de cuantificacin,
sensibilidad,
Procedimientos para determinar la incertidumbre
Procedimientos para establecer la trazabilidad

30
Materiales de referencia, y
Participacin en pruebas de aptitud

Asimismo, los laboratorios de anlisis pueden suscribirse al uso de sistemas de


control y aseguramiento de la calidad que presentan sus lineamientos bajo normas
o guas, tales como la ISO/IEC 17025 que describe los requerimientos generales
para la competencia de laboratorios de ensayo y calibracin.

Finalmente, y en orden a establecer la comparabilidad de las mediciones se


requiere de la aplicacin y uso correcto del proceso analtico, establecer una
adecuada cadena de trazabilidad y establecer la conmutatividad entre la muestra
real y el uso de materiales de referencia.

5.5. TRAZABILIDAD
Segn el Vocabulario Internacional de Metrologa 13 es la Propiedad del resultado
de una medicin o el valor de un patrn, por el cual puede ser relacionado con los
patrones de referencia, usualmente patrones nacionales o internacionales, a
travs de una cadena ininterrumpida de comparaciones, teniendo establecidas las
incertidumbres 14

5.5.1. Elementos de la trazabilidad

La trazabilidad est caracterizada por seis elementos esenciales:

a) Una cadena ininterrumpida de comparaciones; que se remite a referencias


determinadas aceptables por las partes, por lo general un patrn nacional o
internacional;

b) Incertidumbre de la medicin; que para cada paso de la cadena de trazabilidad


se deber calcular o estimar siguiendo mtodos aceptados. Se debe declarar la
incertidumbre en cada paso de la cadena, de modo que se pueda calcular o
estimar una incertidumbre total para la cadena completa.

c) Documentacin; cada paso de la cadena debe ser ejecutado de acuerdo con


procedimientos documentados y generalmente reconocidos; los resultados deben
registrase de modo que puedan ser verificados;

d) Competencia; los laboratorios que ejecutan uno o ms pasos de la cadena


deben proporcionar evidencias de su competencia tcnica.

13
Vocabulario Internacional de Metrologa VIM del Comit Conjunto para las Guias en Metrologa.
14
JCGM 200, Vocabulario Internacional de Metrologa: Conceptos fundamentales y generales, y
a
trminos asociados (VIM) 1 Edicin en espaol, 2008 (JCGM, 2008)

31
e) Referencia a las unidades del Sistema Internacional (SI); la cadena de
comparaciones debe terminar en los patrones primarios para la realizacin de las
unidades del SI, salvo que no sea tcnicamente posible.

f) Intervalos de calibracin; con el objeto de mantener la trazabilidad de las


mediciones, las calibraciones debern repetirse a intervalos apropiados; la
frecuencia de las calibraciones depende de una serie de variables, por ejemplo, la
exactitud requerida, incertidumbre requerida, la frecuencia y modo de uso y la
estabilidad de los equipos, entre otros.

5.5.2. Poltica sobre la Trazabilidad de las mediciones

Los laboratorios de ensayo, laboratorios de calibracin y organismos de


inspeccin deben:

a) Demostrar que la calibracin de los equipos crticos y por tanto los resultados
de la medicin generados por dichos equipos, de acuerdo con el alcance de su
acreditacin, son trazables al Sistema Internacional de Unidades (SI).

b) La calibracin de los equipos crticos debe ser realizada por laboratorios de


calibracin acreditados.

c) En caso que los laboratorios de ensayo acreditados calibren sus propios


equipos e instrumentos, debern cumplir los requisitos de competencia tcnica
que la norma NTP-ISO/IEC 17025 establece para los laboratorios de calibracin
(Cap.5).

d) Los laboratorios que realizan sus propias calibraciones, deben asegurar su


trazabilidad.

e) Cuando la trazabilidad referida al SI, no sea tcnicamente posible o razonable,


los laboratorios de ensayo, laboratorios de calibracin y organismos de inspeccin
y el cliente y otras partes interesadas pueden acordar el uso de materiales de
referencia certificados suministrados por un proveedor competente o utilizar
mtodos y/o patrones de consenso especificados que estn claramente descritos
y sean aceptados por las partes involucradas.

5.5.3. Trazabilidad de las pruebas qumicas y biolgicas

Para lograr la trazabilidad al Sistema Internacional de Unidades (SI) en las


mediciones qumicas (incluye fisicoqumicas y bioqumicas), se requiere
necesariamente la aplicacin de algn mtodo primario de medicin qumica. En
consecuencia, la trazabilidad de las mediciones qumicas de un laboratorio se

32
puede demostrar mediante la aplicacin de alguno de los siguientes
mecanismos15:

1. Uso de materiales de referencia certificados trazables al SI y su incertidumbre,


Los laboratorios puede demostrar que el resultado de la medicin que logra es un
valor trazable y confiable.

2. En los anlisis fsico-qumicos, cuando no sea posible o relevante la calibracin


del equipo para asegurar la trazabilidad de las medidas (ej. Cromatgrafo), puede
conseguirse una calibracin trazable del conjunto equipo-mtodo de ensayo,
utilizando un Material de Referencia Certificado (MRC). EL MRC ser sometido al
mismo proceso de las muestras. El grado de concordancia entre el valor obtenido
para el MRC y su valor certificado puede utilizarse para determinar la exactitud de
los valores obtenidos para las muestras (ver ISO 5725 Parte 1).

3. Cuando no se disponga de MRC se puede demostrar la trazabilidad de las


medidas mediante la participacin del laboratorio en un ejercicio de comparacin
de ensayos interlaboratorios.

4. Uso de mtodos de medicin de referencia, aplicados por laboratorios


competentes (que demuestren cumplimiento de la Gua ISO/IEC 34) cuyas
mediciones tienen trazabilidad demostrada a unidades del SI diferentes a la
unidad de medida mol.

5. Uso de un mtodo primario por el cual un laboratorio qumico es capaz de


establecer la trazabilidad directa de una medicin qumica o bioqumica al SI.

REGISTROS

Los laboratorios para demostrar la trazabilidad debern mantener los siguientes


registros:

Certificados de los materiales de referencia que demuestren la trazabilidad hacia


el SI, y que declaren su incertidumbre.

Cartas de trazabilidad completas y actualizadas, que permitan demostrar la


trazabilidad de sus mediciones a patrones nacionales o internacionales. La carta
de trazabilidad debe contar con los valores y las incertidumbres estimados en
cada comparacin, as como la referencia al procedimiento de calibracin o
mtodo de medicin qumica en cada comparacin preferentemente. La referencia

15
Sistema Nacional de Acreditacin, criterios para la Trazabilidad de las Mediciones Lima Per
2013

33
al organismo responsable de la calibracin, de la certificacin del material de
referencia.

Certificados de calibracin de los equipos utilizados en los mtodos.

5.6. RAZONES QUE JUSTIFICAN LA VALIDACION DE METODOS


ANALITICOS

Demostrar que los mtodos son adecuados a los anlisis propuestos en las
condiciones descritas. La validacin es la herramienta que permite obtener
las pruebas documentales al respecto.

Trabajar con mtodos que ofrezcan confianza y seguridad en los


resultados, lo cual a su vez minimizara el nmero de fallos y repeticiones
permitiendo un importante ahorro de costos.

Trabajar con mtodos validados permite no solo el conocimiento del mtodo


analtico sino tambin cumplir con las exigencias legales.

PARA INICIAR LA VALIDACION ES NECESARIO PREVIAMENTE:

Tener perfectamente caracterizado el analito

Trabajar con una formulacin definitiva, puesto que cambios en la


composicin incluso a nivel de excipientes afectarn probablemente el
procedimiento analtico.

Trabajar suficientemente con el mtodo de anlisis como para que el


conocimiento acerca de este, nos ofrezca garantas de que la validacin
puede ser satisfactoria. Solo cuando el procedimiento est definido en
todos sus detalles y se tiene el convencimiento de que las condiciones
descritas son idneas para alcanzar los resultados esperados debe
iniciarse la validacin.

5.7. MTODOS SUCEPTIBLES DE SER VALIDADOS

Los mtodos suceptibles de ser validados en un laboratorio son:


Ensayos de identificacin.
Ensayos para la determinacin del analito de inters de una materia prima o
de una especialidad farmacutica.

34
Ensayos para la determinacin de caractersticas frmaco tcnicas
diferentes.
Ensayos de lmite de impurezas y de cuantificacin de impurezas.
Ensayos para la determinacin den fluidos biolgicos y en productos
naturales.
Ensayos microbiolgicos.

5.8. FASES EN EL DESARROLLO DE UN MTODO ANALTICO Y CRITERIOS


DE VALIDACIN

5.8.1. Definicin De Las Caractersticas De Prctica.


Han de evaluarse los parmetros de practicabilidad del mtodo analtico: precisin
exigible, sensibilidad deseable, grado de selectividad, tiempo, costo, tamao de la
muestra, capacidad del personal, tipo de equipo e instrumentacin, condiciones de
seguridad, etc.

5.8.2. Caractersticas De Fiabilidad


Esta etapa permite conocer las caractersticas de fiabilidad del mtodo para su
aplicacin rutinaria. Dichas caractersticas son las que demuestran la capacidad
de un mtodo analtico para mantener a lo largo del tiempo los criterios
fundamentales de validacin.
Las caractersticas de fiabilidad comprenden los cinco criterios fundamentales de
validacin, (no necesariamente aplicables en todos los casos) y de los que
derivan en la prctica todos los parmetros de validacin:

a) La capacidad de un mtodo para determinar el analito sin interferencias de


impurezas, productos de degradacin, excipientes u otras sustancias presentes en
la muestra relacionada con el trmino selectividad.
Selectividad: Se define como la capacidad del mtodo para proporcionar
resultados que son directamente (o por medio de transformaciones matemticas)
proporcionales a la concentracin del analito en la muestra dentro de un rango
establecido.
Rango: Se define como el intervalo entre la concentracin superior e inferior para
las cuales se ha demostrado la correcta precisin, exactitud y linealidad de
mtodo.

b) La dispersin de una serie de resultados alrededor del valor medio o


central, es decir, el ms - menos de un procedimiento analtico se relaciona con el
trmino precisin.
Precisin: Es la capacidad de un mtodo para proporcionar resultados prximos
entre si. Se puede estudiar a tres niveles:
Repetibilidad: Evala la precisin del mtodo (precisin intraensayo).
Precisin intermedia: Evala la precisin frente a variaciones de analista, equipo
y da (precisin intralaboratorio o precisin intraensayo).

35
Reproducibilidad: Evala la precisin entre laboratorios (precisin
interlaboratorios).

c) La diferencia entre el valor hallado en el anlisis y el valor verdadero.


Concepto relacionado con el termino exactitud.
Exactitud: expresa la proximidad entre el valor que es aceptado
convencionalmente como valor verdadero o valor de referencia y el valor
experimentalmente encontrado.

d) La cantidad mnima de analito requerida para obtener un resultado


significativo est relacionada con los trminos lmite de deteccin y limite de
cuantificacin.
Lmite de cuantificacin: se define como la mnima cantidad de analito que
puede determinarse cuantitativamente con una adecuada exactitud y precisin.
Este parmetro tiene sentido y especial inters en la determinacin de
concentraciones bajas de analito.
Lmite de deteccin: se define como la mnima cantidad de analito en una
muestra que puede ser detectado aunque no necesariamente cuantificado con
precisin y exactitud.

5.9. DOCUMENTACIN DE LA VALIDACIN

Toda validacin comienza a partir de un mtodo ya probado y ajustado. La


validacin trata de demostrar con un nmero mnimo de ensayos, que tanto el
mtodo de anlisis como su sistema analtico asociado producirn resultados
adecuados a las exigencias preestablecidas. Dicha demostracin debe ser
siempre documentada de acuerdo al siguiente sistema:

Ilustracin 2. Diagrama de Flujo de Validacin

36
5.10. PROTOCOLO DE VALIDACIN

Se trata de un documento que ha de recoger el objetivo, la definicin del sistema a


validar, la identificacin de los parmetros, el diseo del plan experimental y los
criterios de aceptacin. Debe ser especfico para cada producto y mtodo,
debiendo ir firmado fechado por las personas responsables de la validacin y
aprobacin.

El esquema de un protocolo de validacin puede incluir los puntos siguientes:

Objetivo: exposicin de la finalidad de la validacin y propuesta de fechas de


inicio y final.

Responsables: Relacin de las personas que llevarn a cabo la validacin y de


las que la aprobaran.

Parmetros a estudiar: Lo parmetros a estudiar se seleccionan en funcin de


las caractersticas de la muestra, tipo de mtodo analtico y rango de
concentracin del analito.

Muestras: El muestreo se realizar de acuerdo con procedimientos escritos, en


los cuales se indicarn los sistemas de identificacin y tratamiento previo de las
muestras.

Equipos: Se han de identificar los equipos implicados en el proceso de validacin


(pH-metros, balanzas, cromatografos, etc), y comprobar que estn
convenientemente cualificados, referenciando estos datos en el informe de
validacin.

Mtodos analticos: Existirn mtodos escritos describiendo el procedimiento


para la determinacin de los parmetros a evaluar, con indicacin de reactivos,
patrones, materiales, tcnica y clculos.

Criterios de aceptacin: Se establecern a priori para cada uno de los


parmetros, basndose en las necesidades o finalidad del mtodo y en la
informacin recogida durante la fase de desarrollo del procedimiento analtico

5.11. REALIZACION DE LA VALIDACION Y EVALUACION DE LOS


RESULTADOS
Todos los datos primarios deben ser perfectamente auditables una vez realizada
la parte experimental de la validacin, se evaluaran los resultados obtenidos. Si
durante la ejecucin del protocolo se produce alguna modificacin se aadirn
como un anexo al mismo explicando el cambio introducido respecto al original y la
razn que lo justifica.

37
INFORME DE VALIDACION

Los informes de validacin incluyen:


a) Referencia al protocolo en el cual se describe el procedimiento para la
determinacin de cada uno de los parmetros a evaluar.
b) Resultados de las determinaciones de cada parmetro incluyendo todos los
datos primarios.
c) Referencias de la calibracin y cualificacin de los instrumentos utilizados y
resultados de la verificacin de los parmetros de idoneidad antes de iniciar
el estudio de validacin.
d) Discusin delos resultados y conclusiones. Se indicara la aceptacin o no
de la validacin del mtodo analtico. Tambin se puede aceptar un mtodo
analtico con limitaciones para un tipo de muestras concreto.

5.12. CERTIFICADO DE VALIDACIN


El certificado de validacin o documento formal de aprobacin que emite el
laboratorio con los resultados obtenidos para cada parmetro, debe ser firmado
por las personas responsables, en este caso es el plan de validacin como tal y
sus resultados, los cuales se encuentran anexados en este trabajo; los
documentos firmados hacen parte de la documentacin privada del Laboratorio de
Qumica Ambiental de la Universidad Tecnolgica de Pereira.

5.13. ARCHIVO
Los documentos referentes a la validacin se archivaran adecuadamente durante
todo el tiempo de vida del producto o servicio 16

5.14. INCERTIDUMBRE
Para la estimacin de incertidumbre se recomienda seguir los cuatro pasos
principales:

1. Especificacin de la cantidad bajo determinacin de medicin (mesurando)


incluyendo la relacin entre el mesurando y los parmetros (cantidades
medidas, constantes, patrones de calibracin, etc.) de los cuales el
mesurando depende.

2. Identificacin de las fuentes de incertidumbre incluyendo por lo menos


todos los parmetros identificados en el transcurso del primer paso. Pueden
incluirse otras fuentes.

16
CAPACHA E., HENRY P., LLANOS R., GIOVANNA P., Desarrollo y validacin de un mtodo
analtico para la cuantificacin de dexametasona y clotrimazol en crema, por HPLC y anlisis de
productos comercializados en el Per Universidad de San Marcos Lima, Per 2007 (Capcha
Espinoza & Llanos Rebaza, 2007)

38
3. Cuantificacin de los componentes de incertidumbre (componente por
componente) usando estimados para los parmetros y dems fuentes
identificadas, obtenidas por experimento, de la validacin o de ensayos
intra o interlaboratorios.

4. Calculo de incertidumbre total (del balance) segn las reglas de la


propagacin de incertidumbre.

Este procedimiento est demostrado en la siguiente Ilustracin

Ilustracin 3 Diagrama Estimacin de la Incertidumbre

Para una mejor visualizacin de los componentes de un procedimiento o mtodo


analtico, sus interrelaciones y fuentes de incertidumbre, y una decisin ms fcil
tanto sobre el impacto real de las diferentes fuentes como sobre la (posible)
agrupacin o combinacin de fuentes, la gua EURACHEM17propone la aplicacin
del diagrama causa y efecto, inicialmente elaborado en 1943 por Kaoru Ishikawa,

17
Validacin de mtodos y determinacin de la incertidumbre de la medicin: Aspectos generales
sobre la validacin de mtodos. Santiago de Chile, 2010

39
protagonista japons de actividades en control dela calidad, y recientemente
redescubierto como herramienta til.

6. METODOLOGIA
La metodologa que se emple para dar cumplimiento a cada uno de los objetivos
propuestos en el presente documento se describe como una serie de actividades.

6.1 Revisin de metodologas analticas:

6.1.1 Documentacin del ensayo de Nitrito


Mediante el mtodo colorimtrico. 4500 No2-B.tomado del Standard Methods for
the examination of water and wastewater. 22nd. 2012.

6.1.2 Procedimiento Estndar de Operacin SOP.

6.2 Elaboracin de matriz AMEF


(Anlisis de modo y efecto de falla), teniendo en cuenta que la herramienta fue
adaptada por parte del LQA.

6.3 Definicin de los parmetros caractersticos del mtodo.


Evaluacin de la competencia para desarrollar el anlisis y Elaboracin del plan de
validacin de acuerdo con el formato de trabajo que fue aportado por el LQA.

6.4 Ejecucin de actividades analticas:

6.4.1 Induccin a la actividad analtica,


Reconocimiento de equipos y puesta a punto del mtodo.

6.4.2 Recoleccin, preparacin de muestras y ejecucin del plan de validacin.

6.5 Procesamiento de datos:

Desarrollo de clculos y estimaciones estadsticas a los datos recolectados


usando el software ProControl.

40
6.6 Anlisis de los resultados:

Anlisis de las estimaciones estadsticas acorde al plan de validacin.

Estimacin de la incertidumbre de medicin.


Determinar la trazabilidad del mtodo de ensayo.
Generacin de la documentacin soporte con los resultados.

41
7. RESULTADOS
De acuerdo con los objetivos trazados para la elaboracin del presente trabajo, se
realiz un cuadro resumen donde se seala el producto obtenido de las
actividades realizadas, materializndose en los diferentes documentos que se
describen en la tabla 2, que se incluirn como anexos.

Objetivo Especfico Resultado


Validar el ensayo de Nitrito a travs Ver Anexo A: Puntos crticos del
de la estimacin de los parmetros ensayo de Nitrito.
caractersticos del ensayo como Ver Anexo B: AMEF Nitritos.
son: Lmite de deteccin, lmite de Ver Anexo C: Plan de validacin de
cuantificacin, exactitud y precisin Nitritos.
bajo condiciones de repetibilidad y Ver Anexo D: Resultados validacin
reproducibilidad, rango lineal y de Nitritos.
trabajo, sensibilidad y porcentaje de
recuperacin.
Validar el ensayo de Nitratos a travs Ver Anexo G: Puntos crticos del
de la estimacin de los parmetros ensayo de Nitratos.
caractersticos del ensayo como Ver Anexo H: AMEF Nitratos.
son: Lmite de deteccin, lmite de Ver Anexo I: Plan de validacin de
cuantificacin, exactitud y precisin Nitratos.
bajo condiciones de repetibilidad y Ver Anexo J: Resultados validacin de
reproducibilidad, rango lineal y de Nitratos.
trabajo, sensibilidad y porcentaje de
recuperacin.
Ver Anexo E: Estimacin de la
Estimar la incertidumbre de incertidumbre del ensayo de Nitritos.
medicin asociada al ensayo
validado
Ver Anexo F: Trazabilidad del ensayo
Determinar la trazabilidad para el de Nitritos.
ensayo validado
Generar la documentacin necesaria La documentacin que soporta que el
para dar cumplimiento a los LQA aplica de forma adecuada el
requisitos establecidos en la NTC- mtodo de ensayo para el anlisis de
ISO/IEC 17025:2005 en el numeral Nitritos se evidencia en los anexos del
5.4.2 A al F.
Tabla 1. Tabla de Resultados de Validacin del Ensayo de Nitritos y Nitratos

42
9. CONCLUSIONES
Se valid el ensayo de Nitritos a travs de los parmetros caractersticos como:
Lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, exactitud, precisin bajo condiciones
de repetibilidad, reproducibilidad, rango lineal, rango de trabajo y porcentaje de
recuperacin; lo que permiti concluir que el mtodo Colorimtrico para la
determinacin de Nitrito propuesto en el Standard Methods for the examination of
water and wastewater es apto para el alcance y uso propuesto.

Se valid el ensayo de Nitratos a travs de los parmetros caractersticos como:


Lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, exactitud, precisin bajo condiciones
de repetibilidad, reproducibilidad, rango lineal, rango de trabajo y porcentaje de
recuperacin; lo que permiti concluir que el mtodo de espectrofotometra
ultravioleta para la determinacin de Nitrato propuesto en el Standard Methods
for the examination of water and wastewater no es apto para el alcance y uso
propuesto.

El ensayo de Nitratos es apto para el uso siempre que los usuarios manifiesten la
aceptacin de datos aunque no cumplan con el criterio de correccin de
background, teniendo en cuenta que se evidenci durante la validacin que los
datos de % recuperacin efectuados con muestras cumplen con el criterio de
aceptacin. Tambin se evidencia cumplimiento en cuanto a Repetibilidad y
reproducibilidad.

Se estim la incertidumbre de medicin asociada al ensayo de Nitrito lo que


genera una mayor confianza en la validez del resultado permitiendo establecer las
fuentes que en mayor proporcin contribuyen a la misma para tomar acciones
correctivas, eliminar errores sistemticos y obtener resultados analticos ms
confiables.Igualmente para el ensayo de Nitrito se estableci que cada una de las
mediciones involucradas en ste son trazables a las unidades del Sistema
Internacional.

Con la documentacin generada (anexos del A al F) a travs del desarrollo del


presente trabajo se demostr que el mtodo de ensayo para determinar Nitritos
utilizado por el Laboratorio de Qumica Ambiental es apropiado para el uso
especfico previsto.

Con la documentacin generada (anexos del G al L) igualmente se demostr que


el mtodo de ensayo para determinar Nitratos utilizado por el Laboratorio de
Qumica Ambiental solo es apropiado para el uso especfico previsto siempre que
los usuarios manifiesten la aceptacin de datos aunque no cumplan con el criterio
de correccin de background .

43
9. RECOMENDACIONES
Es muy importante que las muestras, patrones, materiales volumtricos y de
medicin se aclimaten a 20 C, temperatura para la cual ya est dada su
incertidumbre y as minimizar los errores.

Se recomienda el uso de agua tipo II para evitar cualquier interferencia debido a


otros iones.

El material de referencia (Nitrito de Sodio y Nitrato de Potasio), es la base del xito


de la validacin o de cualquier anlisis, por lo tanto es indispensable su correcto
uso, en este trabajo por ejemplo: su manipulacin, tiempo y temperatura de
secado jugaron un papel muy importante.

Con las soluciones que se preparan pesando directamente los materiales de


referencia antes son las nicas con las que se trabaja durante toda la validacin,
es importante que permanezcan muy bien refrigeradas ya que el resto de
soluciones se preparan todos los das a partir de ellas.

Se debe tener presente que factores como el pH de la muestra o slidos presentes


en la misma, afectan enormemente los resultados de las mediciones por lo que es
de mucha importancia el ajuste de pH y la filtracin de las muestras en ambos
mtodos.

Para la determinacin de Nitrato recomiendo al Laboratorio de Qumica Ambiental


el uso de un formato, en el que se explique al usuario en que consiste el criterio
de correccin de background y se informe que el mtodo no logra cumplir con el
mismo, este formato debe ser firmado por el usuario si acepta estos trminos.

Para la determinacin de Nitratos si existen problemas con la correccin por


backgruond, al igual que lo hace el Standard methods for examination of water
and wastewater se recomienda utilizar el mtodo de la segunda derivada por
espectrofotomtria UV, pues una aproximacin alternativa a la correccin del
background es el uso de la segunda derivada del espectro; el mtodo de las
derivadas a contribuido a la solucin de problemas de interferencias en la
determinacin de trazas y mezlca de sustancias.

44
10. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Capcha Espinoza, H. P., & Llanos Rebaza, G. P. (2007). Desarrollo y validacin de


un mtodo analtico para lacuantificacin de dexametasona y clotrimazol en
crema,por HPLC y anlisis de productos comercializados en elPer.
Recuperado el 25 de noviembre de 2013, de
www.cybertesis.edu.pe/bitstream/cybertesis/3095/1/capcha_eh.pdf:
http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:-
X0H1tTRb2sJ:www.cybertesis.edu.pe/bitstream/cybertesis/3095/1/capcha_
eh.pdf+&cd=1&hl=es&ct=clnk&gl=co
Carrasquilla, L., & Morrillo, J. (1994). Contaminacion Industrial en Colombia. Bog.
Duarte Lisci, G. (s.f.). Buenas Practicas de Laboratorio. Recuperado el 22 de
noviembre de 2013, de depa.fquim.unam.mx:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Buenas_practicas_laboratorio_p
ara_previo_1_24234.pdf
Eurachem Guide. (1998). The fitness for Porpuse of Analitiycal Methos.
Hernandez Hernandez, L., & Gonzlez Prez, C. (2002). Introduccin al anlisis
Instrumental. Barcelona: Ariel Ciencia.
Icontec . (2005). Norma ISO/IEC 17025 Requisitos generales para la competencia
yde los laboratorios de ensayo y calibracin. Bogot.
Instituto de Salud Pblica. (2010). Validacion de mtodos y determinacin de la
incertidumbre de la medicion: Aspectos generales sobre la validacion de
mtodos. Santiago de Chile.
JCGM. (2008). Vocabulario Internacional de Metrologa: Conceptos fundamentales
y trminos asociados. VIM.
Leiva Guzmn, M. A. (2006). Materiales de referencia y comparaciones
interlaboratorios: Herramientas para el control de la calidad en laboratorios
de ensayo. Santiago de Chile: Aquaprint.
Rodier, J. (1981). Analisis de Aguas: aguas naturales, aguas resiguales, agua de
mar". Barcelona.
Roldn, & Roldn, G. (1992). Fundamentos de Limnologa Tropical. Medelln:
Universidad de Antioquia.
Romero, J. (s.f.). Acuiquimica; anlisis qumico del agua.
Sanchenzo, O. (2007). Perspectivas sobre Conservacion de Ecosistemas
Acuaticos en Mxixo.Mxico D.F.
Sawer, C., & Mc Carty, P. (1996). Chemistry for Enviriomental Engineering.New
York: Mc Graw Hill.
Sistema Nacional de Acreditacion. (2013). Criterios para la Trazabilidad de las
mediciones. Lima: SNA.

45
LISTA DE ANEXOS
ANEXO A. Puntos crticos del ensayo de Nitrito.

FLUJOGRAMA.

Ilustracin 4. Diagrama de puntos crticos del ensayo de Nitritos

Como se observa en el anterior flujograma los puntos crticos de la determinacin


de Nitritos son:

46
La preparacin de la solucin intermedia, la solucin estndar y los patrones,
debido a que cualquier cambio en sus concentraciones afectar los resultados.

La filtracin de los slidos suspendidos, ya que estos afectan los resultados de la


medicin.

El pH de la muestra debe estar entre 5,00 y 7,00 para que los nitritos presenten no
se reduzcan a amoniaco, ni se oxiden a nitratos.

47
ANEXO B. AMEF Nitritos

48
49
50
ANEXO C. PLAN DE VALIDACIN DEL ENSAYO DE NITRITO MEDIANTE
EL MTODO COLORIMETRICO. 4500 NO2- B. Standard Methods for the
examination of water and wastewater (DE 097).
Se trata de un mtodo colorimtrico basado en la reaccin de Griess.

La diazotacin de la sulfamida en medio cido y su copulacin con diclorhidrato de


N-(1-naftil)-etilendiamina (diclorato de NED) da un complejo coloreado prpura
adecuado para la determinacin espectrofotomtrica de los nitritos.

Podemos distinguir dos etapas:

1) Diazotacin de la sulfamilamida, formndose un catin de diazonio incoloro.


2) Copulacin del catin con el clorhidrato de NED, dando un colorante azoico de
color prpura.

La reaccin es la siguiente

Ilustracin 5. Reaccin de la determinacin de Nitritos

1 ESTABLECIMIENTO DEL RANGO DE LINEALIDAD

El Standard Methods establece que para el ensayo de nitrito mediante el mtodo


colorimtrico, el sistema de color obedece a la ley de Beer hasta 180 mg N / L con
un paso de luz de 1 cm a 543 nm.

2. EQUIPOS, REACTIVOS Y VIDRIERA EMPLEADOS EN LA EJECUCIN


DEL PLAN DE VALIDACIN
Equipos, Estufa de secado marca Binder, Balanza analtica marca Sartorious BP
221 S, Agitador magntico marca Heidolph MR 3001 con barras magnticas,

51
Termstato marca Julabo F34, Sistema de purificacin de agua Simplicity
MILLIPORE- Fotmetro marca Shimadzu UV-1700 Pharmaspec

Reactivos

Agua tipo II
Nitrito de Sodio
cido Fosfrico 85%
Sulfanilamida
N-(1-Nafti)l-etilendiamina
Hidrxido de Sodio 1N
Acido Clorhidrico 1N

Tabla2. Reactivos

Vidriera y materiales

El material volumtrico empleado para el desarrollo de la validacin es clase A

Matraces aforados clase :A 100 mL ,200mL ,1000 Ml


Pipetas volumtricas clase A:3mL, 4 mL, 8 mL , 10 mL ,20 mL, 50 mL ,100
mL.
Beakers de 100 mL , 250 mL.
Esptulas
Frascos lavadores
Varillas de vidrio
Barras agitadoras de tefln

Tabla 3. Vidriera y materiales

1. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS

Preparacin de Soluciones de Trabajo y Muestras Adicionadas

Los estndares se prepararon a partir de diluciones de la solucin estndar de 1,0


mg NO2-/L la cual se prepar diariamente, la solucin intermedia se prepar una
sola vez y se mantuvo refrigerada durante toda la validacin.

Solucin Intermedia de Nitritos: Concentracin terica de 50 mg NO2-/L,


preparada por pesada directa de 0.1244 g de Nitrito de Sodio, secado previamente
a 105 C durante 2 horas y disuelto hasta completar 500 mL con agua tipo II a 20
C.

52
Solucin Estndar de Nitritos: Concentracin terica de 1,0 mg NO2-/L,
preparado por dilucin, tomando 5 mL de la solucin intermedia y diluyendo a 250
mL con agua tipo II, aforando a 20 C.

Estndar Bajo, Eb: Concentracin terica de 0,02 mg NO2-/L, preparado por


dilucin, tomando 4 mL de la solucin estndar y diluyendo a 200 mL con agua
tipo II, aforando a 20 C.

Estndar Medio, Em: Concentracin terica de 0,5 mg NO2-/L, preparado por


dilucin, tomando 100 mL de la solucin estndar y diluyendo a 200 mL con agua
tipo II, aforando a 20 C.

Estndar Alto, Ea: Concentracin terica de 1,0 mg NO2-/L, tomando


directamente una alcuota de 50 mL de la solucin estndar.

Los patrones para las adiciones se prepararon una sola vez para toda la validacin
a partir de la solucin intermedia de 50 mg NO2-/L. Las adiciones sugeridas se
hicieron diariamente.

La preparacin de los patrones para las adiciones se describe a continuacin:

Patrn de 1,0 mg NO2-/L: Preparado por dilucin, tomando 5 mL de la solucin


intermedia y diluyendo a 250 mL con agua tipo II aforando, a 20 C.

Patrn de 3,0 mg NO2-/L: Preparado por dilucin, tomando 6 mL de la solucin


intermedia y diluyendo a 100 mL con agua tipo II aforando, a 20 C.

Patrn de 11,0 mg NO2-/L: Preparado por dilucin, tomando 22 mL de la solucin


intermedia y diluyendo a 250 mL con agua tipo II aforando, a 20 C.

Las adiciones se realizaron como se indica a continuacin, teniendo en cuenta que


la muestra y los patrones estaban aclimatados a 20 C:

M1: ARD con una concentracin de Nitrito cercana a 0,25 NO2-/L

M1 + Ab (12%): Medir 150 mL de la muestra M1, adicionarle 5 mL de solucin


patrn de 1,0 mg NO2-/L, homogenizando permanentemente.

M1 + Ab (33%): Medir 200 mL de la muestra M1, adicionarle 6 mL de solucin


patrn de 3,0 mg NO2-/L, homogenizando permanentemente.

M1 + Aa (80%): Medir 200 mL de la muestra M1, adicionarle 4 mL de solucin


patrn de 11,0 mg NO2-/L, homogenizando permanentemente.

53
M2: ARD con una concentracin de Nitrito cercana a 0,75 NO2-/L.

2. OBJETIVO DE LA VALIDACIN

Comprobacin de que el mtodo tiene la repetibilidad, la reproducibilidad, la


precisin intermedia y la exactitud suficiente para el objetivo de aplicacin.

Objetivo del mtodo:

Matriz: Aguas residuales domesticas e industriales y aguas naturales


(superficiales y subterrneas).

Analito: Ion nitrito.

Rango de aplicacin: Desde el Lmite de cuantificacin hasta 1,0 mg NO2-/L.

Criterios de aceptacin

En la siguiente tabla se muestran los criterios de aceptacin definidos para el


mtodo de nitrato, evaluando la exactitud como porcentaje error y la precisin en
trminos de coeficiente de varianza.

Criterios de Aceptacin del Mtodo

Exactitud 10% Expresada como porcentaje de Error (%E) para los


patrones
Precisin 10% Expresada como Coeficiente de variacin (%CV)
para los patrones y muestras
Muestras de agua
residual (mg NO3- S %R
+ NO2- -N/L)
0,04 0,005 -------

Valores de 0,24 0,004 100%


Referencia
0,55 0,005 102%
1,04 0,01 100%

Tabla 4.Criterios de Aceptacin del Mtodo de Nitritos.

Se toma la concentracin de las muestras como (mg NO3- + NO2- -N/L) dando a
entender que realizando este mtodo de la misma forma como se describe en e l
Standard Methods for the examination of water and wastewater pagina 4-120, el
NO3- no produce interferencias.

54
3. PARMETROS DE VALIDACIN.

Parmetros caractersticos a evaluar para el mtodo.

Aplica
Parmetro
S No
Lmite de deteccin X
Lmite de cuantificacin X
Exactitud X
Precisin X
Repetibilidad X
Repetibilidad intermedia X
Reproducibilidad X
Recuperacin X
Sensibilidad X
Tabla 5.Parmetros caractersticos a evaluar para el mtodo de Nitritos.

Actividades principales para dar cumplimiento a los parmetros de


validacin.

En la siguiente tabla se relaciona las actividades principales realizadas para dar


cumplimiento a los parmetros establecidos en el numeral 7.4.3

Parmetro Actividades Principales


Previamente a la validacin del mtodo se realizaron varios
ensayos analizando patrones de diferente concentracin, con
el fin de determinar cul de ellos cumple con los criterios de
aceptacin establecidos en cuanto a exactitud expresada
como %E y precisin expresada como Coeficiente de
Lmite de variacin (%CV). Posterior a la seleccin del estndar
deteccin y de adecuado y con el objetivo de ratificar el lmite de
cuantificacin cuantificacin experimental, se evaluaron 7 rplicas de un
patrn de concentracin 0,02 mg NO2-/L.
Con el fin de evaluar la exactitud del mtodo se analizaron
Exactitud, diariamente 2 rplicas, durante 7 das de 3 estndares
expresada como (Eb,Em,Ea) de diferente concentracin 0,02 mg NO2-/L; 0,5
%E mg NO2-/L; 1,0 mg NO2-/L respectivamente.
Con el fin de evaluar la precisin del mtodo se analizaron
diariamente y durante 7 das 2 rplicas de cada uno de los
estndares mencionados (Eb, Em,Ea) y dos muestras
naturales (M1 y M2) cuyas concentraciones de Nitritos se

55
Precisin, encuentran dentro del rango de aplicacin del mtodo:
expresada como M1: Muestra natural. Muestra de ARD Afluente de la PTAR de
porcentaje de la UTP.
coeficiente de M2: Muestra natural. Muestra de ARD Afluente de la PTAR de
variacin (%CV). la UTP.

Precisin bajo El analista responsable aplic el mtodo a todos los


condiciones de estndares y muestras propuestas durante 7 das en la
repetibilidad. validacin y durante el ltimo da en la maana y en la tarde.

Precisin bajo El analista responsable aplic el mtodo a todos los


condiciones de estndares y muestras propuestas un da dos veces: en la
Repetibilidad maana y en la tarde.
Intermedia
Precisin bajo El analista sustituto aplicar el mtodo a todos los estndares
condiciones de y muestras propuestas durante 2 das en la validacin.
reproducibilidad.
Con el fin de evaluar el porcentaje de recuperacin se analiz
una muestra de agua natural (M1) que contiene una
concentracin aproximada de 0.27 mg NO2-/L, a la cual se le
efectu una adicin baja (M1 + Ab) de aproximadamente
0.032mg NO2-/L(12%), una adicin baja (M1 + Ab) de
aproximadamente 0.089 mg NO2-/L (33%) de la concentracin
de la muestra y una adicin baja (M1 + Ab) de
aproximadamente 0.216 mg NO2-/L (80%) de la concentracin
de la muestra.

La muestra (M1) y las muestras adicionadas (M1 + Ab y M1 +


Recuperacin Aa) se analizaron por el analista responsable durante 7 das
en la validacin. Un da en la maana y en la tarde. El analista
sustituto efectu el anlisis durante 2 das al final de la
validacin.

A partir de los valores promedio obtenidos, cada da, para la


muestra y de los valores promedio obtenidos, cada da, para
las adiciones se calcul el porcentaje de recuperacin

56
Anexo D. Resultados Validacin Nitritos.

Limite de Cuantificacin Experimental (LC).


En las tablas 6, 7, 8 y 9 se presentan los resultados obtenidos previos a la
validacin de los patrones de 0,01mgN-NO2-/L y 0,02mgN-NO2-/L, para definir el
patrn correspondiente al lmite de cuantificacin experimental, teniendo en cuenta
que cumpla con los criterios de aceptacin del mtodo.

Corrida 1:

Tabla 6. Resultados Patrn 0,01 mgN-NO2-/L.

Tabla 7. Resultados Patrn 0,02 mgN-NO2-/L.

57
Corrida 2:

-
Tabla 8. Resultados Patrn 0,01 mgN-NO2 /L.

-
Tabla 9. Resultados Patrn 0,02 mgN-NO2 /L.

En las tablas 7 y 9 se observa que los resultados obtenidos para el patrn de 0,02
mg N-NO2-/L cumplen con los criterios de aceptacin del mtodo ya que se

58
obtuvo un %CV y % E menor o igual al 10%. Por esta razn se concluye que el
limite de cuantificacin experimental es 0,02 mgN-NO2-/L.

4. Datos Obtenidos de estndares y muestras durante la validacin

Discusin de Resultados
Al lote de datos de cada estndar o muestra obtenidos se les realiz la prueba F,
sta prueba considera la razn de dos varianzas mustrales, es decir, la razn de
los cuadrados de las desviaciones estndar. La cantidad calculada (F est dada
por la ecuacin1.

12
. 1 = 2
1

Tambin se realiz la prueba de t la cual consiste en comparar dos medias


mustrales (X1 y X2) para comprobar si estas medias difieren significativamente de
cero. Si las dos muestras tienen desviaciones estndar que no sean
significativamente diferentes, se puede calcular una estimacin conjunta de la
desviacin estndar a partir de las dos desviaciones estndar individuales s1 y s2
utilizando la ecuacin 2

2
1 1 s12 + 2 1 s22
. 2 =
1 + 2 2
Se puede demostrar entonces que la prueba de t est dado por: Ecuacin 3
1 2
. 3 =
. 1 1
1 + 2

Donde t tiene n1 y n2 2 grados de libertad.

La prueba de f y de t para cada lote de datos se efectu usando el software


estadstico ProControl, para evaluar si las poblaciones de datos son homogneas
y tener un criterio adicional, para excluir del lote los datos estadsticamente
desiguales e/o inhomogneos. El procesamiento estadstico de los datos a travs
de procontrol hace parte de la documentacin del laboratorio de qumica ambiental
por lo tanto no se pblica en este documento.

59
Lmites de Deteccin y de Cuantificacin
A continuacin se muestran los resultados obtenidos durante los das de
validacin para el estndar de menor concentracin.

DIA DIA 1 DIA 2 DIA 3 DIA 4 DIA 5 DIA 6 DIA 7 N MEDIA S % CV %


Error
Mg 0,020 0,021 0,021 0,021 0,022 0,021 0,022
N- 0,020 0,021 0,021 0,021 0,022 0,021 0,021 20 0,021 0,0005 2,250 4,821
NO2
-
Tabla 10. Resultados obtenidos para el estndar de 0,02 mgN-NO2 /L

Al efectuar la prueba F, se pudo establecer que las poblaciones de datos


obtenidas durante los 7 das de validacin son homogneos entre s, lo que
significa que no hay diferencias significativas en las distribuciones de cada uno de
ellos, por lo tanto, pertenecen a la misma poblacin de datos, lo que permite que
los valores de LD y LC se puedan promediar.
De manera terica el lmite de deteccin se considera como 3 veces la desviacin
estndar del valor del Eb (0,02 mg N-NO2/L) y el lmite de cuantificacin se
considera como 10 veces la desviacin estndar del valor del Eb.

= 3

= 10

Teniendo en cuenta el resultado de la desviacin estndar obtenido para las 20


rplicas de Eb (s=0,0005mg/L), el Lmite de deteccin para el ensayo es 0,0015
mg/L y el Lmite de cuantificacin es 0,005 mg/L.

= 3

= 3 0,0005

= ,

= 10

= 10 0,0005

= ,

Lmite de cuantificacin: 0,005 mg N-NO2-/L.


Lmite de deteccin: 0,0015 mg N-NO2-/L

60
Exactitud expresada como %E
A continuacin se recopilan los resultados de los estndares durante los siete das
de la validacin.

Da Estndar Estndar Estndar


bajo (Eb) medio alto (Ea)
(Em)
0,02 mg 0,5 mg 1,0 mg N-
N-NO2/L N-NO2/L NO2/L

Da 1 0,0202 0,5159 0,993


0,0203 0,520 0,988
Da 2 0,021 0,5007 0,973
0,021 0,5026 0,973
Da 3 0,021 0,502 0,993
0,021 0,503 0,993
Da 4 0,021 0,506 0,982
0,021 0,507 0,982
Da 5 0,022 0,504 0,982
0,022 0,505 0,982
Da 6 0,021 0,511 0,993
0,021 0,508 0,993
Da 7 0,022 0,497 0,988
0,021 0,496 0,988
N 14,00 14 14
Media 0,021 0,51 0,99
S 0,0005 0,01 0,01
%CV 2,25 1,32 0,70
%Error 4,82 1,10 -1,42

Tabla 11. Resultados de los estndares durante los siete das de validacin.

El anlisis estadstico realizado a travs del programa ProControl para los


estndares evidencia en cuanto a la exactitud, evaluada a travs del %E que cada
grupo de patrones cumple con los parmetro de aceptacin establecido para el
mtodo ( %CV 10% y %E 10% ).

61
Precisin expresada como %CV
A continuacin se consolidan los resultados obtenidos durante los das de
validacin para las muestras analizadas.

Tabla 12. Consolidado de los resultados de la validacin del ensayo de Nitritos.

La precisin bajo condiciones de repetibilidad se evalu a partir de la prueba F.


Como se discuti anteriormente en el lmite de deteccin y el lmite de
cuantificacin, las series de datos obtenidas durante la validacin muestra que las
poblaciones de datos cumplen con los criterios de aceptacin establecidos para el
mtodo (%CV 10%).

Para las muestras naturales: M1, M1+Ab (12%y 33%), M1+ Aa (80%) y M2 la
prueba F muestra que todas las poblaciones de datos son estadsticamente
iguales, ya que no hay diferencias significativas entra las varianzas de las series
de datos obtenidas durante la validacin, con un 95% de confianza.

La prueba de t muestra que no hay diferencias significativas entre las poblaciones


de datos de las muestras naturales M1, M1+Ab (12%y 33%), M1+ Aa (80%) y
M2.

62
Las muestras naturales presentan %CV por debajo del 10% lo que evidencia
condiciones de repetibilidad.

Repetibilidad Intermedia.
En la siguiente tabla se muestran los resultados obtenidos para los diferentes
patrones efectuando el anlisis un da en la maana y en la tarde.

Da Estndar bajo (Eb) Estndar medio Estndar alto (Ea)


(Em)
0,02 mg N-NO2/L 0,5 mg N-NO2/L 1,0 mg N-NO2/L

Da 7 (Maana) 0,022 0,497 0,988


0,021 0,496 0,988
Da 7 (Tarde) 0,021 0,505 0,982
0,021 0,506 0,982
N 4 4 4
Media (Xm) 0,021 0,50 0,98
S 0,0003 0,01 0,00
%CV 1,49 1,06 0,30
%Error 6,00 0,17 -1,50

Tabla 13. Datos obtenidos bajo condiciones de repetibilidad intermedia.

En la tabla 13 se observa que los valores de Xm, s, CV% y E% no difieren


significativamente, y cumplen con los criterios de aceptacin del mtodo.

Los resultados para el mismo analista en la maana y en la tarde proporcionan


evidencia de condiciones de Repetibilidad.

Precisin bajo condiciones de Reproducibilidad.

Analista sustituto: Andrs Mauricio Camacho.

A continuacin se muestran los resultados obtenidos por el analista sustituto


durante la validacin.

63
Da Estndar bajo (Eb) Estndar medio Estndar alto (Ea)
(Em)
0,02 mg N-NO2/L 0,5 mg N-NO2/L 1,0 mg N-NO2/L

Da 1 (Sustituto) 0,022 0,539 0,982


0,021 0,537 0,978
Da 2 (Sustituto) 0,022 0,538 0,993
0,022 0,540 0,982
N 4,00 4 4
Media 0,022 0,54 0,98
S 0,0003 0,00 0,01
%CV 1,39 0,22 0,64
%Error 7,62 7,68 -1,62
Tabla 14. Datos obtenidos bajo condiciones de Reproducibilidad

Se calcula la desviacin estndar media de las series de mediciones a travs del


software estadstico Procontrol con un 95% de seguridad estadstica. Con esta
prueba se evalu la dispersin de cada una de las series de datos (s) frente al
nmero total de datos (N) y al nmero total de series de mediciones (k).


1
. 4 1 = ( 1)2

=1

La desviacin estndar media del mtodo es 1,85 %CV valor que proporciona
evidencia de condiciones de reproducibilidad y que se encuentra por debajo de los
criterios de aceptacin establecidos para el mtodo.

% Recuperacin.

Muestra baja + Muestra baja + Muestra baja +


%R %R %R
Adicin Baja Adicin Alta Adicin Alta
(M1Ab) (M1Ab) (M1Aa)
(M1Ab) 12% (M1Ab) 33% (M1Aa) 80%
Media 0,29 106,42 0,35 106,80 0,49 106,00
%CV 3,28 6,52 3,02 2,3 0,78 1,89
%Error NA 6,42 NA 6,08 NA 5,89

Taba 15. Resultados obtenidos de los porcentajes de recuperacin de las muestras

64
Los porcentajes de recuperacin obtenidos para la muestra adicionada fueron de
106,42% para la adicin baja del 12%, del 106,80% para la adicin baja del 33% y
de 106,00% para la adicin alta.

Los porcentajes de error obtenidos tanto para la adiciones bajas (6,42 % y 6,08%
respectivamente) como para la adicin alta (5,89%) son menores al 20%,
evidenciando que no existen efectos de matriz.

A continuacin se muestra la forma en que se efectuaron los clculos para los


porcentajes de recuperacin:

A partir de los valores promedio obtenidos, cada da, para la muestra y de los
valores promedio obtenidos, cada da, para las adiciones se calcul el porcentaje
de recuperacin mediante la siguiente ecuacin:.

% RECUPERACION
A * Vs V B *Vs *100
Cx * V

Donde:
A: Concentracin medida del analito a la muestra a la que se le ha hecho la
adicin conocida.
B: Concentracin base del analito en la muestra.
Cx: Concentracin del patrn de adicin.
Vs: volumen de la muestra antes de la adicin conocida del analito.
V: Volumen utilizado del patrn de adicin.

Para el caso de la M1+ Ab (12%) el primer da miremos el ejemplo:

Muestra baja Muestra baja + Adicin


%R (M1Ab)
(M1) Baja (M1Ab) 12%

mg N-NO2/L mg N-NO2/L %R
Da
0,238 0,267
Da 1 108,94
0,239 0,265

Promedio M1 (b)= 0,2384


Promedio M1+Ab (A)= 0,26585
Patrn de adicin (Cx)= 1,0 mg N-NO2-/L.
Volumen utilizado del patrn de adicin (V)=5 mL
Volumen de la muestra antes de la adicin conocida del analito (v)=150 mL

65
0,26585 150 + 5 (0,2384 150)
% = 100
15

% = ,

Cartas de Control.

En la siguiente tabla se recopilan los resultados obtenidos del estndar para la


elaboracin de las cartas de control. En el laboratorio se decidi generar cartas de
control para el patrn de 0.5 mg N-NO2-/L.

-
Tabla 16.Recopilacin de resultados del estndar de 0,5 mg N-NO2 /L para la elaboracin de carta de
control.

A continuacin se describe la forma como se efectuaron los clculos para la


elaboracin de las cartas de control.

Se tomaron como ejemplo los valores de la tabla 16.

Para cada subgrupo de datos se calcul su media y su rango as:

66

=

Dnde:
= promedio del subgrupo
= sumatoria de datos

=Nmero de datos

Para el dato 1:

Patrn 0,5 mg/L N-NO2


Dato Replicas Promedio Mnimo Mximo Rango
0,516
1 0,518
0,520 0,516 0,520 0,004

0,516 + 0,520
= = 0.518
2

Se determinaron los rangos de los datos de la siguiente manera:

= 0,520 0,516 = 0.004

Clculo de la media de todos los datos:

,
= = .

Clculo del rango promedio de todos los datos:

67
,
= = ,

Para determinar los lmites de control para los rangos se utiliz la siguiente tabla
de factores para lmites de control.

Factores para lmites de control.

Tamao de
Factor A2
muestras
2 1,88
3 1,023
4 0,729
5 0,577
6 0,483
7 0,419
8 0,373
9 0,337
10 0,308

Calculo de los lmites de control:


LCS= Lmite de cuantificacin superior.

LCS = + A2*R

LCS=0,518 + (1,88*1,8x10-3)

LCS=0,521
LCI= Lmite de cuantificacin inferior.

LCI= - A2*R

LCI= 0,518 - (1,88*1,8x10-3)

LCI= 0,514

68
Anexo E. Estimacin de La incertidumbre de medicin de Nitritos.
1. Mesurando
Se mide la absorbancia por parte del complejo azo formado que se lee
espectrofotomtricamente a 540 nm. La intensidad de color es directamente
proporcional a la concentracin de Nitritos.

2. Modelo matemtico.
La ecuacin tpica que aparece al usar la tcnica de ultravioleta -visible es la de la
lnea recta como se muestra en la siguiente ecuacin.

= 1 + 0
De la ecuacin despejamos la componente que corresponde a la concentracin,
como se muestra en la siguiente ecuacin:

( 0 )
=
1
Donde
= La concentracin de masa (mg/L) de NO2, resultado de la curva de
calibracin.
= Es la respuesta observada del instrumento, en este caso la unidad es la
absorbancia.
=La ordenada al origen
=La pendiente calculada.

3. Identificacin de las Fuentes de Incertidumbre

A continuacin se muestran las fuentes inmediatas de incertidumbre que afectan


la cuantificacin para el anlisis de Nitritos.

FUENTES FACTOR CRITICO PARA LA CUANTIFICACION


Aplica Incertidumbre No Aplica Incertidumbre
Preparacin de la Solucin
X
Intermedia
Preparacin de la Solucin
X
Estndar
Preparacin de los patrones de
X
la curva
Curva de Calibracin X
Alcuota de la muestra X
Medicin de pH X
Adicin de Reactivo Color X
Medicin Fotomtrica X
Tabla 17. Fuentes de Incertidumbre para el anlisis de Nitritos.

69
5. Diagrama Causa-Efecto.

En la siguiente figura se muestra las fuentes que aportan incertidumbre al mtodo


de Nitritos.

Ilustracin 6. Fuentes que aportan incertidumbre para el mtodo de Nitritos

Fuentes que aportan incertidumbre para el mtodo de Nitritos.


Clculos

a) Incertidumbre debida a la Concentracin de la Solucin Intermedia


Masa de NaNO2

Hallamos con los datos de la balanza la incertidumbre original de la masa de


NaNO2 pesada para la preparacin de las soluciones de trabajo. Mediante la
formula:

= + ( )

Donde
=
= (0,0001g)
= 2,851006
= 2

70
Reemplazamos los datos

= 0,0001
= 2,851006
= 0,1244

= 0,0001 + (2,851006 0,1244)

= 1,00104

Ahora que ya se calculU, se continua con el calculo de la incertidumbre estandar,


teniendo en cuenta que es una distribucin normal y el factor de cobertura(k)
proporcionado por el fabricante es 2.

Incertidumbre original (): 1,00 04

Factor de cobertura (k): 2



=

Donde

Incertidumbre estandar de la balanza.

Incertidumbre original reportada enel certificado.

Factor de cobertura.

1,00 04
=
2

= ,

Incertidumbre por resolucin de la balanza:

Para calcular la incertidumbre de la resolucin de la balanza se realizan los


mismos clculos anteriormente mencionados, teniendo en cuenta que en esta
ocasin la mNaN O 2 vale 0.

= 0,0001
= 2,851006
= 0,000

= 0,0001 + (2,851006 0)

71
= 1,00104

Incertidumbre original (U): 1,00e04

Factor de cobertura (k): 2



=

1,00 04
=
2

= ,

Para el calculo de la incertidumbre combinada , la espresin uxia har


referencia a la incertidumbre estndar de la masa de NaNO2, mientras que uxib a
la incertidumbre estndar de la resolucin de la balanza.

= ( ) + ( )

= ,

La incertidumbre estndar relativa se refiere a la incertidumbre combinada


dividida entre el valor estimado (Xi) que en este caso es la masa de NaNO2
pesada inicialmente (0,1244g).

7,08105
=
0,1244

= ,

El clculo mencionado anteriormente es el mismo utilizado para la determinacin


de la incertidumbre de la pureza de NaNO2.

Al igual que en el resto de las fuentes de incertidumbre como lo son:

b) Incertidumbre debida a la concentracin de solucin estndar.

72
= ,

c) Incertidumbre debida a los patrones de la curva de calibracin, en


donde los datos utilizados fueron los del patrn de 0,25 mg de N-NO2 con
el fin de trabajar con un promedio, la incertidumbre final es multiplicada por
los 8 patrones que en realidad se trabajaron.

d) Incertidumbre debida al volumen de muestra.

e) Incertidumbre debida a la masa molar de NaNO2

Para la determinacin de la incertidumbre estndar de la masa molar Del NaNO2,


Primero se halla la incertidumbre estndar de cada elemento, luego se procede a
determinar la incertidumbre combinada del NaNO2

Para estos clculos se tuvo en cuenta que esta es una distribucin rectangular con
la siguiente formula

=
3

Donde

Para el O:

Peso Atmico: 15,9994 g/mol.


Incertidumbre original: 3,00104 .

3,00104
=
3

= 1,73104

Como en la molcula de NaNO2 existen dos tomos de Oxigeno la incertidumbre


estndar de ste es multiplicada por 2 obteniendo ahora la incertidumbre estndar
del peso molecular del O2 .

73
2 = 1,73104 2

2 = 3,46104

Se opera de la misma manera en la determinacin de la incertidumbre estndar


para Na y N.

ATOMO Peso Molar Incertidumbre Original Incertidumbre Estandar


Na 22,99 2,00E-06 1,15E-06
N 14,01 7,00E-05 4,04E-05
O2 32,00 3,00E-04 3,46E-04
Tabla 17. Incertidumbre estndar de los tomos Na,N y O.

Para el clculo de la incertidumbre combinada :

= ( ) + ( ) + ( )

= (, ) + (, ) + (, )

= ,

La incertidumbre estndar relativa se refiere a la incertidumbre combinada


dividida entre el valor estimado (Xi) que en este caso es la masa molecular de
NaNO2 (68,99531 g/mol).

,
=
68,99531

= ,

74
f) Incertidumbre debida a la curva de calibracin.

Regresin Lineal.

Se basa en el algoritmo matemtico de mnimos cuadrados.

La ecuacin tpica que aparece al usar la tcnica de ultravioleta -visible es la de la


lnea recta como se muestra en la siguiente ecuacin

= +

De la ecuacin despejamos el componente que corresponde a la concentracin,


como se muestra:

( b0 )
=
b1
Donde:

La concentracin de masa (mg/L) de NO2, resultado de La curva de


calibracin.

Es La respuesta observada del instrumento, en este caso La unidad es la


absorbancia

b0 La ordenada en el origen.

b1 La pendiente calculada.

La incertidumbre debida a la curva de calibracin se obtiene a partir de los datos


de la curva de calibracin de una lnea recta.

El diseo tpico experimental para la estimacin de la incertidumbre es realizar una


curva de calibracin con i concentraciones y j repeticiones con lo que se hace
un arreglo xi, yj (i , j ).

75
CURVA DE CALIBRACION NITRITOS.

Patrn Concentracin (mg/L ) Absorbancia


0,020
1 0,005
0,020
0,032
2 0,01
0,032
0,150
3 0,05
0,149
0,307
4 0,1
0,307
0,731
5 0,25
0,731
1,444
6 0,5
1,444
2,088
7 0,75
2,088
2,683
8 1
2,709
Tabla 18. Datos para construir la Curva de calibracin

Ilustracin 7. Curva de calibracin del mtodo de Nitritos

76
El patrn 8 se trabaj de la misma manera que los dems, es posible que
existiera una pequea variacin en las alcuotas para su preparacin, la cual se
observa en la diferencia de las lecturas.

La ecuacin de la curva calculada por el sistema es:

Abs= 2,750 C + 0
R2= 0,998

Con los datos obtenidos, para la elaboracin de La ecuacin de la lnea recta


en la curva de calibracin, se estima la incertidumbre, de una concentracin
de masa de N-NO2, en base al clculo de regresin lineal de la curva de
calibracin, con una repuesta " ". Como se muestra en la ecuacin 4

S 1 1 ( MCR )2
uNO = + +
2
b1 p n SXX

Donde

u Incertidumbre del N-NO2 obtenida por el instrumento calibrado.


S Desviacin estndar residual del calculo de regresin lineal.
b1 La pendiente calculada
p El numero de replica de la muestra en estdio.
n Numero de puntos en la curva de calibracin multiplicado por el numero de
replicas de cada punto (total de datos (i*j)).
La concentracin de N-NO2.
MRC Promedio de las concentraciones calculadas.
SXX Suma de cuadrados de los residuales de las concentraciones obtenidas.

La desviacin estndar de los residuales "s" esta dada por la ecuacin 5


= +
=

Y

= ( )
=
Donde:

Desviacin estndar residual del calculo dela regresin lineal.

77
Las "i" lectura observadas correspondientes a iMRC conocidas con las
que se calibro el instrumento.

Las "i" lecturas ajustadas correspondientes a iMRC conocidas del


instrumento en las curvas de calibracin.

Ordenada al origen de la curva de calibracin.

Pendiente calculadade la curva de calibracin.

Numero total de datos ( i*j)

Suma de cuadrados de los residuales de las concentraciones obtenidas


por la curva de calibracin.

Cada una de las concentraciones de las diluciones de referencia (MRC)


empleadas en la curva de calibracin. (En este caso se selecciona para efectos
prcticos de clculo el patrn de 0,5 mg N-NO2/L).

El promedio de las concentraciones de las disoluciones de referencia


empleadas en cada uno de los puntos de la curva de calibracin.

Tabla 19. Datos para la determinacin de la incertidumbre de la Curva de Calibracin.

Despus de obtener los datos necesarios

S = 0,00189
b1 = 2,750
p=2

78
n=8
= 0,5
MCR = 0,333

Reemplazamos en:

S 1 1 ( MCR )2
u = + +
b1 p n SXX
Obtenemos:
u = 5,52 x 104

Para hallar la incertidumbre combinada dividimos el dato anterior por la


concentracin del patrn con el que se trabaj es decir, 0,5:

5,52 x 104
UC =
0,5

UC
= 1,10 x 103
C
Tenemos los resultados de los datos anteriores:

a) Incertidumbre por la solucin Intermedia:


= , + , + , + ,


= ,

b) Incertidumbre por Solucin Estndar


= , + ,


= ,

c) Incertidumbre por los patrones de la curva de calibracin.

79

= , + ,


= ,

d) Incertidumbre por la curva de calibracin.


= ,

e) Incertidumbre por el volumen de muestra


= ,

INCERTIDUMBRE ESTNDAR COMBINADA EN EL ANLISIS DE NITRATOS

Se toman los aportes de cada fuente de incertidumbre:

UNO2
NO
2
= (1,83x103 )2 + (1,033x103 )2 + (5,83x104 )2 + (1,10 x 103 )2 + (5,0 x 104 )2

UNO2
= 0,0025
NO2

Resumiendo en la siguiente los datos obtenidos mediante los clculos


anteriormente mencionados:

80
Formato para guiar la estimacin de la incertidumbre Nitritos.

EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

Incertidumbre Estndar Combinada:

NO
2 muestra = NO2 muestra 0,0025 NO2 muestra

Considerando un nivel de confianza del 95% y un factor de cobertura de k = 2


se tiene:

UNO2
Uexp = k
NO2

81
Incertidumbre Expandida:

NO
2 muestra = NO2 muestra 0,0025 NO2 muestra 2

NO
2 muestra = NO2 muestra 0,0050 NO2 muestra

Por ejemplo, para la muestra de 1,0 mg N-NO2-/L se expresa as:

1,0 mg N-NO2-/L 0,005 mg N-NO2-/L

Incertidumbre Estandar Relativa

Incertidumbre Total 6,45E-03

Curva de Calibracion 2,50E-03

Solucion Intermedia 1,83E-03

Solucion Estandar 1,03E-03

Patrones Curva C 5,83E-04

V. Muestra 5,00E-04

0,00E+00 2,00E-03 4,00E-03 6,00E-03 8,00E-03

Ilustracin 7. Contribuciones a la incertidumbre del anlisis de Nitritos

82
Anexo F.TRAZABILIDAD DEL ENSAYO DE NITRITOS
En la figura 8 se muestran las diferentes etapas para el ensayo Nitritos de forma
tal que se pueda tener un panorama general para establecer la trazabilidad del
ensayo.

Ilustracin 8.Etapas del ensayo de Nitritos

83
Aseguramiento de la Trazabilidad

1. Preparacin de la solucin intermedia: La trazabilidad de la temperatura de


la estufa para secar el material de referencia (NaNO2) se tiene por verificacin con
termopar calibrado.

Se asegura la trazabilidad del valor de la masa pesada del material de referencia


mediante certificado de calibracin de la balanza analtica (Sartorius BP221S
certificado nmero 024825) y usndola bajo las condiciones de temperatura y
humedad relativa controladas.

Se asegura la trazabilidad del baln para la preparacin del material de referencia,


mediante una calibracin hecha en el laboratorio al material volumtrico.

2 Aclimatar muestras y patrones: La temperatura del termstato es trazable


debido a la calibracin que se realiza, empleando un termopar calibrado.

Para la preparacin de los patrones se asegura la trazabilidad del baln mediante


una calibracin hecha en el laboratorio al material volumtrico y usando la solucin
a una temperatura de 20C, para garantizar que los ensayos se estn realizando
a esta temperatura.

3 Medir con pipeta volumtrica el volumen de muestra establecido: Se


asegura la trazabilidad de la medicin del volumen usando la pipeta bajo las
condiciones descritas por el fabricante, adems se cuenta con una calibracin
hecha en el laboratorio.

Se asegura la trazabilidad de los balones mediante una calibracin hecha en el


laboratorio del material volumtrico, y usando las soluciones a 20 C

Se asegura la trazabilidad de la medicin del pH-metro mediante la calibracin del


equipo realizada en el laboratorio.

Notas: Cada una de las calibraciones est acompaada de la declaracin de


incertidumbre de las mismas.

84
ANEXO G. Puntos crticos del ensayo de Nitratos.

Ilustracin 9 Diagrama de puntos crticos del ensayo de Nitratos.

85
Como se observa en el anterior flujograma los puntos crticos de la determinacin
de Nitratos son:

La preparacin de la solucin intermedia, la solucin estndar y los patrones,


debido a que cualquier cambio en sus concentraciones afectar los resultados.

La filtracin de los slidos suspendidos, ya que estos afectan los resultados de la


medicin.

Se adiciona 1mL de HCL 1N con el fin de evitar posibles interferencias con los
carbonatos presentes en la muestra.

86
Anexo H. AMEF NITRATOS

87
88
Anexo I. PLAN DE VALIDACIN DEL ENSAYO DE NITRATOS
MEDIANTE EL MTODO DE ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA.
4500 NO3- B. Standard Methods for the examination of water and
wastewater (DE 097).

1. ESTABLECIMIENTO DEL RANGO DE LINEALIDAD

El Standard Methods establece que para el ensayo de nitrato mediante el mtodo


espectrofotomtrico, La curva de calibracin sigue la ley de Beer hasta 11 mg N-
NO3-/ L

Se realiz la curva de calibracin desde 0,2mg N-NO3- / L hasta 5,0 mg N-NO3- / L.

Tabla 19.Datos para determinar el rango Lineal

La casilla de Observacin est destinada para informar solo en el caso en que la


correccin (absorbancia de la lectura a 275 nm) sea mayor al 10% de la
absorbancia de la lectura a 220 nm.

89
6
Curva de Calibracion Nitratos

Concentracion (mg N-O3/L)


5
4
3
2
y = 4,093x
1 R = 0,998
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4
Absorbancia
Ilustracin 10. Curva de Calibracin para determinar el rango Lineal.

La curva est dada por la ecuacin determinada por el sistema:


= 4,093 + 0

Finalmente se decide que el rango de trabajo para la determinacin de Nitratos es


hasta 3,0 mg N-NO3-/L:

Curva de Calibracion Nitratos


3,5
3
Concentracion (mg N-NO3/L)

2,5
2
1,5
1
0,5
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8
Absorbancia y = 3,955x
R = 0,999
Ilustracin 11. Curva de Calibracin Final de Nitratos.

90
Con la siguiente ecuacin:


= 3,955 + 0

Equipos

Estufa de secado marca Binder


Balanza analtica marca Sartorious BP 221 S
Agitador magntico marca Heidolph MR 3001 con barras magnticas
Termstato marca Julabo F34
Sistema de purificacin de agua Simplicity MILLIPORE
Fotmetro marca Shimadzu UV-1700 Pharmaspec
Tabla 20. Equipos

Reactivos

Agua tipo II
Nitrato de Potasio
Acido Clorhdrico 1N
Tabla 21. Reactivos

Vidriera y materiales

Balones aforados de 100 mL, 200mL, 250mL, 500mL, 1000 mL. Clase A
Pipetas aforadas de 3 mL, 6 mL, 8 mL, 10 mL, 25 mL, 50 mL, 100 mL. Clase A
Beakers de 100 mL, 250 mL.
Esptulas
Frasco lavador
Varillas de vidrio
Barras agitadoras de tefln
Tabla 22. Vidriera y materiales

3. Preparacin de Soluciones de Trabajo y Muestras Adicionadas

Los estndares se prepararon a partir de diluciones de la solucin estndar de 5


mg NO3-/L, la cual se prepar diariamente, la solucin inicial se prepar una sola
vez y se mantuvo refrigerada durante toda la validacin.

91
Solucin Inicial: Concentracin terica de 100 mgNO3-/L, preparada por pesada
directa de 0.7221 g de Nitrato de Potasio, secado previamente a 105 C durante
24 horas y disuelto hasta completar 1 L con agua tipo II, aforando a 20 C.

Solucin Estndar: Concentracin terica de 5,0 mg NO3-/L, preparada por


dilucin, tomando 25 mL de la solucin inicial y diluyendo hasta 500mL con agua
tipo II, aforando a 20 C.

Estndar Bajo, Eb: Concentracin terica de 0,20 mg NO3-/L, preparado por


dilucin, tomando 8 mL de la solucin estndar y diluyendo a 200 mL con agua
tipo II, aforando a 20 C.

Estndar Medio, Em: Concentracin terica de 1,0 mg NO3-/L, preparado por


dilucin, tomando 50 mL de la solucin estndar y diluyendo a 250 mL con agua
tipo II, aforando a 20 C.

Estndar Alto, Ea: Concentracin terica de 2,5 mgNO3-/L, preparado por


dilucin, midiendo 100 mL de la solucin estndar y diluyendo a 200 mL con agua
tipo II, aforando a 20 C.

La preparacin de los patrones para las adiciones se describe a continuacin:

Patrn de 8 mg NO3- /L: Se prepara por dilucin, tomando 8 mL de la solucin


inicial y diluyendo a 100 mL con agua tipo II, aforando a 20 C.

Patrn de 14 mg NO3- /L: Se prepara por dilucin, tomando 14 mL de la solucin


inicial y diluyendo a 100 mL con agua tipo II, aforando a 20 C

Las adiciones se realizarn como se indica a continuacin, teniendo en cuenta que


la muestra y los patrones deben estar aclimatados a 20 C:

M1 + Ab: Medir 150 mL de la muestra M1, adicionarle 4 mL de solucin patrn de


8 mg NO3-/L, homogenizando permanentemente.

M1 + Aa: Medir 150 mL de la muestra M1, adicionarle 6 mL de solucin patrn de


14 mg NO3-/L, homogenizando permanentemente.

4. Objetivo de la validacin

Comprobacin de que el mtodo tiene la repetibilidad, la reproducibilidad, la


precisin intermedia y la exactitud suficiente para el objetivo de aplicacin.

Objetivo del mtodo:

92
Matriz: Aguas residuales domesticas e industriales y aguas naturales
(superficiales y subterrneas).

Analito: Ion nitrato.

Rango de aplicacin: Desde el Lmite de cuantificacin hasta 3,0 mg NO3-/L.

5. Criterios de aceptacin

En la siguiente tabla se muestran los criterios de aceptacin definidos para el


mtodo de nitrato, evaluando la exactitud como porcentaje error y la precisin en
trminos de coeficiente de varianza.

Criterios de Aceptacin del Mtodo

Exactitud 10% Expresada como porcentaje de Error (%E) para


los patrones.
Precisin 10% Expresada como Coeficiente de variacin (%CV)
para los patrones y muestras.
Valores de Estndar (mg/L) % CV %E
Referencia No hay datos No hay datos No hay datos
segn DE
---- ---- ----
097.

Tabla 23. Criterios de Aceptacin del Mtodo de Nitratos.

6. Parmetros de Validacin.

Aplica
Parmetro
S No
Lmite de deteccin X
Lmite de cuantificacin X
Exactitud X
Precisin X
Repetibilidad X
Repetibilidad intermedia X
Reproducibilidad X
Recuperacin X

93
Sensibilidad X

Tabla 24. Parmetros caractersticos a evaluar para el mtodo.

7. Actividades principales para dar cumplimiento a los parmetros de


validacin.

En la siguiente tabla se relaciona las actividades principales realizadas para dar


cumplimiento a los parmetros establecidos en el numeral 9.8

Parmetro Actividades Principales


Previamente a la validacin del mtodo se realizaron varios
ensayos analizando patrones de diferente concentracin, con
el fin de determinar cual de ellos cumple con los criterios de
aceptacin establecidos en cuanto a exactitud expresada como
%E y precisin expresada como Coeficiente de variacin
Lmite de deteccin y de (%CV). Posterior a la seleccin del estndar adecuado y con el
cuantificacin objetivo de ratificar el lmite de cuantificacin experimental, se
evaluaron 7 rplicas de un patrn de concentracin 0.20 mg
-
NO3 /L.
Con el fin de evaluar la exactitud del mtodo se analizaron
Exactitud, expresada diariamente 2 rplicas, durante 7 das de 3 estndares
-
como % E (Eb,Em,Ea) de diferente concentracin 0.20 mg NO3 /L; 1,0 mg
- -
NO3 /L; 2,5 mg NO3 /L respectivamente.
Con el fin de evaluar la precisin del mtodo se analizaron
diariamente y durante 7 das 2 rplicas de cada uno de los
estndares mencionados (Eb, Em,Ea) y dos muestras
naturales (M1 y M2) cuyas concentraciones de Nitritos se
Precisin, expresada encuentran dentro del rango de aplicacin del mtodo:
como porcentaje de M1: Muestra natural. Muestra de ARD Afluente de la PTAR de
coeficiente de variacin la UTP.
(%CV). M2: Muestra natural. Muestra de ARD Afluente de la PTAR de
la UTP.

Precisin bajo El analista responsable aplic el mtodo a todos los


condiciones de estndares y muestras propuestas durante 7 das en la
repetibilidad. validacin y durante el ultimo da en la maana y en la tarde.

Precisin bajo El analista responsable aplic el mtodo a todos los


condiciones de estndares y muestras propuestas un da dos veces: en la
Repetibilidad Intermedia maana y en la tarde.
Precisin bajo El analista sustituto aplicar el mtodo a todos los estndares
condiciones de y muestras propuestas durante 2 das en la validacin.
reproducibilidad.
Con el fin de evaluar el porcentaje de recuperacin se
analizar una muestra de agua natural (M1) que contiene una

94
-
concentracin aproximada de 0.70 NO3 /L, a la cual se le
efectuar una adicin baja (M1 + Ab) de aproximadamente
-
0.21mg NO3 /L (30%) y una adicin alta (M1 + Aa) de
-
aproximadamente 0.56 mg NO3 /L (80%) de la concentracin
de la muestra.

La muestra (M1) y las muestras adicionadas (M1 + Ab y M1 +


Aa) se analizaron por el analista responsable durante 7 dasen
la validacin. Un da en la maana y en la tarde. El analista
Recuperacin sustituto efectuar el anlisis durante 2 das al final de la
validacin.

95
Anexo J. RESULTADOS DE LA VALIDACIN DE NITRATOS.

Limite de Cuantificacin Experimental (LC).


En las tablas se presentan los resultados obtenidos previos a la validacin del
patrn 0,20mgN-NO3-/L, para definir el lmite de cuantificacin experimental,
teniendo en cuenta que cumpla con los criterios de aceptacin del mtodo.

Se muestran las absorbancias a 220 nm y 275 nm , debido a que el Standard


Methods aclara que para las muestras y patrones debe realizarse una correccin
de 2 veces la absorbancia de la lectura a 275 nm, y si las absorbancias a 275 nm
exceden el 10% de la lecturas a 220 nm, no se recomienda usar este mtodo
.

= ( )

-
Tabla 25. Resultados patrn de 0,2mg N-NO3 /L para LC y LD

La casilla de Observacin est destinada para informar en el caso en que la


correccin sea mayor al 10% de la absorbancia de la lectura a 220 nm.

En la tabla 25 se observa que los resultados obtenidos para el patrn de 0,2 mg N-


NO3-/L cumplen con los criterios de aceptacin del mtodo ya que se obtuvo un
%CV y % E menor o igual al 10%.

Se concluye que el limite de cuantificacin experimental es 0,2 mgN- NO3-/L.

96
Datos Obtenidos de estndares y muestras durante la
validacin

Lmites de Deteccin y de Cuantificacin Lmite de Cuantificacin


Experimental (LC).

A continuacin se muestran los resultados obtenidos durante los das de


validacin para el estndar de menor concentracin Eb (0,2 mgN-NO3-/L).

-
Tabla 26. Resultados obtenidos para el estndar de 0,2 mgN-NO3 /L

Exactitud expresada como %E

A continuacin se recopilan los resultados de los estndares durante los das de


la validacin.

97
Tabla 27.Resultados de los estndares durante la validacin

Precisin expresada como %CV

A continuacin se consolidan los resultados obtenidos durante los dias de


validacin para las muestras analizadas.

Tabla 28. Resultados de las muestras durante la validacin

98
Como se observa los resultados obtenidos con las muestras (M1, M1+Ab, M1+Aa
y M2) no tienen coherencia alguna debido a que al realizar la correccin esta es
mayor al 10% de la lectura a 220 nm. A continuacin se presenta el consolidado
de datos de la muestra1 (M1):

Tabla 29. Consolidado de datos Muestra1 durante la validacin,

99
Para calcular las correcciones se trabaj de la siguiente manera, como ejemplo se
tomarn los datos del Da 1:

Los datos de absorbancia a 220 nm entregados por el equipo ya tienen una


correccin a 275 nm debido la configuracin del mtodo en espectrofotmetro, es
decir:

= ()

Para determinar la absorbancia real a 220 nm se despeja de la anterior ecuacin

= + ()

= 0,18927 + 0,15975

= 0,34902

Ahora de halla la absorbancia con la correccin y esta es por la que se va a


multiplicar la pendiente de la curva de calibracin para hallar la concentracin de
NO3- en la muestra.


= 0,34902 (2 0,15975)


= ,

Recordando que la ecuacin de la curva es


= 3,955 + 0

Entonces

= 3,955 0,02952


= 0,1173 /

El 10% de la absorbancia real a 220 nm es 0,035 y la absorbancia a 275 nm es


mucho mayor a este valor por lo tanto el mtodo no es adecuado para este tipo
de muestra.

De la misma manera se calcularon los datos para todas las muestras obteniendo
siempre una lectura a 275 nm mucho mayor a la lectura a 220nm.

Repetibilidad Intermedia.

100
En la siguiente tabla se muestran los resultados obtenidos para los diferentes
patrones efectuando el anlisis un da en la maana y en la tarde.

Estndar
Da Estndar Bajo (Eb) Estndar Medio (Em) Alto(Ea)
0,20 1,00 2,50

Dia4(Maana) 0,212 1,001 2,467

Dia4 (Tarde) 0,210 1,011 2,472


N 2,00 2,00 2,00
Media (Xm) 0,21 1,01 2,47
S 0,00 0,01 0,00
%CV 0,61 0,68 0,12
%Error 5,50 0,57 -1,22
Tabla 30. Datos de los patrones para la repetibilidad intermedia.

En la tabla se observa que los valores de Xm, s, CV% y E% no difieren


significativamente, y cumplen con los criterios de aceptacin del mtodo.

Los resultados para el mismo analista en la maana y en la tarde proporcionan


evidencia de condiciones de Repetibilidad.

Precisin bajo condiciones de Reproducibilidad.

Analista sustituto: Andrs Mauricio Camacho.

A continuacin se muestran los resultados obtenidos por el analista sustituto


durante la validacin.

Da Estndar Bajo (Eb) Estndar Medio (Em) Estndar Alto(Ea)


0,20 1,00 2,50

Dia1 (Sustituto) 0,201 0,993 2,441

Dia2(Sustituto) 0,225 1,031 2,501

101
DATOS 2,00 2,00 2,00
Media 0,21 1,01 2,47
S 0,02 0,03 0,04
%CV 8,06 2,68 1,72
%ERROR 6,39 1,20 -1,17
Tabla 31. Datos obtenidos bajo condiciones de Reproducibilidad

% Recuperacin.

Tabla 32. Resultados obtenidos de los porcentajes de recuperacin de las muestras

El calculo de los porcentajes de recuperacin es imposible de realizar debido a


que como se muestra en la tabla anterior la M1 muestra concentraciones
negativas, adems ninguno de los parmetros de aceptacin se encuentran dentro
del rango.

Cartas de Control del Mtodo de Nitratos.

102
En la siguiente tabla se recopila los resultados obtenidos del estndar para la
elaboracin de las cartas de control. En el laboratorio se decidi generar cartas de
control para el patrn de 1,0 mg N-NO3-/L.

Clculos. Ver Anexo E.

-
Tabla 33. Recopilacin de resultados del estndar de 1,0 mg N-NO3 /L para la elaboracin de carta de
control.

103
Anexo K. Estimacin de La incertidumbre de medicin de Nitratos.

1. Mesurando
Se mide la absorbancia por parte del in Nitrato en el espectro ultravioleta a 220
nm.

2. Modelo matemtico. Ver Anexo E.

3. Identificacin de las Fuentes de Incertidumbre

A continuacin se muestran las fuentes inmediatas de incertidumbre que afectan


la cuantificacin para el anlisis de Nitratos.

FACTOR CRITICO PARA LA


FUENTES CUANTIFICACION
Aplica No Aplica
Incertidumbre Incertidumbre
Preparacin de la
X X
Solucin Inicial
Preparacin de la
X X
Solucin Estndar
Preparacin de los
X X
patrones de la curva
Curva de Calibracin X X
Alcuota de la muestra X X
Filtracin. X
Adicin de HCL 1N X
Medicin Fotomtrica X X

Tabla 34. Fuentes de Incertidumbre para el anlisis de Nitratos.

4. Diagrama Causa-Efecto.

En la siguiente figura se muestra las fuentes que aportan incertidumbre al mtodo


de Nitratos.

104
Ilustracin 12. Fuentes que aportan incertidumbre para el mtodo de Nitratos.

5. Clculos Ver Anexo E.

105
Formato para guiar la estimacin de la incertidumbre de Nitratos.

Incertidumbre por la solucin Inicial:


= , + , + , + ,


= ,

106
Incertidumbre por Solucin Estndar


= , + ,


= ,

Incertidumbre por los patrones de la curva de calibracin.


= , + ,


= ,

Incertidumbre por la curva de calibracin.


= ,

Incertidumbre por el volumen de muestra


= ,

Incertidumbre estndar combinada en el anlisis de Nitratos

Se toman los aportes de cada fuente de incertidumbre:



= (, ) + (, ) + (, ) + (, ) + (, )


= ,

107
Expresin de los resultados

Incertidumbre Estndar Combinada:


= ,

Considerando un nivel de confianza del 95% y un factor de cobertura de k = 2 se


tiene:


=

Incertidumbre Expandida:


= ,


= ,

Por ejemplo, para la muestra de 2,3 mg N-NO3-/L se expresa as:

2,3 mg N-NO3-/L 0,09 mg N-NO3-/L

Incertidumbre Estandar Relativa


Incertidumbre Total 0,025405

Curva de Calibracion 0,0182

Solucion Inicial 0,00577

Solucion Estandar 0,000275

Patrones Curva C 0,000583

V. Muestra 0,000577

0 0,005 0,01 0,015 0,02 0,025 0,03

Ilustracin 13. Contribuciones a la incertidumbre del anlisis de Nitratos.

108
Anexo L.TRAZABILIDAD DEL ENSAYO DE NITRATOS.

En la figura 14 se muestran las diferentes etapas para el ensayo Nitritos de forma


tal que se pueda tener un panorama general para establecer la trazabilidad del
ensayo.

TRAZABILIDAD DEL ENSAYO


DE NITRATOS

Secar KNO3 durante 24


horas a 150C, luego
cuidadosamente transferirlo a un
desecador hasta que se aclimate.

Pesar cuidadosamente 0,7221g


de KNO3

Usar agua tipo II, aforar


cuidadosamente el matraz
despus de ser aclimatado
el tiempo necesario.

Aclimatar la Solucin
Inicial

Medir, con pipeta


volumtrica, el volumen
de solucin inicial
establecido.

Usar agua tipo II, aforar


cuidadosamente el matraz
despus de ser aclimatado
el tiempo necesario.

Aclimatar la Solucin
Estndar

109
Medir, con pipeta
volumtrica, los volmenes
de solucin estndar
establecidos para la
preparacin de cada patrn.

Usar agua tipo II, aforar cuidadosamente


cada matraz despus de ser aclimatado
el tiempo necesario

Medir, con pipeta volumtrica, 50 mL


de cada patrn y transferirlos a un
beaker

Construir la curva de calibracin,


midiendo cada patrn a 220 nm con
correccin a 250 nm..

Aclimatar la muestra

Si la muestra presenta slidos


suspendidos, filtrarla

Medir, con pipeta volumtrica, el


volumen de muestra establecido.

Adicionar 2 mL de HCL 1N

Medicin Fotomtrica.

Ilustracin 14. Etapas del ensayo de Nitratos

110