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Cromatografia de Gases
Cromatografia de Gases
INTRODUCCION
Para realizar una separacin mediante cromatografa de gases, se inyecta una pequea
cantidad de la muestra a separar en una corriente de un gas inerte a elevada temperatura; esta
corriente de gas, atraviesa una columna cromatogrfica que separar los componentes de la
mezcla por medio de un mecanismo de particin (cromatografa gas lquido), de adsorcin
(cromatografa gas slido) o, en muchos casos, por medio de una mezcla de ambos. Los
componentes separados, emergern de la columna a intervalos discretos y pasarn a travs de
algn sistema de deteccin adecuado, o bien sern dirigidos hacia un dispositivo de recogida de
muestras.
.- Fuente de gas.
.- Sistema de inyeccin.
.- Horno y columna cromatogrfica.
.- Sistema de deteccin.
.- Sistema de registro.
Al margen del efecto que la naturaleza del gas portador puede ejercer sobre la altura de
plato, la eleccin de uno u otro tipo de gas, estar determinada fundamentalmente por el sistema
de deteccin utilizado. Como fuentes de gas portador se suelen utilizar cilindros de gas
comprimido de elevada pureza, capaces de suministrar una presin de gas adecuada y constante;
es de hacer notar que, en muchos casos, es necesario eliminar las trazas de impurezas que pueda
contener el gas (O2 y H2O fundamentalmente) que pueden afectar al sistema cromatogrfico, por
medio de filtros adecuados. El control de la velocidad del gas portador a travs de la columna,
se realiza por medio de vlvulas que suministran un caudal constante (columnas empaquetadas)
o que mantienen constante la presin en cabeza de columna (sistemas capilares).
Figura 2. Curvas de AEPT para tres gases portadores de uso habitual
Bsicamente, un inyector est formado por un bloque metlico, buen conductor del calor,
provisto de un sistema de calentamiento, un termostato capaz de mantener su temperatura
constante y un aislamiento trmico adecuado; en el interior de este horno, se encuentra alojado
el sistema de inyeccin (figura 3). En ste, el gas portador, previamente calentado, pasa de forma
continua por el sistema; la muestra es inyectada en el interior de la cmara, por medio de una
microjeringa de precisin, a travs de un diafragma perforable (septum) con capacidad de
autosellado en el momento en que se retira la aguja; una vez inyectada la muestra, sta es
vaporizada de forma instantnea, mezclndose con el gas portador en una cmara de mezcla
(liner) construida de un material lo ms inerte posible (acero inoxidable, nquel, vidrio o
cuarzo). La muestra, una vez vaporizada, es arrastrada rpidamente por la corriente de gas
portador en direccin a la columna.
Existen algunos tipos de inyectores que permiten utilizar uno de los extremos de la
columna cromatogrfica como cmara de mezcla. La introduccin de la muestra por medio de
este tipo de inyectores (inyeccin en columna), est libre de muchos de los problemas
mencionados anteriormente, adems de ofrecer ventajas adicionales tales como permitir la
utilizacin de temperaturas ms bajas para la vaporizacin.
Los sistemas de introduccin de muestras utilizados para trabajar con columnas capilares,
estn basados sobre los mismos principios de los inyectores utilizados para columnas
empaquetadas, por lo que las consideraciones generales sobre ellos siguen siendo vlidas.
La diferencia fundamental entre los sistemas que utilizan columnas empaquetadas y los
que utilizan columnas capilares, radica en que la cantidad de muestra que estas ltimas pueden
separar es mucho menor que en el primer caso; por otra parte, las columnas capilares son muy
afectadas por los disolventes, de forma que los volmenes que se pueden inyectar en ellas son
extremadamente bajos. Dado que no existen jeringas capaces de medir con precisin volmenes
inferiores a 0,1 l, los inyectores utilizados para trabajar con este tipo de columnas, adems
vaporizar la muestra y mezclarla con el gas portador, debern ser capaces de introducir en la
columna slo una alcuota de la muestra total inyectada. Existen muchas ms tcnicas de
inyeccin para columnas capilares que para columnas empaquetadas, y de entre ellas, se
comentarn a continuacin algunas de las ms utilizadas.
1.- Inyeccin con divisin de muestra
Este tipo de inyeccin (ms conocida como inyeccin split), es el ms sencillo de los
que se utilizan en cromatografa capilar. El inyector de split (figura 4), consta bsicamente de
los mismos elementos que un inyector normal, con la nica adicin de un sistema de divisin de
flujo a la salida de la cmara de mezcla. Por medio de este tipo de inyector, el flujo de gas
portador que pasa a travs del inyector (y por lo tanto tambin la muestra vaporizada), se divide
en dos; una parte es introducida en la columna y la otra escapa fuera del sistema a travs de una
vlvula de aguja que permite regular la proporcin de gas que es introducido en la columna.
Dado que en este tipo de inyectores la mayor parte del caudal del gas portador se dirige
hacia la atmsfera, la vlvula de split dispone de un sistema de apertura y cierre automticos
para que nicamente permita la salida de gas hacia la atmsfera durante el proceso de inyeccin.
El control del flujo de gas portador que pasa a travs de la columna, se realiza en este tipo de
sistemas manteniendo constante la presin en la cmara de inyeccin, lo que permite que el
caudal de gas que pasa a travs del inyector pueda variar en funcin de que la vlvula de split
est abierta o cerrada.
Los inyectores de este tipo presentan dos inconvenientes; en primer lugar la divisin de
la muestra da lugar a que las cantidades de analito que son separadas y llegan al detector sean
muy pequeas, por lo que los lmites de deteccin aumentan bastante, lo que es un gran
inconveniente a la hora de realizar anlisis de trazas. Por otra parte, los inyectores de split
pueden en algunos casos dar lugar a discriminacin entre los componentes de la muestra.
2.- Inyeccin splitless
Es evidente que la introduccin de una muestra por medio de una jeringa directamente
en el interior de una columna capilar (de 0,23 mm de dimetro interno), requiere la utilizacin
de agujas extremadamente finas (suelen utilizarse agujas de slice fundida de 0,15 mm de
dimetro) que, en consecuencia, son incapaces de perforar un septum; la caracterstica bsica de
un inyector on-column (figura 5), es la utilizacin de un sistema de vlvulas y tubos de gua
que permitan la introduccin en el sistema de una aguja extremadamente fina.
Para realizar un anlisis por medio de esta tcnica, la muestra se introduce en un vial
hermticamente cerrado y se somete a una temperatura previamente fijada durante un tiempo
suficiente para que las distintas fases de los compuestos a analizar alcancen el equilibrio, es
decir, hasta que la presin parcial de cada componente en la atmsfera del vial sea igual a su
presin de vapor a la temperatura de trabajo.
DETECTORES
Una vez que los componentes de la muestra han sido separados por la columna, se hace
preciso el disponer a la salida de sta de un sistema de deteccin, capaz de sealar la elucin de
un componente de la muestra y ofrecer, al mismo tiempo, una seal proporcional a la cantidad
de substancia que pasa a travs de l.
Los detectores utilizados en cromatografa de gases son de tipo diferencial, no ofrecen
seal cuando pasa por ellos slamente el gas portador y responden ante alguna propiedad que
pueda variar cuando ste se encuentra mezclado con alguna substancia eluida de la columna.
Como ya se ha dicho, el detector mide una propiedad que diferencia el gas portador de
la mezcla gas portador/substancia eluida. El cambio medido por el detector, denominado seal
(S), es proporcional a la magnitud de la propiedad a la que responde (a), a una constante propia
del diseo del detector (k) y al nmero de molculas de la substancia eluida que en un momento
dado estn presentes en el detector (N); la expresin de la seal del detector ser:
S=kaN
St = Sg + Si + S1 + S2 + ....
Sensibilidad
Es decir, la sensibilidad de un detector hacia una substancia estar dada por el producto
de la constante de diseo del detector y el valor de la propiedad analizada de la substancia eluida.
En consecuencia, la sensibilidad de cada detector ser diferente, dependiendo de su diseo, y
para un detector dado, la sensibilidad ser diferente para substancias diferentes.
Linealidad
Representando esta ecuacin (figura 9) se obtiene una recta cuya pendiente es l y cuya
ordenada en origen es log(k as), es decir, el logaritmo de la sensibilidad.
La seal de fondo medida por un detector, flucta con el tiempo debido a la inconstancia
de los parmetros experimentales; estas fluctuaciones pueden ser consideradas como errores
aleatorios de la medida y son denominadas ruido. El nivel de ruido oscila continuamente
alrededor de una seal promedio, dando el conjunto de sus valores a lo largo del tiempo una
distribucin que vendr definida por su desviacin standard. El valor de seal correspondiente
a la mnima cantidad detectable, podr calcularse en base al valor del incremento de seal
necesario (S) para ser siginificativamente diferente del resto de la distribucin. Considerando
un nmero suficiente de medidas de seal de fondo, se puede calcular que una seal es
significativamente distinta del ruido, con un 95 % de probabilidad, cuando su valor es dos veces
superior al intervalo de ruido; de forma anloga, cuando se incrementa la probabilidad hasta un
99 %, la seal debe ser al menos 2,65 veces mayor que el nivel de ruido para ser
significativamente distinta.
Por supuesto, la evaluacin del nivel requerido para que una seal sea significativamente
diferente del ruido, est realizado en base a considerar una seal instantnea; No obstante, la
situacin es extrapolable a medidas reales haciendo la consideracin de que la seal evaluada
corresponde al valor mximo del pico de elucin (figura 10), siendo evaluable de forma
cuantitativa todo pico que cumpla estas condiciones.
Los detectores de ionizacin de llama ofrecen una elevada sensibilidad, gran estabilidad
y un rango dinmico lineal excepcionalmente elevado; todo ello, junto con una gran sencillez
de utilizacin ha hecho que este tipo de detectores, como ya se ha mencionado, sean con mucho
los de mayor utilizacin.
Las fuentes de partculas utilizadas en este tipo de detectores son emisores dbiles, 3H,
63
Ni, 55Fe, o electrones emitidos por efecto termoelctrico, aunque en la prctica slamente son
asequibles detectores basados en fuentes de 63Ni y en algunos casos de tritio. Como gases
portadores, el detector de captura electrnica puede utilizar nicamente hidrgeno, gases nobles
o nitrgeno, que deben estar libres, hasta niveles extremadamente bajos de trazas de oxgeno y
vapor de agua.
Detector de nitrgeno-fsforo.
El detector fotomtrico de llama (FPD), utiliza una llama de hidrgeno para excitar a un
estado electrnico elevado fragmentos de molculas que contengan tomos de azufre o fsforo.
Estos dos elementos son excitados de forma ptima por la llama de hidrgeno, y cuando retornan
a su estado fundamental emiten las lneas caractersticas de sus espectros; las lneas analticas
de inters son seleccionadas por medio de un filtro (392 nm para determinar azufre y 526 nm
para fsforo) y la intensidad de las radiacin emitida es medida por medio de un
fotomultiplicador (figura 15).
En este tipo de detector, el gas portador procedente de la columna es mezclado con aire
y quemado en una atmsfera de hidrgeno; la emisin de los tomos de azufre o fsforo se da
fundamentalmente en la zona superior, rica en hidrgeno de la llama, por lo que en ocasiones se
utiliza un diseo de doble quemador (figura 16) con una segunda llama para producir la
excitacin; este diseo, ayuda a adems a evitar el fenmeno de apagado de llama, que se da en
este tipo de detectores, cuando eluye de la columna un compuesto en gran cantidad (bsicamente
el disolvente de inyeccin).
Figura 16. Detalle de un doble quemador
Detector de fotoionizacin
Este tipo de detectores, utilizan para generar la radiacin un tubo de descarga que
contiene una mezcla de gases a baja presin; stos son excitados por medio de una diferencia de
potencial elevada que se mantiene entre dos electrodos. La variacin en las proporciones de la
mezcla de gases de la lmpara, permite obtener radiacin ultravioleta de diferentes energas,
aunque la ms utilizada es la lmpara de 10,2 Ev.
En este detector (figura 17), el gas portador pasa a travs de una cmara de ionizacin,
separada fsicamente del tubo de descarga por medio de una ventana transparente a la radiacin
(generalmente de MgF2). Los compuestos que eluyen de la columna son ionizados por los
fotones de alta energa procedentes de la lmpara y los iones generados son recogidos por medio
de un electrodo polarizado adecuadamente.
Prcticamente la totalidad de los compuestos orgnicos dan algn tipo de respuesta con
estos detectores. La sensibilidad del detector de fotoionizacin es dependiente del potencial de
ionizacin del compuesto de que se trate; la respuesta del detector frente a los compuestos
orgnicos sigue el orden general:
Compuestos aromticos > alquenos > alcanos > alcoholes > steres > aldehidos > cetonas
Los detectores de conductividad ofrecen una buena sensibilidad (entre 10-12 y 10-13 g/s
del elemento con el que se est trabajando), una buena selectividad (entre 104 y 109 segn
elementos) y un rango dinmico lineal que oscila entre 103 y 105. De todas formas, la utilizacin
de este tipo de detectores no es fcil, ya que cualquier tipo de contaminacin, un catalizador
desactivado, un filtro qumico agotado, etc. se traducen con mucha facilidad en deformaciones
de los picos, ruido elevado y falta de linealidad en la respuesta.
COLUMNA CROMATOGRAFICA
Al igual que sucede en todas las tcnicas cromatogrficas, la columna es el corazn del
cromatgrafo de gases. Es necesario tener siempre presente que la columna es el autntico
elemento de separacin de los componentes de la muestra; as, una mala eleccin de la columna,
una columna deteriorada o unas condiciones de trabajo inadecuadas, nunca permitirn obtener
buenos resultados aunque se disponga del mejor equipo en el resto del cromatgrafo, siendo
adems las causas citadas las responsables de la inmensa mayor parte de los problemas que se
encuentran a la hora de realizar un anlisis por cromatografa de gases.
Una columna para cromatografa de gases, est formada por un tubo, que puede ser de
diversos materiales (preferiblemente inertes), dentro del cual se encuentra la fase estacionaria.
Esta puede ser un slido activo (cromatografa gas slido), o con mayor frecuencia un lquido
depositado sobre las partculas de un slido portador (columnas empaquetadas o de relleno) o
sobre las propias paredes del tubo (columnas tubulares abiertas).
Columnas empaquetadas
Bsicamente, una columna tubular est formada por un tubo (normalmente de vidrio o
slice fundida) de un dimetro comprendido entre 0,2 y 0,8 mm, en cuya pared interna se dispone
la fase estacionaria. Segn sea la forma en que se dispone la fase estacionaria sobre la pared del
tubo, se distinguen bsicamente dos tipos de columnas (figura 21):
a) Columnas WCOT (Wall Coated Open Tubular). En este tipo de columnas (que
son las de uso ms frecuente), la fase estacionaria se encuentra depositada
formando una pelcula lquida directamente sobre las paredes del tubo.
Es evidente que la permeabilidad de las columnas tubulares hacia los gases es mucho
mayor que la de las columnas empaquetadas (del orden de 100 veces mayor), por lo que este tipo
de columnas pueden tener una longitud bastante grande (son muy frecuentes columnas de 50 m)
sin provocar presiones excesivamente elevadas en cabeza de columna.
El enorme uso que se hace de este tipo de columnas es debido fundamentalmente a que
la elevada eficacia que ofrecen (son frecuentes valores de 30.000 a 50.000 platos frente a los
2.000 - 4.000 de una columna empaquetada) permite la separacin de mezclas muy complejas
con relativa facilidad; por otra parte, la gran eficacia de este tipo de columnas permite conseguir
buenas resoluciones sin recurrir a fases estacionarias de gran selectividad, lo que simplifica
mucho el problema de la eleccin de la fase estacionaria (prcticamente todas las separaciones
se pueden realizar con tres o cuatro columnas diferentes).
Soporte slido
Los soportes utilizados en cromatografa de gases deben reunir una serie de cualidades,
como son:
1.- Deben presentar una superficie especfica relativamente elevada, con el fin de
que la fase estacionaria pueda distribuirse de manera uniforme y ofreciendo la
mxima superficie de contacto con la fase mvil para facilitar los procesos de
intercambio.
2.- Deben ser porosos, con el fin de no provocar cadas excesivas de presin
3.- Deben ser relativamente duros para que sus partculas no se rompan durante los
procesos de impregnacin y llenado de las columnas.
5.- La superficie de los soportes debe ser qumicamente inerte y no debe provocar
fenmenos de adsorcin que puedan influir en la separacin cromatogrfica.
Ninguno de los materiales probados hasta este momento cumple todas las condiciones
expuestas por lo que, en la prctica, es necesario elegir de entre los soportes existentes el que
mejor se adapte a cada separacin concreta aunque sea a costa de sacrificar alguna de las
propiedades deseables.
Como soportes, se han utilizado slidos inertes de todo tipo, microbolas de vidrio, carbn
grafitizado, metales, slices, fluoropolmeros, polmeros porosos, etc. aunque los ms utilizados
son los soportes preparados a base de tierras de diatomeas sinterizadas (Chromosorb, Gas
Chrom, etc.); la superficie de estos materiales se somete a diversos tratamientos qumicos
(lavados cidos o bsicos, silanizacin de grupos silanol libres, ligado de pequeas cantidades
de fases estacionarias, etc), con el fin de eliminar, en la mayor medida posible, los puntos activos
de la superficie del soporte que pudiesen interaccionar con los compuestos a separar. En la Tabla
1 se recogen las propiedades de algunos soportes diatomaceos tpicos.
La fase estacionaria
Como en casi todos los casos, las propiedades deseables de una fase estacionaria son con
frecuencia contradictorias, por lo que no existe la fase estacionaria ideal. Las propiedades que
debera cumplir una fase estacionaria son:
6.- Debe mojar bien el soporte, presentando adems una adherencia suficiente como
para que no sea arrastrada por la fase mvil.
Adems de cumplir estos requisitos generales, la fase estacionaria debe ser selectiva
frente a los compuestos a separar. Evidentemente, no existe ninguna fase estacionaria que
cumpla todos los requisitos anteriores, aunque para realizar separaciones a temperaturas
elevadas, la utilizacin de polmeros lquidos de elevado peso molecular ofrece resultados
bastante buenos.
A nivel molecular, la retencin de un soluto por parte de la fase estacionaria puede ser
debida a cualquier tipo de fuerzas intermoleculares:
1.- Fuerzas de dispersin (fuerzas de London). Este tipo de fuerzas son debidas a los
campos elctricos producidas por dipolos instantneos debidos al movimiento
relativo de ncleos y electrones. Las fuerzas de dispersin son las nicas que
actan entre fases estacionarias y solutos no polares.
2.- Fuerzas de induccin (fuerzas de Debye). Este tipo de fuerzas son debidas a la
interaccin electrosttica que se produce entre dipolos permanentes y dipolos
instantneos, formados en molculas no polares aunque polarizables, inducidos
por los primeros.
Para compuestos no polares, las nicas fuerzas de interaccin entre el soluto y la fase
estacionaria son las dispersivas; este tipo de fuerzas no son selectivas, y en las separaciones
basadas en este tipo de fuerzas los solutos emergen de la columna, por lo general, en orden
correspondiente a sus puntos de ebullicin.
Para compuestos polares, las interacciones de mayor importancia son las debidas a
fuerzas de induccin y orientacin y en algunos casos a interacciones electrnicas especficas
de tipo donador-aceptor; este tipo de fuerzas dependen del momento dipolar y de las
polarizabilidades tanto de la fase estacionaria como del soluto.
La suma de todas las interacciones entre un soluto y una fase estacionaria es una medida
de la polaridad de la fase respecto al soluto, que marca las caractersticas generales de
retencin, mientras que la magnitud de cada uno de los tipos de interacciones particulares
marcar la selectividad de la fase estacionaria, de gran importancia ya que puede permitir separar
en una fase estacionaria concreta solutos de igual polaridad.
Las constantes de caracterizacin propuestas inicialmente por Rohrschneider (X', Y', Z',
U' y S'), se calculaban en base a la retencin de benceno, etanol, 2-butanona, nitrometano y
piridina. En el mtodo sugerido por McReynolds se utilizan 10 compuestos de prueba (Tabla 2),
aunque para la caracterizacin rutinaria se utilizan nicamente la cinco primeras constantes (X'
a S').
Las constantes de McReynolds pueden utilizarse no slamente para caracterizar las fases
estacionarias, sino tambin como gua de seleccin de la fase a utilizar para la separacin de un
compuesto determinado atendiendo a su funcionalidad; as, si se trata de separar una serie de
compuestos con una funcionalizacin comn, en un primer intento se podra seleccionar una fase
estacionaria con un valor elevado de las constantes de McReynolds relacionadas con el grupo
funcional comn a fin de que la fase estacionaria tenga una selectividad elevada. De cualquier
forma, debe tenerse siempre en cuenta que estas constantes caracterizan las fases estacionarias
en una primera aproximacin, y que en ocasiones se pueden encontrar fases estacionarias con
selectividades muy diferentes a pesar de tener muy similares los valores de las constantes de
McReynolds.
Compuestos ramificados,
H' 2-metil-2-pentanol
particularmente alcoholes
K' 2-octino
M' cis-hidrindano
Las nicas fuerzas de interaccin que se tienen con este tipo de fases son las de
dispersin, por lo que los compuestos cromatografiados eluirn de las columnas que utilicen este
tipo de fases en orden de volatilidad, y en el caso de algunos compuestos muy polares, en orden
inverso a su hidrofobicidad
Este tipo de fases estacionarias es muy utilizado como referencia para la caracterizacin
de otras fases estacionarias, utilizndose fundamentalmente con este fin el escualano:
2.- Polisiloxanos.
Las grandes posibilidades de variacin estructural que tienen estos compuestos hacen que
sea posible obtener fases estacionarias enormemente selectivas. En este sentido, los fenil,
cianopropil y trifluoropropil polisiloxanos presentan muy buenas caractersticas de selectividad.
3.- Polifenilteres.
Los polisteres son fases estacionarias moderadamente polares. Las columnas preparadas
con este tipo de fases presentan el problema de su escasa estabilidad ya que los polisteres son
fcilmente hidrolizables, pueden reaccionar con algunos componentes de las muestras (por
ejemplo aminas) y son muy sensibles a la oxidacin; por estos motivos, la utilizacin de
polisteres como fase estacionaria ha disminuido bastante.
5.- Polietilenglicoles.
los polietilenglicoles son fases estacionarias muy tiles para la separacin de compuestos
polares y con posibilidades de formacin de enlaces de hidrgeno. Este tipo de fases
estacionarias se preparan por polimerizacin del xido de etileno, lo que da lugar a la estructura:
El factor fundamental que marca las caractersticas de retencin de este tipo de fases es
la concentracin de grupos hidroxilo, y en mucho menor grado, el peso molecular promedio de
la fase. Este ltimo factor si tiene por el contrario una gran influencia sobre la estabilidad trmica
de la fase; as, el Carbowax 20M, con un peso molecular promedio de 14.000, tiene una
temperatura mxima de utilizacin de 225 EC, mientras que el Superox-4, con un peso molecular
promedio de 4 millones, es utilizable a temperaturas de hasta 300 EC. El principal inconveniente
que presenta este tipo de fases estacionarias es su facilidad de oxidacin.
Fases estacionarias ligadas
En general, uno de los factores que influyen en la temperatura lmite de utilizacin de las
fases estacionarias, particularmente en las de baja viscosidad, es la tendencia de stas a ser
arrastradas por la corriente de gas portador a medida que la viscosidad de la fase va
disminuyendo por efecto del aumento de temperatura; este efecto tiene una particular
importancia en el caso de las columnas capilares dado que las paredes internas del tubo, que
carecen de irregularidades, no tienen buenas caractersticas estructurales para mantener una
pelcula lquida.
Estas fases estacionarias son conocidas como fases ligadas o fases inmovilizadas y
presentan una serie de ventajas sobre las fases estacionarias convencionales; en primer lugar, las
fases inmovilizadas ofrecen temperaturas de utilizacin ms elevadas que las fases
convencionales, teniendo adems un menor nivel de sangrado a temperaturas elevadas; por otra
parte, dado que las fases de este tipo son prcticamente insolubles, son mucho menos afectadas
que las fases normales por la inyeccin de elevados volmenes de disolvente. Una ventaja
adicional de este tipo de fases es que las columnas contaminadas por componentes no voltiles
de las muestras pueden ser regeneradas mediante un lavado con disolventes adecuados.
1.- Las isotermas de adsorcin en cromatografa gas slido no son lineales, lo que
da lugar a que los volmenes de retencin varen con la cantidad de muestra, a
que los picos sean asimtricos y, con frecuencia, a que las muestras no eluyan
completamente de la columna.
2.- La elevada superficie especfica de los adsorbentes, junto con una energa de
interaccin relativamente alta, dan lugar a tiempos de retencin excesivamente
largos; adems, muchos adsorbentes muestran acusadas propiedades de catlisis
a las temperaturas de trabajo de la columna.
ELECCION DE LA COLUMNA
b) Columnas de lecho mixto, en las que cada una de las fases estacionarias, ya
depositadas sobre un soporte adecuado, se mezclan en proporciones apropiadas.
c) Rellenos propiamente de fase mixta, en los que las fases estacionarias son
mezcladas antes de depositarlas sobre el soporte slido.
La temperatura del detector, aunque en algunos tipos de detectores puede influir sobre
la respuesta, no es normalmente un parmetro que requiera una optimizacin excesiva. La
temperatura del detector debe ser siempre ms elevada que la mxima temperatura de trabajo (o
de limpieza) a que se someta la columna, con el fin de evitar que se puedan condensar en el
detector compuestos eluidos de baja volatilidad; aparte de este criterio, las nicas limitaciones
sern las que puedan venir determinadas por el tipo concreto de instrumento de que se trate.
En estos casos, resulta muy conveniente realizar una prueba previa con una velocidad de
calentamiento relativamente elevada y cubriendo un rango de temperaturas muy amplio, con el
fin de estimar la temperatura a la que eluye cada componente y la resolucin que presentan los
picos; a la vista de los resultados obtenidos, se podr fijar mayor precisin el intervalo de
temperatura a utilizar, as como la velocidad de calentamiento, teniendo en cuenta que la mayor
separacin entre los componentes se obtiene siempre con velocidades de calentamiento muy
pequeas.