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Practica NO 1
MANEJO Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO
Miembros de equipo:
Jess Castaeda Snchez
Monserrat Ros Garca
Juan Carlos Montero Domnguez
Axel Ayrton Lara Ponce
Eduardo Montiel Enrquez
Josu Alejandro Rodrguez Lopez
Titular de la materia:
Dra. Nayali A. Lpez Balderas
BLOQUE 105
PRACTICA No 1.
MANEJO Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO
INTRODUCCION:
Propiedades Bsicas De La Luz: Algunas propiedades de la luz dependen del tipo
de fuente luminosa que las emita, como el color, la intensidad, etc.
Propiedades Fsicas: La luz es una radiacin electromagntica visible para nuestros
ojos. Esta radiacin la podemos describir bien considerando un modelo corpuscular,
bien considerando un modelo ondulatorio. En el primer caso podemos considerar
que la luz esta compuesta por pequeas partculas denominadas fotones, cuya
masa en reposo es nula y que representan unidades o cuantos de energa. En el
segundo caso, la luz al igual que cualquier otra onda, puede ser caracterizada en
trminos:
Longitud De Onda: distancia sucesiva entre dos ondas.
Sistema Mecnico:
El sistema mecnico es el esqueleto o armazn del microscopio, el cual proporciona
soporte y estabilidad al equipo. Est integrado por:
El tubo de microscopio: El cual es de forma cilndrica, en su parte superior sostiene
a la lente o lentes oculares y en la parte inferior se encuentra el sistema de lentes
objetivos.
Revlver: Es la parte circular en la que se encuentran atornilladas las diferentes
lentes objetivos, al girar el revolver cambian las lentes objetivos sin que se
desenfoque la preparacin.
Platina: Pieza metlica cuadrada o circular, con un orificio central sobre el que se
colocan las preparaciones a observar y por el que atraviesa el rayo luminoso. Puede
ser fija o estar provista de tornillos de desplazamiento que nos permiten centrar la
preparacin o buscar diferentes campos de observacin.
Base o Pie: Es la base sobre la que descansa el aparato y le da estabilidad.
Brazo o columna: Esla parte que sostiene el tubo y su mecanismo de
desplazamiento vertical formado por los tornillos macromtrico y micromtrico.
Sistema ptico:
El sistema ptico est formado por 2 sistemas de lentes: Oculares y Objetivos.
Los lentes oculares van montados en la parte superior del tubo del microscopio. Su
nombre se debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador y sus poderes
de aumento van desde 4x hasta 20x.
Los lentes objetivos se encuentran en el revlver y quedan cerca del objeto a
observar. Hay 2 tipos de objetivos: Objetivos secos y de Inmersin
Los objetivos secos se utilizan sin colocar alguna sustancia entre ellos y la
preparacin, nicamente el aire. Proporcionan poco aumento que va desde 10x ,
20x,40x hasta incluso 60x; dicho aumento se encuentra grabado en el exterior de
cada objetivo, en este caso encontramos 10x o tambin llamado seco dbil y 40x o
seco fuerte.
Los objetivos de inmersin se utilizan colocando una sustancia entre ellos y la
preparacin, por lo general, se emplea el aceite de cedro. Proporcionan un mayor
aumento y definicin, de 100x; los podemos identificar ya que son los ms largos y
traen grabada en el exterior la palabra oil (aceite).
Sistema de Iluminacin
El sistema de Iluminacin est formado por la fuente de iluminacin, Espejo,
Condensador, y Diafragma.
La fuente de iluminacin consta generalmente de una lmpara incandescente de
tungsteno.
El espejo es necesario si la fuente de iluminacin no est dentro del microscopio
tiene una cara plana y una es cncava.
El condensador de luz est formado por un sistema de lentes cuya funcin es captar
los rayos luminosos y dirigirlos hacia la preparacin que se va a enfocar.
El Diafragma es una abertura que controla la cantidad de luz que debe pasar por el
condensador, que se regula por una palanca lateral.
MATERIAL:
Microscopio
Papel seda
Aceite de inmersin
Preparaciones (las proveer el profesor)
PROCEDIMIENTO.
1. Identificar los principales componentes del microscopio
2. Realizar la iluminacin de Khler.
3. Abrir el diafragma de iris y el diafragma de campo
4. Subir el condensador, utilizando el tornillo portacondensador
5. Colocar el objetivo 10X
6. Ajustar la distancia interpupilar. Enfocar una preparacin
7. Cerrar el diafragma de campo completamente se observa una luz difusa
8. Con el tornillo porta condensador ajustar la altura, descender hasta
observar el diafragma de campo, se ver un polgono
9. Centrar el polgono con los tornillos posteriores
10. Abrir el diafragma lentamente hasta que los vrtices del polgono
desaparezcan y el rea iluminada cubra todo el campo
11. Contrastar con el diafragma de iris del condensador
12. Observar las preparaciones en 40X y 100X (usando aceite de inmersin)
13. Registrar sus observaciones con las diferentes preparaciones
RESULTADOS.
Frotis Sanguneo
DRIGTH - Giemsa
Identificar cromosomas
40X
Se ven varios grupos de
cromatides, de manera circular
y lineal, como rayitas rosadas.
Frotis Sanguneo
DRIGTH - Giemsa
Identificar cromosomas
100X
Frotis Sanguneo
DRIGTH - Giemsa
Identificar linfocitos entre eritrocitos
40X
Se ven ramificaciones con
pequeos espacios de
separacin y puntos morados
los linfocitos.
Frotis Sanguneo
DRIGTH - Giemsa
Identificar linfocitos entre eritrocitos
100X
ANLISIS DE RESULTADOS:
1. Se logr el objetivo planteado?
Se acudi al laboratorio del hospital regional y all la profesora, primeramente,
nos seal las partes que conforman el microscopio preparo la muestra para
ser observada en el microscopio y nos la mostr a diferentes objetivos.
5. Mencione cuales son las diferencias entre las clulas observadas y ente los
objetivos empleados. Mencionando las estructuras observadas.
Actividad Complementaria:
Dentro del sistema ptico se incluye un foco (tambin denominado fuente de luz)
que emite rayos de luz dirigidos hacia la muestra. Antes de llegar a la muestra los
rayos atraviesan un condensador, la funcin del cual es concentrar los rayos de luz
sobre la preparacin a observar. Habitualmente el condensador est acoplado con
un diafragmapara regular la cantidad de luz incidente. El siguiente elemento ptico
es el objetivo. Esta parte del microscopio consiste bsicamente en un conjunto de
lentes que reciben la luz proveniente de la muestra y permiten aumentar la imagen
observada. Por ltimo, el ocularampla la imagen proveniente del objetivo y es a
travs de l que se puede observar finalmente la muestra. En cuanto al sistema
mecnico hay en primer lugar una base o pie que permite mantener el microscopio
en posicin estable. El brazo es la estructura principal del microscopio y conecta la
base con el sistema ptico. El sistema mecnico incluye tambin la platina, es decir,
la pieza horizontal donde se coloca la muestra. La platina no est conectada de
forma fija con el brazo sino que su posicin se puede regular mediante los tornillos
macromtrico y micromtrico. El revlver es la parte del microscopio donde estn
montados los objetivos, normalmente 3 o 4, y que puede girar para seleccionar el
objetivo deseado. Finalmente, el tubo conecta los objetivos con el ocular.
Tipos de microscopia y sus aplicaciones
Campo Claro:
En campo claro toda la luz desde el espcimen y sus alrededores es
colectada por el objetivo para formar una imagen contra un fondo brillante.
En aplicaciones biolgicas, las observaciones de campo claro son usadas
ampliamente para tinciones o pigmentos naturales o especmenes
altamente contrastados montados en una porta objetos. El espcimen es
iluminado desde abajo y observado desde arriba. El espcimen aparece
brillante, pero ms oscuro que el brillante fondo. Esta tcnica es
ampliamente usada en patologa para ver secciones de tejidos fijos o
pelculas celulares/frotis. El campo claro no es muy til para clulas vivas
sin teir o secciones de tejido sin teir, como en la mayora de los casos,
la luz pasa a travs de muestras transparentes o traslucida con poca o
sin definicin de la estructura.
La luz es reflejada desde muestras opacas y esto es explotado en los
ambientes industriales donde las imgenes de campo claro son usadas
para la inspeccin de obleas (WAFERS) y tarjetas de cristal lquido.
Campo Obscuro:
La microscopia de campo oscuro es una tcnica de contraste donde solo
la luz difractada desde el espcimen se usa para formar la imagen. El
espcimen aparece brillante contra un fondo oscuro.
Contraste De Fases:
La microscopia de contraste de fases es una tcnica ptica que explota
los cambios en el ndice de refraccin para producir imgenes de alto
contraste de especimenes transparentes.
La imagen de contraste de fases es aplicable a varios objetos
transparentes, como clulas vivas en cultivos, micro-organismo,
rebanadas delgadas de tejido, patrones litogrficos, vibras, dispersiones
de ltex, fragmentos de vidrio, y partculas subcelulares (incluyendo
ncleos y otros organelos) donde la tcnica revela estructuras que no son
visibles en campo claro. Una ventaja de la microscopia de contraste de
fases es que las clulas vivas pueden ser observadas en detalle sin la
necesidad de teirlas o usar fluorforos.
Fluorescencia:
La fluorescencia es el fenmeno donde la absorcin de luz de una
longitud de onda dada por una molcula es seguida por la emisin a
longitudes de onda ms largas (visible).
La obtencin de imgenes auto fluorescentes permite visualizar
molculas que estn ms all del lmite de resolucin de la microscopia
de luz. La microscopia fluorescente es una tcnica clave en el diagnstico
clnico (por ejemplo, inmunologa, patologa, microbiologa, citogentica)
y ambientes de investigacin. La microscopia fluorescente confocal, en
particular, se ha vuelto una herramienta esencial para estudiar las
dinmicas estructurales y moleculares en clulas vivas. La fluorescencia
habilita tcnicas de imagen como el TIRF, FRET, FLIM, FLIP y FRAP.
La microscopia de fluorescencia tambin es importante para identificar
minerales fluorescentes, contaminantes e impurezas en ciencias de
materiales, geologa, inspeccin de semiconductores, y proteccin
ambiental.
Luz Polarizada:
La microscopia de polarizacin explota las propiedades de la luz
polarizada para identificar y caracterizar la estructura y propiedades de
los materiales.
La microscopia de luz polarizada es tal vez mejor conocida por sus
aplicaciones geolgicas principalmente por el estudio de minerales en
secciones delgadas de rocas pero tambin se puede usar para estudiar
varios materiales ms incluyendo minerales naturales e industriales
(refinados, extrados o fabricados), compuestos como cementos,
cermicas, fibras minerales y polmeros, y molculas biolgicas
cristalinas o altamente ordenadas como el DNA, almidn, madera y urea.
La tcnica puede ser usada tanto cualitativamente como
cuantitativamente en las ciencias de materiales, geologa, qumica,
biologa, metalurgia y medicina.
Luz UV:
La microscopia (UV) Ultravioleta es un tipo de microscopia plida que
utilice la luz UV para generar una imagen magnificada de la muestra que
es analizada. Como resultado de la longitud de onda ms corta de la luz
UV que luz visible, es posible ver muestras con la mayores magnificacin
y resolucin.
Hay dos ventajas primarias que el uso de la microscopia ULTRAVIOLETA
puede ofrecer; resolucin de imagen mejorada y aumento creciente del
contraste.
La resolucin de un microscopio ptico depende de la longitud de onda
de la fuente de luz. La longitud de onda corta de la luz UV ayuda a mejorar
la resolucin de imagen ms all del lmite de difraccin de microscopios
pticos usando luz blanca normal.
La reaccin de la muestra a la luz UV es mayor que lo lograda por medio
de la luz blanca, por lo que se refiere a los alrededores. Como
consecuencia, hay un contraste creciente en la imagen creada por el
microscopio de modo que sea ms fcil ver las muestras.
Interferencia De Nomarsky:
La ptica Nomarski u ptica de Contraste Interdiferencial (DIC, por sus
siglas en ingls) es una tcnica de microscopa de luz que emplea filtros
polarizantes y prismas para producir imgenes impresionantes con
bastante tridimensionalidad. Este tipo de microscopa se caracteriza por
su buena resolucin y contraste que ayudan a discernir tanto detalles
superficiales como estructuras internas. Adems, el uso de prismas
permite obtener imgenes de colores brillantes sin necesidad de aplicar
protocolos de tincin, ni de preparacin de muestras.
Estereoscpico:
El microscopio estereoscpico es un tipo de microscopio ptico que
permite observar la muestra generando una imagen en tres dimensiones.
Esta es su caracterstica principal que lo distingue del resto de
microscopios donde la muestra siempre es observada en dos
dimensiones.
Los microscopios estereoscpicos son en general microscopios de luz
reflejada. Es decir, un foco ilumina la muestra y la luz reflejada por la
muestra es observada a travs de los objetivos y oculares. De este modo
se pueden observar muestras sin necesidad de laminarlas como en el
caso de los microscopios de luz transmitida, donde la luz atraviesa la
muestra antes de llegar al objetivo. Este es el motivo por el cual
generalmente los microscopios estereoscpicos tampoco tienen ni
condensador ni diafragma.
Este tipo de microscopio es por lo tanto adecuado para observar de forma
aumentada todo tipo de objetos sin necesidad de llevar a cabo un proceso
de preparado de la muestra. Esto los hace muy tiles en todo tipo de
campos y aplicaciones incluyendo el control de calidad de materiales, la
construccin de microcircuitos, el montaje de relojes o procedimientos de
microciruga. En general, los microscopios estereoscpicos son muy
utilizados en campos donde debe manipularse la muestra mientras se
observa.
En este tipo de microscopio la fuente de luz es un lser que ilumina el
preparado a diferentes alturas, generando secciones pticas. Uno de sus
componentes fundamentales es el pinhole, que filtra la luz proveniente de
planos fuera de foco.
Confocal:
El funcionamiento del microscopio lser confocal es muy similar al del
microscopio de epifluorescencia. Su principal ventaja es que permite
obtener imgenes de mayor
calidad mediante tcnicas de filtrado espacial que eliminan la luz que
proviene de planos fuera de foco. Esto permite controlar la profundidad
de campo y, adems, obtener series de imgenes del espcimen
cambiando el plano de foco. Se pueden obtener secciones pticas de 0.5
a 1.5 micras de especimenes fluorescentes de un espesor de
aproximadamente 50 micras o ms.
En este tipo de microscopio la fuente de luz es un lser que ilumina el
preparado a diferentes alturas, generando secciones pticas. Uno de sus
componentes fundamentales es el pinhole, que filtra la luz proveniente de
planos fuera de foco.
Electrnico De Transmisin:
El microscopio electrnico de transmisin (TEM) es un instrumento que
aprovecha los fenmenos fsico-atmicos que se producen cuando un
haz de electrones suficientemente acelerado colisiona con una muestra
delgada convenientemente preparada. Cuando los electrones colisionan
con la muestra, en funcin de su grosor y del tipo de tomos que la
forman, parte de ellos son dispersados selectivamente, es decir, hay una
gradacin entre los electrones que la atraviesan directamente y los que
son totalmente desviados. Todos ellos son conducidos y modulados por
unas lentes para formar una imagen final sobre una CCD que puede tener
miles de aumentos con una definicin inalcanzable para cualquier otro
instrumento. La informacin que se obtiene es una imagen con distintas
intensidades de gris que se corresponden al grado de dispersin de los
electrones incidentes.
Electrnico De Barrido:
La microscopia electrnica de barrido o SEM se basa en el principio de la
microscopia ptica en la que se sustituye el haz de luz por un haz de
electrones. Con esto conseguimos hasta los 100 , resolucin muy
superior a cualquier instrumento ptico.
Su funcionamiento consiste en hacer incidir un barrido de haz de
electrones sobre la muestra. La muestra (salvo que ya sea conductora)
est generalmente recubierta con una capa muy fina de oro o carbn, lo
que le otorga propiedades conductoras. La tcnica de preparacin de las
muestras se denomina sputtering o pulverizacin catdica.
Conclusiones:
Bibliografa
http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_campo_claro.htm
http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_campo_oscuro.htm
http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_contraste_de_fases.htm
http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_fluorescencia.htm
http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_polarizacion.htm
https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Ultraviolet-Microscopy-
(Spanish).aspx
https://microscopico.wordpress.com/nomarski/
https://iie.fing.edu.uy/investigacion/grupos/gti/timag/trabajos/2007/proteus/c
onfocal.html
https://www.mundomicroscopio.com/microscopio-estereoscopico/
http://www.upv.es/entidades/SME/info/753329normalc.html
https://www.patologiasconstruccion.net/2012/12/la-microscopia-electronica-
de-barrido-sem-i-concepto-y-usos/
http://retina.umh.es/webvision/spanish/fisicaluz.html
http://www.aitanatp.com/nivel6/luz/propied.htm