FROTIS SANGUINEO y GOTA GRUESA

I. INTRODUCCION

El frotis sanguneo, tambin llamado extendido, es de gran importancia en hematologa ya que el

diagnstico de muchas enfermedades hematolgicas puede realizarse con slo observar las caractersticas
morfolgicas de las clulas sanguneas, de manera que ste no debe ser excesivamente grueso ni
excesivamente fino. Todas las lminas por usar, sobre todo nuevas, deben ser limpiadas con algodn y
alcohol al 70% para eliminar la grasa que viene adherida.
La gota gruesa, Es una tcnica de rutina y consiste en una muestra de una gota de sangre conformada
por numerosas capas en su mayora de glbulos rojos, los que son deshemoglobinizados durante la
coloracin con giemsa. Esta concentracin de glbulos rojos facilita la deteccin de los parsitos
que pudieran estar presentes en su interior en densidades bajas.

II. OBJETIVOS
Realizar el extendido sanguneo para el estudio de las clulas sanguneas.
Realizar las coloraciones hematolgicas para el estudio de las clulas sanguneas.

III. PROCEDIMIENTO:
Materiales
Alcohol al 70%.
Algodn.
Lanceta descartable.
Portaobjetos de vidrios limpios y desgrasados (25 x 75 mm).
Muestra de sangre (venosa o capilar)
Capilares
Lancetas
Agujas vacutainer

Procedimiento
Gota gruesa:
Una vez que se extrae la sangre con cualquiera de las metodologas (sangre venosa o sangre
capilar), se coloc una pequea gota de sangre (5ul aprox )sobre un portaobjeto a 1 cm de uno de
los extremos (gota gruesa) y se coloc otra gota en la parte central de la lmina portaobjeto (frotis)
Utilizando uno de los ngulos de una segunda lmina (lmina auxiliar) se esparci
rpidamente la gota de sangre y se extendi uniformemente hasta formar una gota gruesa de
 1 cm de lado o de dimetro. La sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente con
3 a 6 movimientos..

FROTIS

Con el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del primer portaobjeto (en la que se
encuentra la gota de sangre) formando un ngulo de 45, se desliz suavemente y a velocidad
moderada el portaobjeto sobre el otro en sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre qued bien
extendida sobre la superficie del primer portaobjeto.
El grosor del frotis sanguneo puede variar segn sea el ngulo que formen entre s ambos
portaobjetos. As, si es superior a 45, la extensin obtenidas er gruesa y corta, si es inferior a 45
ser larga y fina.
Luego se dej secar a temperatura ambiente por 20 minutos.

Zona excesivamente gruesa: Se halla en la regin inmediata al punto departida de la extensin (cabeza). En
ella se aprecia siempre un aumento de linfocitos.
Zona excesivamente fina: Corresponde al final de la extensin y termina en un rea donde las clulas
adoptan una posicin acartonada (barbas). En esta regin existe un exceso de granulocitos y monocitos.
Zona ideal: Corresponde a la regin intermedia del frotis y en ella existe un reparto equilibrado de clulas.

TINCIN CON COLORANTE DE WRIGHT

Fundamento
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar las
variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamao de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y
sus propiedades de coloracin. La informacin obtenida de un frotis de sangre perifrica depende en gran
parte de la calidad del extendido y la coloracin.

Procedimiento
Una vez obtenido el frotis sanguneo, se le dej secar a temperatura ambiente.
Luego se coloc la preparacin en un soporte y se cubri con el colorante de Wright, dejndolo por
espacio de 1 2 minutos.
 Posteriormente se aadi agua destilada en partes iguales hasta obtener un brillo metlico, dejando
actuar 5 minutos adicionales.
Finalmente se lav con agua corriente y se deja secar.
Se coloc en el microscopio y, con pequeo aumento, se revis la calidad de la coloracin. Se coloc
una gota de aceite de inmersin y se enfoca a un aumento de 100x
La forma de los glbulos rojos se examinar detenidamente observando adems del color (cantidad
de hemoglobina), presencia de plaquetas, su agrupacin y distribucin.
Posteriormente, se hace el recuento diferencial de glbulos blancos en 100 clulas, para lo cual se
deber conocer las diferencias entre neutrfilos, eosinfilos, linfocitos y monocitos.
Una extensin de sangre bien teida debe caracterizarse por una buena diferenciacin de las
estructuras subcelulares en los leucocitos, una coloracin rosada de los hemates y la ausencia de
precipitados

TINCION DE GIEMSA.
El constituyente bsico del colorante giemsa consiste en cierto tipo de eosinato de azul de metileno, disuelto
ya sea en alcohol metlico puro o glicerina pura. La solucin alcohlica constituye una forma conveniente en
la preparacin de la solucin acuosa que tie simultneamente en rojo, azul y violeta. Los elementos
disueltos permanecen en solucin y al cabo de un tiempo todos los elementos activos de coloracin se
precipitan

Procedimiento:
Una vez que se obtiene el frotis sanguneo, este se deja secar a temperatura ambiente x 15 20
minutos.
Seguidamente se le agreg unas gotas de metanol, esto es para que se fije y se conserve la
morfologa celular.
Luego se agreg el colorante Giemsa diluido( 1 gota de solucin Giemsa madre en 1 ml de agua
destilada)
Se dej actuar por espacio de 15 -20 minutos.
Luego se enjuag la extensin con abundante agua corriente y se dej secar a temperatura ambiente.
Una vez seca, la preparacin, esta se llev al microscopio para su observacin con objetivo de 100x
y agregndole una gota de aceite de inmersin.

IV. CONCLUSIONES.
 El frotis sanguneo nos permite evaluar las patologas de la sangre.
Las coloraciones Wrigth y Giemsa tiene como componentes bsicos a la eosina y el azul de metileno
lo que les da la tonalidad a las clulas sanguneas.
Para una buena calidad de un frotis todo el material debe ser completamente nuevo libres de
partculas de polvo y grasa.