Está en la página 1de 8

LABORATORIO DE BIOLOGA

GUA # 1

USO Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. OBJETIVOS

- Conocer las partes que componen al microscopio, as como la funcin que


desempea cada una de ellas.
- Reconocer el manejo adecuado del microscopio.

2. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Materiales Reactivos Equipos


- Goteros. Lugol --- Microscopio compuesto.
- Lminas portaobjetos. Aceite de Inmersin
(Alumnos) Azul de metileno
Lminas cubreobjetos.
(Alumnos)
Toallas de papel. (Alumnos)
Agua de florero. (Alumnos)
Un trozo de una hoja de
peridico impreso. (Alumnos)
Pelo humano. (Alumnos)
Epidermis de cebolla.
(Alumnos)

3. FUNDAMENTO TERICO

En la Biologa es muy importante conocer la forma y estructura de los organismos. Sin


embargo, en ocasiones estos son tan pequeos que no es posible observarlos a simple
vista. El ojo humano tiene un poder de resolucin de aproximadamente 1/10
milmetros o 100 micrmetros. El poder de resolucin es una medida de la
capacidad para distinguir un objeto de otro, es la distancia mnima que debe haber
entre dos objetos para que sean percibidos como objetos separados. Si se miran dos
lneas que se encuentran a menos de 100 micrmetros una de otra, se ver una sola
lnea algo engrosada.

La mayora de las clulas eucariticas miden entre 19 y 30 micrmetros de dimetro,


entre 3 y 10 veces menos que el poder de resolucin del ojo humano; las clulas
procariticas son an ms pequeas. Por tal razn, y con la intencin de observar
objetos que no son visibles para el ojo humano, es necesario el uso de herramientas
que suministren mayor resolucin.
Un microscopio compuesto es un microscopio ptico con ms de un lente. Los
microscopios pticos tienen un lmite resolucin de cerca de 200 nm (0.2 m). Este
microscopio utiliza luz visible.

4. PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

El sistema mecnico:

representa el armazn del aparato y sostiene a las diferentes partes de los sistemas
pticos y de iluminacin, est integrado por:

a. Pie o base: es el soporte que da firmeza a todo el microscopio. Normalmente porta la fuente de
iluminacin (lmpara incandescente o halgena).

b. Brazo o mango: es la parte que sostiene al tubo del microscopio o al sistema de


lentes, es la parte ideal para sujetar el aparato para trasladarlo de un sitio a otro.

c. Platina: pieza donde se coloca la preparacin. Es la plataforma rectangular


colocada horizontalmente en el brazo, perpendicular al eje ptico. Est provisto de
pinzas o carro mvil para sujetar la preparacin, cuenta con accesorios con escala que
permiten ubicar puntos determinados. d. Tubo: esta sostenido por la parte superior del
brazo y sostiene los lentes.

d. Revolver: pieza de forma discoidal, giratoria que esta articulada a la parte inferior del
tubo, al
cual se insertan los objetivos.

f. Tornillo Macromtrico: es el encargado de producir desplazamientos rpidos de


ascenso y
descenso de la platina, lo cual permite acercar o alejar la muestra de los objetivos.

g. Tornillo Micromtrico: sirve para dar el enfoque preciso de alguna muestra.

El Sistema ptico:

Cuenta con dos sistemas de lentes separados a una distancia tal que uno amplifica la
imagen obtenido por el otro, se llaman objetivos y oculares.

a. Objetivos: Estn separados por una o varias lentes que suministran una imagen real
e invertida de la muestra que se observa. Existen diferentes tipos de objetivos y se
encuentran montados en el dispositivo giratorio llamado revlver. El lente ms cercano
al microscopio produce magnificacin, el segundo lente del objetivo es responsable del
poder de resolucin.

Cada objetivo lleva marcado el nmero que indica el coeficiente de aumento de las
lentes y que al ser multiplicado por el del ocular se obtiene el aumento total que se
logra en la observacin.

Normalmente los microscopios tienen los siguientes objetivos: 4X, 10X, 40X y 100X,
siendo X nmero de aumentos). El objetivo de inmersin (100X) se usa agregando un
lquido que ocupa el espacio comprendido entre el lente de preparacin. Este lquido
debe tener un ndice de refraccin mayor que el del aire, lo cual favorece la observacin,
generalmente se trata de aceite de madera y cedro y se conoce como aceite de
inmersin. Con este objetivo se logra un mayor aumento (inmersin) y se identifica por un
anillo marcado en la parte inferior.
Tomando en cuenta que tambin el ocular proporciona aumentos, tenemos que el
nmero total de
aumentos que se consiguen es el resultado de multiplicar ambos coeficientes.

b. Ocular: se llama as por estar prximo al ojo del observador y esta formado
por dos lentes simples o compuestos, atravs de los cuales se mira, aumentando a
modo de lupa la imagen real proyectada por el objetivo. Lleva grabado el nmero de
aumentos que normalmente es 10X. Hay microscopios que tienen un solo ocular
(microscopio monoculares) y otros que tienen dos oculares (microscopio binoculares).

Sistema de iluminacin: La fuente luminosa se encuentra integrada al aparato y


consta de una lmpara colocada en la base, de donde la luz va directamente a la
preparacin.

c. Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. Por lo
cual esta
ubicado entre la fuente de luz y la muestra.

d. Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

e. Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

1 metro (m)= 100 centmetros (cm)


1 centmetro (cm)= 10 milmetros (mm)
1 milmetro (mm)= 1000 micras ()
1 micrmetro (m)= 1/10.000 cm
1 nanmetro (nm) = 1/ 10.000.000 cm

Tabla 1. Algunas relaciones mtricas

5 . MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES EN EL USO DEL MICROSCOPIO

NUNCA mueva los microscopios de los recuadros amarillos. No golpee el mesn y


evite producir vibraciones, estos impactos producen desajustes en el sistema
ocular del equipo.
Utilice el aceite de inmersin nicamente con el objetivo de 100X, recuerde que la
funcin del mismo es evitar que este lente se raye. Evite manchar los dems
objetivos con aceite.
NUNCA se debe tocar los lentes con las manos.

Al terminar el trabajo, retire las preparaciones de la platina, deje limpio el equipo y


Limpie el objetivo de 100X nicamente con papel de arroz.

La posicin en la que debe quedar el microscopio es: enfocado en el objetivo de


menor aumento, platina abajo, apagado y desconectado (en ese orden, de lo
contrario la lmpara puede quemarse).
Una vez el equipo sea entregado(a) a (la) laboratorista cbralo con el forro.

No mueva ninguna pieza si no conoce exactamente su uso. No fuerce los


dispositivos giratorios, los tornillos, platina, revlver y condensador mas all de lo
que lo permite el mismo aparato. Recuerde que si usted o su grupo de trabajo
daan alguna pieza del equipo, la reparacin del mismo quedara bajo su
responsabilidad.
No coloque el mechero encendido cerca del equipo. No moje el equipo mientras
realiza la limpieza del mesn. Si esto sucede, informe inmediatamente y avise al
laboratorista.

Al utilizar colorantes (tincin de Gram, tincin de hongos) tenga especial cuidado


de colocar la laminilla para evitar que estos reactivos entren en contacto con los
lentes pues su naturaleza qumica podra afectar la vida til de los mismos. Si esto
llegase a suceder limpie muy bien los lentes con alcohol isoproplico y papel de
arroz y pida ayuda del laboratorista.

Tenga especial cuidado al hacer los enfoques ya que muchas veces el objetivo
ejerce tanta presin sobre el portaobjetos que se puede romper el micropreparado
y se puede rayar el lente.

6. PROCEDIMIENTO

a. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

1. Identifique las partes del microscopio

2. Preparacin de la muestra.

a. Revise que las lminas que va a utilizar estn completamente limpias.

b. Coloque sobre una lmina portaobjetos una gota de agua y recorte de lla letra e
o a. Espere a que el papel se moje totalmente.

c. Cbralo. Mantenga el cubreobjeto (laminilla) en un ngulo de 45 respecto


al portaobjeto, djelo caer suavemente sobre la muestra de manera que el agua
quede distribuida uniformemente. Una ligera presin sobre el cubreobjeto
eliminar las burbujas de aire que pudieran haber quedado.

d. Sobre una lmina limpia disponga una gota de agua de florero y cubra con la
laminilla como se indica en el punto c.

e. Corte un trozo de pelo de 1 cm de longitud y ubquelo sobre otra lmina, agregue


sobre ste una gota de agua y cubra con la laminilla.

f. Separar una de las hojas internas de la cebolla y desprender la tenue membrana


que est adherida por su cara inferior cncava. Depositar una gota de agua
sobre la lmina y sobre esta colocar un fragmento de la membrana. Escurrir el
agua, aadir una gotas azul de metileno o lugol sobre la membrana y dejar
actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis
por falta de colorante o por evaporacin del mismo!. Con el gotero lavar la
epidermis con agua abundante hasta que no suelte ms colorante. Colocar
sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y
llevarla al microscopio.

3. Compruebe que las lentes del ocular y de los objetivos estn limpias: de no ser as
lmpielas cuidadosamente con papel de arroz . No toque los lentes con los dedos.

4. Ajuste la distancia interocular para adaptar la distancia entre los lentes o culares a la
distancia entre sus ojos; mueva lateralmente la base de los lentes oculares hasta que
vea claramente una sola imagen. El propsito principal de tener dos lentes
oculares, en vez de uno, es eliminar el cansancio que se produce al mantenerse
un ojo cerrado y reducir la interferencia de luz ambiental y de otras imgenes si se
mantiene el ojo abierto. Los dos lentes oculares no proporcionan una imagen
estereoscpica porque hay un solo lente objetivo. La distancia interpupilar vara para
cada persona y por lo tanto debe ajustarse cada vez que se use el microscopio.

5. Monte la muestra

a. Realice el procedimiento primero con la lamina preparada de la letra recortada del


peridico.

b. Ubique el lente objetivo de menor aumento (4X o 5X dependiendo del


equipo). Para enfocar SIEMPRE se empieza con el objetivo de menor
aumento.

c. Monte la lamina sobre la platina, y sujtela con la grapilla o gancho. Asegrese de


que la muestra quede justo en la abertura de la platina y que la luz pasa a travs,
usando los tornillos de la misma.

d. Suba la platina hasta la posicin ms alta, usando el tornillo macromtrico.

e. Encienda la luz y ajuste la iluminacin. Mientras utilice el equipo se podr dar


cuenta que los objetivos de mayor poder necesitan mayor cantidad de iluminacin.

f. Mirando por los lentes oculares, use el tornillo macromtrico baje la platina hasta
que el objeto quede en foco. Ahora proceda a hacer el enfoque fino moviendo
el tornillo micromtrico hacia adelante o hacia atrs hasta que obtenga una
imagen ntida de la letra recortada. Haga sus observaciones y dibuje lo que ve.

g. Una vez que ha enfocado con el objetivo de 4X, gire el revolver para colocar el
objetivo 10X. Afine el enfoque con el tornillo micromtrico. Observe y dibuje sus
observaciones. Repita el mismo procedimiento con el objetivo de 40X.

6. Compare la posicin de la imagen en la lmina y la posicin en la imagen


producida por el microscopio, qu conclusin saca?. Mueva la preparacin hacia la
derecha y la izquierda, en qu direccin se mueve la imagen?.

7. Observe a 4X, 10X y 40X las otras muestras de agua de florero, epidermis de
cebolla y pelo humano. Con este ltimo haga observaciones con el objetivo 100X, es
decir con aceite de inmersin, siguiendo el siguiente procedimiento:

a. Una vez enfocado con el objetivo de 40X, gire el revlver hacia el objetivo de 100
X u objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de 40X.

b. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el cubreobjetos justo


donde se encuentre crculo de luz.

c. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de


inmersin. Al hacer esto, la gota de aceite debera tocar el lente de 100 X, si no
sucede, suba la platina con el tornillo micromtrico. RECUERDE: El uso del aceite
de inmersin es nicamente para evitar que el lente de 100X se raye, pues por lo
general al usarlo hace contacto directo con la laminilla. RECUERDE: NUNCA
mueva el tornillo macromtrico cuando este observando con los lentes de 40X y
100X.

d. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el


objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, por lo que debe estar
pendiente de que el lente no ejerza demasiada presin y rompa la lamina.
e. Una vez que se ha puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite.

f. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca


el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se
puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo
de inmersin en posicin de observacin.

g. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando papel de arroz.


Comprobar tambin que el objetivo 40X est perfectamente limpio.

7. CALCULO DEL AUMENTO TOTAL

Para calcular el aumento total obtenido al observar las muestras se usa la siguiente
frmula:

Magnificacin total= magnificacin del objetivo x magnificacin del ocular.

Qu le sucede al tamao de un objeto cuando se observa en aumentos crecientes?. El


objeto se observa ms grande o ms pequeo?. El campo de visin del microscopio es el
rea que se explora con el microscopio en un determinado aumento. Qu le sucede al
campo al incrementar los aumentos? Cundo se observa un campo mas amplio, en
4X o 40X?

8. MANEJO DE RESIDUOS:

Reactivos qumicos:

Los residuos que contengan lugol deben descartarse en el recipiente etiquetado


como SOLUCIONES ACUOSAS INORGNICAS.

Los residuos que contengan azul de metileno deben descartarse en el recipiente


etiquetado como SOLUCIONES ACUOSAS INORGNICAS.

Material orgnico:

Los residuos de materiales como pera, papa, huevo, mantequilla y gelatina deben
disponerse en la caneca de residuos ordinarios identificada con una bolsa negra,
en este mismo contenedor puede descartarse el papel de arroz utilizado.

Cortopunzantes:

Las laminas y laminillas rotas deben disponerse en los guardianes de seguridad.


Nunca dejar los trozos sobre los mesones o en los fregaderos porque pueden
provocar cortaduras e infecciones a otros usuarios del laboratorio.

Elementos de proteccin personal:

Disponga los elementos de proteccin personal en las canecas rotulada como


GUANTES Y COFIAS Y TAPABOCAS RESPECTIVAMENTE.

SI LOS RECIPIENTES PARA LA DISPOSICIN DE RESIDUOS SE ENCUENTRAN


LLENOS O NO ESTN DISPONIBLES POR FAVOR COMUNQUELO AL
LABORATORISTA PARA QUE SE REALICE SU REMPLAZO. NUNCA REALICE
VERTIMIENTOS POR EL DESAGE, LIMPIE LOS RESTOS DE MATERIAL
UTILIZADO QUE QUEDEN EN EL FREGADERO PARA EVITAR EL TAPONAMIENTO
DE LAS TUBERAS.

8. CUESTIONARIO

1. Identifique las partes del microscopio

A. E. I.
B. F. J.
C. G. K.
D. H. L.
2. Desde el punto de vista ptico, qu tipo de imagen se produce en el microscopio y por
qu?

3. Cuando se observa en el microscopio, cmo se debe mover un punto en la muestra


que se encuentra en el extremo inferior derecho del campo para colocarlo en el centro de
la imagen?. Utilice las palabras atrs, adelante, derecha, izquierda.

4. Qu es poder de resolucin y aumento?

5. Cul es la diferencia entre magnificacin y resolucin?

6. Cuanto mide el dimetro del campo visual observando con menor aumento? Utilice
una regla para medirlo. a. En milmetros b. En micras c. En nanmetros
___ d. En Angstrom____________

7. Qu papel desempea el aceite de inmersin?

7. BIBLIOGRAFA

- Daz, R. Gamazo, C. Lopez--Goi, I. Manual prctico de microbiologa. (1995).


- Corts, J. (s.f.). Recursos didcticos para Biologa: Manejo y uso del
microscopio ptico compuesto. Recuperado el 20 de agosto de
2012. de junio de, http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm
- Thompson, R & Thompson, B. Ilustrated guide to home Biology experiments, All
lab, no Lecture. Published by Make:Books, an imprint of Maker Media, a division of
OReilly Media, Inc.
- 2012.
- Vodopich, D. S., & Moore, R. Biology Laboratory Manual .(6th ed.).New York:
McGraw Hill. (2002)
- Chagoya, H, et al. Manual de prcticas de la materia de biologa general.
Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo. Facultad de Biloga. (2011).
Recuperado el 20 de Agosto de 2012 de:
bios.biologia.umich.mx/files/manualbiologiageneral.pdf