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INGENIERA BIOQUMICA

Practica 1.- Cuantificacin de Protenas


Alumnos: Bojrquez Moreno Andry, Cencea Heras Silvia Mara, Ruiz Meza Daniela,
Vzquez Camacho Jess Ivn, Yucupicio Lugo Lizbeth.
Docente: Dra. Castro Ochoa Lelie Denise
Bioqumica del Nitrgeno y Regulacin Gentica Grupo:T10
TECNOLGICO NACIONAL DE MXICO. Instituto Tecnolgico de Los Mochis.
A 18 de Septiembre de 2017

Resumen. Es un enunciado resumido del contenido de la prctica y organizado secuencialmente (menos


de 100 palabras). Establece brevemente el problema y propsito de la prctica. Indica el plan terico o
experimental a que se sigui. Resume las principales aportaciones y principales conclusiones. Importante:
El resumen es la informacin condensada que el profesor recibe de la prctica realizada. Debe ser corto y
claro para que el profesor determine si se entendi y realizo correctamente la prctica. I Sper Importante:
Escribe el resumen al ltimo para estar seguro que refleja con exactitud la prctica realizada.

otras sustancias que pudieran interferir y la


Introduccin facilidad y reproducibilidad del mtodo.
(Garca, H y Vzquez, R, 1998) 1 .El
Sin duda alguna la cuantificacin de
mtodo ms adecuado para esta
protenas es una de las determinaciones ms
cuantificacin es el mtodo de Bradford.
usadas en el campo de la bioqumica.
Este mtodo involucra la unin del
Estimar la concentracin de protenas es
colorante Azul Brillante de Coomasie G-
necesario porque en algunos casos es una
250 a las protenas, provocando un cambio
medida indirecta del crecimiento de
en el mximo de absorcin de 465 a 595
colonias bacterianas, la concentracin de
nm, el mtodo est basado en la
protenas es un dato revelador que sirve
observacin de que el colorante presenta
para identificar y dar a conocer
dos formas coloreadas, azul y rojo. El color
informacin. Existen mtodos variados para
rojo pasa a azul cuando el colorante se une
la determinacin de protenas, por ejemplo
a la protena. La formacin del complejo
el mtodo de Kjeldahl que se basa en la
colorante-protena toma aproximadamente
determinacin del nitrgeno total de la
dos minutos y permanece estable por una
muestra, en este las protenas son digeridas
hora (Reisner, A. H, 1975) 2 .Es necesario
en un medio cido y el nitrgeno total
construir una curva de calibracin para
determinado por titulacin; el mtodo de
determinar la concentracin de la muestra,
Lowry se realiza con cobre y el reactivo
el mtodo se basa en la unin especifica del
Folin es un mtodo sensible que no requiere
colorante a los residuos Arg, Trp, Tyr, His y
digestin previa; el mtodo BCA que es un
Phe de las protenas. Entre las interferencias
mtodo altamente sensible que combina la
del mtodo se encuentran los buffers
reaccin de las protenas con Cu +2 en un
altamente alcalinos, reactivos como Tris,
medio alcalino.
cido actico, 2-mercaptoetanol, sacarosa,
El uso del mtodo adecuado depende de la glicerol, EDTA y trazas de los detergentes
cantidad total de protena presente en la Triton X-100, dodecil sulfato de sodio y
muestra, la concentracin de la protena, la Hemosol, estos ltimos pueden ser
especificidad del mtodo, la presencia de fcilmente eliminados preparando buffers
adecuados. La presencia de grandes Para preparar la muestra problema se
cantidades de detergentes presenta una gran tomaron 300 L de extracto enzimtico
interferencia (Stoscheck CM, 1990) 3 previamente preparado con una
concentracin X. Se diluy con 500 L
El objetivo de esta determinacin es
de agua destilada y finalmente se le aadi
cuantificar en concentracin de g/Ml el
200 L del reactivo de Bradford.
contenido de protena en una muestra de un
extracto enzimtico de penicilium con un Los estndares, al igual que la muestra
soluciones estndar para la curva de problema, se leyeron en el
calibracin de albumina de huevo. espectrofotmetro a 595nm. Primero se
calibr el espectrofotmetro con agua
Materiales y Mtodos
destilada, despus se ley el blanco y se
Se necesitaron 10 microtubos marca ajust a cero, enseguida se leyeron los
eppendorf de 1.5mL, dos micropipetas estndares de forma consecutiva y al final
1/100 L, una micropipeta 10/1000 se ley la absorbancia de la muestra.
L, puntas para pipeta de 200 L,
puntas para pipeta de 1mL y una gradilla. El
reactivo utilizado fue el reactivo de Resultados y discusin
Bradford concentrado. Los estndares se
hicieron con albmina de huevo. Las palabras resultados y discusin van con
letra negrita, el resto del texto en letra
Para preparar la solucin testigo de normal. En esta seccin, se podrn incluir
concentracin conocida se pesaron Xmg de tablas o figuras.
albmina de huevo y se llev a YmL
obteniendo una solucin de 2mg/mL.
Enseguida se diluy esta solucin a 10mL El propsito de la discusin es interpretar y
para obtener 0.2mg/mL de albmina de comparar los resultados obtenidos.
huevo. Importante: Se objetivo y enfcate en las
Despus se realizaron 9 estndares. Las ventajas y desventajas del trabajo
cantidades necesarias para la preparacin de experimental. Relaciona tus resultados, a lo
los estndares se muestran en la tabla que has aprendido en tu clase de teora o a
siguiente. lo que has aprendido por otros medios.
Resolviste el problema?, En qu
Solucin Reactivocontribuyo en ti, esta prctica?, Qu
H2O (
# tubo Testigo ( Bradfordaportaste?
( Si tus datos son extraos, trata de
L)
L) localizar la posible fuente de error
blanco 800 0 200
1 790 10 200
2 780 20 200
3 770 30 200
4 760 40 200
5 750 50 200 En un espacio como este puedes colocar una figura, asegrate de
6 740 60 200 escribir las unidades correctamente y de que los nmeros y
7 730 70 200 smbolos sean los adecuados, usa letra de tamao 9
8 720 80 200
Fig. 1. Las figuras llevan una descripcin corta al en letra tamao 9. Los ejemplos a
pe, centrada con letra tamao 9,con letra times continuacin son para artculo, captulo de
new roman y cursiva. libro memorias de congreso y pginas web
respectivamente.
1. Garca, H y Vzquez, R. (1998). Cuantificacin de
En caso de que incluyas una tabla recuerda
protenas: una revisin. BioTecnologa. vol (3): 1-3.
que el ttulo de sta va en la parte de arriba
contrario a una figura. 2. Reisner, A. H.; Nemes, P y Bucholtz, C.
Bioqumica Analtica, (1975).

3. Stoscheck CM. Quantitation of Protein. 1990.


Bibliografa Methods in Enzymology 182, 50-69.

4. http://www.revista.unam.mx/vol.17/num2/art14/
La palabra bibliografa se escribir en letra
negrita en tamao 10, las citas se escribir