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UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


CARRERA DE LABORATORIO CLNICO

TEMA:

ASIGNATURA:

Biologa Molecular

Nombres:

Maritza Carrasco
Sonia Latacunga
Mara Fernanda Manzano
Mara Fernanda Snchez
Grimanesa Tobar

Docente:

PhD: Marisel De Lucca

Ambato
2016
INFORME DE PRCTICAS #5 y 6

1. Calcular las concentraciones finales de cada uno de los componentes la mezcla de


pcr (buffer 10x, dntps 25mm, mgcl2 50mm, primers 20pmol/ul, taq polimerasa
5u/ul, adn), tomando en cuenta la concentracin inicial y el volumen final de 5oul.

2. Buscar las caractersticas de la enzima taq polimerasa recombinante utilizada


(marca INVITROGEN).

3. Explicar cada uno de los pasos de los ciclos de la PCR.

4. Realizar los clculos de todos los reactivos (TAE 50x, agarosa, SYBR SAFE
10000x) utilizados en la electroforesis a partir de las concentraciones iniciales en el
volumen final de 60 ml. Explicar cmo se prepara el gel de agarosa utilizado para
la PCR y para la digestin.

5. Buscar la informacin del marcador de peso molecular utilizado para la


electroforesis TRACKIT 100pb (marca INVITROGEN cat# 10588-058).

6. Cul es el tamao del fragmento a amplificar en la PCR?

7. Cul es el tamao de los fragmentos obtenidos al digerir el producto de pcr


anterior con la enzima HINFI?

8. Describir las caractersticas de la enzima HINFI (THERMO FISHER).

Corta de mejor manera a 37C.


100% activas en los tampones de reaccin.
El tampn universal permite una rpida digestin de ADN simple, doble o multiple
en 5-15 minutos, eliminando cualquier necesidad de cambio de tampn o pasos
subsiguientes de limpieza de ADN.
Control de calidad de calidad superior y proceso de fabricacin lder en la industria
Sistema de Cinco Buffer Conveniente codificado por colores
Incluye tampn Tango universal para doble digestin
BSA premezclado en tampones de reaccin, lo que aumenta la estabilidad de
muchas enzimas y se une a los contaminantes que pueden estar presentes en las
preparaciones de ADN.
Amplia seleccin de especificidades de endonucleasas de restriccin.
Carga directa en geles.

9. Qu mezcla utilizamos para hacer la digestin?

10. Identificar en el gel de PCR y de digestin los fragmentos obtenidos y pares de


bases a los que corresponde las bandas del marcador de peso molecular.

11. Con cuntas pares de bases migran los colorantes (G7654 SIGMA GEL
LOADING SOLUTION 6x), azul de bromofenol, xylene cyanol ff y tartrazine
(TRACKIT 100 bp DNA LADDER)?

G7654 SIGMA GEL LOADING SOLUTION 6x

- AZUL DE BROMOFENOL: siempre corre ms rpido que el xileno Ciano,


migra con ADN de 15-100 pb (dependiendo de Concentracin de gel)
- XYLENE CYANOL FF: migra con aproximadamente 45-460 pb de ADN
(dependiendo de la concentracin de gel)

TRACKIT 100 BP DNA LADDER

- TARTRAZINE (): La Escala de ADN de 100 bp de TrackIt es adecuada para


dimensionar fragmentos de ADN de doble hebra de 100-1.500 pb.

12. Indicar en el gel de electroforesis las bandas que se observan en cada carril y decir
a que pertenecen.

https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10488058

https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-
aldrich/docs/Sigma/Datasheet/g7654dat.pdf

https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/FD0804