Dado que la cantidad de pruebas genticas realizadas ha aumentado rpidamente en la

ltima dcada, tambin lo han hecho las diferentes metodologas de pruebas genticas que
se han utilizado. El tipo de prueba depende del tipo de anomala que se est evaluando. En
terminus generales, hay tres tipos de pruebas genticas disponibles: citogenticas,
bioqumicas y moleculares utilizadas para detectar anomalas en la estructura de los
cromosomas, en el funcionamiento de las protenas o en la secuencia del ADN,
respectivamente.
Pruebas citogenticas. La citogentica estudia los cromosomas para identificar las
anomalas estructurales. Los cromosomas de una clula humana en divisin pueden
analizarse fcilmente en glbulos blancos, especialmente los linfocitos T, que se obtienen
fcilmente de la sangre. Las clulas de otros tejidos como la mdula sea o el lquido
amnitico tambin se pueden cultivar para la llevar a cabo un anlisis citogentico. Tras
varios das de cultivo celular, los cromosomas se fijan, se distribuyen en las lminas
portaobjetos para microscopio y se tien. Los mtodos de teido para los anlisis de rutina
permiten identificar a los cromosomas en forma individual. Las diferentes patrones de
bandas de cada cromosoma revelados por el teido permiten analizar cada una de las
estructuras cromosmicas.
La hibridacin fluorescente in situ (FISH, por sus siglas en ingls) es un proceso que tie
con colores vivos los cromosomas o partes de los cromosomas con molculas fluorescentes
para identificar anomalas cromosmicas (p. ej., inserciones, eliminaciones, translocaciones
y amplificaciones). El proceso FISH se usa con regularidad para identificar las
eliminaciones cromosmicas especficas asociadas con sndromes peditricos como el
sndrome de DiGeorge (la eliminacin o prdida de parte del cromosoma 22, tambin
denominada del22) y algunos tipos de cncer como la leucemia mielgena crnica (la
translocacin de los cromosomas 9 y 22).
Pruebas bioqumicas. Las pruebas clnicas para detectar una enfermedad bioqumica usan
tcnicas que analizan las protenas, pero no los genes. Muchas enfermedades genticas
bioqumicas se conocen como "anomalas congnitas del metabolismo" porque estn
presents al nacer y afectan un proceso metablico clave. Segn la enfermedad, las pruebas
pueden realizarse para medir directamente la actividad de las protenas (medicin directa de
la actividad enzimtica), el nivel de metabolitos (medicin indirecta de la actividad
enzimtica) y el tamao o la cantidad de protenas (estructura de las protenas). Para estas
pruebas se necesita una muestra de tejido que contenga la protena, por lo general, la
sangre, la orina, el lquido amnitico o el lquido cerebroespinal. Dado que las protenas
pueden ser menos estables que el ADN y el ARN y que pueden degradarse rpido, las
muestras deben obtenerse y almacenarse en forma adecuada y luego transportarse de
inmediato segn las instrucciones del laboratorio.
Hay una variedad de tecnologas como la cromatografa lquida de alto rendimiento (HPLC,
por sus siglas en ingls), la cromatografa lquida/espectrometra de masa (GC/MS, por sus
siglas en ingls) y la espectrometra de masas en tndem (MS/MS, por sus siglas en ingls)
que permiten tanto la determinacin cualitativa como cuantitativa de los metabolitos.
Adems, los bioanlisis pueden usar otros mtodos como la fluorometra, la radioisotopa o
la cromatografa en capa fina.
Pruebas moleculares. El anlisis directo de ADN se realiza cuando se conoce la secuencia
del gen de inters. Para las pequeas mutaciones de ADN, las pruebas directas de ADN
suelen ser el mtodo ms eficaz, en particular, si se desconoce el funcionamiento de la
protena y no se puede desarrollar una prueba bioqumica. Se puede realizar una prueba de
ADN en cualquier muestra de tejido, incluso con muestras muy pequeas. Para realizar las
pruebas, se pueden usar diferentes tecnologas moleculares, como la secuenciacin directa,
los ensayos de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en ingls) y la
hibridacin. La tcnica de PCR es un procedimiento usado para amplificar los segmentos
deseados de ADN a travs de la repeticin de los ciclos de desnaturalizacin (separacin
del ADN de doble cadena inducida por calor), el apareamiento (unin de cebadores
especficos del segmento deseado a una cadena parental de ADN) y la elongacin
(extensin de las secuencias cebadoras para formar una nueva copia de la secuencia
deseada). Se pueden realizar otras pruebas sobre el producto amplificado. En el caso de
algunas enfermedades genticas, se pueden dar muchas mutaciones diferentes en el mismo
gen y causar una enfermedad, lo que puede dificultar las pruebas moleculares. Sin embargo,
si la mayora de los casos de una enfermedad gentica en particular se debe a un pequeo
nmero de mutaciones, primero se verificar dicho grupo de mutaciones y luego se
realizarn pruebas ms a fondo como la secuenciacin.
La hibridacin genmica comparativa (CGH, por sus siglas en ingls) o anlisis de
micromatrices cromosmicas (CMA, por sus siglas en ingls) es un mtodo citogentico
molecular para analizar las ganancias o prdidas del ADN y que no son detectables con los
anlisis cromosmicos de rutina. Este mtodo se basa en la proporcin entre el ADN del
paciente etiquetado con molculas fluorescentes y el ADN normal de referencia. La tcnica
CGH puede detectar pequeas eliminaciones o duplicaciones, pero no las modificaciones
cromosmicas como las inversiones o las translocaciones recprocas equilibradas o las
alteraciones en el nmero de copias de cromosomas.
El anlisis de micromatrices del ADN, tambin conocido como anlisis de
genes/genoma/AND es una herramienta que se usa para determinar la expresin gentica.
Las molculas de ARNm unen, o hibridan, especficamente a una plantilla de ADN, por lo
general, un gen entero o parte del cual se origin. Cuando una micromatriz contiene
muchas plantillas de ADN, el nivel de expresin de los cientos de miles de genes en una
sola muestra del paciente se puede medir usando una computadora para detectar la cantidad
de ARNm unida a cada sitio en la micromatriz.
El anlisis de micromatrices de protenas se usa para determinar la cantidad de protenas
presentes en una muestra biolgica. Casi al igual que el anlisis de micromatrices
cromosmicas y del ADN, la hibridacin de protenas marcadas en una muestra del
paciente se mide en comparacin con la muestra de referencia. La presencia, ausencia,
aumento o reduccin de una protena en particular (variaciones conocidas como
"marcadores biolgicos" o "biomarcadores"), puede indicar enfermedad en una persona.
Por ejemplo, se puede analizar el lquido cerebroespinal de un paciente y evaluar la
presencia de protenas tau o betaamiloides para diagnosticar el mal de Alzheimer.