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CITOGENTICA

Laura Rengifo
Supervisora

Marta Luca Bueno Angulo


Coordinadora

Laboratorio de Citogentica
Instituto de Gentica
Citogentica
Orgenes

Generalidades Cariotipo Humano

ndices para la determinacin de la Morfologa


Cromosmica.
Tipos de Bandas.
Morfolgicas
Dinmicas

Relacin estructura cromatina y bandas


Tipos de Bandas Morfolgicas ( Q; G; R; C, NOR).

Nomenclatura (ISCN)
CITOGENTICA
Estructura Funcin Evolucin
Mitosis

Meiosis

Cambios
CARIOTIPO

Conjunto de cromosomas de una clula o


individuo que representa el complemento
completo.
Permite el estudio morfolgico de los pares por
tamao , morfologa y patrn de bandas
ORGENES
ERAS DE LA CITOGENTICA
Oscurantismo: Descripciones cromosmicas mediante
esquemas - 1879 (Arnold)
1891 (Hansermann)
1912 (Hans von Winiwarter)
1937 (Koller)

Hansemann Hans von Winiwarter


Era de la Hipotnica
Tijo y Levan (1956) Determinacin del
nmero correcto de cromosomas en humanos

Tijo Levan
Era de las trisomas
Lejeune 1959 Sindrome de Down
Ford 1959 Sindrome de Turner
Jacobs y Strong 1959 Klinefelter.
Era de Bandeamientos

Dcada de los 60s-70s (Lejeune-Patau) comienzan a


desarrollarse pruebas de tincin cromosmica que
dieron origen a las bandas cromosmicas

Primeras pruebas con soluciones diluidas de enzimas


proteolticas (tripsina, pepsina) o soluciones salinas
(2xSSC)

Lejeune - 1966
Patau - 1961
Nomenclatura cromosmica
Denver 1960
Era Molecular

http://www.molecularstation.com/molecular-biology-images/data//502/46-chromosomes.jpg

bio.davidson.edu
http://1.bp.blogspot.com/_o5Yoa9qUx1Y/TBsxPpwpLKI/AAAAAAAAAC8/WZ_E1rMDsXM/s1600/gena_h1.jpg
material gentico
organizado
Divisin: Empaquetado: cromosomas
ADN, histonas y
Interfase protenas no histnicas

Divisin
CICLO CELULAR
CROMOSOMA

Brazo p

Cromos color
Soma Cuerpo

Brazo q

http://ytchang.science.nus.edu.sg/book/html/e001.html
CARACTERSTICAS MNIMAS PARA
SUPERVIVENCIA= ESTABILIDAD CROMOSMICA

Centrmero Segregacin

Telmero Supervivencia e
integridad

Regiones NOR Regin organizadora


Nucleolar
Varios niveles de
enrollamiento:
Nucleosoma: 100 A : 6
Solenoide: 300 A: 40

Lazos o dominios: 3000 A


CENTRMERO
TELMEROS
REGIONES NOR

En el caso de la especie humana, existen cinco


pares de cromosomas que poseen regiones
NOR, los pares 13, 14, 15, 21 y 22.
CITOGENTICA CLSICA
Estudio de los cromosomas
Tamao (Grandes - Medianos - Pequeos)
Morfologa (Metacntricos - Submetacntricos - Acrocntricos)
Patrn de Bandas Tinciones Diferenciales
Funcin: Autosomas vs cromosomas sexuales

grande mediano pequeo


metacntrico submetacntrico acrocntrico

http://learn.genetics.utah.edu/content/begin/traits/scientists/metacentric.gif
CICLO CELULAR
PASOS BSICOS PARA EL
ANALISIS DE LOS CROMOSOMAS
1. Cultivos de clulas en medio con mitgeno
adecuado. (Fitohemaglutinina)
2. Acumulacin de clulas en metafase.
(Colchicina).
3. Hinchamiento de las clulas por tratamiento
hipotnico.
4. Fijacin adecuada del material con Carnoy
fresco y fro.
5. Dispersin de cromosomas sobre una lmina
limpia libre de grasa.
OBTENCIN DE METAFASES
METAFASE

Linfocito

LinfoBlasto
Los cultivos y variaciones en las condiciones y
medios de los cultivos de clulas han sido
adoptados para:
1. Obtener una alta frecuencia de divisiones
celulares.
2. Lograr una mejor morfologa de los
cromosomas.
3. Estimular las clulas para que se dividan o
aumentar la tasa de proliferacin de las clulas
que estn dormantes o que son benignas in
vivo.
CARIOTIPO FEMENINO NORMAL

GRUPO A GRUPO B

GRUPO C

GRUPO D GRUPO E

GRUPO F GRUPO G
CARIOTIPO MASCULINO NORMAL

GRUPO A GRUPO B

GRUPO C

GRUPO D GRUPO E

GRUPO F GRUPO G
BANDEOS CROMOSMICOS

Parte del cromosoma que puede ser


distinguida de segmentos adyacentes por
aparecer de forma oscura o clara en ms
de una tcnica de coloracin (ISCN -1971)
Los patrones de bandas son especficos
para cada cromosoma
CROMATINA
Eucromatina Rica en genes activos. Gran
cantidad de G-C
Heterocromatina Pobre en genes activos. Gran
cantidad de A-T
Constitutiva
Facultativa

http://recursos.educarex.es/escuela2.0/Ciencias/Biologia_Geologia/biologia_celular/images/cromatina2.jpg
RELACIN ENTRE DENSIDAD DE GENES
Y CONTENIDO DE GC
TIPOS DE BANDEOS
MORFOLGICO
Estructura y Modelo Cromosomico
Se obtienen basndose en tcnicas inherentes a la
heterogeneidad de la cromatina.
Existe en ellos una relacin con protenas (histnicas
y no histnicas) e interacciones ADN
DINMICO
Se obtienen con tcnicas que implican la
incorporacin de una base anloga, bromo-
desoxiuridina (BrdU), en el ADN durante la fase S
del ciclo celular. Se denomina tambin bandeo de
replicacin debido a la relacin existente entre el
tiempo de incorporacin del BrdU y el patrn de
replicacin
BANDEOS MORFOLGICOS
http://img.springerimages.com/Images/SpringerBooks/PUB=Humana_Press-Totowa,_NJ/BSE=7651/BOK=978-1-
59745-294-6/CHP=19_10.1007-978-1-59745-294-6_19/MediaObjects/WATER_978-1-59745-294-
6_19_Fig2_HTML.jpg

http://www-dna2006.cea.fr/laemmli.png
Saitoh y Laemmil 1994
TCNICAS DE BANDEO
Diferenciales: Banda Q, G y R
No diferenciales: Banda C y NOR
Banda Q Banda G Banda R

Cromosoma 7 humano en distintas tcnicas de bandeo cromosmico diferencial


BANDEO Q
Caspersson et al
(1970)
Utilizacin de un
colorante
fluorescente:
Mostaza de
Quinacrina afn
a regiones ricas en
AT
Se observan bandas
con diferentes
intensidades de
fluorescencia
UTILIDAD BANDA Q
REGIN I
TDF: Factores de diferenciacin testicular.
Gen SRY: mejor Candidato para los TDF
Localizacin: Brazos cortos del Y

Bivalente Meiotico
Sexual
BANDEO G
Arrighi & Hsu
1971; Summer
1972
Mediante la
utilizacin de
soluciones salinas
y enzimas
proteolticas
Patrn de bandeo
similar a G
bandas
fluorescentes (Q+)
tien oscuro en
bandeo G (G+)
IDIOGRAMAS
Es la representacin esquemtica del tamao, forma y patrn de
bandas de todo el complemento cromosmico.
UTILIDAD
BANDEO R BANDAS DINMICAS
Dutrillaux y
Lejeune (1971)
Exposicin a una
solucin bsica en
altas
temperaturas
muy baja
resolucin
Exposicin a
soluciones salinas
en calor e
irradiacin.
Genera bandas
reversas al patrn
de Bandeo G
Cromosoma
x
Hembras XX

Un X se inactiva

Cuerpo de Barr
TIPOS DE BANDEO COMPARACION DE
BANDAS DIFERENCIALES

Banda Q Banda G Banda R

Cromosoma 7 humano en distintas tcnicas de bandeo cromosmico diferencial


BANDA C
Seabright, 1971
Desnaturalizacin
del DNA
utilizando
soluciones cidas
y bsicas fuertes
Solo se
visualizan las
regiones
centromricas y la
porcin distal del
Y
UTILIDAD BANDA C
BANDA NOR
Regiones Organizadoras
Nucleolares (NOR)
teidas mediante Nitrato
de Plata

NOR producen el RNAr


que es necesario para toda
la sntesis de protenas en
la clula

No todos los sitios NOR se


marcan en una clula.
Solo los
transcripcionalmente
activos durante el ciclo

Se encuentran en la
regin satelital de los
cromosomas acrocntricos
CITOGENTICA
MOLECULAR
PRINCIPIO BSICO
HIBRIDIZACIN IN SITU
METAFASE INTERFASE
Metafase / Interfase
CITOGENETICA
INTERFASICA
Example metaphase spread analysed using SKY FISH. Showing der(2)t(2;12;8) (a), der(15)t (20;15) (b),
der(6)t(6;19;12;8) (c). From:Variation between independently cultured strains of the MDA-MB-231 breast cancer
cell line identified by multicolour fluorescence in situ hybridisation. Mark B. Watson, et al. 2004
NOMENCLATURA

46,XX
ANEUPLOIDAS
Aumento o prdida de cromosomas sexuales o
autosomas Trisomas, Monosomas
47,XY,+21
APLICACIONES

Trisoma 13
-Pre o post natal

47,XX,+13
TRASLOCACIONES
46,XX,t(9;22)(q34;q11)
OTROS TIPOS DE ABERRACIONES
Deleciones Falta de un segmento cromosmico

46,XY,del(5)(p15)
Inversiones Cambio de direccin de un segmento cromosmico
46,XY,inv(9)(p12q12)
ES RECOMENDABLE REALIZAR UN
CARIOTIPO DE UN INDIVIDUO :
Para confirmar sndromes congnitos.
Cuando se observan algunas anomalas especficas o
que pueden estar relacionadas con los heterocromatina.
En situaciones de abortos repetidos, problemas de
esterilidad.
En casos de retardo Mental
UTILIDAD CLNICA
Complemento al anlisis clnico de los pacientes
dentro del proceso de asesoramiento gentico
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA CITOGENTICA
CONVENCIONAL
GRACIAS
Contacto: lyrengifoco@unal.edu.co

kmarsh2.umwblogs.org