UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PER

VICE RECTORADO ACADMICO

CENTRO DE IDIOMAS
TRABAJO DE TRADUCCIN

ACREDITACIN DEL IDIOMA: INGLS

DESARROLLO DE UN CONCRETO AUTO-GENERANTE

BASADO EN BACTERIAS.

Development of a bacteria-based self healing

concrete.

DOCENTE: MOISES, MENDOZA ALVAREZ

ALUMNO: CRISTHIAN ERICK, ARELLANO VEGA

HUANCAYO, Enero 2017.

 DESARROLLO DE UN CONCRETO AUTO-GENERANTE BASADO EN

BACTERIAS. (ARTICULO ESPAOL)

1. INTRODUCCIN

La incidencia de la curacin autgena -o la auto-curacin de las grietas en el

concreto se ha reconocido en varios estudios recientes (Neville 2002, Reinhardt y

Jooss 2003). Sin embargo, la capacidad para la curacin de grietas en la mayora de

los tipos comunes de concreto parece estar limitada a micro-grietas, es decir, grietas

con anchos de hasta 0,1-0,2 mm (Li & Yang 2007; Edvardsen 1999). El mecanismo

del proceso de auto-curacin puede realmente diferir, ya que depende

principalmente de la composicin de la mezcla de concreto. Por ejemplo, se ha

observado la curacin de grietas en el mortero de edificios de ladrillos de siglos de

antigedad en los canales de msterdam, y aqu el proceso contribuy a la

disolucin y re-precipitacin del carbonato de calcio dentro de la matriz de mortero a

base de cal. El agua penetrante de grietas no slo disolvera las partculas de calcita

(CaCO3) presentes en la matriz de mortero, sino que tambin reaccionara junto con

el dixido de carbono atmosfrico con componentes de cal completamente

hidratados, tales como xido de calcio e hidrxido de calcio, de acuerdo con las

siguientes reacciones:

Los minerales recin producidos a partir de las reacciones mencionadas

anteriormente (1) y (2) y de minerales de calcita disueltos y recristalizados

precipitaron sobre la superficie de grietas que dieron como resultado el sellado de

grietas y la reduccin concomitante en la permeabilidad del mortero.

El potencial de cicatrizacin de este sistema estaba directamente relacionado con la

cantidad de partculas de cal no reaccionadas dentro del mortero fijado. Las

estructuras de concreto modernas, usualmente basadas en cemento Portland con

porcentajes variables de reemplazos de cemento tales como cenizas volantes, humo

de slice o escorias de alto horno, tambin tienen cierto potencial para la curacin

autnoma de grietas. Sin embargo, el proceso en este concreto moderno es anlogo

al de los morteros a base de cal, el exceso de Slo partculas de cemento

parcialmente hidratadas sufren hidratacin retardada o secundaria con agua de

entrada. Especialmente concreto producido con mezclas caracterizadas por una

relacin de peso de agua a cemento baja, tal como concreto de alta resistencia o

concreto armado de fibra de polmero (Li & Yang 2007) pueden presentar alto

potencial de cicatrizacin debido a la cantidad relativamente alta de partculas de

cemento no reaccionadas presentes en la matriz de concreto. Un alto potencial de

curacin de grietas de estructuras de concreto es beneficioso, ya que hace que el

material ms fuerte y sobre todo ms duradero. Una cicatrizacin continua de grietas

particularmente superficiales da como resultado una permeabilidad disminuida del

material y un riesgo significativamente reducido de degradacin prematura de la

matriz y corrosin del refuerzo de acero incrustado debido al agua de entrada y

productos qumicos agresivos. Una de las razones por las que el concreto tradicional

no se basa rutinariamente en una baja relacin agua-cemento y en el alto potencial

de auto-curacin concomitante es el alto costo involucrado. Por otra parte, la poltica

actual es reducir la cantidad de cemento necesaria en una mezcla de concreto, ya

que su produccin es ambientalmente hostil debido al alto consumo energtico y a

las emisiones atmosfricas de CO2 asociadas (Gerilla et al. 2007; Peris Mora 2007).

Sin embargo, el concreto con bajo contenido de cemento, es decir, basado en una
alta relacin agua / cemento, probablemente no presentar una capacidad de

curacin de grietas autgena significativa ya que la mayora, si no todas, las

partculas de cemento ya han experimentado hidratacin completa durante la edad

temprana. Por lo tanto, para mejorar la durabilidad de tal concreto relativamente

barato y ambientalmente sostenible, es probable que se incorpore un mecanismo

alternativo de autocuracin. Uno de estos mecanismos puede ser posiblemente

proporcionado por bacterias productoras de minerales. Los suelos naturales son el

hbitat de una gran variedad de bacterias no patgenas y varios de ellos han sido

reportados como potentes productores de bio-minerales (Stocks-Fischer et al., 1999,

Castanier et al., 1999, Douglas & Beveridge 1998). Tambin los lagos alcalinos

(Nielsen et al., 1994) e incluso ciertas piedras naturales y minerales albergan grupos

de bacterias especializadas (Clegg 2001), denominadas bacterias alcaloplicas y

endolticas respectivamente, que incluyen bacterias productoras de calcita

(Rodriguez-Navarro et al., 2003; Fajardo & Nicholson 2006, Stocks-Fischer et al.,

1999). Particularmente, las bacterias de estos dos ltimos grupos parecen

prometedoras para su aplicacin como agente de auto-curacin en el concreto, ya

que los entornos de donde provienen muestran cierta analoga con la matriz de

concreto, es decir, pedregosa y un pH altamente alcalino. El principal objetivo del

presente estudio fue, por tanto, investigar si las bacterias productoras de calcita

inmovilizadas en concreto podran representar potencialmente un mecanismo

alternativo de curacin de grietas en el concreto.

2. MATERIALES Y MTODOS

2.1 Seleccin y cultivo de bacterias productoras de calcita Las siguientes especies

de bacterias alcalifilares formadoras de esporas se obtuvieron de la Coleccin

Alemana de Microorganismos y Culturas Celulares (DSMZ), Braunschweig,

Alemania: Bacillus cohnii DSM 6307; Bacillus halodurans DSM 497 y Bacillus

pseudofirmus DSM 8715. El potencial para la formacin de esporas y la produccin

de calcita de estas cepas se ensay mediante cultivo en medios especficos. El

medio bsico estaba compuesto por 0,2 g de NH4Cl, 0,02 g de KH2PO4, 0,225 g de

CaCl2, 0,2 g de KCl, 0,2 g de MgCl2 6H2O por litro de agua ultra-pura Milli-Q ms

1 ml de solucin de elementos traza SL12B y 0,1 g de extracto de levadura. Para los

experimentos de esporulacin (formacin de esporas), se aadi NaHCO _ {3} 50

mM, Na _ {2} CO _ {3} 50 mM y citrato sdico 20 mM al medio bsico.

Para investigar el potencial de produccin de calcita de estas bacterias en medios

lquidos, se modific el medio bsico con NaHCO _ {3} 50 mM, citrato de sodio 100

mM y CaCl _ {2} 25 mM. La alta concentracin de citrato sdico en el medio

posterior fue necesaria para inhibir la formacin de calcita abitica.

2.2 Efecto de las adiciones de bacterias y sustancias orgnicas sobre la resistencia

de la pasta

Debido a que tanto las bacterias como los compuestos precursores bio-minerales

orgnicos necesitan ser incorporados en la matriz del material para obtener un

concreto autogenerante autgeno, su potencial efecto negativo sobre las

caractersticas de resistencia debe primero ser cuantificado. Por lo tanto, para

determinar la influencia sobre la resistencia a la compresin y la resistencia a la

rotura, se prepararon y ensayaron muestras de pasta de cemento con y sin

adiciones (de control). Se excluy el material agregado de la mezcla de pasta para

exponer completamente el efecto de las adiciones a la resistencia del ligante. Antes

de la adicin a la pasta fluida, se limpi un cultivo de Bacillus pseudofirmus de

residuos por medio de centrifugacin, lavado y resuspensin del sedimento celular

en agua del grifo. La suspensin limpia de esporas obtenida se diluy

posteriormente con la pasta para formar agua para obtener una densidad celular

final de piedra de cemento de 6 x 108 cm ^ {- 3}. Se ensayaron ensayos de 6

ejemplares de repeticin con dimensiones de 4 x 4 x 4 cm para comprobar la

resistencia a la compresin despus de 3, 7 y 28 das de curado. Los ensayos de

resistencia a la rotura se realizaron en cilindros de piedra de cemento (2,2 cm de

dimetro, 3 cm de altura) que contenan diferentes compuestos orgnicos que

representaban compuestos precursores bio minerales potenciales (vase la figura

3). La concentracin de sustancias orgnicas aadidas ascendi a 0,5% del peso de

cemento, y los cilindros triplicados para cada compuesto se ensayaron despus de

28 das de curado. Se utiliz cemento Portland ordinario (ENCI CEMI 32.5R) y una

proporcin en peso de cemento de 0.4 y 0.5, para muestras de bacterias y

compuestos orgnicos modificados respectivamente, para la preparacin de los

especmenes de ensayo de pasta de cemento.

2.3 Potencial productor de calcita de bacterias inmovilizadas en pasta

Se prepararon cilindros de pasta de cemento (2,2 cm de dimetro y 3 cm de altura)

con una proporcin en peso de agua a cemento de 0,5 sin adiciones adicionales

(serie A: control), con lactato de calcio (0,5% de peso de cemento serie B) y 0,5%

De lactato de calcio ms 1 108 B. esponjas cm-3 de esporas de B. (serie C).

Despus de 7 das de curado en viales de plstico sellados se cortaron cilindros en

rodajas de 0,5 cm de grosor, y posteriormente se incubaron en agua del grifo.

Las rebanadas de pasta se enjuagaron con agua destilada despus de 10 das de

incubacin y la formacin de calcita en las superficies de la muestra se examin con

un microscopio electrnico de barrido de escaneado (ESEM) Philips XL30 sin

ninguna preparacin de muestra adicional.

3 RESULTADOS

3.1 Formacin de esporas y produccin de calcita en cultivos lquidos

Las tres especies bacterianas investigadas crecieron bien en el medio especificado

de citrato de sodio y produjeron esporas copiosas durante la fase de crecimiento

exponencial tarda.

Figura 1. Formacion de Endoespora en cultivo de B.cohnii. Figura 2. Produccion de Calcite en cultivo de

k B.halodurans.

La Figura 1 muestra una imagen microscpica de luz de un cultivo de B.cohnii en el

que las endsporas producidas aparecen como esferas intracelulares brillantes. El

aspecto brillante es debido a la dispersin de luz fuerte de las endosporas de

paredes gruesas. Por otra parte, todas las bacterias demostraron potentes

productores de calcita en los medios de comunicacin modificados con cloruro de

calcio y una alta concentracin de citrato de sodio pero contenido de carbono

inorgnico relativamente bajo (Figura 2). No se observ formacin de calcita en

cultivos abiticos (mismo medio pero no inoculado con bacterias). Aunque tanto los

iones de calcio libres como el carbono inorgnico estaban presentes en este medio

especfico, no se produjo formacin de calcita abitica debido a la eficiencia de

calcificacin del citrato presente. Los cultivos bacterianos produjeron calcita, ya que

la conversin metablica de citrato result en aumento de la alcalinidad y

disminucin del potencial quelante.

Figura 3. Desarrollo de fuerza de compresin Figura 4. Resistencia a la rotura por fractura de

de control y bacterias aadiendo muestras de compuestos orgnicos-Enriquecido (0,5% del
pasta de cemento en el tiempo. peso del cemento) despus de 28 das de curado.

3.2 Resistencia de bacterias y especmenes de pasta modificados con compuestos

orgnicos como aditivos orgnicos para pegar mezclas pueden resultar en prdida

de fuerza no deseada, se investig el efecto de bacterias y compuestos orgnicos

(precursores potenciales de minerales biolgicos) sobre la resistencia a la

compresin o la resistencia a la rotura.

La incorporacin de un elevado nmero de esporas bacterianas en la pasta (6 108

cm-3) dio como resultado una disminucin de la resistencia a la compresin del

orden del 10% a 91, 92 y 93% despus de 3, 7 y 28 das Curado respectivamente

(Figura 3).

Las adiciones de diferentes compuestos orgnicos (0,5% del peso del cemento)

tambin afectaron a la resistencia a la rotura de la pasta. Sin embargo, el grado de

cambio (en comparacin con el control) vari, ya que dependa de la identidad

compuesta (Figura 4]. Seis de los 11 compuestos ensayados (extracto de levadura,

peptona, almidn, urea, poliacrilato de sodio y aspartato de sodio) dieron como

resultado una reduccin sustancial de la resistencia despus de 28 das de curado.

Sin embargo, 5 compuestos (glutamato de sodio y calcio, formiato de calcio, acetato

y -lactato) parecan no resultar en prdida de resistencia. Cabe sealar, sin

embargo, que las desviaciones estndar de los datos obtenidos fueron grandes, por

lo que estos resultados deben interpretarse con cuidado.

Figura 5A. Superficie de la muestra de la pasta Figura 5B. Especie de pasta enriquecida con
de control lactato de calcio.

Figura 5C. Formacin de partculas de calcita en la superficie de. Cohnii ms una muestra enriquecida con
lactato de calcio; Nota barra de escala.

3.3 Potencial de produccin de calcita de bacterias inmovilizadas en pasta El anlisis

ESEM de la superficie de las muestras de pasta incubadas con agua de grifo mostr

diferencias importantes entre los especmenes controlados (sin adiciones), con

lactato de calcio y el lactato de calcio,

(Figura 5A, B y C, respectivamente). En la superficie de los especmenes

enriquecidos con el control y el lactato, se formaron grupos de pequeos minerales

de calcita (2-5 m) as como filamentos en forma de C-S-H (silicato hidrato de calcio)

masivos. Por el contrario, los especmenes de pasta con lactato de calcio

incorporado ms bacterias produjeron, adems de minerales pequeos y filamentos

similares a C-S-H, precipitados de gran tamao (hasta 100 m) de calcita robusta.

4 DISCUSIONES

Aunque se desea un concreto con un alto potencial de autocuracin (crackhealing),

la adicin de agentes curativos tales como bacterias y / o compuestos qumicos

(orgnicos) a la pasta puede dar lugar a propiedades no deseadas de disminucin

de la resistencia. En este estudio se observ una prdida de fuerza de compresin

del 10% debido a la incorporacin de bacterias (B. pseudofirmus). Sin embargo, tal

prdida de resistencia puede ser aceptable cuando esto es compensado por un

aumento sustancial en la capacidad de auto-sellado de los materiales (crack). El

sistema de auto-secado de dos componentes ensayado aqu (bacterias incorporadas

ms lactato de calcio) dio como resultado la formacin de Partculas de calcita de

100 \ mu m de tamao en las superficies de las muestras en contraste con los

controles (no hay adiciones o lactato de calcio solamente), donde se formaron

partculas de tamao mucho menor. Los resultados de este estudio preliminar

indican, por lo tanto, que el sistema de dos componentes puede caracterizarse por

un potencial superior de curacin de grietas, ya que en teora pueden sellarse

grietas mayores por las partculas de calcita ms grandes producidas. Queda por

evaluar, sin embargo, hasta qu punto el aumento de la produccin de minerales

bacterianos en las superficies (de la grieta) da como resultado una permeabilidad

disminuida, y por lo tanto una mejor proteccin de la matriz de material subyacente.

Una permeabilidad reducida debida a la cicatrizacin de las grietas resultara en una

disminucin de la tasa de penetracin de productos qumicos agresivos, lo que

podra conducir a una degradacin prematura de la matriz oa la corrosin del

refuerzo de acero incrustado. La autocuracin con la ayuda de bacterias

incorporadas podra as resultar en una mejor cicatrizacin (sellado de grietas ms

grandes) en comparacin con la curacin autgena de pastas no modificadas. Se ha

observado en estudios previos que el concreto particularmente resistente,

caracterizado por una baja relacin agua / cemento, tiene una capacidad sustancial

de autocuracin (Edvardsen 1999; Neville 1999). Esto se debe a la gran cantidad de

no o solo Partculas de cemento parcialmente hidratadas presentes en la matriz de

material. Tales partculas sufrirn una hidratacin secundaria con agua de entrada

de grietas, un proceso que tambin se observ en este estudio para las muestras de

control (Figura 5A y B). La capacidad de este mecanismo auto-curativo qumico

autgeno est directamente relacionada con la cantidad de partculas de cemento no

hidratadas (totalmente) presentes en la matriz del material. El ancho mximo de

fisura que puede auto-curarse en un concreto de alta resistencia parece estar

limitado a 0,1 mm (Edvardsen 1999; Li & Yang 2007). Sin embargo, desde un punto

de vista econmico y ambiental, no se prefiere un sistema de autocuracin qumico

basado en partculas de cemento debido a los altos costos del cemento y la gran

cantidad de CO2 que se libera durante su produccin (Gerilla et al., 2007 Peris Mora

2007). Un sistema de auto-curacin de dos componentes basado en la produccin

de minerales bacterianos como se propone en este estudio sera por estas dos

razones preferentes y, adems, el tamao de los minerales producidos

bacterialmente sugiere que las grietas ms grandes podran ser curadas

potencialmente. El mecanismo de auto-cicatrizacin inducida por bacterias se basa

en la conversin metablica de compuestos orgnicos adecuados en calcita, p.

Representado por la bioconversin del formiato de calcio con portlandita presente en

la matriz de pasta:

En varios estudios anteriores, las bacterias tambin se aplicaron para la mejora de la

durabilidad o la reparacin del concreto. En estos estudios, se investig el potencial

de produccin de calcita de un grupo especial de bacterias ureolticas y su

aplicabilidad al concreto (Bang et al., 2001, Ramachandran et al., 2001, y

Ramakrishnan 2007). Sin embargo, en esos estudios las bacterias y sus sustratos

requeridos (urea ms cloruro de calcio) se aplicaron externamente, es decir, en

especmenes de concreto armado. Dado que las bacterias y los sustratos no

formaban parte de la mezcla de concreto original, este tipo de reparacin no puede

considerarse autocurable. Sin embargo, en el presente estudio, tanto las bacterias

como los compuestos precursores minerales se mezclaron con la pasta y se

convirtieron, por lo tanto, en una parte integral del material. En un estudio paralelo se

demostr que las esporas de bacterias alcaliflicas especializadas, como las

utilizadas en este estudio, sobreviven dentro de la matriz de concreto y pueden ser

activadas por una combinacin de agua (entrada) y un sustrato de crecimiento

adecuado (Jonkers 2007; Jonkers & Schlangen 2007). Lo que todava no est claro,

sin embargo, es el grado de biodisponibilidad de compuestos orgnicos mezclados

con la pasta de cemento. Queda por cuantificarse qu parte de las sustancias

orgnicas aadidas est realmente disponible para las bacterias (por ejemplo,

disolvindose en el agua capilar de la matriz) y cuya parte estar unida

qumicamente a los productos de hidratacin del cemento y siendo por lo tanto la

matriz inaccesible para las bacterias. Sin embargo, los resultados de este estudio
indican que al menos una parte de las sustancias orgnicas agregadas estaba

disponible para la conversin metablica, ya que las partculas de calcita producidas

eran mucho ms grandes en bacterias ms pasta orgnica-modificada (Figura 5C)

en comparacin con los controles.

En conclusin podemos afirmar que el sistema de dos componentes basado en

bacterias investigado parece una alternativa prometedora y definitivamente ms

sostenible a las pastas de alta resistencia que se caracterizan por un alto contenido

de cemento. Sin embargo, la capacidad de auto-curacin (crack-sellado y la

reduccin de la permeabilidad concomitante) sigue siendo cuantificado en futuros

estudios.
 DEVELOPMENT OF A BACTERIA-BASED SELF-HEALING CONCRETE.

(ENGLISH ARTICLE)

1 INTRODUCTION

The occurrence of autogenous healing -or self-healingof cracks in concrete has been

recognized in several recent studies (Neville 2002; Reinhardt & Jooss 2003).The

capacity for crack-healing in most common types of concrete, however, appears to

be limited to micro-cracks, i.e. cracks with widths up to 0.10.2mm (Li & Yang 2007;

Edvardsen 1999). The mechanism of the self-healing process may actually differ, as

it mainly depends on the composition of the concrete mixture. For example, crack-

healing in mortar of centuries-old brick buildings in Amsterdam canals has been

observed, and here the process was contributed to dissolution and re-precipitation of

calcium carbonate within the mainly lime-based mortar matrix. Crack-penetrating

water would not only dissolve calcite (CaCO3) particles present in the mortar matrix,

but would also react together with atmospheric carbon dioxide with not fully hydrated

lime constituents such as calcium oxide and calcium hydroxide according to the

following reactions:

The freshly produced minerals from the above stated reactions (1) and (2) and from

dissolved and recrystallized calcite minerals, precipitated on the surface of cracks

what resulted in crack-sealing and concomitant reduction in permeability of the

mortar.

The healing potential of this system was directly related to the amount of non-reacted

lime particles within the set mortar. Modern concrete structures, usually based on

Portland cement with varying percentages of cement replacements such as fly ash,
silica fume or blast-furnace-slag, also feature a certain potential for autonomous

crack-healing. The process in this modern concrete is, however, analogous to that of

lime-based mortars, as excess non-hydrated or only partially hydrated cement

particles undergo delayed or secondary hydration with ingress water. Particularly

concrete produced with mixtures characterized by a low water to cement weight ratio

such as high strength concrete or polymer fiber reinforced concrete

(Li&Yang 2007) may feature high crack-healing potential due to the relatively high

amount of non-reacted cement particles present in the concrete matrix. A high crack-

healing potential of concrete structures is beneficial as it makes the material stronger

and above all more durable. A continuous healing of particularly surface cracks

results in a decreased permeability of the material and a significantly reduced risk of

premature matrix degradation and corrosion of the embedded steel reinforcement

due to ingress water and aggressive chemicals. One reason why traditional concrete

is not routinely based on a low water to cement weight ratio and concomitant high

self-healing potential is the high costs involved. Moreover, current policy is to reduce

the amount of cement needed in a concrete mixture, as its production is

environmentally unfriendly due to high energy consumption and concomitant

atmospheric CO2 emissions (Gerilla et al. 2007; Peris Mora 2007). However,

concrete with low cement content, i.e. based on a high water/cement ratio, will likely

not feature a significant autogenous crack-healing capacity as most, if not all, cement

particles have already undergone full hydration during early age. Thus, to improve

the durability of such a relatively cheap and environmentally sustainable concrete, an

alternative self-healing mechanism has likely to be incorporated. One such a

mechanism can possibly be provided by mineral-producing bacteria. Natural soils are

the habitat of a large variety of non-pathogenic bacteria and several of those have
been reported to be potent bio-mineral producers (Stocks-Fischer et al. 1999;

Castanier et al. 1999; Douglas & Beveridge 1998). Also alkalic lakes (Nielsen et al.

1994) and even certain natural stones and minerals harbor groups of specialized

bacteria (Clegg 2001), termed alkaliphilic- and endolithic bacteria respectively, which

include calcite-producing bacteria (Rodriguez-Navarro et al 2003; Fajardo &

Nicholson 2006; Stocks-Fischer et al. 1999). Particularly bacteria of the latter two

groups appear promising for application as self-healing agent in concrete, as the

environments they originate from show a certain analogy with the concrete matrix,

i.e. stony, and a highly alkaline pH. The main goal of the present study therefore was

to investigate whether concrete-immobilized calcite-producing bacteria could

potentially represent an alternative crack-healing mechanism in concrete.

2. MATERIALS AND METHODS

2.1 Selection and cultivation of calcite-producing bacteria The following species of

spore-forming alkaliphilic bacteria were obtained from the German Collection of

Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ), Braunschweig, Germany: Bacillus cohnii

DSM 6307; Bacillus halodurans DSM 497 and Bacillus pseudofirmus DSM 8715.

Potential for spore-formation and calcite production of these strains was tested by

cultivation in specific media. Basic medium was composed of 0.2 g NH4Cl, 0.02 g

KH2PO4, 0.225 g CaCl2, 0.2 g KCl, 0.2 g MgCl2 6H2O per liter Milli-Q ultra-pure

water plus 1ml trace elements solution SL12B and 0.1 g yeast extract. For

sporulation (spore-formation) experiments, 50mM NaHCO3, 50mM Na2 CO3 and

20mMsodium citrate was added to the basic medium.

To investigate calcite production potential of these bacteria in liquid media, basic

medium was amended with 50mM NaHCO3, 100mM sodium citrate and 25mM
CaCl2. The high concentration of sodium citrate in the later medium was needed to

inhibit abiotic calcite formation.

2.2 Effect of bacteria and organics additions on paste strength

As both bacteria and organic bio-mineral precursor compounds need to be

incorporated in the material matrix to obtain an autogenous self-healing concrete,

their potential negative effect on strength characteristics must first be quantified.

Therefore, to determine the influence on compressive and splitting-tensile strength,

cement paste samples with and without (control) additions were prepared and tested.

Aggregate material was excluded from the paste mixture in order to fully expose the

effect of additions to binder strength. Before addition to the fluid paste, a B.

pseudofirmus culture was cleaned from medium residues by centrifugation, washing

and suspension of the cell pellet in tap water. The obtained clean spore suspension

was subsequently diluted with the paste make up water to obtain a final cell density

of 6108 cm3 cement stone. Sets of 6 replicate test specimens with dimensions of

444 cm were tested for compressive strength after 3, 7 and 28 days curing.

Splitting-tensile strength tests were performed on cement stone cylinders (2.2 cm

diameter, 3 cm height) containing different organics representing potential bio-

mineral precursor compounds (see Figure 3). Concentration of added organics

amounted to 0.5% of cement weight, and triplicate cylinders for each compound were

tested after 28 days curing. Ordinary Portland cement (ENCI CEMI 32.5R) and

awater to cement weight ratio of 0.4 and 0.5, for bacteriaand organic compound

amended samples respectively, was used for the preparation of the cement paste

test specimens.
2.3 Calcite-producing potential of paste-immobilized bacteria

Cement paste cylinders (2.2 cm diameter, 3 cm height) with a water to cement weight

ratio of 0.5 were prepared without any further additions (series A: control), with

calcium lactate (0.5% of cementweight: series B) and with 0.5% calcium lactate plus

1108 B.cohnii spores cm3 paste (series C). After 7 days curing in sealed plastic

vials cylinders were cut in 0.5-cm thick slices, and subsequently incubated in tap

water.

The paste slices were rinsed with distilled water after 10 days incubation and calcite

formation on the specimen surfaces were examined with a Philips XL30

environmental scanning electron microscope (ESEM) without any further sample

preparation.

3 RESULTS

3.1 Spore formation and calcite production in liquid cultures

All three investigated bacterial species grew well in the specified sodium citrate

amended medium and produced copious spores during the late exponential growth

phase.

Figure 1. Endo-spore formation in B.cohnii culture. Figure 2. Calcite production in B.halodurans

culture k
Figure 1 shows a light microscopic picture of a B.cohnii culture in which the produced

endospores appear as bright intracellular spheres. The bright appearance is due to

strong light- scattering of the thick-walled endospores. Moreover, all bacteria proved

potent calcite producers in media amended with calcium chloride and a high

concentration of sodium citrate but relatively lowinorganic carbon content (Figure 2).

No calcite formation was observed in abiotic cultures (same medium but not

inoculated with bacteria). Although both free calcium ions and inorganic carbon was

present in this specific medium, no abiotic calcite formation occurred due to the

calciumchelating efficiency of present citrate. Bacterial cultures did produce calcite,

as metabolic conversion of citrate resulted in increased alkalinity and decreased

chelating potential.

Figure 3. Compressive strength development Figure 4. Splitting-tensile strength of organic

ofcontrol and bacteria-added cement paste compound-enriched (0.5% of cement weight)
samples in time. cement paste after

28 days curing..
3.2 Strength of bacteria and organic compound-amended paste specimens

As organic additives to paste mixtures can result in unwanted strength loss, the effect

of bacteria and organic compounds (potential bio-mineral precursors) on

compressive or splitting-tensile strength was investigated.

Incorporation of a high number of bacterial spores in the paste (6108 cm3)

resulted in about 10% decrease in compressive strength as values amounted

(compared to controls) to 91, 92 and 93% after 3, 7 and 28 days curing respectively

(Figure 3).

Additions of different organic compounds (0.5% of cement weight) also affected

splitting-tensile strength of the paste. However, the extent of change (compared to

the control) varied as this depended on compound identity (Figure 4). Six out of 11

tested compounds (yeast extract, peptone, starch, urea, sodium-polyacrylate and

sodium-aspartate) resulted in a substantial reduction in strength after 28 days curing.

However, 5 compounds (sodium- and calcium-glutamate, calcium-formate, -acetate,

and -lactate) appeared not to result in strength loss. It should be noted, however, that

standard deviations of obtained data were large, and therefore these results should

be interpreted with care.

Figure 5A. Surface of control paste specimen Figure 5B. Calcium lactate-enriched paste
specimen.

Figura 5C. Calcite particle formation on surface ofB. Cohnii plus calcium lactate-enriched specimen; note scale
bar.
3.3 Calcite-producing potential of paste-immobilized bacteria ESEM analysis of the

surface of tap water incubated paste samples showed major differences between

control (no additions), calcium lactate-amended, and calcium lactate plus bacteria-

amended specimens

(Figure 5A, B and C respectively). On the surface of control- and lactate-enriched

specimens, clusters of small (25m) calcite minerals as well as massive C-S-H

(calcium silcate hydrate)-like filaments were formed. In contrast, paste specimens

with incorporated calcium lactate plus bacteria produced, in addition to small

minerals and C-S-H-like filaments, large-sized (up to 100m) robust calcite

precipitates.

4 DISCUSSIONS

Although concrete with a high self-healing (crackhealing) potential is wanted, the

addition of healing agents such as bacteria and/or (organic) chemical compounds to

the paste may result in unwanted decrease of strength properties. A 10%

compressive strength loss due to incorporation of bacteria (B.pseudofirmus) was

observed in this study. However, such a loss in strength may be acceptable when

this is compensated for by a substantial increase in the materials self (crack)-healing

capacity.The two-component selfhealing system tested here (incorporated bacteria

plus calcium lactate) resulted in the formation of 100-m sized calcite particles on

specimen surfaces in contrast to controls (no additions or calcium lactate only),

where much smaller sized particles were formed. The results of this preliminary study

thus indicate that the two-component system may be characterized by a superior

crack-healing potential, as much larger cracks can theoretically be sealed by the

larger calcite particles produced. It remains to be evaluated, however, to what extent

increased bacterial mineral production on (crack) surfaces results in decreased

permeability, and thus better protection of the underlying material matrix. A lowered

permeability due to healing of cracks would result in a decreased ingress rate of

aggressive chemicals, which could lead to premature matrix degradation or corrosion

of embedded steel reinforcement. Self-healing with the aid of incorporated bacteria

could thus result in a better healing (sealing of larger cracks) compared to

autogenous healing of non-amended pastes. It has been observed in previous

studies that particularly high strength concrete, characterized by a low water to

cement weight ratio, has a substantial self-healing capacity (Edvardsen 1999;Neville

1999).This is due to the large amount of non- or only partially hydrated cement

particles present in the material matrix. Such particles will undergo secondary

hydration with crack ingresswater, a process that was also observed in this study for

the control samples (Figure 5A and B). The capacity of this autogenous chemical

self-healing mechanism is directly related to the amount of non- (fully) hydrated

cement particles present in the material matrix. The maximum crack width that can

be self-healed in such high strength concrete appears to be limited to 0.1mm

(Edvardsen 1999; Li &Yang 2007). From an economical and environmental point of

view, however, such a cement particle-based chemical self-healing system is not

preferred due to the high costs of cement and the high amount of CO2 that is

released during its production (Gerilla et al. 2007; Peris Mora 2007). A two-

component self-healing system based on bacterial mineral production as proposed in

this study would for the latter two reasons be preferential, and moreover, the size of

bacterially produced minerals suggests that larger cracks could potentially be healed.

The mechanism of bacterially induced self-healing is based on the metabolic

conversion of suitable organic compounds to calcite, e.g. represented by the bio-

conversion of calcium-formate with portlandite present in the paste matrix:

In several previous studies, bacteria were also applied for durability improvement or

concrete repair. In those studies, the calcite production potential of a special group of

ureolytic bacteria and their applicability to concrete was investigated (Bang et al.

2001; Ramachandran et al. 2001; De Muynck et al 2007; Ramakrishnan 2007).

However, in those studies bacteria and their required substrates (urea plus calcium

chloride) were applied externally, i.e. on set concrete specimens. As the bacteria and

substrateswere not part of the original concrete mixture, this type of repair can not be

considered as self-healing. In the present study, however, both bacteria and mineral

precursor compounds were mixed with the paste and became therefore an integral

part of the material. In a parallel study it was shown that the spores of specialized

alkaliphilic bacteria, such as the ones used in this study, survive within the concrete

matrix and can be activated by a combination of (ingress) water and a suitable

growth substrate (Jonkers 2007; Jonkers & Schlangen

2007). What is still unclear, however, is the extent of bio-availability of organic

compounds mixed with the cement paste. It remains to be quantified which part of

added organics is actually available for the bacteria (e.g. by being dissolved in the

matrix capillary water), and which part will be chemically bound within cement

hydration products and matrix thus being inaccessible for bacteria. However, the

results of this study indicate that at least a part of the added organics was available

for metabolic conversion, as produced calcite particles were much larger in bacteria

plus organics-amended paste (Figure 5C) compared to controls.

In conclusion we can state that the investigated bacterially based two-component

system seems a promising- and definitely more sustainable, alternative to high

strength pastes which are characterized by a high cement content. However, the self-

healing capacity (crack-sealing and concomitant permeability reduction) remains to

be quantified in future studies.