Divisin Ciencias de la Vida Y TECNOLOGIA DE ALIMENTOS
Campus Irapuato-Salamanca Jueves 27 y Viernes 28 de Mayo de 2010 Guanajuato, Gto.
CONTROL BIOLOGICO DE JITOMATE CON LA CEPA MEXICANA Bacillus
subtilis No 21
Basurto-Cadena M.G. a*, Salcedo-Hernndez R. a, Vzquez-Arista M. a, Romero-Valdez
M.E. b, Daz-Serrano F.R. b, Bucio-Villalobos C.M. b, Martnez-Jaime O.A. b a Departamento de Alimentos, Divisin de Ciencias de la Vida, Campus Irapuato- Salamanca, Universidad de Guanajuato, Irapuato, Guanajuato, Mxico. b Departamento de Agronoma, Divisin de Ciencias de la Vida, Campus Irapuato- Salamanca, Universidad de Guanajuato, Irapuato, Guanajuato, Mxico. * cadenag@ducinea.ugto.mx
RESUMEN Mxico se encuentra entre los diez primeros productores de jitomate en el mundo y su importancia radica en su utilizacin para consumo en fresco y procesado. Desafortunadamente los principales problemas que limita la productividad del cultivo de jitomate son las plagas y las enfermedades, los cuales han sido controlados con el uso indiscriminado de agroqumicos. Estos productos qumicos han incidido de manera importante en la salud humana provocando enfermedades como el cncer, malformaciones, problemas neurolgicos, afecciones respiratorias y alergias; as como en la salud ambiental. Una alternativa para controlar las plagas y enfermedades de los productos agrcolas es el uso del control biolgico. En este trabajo se evalu el efecto de la cepa de Bacillus subtilis No. 21, aislada de plantas sanas de cultivos de fresa, en un cultivo de jitomate bajo condiciones de invernadero. Los resultados mostraron que tratando las plantas de jitomate con B. subtilis No. 21 en la raz y asperjndolo en el follaje se obtuvo, por planta, mayor nmero de frutos con ms peso y tamao. Con lo anterior, la aplicacin de B. subtilis No. 21 en el cultivo de jitomate parece ser una opcin viable para el control de enfermedades y como regulador de crecimiento.
ABSTRACT Mexico is one of the ten main tomato producers in the world and its importance is due to its extensive consumption as a fresh vegetable and processing product. Unfortunately, productivity of this agricultural product is limited by the presences of pests and diseases which are controlled with the excessive use of chemical products. These chemical products produced, in time, problems with human health such as cancer, malformations, neurological and respiratory affections, and allergies; as well as environmental health. Biological control is an option to control pest and diseases problems during the agricultural products production. In this work and under greenhouse conditions, the effect of a Bacillus subtilis No. 21 strain, which was isolated from healthy strawberry plants, was evaluated in the tomato production. Results showed that tomato plants treated with the Bacillus subtilis No. 21 strain on roots and leaves produced more tomato per plant with bigger weigh and size. With the above, the application of the Bacillus subtilis No. 21 strain seems to be a very good option to control tomato diseases and as a growth regulator.
Palabras clave: Bacillus subtilis, control biolgico, regulador de crecimiento.
INTRODUCCION
Si bien el jitomate se cultiva en ms de cien pases, tanto para consumo en fresco
como para su industrializacin, los diez principales productores concentran ms del 80% del total mundial: China, Estados Unidos, Turqua, Italia, India, Egipto, Espaa, Irn, Brasil, y Mxico, siendo los tres primeros los que marcan las tendencias de precios y consumo mundiales (FAO, 2008). En Mxico el cultivo de tomate es uno
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de los ms importantes en cuanto a generacin de empleo y su demanda aumenta
continuamente y con ella su cultivo, produccin y comercio. (SECOFI, 1993). En Mxico el jitomate se produce en diez estados, entre ellos destacan Sinaloa, Baja California, San Luis Potos y Nayarit, que producen el 75%; a su vez, son las entidades con mejores rendimientos. El jitomate mexicano es un producto competitivo que cuenta con un mercado slido, tanto en el interior como en el exterior y con posibilidades de expansin. Debido a que el sector agrcola en el Estado de Guanajuato en su mayora se dedica al cultivo de cereales, la produccin de otros cultivos se ve reducida como la de jitomate donde Len, San Luis de la Paz, Cortzar y Celaya son los municipios con mayor produccin (SIAP SAGARPA, 2008).
Las enfermedades constituyen el factor limitante en la produccin de jitomate en
muchas partes del mundo cuando no se utilizan cultivares con resistencia a varias de ellas. Existen cerca de 200 enfermedades en el jitomate con diversas causas y etiologas (Crisantes y col., 1992); sin embargo, el marchitamiento vascular del jitomate, causado por el hongo Fusarium oxysporum, es la enfermedad causante de grandes prdidas en este cultivo y esta ampliamente distribuida en todo el mundo. Este hongo sobrevive en restos de cultivo de una temporada a otra y posee estructuras de resistencia que le permiten perdurar en el suelo por espacio de 6 aos, le favorecen la temperatura clida (20C) y alta humedad (Valiela, 1979).
El Control biolgico es una de las herramientas de un conjunto de tcnicas de
control eficaces desde el punto de vista biolgico, ecolgico y econmico. En el control biolgico se utilizan organismos que son enemigos naturales de una plaga o patgeno, con el fin de reducir o eliminar sus efectos dainos en las plantas o sus productos. (Fuchs y col., 1999). Basurto-Cadena (2006) utiliz, a nivel de invernadero, la cepa Bacillus subtilis No. 21 para el control de Fusarium verticillioides y Rhizoctonia solani, hongos causantes de la enfermedad de la secadera en el cultivo de la fresa.
MATERIALES Y METODOS
Material vegetal. Se trabaj con 72 plantas de jitomate de la variedad Gabriela, de
las cuales 12 se usaron como testigo. Los ensayos se realizaron en el invernadero de la Divisin de Ciencias de la Vida de la Universidad de Guanajuato.
Bacteria antagonista. Se trabajo con la cepa de Bacillus subtilis No. 21, la cual fue aislada de plantas sanas de cultivos de fresa e identificada en el laboratorio de Microbiologa del Departamento de Alimentos de la Divisin de Ciencias de la Vida (Basurto-Cadena, 2006).
Hongos patgenos. Se aislaron de plantas de jitomate que presentaron sistemas
de alguna enfermedad, siguiendo la metodologa sugerida por Basurto-Cadena
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(2006) y la identificacin se realiz en el laboratorio de Microbiologa del
Departamento de Alimentos.
Antagonismo in vitro de hongos patgenos y la cepa de Bacillus subtilis No.
21. El enfrentamiento de los hongos aislados e identificados con B. subtilis No. 21se llev a cabo de acuerdo al protocolo sugerido por Basurto-Cadena (2006).
Preparacin de inoculo de B. Subtilis No. 21. Se preparan tubos de ensaye con
10 mL de caldo nutritivo y se les sembr una azada de la cepa Bacillus subtilis N21, sembrada con anterioridad en agar nutritivo (caja petri), y se incubaron a 352C por 24 hr con agitacin constante.
Preparacin de la solucin concentrada de B. Subtilis No. 21. Del inoculo se
tom 1mL y se adicion a un matraz erlenmeyer con 500 ml con caldo nutritivo y se incub a 352C por 5 das en agitacin constante. Se tomaron 150 mL de esta solucin y se llevaron a un volumen de 1,500 mL con agua destilada para obtener una concentracin final de 1 x 10 -7 clulas por mL.
Tratamientos en invernadero. Los tratamientos que se realizaron en el
invernadero fueron cuatro: T1. Aplicacin de solucin concentrada de B. subtilis No. 21en races; T2. Aplicacin de solucin concentrada de B. subtilis No. 21en races y follaje; T3. Aplicacin de solucin concentrada de B. subtilis No. 21en follaje; y T4. Testigo. En cada tratamiento se utilizaron 20 plantas ms cuatro testigos por tratamiento (72 plantas en total).
Anlisis estadstico. Se realiz un diseo completamente al azar, aplicando la
prueba mltiple de Duncan para los datos de distribucin normal y la prueba de Kruskal-Wallis para aquellos que no presentaron distribucin normal (Montgomery, 1991). Los parmetros evaluados fueron: peso, dimetro polar y dimetro ecuatorial de los frutos. Se realizaron 6 recolecciones de los frutos cada 15 das.
RESULTADOS
Hongos patgenos. Los gneros de los hongos identificados del cultivo de
jitomate segn sus caractersticas morfolgicas macroscpicas y microscpicas fueron: Fusarium sp, Rhizopus sp, Rhizoctonia sp, Alternaria sp. (Barnett y Hunter, 1897 y Nelson et al., 1983).
Antagonismo in vitro de hongos patgenos y la cepa de Bacillus subtilis No.
21. Ejemplos del antagonismo in vitro presentado por los hongos aislados de las plantas de jitomate se puede apreciar en las Figuras 1 y 2.
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B. s. B. s.
Hongo
B. s. B. s.
Hongo Fig. 1. Alternaria sp (Hongo) vs B. subtilis N21 (B.s.)
B. s.
B. s.
B. s. Hongo B. s.
B. s.
B. s.
Fig. 2. Fusarium sp (Hongo) vs B. subtilis N21 (B.s.)
Tratamientos en invernadero. Las Figuras 3, 4 y 5 muestran los resultados obtenidos
durante el experimento despus de las 6 colectas de frutos.
RECOLECCIN N6 PROM EDIO PESO
. 60
a a 50
b 40 b PESO(gr)
30
20
10
0 1 2 3 4 TRATAM IENTOS
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Fig. 3. Peso de jitomates
Nota: 1. B. subtilis No. 21 en races; 2. B. subtilis No. 21 en races y follaje; 3. B. subtilis No. 21 en follaje; y 4. Testigo. Las letras iguales no presentan diferencia significativa (= 0.05%)
RECOLECCIN N6 PROMEDIO DIMETRO
ECUATORIAL
5 a 4.5 4 3.5 a 3 b De (cm)
2.5 b 2 1.5 1 0.5 0 1 2 3 4 TRATAMIENTOS
Fig. 4. Dimetro ecuatorial (De) de jitomates
Nota: 1. B. subtilis No. 21 en races; 2. B. subtilis No. 21 en races y follaje; 3. B. subtilis No. 21 en follaje; 4. Testigo. Las letras iguales no presentan diferencia significativa (= 0.05%)
RECOLECCIN N6 PROMEDIO POLAR
4.5 a 4 3.5 3 a b Dp (cm)
2.5 b 2 1.5 1 0.5 0 1 2 3 4 TRATAMIENTOS
Fig. 5. Dimetro polar (Dp) de jitomates
Nota: T1. B. subtilis No. 21 en races; T2. B. subtilis No. 21 en races y follaje; T3. B. subtilis No. 21 en follaje; T4. Testigo. Las letras iguales no presentan diferencia significativa (= 0.05%)
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DISCUSION Y CONCLUSIONES
Estudios de antagonismos realizados a nivel de laboratorio e invernadero con la
cepa mexicana Bacillus subtilis N 21 mostraron la posibilidad para controlar hongos fitopatgenos en fresa (Basurto, 1993; Basurto-Cadena, 2006), y estos estudios nos sirvieron de base para realizar nuestro trabajo. Los hongos patgenos aislados e identificados fueron Alternaria sp, Fusarium sp, Rhizopus sp y Rhizoctonia sp, los cuales presentaron antagonismo in vitro frente a la cepa de B.subtilis N 21.
Los resultados del anlisis estadstico realizado, considerando cuatro tratamientos
en plantas de jitomate en su estado de maduracin (presencia de coloracin roja en el fruto), mostraron que los tratamientos T1 y T2, donde se aplic la solucin concentrada de B.subtilis N 21 en la raz y en la raz y follaje respectivamente, fueron mejores que los tratamientos T3 y T4, en cuanto a peso, dimetro polar y dimetro ecuatorial y no mostraron diferencias significativas entre ellos al final del experimento; sin embargo, el tratamiento T2 present mayores valores numricos que el tratamiento T1 cuando se midieron los parmetros de dimetro polar y ecuatorial. Por otro lado, el tratamiento T3, donde se aplic la solucin de concentrada de B.subtilis N 21 en el follaje nicamente y el testigo T4, sin B.subtilis N 21, no presentaron diferencia significativa entre ellos al final del periodo de experimentacin.
En general, se puede decir que los resultados de control biolgico en los
tratamientos T1 y T2 donde se aplic la cepa de B.subtillis N21 presentaron mejores resultados de peso, dimetros polar y ecuatorial; adems, se observ que la maduracin de los frutos en estos tratamientos fue ms rpida en comparacin con los frutos de los tratamiento T3 yT4, lo que sugiere que posiblemente B.subtilis N 21 tambin actu como agente promotor de crecimiento.
Finalmente, otro aspecto importante que se debe enfatizar es que los problemas de plagas y enfermedades deberan manejarse de una manera sostenida a travs de un programa de control integrado, con el cual la aplicacin de varios mtodos de control, incluido el biolgico, podra llegarse a establecer un equilibrio, de tal forma que las poblaciones de plagas y enfermedades puedan mantenerse en un nivel tal que su impacto econmico y social en los cultivos sea mnimo para evitar el deterioro de la salud humana y ambiental.
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