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EL MICROSCOPIO

El estudio detallado de los componentes de clulas y tejidos animales o vegetales,


por el tamao que poseen, requiere el uso de instrumentos que permitan ampliar
muchas veces ms la imagen de las estructuras que los constituyen.

El instrumento que fue empleado por los primeros bilogos para estudiar la clula y
los tejidos, es el microscopio. El nombre deriva etimolgicamente de dos races
griegas: mikrs, que significa pequeo y skopoo, que significa observar. Es decir
el microscopio es un instrumento que sirve para observar objetos o estructuras
pequeas.

Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energa para
formar imgenes aumentadas y detalladas de objetos que a simple vista no es
posible observar:

a) Microscopio ptico simple o lupa.


b) Microscopio ptico compuesto.

El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificacin de imgenes que


consiste en la utilizacin de una o ms lentes convergentes en un solo sistema
ptico. Dependiendo de la curvatura de la superficie de la(s) lente(s) las lupas
pueden ampliar las imgenes de los objetos desde 5, 8,10, 12, 20 y hasta 50 veces.
Forman una imagen de mayor tamao, derecha y virtual.

Los microscopios pticos compuestos que se emplean actualmente tienen sus


antecesores en los instrumentos pticos desarrollados, en el periodo comprendido
entre 1590 y 1610, por Hans (padre) y Zacaras (hijo) Janssen; quienes mediante el
tallado cuidadoso de lentes biconvexas construyeron los primeros microscopios
compuestos (fig. microsc. 1).

Lente ocular tubo extensible lente objetivo

Diafragma

Figura 1. Diagrama que muestra los componentes del microscopio compuesto fabricado por los Jansen.

A partir de esa poca, el microscopio es el instrumento ms utilizado en el estudio


de clulas y tejidos. Se fue perfeccionando, tanto en su parte ptica como en su
parte mecnica, gracias a los adelantos tecnolgicos aplicados a los componentes
antes mencionados.
Se denominan compuestos porque la imagen se forma mediante la utilizacin de
tres sistemas de lentes, cada uno de ellos constituidos por lentes convergentes y
divergentes.

Los sistemas de lentes son el condensador, los objetivos y los oculares.

En la actualidad, el microscopio ptico es un instrumento de uso cotidiano en los


laboratorios de investigacin y de diagnstico as como en las aulas de enseanza.

COMPONENTES DEL MICROSCOPIO OPTICO. El microscopio ptico compuesto


est integrado por tres tipos de componentes:

a) COMPONENTES MECNICOS: Son aquellos que sirven de sostn, movimiento


y sujecin de los sistemas pticos y de iluminacin as como de los objetos que se
van a observar. stos se muestran en la imagen del microscopio de la figura 2:

Base o pi. Es un soporte metlico, amplio y slido en donde se apoyan y


sostienen los otros componentes del microscopio.
Brazo, estativo o columna. Permite la sujecin y traslado del
microscopio. Soporta al tubo ptico, a la platina y el revlver.
Platina. Superficie plana de posicin horizontal que posee una perforacin
circular central. En ella se apoya la preparacin (lmina portaobjetos que
contiene a la muestra que se va a examinar) que se sujeta a la platina
mediante pinzas o con un carrito o charriot que, mediante mandos
especiales facilitan el movimiento de la preparacin de derecha a izquierda y
de adelante hacia atrs.
Tubo ptico. Consiste en un cilindro metlico que suele medir 160mm o
170 mm de longitud (dependiendo del fabricante del microscopio) el cual en
un extremo, est conectado al revolver o portaobjetivos y en el otro se
relaciona con el (los) ocular(es).
Revolver o portaobjetivos. Es un componente que gira alrededor de un eje
con la finalidad que los objetivos que sostiene coincidan de manera
perpendicular con la perforacin central de la platina. En su superficie inferior
posee varios agujeros donde se atornillan los objetivos.
Tornillos macromtrico y micromtrico.
Generalmente estn situados en la parte inferior del brazo o columna.
Pueden estar separados (en los microscopios antiguos) o el tornillo
micromtrico est incorporado en la circunferencia del tornillo macromtrico
(microscopios actuales). Ambos tornillos permiten el desplazamiento de la
platina hacia arriba y hacia abajo con la finalidad de acercar o alejar la
preparacin hacia los objetivos y as conseguir un enfoque ptimo de la
imagen.
Figura 2. Principales componentes de un microscopio ptico compuesto

El macromtrico produce desplazamientos evidentes y rpidos de la platina,


en cambio el tornillo micromtrico produce movimientos imperceptibles de la
platina y sirve para efectuar el enfoque fino y definitivo de la imagen. En la
actualidad los microscopios tienen incorporados a los mecanismos de
desplazamiento de los tornillos macro y micromtricos, topes de seguridad que
impiden que stos continen descendiendo indefinidamente y as se evita
roturas y daos a la laminilla y a las lentes de los objetivos.

Engranajes y cremallera. Constituyen mecanismos de desplazamientos de


las diferentes partes del microscopio.
Cabezal. Es un componente situado en relacin con el tubo del microscopio
que alberga principalmente prismas o espejos que sirven para
acondicionar en l dos o ms oculares, o sistemas mecnicos que soportan
cmaras fotogrficas, de vdeo o sistemas de proyeccin de la imagen.

b) COMPONENTES PTICOS: Son los objetivos, los oculares, el condensador


y los prismas. Los tres primeros estn constituidos por sistemas de lentes
positivos y negativos.

Condensador: Es el componente ptico que tiene como funcin principal


concentrar y regular los rayos luminosos que provienen de la fuente
luminosa (fig. 3).
Figura 3. Diagrama de los principales componentes de un condensador y recorrido de los rayos luminosos.

Est formado por una o dos lentes convergentes que renen los rayos
luminosos y los orientan hacia la abertura central de la platina. Mediante un
mecanismo de cremallera se acerca o aleja de la platina. Tambin tiene
incorporado un diafragma iris que regula la entrada de luz Todo ello con la
finalidad de concentrar la mayor cantidad de rayos luminosos en el plano donde
est situado el objeto a observar. La mayora de los condensadores de los
microscopios actuales tambin poseen una apertura numrica que indica la
cantidad de luz que puede captar y luego enviar hacia la preparacin.

Objetivos. Los objetivos estn considerados los elementos ms


importantes en la formacin de la imagen microscpica, ya que estos
sistemas de lentes establecen la calidad de la imagen en cuanto a su
nitidez y la capacidad que tiene para captar los detalles de la misma (poder de
resolucin). Estn constituidos tambin por un juego de lentes, en este caso,
convergente y divergente, para eliminar, en la medida de lo posible, una serie
de aberraciones que afectaran la calidad de las imgenes formadas.

Las lentes se disponen dentro de un soporte o camiseta de metal, en cuyo exterior


estn inscritas una serie de anotaciones numricas que indican, como se observa
en la figura 4: el aumento propio del objetivo, la apertura numrica, el tipo de
material con que estn tallados las lentes (de fluorita o semiapocromticos) o la
calidad que tendrn las imgenes, al anularse en la construccin de los objetivos,
algunas aberraciones de las lentes (acromticos, apocromticos, aplanticos etc.)
o si se debe usar alguna sustancia de inmersin.
Fig 4. Principales caractersticas externas de los
objetivos

Los objetivos se fabrican para ampliar


las imgenes de los objetos observados en diversos aumentos; as se tienen
objetivos con aumentos propios de 3.5 x, 4x, 10x, 25x, 40x,

65x y 100x. Algunos objetivos tienen alrededor de ellos una lnea coloreada que
indica a simple vista el aumento propio.

Los objetivos tambin se clasifican de acuerdo al medio que existe entre el objeto
examinado y la lente frontal del objetivo. De acuerdo a esta caracterstica son
secos o de inmersin. Son objetivos secos aquellos que entre el objeto observado
y el objetivo solamente existe el aire; en cambio se denominan objetivos de
inmersin aquellos que requieren que entre la preparacin y la lente frontal del
objetivo se coloque una sustancia lquida, sta puede ser agua, glicerina o un
aceite de inmersin, natural como el aceite de cedro o aceites artificiales.

Otra clasificacin de los objetivos se refiere al tipo de correccin al que deben


someterse las lentes con la finalidad de disminuir o anular algunas aberraciones
que se producen en las lentes, como las aberraciones cromtica, de curvatura de
campo, astigmatismo y de esfericidad. Dependiendo de las aberraciones
corregidas los objetivos pueden ser:

Acromticos. Estos objetivos corrigen los rayos luminosos azules y rojos


hacindolos coincidir en un solo plano focal. En tanto que los otros
rayos coloreados se forman en otro plano focal generando una imagen cuyos
bordes se observan levemente difusos (espectro luminoso secundario). Los
objetivos de los microscopios de estudiante son acromticos.
Semiapocromticos. Se les conoce tambin como objetivos de fluorita,
corrigen el espectro secundario dando como resultado imgenes de bordes
ms ntidos. Por la alta capacidad que tienen para transmitir las radiaciones
luminosas de onda corta, se les considera como los objetivos ideales para
microscopa de fluorescencia.

Apocromticos. En estos objetivos se hacen coincidir en un solo plano los


rayos luminosos azules, rojos y verdes, obteniendo as una imagen de
bordes sumamente ntidos, pero la correccin de esta aberracin
trae consigo la acentuacin de otra, que es la de curvatura de campo, pues
la superficie focal de la imagen es ligeramente curva, dando como
resultado que, al observar la imagen y tratar de enfocarla en lazona central
del campo microscpico se desenfoca la zona perifrica y viceversa.

Planapocromticos. Son los objetivos en los cuales se han corregido la


mayor cantidad de aberraciones como la cromtica, curvatura de campo, de
esfericidad y de astigmatismo; por lo tanto se obtienen imgenes sumamente
ntidas y el campo microscpico aparece totalmente plano, enfocado en
toda su extensin. Son los objetivos que generan imgenes con mejor
resolucin, es preferible usarlos cuando se desea obtener imgenes
fotogrficas (fotomicrografa).
La imagen que forman los objetivos es aumentada de tamao, invertida y real.
Se mencion al inicio del acpite que los objetivos estn considerados como los
integrantes ms importantes del microscopio, pues de la calidad de sus
componentes depende que, en la imagen generada a travs de ellos, se puedan
observar una mayor cantidad de detalles. En otros trminos, los objetivos son los
responsables de ofrecer imgenes mejor resueltas.

La capacidad que tienen los objetivos de formar imgenes en donde se distingan


ms detalles del objeto examinado depende de una serie de factores como los que
se mencionan a continuacin:

ndice de refraccin: Se denomina as a la relacin existente entre la


velocidad de la luz en el aire y su velocidad en el medio transparente utilizado.
De la misma manera, se pueden obtener los ndices de refraccin de una serie de
sustancias que se utilizan en la construccin y tallado de las lentes de los
objetivos.

La velocidad de la luz es de 300,000 Km/sg en el aire. Al atravesar un medio


transparente como el vidrio del cual estn fabricados las lentes de los
microscopios, su velocidad se reduce a 200, 000 km./sg. Por lo tanto el vidrio
tendr un ndice de refraccin de 1.5; pues el ndice de refraccin de un objeto o
una sustancia transparente se expresa mediante la frmula:
Velocidad de la luz en el aire
IR=
Velocidad de la luz en el medio

A continuacin se muestran los ndices de refraccin de una serie de sustancias


transparentes que se emplean en microscopa para construir lentes o como
sustancias de inmersin:
Agua = 1.3300
Aceite de inmersin = 1.5150
Fluorita = 1.4340
Vidrio (crown) = 1.5200
Flint = 1.6600

Angulo de apertura: Es la capacidad de un objetivo de captar los rayos luminosos


refractados cuando stos atraviesan un medio transparente. Cuanto mayor sea este
ngulo, la lente frontal del objetivo aceptar una mayor cantidad de ellos (fig.5).

Figura 5. Rayos luminosos que forman el ngulo de apertura.

En el esquema anterior, el ngulo de apertura de la lente frontal del objetivo capta


varios rayos luminosos teniendo como lmite los rayos laterales del cono luminoso
(lneas continuas), en cambio los rayos perifricos (lneas punteadas) no
son aceptados. Esta capacidad de captacin est dada fundamentalmente por la
distancia que existe entre el objeto y el objetivo. As, se puede constatar que en la
figura 5a el ngulo de apertura es de aproximadamente 50, en cambio en la
figura 5b el ngulo es mucho mayor (95) donde se observa que la lente logra
captar ms rayos perifricos.

Dependiendo del ndice de refraccin del material transparente que forma la lente
del condensador, o la interfase (aire o sustancia de inmersin) que exista entre el
objeto y la lente frontal del objetivo, el ngulo de apertura ser mayor o menor.

Captacin de rayos luminosos a travs de objetivos secos y objetivos de


inmersin. La figuras 6 y 7 muestran la diferencia en la captacin de rayos
luminosos de un objetivo (a) donde la interfase es aire y, en el objetivo (b) se ha
colocado como interfase una sustancia de inmersin que posee un ndice de
refraccin similar al del vidrio.

Los rayos luminosos que atraviesan el aire se refractan ms y por lo tanto su


desviacin es mayor porque el ndice de refraccin del aire es igual a 1.0.
Figura 6. Trayectoria de los haces luminosos en un objetivo seco.

En la figura 6 los rayos que emergen del objeto, al llegar a esta interfase constituida
por aire se refractan o su ngulo de inclinacin es tal que sobrepasan el ngulo
crtico de refraccin, por lo que al llegar a la lente frontal del objetivo se reflejan en
la superficie y no son captados por la lente.

En la figura (b) el ndice de refraccin del aceite de inmersin (1.52) es similar al


del vidrio (portaobjetos, cubreobjetos y la lente frontal del objetivo) por lo tanto los
rayos luminosos perifricos que emergen del objeto no se desvan y pueden ser
aceptados por el objetivo, incrementndose de esa manera la cantidad de rayos
luminosos que penetran al microscopio.

Figura microsc. 6. Trayectoria de los haces luminosos en un objetivo de inmersin.

A la mitad del ngulo de apertura se le denomina alfa (), por ejemplo si el ngulo
de apertura de un objetivo es de 50, su valor alfa ser de 25. Este valor es
importante pues permitir calcular un factor que tiene que ver directamente con la
capacidad del objetivo para formar imgenes que muestren ms detalles, es decir
mejor resueltas.
Apertura numrica (NA): Es una medida que indica la capacidad del objetivo de
poder captar los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales est
constituido el objeto que se observa. Esta capacidad se traduce en el poder del
microscopio de formar imgenes que muestren al observador una serie de detalles
del objeto que se est examinando. Cuanto mayor sea la apertura numrica de un
objetivo, ste tendr una mayor capacidad de mostrar detalles finos en la
imagen que forma.
La apertura numrica de un objetivo se calcula empleando la frmula matemtica
siguiente:
A= n x sen

Donde n representa el ndice de refraccin de la interfase que separa el


cubreobjeto de la muestra examinada y la lente frontal del objetivo y es la mitad
del ngulo de apertura.

La apertura numrica de un objetivo guarda una relacin directamente


proporcional con el aumento propio del objetivo y tambin con la capacidad que
tiene de mostrar mayores detalles. Por ejemplo en la relacin de objetivos que
se muestran se puede comprobar lo afirmado referente al aumento del
microscopio:

Aumento del objetivo Apertura numerica


3.2x 0.07
4x 0.10
10x 0.22
10x 0.25
25x 0.45
40x 0.65
63x 0.80
100x 1.25oil
La mayora de los denominados microscopios de estudiantes que se fabrican en la
actualidad vienen implementados (AN y aumentos propios) con los objetivos que
estn sealados en negritas.

Aumento de un objetivo. Es la capacidad que posee un objetivo de ampliar la


imagen del objeto observado. Se define como la relacin entre el tamao de la
imagen y el objeto, en valores lineales (largo y ancho).

En la relacin anterior, un objetivo que tiene grabado en la camiseta la cifra 10x


aumentar 10 veces el tamao de la imagen del objeto examinado.

Poder de resolucin. Se define as la capacidad de un objetivo de poder distinguir


la distancia mnima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se
puedan visualizar como dos puntos separados. La calidad de una imagen, en
la que se observe la claridad, nitidez y la riqueza de detalles, depende del poder de
resolucin del objetivo.

El poder de resolucin (PR) de un objetivo depende de la longitud de onda ()


del rayo luminoso utilizado y la apertura numrica del sistema ptico del
objetivo.
El mximo poder de resolucin que se puede obtener es de 0.2 m
aproximadamente, para lo cual se requiere que el microscopio proporcione
una imagen de un aumento total de 1000x a 1400x.

OCULAR.
Es otro componente ptico del microscopio, debe su nombre porque la imagen final
se observa a travs de l acercando el ojo a la lente ocular del componente.
Es el encargado de formar una segunda imagen a partir de la imagen primaria que
forma el objetivo. La imagen del ocular es de mayor tamao, virtual y derecho.
Esta imagen nicamente ampla un nmero determinado de veces (5x, 8x, 10x,
12x) a la imagen formada por el objetivo. No aade, por ms aumentos propios
que posea, ningn detalle a los generados por el objetivo.

En la generalidad de los casos, los oculares estn construidos por dos


lentes convergentes (planos convexos). La primera lente se denomina de campo o
frontal, est situada en la parte anterior del ocular (fig. micros.8) y, es la encargada
de recoger y ampliar la imagen generada por el sistema de lentes del objetivo.
La lente posterior, en contacto estrecho con el ojo del observador, se denomina
lente ocular y es la responsable de aumentar nuevamente la imagen y orientarla
hacia el ojo del observador

Los oculares se clasifican, dependiendo de la disposicin de las lentes y del


diafragma, dentro de la camiseta metlica que los contienen, en:

Oculares negativos de Hygens. Estn constituidos por dos lentes plano


convexos, con la superficie convexa dirigida hacia abajo. Entre ambos se sita
un diafragma anular, localizado en el plano focal de las lentes. En este diafragma
se puede adherir un puntero o sealador que suele ser elaborado por una
pequea porcin de una pestaa o pelo.

Figura microsc. 8. Diagrama de la disposicin de las lentes en: (a) un ocular negativo; (b) en un ocular positivo.

Oculares positivos o de Ramsden. Las lentes plano convexas estn dispuestas


con las superficies curvas dirigidas hacia adentro. El diafragma est situado por
debajo de la lente de campo o frontal; en el plano donde se forma la imagen
formada por el objetivo.

Adems de estos oculares, existen otros tipos como los de campo de visin
amplia; aquellos acondicionados para poder observar con los anteojos
puestos y otros oculares que generalmente que se usan en los microscopios
binoculares, denominados oculares de compensacin. stos consisten en que
uno de ellos posee un sistema de lentes mviles que permite enfocar
correctamente la imagen del objeto, despus que el enfoque total del microscopio
se ha realizado y se nota an una imagen levemente desenfocada en uno de ellos,
generalmente el izquierdo, porque al observar la imagen a travs de cada ocular
derecho e izquierdo se nota que una de ellas no est enfocada correctamente.

PRISMAS. En los microscopios modernos monoculares o binoculares, se requiere


el empleo de prismas, estructuras transparentes que, en el caso de los
microscopios monoculares, sirven para desviar los rayos luminosos de la
trayectoria rectilnea del eje ptico del objetivo y dirigirlos hacia el tubo ptico
ligeramente inclinado y luego hacia el ocular.

Figura 9. Prisma con superficie reflectante que sirve para desviar los rayos luminosos.

En los microscopios binoculares, los prismas separan los rayos luminosos


provenientes del objetivo, en dos haces de luz y los dirigen a cada ocular. En ambos
casos existe siempre una superficie reflectante para evitar la descomposicin de la
luz.

C) COMPONENTES DE ILUMINACIN: Se consideran dentro de este grupo a


los instrumentos que proporcionan energa luminosa al microscopio. Las fuentes de
energa luminosa son de dos tipos natural y artificial.

La luz natural, emitida por el sol, se obtiene de manera indirecta mediante un


espejo que posee una superficie plana y otra cncava. El espejo est situado
en la superficie superior de la base o pie. Un mecanismo especial permite
orientarlo hacia un lugar iluminado indirectamente por el sol (una ventana, por
ejemplo) y luego dirigir el haz luminoso hacia la lente del condensador.

La luz artificial se genera a travs de una lmpara de bajo voltaje (generalmente


de 6 voltios) que, mediante un reostato regula la emisin y la intensidad de luz. Al
igual que el espejo, este sistema de iluminacin se inserta en la base o pie del
microscopio
En los microscopios que poseen un espejo, por carecer de una fuente de luz
incorporada, tambin se puede emplear la luz artificial emitida por una lmpara que
proyecta el haz luminoso de la misma manera como se orienta la superficie
reflectante del espejo cuando se ilumina el microscopio con luz natural.

FILTROS. En diversas partes del recorrido de haz luminoso, aunque en la


mayora de los casos se sitan entre la fuente luminosa y el condensador. Tienen
por finalidad modificar la longitud de onda de la luz que ilumina el objeto a observar.
Por ejemplo, cuando se utiliza Son estructuras transparentes (de vidrio, plstico o
gelatina) coloreadas que se localizan luz artificial es necesario emplear filtros azules
pues modifican el color ligeramente amarillento que poseen los rayos luminosos que
emite las lmparas elctricas, transformndolos en rayos de luz blanca. Este color
de luz es ms aceptada por la retina y en las preparaciones histolgicas coloreadas
mejora facilita la rendicin de color de las estructuras celulares o tisulares
examinadas.

Para ciertos casos de microscopa fotnica especial se requiere el auxilio de filtros


especiales como en el caso de los microscopios de fluorescencia, contraste de
fases y de polarizacin.

Dependiendo del fabricante y de los modelos de microscopios, los filtros se colocan


en anillos o dispositivos especiales denominados portafiltros que, en el caso de los
microscopios fotnicos de campo claro (de uso ms frecuente), estn situados
inmediatamente encima de la fuente luminosa o debajo de la lente frontal
del condensador.

Aumento total del microscopio fotnico compuesto. El aumento total de la


imagen del microscopio compuesto se obtiene multiplicando el aumento propio del
objetivo por el aumento propio del ocular:

AT= aumento del objetivo x aumento del ocular

Aumento til y aumento vaco del microscopio. La imagen que forma el


microscopio fotnico compuesto posee caractersticas que permiten ver menor o
mayor cantidad de detalles de la misma.Se observarn ms detalles cuanto mejor
sea el poder de resolucin del objetivo empleado. Ya se ha mencionado que la
resolucin de la imagen del objeto depende esencialmente de la apertura numrica
del objetivo y del tipo de luz que se utilice.
Tipos principales de microscopios

Microscopio ptico

Tambin conocido como microscopio de luz, es el microscopio de mayor sencillez


estructural y funcional.

Trabaja a travs de una serie de pticas que, en conjunto con la entrada de luz,
permiten la magnificacin de una imagen que se encuentre bien ubicada en el plano
focal de las pticas.

Es el microscopio de diseo ms antiguo y sus primeras versiones se atribuyen a


Anton van Lewenhoek (siglo XVII), el cual utilizaba un prototipo de una sola lente
sobre un mecanismo que sostena la muestra.

Microscopio compuesto

El microscopio compuesto es un tipo de microscopio ptico que trabaja de manera


distinta al microscopio simple.

Cuenta con uno ms mecanismos de pticas independientes que permiten un mayor


o menor grado de magnificacin sobre la muestra. Suelen tener una composicin
mucho ms robusta y permitir mayor facilidad de observacin.

Se estima que su nombre no se atribuye a una mayor cantidad de mecanismos


pticos en la estructura, sino a que la formacin de la imagen magnificada ocurre en
dos etapas.

Una primera etapa, donde la muestra se proyecta directamente en los objetivos


sobre ella, y una segunda, donde es magnificada a travs del sistema ocular que
llega al ojo humano.

Microscopio estereoscpico

Es un tipo de microscopio ptico de bajo nivel de magnificacin utilizado


principalmente para disecciones. Cuenta con dos mecanismos pticos y visuales
independientes; uno para cada extremo de la muestra.

Trabaja con luz reflejada sobre la muestra en vez de a travs de esta. Permite
visualizar una imagen tridimensional de la muestra en cuestin.

Microscopio petrogrfico
Utilizado especialmente para la observacin y composicin de rocas y elementos
minerales, el microscopio petrogrfico trabaja con los fundamentos pticos de los
microscopios anteriores, con la cualidad de incluir material polarizado en sus
objetivos, lo que permite reducir la cantidad de luz y brillo que los minerales pueden
reflejar.

El microscopio petrogrfico permite, a travs de la imagen magnificada, dilucidar los


elementos y estructuras de composicin de rocas, minerales, y componentes
terrestres.

Microscopio confocal

Este microscopio ptico permite el aumento de la resolucin ptica y el contraste de


la imagen gracias a un dispositivo o pinhole espacial que elimina la luz excedente o
fuera de foco que se refleja a travs de la muestra, sobre todo si esta tiene un mayor
tamao que el permitido por el plano focal.

El dispositivo o pinole es una pequea abertura en el mecanismo ptico que evita


que la luz excedente (aquella que no se encuentra en foco sobre la muestra) se
disperse sobre la muestra, disminuyendo la nitidez y el contraste que esta pueda
presentar.

Debido a esto, el microscopio confocal trabaja con una profundidad de campo


bastante limitada.

Microscopio de fluorescencia

Es otro tipo de microscopio ptico en el cual se utilizan ondas lumnicas


fluorescentes y fosforescentes para un mejor detalle sobre el estudio de
componentes orgnicos o inorgnicos.

Se destacan sencillamente por el uso de la luz fluorescente para generar la imagen,


no teniendo que depender enteramente de la reflexin y absorcin de la luz visible.

A diferencia de otros tipos de microscopios analgicos, el microscopio fluorescente


puede presentar ciertas limitaciones a causa del desgaste que puede presentar el
componente lumnico fluorescente debido a la acumulacin de elementos qumicos
causados por el impacto de los electrones, desgastando las molculas fluorescentes.

El desarrollo del microscopio fluorescente les vali el Premio Nobel de Qumica en


2014 a los cientficos Eric Betzig, William Moerner y Stefan Hell.

Microscopio electrnico
El microscopio electrnico representa una categora en s mismo frente a los
microscopios anteriores, debido a que cambia el principio fsico bsico que permita
la visualizacin de una muestra: la luz.

El microscopio electrnico sustituye la utilizacin de luz visible por electrones como


fuente de iluminacin.

El uso de electrones genera una imagen digital que permite una mayor ampliacin de
la muestra que los componentes pticos.

Sin embargo, grandes magnificaciones pueden generar una prdida de fidelidad en


la imagen de la muestra.

Se utiliza principalmente para investigar la ultra estructura de especmenes


microorgnicos; capacidad con la que no cuentan los microscopios convencionales.

El primer microscopio electrnico fue desarrollado en el 1926 por Han Busch.

Microscopio electrnico de transmisin

Su principal atributo es que el rayo de electrones pasa a travs de la muestra,


generando una imagen bidimensional.

Debido a la potencia enrgica que pueden tener los electrones, la muestra debe ser
sometida a una preparacin previa antes de ser observada a travs de un
microscopio electrnico.

Microscopio electrnico de barrido

A diferencia del microscopio electrnico de transmisin, en este caso el rayo de


electrones es proyectado sobre la muestra, generando un efecto de rebote.

Esto permite la visualizacin tridimensional de la muestra debido a que se obtiene


informacin sobre la superficie de esta.

Microscopio de sonda de barrido

Este tipo de microscopio electrnico fue desarrollado despus de la invencin del


microscopio de efecto tnel.

Se caracteriza por utilizar una probeta que escanea las superficies de una muestra
para poder generar una imagen de alta fidelidad.

La probeta escanea, y mediante los valores trmicos de la muestra es capaz de


generar una imagen para su posterior anlisis, mostrada a travs de los valores
trmicos obtenidos.
Microscopio de efecto tnel

Es un instrumento utilizado especialmente para generar imgenes a nivel atmico.


Su capacidad de resolucin puede permite la manipulacin de imgenes individuales
de elementos atmicos, funcionando a travs de un sistema de electrones en un
proceso de tunel que trabajar con diferentes niveles de voltaje.

Se necesita un gran control del entorno para una sesin de observacin a nivel
atmico, as como la utilizacin de otros elementos en estado ptimo.

No obstante, se han visto casos en los que se han construido y utilizados


microscopios de este tipo de manera domstica.

Fue inventado e implementado en 1981 por Gerd Binnig y Heinrich Rohrer, quienes
obtuvieron el Premio Nobel de Fsica en 1986.

Microscopio de iones en campo

Ms que un instrumento, se conoce con este nombre a una tcnica implementada


para la observacin y estudio del ordenamiento y reordenamiento a nivel atmico de
distintos elementos.

Fue la primera tcnica que permiti discernir la disposicin espacial de los tomos en
un elemento dado. A diferencia de otros microscopios, la imagen magnificada no est
sujeta a la longitud de onda de la energa lumnica que cruce a travs de ella, sino
que cuenta con una capacidad nica de magnificacin.

Fue desarrollada por Erwin Muller en el siglo XX, y ha sido considerado el


precedente que ha permitido una mejor y ms detallada visualizacin de elementos a
nivel atmico hoy en da, a travs de nuevas versiones de la tcnica e instrumentos
que lo hacen posible.

Microscopio digital

Un microscopio digital es un instrumento con un carcter mayormente comercial y


generalizado. Funciona a travs de una cmara digital cuya imagen es proyectada en
un monito o computadora.

Ha sido considerado un instrumento funcional para la observacin de volumen y


contexto de las muestras trabajadas. De igual forma tiene una estructura fsica
mucho ms sencilla de manipular.

Microscopio virtual

El microscopio virtual, ms que un instrumento fsico, es una iniciativa que busca la


digitalizacin y archivo de muestras trabajadas hasta el momento en cualquier campo
de la ciencia, con el objetivo de que cualquier interesado pueda acceder e interactuar
con versiones digitales de muestras orgnicas o inorgnicas a travs de una
plataforma certificada.

De esta manera se estara dejando atrs la utilizacin de instrumentos


especializados y se fomentara la investigacin y el desarrollo sin los riesgos que
comprenden destruir o perjudicar una muestra real.
BIBLIOGRAFIA

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