Synthse

Ann Biol Clin 2011 ; 63 (3) : 273-84

Le dosage de linuline : mise au point

Measurement of inulin: development

Pierre Delanaye1 Rsum. Linuline, polymre de fructose, reste le marqueur de rfrence du

Marie Souvignet2 dbit de filtration glomrulaire (DFG). Popularis par les tudes de Smith et
Laurence Dubourg3 Shannon, son dosage nen demeure pas moins complexe et sujet des inter-
frences dont celle du glucose est la plus importante. Il existe deux grands
Lise Thibaudin2
types de dosages de linuline : les mthodes de dosage acide et enzyma-
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Nicolas Maillard2 tiques. Le dosage acide consiste en un dosage colorimtrique du fructose

Jean-Marie Krzesinski1 obtenu aprs hydrolyse de linuline en milieu trs acide. Le dosage du fructose
Etienne Cavalier4 englobe diffrentes mthodes de dosage dont la plus utilise est la raction
Christophe Mariat2 lanthrone. Toutes ces mthodes prsentent des interfrences au glucose.
1 Service de nphrologie- Diffrentes mthodes enzymatiques ont t dcrites au cours du temps.
dialyse-transplantation rnale, Celles-ci apparaissent plus prcises et sans doute moins sujettes aux interf-
Universit de Lige, CHU Sart Tilman, rences mme si peu dtudes comparatives sont disponibles. Plusieurs auteurs
Lige, Belgique ont galement dvelopp des dosages de type CLHP. Cette mthode spcifique
<pierre_delanaye@yahoo.fr>
2 Laboratoire dexplorations rnales,
et prcise demeure cependant moins adapte la routine. Ainsi, si lutilisation
Universit Jean Monnet, Hpital Nord, de linuline comme marqueur de rfrence nest pas remise en cause, son
Saint-Etienne, France dosage reste dlicat, sujet aux interfrences et une certaine interprtation.
3 Explorations rnales et mtaboliques, Des tudes supplmentaires restent ncessaires pour valider analytiquement et
Hospices Civils de Lyon, Universit comparativement les techniques de dosage de linuline.
Lyon 1, Inserm U820, Lyon, France
4 Service de chimie mdicale, Mots cls : inuline, dbit de ltration glomrulaire, interfrences
Universit de Lige,CHU Sart Tilman,
Lige, Belgique Abstract. Inulin clearance is still considered as the gold standard method to
measure glomerular filtration rate. This method has been proposed in thirties by
Smith and Shannon but the inulin measurement method still remains complex.
Interferences, notably with the glucose, must also be considered. Two main
methods have been proposed to measure inulin both in urine and plasma: acid
or enzymatic methods. Acid methods are colorimetric. Fructose is actually
measured after inulin hydrolysis in acid milieu. Different methods have been
described to measure fructose. Among these methods, the measurement using
anthrone is the most popular. Several enzymatic methods have also been publi-
shed. These have more precision and the interference with glucose is probably
less even if relatively few studies are available. HPLC methods for inulin mea-
surement have also been described. This method is specific and accurate. While
inulin is an unquestioned reference method for glomerular filtration rate, its
measurement in urine and plasma remains tricky and at risk of interferences.
Additional trials seem necessary to analytically validate and compare all the
methods available on the market.
Article recu le 15 septembre 2010,
accepte le 26 novembre 2010 Key words: inulin, glomerular ltration rate, interferences

Linuline est le marqueur considr, encore aujourdhui (DFG). En effet, ce polymre de fructose prsente toutes
doi:10.1684/abc.2011.0580

et par la plupart des scientifiques, comme la rfrence les caractristiques dun marqueur exogne idal du
pour la dtermination du dbit de filtration glomrulaire DFG :
1) libre au niveau plasmatique (non li aux protines)
et entirement filtr au niveau glomrulaire (masse mol-
Tirs part : P. Delanaye culaire moyenne de 5 200 Da) ;
Pour citer cet article : Delanaye P, Souvignet M, Dubourg L, Thibaudin L, Maillard N, Krzesinski JM, Cavalier E, Mariat C. Le dosage de linuline : mise au point. Ann
Biol Clin 2011 ; 63(3) : 273-84 doi:10.1684/abc.2011.0580 273
 Synthse
2) ni scrt, ni rabsorb, ni mtabolis au niveau tubu-
laire ;
3) physiologiquement inerte et non toxique ;
4) excrtion exclusivement rnale ;
5) concentration mesurable dans le sang et les urines [1].
Lutilisation de linuline comme marqueur du DFG a t
popularise par les tudes de Smith et Shannon (ce dernier
tant le premier humain chez qui le DFG a t mesur par
cette mthode en 1935 [2]). Les donnes collectes par ces
pionniers de la physiologie rnale sont compiles dans le
fameux livre de Smith publi en 1951 : The kidney: Struc-
ture and function in health and disease. Ces auteurs ont
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logiquement concentr leurs efforts sur les aspects les plus
physiologiques de la mesure du DFG, laissant alors quelque
peu de ct les difficults inhrentes au dosage mme de
linuline. Smith ne fera quvoquer brivement la mesure
de linuline dans son livre (et pour arriver la conclusion
quaucun dosage nest parfait !). Il est pourtant vident que
la mesure de linuline dans le sang et les urines est loin dtre
simple et est sujette interfrences dont la plus importante
est celle concernant le glucose. Un dosage marqu a bien t
propos (inuline marque au 51 Cr ou au 14 C, inuline-allyl
marque l125 I et inuline marque l3 H) mais na jamais
vraiment rencontr le succs en pratique [3-6]. La mesure
du polymre de fructose quest linuline inclut au moins
deux tapes successives. Tout dabord, linuline doit tre
hydrolyse en fructose puis le fructose doit tre mesur.
En mthode non isotopique, deux grands types de tech-
nologie ont t dvelopps. Nous parlerons classiquement
des mthodes de dosages dites acide et des mthodes
dites enzymatiques . Pour les deux mthodes, la mesure
dun blanc est toujours conseille dune part, cause
des interfrences possibles entre le dosage du fructose et
du glucose (voir ci-dessous) et, dautre part, pour prendre
en compte le fructose naturellement prsent dans le
plasma [7]. Cependant, la concentration habituelle de fruc-
tose endogne dans le plasma est si faible (1 7 mg/L,
donnes personnelles) quelle est nglige par certains
auteurs [8, 9].
Relativement peu de donnes ont t publies sur les
diffrences ventuelles entre ces dosages. Limpact sur
une mesure de DFG dventuelles diffrences de dosage
est, sans doute rel, mais na que trs rarement t
estim. Quoi quil en soit, nous allons dcrire, dans cet
article, les diffrentes mthodes de mesure existantes pour
linuline. Sous le vocable inuline, nous comprendrons
aussi le dosage dun autre polymre de fructose, la sinis-
trine (Inutest) qui prsente une masse molculaire moins
importante (3 500 Da) et qui apparat plus soluble mais
dont le dosage est identique celui de linuline classique
[10, 11].
274
Mthodes acide
Le dosage acide classique de linuline inclut un pr-
traitement de lchantillon pour prcipiter les protines
(plusieurs mthodes de prcipitations des protines seront
utilises au cours du temps). En effet, comme son nom
lindique, ces dosages doivent ensuite tre raliss en milieu
acide, or, ce milieu acide entranera une dgradation des
protines qui risquent dinterfrer lors du dosage en colori-
mtrie [12]. La premire tape consiste donc en lhydrolyse
de linuline en fructose. Ensuite, le fructose sera dos par
colorimtrie selon diffrentes modalits. Plusieurs rac-
tions acide sont proposes. Nous reprendrons ici les
diffrentes mthodes de dosage dcrites au cours du temps.
Cuivre et iodure
Cest le dosage utilis dans les premires tudes historiques
de Smith et Richards, notamment [2, 13]. Lhydrolyse de
linuline est obtenue par adjonction dacide chlorhydrique
[13] ou dacide sulfurique [2]. Le dosage du fructose se
basait sur la raction connue alors sous le nom de rac-
tion de Schaffer-Somogyi et qui inclut une raction avec
le cuivre et liodure [14]. Ce dosage est peu sensible et
ncessitait donc dinjecter de hautes doses dinuline. Il sera
rapidement abandonn [15]. Notons que ces deux auteurs
proposaient dj un pr-traitement de lchantillon base
de levures pour liminer le glucose de lchantillon et viter
les interfrences (voir ci-dessous) [2, 13].
Diphnylamine
Ce dosage, dcrit en 1939 par deux auteurs indpendants,
se rvle bien plus prcis et sensible que le prcdent
[15, 16]. Il se base sur la raction entre le fructose et la
diphnylamine dcrit en 1885 par Ihl et Pechamnn. Le
fructose en ragissant avec la diphnylamine en milieu
acide (acide chlorhydrique dissous dans de lthanol) et
chaud (60 minutes 100 C) donne un compos bleu clair
[15]. Ce dosage sera simplifi en 1942 (lacide actique,
moins volatile, remplacant lthanol) [17]. Pour diminuer
linterfrence avec le glucose, ces deux auteurs proposent
aussi de traiter pralablement le plasma avec une
levure consommatrice de glucose (en fait, ils utilisent de
la simple levure de boulangerie). Little, en 1949, rem-
place lutilisation des levures par un prtraitement en milieu
alcalin cens oxyder une grande quantit de glucose [18].
Ce traitement semble nanmoins dgrader aussi linuline,
surtout dans les urines [19]. Cette dgradation partielle
dinuline semble aussi varier selon lorigine de linuline uti-
lise, ce qui ne simplifie videmment pas les choses [19-24].
Ann Biol Clin, vol. 63, n 3, mai-juin 2011

Linterfrence au glucose persistait et la ncessit dune
mesure blanc savrait toujours indispensable [25].
Notons que Rolf dcrit une diminution de linterfrence
entre dosage de fructose et de glucose si la raction a lieu
75 et non pas 100 C [26].
Rsorcinol
Ce dosage se base sur la raction de Seliwanoff dcrite en
1887. En 1934, Roe propose un dosage bas sur la rac-
tion avec le rsorcinol en milieu acide (alcool thylique
et chlorhydrique) et chauff 80 C pendant 8 minutes
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La raction donne un compos de couleur rouge [27]. Ce
dosage sera repris, dcrit plus en dtail et lgrement modi-
fi par Steinitz en 1938 et Hubbard en 1942 [28, 29]. En
1949, Roe amliore le dosage en remplacant lalcool thy-
lique par de lacide actique glacial [30]. Cette mthode
sera valide par Schreiner en 1950 qui propose, par ailleurs,
que la raction se passe 80 C pendant 25 minutes [31].
Preedy, en 1954, propose un prtraitrement avec une solu-
tion dthanol pour prcipiter les dextrans [32]. Ullmann
exprimente le prtraitement en milieu alcalin (mthode de
Little) pour oxyder le glucose mais retrouve aussi une cer-
taine dgradation de linuline variant selon les prparations
[21]. Linterfrence avec le glucose subsistant nanmoins,
la proposition de Froesch, en 1957 apparat novatrice et
originale mme si elle sera largement ignore. Cet auteur
suggre une oxydation pralable du glucose par traitement
enzymatique purifi (dgradation du glucose en gluconate
par la glucose oxydase). Les rsultats de Froesch appa-
raissent excellents [33]. Cette tape pr-analytique peut tre
considre comme enzymatique et sera, dailleurs, uti-
lise plus tard dans les mthodes de dosage enzymatiques
(voir ci-dessous). Le dosage par rsorcinol, en lui-mme,
ncessite un contrle strict de la temprature de la rac-
tion, ce qui nest pas toujours vident et simple raliser
en pratique. Un premier dosage semi-automatique (dpro-
tinisation manuelle pralable) sera publi en 1968 sur lun
des premiers automates de type Technicon (sans utiliser la
fonction dialyse prsente sur cet automate pour la dpro-
tinisation) [34]. Dautres mthodologies sur le Technicon
seront proposes utilisant (ou non) la fonction dialyse
telle quelle avait t dveloppe avec la raction de Hey- mme temps, ce qui permet de corriger le rsultat du dosage
rovsky (voir ci-dessous [35]) : traitement dhydrolyse de
linuline par lacide chlorhydrique puis dialyse via passage
travers une membrane en cuprophane pour dprotini-
ser le plasma puis raction avec le rsorcinol et lacide
thylique [36-38]. lpoque automatise du Technicon,
certains auteurs proposent encore un pr-traitrement des
chantillons la levure de boulangerie pour diminuer au
mieux les interfrences avec le glucose [38]. Dans cette der-
nire publication, les auteurs dcrivent par une rgression
la concentration apparente dinuline due au glucose qui est
Ann Biol Clin, vol. 63, n 3, mai-juin 2011
Le dosage de linuline
loin, malgr tous leurs efforts, dtre ngligeable (y = 195x-
10,1 mg/L). De mme, Erman attribue linterfrence au
glucose le fait quils trouvent une diffrence significative de
DFG entre 8 patients diabtiques glucosuriques et 7 patients
diabtiques non glucosuriques lorsque le DFG est mesur
par clairance dinuline, alors quaucune diffrence nest
observe si les clairances diothalamate ou de cratinine
sont utilises [39].
Anthrone
Le dosage de carbohydrates avec le ractif anthrone de
Dreywood (raction dcrite en 1946) a t publi en 1948
par Morris [40]. Cest en 1952 que Young Jr ladaptera
pour la premire fois au dosage de linuline [41]. Cest
probablement la mthode acide qui est la plus uti-
lise de nos jours, du moins dans les pays anglo-saxons
[7]. Young propose un traitement pralable du glucose de
lchantillon pour oxyder le glucose avec de lhydroxyde de
sodium [18]. Lanthrone est ajout une solution dacide
sulfurique puis le plasma est mlang et chauff pendant
15 minutes 75 C. Le produit de la raction a une cou-
leur jaune. Par rapport aux autres ractifs (diphnylamine
et rsorcinol), lanthrone semble plus stable et plus facile
prparer. La raction est galement moins dpendante des
conditions environnantes comme la temprature. La sensi-
bilit et la reproductibilit apparaissent meilleures [41-43],
ce qui permet dailleurs un dosage dans le sang capillaire
[43]. Ces deux avantages sont retrouvs par White un an
plus tard, mme si cet auteur utilise le prtraitement base
de levures [44]. Linterfrence avec le glucose diminuerait
encore si la temprature de la raction est fixe 56 C [19]
ou 38 C [45] et si la concentration du ractif est rduite
[45]. Une version automatise de la mesure par anthrone
sera propose, ds 1965, dans laquelle linuline est hydro-
lyse par lacide chlorhydrique sans dprotinisation, les
hydrolysats dinuline passant ensuite par une membrane de
dialyse pour ragir avec lanthrone [23]. Dautres auteurs
proposeront une version semi-automatise (dans leur pro-
tocole, le plasma est dprotinis manuellement en utilisant
lacide trichloroactique) sur le Technicon. Lintrt rside
dans le fait que le glucose soit mesur systmatiquement en
dinuline (sorte de blanc systmatique). Les auteurs
dmontrent, par ailleurs, lintrt de lautomatisation sur
les performances analytiques (CV intra-assay de 0,5 %
et CV inter-assay de 5,8 % 165 mg/L et de 2,7 %
400 mg/L, recouvrement de 98 % et linarit entre 0 et
2 500 mg/L). Ces auteurs ont tudi les interfrences du
glucose chez 36 patients diabtiques prsentant des concen-
trations variables de glucose et nayant pas recu dinuline.
Ils montrent que linterfrence du glucose sur le dosage
de linuline est importante et linaire avec une relation :
275
 Synthse
inuline (en mg/L) = 5,9xglycmie (en mmol/L)+20,8. Ainsi,
en labsence de la correction effectue grce cette courbe,
une concentration de glucose de 1,8 g/L donnera une valeur
dinuline de 59 mg/L [46]. Florijn illustrera, sur 3 patients
diabtiques, linterfrence au glucose pour la mesure de
linuline avec ce dernier dosage. Linjection de 50 mL
de glucos 50 % en 20 minutes chez 3 diabtiques non
insulino-requrants induira une augmentation de la glyc-
mie de 1,20,1 g/L 2,40,01 g/L. Le dosage dinuline
passe de 12223 18027 mg/L et la clairance dinuline
passera de 299 mL/min 443 mL/min selon que la
correction pour le glucose est, ou non, effectue [47].
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Acide -indole-actique
Ce dosage est propos, en 1956, par le Praguois Hey-
rovsky dans le premier volume de Clinica Chimica Acta
[48]. En prsence dacide hydrochlorhydrique concentr
pour hydrolyser linuline, lauteur dmontre que lacide
-indole actique est excellent pour le dosage colorim-
trique du fructose en donnant un produit de couleur pourpre.
Linterfrence avec le glucose persiste mais semble limi-
te 0,5-1 %. Lauteur recommande toujours nanmoins
dutiliser un blanc et de dprotiniser le plasma. Cette
raction a lieu temprature ambiante (raction sur la nuit)
et a le mrite dtre simple (en tout cas relativement pour
une technique manuelle) [48]. Yatzidis, en 1976, montrera
que lacide actique -indol peut tre utilis comme ractif et dure 20 minutes. La seconde tape est une quantifi-
sans dprotinisation pralable et que le temps de raction
peut, de fait, tre limit 25 minutes [49]. La simplicit du
dosage propos par Heyrovsky explique que cette technique
fut la premire, en 1965, tre utilise de facon automati-
se. Dawborn dcrit donc, sur le Technicon, la raction qui
comprend une dprotinisation pralable automatique par
dialyse (membrane en cuprophane impermable linuline
et traitement dhydrolyse de linuline avant cette dialyse
par lacide chlorhydrique) [35]. Dautres auteurs amlio-
reront encore les performances analytiques de ce dosage
automatis [50, 51].
Autres dosages
Dautres dosages ont t proposs comme celui bas sur
le fait que linuline ragisse avec la vanilline en milieu
acide pour donner un compos rouge [52]. Lavantage est
quaucune raction dhydrolyse pralable de linuline nest
ncessaire. La raction doit cependant se raliser labri
de la lumire et la survenue dinterfrence est peu tudie.
Une raction aboutissant une coloration rose est aussi
dcrite aprs raction de linuline avec lacide thiobarbi-
turique en milieu acide (acide chlorhydrique) et diffrents
auteurs proposent une mthode semi-automatise avec ou
sans dprotinisation [53, 54]. Linterfrence au glucose
276
est peu tudie avec cette raction mais est probablement
prsente.
Enfin, signalons encore que certains auteurs ont propos
dautres mthodes de prtraitement de lchantillon pour
enlever le glucose du plasma, par exemple, en utilisant
des colonnes de gel censes filtrer le glucose [55, 56]. Ceci
rallonge bien entendu fortement la dure de la mesure.
Toutes ces ractions sont susceptibles dinterfrences avec
le glucose ou les autres carbohydrates et la mesure dun
plasma avant injection (blanc) reste donc systmatiquement
recommande. Cette ncessit est affirme ds la fin des
annes 1930 [15, 17, 18, 28, 30, 31]. Lutilisation dun
blanc ne rgle cependant pas le problme si la glycmie
varie pendant la dtermination du DFG [18]. De plus, la pre-
mire tape dhydrolyse de linuline ncessite lutilisation
de produits corrosifs et acides ce qui rend la raction, non
seulement difficile et chronophage, mais galement poten-
tiellement dangereuse [46, 57].
Mthodes enzymatiques
Le premier dosage entirement enzymatique est propos
par Day en 1984 [58]. Il seffectue aussi en deux tapes.
La premire tape est, encore une fois, une hydrolyse de
linuline en fructose qui est ici effectue par un enzyme
appel la -fructofuranosidase. Cette raction a lieu 50 C
cation du fructose aprs transformation en sorbitol, via
une raction avec le NADH et la sorbitol dshydrog-
nase. La transformation du fructose en sorbitol entrane
une diminution dabsorbance 340 nm qui permet de
dduire la concentration de fructose. Day ne prcise pas
la performance analytique de son dosage ni les ventuelles
interfrences avec le glucose [58]. La sorbitol dshydro-
gnase savrera nanmoins par la suite spcifique du
fructose (ractivit avec le glucose infrieure 1 %) [7, 59].
Dalton, en 1987, propose une mthode semi-
enzymatique , savoir une tape dhydrolyse de linuline
par lacide perchlorhydrique (comme dans les mthodes
acide ) puis une tape enzymatique de dosage du fructose
selon la proposition de Day. La reproductibilit est excel-
lente (CV intra-assay, pour le plasma et les urines, de 1,8 et
1,3 %). Les auteurs voquent (sans en dtailler les rsultats)
labsence dinterfrence avec des concentrations de glucose
de 45 grammes [60]. En fait, le problme de la raction
propose par Day est que lenzyme -fructofuranosidase
nest pas facile obtenir. Cette mthode ne sera donc
jamais utilise grande chelle. En 1987, Degenaar, dcrit
lutilisation de linulinase pour lhydrolysation de linuline
en fructose (raction de 30 minutes 50 C avec un
tampon citrat). Des enzymes de type hexokinase sont
ensuite utiliss pour convertir, en prsence dATP, les
Ann Biol Clin, vol. 63, n 3, mai-juin 2011

hexoses, glucose et fructose, en glucose- et fructose-6-
phosphate. Le fructose-6-phosphate est ensuite converti
en glucose-6-phosphate par une phosphoglucose isom-
rase. Le glucose-6-phosphate obtenu des deux ractions
prcdentes, est, enfin, lui-mme oxyd en prsence de
NADP et de glucose-6-phosphate dshydrognase en acide
6-phosphogluconique et en NADPH. Cette dernire tape
entrane une augmentation dabsorbance qui permet de
dterminer la concentration de fructose (gure 1). Cette
technique a lavantage de pouvoir tre automatise (sur
Cobas Bio en loccurence). Son CV analytique (CV intra-
assay) est meilleur que pour le dosage base danthrone
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(1,2 % versus 3,4 %). Les deux mthodes sont, bien logi-
quement, corrles (r = 0,96 pour le sang et 0,99 pour les
urines). Les auteurs reprennent, comme argument en faveur
de la technique enzymatique, une concentration dinuline
lors de la perfusion continue qui apparat plus constante
[61]. Jung, en 1990, dcrit une mthode semi-enzymatique
(hydrolyse de linuline par lacide chlorhydrique puis
mesure du fructose par lhexokinase). Il ne trouve pas de
performance analytique suprieure la mthode enzyma-
tique par rapport la technique lanthrone pour le dosage
plasmatique de linuline que ce soit en terme de prcision
(CV intra-assay de 1,9 % et de 1 % pour les mthodes enzy-
matique et acide respectivement), de linarit ou de
limite de dtection. Il insiste sur le prix nettement moins
lev de la mthode acide . La corrlation entre les
mthodes est, heureusement, excellente (r = 0,99 sur 57
chantillons). Cet auteur na pas spcifiquement tudi les
interfrences avec le glucose mais il cite (sans dvelopper)
lutilisation de la glucose oxydase comme prtraitement
des chantillons pour viter cette interfrence. Ce prtraite-
ment est utilis pour la mthode enzymatique et la mthode
lanthrone ce qui peut, peut-tre, expliquer labsence de
supriorit de la premire mthode sur la seconde dans cette
tude [62]. En 1991, Delanghe confirme et insiste sur ltape
intressante pour diminuer linterfrence du dosage avec
le glucose. Cette tape implique donc une glucose oxy-
dase qui transforme le glucose en gluconate et qui agit
avant linulinase, cest--dire en phase de princubation
(gure 1) [8]. Cette tape avait dj t dcrite et propose hexokinase (selon [8], voir texte pour dtails). GOD : glucose
par Froesch en 1957 (voir ci-dessus) mais avait, semble-t-
il, rencontr alors peu de succs ( tel point que Delanghe,
Jung et les autres auteurs utilisant cet enzyme semblent
ignorer cette publication ; en tout cas, ils ne citent pas
ce travail quil convient donc, en quelque sorte, de rha-
biliter [8, 12, 62]) [33]. Le reste de la mesure est assur
par un traitement linulinase puis une mesure du fructose
avec hexokinase, phosphoglucose isomrase et glucose-6-
phosphate dshydrognase, tels que dcrit par Degenaar
(gure 1) [8, 61]. Les performances analytiques de cette
mthode sur lautomate Hitachi 717 (mais la mthode peut
tre adapte sur tout automate) sont excellentes (linarit,
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Le dosage de linuline
limite de dtection, CV intra- et interassay 0,9 % et 2,7 %,
stabilit 1 mois 4 C). Des concentrations en glucose
atteignant 3,6 g/L sont totalement limines par ltape
enzymatique pralable [8]. Kuehnle, en 1992, confirme les
rsultats de Delanghe concernant lintrt dun traitement
de lchantillon avec la glucose oxydase. Cet auteur insiste
sur le fait que de petits volumes plasmatiques suffisent pour
lanalyse (100 L) et que linterfrence au glucose est am-
liore (jusqu une concentration de 7 g/L bien que les
donnes prouvant cette affirmation ne sont pas don-
nes dans larticle). Les auteurs insistent aussi sur le gain
de temps obtenu par le fait que, contrairement aux mthodes
acide , une dprotinisation pralable du plasma nest
plus ncessaire vu le pH moins acide de ces ractions [12].
En 1993, Summerfield [7] propose un dosage automatis
(sur Cobas FARA II) combinant lutilisation de linulinase
et lenzyme sorbitol deshydrognase reprenant ainsi, pour le
dosage du fructose, la raction enzymatique propose ant-
rieurement par Day (gure 2) [58]. Larticle de Summerfield
est intressant car il compare directement sa mthode enzy-
matique avec une mthode acide [7], en loccurrence,
la mthode lanthrone [44]. La mthode enzymatique se
rvle prcise, linaire et son recouvrement est excellent
(quasi 100 %). La comparaison entre mthode enzymatique
et mthode anthrone dmontre un biais systmatique
Pr incubation
Inulinase
Inuline D-Fructose
GOD
Glucose + H2O2 gluconate + H2O+ O2
Raction
Hexokinase
D-Fructose + ATP D-fructose-6-phosphate +ADP
PGI
D-Fructose-6-phosphate D-glucose-6-phopshate
G6PDH
D-Glucose-6-phosphate + NADP+ acide 6 phosphogluconique + NADPH + H+
Figure 1. Mthode enzymatique de dosage de linuline utilisant
oxydase, PGI : phosphogluco-isomrase, G6PDH : glucose-6-
phosphate dshydrognase.
Inulinase
Inuline Fructose
Sorbitol dshydrognase + NADH
Fructose + NADH+ D-Sorbitol + NAD+
Figure 2. Mthode enzymatique de dosage de linuline utilisant la
sorbitol dshydrognase (selon [7], voir texte pour dtails).
277
 Synthse
de 3,5 mg/L (lanthrone donnant des rsultats plus levs)
dans le sang et de 138 mg/L dans les urines. Ces diff-
rences sont juges non significatives par les auteurs (pour
les urines, les concentrations sont habituellement comprises
dans des valeurs suprieures 3 000 mg/L). Ladjonction
dune concentration connue de glucose (300 mg/L) du
plasma ne contenant pas dinuline, entrane une appari-
tion dinuline de 33 mg/L avec la mthode lanthrone,
alors quelle ne sera que de 1,3 mg/L avec la mthode
enzymatique. Les auteurs recommandent, pour les deux
mthodes, la ralisation dun blanc pour la prise en
compte du fructose endogne. Par ailleurs, les auteurs ne
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retrouvent pas dinterfrence avec le sorbitol, le mannitol
et le xylitol pour la mthode enzymatique. Le CV analy-
tique de la mthode enzymatique est meilleur que celui
de la mthode acide (CV inter-assay de 1,4 % versus
2,8 %). Mme si ces derniers CV ont t calculs deux
concentrations plasmatiques diffrentes, ce qui est quelque
peu discutable, ces rsultats sont en faveur de la mthode
enzymatique, le CV tant meilleur alors que les concentra-
tions testes sont plus basses (moyenne des concentrations
1602,3 mg/L pour lenzymatique et 64518 mg/L pour
lanthrone). Le CV inter-assay de la mthode enzyma-
tique pour le dosage urinaire est lui de 4 % (pour une
concentration moyenne de 2 39096 mg/L) (rsultats non
donns pour la mthode acide dans les urines) [7].
La ncessit dune quantit relativement leve de sorbi-
tol dshydrognase rend cependant le prix de cette raction
lev. La mme quipe a amlior le dosage en utilisant
une version cintique (lecture 10 20 minutes aprs
le dbut de la raction), ce qui permet dconomiser les
ractifs (diminution du prix dun facteur 30). Les auteurs
confirment galement que linuline est stable 2-8 C et
- 70 C pendant 5 semaines. Enfin, les auteurs ne retrouvent
pas dinterfrence significative entre le dosage enzyma-
tique dinuline et la bilirubine ou lhmoglobine, alors
quune interfrence modeste est dcrite avec les triglyc-
rides (6,8 mg/L dinuline par 100 mg/dL de triglycrides)
[63]. Cette dernire mthode de dosage sera aussi quelque
peu adapte par Soper (modification du temps dincubation
avec linulinase et modification des tampons utiliss) pour
la sinistrine [64]. Ces auteurs voqueront galement, assez
discrtement, une hydrolyse potentiellement incomplte de
sinistrine en fructose par linulinase chez les patients insuf-
fisants rnaux ou hpatiques [65]. Sugita a, lui-aussi, tudi
les performances analytiques et les interfrences au glu-
cose dune mthode enzymatique. Il reprend les ractions
enzymatiques dcrites par Degenaar [61], mais remplace
lhexokinase par une fructokinase, videmment cense tre
plus spcifique du fructose, ce qui lui permettrait de ne
pas prendre en compte la concentration de glucose [66].
Notons tout de mme que la rfrence scientifique repor-
tant la caractrisation de cet enzyme (cens, daprs
278
la bibliographie, tre in press ) na, notre connais-
sance, jamais t publie. Le dosage est adapt lautomate
Cobas FARA (Roche). Sugita mne une tude comparative
entre cette mthode et la mthode acide lanthrone
[66]. Cette mthode de dosage enzymatique est analyti-
quement performante (CV intra-assay, respectivement, de
1,66 %, 2,32 % et 1,07 % pour 131, 254 et 986 mg/L, CV
inter-assay de 2,15 % 259 mg/L, recouvrement excellent).
Ladjonction de glucose (jusqu 5 g/L), de fructose ou de
mannose au srum et lurine ne modifie pas les rsultats de
la mthode enzymatique et il ny pas non plus dinterfrence
significative avec les triglycrides, lhmoglobine, la bili-
rubine, lure et la cratinine. Dans cette tude, les rsultats
de la mthode enzymatique sont videmment bien corr-
ls aux rsultats de la mthode lanthrone (rsultats chez
64 sujets dont 4 diabtiques) (r = 0,979), mais lanalyse
du graphe de Bland et Altman montre que la mthode
lanthrone donne des rsultats plus hauts en dessous de
500 mg/L et des rsultats plus bas au-dessus de 500 mg/L
(les chiffres prcis ne sont pas donns dans larticle mais, si
la moyenne des diffrences semble acceptable (infrieure
5 mg/L), lcart type de la diffrence parat suprieur
50 mg/L, ce qui est norme). Notons enfin que la diffrence
est plus importante pour les 4 sujets diabtiques (mme
si leur glycmie au moment de la mesure nest malheu-
reusement pas connue) [66]. Enfin, trs rcemment, une
nouvelle mthode enzymatique a t propose qui se veut
notamment plus rapide et plus (ou aussi) prcise que les
autres mthodes enzymatiques [67]. Notons que les auteurs
proposent une dprotinisation du plasma avec de lacide
perchlorique, notamment pour diminuer les interfrences
potentielles la bilirubine. Cette raction, effectue appa-
remment manuellement avant centrifugation, doit durer
10 minutes temprature ambiante (ce temps est-il pris
en compte quand les auteurs affirment que leur mthode est
entirement automatise et rapide ?). La premire tape
est classique et consiste en lhydrolyse de linuline en
fructose par linulinase. La seconde tape fait ragir le fruc-
tose avec la D-fructose dshydrognase en prsence de la
forme oxyde du 1-mthoxy-5-mthylphnazinium (1-m-
PMS) pour donner la forme rduite du 1-m-PMA. Ce ractif
agit sur loxygne pour produire de leau oxygne qui,
en ragissant avec une peroxydase, va transformer dautres
ractifs, savoir le N-thyl-N-(2-hydroxy-3-sufopropyl)-
m-toluidine et le 4-aminoantipyrine en quinonimine. Ce
compos final sera quantifi par colorimtrie classique.
Cette mesure est automatise sur lHitachi 717. Les per-
formances de ce dosage ont t compares celles dun
dosage lanthrone. Les deux mthodes savrent linaires.
Le CV intra-assay est dtermin sur 3 chantillons de srum
50, 101 et 200 mg/L et sur 3 chantillons durines
50, 101 et 160 mg/L (pour les urines, soit dit en pas-
sant, ces concentrations ne correspondent pas aux valeurs
Ann Biol Clin, vol. 63, n 3, mai-juin 2011

rencontres en clinique). Le CV intra-assay de la mthode
enzymatique est excellent (1 3,6 % pour le sang et 0,6
1,37 % pour les urines), de mme que le CV inter-assay
(0,96 3,33 % pour le sang et 1,68 2,2 % pour les urines).
Les auteurs confirment labsence dinterfrences avec la
bilirubine, les triglycrides, lhmoglobine, lacide ascor-
bique et lalbumine. Ladjonction, dans le srum, de 1 et
2 g/L de glucose ne modifie pas la concentration dinuline
dtermine par mthode enzymatique. Par contre, si on
utilise la mthode lanthrone, la concentration dinuline
augmente de 12,6 % 1 g/L et de 38,7 % 2 g/L. Le
recouvrement est proche de 100 % pour les deux tech-
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niques mais la mthode lanthrone donne, en prsence
du glucose, un rsultat dinuline de 52 92 mg/L dans
le plasma, alors quil ne contient pas dinuline (ncessit
dun blanc) tandis que la mthode enzymatique donnera des
rsultats de 4 mg/L maximum. Enfin, les deux mthodes
ont t compares sur 46 chantillons urinaires (entre 100
et 11 000 mg/L) et sur 46 chantillons plasmatiques (entre
50 et 350 mg/L). La corrlation entre les deux mthodes
est, videmment et heureusement, excellente (r = 0,99).
Lanalyse de Bland et Altman dmontre une diffrence
entre les deux mthodes de - 2,59,3 mg/L (anthrone-
enzymatique). Cette diffrence nest pas juge significative
par les auteurs. La diffrence entre les dosages urinaires
est, elle, plus significative avec une tendance nette pour la
mthode lanthrone donner des rsultats 5 % plus bas
(-139,7141,8 mg/L). Lavantage, du moins thorique, de
cette raction est que linulinase et la D-frucose dshydro-
gnase ont une activit optimale au mme pH (ce qui nest
pas le cas de lhexokinase et de la sorbitol deshydrognase)
[67].
Dans la mthode dveloppe par Kuenhle [12], le glu-
cose prsent dans le srum ou les urines est limin par
ladjonction de glucose-oxydase pendant la premire tape
dhydrolyse du polyfructosan. Cependant, lutilisation de
cette mthode en pratique courante est limite dans de
nombreux chantillons par la prsence de phosphoglu-
cose isomrase libre des globules rouges par hmolyse.
La mthode a donc t amliore en ajoutant une tape En effet, cet auteur recommande une hydrolyse de linuline
dinactivation de la phosphoglucose isomrase endogne
(gure 3) et a t reformate pour un lecteur de plaques
(96 puits) [68]. La technique est ainsi simple, reproduc-
tible (le CV intra-assay est excellent (0,3 % pour le sang
et 0,7 % pour les urines), de mme que le CV inter-
assay (1,6 3,5 % pour le sang). Les auteurs confirment
labsence dinterfrences avec la bilirubine, lhmoglobine.
Ladjonction de glucose (50 mmol/L dans le srum, 100
mmol/L dans les urines) ne modifie pas la concentration
dinuline dtermine par mthode enzymatique (0,7 %
et 1,0 % de variation, respectivement). La comparai-
son de cette technique avec une technique colorimtrique
chez 52 patients retrouve une diffrence moyenne de
Ann Biol Clin, vol. 63, n 3, mai-juin 2011
Le dosage de linuline
-3,04,5 mL/min/1,73 m2 , ce qui est tout fait compa-
rable aux rsultats prcdemment cits et nest pas jug
cliniquement significative par les auteurs. Enfin, la tech-
nique est facilement utilisable par tout laboratoire disposant
dun spectrophotomtre (lecteur de plaque) et est bon mar-
ch (moins de 0,10 euro par chantillon).
Mthodes CLHP
notre connaissance, 7 articles ont t publis, prove-
nant de 6 quipes diffrentes, sur le dosage de linuline
par mthode CLHP. Dans ces mthodes, cest soit le fruc-
tose (ou un driv, lhydroxymthylfuraldhyde (HMF))
qui est dos et cela implique donc que linuline soit pra-
lablement hydrolyse (le plus souvent, manuellement et
en utilisant un milieu acide, voir ci-dessus) [57, 69, 70],
soit cest linuline qui est directement dose [71-73]. Les
mthodes de dtection dpendront galement du compos
doser. Pour linuline, il sagit soit de mthodes lectrochi-
miques [71, 72] ou faisant appel un dtecteur diffusion
de la lumire [73]. Pour le fructose ou ses drivs (HMF),
des dtecteurs UV sont gnralement employs [57, 69].
La premire tude publie sur le dosage CLHP de linuline
est celle de Ruo en 1991 [71]. Dans cette tude, cest
linuline, elle-mme, que les auteurs se proposent de
mesurer. La dtermination lectrochimique de linuline
seffectue aprs une tape assez exhaustive de purification
de lchantillon (passage sur une cartouche OnGuard-
A, vaporation sec 40 C et dissolution du rsidu
dans 600 L deau bouillante). Lextraction de linuline
du plasma et de lurine est satisfaisante (respectivement
94,2 2,7 % et 101,9 2,4 %). Le glucose et le fructose
ninterfrent pas dans le dosage. Le dosage savre linaire
et prcis : CV intra-assay infrieur 5 % pour le plasma
et 3 % pour les urines des concentrations entre 5 et
200 g/L et CV de 12 % pour des concentrations aussi
basses que 1 mg/L.
En 1995, DallAmico propose une mthode diffrente [57].
en fructose puis en HMF (acidification par de lacide
perchlorique 70 %, centrifugation et bullition pendant
5 minutes) et cest ce dernier compos qui est en fait dos
[57]. Lanalyse du pic de chromatographie ne laisse pas sus-
pecter dinterfrences, mais le fructose endogne du patient
doit probablement tre mesur par cette mthode, ce qui
nest pas abord par les auteurs de larticle. Encore une
fois, les performances analytiques du dosage CLHP sont
excellentes. La mesure est linaire et le recouvrement est
excellent. Le CV intra-assay dans le plasma varie de 1,7
0,9 % pour des concentrations de 200 1 600 mg/L et,
pour les urines, de 1,2 0,8 % pour des concentrations de
800 3 200 mg/L. Pour les mmes concentrations, les CV
279
 Synthse
tape 1 (60 min) : Catalase
oxydation du glucose et
hydrolyse du polyfructosan
tape 2 (30 min) :
inactivation de la phosphogluco-
isomrase endogne
tape 3 (10 min) :
limination du glucose
rsiduel
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tape 4 (10 min) : Lecture spectrophotomtrique
dtermination des monomres
du fructose
Figure 3. Mthode enzymatique de dosage de linuline selon Dubourg (selon [68] voir texte pour dtails).
inter-assay pour le sang et les urines sont respectivement
de 2,7 3,2 % et de 3,2 3 %. Les auteurs insistent sur la
sensibilit de la mthode (mais ne donnent pas de chiffres)
et sur sa simplicit (30 minutes pour un dosage) [57].
En 1996, Schaud adapte le dosage la sinistrine [72]. Le
gros avantage de la sinistrine par rapport linuline est
sa haute solubilit dans leau temprature ambiante. Ces
auteurs ont dvelopp une mthode de dosage qui permet
de doser directement la sinistrine via une dtection lectro-
chimique. La prparation de lchantillon ncessite une
tape de purification par une petite colonne SPE (Sep-
Pak Plus C18) qui enlve les protines et les substances
potentiellement interfrentes comme le glucose. Le recou-
vrement est excellent mais dans cette mthode, la linarit
est perdue au-del de 350 mg/L, ce qui implique une dilu-
tion de ces chantillons. Ceci peut poser problme car des
dilutions importantes (et pas forcment prdictibles) pour
les urines peuvent tre ncessaires. La limite de quantifi-
cation est calcule 5 mg/L et la limite de dtection est
0,8 mg/L. Le CV intra-assay dans le plasma varie de 8,3
3,5 % pour des concentrations de 20 250 mg/L et le CV
inter-assay de 9,7 6,3 %. Pour une mthode CLHP, ces
CV peuvent tre jugs comme relativement dcevants. De
plus, les CV des mesures dans les urines ne sont pas donns.
Les auteurs ont galement tudi la stabilit de linuline et,
pour une raison inexplique, dans les urines, les rsultats ne
sont pas bons lors des cycles de conglation-dconglation
(augmentation des valeurs dinuline de 9 21 %) [72].
Baccard, en 1999, propose un dosage de linuline par
CLHP/UV quil est possible de combiner avec le dosage de
lacide para-aminohippurique (utilis pour la dtermination
280
H2O2 Glucose Polyfructosan
H2O + O2 Glucose
oxydase Inulinase
Gluconate Fructose
Glucose rsiduel Fructose
NADP ATP ATP
G6PDH Hexokinase Hexokinase
NADPH ADP ADP
Gluconate-6-P DO1 Fructose-6-P
NADP
(= 340 nm) PGI +G6PDH
NADPH
DO2 Gluconate-6-P
du dbit plasmatique rnal) [69]. Dans cette publication,
le traitement de lchantillon pour transformer linuline
en HMF est identique celui propos par DallAmico (
lexception du temps dhydrolyse qui est plus long). Les
conditions chromatographiques sont fort comparables. Le
recouvrement et la linarit de la mthode dcrite sont
excellents. Notons que les auteurs retrouvent, dans un
chantillon sur 100, un pic interfrent avec le HMF quils
ne peuvent liminer. La limite de dtection est 0,5 mg/L.
Le CV intra-assay dans le plasma varie de 7,6 3,8 % pour
des concentrations de 12,5 100 mg/L et, pour les urines,
de 3,6 3,3 % pour des concentrations de 12,5 100 mg/L.
Pour les mmes concentrations, les CV inter-assay pour le
sang et les urines sont respectivement de 10,9 % 6,1 % et
de 7,6 0,9 %. Ici aussi, le dosage comprend certainement
le fructose endogne.
Nous retrouvons, en 2000, une publication du groupe de
DallAmico mais ici, cest linuline qui est directement
dose, et non plus le fructose [73]. Aprs prcipitation
des protines, et passage travers un filtre de 0,2 m,
lchantillon est inject dans une CLHP couple un
dtecteur diffusion de la lumire Varex MKIII ELSD.
Les auteurs tudient spcifiquement et excluent les interf-
rences avec le glucose et le fructose. Le recouvrement parat
excellent mais la linarit, la limite de dtection et de quan-
tification ne sont pas t tudies. Le CV intra-assay dans
le plasma varie de 3,4 1,7 % pour des concentrations de
52 1 201 mg/L et, pour les urines, de 3,5 1,5 % pour des
concentrations de 52 2 397 mg/L. Pour les mmes concen-
trations, les CV inter-assay, pour le sang et les urines, sont
respectivement de 4,3 % 2 % et de 4,4 2 % [73].
Ann Biol Clin, vol. 63, n 3, mai-juin 2011

En 2001, un autre groupe italien publie sa mthode quil
propose de combiner galement avec le dosage de lacide
para-aminohippurique [74]. La mthode propose est trs
proche de la mthode propose par Dall Amico en 1995
[74]. Ces auteurs confirment encore une fois la linarit et
le bon recouvrement de cette mthode. Ils ne dcrivent pas
de pics interfrents. La limite de dtection est estime
50 mg/L. Le CV intra-assay dans le plasma varie de 3,3 %
pour une concentration de 0,3 mg/L et, pour les urines,
de 6,1 % pour des concentrations de 0,13 mg/L. Pour les
mmes concentrations, les CV inter-assay pour le sang et
les urines sont respectivement de 7,1 % et de 10 %. Les
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chiffres donns par ces auteurs sont probablement entachs
derreurs dans les units [74].
Enfin, la dernire tude est publie en 2004 [70] et concerne
le dosage de la sinistrine. Ces auteurs combinent un peu des
trois mthodes de dosage de linuline : hydrolyse acide de
linuline (par lacide trifluoroactique), traitement enzyma-
tique de lchantillon en phase pranalytique pour liminer
les interfrences au glucose (glucose oxydase, voir ci-
dessus) et dosage du fructose par CLHP avec dtection
lectrochimique. Contrairement aux deux tudes prc-
dentes o linuline est pralablement hydrolyse [57, 69],
ces auteurs insistent sur la ncessit doxyder le glucose
endogne dont le pic risque dinterfrer avec celui du
fructose [70]. La mthode de dosage est linaire et le recou-
vrement est bon. La limite de quantification est estime
2 mg/L et cette concentration le CV est 5,7 %. Ces
auteurs sont les seuls, pour ce qui est des mthodes CLHP,
insister sur la ncessit dun blanc pour compenser le
fructose endogne. Cette tude est aussi la seule comparer
les rsultats de la CLHP avec les rsultats dune mthode
enzymatique (en loccurrence celle de Delanghe [8]). Les
deux mthodes sont bien corrles, videmment, (r = 0,97)
mais lanalyse de Bland et Altman voque une diffrence
moyenne de 6,9 % entre mthode CLHP et enzymatique,
rsultat obtenu en comparant 59 chantillons (venant de
deux patients) dont la concentration allait de 20 360 mg/L.
Sur base de la figure prsente, on peut estimer lcart type
autour de la diffrence moyenne 16 %, ce qui nest pas
tout fait ngligeable [70].
Une conclusion gnrale quant au dosage de linuline
en mthode CLHP apparat difficile donner au jour
daujourdhui. En effet, les donnes apparaissent relati-
vement limites et ce, dautant plus, que deux grandes
mthodologies co-existent (hydrolyse ou non de linuline)
et sont difficilement comparables. Une tude comparant
ces deux mthodologies CLHP pourraient dailleurs tre
intressantes. A priori, les mthodes CLHP ont lavantage
dtre sensibles et prcises. Les mthodes dosant linuline
in extenso apparaissent, sans doute, les plus sres au niveau
spcificit [73]. Cependant, les mthodes, notamment
dextraction sont aussi plus compliques (il faut toujours
Ann Biol Clin, vol. 63, n 3, mai-juin 2011
Le dosage de linuline
sassurer que cette extraction dinuline est complte et
ne saccompagne pas dune hydrolyse partielle) et les
mthodes de dtection ncessaires (ampromtres, dtec-
teurs diffusion de la lumire) sont trs difficiles utiliser
en routine. Pour ce qui est des mthodes CLHP avec hydro-
lyse partielle, il existe un doute quant aux interfrences avec
le glucose (du moins en dtection ampromtrique) [70] et
avec le fructose endogne [57, 69]. Ces mthodes CLHP
ncessitent, bien videmment, un certain appareillage mais
le dosage dinuline, quel quil soit, est relativement compli-
qu et la majorit des centres (universitaires, pour la
plupart) possdent cet appareillage ( lexception du dtec-
teur diffusion de la lumire). Largument du cot et du
temps de raction est parfois avanc, notamment en faveur
des mthodes enzymatiques, mais cela reste prouver
dfinitivement. Enfin, ces mthodes sont apparues histo-
riquement (et logiquement) tardivement par rapport aux
autres mthodes, ce qui explique, sans doute, quelles soient
encore peu utilises de nos jours. Nous pensons que des
tudes complmentaires et notamment des tudes compa-
ratives (incluant des comparaisons de prix et de temps de
raction) avec les mthodes acide et enzymatiques
sont indispensables. Gardons aussi en mmoire que les
mthodes CLHP sont considres comme des mthodes
de rfrences pour de nombreux dosages, ceci compris le
dosage dautres marqueurs du DFG comme liohexol [75].
Conclusion
Lintrt de linuline comme marqueur de rfrence ( gold
standard ) est avre depuis les annes trente et ne sest,
ce jour, jamais dmentie. Le dosage, notamment acide ,
de linuline reste nanmoins toujours dlicat, sujet inter-
frences et une certaine interprtation. notre poque
o une standardisation des donnes biologiques est sou-
vent un but atteindre (voir lexemple de la cratinine
pour rester dans la nphrologie [76]), on peut affirmer que
nous sommes loin du compte pour ce qui est du dosage de
linuline.
La supriorit des mthodes enzymatiques sur les mthodes
acide , en terme de prcision, reste dmontrer claire-
ment mme si les tudes les plus rcentes semblent aller
dans ce sens. Encore une fois, les tudes les plus rcentes
insistent surtout sur la facilit demploi et mme le cot
limit des dernires mthodes enzymatiques par rapport
aux mthodes acide [68]. Il apparat aussi assez clai-
rement que les mthodes enzymatiques permettent un gain
en terme de spcificit, notamment vis--vis du glucose. Les
mthodes acide les plus anciennes (mais qui sont tou-
jours utilises en 2010, notamment en France (tableau 1))
restent, bien videmment, manuelles et chrono-
phages [77]. Le facteur qui peut tre le plus limitant
281
 Synthse
Tableau 1. Comparatif des mthodes utilises en France par les diffrentes quipes qui utilisent linuline (non exhaustif).
Centre Hospitalier Francais
CHU de Strasbourg
CHU de Valenciennes
CHU de Saint Etienne
Hospices civils de Lyon
CHU de Rangueil
CHU de Clermont-Ferrand
CHU de Besancon
Paris, Hpital Necker
Paris, Hpital Pompidou
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est la ncessit dun technicien expriment. Quelques
mthodes acide (anthrone et acide -indole-actique)
[23, 35] et enzymatiques [61, 68] sont disponibles de
manire automatise et seraient, de fait, plus prcises et
plus reproductibles. Des tudes analytiques plus pousses,
plus comparatives et utilisant les mthodologies statistiques
les plus modernes (une simple corrlation tant largement
insuffisante pour comparer deux mthodes surtout quand
on est cens doser la mme chose !) seraient encore les
bienvenues. De mme, les consquences de limprcision
(ou des interfrences) du dosage dinuline sur le rsultat de
DFG calcul sont mal connues. Ceci semble particulire-
ment important pour le dosage plasmatique de linuline qui
ncessite une plus grande sensibilit (concentration plus
basse que dans les urines qui concentrent linuline injecte),
une plus grande spcificit (la matrice plasma compor-
tant plus dinterfrents potentiels que la matrice urine )
et une plus grande prcision (dans le calcul dune clairance
urinaire, la concentration plasmatique apparat au dno-
minateur ce qui amplifie les imprcisions ventuelles). Le
dosage, presque centenaire, de linuline na donc probable-
ment pas fini dveiller la curiosit des biologistes et des
nphrologues.
Conits dintrts : aucun.
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282
Technique de dosage utilise
Hydrolyse acide et dosage enzymatique du fructose
Mthode acide au rsorcinol
Mthode acide au rsorcinol
Mthode enzymatique
Mthode acide lanthrone
Mthode acide au rsorcinol
Hydrolyse acide et dosage enzymatique du fructose
Mthode acide au rsorcinol
Mthode acide lanthrone
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