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PRACTICA DE LABORATORIO N 01:

RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y MATERIAL DE


LABORATORIO USADO EN PARASITOLOGA

I.INTRODUCCIN

La presente gua de prctica tiene como finalidad que el alumno de


Farmacia y Bioqumica tenga la capacidad de poder reconocer e
identificar loa diferentes equipos y materiales de laboratorio utilizados en
parasitologa, con el fin de que sean capaces de utilizarlos
adecuadamente.

Por ello en esta prctica se ver las caractersticas y formas de uso de los
siguientes equipos y/o materiales de laboratorio como es el caso del
microscopio, la centrifuga y pipeta Pasteur.

II.OBJETIVOS

a) Reconocer los equipos y materiales utilizados en el laboratorio de


parasitologa.
b) Aprender a manipular adecuadamente los equipos y materiales
utilizados en el laboratorio de parasitologa.
c) Identificar las partes del microscopio y utilizarlo adecuadamente.

III.MARCO TERICO

EL MICROSCOPIO
Es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado
pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero
que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico
que contiene dos o ms lentes que permiten obtener una imagen
aumentada del objeto y que funciona por refraccin.

Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecnicos


que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se
desarrollaron por el momento mejoras pticas. Las mejoras ms
importantes de la ptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe public su
teora del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejor la microscopa
de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite
obtener aumentos de 2000.
El microscopio electrnico de transmisin (TEM) fue el primer tipo de
microscopio electrnico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar
de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue
desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931.
Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de
barrido.

UNA CENTRFUGA
Es una mquina que pone en rotacin una muestra para acelerar por
fuerza centrfuga la decantacin o sedimentacin de sus componentes o
fases (generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad.
Existen diversos tipos de estos, comnmente para objetivos especficos.

Aplicaciones
Usada en laboratorios de control de calidad, de fbricas que elaboran
zumos a base de ctricos, para controlar el nivel de pulpa fina de estos,
separando la pulpa fina del zumo exprimido.Otra aplicacin de las
centrfugas es la elaboracin de aceite de oliva.

Una aplicacin tpica consiste en acelerar el proceso de sedimentacin,


dividiendo el plasma sanguneo y el suero sanguneo en un proceso de
anlisis de sangre.

Funcionamiento

El centrifugado es una sedimentacin acelerada, ya que la aceleracin de


la gravedad se sustituye por la aceleracin centrfuga, , donde es la
velocidad angular de giro de la centrifugadora y es la distancia al eje de
la centrifugadora. Puesto que la velocidad angular de giro puede ser de
miles de revoluciones por minuto, se alcanzan aceleraciones mucho
mayores que la gravedad.
El centrifugado, como la sedimentacin, est gobernado por la ley de
Stokes, segn la cual las partculas sedimentan ms fcilmente cuanto
mayor es su dimetro, su peso especfico comparado con el del fluido, y
cuanto menor es la viscosidad del mismo. Es importante entender que el
papel del fluido es esencial, pues sin su viscosidad todas las partculas
caeran a la misma velocidad.

Tipos de centrfuga
Los aparatos en los que se lleva a cabo la centrifugacin son las
centrfugas, que son dispositivos moviles con alas en las braqueas. Una
centrfuga tiene dos componentes esenciales: rotor (donde se coloca la
muestra a centrifugar) y motor. Existen dos tipos de rotores:

Fijos: Los tubos se alojan con un ngulo fijo respecto al eje de giro. Se
usa para volmenes grandes.

Basculante: Los tubos se hallan dentro de unas carcasas que cuelgan.


Estas carcasas estn unidas al rotor con un eje y cuando la centrfuga
gira, se mueven. Se usan para volmenes pequeos y para separar
partculas con un mismo o casi igual coeficiente de sedimentacin.

Las centrfugas estn metidas en el interior de una cmara acorazada a


unos 4C. Si esta cmara no estuviese presente, al comenzar la
centrifugacin, y debido al rozamiento con el aire, subira la temperatura
de la muestra y podra llegar a desnaturalizarse.

Una centrfuga debe tener las masas de las muestras compensadas unas
con otras. En caso contrario, la centrfuga podra "saltar por los aires".
Aunque hoy en da, para que esto no ocurra, casi todas las centrfugas se
detienen si las masas no estn compensadas.

Existen dos grandes grupos de centrfugas:

Analticas: Con las que se obtienen datos moleculares (masa molecular,


coeficiente de sedimentacin, etc.). Son muy caras y escasas.

Preparativas: Con las que se aslan y purifican las muestras. Hay 4 tipos
de centrfugas preparativas:

De mesa: Alcanzan unas 5.000 rpm (revoluciones por minuto). Se


produce una sedimentacin rpida. Hay un subtipo que son las
microfugas que llegan a 12.000-15.000 rpm. Se obtiene el precipitado en
muy poco tiempo.

De alta capacidad: Se utilizan para centrifugar volmenes de 4 a 6


litros. Alcanzan hasta 6.000 rpm. Son del tamao de una lavadora y estn
refrigeradas.

De alta velocidad: Tienen el mismo tamao que las de alta capacidad y


llegan a 25.000 rpm.

Ultracentrfugas: Pueden alcanzar hasta 100.000 rpm. Tambin estn


refrigeradas. Son capaces de obtener virus

PIPETA PASTEUR
Son unos tubos de vidrio que por uno de sus extremos son muy estrechos
(tubo capilar) y en el otro extremo se suele colocar un chupete de un
cuentagotas. No estn graduadas por lo tanto no sirven para medir
volmenes. Se utilizan fundamentalmente para enrasar en los matraces
aforados con mayor facilidad y exactitud y para coger pequeas
cantidades de cualquier disolucin.

CARACTERSTICAS

Pipetas Pasteur, tambin conocidos como goterosse utilizan para


transferirpequeas cantidades de lquidos. Por lo general
sontuboscnicosde vidrioa un puntoestrecho, yequipados conuna perilla
de gomaen la parte superior. La combinacin delapipeta Pasteury lapera
de gomatambin se hareferido comouna pipetapezn.

Pipetas Pasteurvienen en varias longitudesyse vendenen cajas decientos


de personas.Ellosllevan el nombre delcientfico francsLouisPasteur,
quien era conocido porhaber utilizadouna variantede ellasampliamente
durantesu investigacin.

En general, se consideran lo suficientemente baratospara ser


desechables, sin embargo, tanto tiempocomo el punto devidriono est
quebrada, lapipeta Pasteurse puedelavar y reutilizarindefinidamente.

IV.EQUIPOS Y MATERIALES

Microscopio
Centrifuga
Laminas porta y cubre objetos
Pipetas Pasteur
Tubos de ensayo

V.PROCEDIMIENTO

a) Observar y reconocer los equipos en el laboratorio de


parasitologa como son: el microscopio y la centrifuga.
b) Reconocer las partes del microscopio
c) Enfocar una muestra
d) Observar y reconocer el uso de los materiales de laboratorio de
parasitologa

VI.RESULTADOS Y DISCUSIONES

a) Graficar todos los equipos y materiales observados


Portaobjetos y cubreobjetos: portaobjetos es una fina placa de cristal
sobre el cual se disponen objetos para su examen microscpico. Sus
dimensiones tpicas son de 75 mm x 25 mm.

Cubreobjetos es una fina hoja de material transparente de planta


cuadrada (normalmente 20mm x 20mm) o rectangular (de 20 mm x 40
mm habitualmente).

Pipetas Pasteur: se utilizan para transferir pequeas cantidades de


lquidos. Por lo general son tubos de vidrio afilado a un punto estrecho, y
equipado con una perilla de goma en
la parte superior.

Centrifuga: Una centrfuga es una mquina que pone en rotacin una


muestra para separar por fuerza centrfuga sus componentes o fases
(generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad.
b) Graficar el microscopio y sus partes

Las partes esenciales que componen un microscopio ptico son:

Parte mecnica

Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en l se encuentra la


fuente de iluminacin.

Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro


se encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay
un sistema de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la
preparacin, y unas escalas que ayudan a conocer qu parte de la
muestra se est observando.

Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el


soporte de oculares y objetivos.

Revlver: estructura giratoria que contiene los objetivos.


Brazo: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomat el
microscopio para trasladarlo de lugar.

Tornillo macromtrico: sirve para obtener un primer enfoque de la muestra


al utilizarse el objetivo de menor aumento.

Tornillo micromtrico: sirve para un enfoque preciso de la muestra, una


vez que se ha realizado el enfoque con el macromtrico. Es el nico
tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al ir
cambiando a objetivos de mayor aumento.

Parte ptica

Oculares: son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador,


situados en la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos
provistos de lentes convergentes cuyo aumento se resea en la parte
superior de los mismos (normalmente 10X en los microscopios que se
utilizarn en esta prctica).

Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la


parte inferior del tubo, mediante el revlver. En esta estructura se pueden
acoplar varios objetivos (ordenados de forma creciente segn sus
aumentos, en el sentido de las agujas el reloj). Un anillo coloreado es
distintivo de los aumentos de cada objetivo, que tambin van reseados
en el lateral del mismo. Algunos objetivos no enfocan bien la preparacin
al aire, y se deben de utilizar con un aceite de inmersin (normalmente
van marcados con un anillo rojo).

Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz


y los concentra sobre la preparacin, de manera que proporciona mayor o
menos contraste. Se regula en altura mediante un tornillo

Fuente de iluminacin: en los microscopios a utilizar, el aparato de


iluminacin est constituido por una lmpara halgena de bajo voltaje
(12V) situada en el pie del microscopio. La luz procedente de la bombilla
pasa por un reflector que enva los rayos luminosos hacia la platina.

Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminacin. Abrindolo


o cerrndolo permite graduar la intensidad de la luz.

Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red,


es necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan
incorporado en el pie del microscopio. Adems, el transformador dispone
de un potencimetro para regular la intensidad de la luz.

VII.CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

La microscopia es la ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando


el microscopio es muy importante para la parasitologa clnica debido a
que muchos parsitos son de tamaos diminutos ya sean que estos
estnen las heces o en la sangre como en el caso de la leishmaniosis o la
malaria.
Saber manejar y conocer las partes del microscopio as como de la
centrifuga (tambin debe conocerse las lminas porta y cubre objetos)
para poder realizar las diversas tcnicas de anlisis parasitolgico ya sea
en la sangre o en las heces
Es importante conocer las partes del microscopio dado que es el
instrumento primordial para el procedimiento de las pruebas o tcnicas
para el examen parasitolgico, saber adems que posee un sistema
mecnico y un sistema ptico.

VIII.CUESTIONARIO

a) Mencione los cuidados que se debe tener al utilizar el


microscopio

Enchufar el microscopio al transformador.

Colocar la preparacin sobre la platina de forma que la estructura a


observar quede en el orificio central de la platina.

Poner el objetivo de menor aumento para que as haya un amplio campo


para visualizar las muestras.

Colocar el portaobjetos sobre la platina del microscopio.

Utilizar el objetivo de menor aumento.

Deslizar el tubo del microscopio por medio del tornillo macromtrico,


observando lateralmente hasta que el objetivo quede cerca del
portaobjetos.

Observar a travs de los oculares subiendo lentamente el tubo del


microscopio hasta observar la preparacin enfocada, no debe bajarse el
tubo del microscopio mientras se est observando, porque puede llegar a
chocar el objetivo con el portaobjetos y ocasionar desperfectos.

Afinar la imagen moviendo lentamente el tornillo micromtrico.

Si se desea mayor aumento, girar el revolver al objeto adecuado.

Si se utiliza el objeto de inmersin (100 X) colocar sobre la preparacin


una gota de aceite de inmersin y baja el tubo del microscopio hasta que
la lente del objetivo toque a la gota, observa y ajusta cuidadosamente
despus de su uso limpiar el objetivo con un tejido suave (papel seda).
b) Describa los equipos y materiales observados

Pipetas Pasteur: se utilizan para transferir pequeas cantidades de


lquidos. Por lo general son tubos de vidrio afilado a un punto estrecho, y
equipado con una perilla de goma en la parte superior.

Centrifuga: Una centrfuga es una mquina que pone en rotacin una


muestra para separar por fuerza centrfuga sus componentes o fases
(generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad.

Microscopio: El microscopio es un instrumento que permite observar


objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El
tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se
trata de un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que
permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por
refraccin.

c) Cul es el principio fsico de funcionamiento del


microscopio ptico?

El principio de funcionamiento del microscopio est formado por dos


lentes convergentes:

Lenteobjetivo, situado muy cerca del objeto.

Lente ocular, al otro extremo del tubo, est situada ms cerca del ojo y
hace la funcin de lupa sobre la imagen que produce la lente objetivo.

La lente objetivo es muy convergente (f=2 cm la de la siguiente figura) y el


objeto debe colocarse ms all de su punto focal, pero cerca de l.

Los microscopios de este tipo suelen ser ms complejos, con varias


lentes en el objetivo como en el ocular. El objetivo de stas lentes es el de
reducir la aberracin cromtica y la aberracin esfrica. En los
microscopios modernos el espejo se sustituye por una lmpara que ofrece
una iluminacin estable y controlable.

Los microscopios compuestos se utilizan para estudiar especmenes


delgados, puesto que su profundidad de campo es muy limitada. Por lo
general, se utilizan para examinar cultivos, preparaciones trituradas o una
lmina muy fina del material que sea. Normalmente depende de la luz que
atraviese la muestra desde abajo y usualmente son necesarias tcnicas
especiales para aumentar el contraste de la imagen.

La resolucin de los microscopios pticos est restringida por un


fenmeno llamado difraccin que, dependiendo de la apertura numrica
(AN o ) del sistema ptico y la longitud de onda de la luz utilizada ( ),
establece un lmite definido ( ) a la resolucin ptica. Suponiendo que las
aberraciones pticas fueran despreciables, la resolucin sera:

Normalmente, se supone una de 550 nm, correspondiente a la luz verde.


Si el medio es el aire, la prctica mxima es de 0,95, y en el caso de
aceite de hasta 1,5.

Ello implica que incluso el mejor microscopio ptico est limitado a una
resolucin de unos 0,2 micrmetros.

Poder separador, objetivos de inmersin y aumento til

Poder separador

De la teora de la difraccin sobre la formacin de imgenes mediante un


microscopio se obtiene que la distancia mnima entre dos puntos visibles
por separado sea:

Donde es la longitud de onda de la luz monocromtica en la que se


observa el objeto y A es la abertura del microscopio.

Objetivos de inmersin

El medio ptico lquido que rellena el espacio entre el objeto y el objetivo


se le denomina lquido de inmersin. El ndice de refraccin de este es
prximo al del vidrio (se utiliza agua, glicerina, aceites de cedro y de
enebro, monobromonaftalina, entre otros)

d) Cules son los aumentos a que se pueden observar las


muestras parasitolgicas con el microscopio observado?

Se pueden observar desde 4x, 1ox que son medidas para fijar la muestra
y 40 x, tambin 100x que es un aumento de inmersin.

Normalmente se observan las muestras en 4ox es decir en 400 veces el


tamao de lo que estamos viendo.

e) Por qu cuando se usan los objetivos 100x es necesario


emplear el aceite de inmersin?
Se utiliza para lograr una buena resolucin, debido al tamao del lente del
objetivo de 100x, por lo mismo la luz no penetra en cantidad suficiente.
Entonces el aceite de inmersin "dirige" la mayor cantidad de luz hacia el
objetivo y por lo tanto la resolucin es mejor.

f) Cules son las medidas de bioseguridad que se deben tener


en el laboratorio?

Se deber utilizar vestimenta apropiada para realizar trabajos de


laboratorio y cabello recogido, zapatos cerrados, evitando el uso de
accesorios colgantes.

Usar bata de manga larga dentro de laboratorio, la cual se pondr al


momento de entrar y deber ser quitada inmediatamente antes de
abandonar el laboratorio.

No se permitir comer, beber, fumar y/o almacenar comidas as como


cualquier otro tem personal (maquillaje, cigarrillos, etc.) dentro del rea
de trabajo.

Asegurarse de no presentar cortes, raspones u otras lastimaduras en la


piel y en caso de que as sea cubrir Ia herida de manera conveniente.

Usar guantes de ltex de buena calidad para todo manejo de material de


riesgo. Cambiar los guantes toda vez que hayan sido contaminados,
lavrselas manos y ponerse guantes limpios.

No tocar los ojos, nariz o piel con las manos enguantadas.

Bajo ninguna circunstancia se pipeteara sustancia alguna con la boca


para ello se utilizaran peras plsticas o pipeteadores automticos.

Se deber conocer la ubicacin de los elementos de seguridad en el lugar


de trabajo, tales como: matafuegos, salidas de emergencia, mantas
ignfugas, lavaojos, gabinete para contener derrames, accionamiento de
alarmas, etc.

Siempre que sea necesario proteger los ojos y la cara de salpicaduras o


impactos se utilizarn anteojos de seguridad, viseras o pantallas faciales
u otros dispositivos de proteccin. Cuando se manipulen productos
qumicos que emitan vapores o puedan provocar proyecciones, se evitar
el uso de lentes de contacto.