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ANTICUERPOS BSA EN NIOS DIABTICOS TIPO 1 - A Oyarzn et al
sos de diabetes tipo 1 recin diagnosticados (hasta mayores o iguales a 20 unidades JDF. Los
despus de 6 semanas del debut), menores de 15 anticuerpos anti-GAD65 y anti-IA-2 se midieron
aos, y dependientes absolutos de insulina por radioinmunoanlisis (RIA), mediante kit co-
exgena, obtenidos de diversas unidades asis- mercial de la empresa Cis-International (Francia).
tenciales en hospitales de Santiago. El grupo de Se consideraron GAD+ o IA-2+ a aquellos valores
nios controles se seleccion de 3 colegios de superiores a 1 U/ml. Los coeficientes de variacin
Santiago y consider nios de ambos sexos cuyas intraensayo e interensayo fueron de 2,1% y 3,5%,
caractersticas demogrficas (comunas), situacin respectivamente.
socioeconmica, edad y sexo fueran comparables
a los nios provenientes del registro de casos Cuantificacin de anticuerpos anti-BSA. A partir
nuevos de diabetes tipo 1. En el grupo control, se de la muestra de suero obtenida por centri-
seleccionaron aquellos participantes que no pre- fugacin se realiz el siguiente protocolo. Se
sentaban antecedentes familiares de diabetes tipo agreg a cada pocillo 200 L de BSA Sigma, en
1, ni antecedentes de patologas autoinmunes en medio PBS 0,1 mol/L pH 7,4. Se incub toda la
el ncleo familiar. noche a 25C. Al da siguiente, se lavaron las
Se recopil informacin en 161 casos con placas con PBS para luego adicionar 370 L de
diabetes tipo 1 (8,24,0 aos) y en un grupo de gelatina-PBS al 1% llevando a incubacin a 37C
144 nios controles (9,23,0 aos). Los padres de durante un perodo de 1 hora. Cada muestra se
los nios contestaron una encuesta familiar que diluy 1:40 los controles, y 1:80 para los casos en
incluy informacin con respecto a historia fami- gelatina-PBS-Tween 20 (0,5%-100%-0,05%). Se
liar de diabetes, lactancia materna exclusiva, en- agregaron 200 L de cada muestra por duplicado,
fermedades virales, primer consumo de leche de blanco y curva de calibracin o calibrador. Se dej
vaca, sustituto lcteo y slidos lcteos. Todos los incubar por 60 min a 37C y luego se lavaron las
participantes entregaron un consentimiento escri- placas varias veces con Tween 20 0,05%. Poste-
to, siendo sta una investigacin aprobada por el riormente, se agreg 50 L del conjugado anti IgG
comit de tica del INTA. 1:2000 marcado con peroxidasa de rbano (Sigma,
Con el fin de establecer una posible asociacin A6029, St Luis, MO). Finalmente se realiz una
entre anticuerpos anti-BSA-IgG y la lactancia incubacin por 60 min a 25C y un ltimo lavado
materna exclusiva o la exposicin a la leche de con PBS. Se agregaron 50 L de OPD 0,4 mg/ml,
vaca, se analizaron dos variables, a) los meses de 0,001% v/v de H2O2 a los 10 min. La reaccin se
duracin de la lactancia materna (en categoras 3 detuvo por adicin de 100 L de HCl 3 N por
meses y >3 meses), lo que nos indica cunto pocillo. Luego se ley a 492 nm en un lector de
tiempo fue amamantado un nio de forma exclu- placas. El coeficiente de variacin intraensayo e
siva y b) el mes de introduccin de la frmula interensayo fue de 1,6 y 4,3%, respectivamente, el
lctea que tiene relacin con el mes que dej de lmite de deteccin fue de 2,6 ng/ml con una
ser exclusiva la lactancia materna y el nio tuvo su sensibilidad de 0,02 ng/ml.
primer encuentro con protenas forneas, especfi-
camente leche de vaca. Se establecieron catego- Estadstica. Se utilizaron las pruebas estadsticas U
ras para la medicin de anti-BSA-IgG y para ello de Mann Whitney y Kruskal-Wallis para comparar
se utiliz como valor mnimo el de dos desviacio- la duracin de la lactancia e incorporacin de
nes estndar (25,6 ng/ml) observado en la distri- leche de vaca, con anticuerpos anti-BSA IgG en
bucin de los casos. Datos menores a este valor ng/ml. La prueba de Chi cuadrado fue utilizada
fueron catalogados BSA y superiores como BSA+. para establecer las diferencias de asociacin entre
las distintas categoras.
Cuantificacin de autoanticuerpos anti-GAD, ICA
e IA-2. Se determinaron los anticuerpos anticlula
del islote (ICA), por inmunofluorescencia indirec- RESULTADOS
ta mediante un kit comercial de la compaa
IMMCO-Diagnostics (USA). Se consideraron ICA+ a) Distribucin de anticuerpos anti-BSA-IgG. Para
a aquellas muestras que presentaban valores analizar la distribucin de los anticuerpos anti-
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BSA IgG, se construy un grfico que muestra a b) Asociacin entre anticuerpos anti-BSA y exposi-
los controles (n=144) y a los casos (n=161), cin a la leche de vaca. La Tabla 2 muestra cmo
agrupados por categoras, segn sus niveles de se distribuye el anticuerpo anti-BSA-IgG de acuer-
anti-BSA-IgG (Figura 1). En la Figura 1a se puede do al ingreso de la frmula lctea (>3 meses y 3
observar que la distribucin del anti-BSA-IgG de meses) observndose en los casos, que este ttulo
los casos posee un comportamiento normal o no se modifica si se considera el ingreso a la
gaussiano. En la Figura 1b observamos una distri- frmula lctea en cualquiera de estos dos puntos
bucin completamente diferente en los controles. de corte. Por el contrario, en el grupo control,
La dispersin de los valores tanto en los casos, existe una diferencia significativa (p <0,003) en-
como en los controles se puede apreciar en la contrndose un mayor ttulo en aquellos nios
Tabla 1 a partir de la cual se puede observar el que recibieron lactancia sustituta despus de los 3
amplio rango de distribucin y una diferencia meses.
significativa (p <0,0001) al comparar el ttulo La Tabla 3, indica que al realizar un clculo del
promedio entre nios diabticos y nios controles. tiempo de exposicin a la frmula lctea (meses
Figura 1. Distribucin del anticuerpo anti-BSA-IgG en nios diabticos y controles ordenados segn rangos de
concentracin del anticuerpo.
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*p=0,003
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porcentajes de ICA+, GAD+, e IA-2+ en el grupo una posterior respuesta inmunitaria. Especulando
total de diabticos y luego estratificados por la sobre este tema, se podran plantear dos posibles
categora BSA+. interpretaciones: la primera que indique que este
En la Tabla 6 se puede observar, que el evento ocurri en una edad muy temprana en que
porcentaje de positividad del grupo total casi no la mucosa intestinal no se encuentra completa-
se modifica al compararlos con la categora BSA+. mente madura y recubierta, y el BSA o un
segmento de ste (pptido ABBOS) traspas esta
barrera generando una respuesta inmune, la cual
Tabla 6. Porcentaje de positividad de los por mimetismo molecular destruy la protena de
anticuerpos pancreticos de acuerdo a cada membrana ICA69, con su consecuente dao -
categora de anti-BSA-IgG en nios diabticos pancretico18,21. Si esto fuera as, se esperara un
alto nivel de anti-BSA-IgG en pacientes que
Autoanticuerpo BSA+ y BSA- BSA+ fueron poco amamantados, o que recibieron
(n=153) (n=127) frmulas lcteas a muy temprana edad, sin embar-
go nuestro estudio no observ variaciones con
ICA+ 84,3% 83,1% respecto a la asociacin de este ttulo de anti-BSA-
GAD+ 65,4% 55,9% IgG y estas dos variables. De este modo, una
IA-2+ 60,4% 60,6% explicacin alternativa frente al proceso que po-
dra estar ocurriendo sera que en cualquier
ICA+ = toda medicin superior a 20 JDF
momento de la vida en que se consume leche de
GAD+ e IA-2+ = toda medicin superior a 1 U/ml
vaca, las mismas caractersticas del paciente diab-
tico (susceptibilidad gentica, carga viral y otros
gatillantes medioambientales), propenden a que
DISCUSIN el BSA o un segmento de ste traspase la mucosa
intestinal y no exista tolerancia hacia este pptido.
La respuesta inmune frente a elementos dietarios, Puede ser que si en este perodo ya existen
ha sido uno de los campos ms controversiales en anticuerpos anti-ICA69 stos se unan a BSA de
el anlisis de los factores ambientales que podran forma incompleta, y sin destruir a la protena,
gatillar la diabetes tipo 15,17. Uno de los puntos cambien su estructura o dejen expuestas otras
ms importantes en el estudio de la patognesis cadenas peptdicas generando anticuerpos. De
de la enfermedad, es el entender por qu en un este modo, se exacerbara la respuesta inmune
momento determinado se desarrolla el proceso acortando los tiempos de destruccin de las
autoinmune, cules son las clulas y molculas clulas del pncreas. Segn esta explicacin no
que participan, el orden de aparicin de stas, veramos cambios con respecto a la lactancia
cules son las seales que se interrelacionan y materna o al ingreso de la frmula lctea; tampo-
finalmente, qu elementos determinarn cules co nos encontraramos con un nivel de autoanti-
son los mecanismos intracelulares que daan cuerpos ms elevados que de costumbre, y
especficamente a la clula pancretica. explicara la asociacin que se observa entre los
Los resultados anteriormente descritos nos nios con altos niveles de anti-BSA-IgG y genoti-
muestran un altsimo ttulo de anti-BSA-IgG en pos de alto riesgo28,30.
pacientes diabticos de reciente diagnstico; fen- Nuestros datos confirman la alta frecuencia de
meno descrito en mltiples estudios18-29, pero anti-BSA-IgG en la poblacin diabtica; sin embar-
que hasta la fecha no tiene una explicacin go, no es posible atribuir a esta protena un papel
convincente. El alto ttulo de anticuerpos anti-BSA especfico en el desarrollo de autoinmunidad -
detectado en nuestra poblacin diabtica, de- pancretica, siendo posiblemente un evento in-
muestra que hubo un traspaso del pptido o parte munolgico posterior a los estadios iniciales de la
de l, a travs de la membrana mucosa intestinal y diabetes tipo 1.
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Agradecimientos
Los autores agradecen la colaboracin de
todas las familias participantes de esta investiga-
cin. Asimismo a los Hospitales San Juan de Dios,
San Borja Arriarn, Exequiel Gonzlez Corts,
Roberto del Ro y Clnica Alemana. Adems,
agradecemos la buena disposicin de la Funda-
cin de Diabetes Juvenil de Chile.
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