DISCIPLINA FARMACOGNOZIEFITOTERAPIE

LUCRARE DE LICEN
 LUCRARE DE LICEN

Coordonatori tiinifici

ef lucrri dr. George Dan MOGOANU

Conf. dr. Gabriela Ru

Absolvent

Daniela-Georgiana RUSESCU

2014
 DISCIPLINA FARMACOGNOZIEFITOTERAPIE

FORSYTHIA SP. (OLEACEAE): STUDIU

FARMACOGNOSTIC I MICROBIOLOGIC

Coordonatori tiinifici

ef lucrri dr. George Dan MOGOANU

Conf. dr. Gabriela Ru

Absolvent

Daniela-Georgiana RUSESCU

2014
 (a)

(b)

(c)
Forsythia sp. (Oleaceae): (a) F. suspnsa (Thunb.) Vahl; (b) F. viridssima
Lindley; (c) F. intermdia Zabel (F. suspensa viridissima).
http://www.extension.iastate.edu/NR/rdonlyres/A26E5147-5F81-4850-8092-2BFE413C1DA9/12405/forsythia.jpg;
http://www.botansad.com.ua/images/phocagallery/1dendro/Forsythia_viridissimal.jpg;
http://www.havlis.cz/img/1381_3.jpeg.
 CUPRINS

Introducere .......................................................................................................................... 7
PARTEA TEORETIC
1. Date botanice asupra unor specii de Forsythia ......................................................... 10
1. 1. Etimologie. Scurt istoric ............................................................................................... 10
1. 2. ncadrare sistematic .................................................................................................. 10
1. 3. Caracterele morfologice ale familiei Oleaceae ............................................................ 11
1. 4. Caracterele morfologice ale genului Forsythia ............................................................ 11
1. 5. Caracterele morfologice ale unor specii de Forsythia ................................................. 12
1. 5. 1. F. suspnsa (Thunb.) Vahl ................................................................................... 12
1. 5. 2. F. viridssima Lindley ............................................................................................ 12
1. 5. 3. F. intermdia Zabel (F. suspensa viridissima) ............................................... 13
1. 6. Date ecologice, geobotanice i de rspndire ............................................................ 14
2. Date fitochimice asupra unor specii de Forsythia ..................................................... 15
2. 1. Lignani ......................................................................................................................... 15
2. 2. Flavonoide ................................................................................................................... 20
2. 2. 1. Flavonozide ............................................................................................................. 20
2. 2. 2. Antocianozide .......................................................................................................... 21
2. 3. Triterpenoide ............................................................................................................... 21
2. 3. 1. Alcooli triterpenoidici ................................................................................................ 21
2. 3. 2. Acizi triterpenoidici pentaciclici ................................................................................ 21
2. 4. Proteine ....................................................................................................................... 22
2. 5. Alte componente .......................................................................................................... 22
3. Aciune farmacologic i utilizri ................................................................................ 24
3. 1. Aciunea antitumoral .................................................................................................. 24
3. 2. Aciunea antioxidant .................................................................................................. 24
3. 3. Aciunea antiinflamatoare ............................................................................................ 25
3. 4. Aciunea antihistaminic .............................................................................................. 26
3. 5. Aciunea antibacterian ............................................................................................... 26
3. 6. Aciunea antiviral ....................................................................................................... 27
3. 7. Aciunea vasorelaxant ............................................................................................... 27
3. 8. Alte aciuni ................................................................................................................... 27
3. 9. Cercetri fitobiologice asupra speciei F. viridssima ................................................... 28
3. 10. Utilizri apicole i horticole ........................................................................................ 28
PARTEA EXPERIMENTAL
4. Testarea activitii antifungice pentru trei extracte hidroalcoolice din flori de
Forsythia sp. .................................................................................................................. 29
4. 1. Material i metode ................................................................................................... 29
4. 1. 1. Tulpini fungice ..................................................................................................... 29
4. 1. 2. Extracia principiilor active din florile de Forsythia sp. ........................................ 29
4. 1. 3. Determinarea coninutului n polifenoli totali exprimai n acid cafeic ................. 30
4. 1. 4. Determinarea calitativ a activitii antifungice ................................................... 30
4. 1. 5. Curba dinamicii temporale a efectului fungistatic/fungicid .................................. 30
4. 1. 6. Analiza cantitativ a activitii antifungice pentru stabilirea concentraiei
minime inhibitorii (CMI) ....................................................................................... 31
4. 1. 7. Influena extractelor vegetale asupra expresiei coordonate a factorilor de
virulen .............................................................................................................. 31
4. 2. Rezultate i discuii ................................................................................................. 33
5. Determinarea cantitativ a totalului flavonozidic din florile de la trei specii de
Forsythia ........................................................................................................................ 38
5. 1. Material i metode ................................................................................................... 38
5. 2. Rezultate i discuii ................................................................................................. 40
Concluzii ............................................................................................................................. 41
Bibliografie ......................................................................................................................... 43
 Introducere

n flora Romniei, speciile de Forsythia sunt cultivate n scop ornamental, n parcuri

i grdini. F. suspnsa este comun n cultur prin parcuri i grdini, ca arbust ornamental.
Este un arbust exotic, originar din centrul i din nordul Chinei. F. viridssima este o specie
comun n cultur prin grdini i parcuri, ca arbust ornamental. Este, de asemenea, un arbust
exotic, cultivat ca ornamental n China. F. intermedia este o specie hibrid (F. suspensa
viridissima), provenit tot din Orientul ndeprtat. Alte specii exotice de Forsythia cuprind:
F. giraldiana (din nord-vestul Chinei), F. japonica (din Japonia), F. ovata (din Coreea).
Pe lng F. intermedia, tot prin cultivare a fost obinut i o alt specie hibrid: F.
variabilis (F. ovata suspensa).
Din punct de vedere fitochimic, florile, frunzele i fructele speciilor de Forsythia
conin numeroase principii active: lignani, flavonozide (rutozid), antocianozide (n flori),
triterpenoide (alcooli triterpenoidici, acizi triterpenoidici pentaciclici), proteine, acizi poli-
fenolcarboxilici (acid cafeic, acid clorogenic), iridozide (derivai de loganozid), cafeoil-
glicozide ale coniferolului (lianqiaoxinzida A), ulei volatil bogat n monoterpenoide (-pinen),
feniletan-derivai (benzil-etanol), principii amare, alcaloizi (suspensina A, egenina, bicuculina
i derivai), lipide, enzime.
n fitoterapia tradiional chinezeasc, F. suspensa este considerat una dintre cele
50 de specii fundamentale. Sub denumirea de Forsythiae fructus, fructul speciei F. suspensa
este oficinal n Farmacopeea Chinez. Tot n China, fructele de F. suspensa i de F. viridissima
intr n compoziia remediului lian qiao, vechi de peste 4000 de ani. Fructele speciilor
F. suspensa i F. viridissima sunt oficinale n Farmacopeea Japonez, iar fructele de
F. viridissima, F. koreana i F. suspensa sunt oficinale n Farmacopeea Coreean.
n medicina tradiional din Orientul ndeprtat (China, Japonia, Coreea), speciile de
Forsythia (F. koreana, F. suspensa, F. viridissima) sunt utilizate pentru o gam larg de aciuni
farmacologice: antidoturi n diverse intoxicaii, antiinflamatoare (antiflogistice), diuretice,
antioxidante, antibacteriene, antivirale, coleretice, antiemetice, antitusive, tonice, laxative,
emenagoge, antihelmintice, febrifuge, antitumorale etc., n gonoree, erizipel, inflamaii,
febr, ulcer, furuncule, helmintiaze, tromboflebite, hemoroizi, tumori, migrene, scabie etc.

7
 F. suspensa face parte din lista remediilor utilizate ca antitumorale, timp de milenii,
n medicina tradiional chinezeasc. Cercetri recente au evideniat efect antitumoral pentru
triterpenoidele cu structur dammaranic izolate din fructele speciilor de Forsythia.
Forsitialanul A i B (mono-epoxi-lignani) i filirina (tetrahidro-furo-furan), din com-
poziia extractului metanolic din fructele de F. suspensa prezint aciune antioxidant, eva-
luat prin efectul protector mpotriva stresului oxidativ indus de peroxinitrit la nivelul celulelor
epiteliale renale.
Arctigenolul izolat din Forsythiae fructus prezint aciune antiinflamatoare, pe culturi
de celule i pe model experimental de edem al labei de obolan. Efecte antiinflamatoare la
nivelul esutului microglial, prezint i pinorezinolul izolat din fructele de F. koreana.
Extractul din fructele de F. suspensa amelioreaz hipersensibilitatea indus de
-conglicinina din seminele de soia, la purceii nrcai.
Florile speciei F. suspensa au un spectru antibacterial larg, prin inhibiia creterii
Staphylococcus aureus, Shigella dysenteriae, Streptococcus -hemolitic, Pneumococcus sp.,
Bacillus typhi, Mycobacterium tuberculosis etc.
In vitro, extractul etanolic din F. suspensa inhib dezvoltarea virusului gripal A, n
celulele epiteliale bronice infectate cu HIV, dar i a virusului sinciial respirator.
Forsithida din frunzele de F. viridissima are efecte vasorelaxante asupra contraciei
induse de norepinefrin la nivelul aortei de obolan, cu sau fr endoteliu. Suspensazida
prezint o aciune hipotensiv marcat, n model experimental de hipertensiune arterial.
Preparatele extractive i unele principii active izolate din specii de Forsythia mai
prezint urmtoarele aciuni: hipolipemiant i hipocolesterolemiant in vivo, la oarece,
pentru extractul alcoolic din fructe i frunze de F. suspensa; hepatoprotectoare pentru pino-
rezinolul din Forsythiae fructus, n model experimental de hepatit indus cu tetraclorur de
carbon; imunosupresoare in vivo, la oarece (F. suspensa), prin inhibiia activrii i a proli-
ferrii limfocitelor T stimulate cu concanavalin A (ConA); imunostimulatoare in vitro,
prin stimularea fagocitozei la nivelul macrofagelor peritoneale i inhibiia sintezei de NO
(F. suspensa); neuroprotectoare, pentru arctigenol i forsithiazida din Forsythiae fructus,
prin inhibiia neuroinflamaiei; antispastic in vitro inhibiia contraciilor spontane ale
intestinului izolat de guinea pig (Forsythiae fructus); anticoagulant totalul lignanic din
fructele de F. suspensa; antivomitiv, n model farmacodinamic de emez indus cu clorhidrat
de apomorfin la leopard i la broasc (Forsythiae fructus).

8
 Efectul mitoinhibitor (testul Triticum) al extractelor din frunzele i florile speciei
F. viridissima poate fi explicat doar prin prezena unor substane active (ligani, iridozide,
cumarine, triterpenoide, tanin).
Partea experimental a lucrrii cuprinde testarea activitii antifungice pentru trei
extracte hidroalcoolice din flori de Forsythia (F. suspensa, F. viridissima i F. intermedia)
i determinarea cantitativ a totalului flavonozidic din florile celor trei specii de Forsythia.

9
 PARTEA TEORETIC

Capitolul 1
Date botanice asupra unor specii de Forsythia

1. 1. Etimologie. Scurt istoric

Denumirea genului Forsythia provine de la numele botanistului englez William A.
Forsyth (17371804) [1, 2]. Denumirile populare ale unor specii de Forsythia, n limba
romn i n cteva limbi europene, sunt prezentate n Tabelul 1 [16].
Tabelul 1 Denumiri populare ale unor specii de Forsythia
Denumiri populare
Limba
F. suspensa (Thunb.) Vahl F. viridissima Lindley F. intermedia Zabel
Romn Forsiie, Ploaie de aur Forsythia, Clopoei galbeni Forsythia, Clopoei galbeni
Englez Forsythia, Golden Bells Forsythia, Golden Bells Forsythia, Golden Bells
Francez Forsythia, Mimosa de Paris Forsythia, Mimosa de Paris Forsythia, Mimosa de Paris
Forsythie, Goldflieder, Forsythie, Goldflieder, Forsythie, Goldflieder,
German
Goldglckchen, Goldregen Goldglckchen, Goldregen Goldglckchen, Goldregen
Italian Forsythia, Forsizia Forsythia, Forsizia Forsythia, Forsizia
Maghiar Aranyes Aranyes Aranyes
Spaniol Forsythia, Forsitia Forsythia, Forsitia Forsythia, Forsitia

1. 2. ncadrare sistematic
Pentru ncadrarea sistematic a genului Forsythia a fost luat n considerare clasi-
ficarea realizat dup sistemul elaborat de Cronquist, Takhtajan i Zimmermann (1966),
acceptat de ctre Ehrendorfer (1971, 1978), cu unele mici modificri aduse ulterior de Pop,
Hodian et al. n ultimii ani exist o reorientare privind ntregul sistem taxonomic, n care
sunt luate n considerare criterii noi, ceea ce va duce la o nou clasificare a ntregii lumi vii.
n botanica sistematic, apariia unor tratate fundamentale n care se adopt noile criterii de
clasificare a dus la reformularea ncadrrii genurilor i speciilor n uniti sistematice supe-
rioare. Dup sistemul adoptat de ctre Ehrendorfer (1999) i reluat, cu aplicare numai la
speciile superioare, de ctre Ciocrlan (2000), genul Forsythia aparine urmtoarelor uniti
sistematice [1, 4]:
Subregnul CORMOBIONTA
ncrengtura SPERMATOPHYTA
Subncrengtura MAGNOLIOPHYTINA (ANGIOSPERMAE)

10
 Clasa MAGNOLIATAE (MAGNOLIOPSIDA, DICOTYLEDONATAE)
Subclasa ASTERIDAE
Ordinul OLEALES
Familia OLEACEAE
Genul FORSYTHIA
Specii F. suspensa (Thunb.) Vahl, F. viridissima Lindley,
F. intermedia Zabel (F. suspensa viridissima).

1. 3. Caracterele morfologice ale familiei Oleaceae

Familia Oleaceae cuprinde plante lemnoase, arbori, arbuti, liane cu frunze opuse,
rar alterne, nestipelate. Flori hermafrodite, actinomorfe. Caliciu este gamosepal. Corol gamo-
petal, hipocrateriform/campanulat; foarte rar lipsete sau este dialipetal. Androceu cu
dou stamine, de obicei prinse pe tubul corolei sau pe axa floral. Gineceu bicarpelar, bilo-
cular, cu ovarul superior. n funcie de gen, fructul poate fi capsul, samar, bac sau drup
[1, 4, 6].

1. 4. Caracterele morfologice ale genului Forsythia

Arbuti cu frunze cztoare, opuse, simple/trifoliate. Lujeri fistuloi sau cu mduva
dispus n lamele. Florile galben-aurii apar primvara de timpuriu, naintea frunzelor, cte
16 pe lujeri scuri. Caliciu cu patru sepale. Corol uor campanulat, adnc divizat n 4(5)
lacinii imbricate. Stamine extrorse, fixate la baza petalelor. Ovar bilocular, cu 410 ovule n
fiecare locul. Fruct capsul alungit, uscat. Semine ngust aripate, cu albumen [1, 4].
Determinarea speciilor
Lujeri fistuloi, cu mduv numai la noduri. Frunze de obicei trifoliate:
F. suspensa
Lujeri n cea mai mare parte i cel puin n poriunea terminal cu mduv
ntrerupt, dispus n lamele transversale
Frunze de obicei ntregi sau puin dinate, lungi de 58 cm, niciodat tripartite:
F. europaea
Frunze serate, cel puin mai sus de mijloc, numai excepional ntregi, lungi de 7
14 cm, uneori tripartite sau trifoliate
Mduva ntrerupt, dispus n lamele transversale, pe tot lungul ramurii, numai la
lstarii viguroi uneori lipsete pe internoduri: F. viridissima

11
 Mduva ramurilor la noduri ntreag, n lungul internodurilor este lamelar
ntrerupt, mai rar lipsete. Frunzele de pe lstari adesea tripartite: F. intermedia

1. 5. Caracterele morfologice ale unor specii de Forsythia

1. 5. 1. F. suspnsa (Thunb.) Vahl
Arbust nalt pn la 3 m, cu lujeri galbeni mslinii/roii brunii, la nceput ereci, mai
trziu aproape penduli, tetramuchiai, cu numeroase lenticele proeminente. Frunze ovate
sau alungit-ovate, parte ntregi, parte trifidate/trifoliate, lungi de 610 cm, de 1.32 ori mai
lungi dect late, serat dinate, glabre/rareori proase, cu peiolul lung de 13 cm. Flori mari,
galbene, pe tipul 4, cte 13 (uneori ase), galbene, lungi de cca. 2.5(3) cm; nfloresc nainte
de nfrunzire. Corol cu lacinii alungit-ovate, late de 8 mm. Capsul ngust-ovoidal, acut,
uor comprimat, lung de 1.5 cm. nflorete n lunile martieaprilie (Figura 1) [1, 68].

Figura 1 F. suspnsa (Thunb.) Vahl, aspecte morfologice [7, 8].

1. 5. 2. F. viridssima Lindley
Arbust nalt pn la 3 m, tufos, cu ramuri la nceput verzi, mai trziu galbene brune,
pendule, verucoase din cauza lenticelelor proeminente. Frunze alungit eliptice pn la
lanceolate, mai late la mijloc, lungi de 814 cm, de 2.54.5 ori mai lungi dect late, cuneate,
de obicei inegal serate, cel puin mai sus de mijloc, uneori aproape ntregi, totdeauna glabre,
cu peiol lung de 612 mm. Flori cte 13. Lobii caliciului ovali, lungi aproape ct
jumtatea tubului. Corol lung de 1.82.5 cm, galben, cu o uoar nuan verzuie, cu
laciniile ngust alungite, spre vrf uor recurbate. Capsul ovoidal, rostrat, lung de
1.5 cm. nflorete n lunile martieaprilie (Figura 2) [1, 9].

12
 Figura 2 F. viridssima Lindley, aspecte morfologice [9].

1. 5. 3. F. intermdia Zabel (F. suspensa viridissima)

Arbust nalt pn la 3 m, erect. Frunze ovate pn la alungit lanceolate, uneori bi-
partite, tripartite/trifoliate mai ales pe ramurile viguroase, lungi de 812 cm. Flori de obicei
mai multe mpreun, cu caliciul mai scurt dect tubul corolei. Specie hibrid, obinut probabil
n cultur, uneori plantat prin parcuri i grdini (Figura 3) [1, 10].

Figura 3 F. intermdia Zabel (F. suspensa viridissima), aspecte morfologice [10].

13
 1. 6. Date ecologice, geobotanice i de rspndire
n flora Romniei, speciile de Forsythia sunt cultivate n scop ornamental, n parcuri
i grdini. F. europaa se cultiv prin grdini i parcuri, ca specie de ornament. Este un
arbust originar din nordul Albaniei i din rile fostei Iugoslavii [1, 4]. F. suspnsa (2n=28)
este comun n cultur prin parcuri i grdini, ca arbust ornamental. Este un arbust exotic,
originar din centrul i nordul Chinei [1, 46]. F. viridssima (2n=28) este o specie comun
n cultur prin grdini i parcuri, ca arbust ornamental. Este, de asemenea, un arbust exotic,
cultivat ca ornamental n China [4].
Alte specii exotice de Forsythia [11]:
F. giraldiana Lingelsheim, din nord-vestul Chinei;
F. japonica Makino, din Japonia;
F. ovata Nakai, din Coreea.
Pe lng F. intermedia, tot prin cultivare a fost obinut i o alt specie hibrid:
F. variabilis Seneta (F. ovata suspensa) [11].

14
 Capitolul 2
Date fitochimice asupra unor specii de Forsythia

Din punct de vedere fitochimic, florile, frunzele i fructele speciilor de Forsythia

conin numeroase principii active: lignani, flavonozide (exprimate n rutozid), antocianozide
(n flori), triterpenoide (alcooli triterpenoidici, acizi triterpenoidici pentaciclici), proteine, acizi
polifenolcarboxilici (acid cafeic, acid clorogenic), iridozide (derivai de loganozid), cafeoil-
glicozide ale coniferolului (lianqiaoxinzida A), ulei volatil bogat n monoterpenoide (-
pinen), feniletan-derivai (benzil-etanol), principii amare, alcaloizi (suspensina A, egenina,
bicuculina i derivai), lipide, enzime [1119].

2. 1. Lignani
n speciile de Forsythia a fost identificat filirozida (filirina, forsitina) sau filigenol-
-glucozida, heterozid lignanic cu aglicon filigenol (filigenina, forsitigenol) i cu structur
pinorezinolic. Cercetrile au stabilit c aceast glucozid are dou forme: forma (t.t. 154
1550C; []D +48.40, n etanol) i forma (t.t. 1841850C; []D +48.50, n etanol). Agliconul
prezint t.t. 1341350C i []D +1300 (n etanol) [11, 20, 21].
H O
H3CO OR
R
filigenol H
H H filirozida glucozil
H3CO OCH3
O H

n Forsythia sp. au mai fost identificai i ali compui de tip lignani, agliconi i
heterozide: arctiozida, pinorezinol, pinorezinol--D-glucozida, forsithida, forsithid metil
eter, filigenol, forsitozide AJ, matairezinol, suspensazida, siringarezinol etc. [14, 2127].
Patru lignani (arctigenol, matairezinol i derivai), patru glucozide lignanice, o
flavonoid i dou cafeil-glicozide ale coniferolului au fost identificate drept compui
principali n frunzele de F. suspensa, F. viridissima i F. koreana. Structurile din frunze au
fost n general similare cu cele raportate anterior pentru fructe, cu excepia faptului c nu au
fost detectate suspensasidele i -hidroxiacteozidele [12, 28, 29].
Un extract celular brut din specia F. intermedia catalizeaz formarea (-)-seco-izo-
laricirezinolului, a enantiomerului su (+) i a (-)-matairesinolului, atunci cnd sunt incubai

15
cu alcool coniferilic, n prezen de NAD(P)H i H2O2. Acesta este prima menionare a unei
reacii enzimatice implicate specific n cuplarea dintre doi monomeri fenilpropanici pentru a
obine un lignan optic pur [30, 31].
Trei noi glucozide, rengyozidele AC, care au ca agliconi forme reduse ale fenil-
etanolului, au fost izolate din fructele speciei F. suspensa. Studii chimice i spectroscopice
au artat c structurile acestor produse naturale sunt 2-(1,4-dihidroxiciclohexil)--etil-D-
glucopiranozida, 2-(1-hidroxi-4-cetociclohexil)--etil-D-glucopiranozida, 2-(1,4-dihidroxi-
ciclohexil)--D-etil-6-O-[2-(4-hidroxifenil)-acetil]-glucopiranozida. n plus, a fost izolat i
salidrozida, un posibil precursor biogenetic al acestor glucozide [32].
Experimentele biogenetice cu lstari de F. intermedia au artat c fenilalanina i
acidul ferulic sunt precursori ai lignanilor de tip arctigenol, cu structur dibenzil-butiro-
lactonic i a lignanilor furo-furanici, de tip filigenol i epi-pinorezinol. Dei matairezinolul
a fost ncorporat n arctigenol i epi-pinorezinolul n filigenol, n acord cu etapele de metilare
ulterioar din metoda biosintetic, a fost observat i o oarecare ncorporare a structurilor
unei clase de lignani n alta, n special din epi-pinorezinol n arctigenol. Acest lucru poate
indica un grad ridicat de activitate catabolic, urmat de o ncorporare non-specific. Alcoolul
coniferilic marcat radioactiv [2-14C, 1-3H] a fost ncorporat n cei trei lignani, cu o cretere
semnificativ a raportului izotopic 1H:14C. Aceast observaie susine ipoteza c lignanii
apar mai degrab prin cuplarea oxidativ a dou uniti de coniferol, dect din dou uniti
de acid ferulic sau coniferaldehid. Creterea evident n raportul izotopic, rezult, probabil,
dintr-un efect izotopic primar n reaciile de oxido-reducere reversibile inter-relaionate cu
acizi cinamici i alcooli cinamici. O cretere similar n raportul izotopic a fost msurat n
timpul biosintezei podofilotoxinei din specia Podophyllum hexandrum [33].
A fost pus la punct metoda de obinere a calusului i a culturilor celulare n
suspensie de la specia F. intermedia i a fost studiat capacitatea lor de a produce lignani.
Att la nivelul calusului, ct i al celulelor n suspensie, producia de lignani a depins
semnificativ de mediul de cultur utilizat i nu de sursa de explant original, dei tiparele
lignanilor n explante sunt diferite. Au fost stabilite unele linii celulare care sintetizeaz
majoritar lignani, fie matairezinol-4-O-glucozida, fie epi-pinorezinol-4-O-glucozida. Cul-
turile celulare n suspensie metabolizeaz rapid lignanii exogeni, fr a detecta produi de
metabolism rezultai prin transformarea lignanilor [34, 35].
Frunzele i tulpinile speciei F. intermedia conin patru lignani principali i O-

16
glucozidele lor. Acestea au fost identificate ca fiind derivaii dibenzilbutirolactonei: (-)-
arctigenol, arctiozida [(-)-arctigenol-4-O-glucozida], matairezinol i (-)-matairezinol-4-O-
glucozida, mpreun cu lignanii furofuranici (+)-filigenol, filirozida [(+)-filigenol-4-O-glu-
cozida], (+)-epi-pinorezinol i (+)-epi-pinorezinol-4-O-glucozida. Coninutul de lignani a
variat n funcie de tipul de esut i de sezon [36].
Biotransformarea lignanilor izolai din Podophyllum sp. n culturi celulare n sus-
pensie ale speciei F. intermedia are loc prin oxidare rapid, cnd podofilotoxina trece n
podofilotoxon. Au fost produse, de asemenea, cantiti mai mici ale stereoizomerului
picropodofilon, probabil ca urmare a modificrilor n pH-ul culturilor de celule n timpul
incubrii. Aceti derivai cetonici au fost obinui cu un randament global de pn la 40%.
Au fost obinui produi similari atunci cnd acetil-podofilotoxina sau podofilotoxina 4-O-
glucozidat au fost adugate n culturile celulare, demonstrnd prezena unei esteraze supli-
mentare i activitatea -D-glucozidazei. Similar, picropodofilina a fost transformat n picro-
podofilon. Dezoxipodofilotoxina a fost transformat n podofilotoxon, probabil printr-o
hidroxilare benzilic anterioar oxidrii [37].
O concentraie mare de (-)-pinorezinol n extractele celulare de F. intermedia cons-
tituie o dovad pentru reducerea enantiospecific a (+)-pinorezinolului. Astfel, mecanismele
de transformare stereoselectiv i enantiospecific n biogeneza lignanilor ofer prioritate
cercetrii tiinifice: s-a demonstrat c preparatele celulare solubile ale speciei F. intermedia
catalizeaz formarea enantiomerului lignanic pur, (-)-seco-izolaricirezinol, cnd este incubat
cu alcool coniferilic n prezen de NAD(P)H i H2O2. Surprinztor, (-)-pinorezinolul, de
asemenea, se acumuleaz n acest amestec celular solubil n exces enantiomeric mai mult de
96%, chiar dac nu este prezent n mod natural n izomerul (+). Dar aceste preparate celulare
solubile nu dau natere la cuplare stereoselectiv; n schimb, amestecurile racemice pino-
rezinolice sunt primele formate, catalizate de o reacie dependent de H2O2-peroxidaz. Apoi,
o reductaz NAD(P)H enantiospecific convertete (+)-pinorezinolul i nu izomerul (-), n
(-)-seco-izolaricirezinol [38].
Sinteza stereoselectiv a (+)-pinorezinolului n F. suspensa, din precursorul su
achiral, alcoolul coniferilic, a furnizat prima dovad a existenei unei enzime stereoselective
de cuplare n biosinteza lignanilor. Reziduul extractiv din tulpinile de F. suspensa, rmas
dup separarea enzimelor solubile, catalizeaz biosinteza stereospecific (cca. 65%) a (+)-
[8,8-14C]-pinorezinolului din [8-14C]-coniferol n absena unor cofactori exogeni; adiia

17
H2O2 a avut un efect redus asupra compoziiei enantiomerice. Cu toate acestea, atunci cnd
NAD i malatul au fost furnizate, stereoselectivitatea reaciei de cuplare a fost semnificativ
mbuntit, obinnd cca. 80% (+)-pinorezinol. n mod clar, reziduul insolubil conine o
enzim de cuplare specific ce catalizeaz formarea (+)-pinorezinolului din alcool coniferilic.
Prin contrast, atunci cnd alcoolul sinapilic marcat radioactiv [8-14C] a fost folosit ca substrat,
s-au format doar siringarezinoli racemici: reacia de cuplare non-stereoselectiv, catalizat
de o peroxidaz, presupune existena unor cantiti mici de (-)-pinorezinol, atunci cnd
alcoolul coniferilic este folosit ca substrat [3942].
Culturile celulare de F. intermedia catalizeaz transformarea treptat a pinorezi-
nolului n seco-izolaricirezinol prin intermediul laricirezinolului; acest fapt reprezint primul
exemplu documentat de reducere a eterilor benzilici (sau a analogilor lor metid-chinonici) n
plante. Specificitatea etapelor reductive a fost stabilit cu izomerii (+) i (-) ai pinorezino-
lului, ca substraturi, constatnd c transformarea lor n laricirezinol a fost aproape integral
enantioselectiv, >99:1 n favoarea izomerului (+), n timp ce formarea (-)-seco-izolarici-
rezinolului a fost mai strict enantioselectiv, fiind observat doar reducerea (+)-laricirezi-
nolului. n aceste condiii experimentale, nu a fost posibil s se demonstreze reacia NADP-
dependent, utiliznd ()-laricirezinol ca substrat. Interesant este c nici izomerii (+)- i (-)
ai epi-pinorezinolului nu au suferit reacii de reducere similare pentru a se obine larici-
rezinol, epi-laricirezinol sau seco-izolaricirezinol [43, 44].
Formarea (-)-arctigenolului n specia F. intermedia a fost demonstrat pe culturi
celulare, prin cataliza enantioselectiv i regiospecific a O-metilrii matairezinolului. n
contrast cu paii enzimatici definii n cadrul transformrii de la (+)-pinorezinol la (-)-matai-
rezinol, conversia matairezinolului n arctigenol nu a fost nalt enantioselectiv; att (+)-,
ct i (-)-matairezinolul au servit ca substraturi pentru metilare, dei a fost preferat enantio-
merul (-) natural. Astfel, O-metilarea matairezinolului, catalizat de extractul celular de
F. intermedia, nu este nici foarte enantioselectiv, nici regiospecific [45].
Formarea scheletului 8,8-lignanic este generat de (+)-pinorezinol-sintetaz, oxidaz
care catalizeaz cuplarea stereoselectiv a dou molecule achirale de E-coniferol, cnd se
obine (+)-pinorezinolul, cu un randament de peste 97% [46].
Acumularea pinorezinolului i matairezinolului n suspensii celulare din specia
F. intermedia a influenat n principal de coninutul de zaharoz al mediului de cultur. Cel
mai mare randament de obinere a pinorezinolului a fost realizat de celulele cultivate ntr-un

18
mediu care coninea 6% zaharoz, timp de 122 zile. Cea mai mare concentraie de matai-
rezinol a fost atins n acelai mediu de cultur, dar la 142 zile. Aceasta este prima men-
iune privind acumularea pinorezinolului n specia F. intermedia [47, 48].
Separarea n scop preparativ i purificarea filirozidei din F. suspensa, cu un factor
de recuperare de 92%, poate fi realizat i prin cromatografie de mare vitez n contra-
curent (High-Speed Counter-Current Chromatography), utiliznd un solvent cu dou faze,
compus din n-hexanacetat de etiletanolap (1:9:1:9, n volume) [49, 50].
Suspensazida i forsithiazida, care au n structur ramnozil(16)glucozil sunt
componente principale n specia F. suspensa, dar nu i n F. viridissima. Pe de alt parte,
acteozida i -hidroxiacteozida au fost izolate drept componente principale doar din specia
F. viridissima, nu i din F. suspensa [5154].
Determinarea simultan a 12 componente majore din specia F. suspensa se poate
realiza i prin cromatografie lichid de nalt performan, metoda DAD (HPLCDAD):
R-suspensazida, S-suspensazida, metil-eterul S-suspensazidei, (+)-pinorezinol--D-glucozida,
forsithiazida, (+)-epi-pinorezinol-4-O-glucozida, suspensazidele A i B, rutozida, filirozida,
(+)-pinorezinol, (+)-epi-pinorezinol, filigenol. Analiza HPLC a fost efectuat pe o coloan
C18 Zorbax XDB cu gradient de eluie pentru metanol i acid acetic diluat 0.3%, timp de
55 min, la o lungime de und de 280 nm. Metoda de analiz ar putea constituit un test de
control al calitii pentru specia F. suspensa [5558].
n extractul metanolic din fructele speciei F. suspensa au fost izolai doi mono-
epoxi-lignani noi, forsitialan A i B, alturi de filirin, un lignan cu structur tetrahidrofuro-
furanic. Structurile compuilor au fost elucidate prin metode spectroscopice [5962].
O nou forsitenzid, denumit forsitenzida F, a fost izolat din prile aeriene de
F. suspensa: 4-hidroxi-4-[8-{[1-[(4-hidroxifenil)-acetil]--D-glucopiranozil-6-]-oxi}-etil]-2,5-
ciclohexadien-1-ona. Structura compusului a fost stabilit prin metode spectroscopice
RMN-1H, RMN-13C, tehnici RMN 2D (HMBC, HSQC), HR-ESI-MS [63].
Analiza calitativ i cantitativ a trei compui bioactivi (forsitiazida, rutozida i
forsitina) din diferite produse vegetale provenite de la specia F. suspensa s-a realizat pentru
prima dat prin cromatografie lichid de nalt performan cuplat cu spectrometrie de
mas cu ionizare de tip electrospray (HPLCESIMS). Recuperarea testului a fost n
proporie de 98.27101.07%, rezultatele indicnd faptul c metoda ar putea fi utilizat n
controlul calitii medicamentelor pe baz de extracte din F. suspensa [6466].

19
 n fructele necoapte ale speciei F. suspensa au fost identificai patru compui
lignanici: filigenol, (+)-izo-laricirezinol, filirozida i forsithiazida [67].
Pentru trimetilsilil-derivaii arctiozidei, matairezinozidei, arctigenolului, filigenolului,
matairezinolului, pinorezinolului i metil-arctigenolului, separai prin GCMS, au fost stabilite
fragmentrile n spectrele de mas (ionii moleculari) i comportamentul caracteristic al
trimetilsilil-derivailor (TMS) de tip dibenzilbutirolactone [68].
Extracia cu ultrasunete a filirinei din F. suspensa depinde de mai muli parametri
experimentali: tipul i concentraia solventului, umiditatea produsului vegetal, temperatura
de extracie, timpul de sonicare. n urma iradierii cu ultrasunete, s-au stabilit condiiile optime
de extracie pentru 1 g de produs vegetal: 10 ml de metanol 20%, timp de 60 min., la o
temperatur de 600C [69, 70].

2. 2. Flavonoide
2. 2. 1. Flavonozide
n florile speciilor F. intermedia, F. suspensa i F. koreana a fost identificat o
heterozid flavonolic de tip bidesmozidic (forsitiaglucozida), cu aglicon cvercetol i partea
glucidic alctuit din rutinoz (glucozilramnozil). Forsitiaglucozida are t.t. 1781800C i
[]D -51.80 (n metanol). De asemenea, frunzele de F. suspensa sunt bogate n rutozid, cu
aglicon cvercetol. n general, cvercetolul, rutozida i hiperozida au fost identificate n florile,
frunzele i fructele speciilor de Forsythia [12, 20, 23, 28, 53, 57, 58, 64].
OH OH

HO O OH HO O OH

OH OR
R
HO O OH O
hiperozida galactozil
cvercetol rutozida ramnozilglucozil (rutinozil)

Metabolismul flavonoidelor a fost studiat n petalele i n sepalele de F. intermedia,

prin determinarea activitii enzimelor implicate n biosintez: chalcon-sintaza (CHS), fla-
vanon-3-hidroxilaza (FHT), flavonol-sintaza (FLS), dihidroflavonol-4-reductaza. Analizele
HPLC au completat investigaiile enzimatice, artnd c rutozida (cvercetol-3-O-rutinozida)
este flavonol-glicozida acumulat majoritar n petale i sepale (cca. 90% din concentraia de
flavonoli) i c derivaii de cvercetol i cianidol (glicozidele flavonolice i, respectiv, anto-
cianozidele) se acumuleaz exclusiv n sepale. Datele globale au demonstrat c biosinteza

20
flavonoidelor n florile de F. intermedia conduce la acumularea de compui 3,4-dihidro-
xilai, iar 3-hidroxilarea inelului B are loc mai ales n etapa intermediar a biogenezei [71].

2. 2. 2. Antocianozide
Caracterizarea molecular a genei antocianidin-sintazei (ANS) n F. intermedia
evideniaz exprimarea organ-specific n timpul dezvoltrii florilor. Studii anterioare, mole-
culare i biochimice, au demonstrat expresia i activitatea genelor i enzimelor ulterioare
genei ANS. Gena ANS a fost clonat i s-a demonstrat c este prezent sub forma a dou
cpii n genomul vegetal. Analiza exprimrii genice n elementele florale a artat c gena
ANS, corelat cu biosinteza antocianozidelor, a fost exprimat exclusiv n sepalele i nu n
anterele speciei F. intermedia. Prin urmare, s-a constatat c absena exprimrii genei ANS
este cauza lipsei de antociani n petalele de Forsythia sp., oferind astfel orientare pentru
aplicaiile ingineriei genetice n cultivarea i ameliorarea acestor specii ornamentale [72, 73].

2. 3. Triterpenoide
2. 3. 1. Alcooli triterpenoidici
n fraciunea n-hexanic a extractului cu metanol 70% din fructele uscate i din
seminele speciei F. suspensa au fost identificai unii derivai de dammaran: 3-acetil-20,25-
epoxi-dammaran-24-ol, 3-acetil-20,25-epoxi-dammaran-24-ol. Compuii au fost identi-
ficai pe baza interpretrii datelor spectrale, precum i prin comparaie cu cele ale altor
compui similari din punct de vedere structural [74, 75].
n prile aeriene de F. suspensa a fost identificat un alcool triterpenoidic sub form
de acetat: 20(s)-dammar-24-en-3,20-diol 3-acetat [76].

2. 3. 2. Acizi triterpenoidici pentaciclici

n toate organele vegetative ale speciilor de Forsythia, dar mai ales n fructe, se
gsesc acizi triterpenoidici pentaciclici: acid ursolic, acid oleanolic, acid betulinic n specia
F. viridissima [77, 78].
n prile aeriene de F. suspensa a fost identificat acidul ambrolic [76].
Prin cromatografie pe strat subire (CSS), acidul ursolic a fost identificat i n frun-
zele de F. viridissima (Rf=0.6, spot de culoare violet), nu doar n flori (Rf=0.62, spot de
culoare violet), dup cum precizau lucrrile de specialitate [11].

21
 COOH COOH

HO HO
acid oleanolic acid ursolic

COOH

HO

acid betulinic

2. 4. Proteine
Din scoara i frunzele de F. suspensa a fost izolat, purificat i caracterizat din
punct de vedere fizico-chimic o protein antigel. Cu ajutorul cromatografiei de schimb ionic,
pe coloan de hidroxiapatit i al filtrrii pe gel, a fost izolat o protein cu masa molecular
de 20 kD. Din 35 g de scoar uscat s-au obinut 0.5 g de protein [79].

2. 5. Alte componente
Speciile de Forsythia mai conin i alte componente, printre care:
acizi polifenolcarboxilici: acid cafeic, acid clorogenic [11, 12, 14, 58];
cafeil-derivai cafeoil-glicozide ale coniferolului, de exemplu lianqiaoxinzida A:
5-(3,4-dihidroxi--feniletil)-O--L-ramnopiranozil-(16)-3-O-cafeil--D-glucopiranozida)
[23, 28, 67, 80];
iridozide, derivai de loganozid [8183];
ulei volatil bogat n monoterpenoide hidrocarburi (-pinen) i derivai oxigenai
(borneol) , n frunzele i fructele speciei F. suspensa [8486];
feniletan-derivai (benzil-etanol) [87];
principii amare, n F. viridissima [88];

22
 alcaloizi suspensina A, (-)-7-O-metil-egenina, (-)-egenina, (-)-bicuculina , n
extractul alcoolic din fructele de F. suspensa [89];
ftalide: 3-etil-7-hidroxiftalida, n F. japonica [90];
lipide, n semine [91, 92];
acizi organici [14];
oze simple [14];
enzime [93, 94];
sruri minerale [11].
COOH

OH

HO

OH
acid cafeic -pinen borneol

HO COOH

HO OOC

OH

OH

OH
acid clorogenic

23
 Capitolul 3
Aciune farmacologic i utilizri

n fitoterapia tradiional chinezeasc, F. suspensa este considerat una dintre cele

50 de specii fundamentale. Sub denumirea de Forsythiae fructus, fructul speciei F. suspensa
este oficinal n Farmacopeea Chinez. Tot n China, fructele recoltate de la F. suspensa i
F. viridissima intr n compoziia remediului lian qiao, vechi de peste 4000 de ani. Fructele
speciilor F. suspensa i F. viridissima sunt oficinale n Farmacopeea Japonez, iar fructele
de F. viridissima, F. koreana i F. suspensa sunt oficinale n Farmacopeea Coreean [11].
n medicina tradiional din Orientul ndeprtat (China, Japonia, Coreea), speciile de
Forsythia (F. koreana, F. suspensa, F. viridissima) sunt recomandate pentru o gam larg
de aciuni farmacologice: antidoturi n diverse intoxicaii, antiinflamatoare (antiflogistice),
diuretice, antioxidante, antibacteriene, antivirale, coleretice, antiemetice, antitusive, tonice,
laxative, emenagoge, antihelmintice, febrifuge, antitumorale etc., n gonoree, erizipel, infla-
maii, febr, ulcer, furuncule, helmintiaze, tromboflebite, hemoroizi, tumori, migrene, scabie
etc. [9597].

3. 1. Aciunea antitumoral
F. suspensa face parte din lista remediilor utilizate ca antitumorale, timp de milenii,
n medicina tradiional chinezeasc [98]. Pentru dou triterpenoide izolate din partea aerian
de F. suspensa acid ambrolic i 20(s)-dammar-24-en-3,20-diol 3-acetat a fost studiat
mecanismul de inducie a apoptozei, pe culturi celulare de cancer gastric uman (SGC-7901).
S-a observat c numai acidul ambrolic are efect antitumoral, prin cuantificarea evoluiei unor
markeri specifici (Bcl-2, caspaze, FAS, p-Akt) [76]. Cercetri recente au evideniat efect anti-
tumoral i pentru triterpenoidele cu structur dammaranic izolate din fructele de F. koreana
[99].

3. 2. Aciunea antioxidant
Forsitialanii A i B (mono-epoxi-lignani) i filirina (tetrahidro-furofuran) din com-
poziia extractului metanolic din fructele sau din frunzele de F. suspensa, prezint aciune
antioxidant, evaluat in vitro prin efectul protector mpotriva stresului oxidativ indus de

24
peroxinitrit la nivelul celulelor epiteliale renale [59, 100102] sau mpotriva peroxidrii
lipidice induse de ionii de Cu2+ asupra LDL i HDL [103108]. De asemenea, efect anti-
oxidant in vitro s-a evideniat i n cazul extractelor apos i etanolic din florile de F. koreana
[109]. n ultimii ani, pentru extractele din prile aeriene de F. suspensa s-a dovedit poten-
ialul antioxidant. n experiment farmacodinamic, a fost cercetat efectul protector al extrac-
tului diclorometanic din Forsythiae suspensae herba mpotriva stresului oxidativ indus de
diquat la obolani. Forsitozida A, forsitialanul A i filigenolul ar putea fi principalii cons-
titueni cu efect antioxidant. De asemenea, extractul vegetal a crescut n mod semnificativ
activitatea superoxid dismutazei (SOD), glutation peroxidazei (GSH-Px) i nivelul de gluta-
tion (GSH) n plasm, ficat i rinichi, scznd nivelul de malondialdehid (MDA) n plasm
i n rinichi. n plus, administrat n doz de 100 mg/kg-corp, extractul diclorometanic a avut
un efect antioxidant mai bun dect acidul ascorbic [110114].

3. 3. Aciunea antiinflamatoare
Att in vitro, ct i in vivo, a fost evideniat aciunea antiinflamatoare pentru filigenol
i regynolon, doi lignani izolai din fructele speciei F. koreana, produs vegetal folosit de
milenii n medicina tradiional chinezeasc, pentru tratamentul tulburrilor inflamatorii.
Filigenolul (1100 M) i extractul metanolic din fructele de F. koreana au inhibat ciclo-
oxigenaza-2 (COX-2) i iNOS-sintetaza (inducible nitric oxide synthase) din celulele RAW
264.7 tratate cu lipopolizaharide. n studiul mecanismului, filigenolul a inhibat expresia iNOS
i activarea factorului nuclear B (NF-B), dar nu a avut nici un efect asupra expresiei COX-2.
n plus, la administrare intraperitoneal, filigenolul a inhibat semnificativ edemul labei de
oarece indus prin carrageenan. Astfel, utilizarea pentru aciunea antiinflamatoare a fructelor
speciei F. koreana este pe deplin justificat din punct de vedere tiinific [115117].
Arctigenolul i filirina izolate din Forsythiae fructus (F. suspensa) prezint aciune
antiinflamatoare, pe culturi de celule i pe model experimental de edem al labei de obolan.
Extractul metanolic din fructe a fost fracionat cu n-hexan i acetat de etil, iar arctigenolul a
fost izolat din fraciunea n acetat de etil, prin cromatografie pe coloan. S-a demonstrat c
arctigenolul (100 mg/kg-corp) a sczut n mod semnificativ edemul indus de carrageenan,
inhibnd exsudatul i recrutnd leucocitele n esuturile inflamate [118124].
Efecte antiinflamatoare la nivelul esutului microglial, prezint i pinorezinolul
izolat din fructele de F. koreana. Activarea microgliei joac un rol important n variate

25
tulburri cerebrale, prin producerea n exces de mediatori ai reacii inflamatorii, cum ar fi
oxidul de azot (NO), prostaglandina E2 (PGE2) i citokinele proinflamatorii. Rezultatele
sugereaz c pinorezinolul scade rspunsul inflamator al microgliei i ar putea fi util n
modularea strilor inflamatorii n tulburrile cerebrale [125, 126].
Aciune antiinflamatoare in vitro a fost evideniat i n cazul a patru alcaloizi
izolai n urma prelucrrii extractului alcoolic din fructele de F. suspensa: suspensina A, (-)-
7-O-metil-egenina, (-)-egenina, (-)-bicuculina [89].
Fraciunea n-butanolic, obinut n urma prelucrrii extractului apos din fructele de
F. koreana, inhib producia de NO i exprimarea genei iNOS la nivelul macrofagelor muri-
nice, cum ar fi celulele RAW 264.7 stimulate cu -interferon (IFN-) i lipopolizaharide
(LPS) [127].

3. 4. Aciunea antihistaminic
Extractul din fructele de F. suspensa amelioreaz hipersensibilitatea indus de
-conglicinina din seminele de soia, la purceii nrcai. Se cunoate c seminele de soia
stimuleaz apariia alergiilor alimentare, i cu toate acestea terapiile curente duc lips n
ceea ce privete atenuarea hipersensibilitii. Optsprezece purcei de 14 zile au fost sensibi-
lizai i stimulai prin administrare p.o. de -conglicinin purificat. Extractul din Forsythiae
suspensae fructus a fost completat n diet, dup sensibilizarea iniial. Au fost analizate
simptomele anafilactice, anafilaxia pasiv cutanat, histamina plasmatic, rspunsurile celu-
lelor T-proliferative, producia de citokine i flora microbian intestinal. Astfel, extractul
din fructele speciei F. suspensa ar putea reprezenta un tratament eficient pentru alergia la
seminele de soia [128]. De altfel, inhibiia degranulrii mastocitare pentru unele extracte
din specii de Forsythia a fost demonstrat in vivo utiliznd i alte modele experimentale
[129132].

3. 5. Aciunea antibacterian
Extractele din flori i din fructe, dar i uleiul volatil din florile speciei F. suspensa
au un spectru antibacterial larg, prin inhibiia creterii Staphylococcus aureus, Shigella
dysenteriae, Streptococcus -hemolitic, S. suis, Pneumococcus sp., Bacillus typhi, Myco-
bacterium tuberculosis etc. [95, 133136]. Glicozidele fenilpropanice, forsithiazida, suspen-
sazida, acteozida, -hidroxi-acteozida din speciile de Forsythia au activitate antibiotic,
mpotriva Staphylococcus aureus [51]. Lianqiaoxinzida A, heterozid fenilpropanic izolat

26
din fructele necoapte ale speciei F. suspensa, are proprieti antibacteriene asupra Staphylo-
coccus aureus, Escherichia coli, Streptococcus -hemolitic, Bacterium vulgare, Pseudo-
monas aeruginosa, Micrococcus pneumoniae, Staphylococcus albus i Bacillus dysenteriae
[67, 104, 108].

3. 6. Aciunea antiviral
Extractul etanolic din F. suspensa inhib dezvoltarea virusului gripal A, n celulele
epiteliale bronice infectate cu HIV [137140]. Pentru un nou compus izolat din seminele
de F. suspensa, respectiv acidul 2-(1,4-dihidroxi-ciclohexanil)-acetic, s-a evideniat, in vitro,
aciune antiviral mpotriva virusului sinciial respirator [141143].

3. 7. Aciunea vasorelaxant
Forsithida (F1) izolat din frunzele de F. viridissima are efecte vasorelaxante asupra
contraciei induse de norepinefrin la nivelul aortei de obolan, cu sau fr endoteliu. Com-
pusul nu a afectat contracia indus prin K+ i phorbol-diacetat, dar a inhibat contracia
indus de norepinefrin, n prezena nicardipinei, probabil datorit scderii afluxul de calciu
din zona extracelular [144, 145]. Suspensazida prezint o aciune hipotensiv marcat, n
model experimental de hipertensiune arterial [51].

3. 8. Alte aciuni
Preparatele extractive i unele principii active izolate din specii de Forsythia mai
prezint:
aciune hipolipemiant i hipocolesterolemiant in vivo, n experiment farmacodi-
namic la oarece, pentru extractul alcoolic din fructe i frunze de F. suspensa [107, 146148];
aciune hepatoprotectoare pentru pinorezinolul din Forsythiae fructus, n model
experimental de hepatit indus cu tetraclorur de carbon [149];
aciune imunosupresoare in vivo, la oarece (F. suspensa), prin inhibiia activrii i
a proliferrii limfocitelor T stimulate cu concanavalin A (ConA) [150];
aciune imunostimulatoare in vitro, prin stimularea fagocitozei la nivelul macro-
fagelor peritoneale i inhibiia sintezei de NO (F. suspensa) [151, 152];
aciune neuroprotectoare, pentru arctigenol i forsithiazida din Forsythiae fructus,
prin inhibiia neuroinflamaiei [153, 154];
aciune antispastic in vitro, prin inhibiia contraciilor spontane ale intestinului
izolat de guinea pig (Forsythiae fructus) [155];

27
 aciune anticoagulant: totalul lignanic din fructele de F. suspensa [156, 157];
aciune antivomitiv, n model farmacodinamic de emez indus cu clorhidrat de
apomorfin la leopard i la broasc (Forsythiae fructus) [158].

3. 9. Cercetri fitobiologice asupra speciei F. viridssima

Testul Triticum a relevat efectul mitoinhibitor al extractului apos 3% din frunze i
flori de Forsythia viridissima. Pentru cercetrile fitobiologice (metoda Constantinescu, bio-
testul Triticum), s-au utilizat cariopse germinate de Triticum vulgare Mill. (Poaceae), soiul
Dropia, cu lungimea radiculei de 1 cm, aduse n cutii Petri. Dou dintre probele de analizat
au fost obinute ca soluii apoase 3%, prin infuzare, celelalte patru fiind diluii seriale 1.5%
i 0.3%. Cariopsele germinate au fost lsate n contact cu probele timp de cinci zile. n
paralel s-a efectuat i o prob martor, utiliznd apa distilat n locul soluiilor de analizat.
Alungirea radicular medie a fost analizat, de asemenea, timp de cinci zile, la intervale de
cte 24 ore. n comparaie cu martorul, efect inhibitor total a fost observat doar pentru
extractul apos 3% din Forsythiae viridissimae flos; celelalte probe au prezentat un efect
inhibitor moderat. Efectul mitoinhibitor al probelor din frunzele i florile de F. viridissima
poate fi explicat prin prezena unor substane active: iridozide, cumarine, triterpenoide,
tanin. Specia F. viridissima poate fi folosit ca materie prim pentru extracia unor acizi
polifenolcarboxilici i flavonozide; frunzele speciei nu au efect citotoxic asupra celulelor
vegetale (n testul Triticum) [11].

3. 10. Utilizri apicole i horticole

F. suspensa este o specie melifer. Florile sunt vizitate de albine, pentru nectar i
pentru polen. Cultivat de obicei n parcuri, grdini, spaii verzi, cimitire, pentru aspectul
morfologic deosebit pe care l are primvara, la nflorire. Prin tundere se modeleaz n tufe
dese, globulare sau umbeliforme. Se nmulete prin butai [5].

28
 PARTEA EXPERIMENTAL

Capitolul 4
Testarea activitii antifungice pentru trei extracte
hidroalcoolice din flori de Forsythia sp.

4. 1. Material i metode
4. 1. 1. Tulpini fungice
Pentru testarea activitii antifungice a trei extracte hidroalcoolice din Forsythia sp.
(F. suspensa, F. viridissima i F. intermedia) s-au utilizat ase tulpini levurice, izolate
recent din specimene clinice, aparinnd genurilor Candida i Saccharomyces. n cadrul
Laboratorului de Microbiologie al Facultii de Biologie, Universitatea din Bucureti, tulpinile
fungice au fost identificate cu sistemul automat Vitek II i cu testul Fungichrom II; de ase-
menea, au testate pentru sensibilitatea la antimicotice curent utilizate n abordarea terapeu-
tic (voriconazol, itraconazol, caspofungin B, fluconazol, flucitozin, amfotericin B), prin
metoda E-test. Tulpinile identificate i sursele de izolare sunt prezentate n Tabelul 2.
Tabelul 2 Tulpinile fungice identificate i proveniena
Nr. de identificare Tulpina fungic Proveniena
(1) Candida albicans 2026 Secreii bronhotraheale
(2) Candida tropicalis 4694 Secreii bronhotraheale
(3) Candida famata 198 Sput
(4) Candida glabrata 1957 Secreii bronhotraheale
(5) Candida krusei Y5 Secreii vaginale
(6) Saccharomyces cerevisiae 200 Sput

4. 1. 2. Extracia principiilor active din florile de Forsythia sp.

Materialul vegetal a fost reprezentat de flori de Forsythia sp. din cultivarul Grdinii
Botanice Universitare Alexandru Buia din Craiova. Speciile utilizate au fost F. suspensa
(F1), F. viridissima (F2) i hibridul F. intermedia (F3). Extractele s-au obinut prin mace-
rare la temperatura camerei cu o soluie de alcool 96%, timp de 10 zile, n conformitate cu
Farmacopeea Romn ediia a X-a. Alcoolaturile au fost filtrate i apoi depozitate n sticle,
la rece i la ntuneric, pn n momentul utilizrii. Pentru testarea activitii antifungice,
maceratele s-au prelucrat prin evaporare la sec urmat de resolubilizarea compuilor din
extracte ntr-o soluie alcoolic 20% [159].

29
 4. 1. 3. Determinarea coninutului n polifenoli totali exprimai n acid cafeic
Reactivi
Reactiv FolinCioclteu: 10 g de wolframat de sodiu, 10 ml de acid fosforic 85%
i 75 ml de ap dublu distilat se refluxeaz dou ore, dup care se rcete i se aduce la
balon cotat de 100 ml;
Carbonat de sodiu soluie 20%.
Mod de lucru
ntr-o fiol se cntrete 1 g de extract vegetal i se aduce cantitativ ntr-un balon
cotat cu ap distilat. 5 ml din aceast soluie se trateaz cu 5 ml reactiv FolinCioclteu, se
agit i se filtreaz. Din filtrat, 1 ml se completeaz la 10 ml cu carbonat de sodiu soluie
20%, ntr-un balon cotat de 10 ml. Se determin absorbana fa de soluia de carbonat de
sodiu ca martor. Coninutul n polifenoli totali se calculeaz cu ajutorul unei curbe etalon,
stabilit astfel: dintr-o soluie de acid cafeic 0.01 g% se realizeaz diluii cuprinse ntre 25
100 g/10 ml; 0.5 ml diluie se trateaz cu 0.5 ml reactiv FolinCioclteu i se completeaz
la semn cu carbonat de sodiu soluie 20%. Se determin absorbana n condiiile de mai sus
fa de martor soluia de carbonat de sodiu, dup exact dou minute de la adugarea carbo-
natului de sodiu.

4. 1. 4. Determinarea calitativ a activitii antifungice

Pentru testarea calitativ a activitii antifungice s-au preparat suspensii microbiene
ajustate la 1.5108 UFC/ml conform standardului McFarland 0.5 din culturi de 1518 ore
dezvoltate pe mediu solid (Sabouraud). Activitatea antifungic s-a determinat prin metoda
difuzimetric adaptat, standardizat pentru controlul activitii antimicrobiene a antibioti-
celor, de CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) [160].

4. 1. 5. Curba dinamicii temporale a efectului fungistatic/fungicid

Curba dinamicii temporale a efectului fungistatic/fungicid s-a realizat prin meninerea
n contact a suspensiilor microbiene cu extractele vegetale, n proporie de 1:1 [159], timp
de contact de 1, 3, 5, 15, 30 minute, determinndu-se numrul de celule viabile prin ns-
mnare pe mediu solid (Sabouraud). S-au utilizat control negativ (alcool 20%), dar i control
pozitiv (suspensie microbian netratat). Avantajul metodei const n instalarea difereniat a
efectului microbicid, aspect care poate fi corelat cu mecanismul activitii antifungice [159].

30
 4. 1. 6. Analiza cantitativ a activitii antifungice pentru stabilirea concentraiei
minime inhibitorii (CMI)
Analiza cantitativ s-a realizat prin metoda microdiluiilor seriale binare n mediu
lichid (bulion glucozat), n plci cu 96 de godeuri, utiliznd control negativ (alcool 20%)
[161]. Diluiile testate aparin intervalului 5000.99 l/ml. CMI s-a stabilit macroscopic, ca
fiind ultima concentraie la care nu s-a observat cretere fungic, cuantificat prin apariia
turbiditii mediului. Densitatea optic a culturilor microbiene s-a msurat la 620 nm, cu
ajutorul spectrofotometrului Apollo LB 911 [159].

4. 1. 7. Influena extractelor vegetale asupra expresiei coordonate a factorilor de

virulen
Testul de filamentare
Suspensiile fungice s-au tratat cu ser bovin timp de dou ore, evideniindu-se fila-
mentarea prin examinare la microscopul optic a preparatelor lam/lamel [162].
Aderena la substrat inert
Influena asupra capacitii de aderen la substrat inert s-a cuantificat dup efectuarea
analizei cantitative a efectului antifungic, prin metoda microtitrrii, evalundu-se biomasa,
dup fixare cu metanol i colorare cu cristal violet. Densitatea optic a materialului biologic
resuspendat s-a determinat spectrofotometric, la 490 nm [162].
Factori de virulen solubili
Factorii de virulen solubili sunt enzime microbiene care pot fi evideniate calitativ
prin nsmnarea microorganismelor de testat pe medii de cultur difereniale. Prin teste
fenotipice s-a pus n eviden prezena hemolizinelor, lipazelor, proteazelor, DNA-zei,
amilazei [162].
Detectarea proteazelor
Proteazele sunt enzime extracelulare cu specificitate sczut, care hidrolizeaz pro-
teinele la peptide i aminoacizi. Pentru evidenierea proteazelor se utilizeaz diferite medii
[162]:
Gelatinaza: mediu de geloz nutritiv cu gelatin n urma precipitrii, apare un
halou n jurul coloniilor, datorit hidrolizei gelatinei;
Cazeinaza: mediu de geloz simpl cu adaos de lapte testul se consider pozitiv
cnd se evideniaz n jurul coloniilor precipitatul alb-glbui de paracazeinat de calciu.

31
 Detectarea amilazelor
Amidonul este un poliglucid cu mas molecular mare, care nu poate fi transportat
prin membran n interiorul celulei bacteriene, fiind necesar secreia de amilaze extracelulare
pentru a fi hidrolizat. Amilazele se detecteaz utiliznd o geloz simpl, la care se adaug
amidon de orez, iar hidroliza se reveleaz prin inundarea plcii cu soluie Lugol (inel galben
n jurul spotului de cultur, n timp ce restul mediului se coloreaz n albastru) [162].
Detectarea lipazelor/esterazelor
n practic se urmrete de obicei prezena tributirin lipazei, utilizndu-se ca mediu
de cultivare geloza cu adaos de tributirin. Pentru detectarea esterazelor, se utilizeaz mediu
gelozat cu adaos de Tween 80, 60 sau 40. Cel mai utilizat n practic este Tween 80 (mono-
oleat de sorbitol). Se nsmneaz mediul n spot, iar prezena Tween-esterazei duce la
apariia cristalelor de oleat de Ca2+ insolubile (cristale formate ntre acizii grai eliberai i
ionii de Ca2+) [162].
Detectarea lecitinazelor
Se pot utiliza medii cu glbenu de ou sau medii cu adaos de lecitin purificat.
Mediile se nsmneaz n striuri sau n spot, iar n jurul culturii sau coloniei se va observa
prezena unui halou i/sau a unei opacifieri. Clarificarea rezult din eliberarea lecitinei mai
solubile din complexul lipidic (prezena lecitinazei). Zona opac apare consecutiv aciunii
altor lipaze, i uneori, poate masca haloul [162].
Detectarea DNA-zelor
DNA-zele acioneaz asupra ADN microbian, elibernd mono- sau dinucleotidele.
Se utilizeaz geloz cu ADN, cu sau fr albastru de toluidin. Geloza este inoculat n
striuri sau n spot, iar hidroliza ADN este revelat prin apariia unui halou roz n jurul spotului
de cultur, n timp ce restul mediului rmne colorat n albastru. Pentru speciile inhibate de
albastrul de toluidin (de exemplu, streptococi) se utilizeaz verde metil.
Detectarea hemolizinelor
Hemolizinele se evideniaz prin nsmnarea microorganismelor de cercetat pe
geloz repartizat n plci Petri cu adaos de 5% snge de oaie sau snge de iepure (eviden-
ierea hemolizinelor Kanagawa). Dup incubare la 370C, timp de 24 de ore, se vizualizeaz
apariia zonelor de hemoliz n jurul coloniilor, sub forma unui halou transparent, clar, carac-
teristic pentru tulpinile -hemolitice (care realizeaz o hemoliz complet, cnd hemoglo-
bina eliberat din hematii sub aciunea -hemolizinelor este degradat total pn la produi

32
finali de metabolism) sau verzui, caracteristic tulpinilor -hemolitice (care realizeaz o
hemoliz parial, cnd hemoglobina este degradat doar parial de ctre bacterii la methe-
moglobin). Zona de hemoliz poate fi accentuat prin pstrarea plcilor la frigider cteva
ore nainte de citirea rezultatelor [162].
Capacitatea de hidroliz a esculinei
n prezena citratului de Fe3+ (FeC6H5O7) din mediu, esculetolul eliberat sub aciunea
unei -galactozidaze genereaz formarea unui precipitat negru de esculetin feric, compus
de Fe fenolic cu structur chimic incert [162].

4. 2. Rezultate i discuii
Concentraiile de polifenoli totali [mg acid cafeic/100 g de material vegetal uscat],
determinate prin metoda FolinCioclteu, au fost de 69.18 (F1), 85.27 (F2) i, respectiv, de
79.13 (F3).
La testarea calitativ, s-a evideniat efectul fungicid/fungistatic timpuriu exercitat
asupra microorganismelor studiate, la 1015 minute de la contactul cu extractele vegetale.
Nu s-au observat diferene semnificative ntre cele trei tipuri de extracte, probabil datorit
concentraiei mari de extract din mediul de cultur. Diferena dintre tulpini ar putea fi
modulat i de etanolul din formulare (Tabelul 3).
Tabelul 3 Testarea calitativ a efectului antifungic pentru cele trei extracte vegetale
(dinamic temporal), comparativ cu tulpinile standard

Extract hidroalcoolic/ F. suspensa F. viridissima F. intermedia

S
Tulpina fungic (F1) (F2) (F3)

Candida albicans 2026

Candida tropicalis 4694

Candida famata 198

33
 Extract hidroalcoolic/ F. suspensa F. viridissima F. intermedia
S
Tulpina fungic (F1) (F2) (F3)

Candida glabrata 1957

Candida krusei Y5

Saccharomyces cerevisiae
200

Cele trei extracte vegetale au manifestat activitate antifungic comparabil, cu con-

centraii minime inhibitorii de 125250 l/ml, probabil datorit compoziiei chimice asem-
ntoare, evideniat prin determinarea cantitativ a totalului polifenolic (Figurile 47).
La trei din cele ase tulpini (C. albicans 2026, C. glabrata 1957 i C. tropicalis
4694), s-a evideniat capacitatea de a forma pseudohife la dou ore de la adugarea serului
bovin, aceasta corelndu-se cu capacitatea de aderen la substrat inert (Figura 8).
Expresia factorilor de virulen solubili a fost influenat de concentraii subinhi-
bitorii ale celor trei extracte vegetale prezente n mediul de cultur, n sensul exprimrii sau
represiei, extractul din flori de F. intermedia (F3) dovedindu-se cel mai activ (Tabelul 4).

Figura 4 Determinarea concentraiei minime inhibitorii (CMI)

a extractului hidroalcoolic din flori de F. suspensa (F1).

34
 Figura 5 Determinarea CMI a extractului hidroalcoolic din
flori de F. viridissima (F2).

Figura 6 Determinarea CMI a extractului hidroalcoolic din

flori de F. intermedia (F3).

Figura 7 CMI pentru cele trei extracte hidroalcoolice din Forsythia sp.

35
 Figura 8 Evidenierea capacitii de a forma pseudohife
a tulpinilor fungice testate.
Tabelul 4 Influena aspra expresiei factorilor de virulen solubili
Factori de F. suspensa F. viridissima F. intermedia Control
Tulpini fungice (cod)
virulen (F1) (F2) (F3) pozitiv
C. albicans 2026 (1) + + + +
C. tropicalis 4694 (2) + + + +
Candida famata 198 (3) + + + +
Hemolizine
C. glabrata 1957 (4) + + + +
C. krusei Y5 (5) + + + +
S. cerevisiae 200 (6) + + + +
1 + + + +
2 + + - +
3 - - - +
Lipaz
4 + + + +
5 + - - -
6 - - - -
1 - - - +
2 - - - -
Factori similari 3 - + - -
sideroforului 4 - - - +
5 + + + -
6 - - - -
1 + + - +
2 - - - -
3 + - - +
Amilaz
4 + + + +
5 - - - -
6 - - - -

36
 Factori de F. suspensa F. viridissima F. intermedia Control
Tulpini fungice (cod)
virulen (F1) (F2) (F3) pozitiv
1 - - - -
2 + + + +
3 - - - +
DNAz
4 + + + -
5 - - - +
6 - - - -
1 - - - +
2 - - - -
3 - - - -
Lecitinaz
4 - - - -
5 - - - +
6 - - - -
1 + + - +
2 - - - -
3 - - - -
Gelatinaz
4 - + - +
5 - - - -
6 - - - -

Influena asupra capacitii de aderen la substrat inert s-a manifestat la concentraii

subinhibitorii, relevnd efectul antibiofilm al celor trei extracte hidroalcoolice, cu un pattern
similar, dup un prag critic de concentraie. Cele mai eficiente s-au dovedit extractele din
flori de F. viridissima (F2) i F. intermedia (F3). Cea mai susceptibil tulpin fungic la
aciunea celor trei extracte vegetale a fost C. famata 198.

37
 Capitolul 5
Determinarea cantitativ a totalului flavonozidic
din florile de la trei specii de Forsythia

5. 1. Material i metode
Principiul metodei
Prin reacie cu clorura de aluminiu, flavonozidele formeaz chelai (compleci) de
culoare galben, a cror concentraie poate fi determinat spectrofotometric, conform F.R. X
[163, 164].
Material vegetal
Materialul vegetal, respectiv florile de la trei specii de Forsythia (F. suspensa, F.
viridissima i F. intermedia) a fost recoltat la nflorire, n luna martie 2014, din Grdina
Botanic Universitar Alexandru Buia din Craiova.
Reactivi
Pentru determinarea cantitativ a flavonozidelor s-au utilizat urmtorii reactivi:
soluie de acetat de sodiu 100 g/l;
soluie de clorur de aluminiu 25 g/l.
Aparatur
Analizele au fost efectuate la un spectrofotometru de tip Krss UVVIS 6000/6500,
care prezint urmtoarele caracteristici tehnice:
domeniul de lucru: 2001000 nm;
limea benzii spectrale: 5 nm;
precizia lungimii de und: mai bun dect 2 nm;
repetabilitatea lungimii de und: mai bun dect 1 nm;
domeniul fotometric: de la 0 la 125% T, de la 0 la 2.5 Abs;
precizia fotometric: 0.5% T;
afiaj electronic, display LCD;
tastatur flexibil, foil keypad;
dou surse de iluminare:
lamp cu filament de W;
lamp cu halogen/deuteriu.

38
 Tehnica de lucru
1 g de produs vegetal se extrage cu metanol, ntr-un aparat de extracie continu
(Soxhlet), pn la epuizarea produsului vegetal (alcoolul este incolor). Soluia extractiv se
filtreaz ntr-un balon cotat de 25 ml i se completeaz la semn. La 10 ml din aceast soluie
se adaug 10 ml soluie de acetat de sodiu 100 g/l, se agit i se filtreaz. Din soluia filtrat
se iau volume de 0.51 ml i se aduc n baloane cotate de 10 ml. Se adaug 2 ml soluie de
clorur de aluminiu 25 g/l. Se completeaz la semn cu metanol, se agit i se las n repaus
45 de minute. n paralel cu probele de analizat, se prepar probele martor corespunztoare,
obinute din 0.51 ml soluie filtrat prin diluare cu metanol pn la 10 ml (la balon cotat).
Se determin extinciile (absorbanele) probelor de analizat fa de martorii
respectivi la un spectrofotometru, la max.=430 nm stabilit n funcie de rutozid, substana
folosit ca etalon (substana de referin) [163].
Stabilirea curbei etalon pentru rutozid
n patru baloane cotate de 10 ml se aduc 1 ml, 2 ml, 3 ml i 4 ml soluie de rutozid
0.01 mg/ml n metanol, peste care se adaug 5 ml soluie de acetat de sodiu 100 g/l, 3 ml
soluie de clorur de aluminiu 25 g/l i se completeaz la semn cu metanol. Se agit fiecare
prob, se las n repaus timp de 45 minute i se stabilete maximul de absorbie. Se citete
absorbanta fiecrei probe, n cuve de 1 cm, fa de martorii preparai n aceleai condiii, dar
nlocuind clorura de aluminiu cu metanol [163].
Pentru respectarea legii LambertBeer, absorbana trebuie s se ncadreze n
intervalul de maxim acuratee 0.150.45. Ecuaia curbei etalon pentru rutozid este:
y = 0.007922x + 0.01801
Cu valorile absorbanelor i ale concentraiilor corespunztoare, se traseaz curba
etalon (Figura 9).
Coninutul n flavonozide, raportat la 100 g de produs vegetal, se determin conform
ecuaiei [163, 164]:
Ep Cet
C% 100
Eet Cp

unde:
C% coninutul de flavonozide, exprimate n rutozid, raportat la 100 g de produs
vegetal [g%];
Ep absorbana probei;

39
 Eet absorbana soluiei de flavon, substan de referin de concentraie Cet din
curba etalon;
Cet concentraia soluiei de rutozid (substan de referin), rezultat din curba
etalon [g/ml];
Cp masa de produs vegetal uscat corespunztoare la 1 ml soluie de prob folosit
la determinarea cantitativ [g/ml].

Figura 9 Curba etalon pentru rutozid, pentru determinarea

cantitativ spectrofotometric a flavonozidelor, conform F.R. X.

5. 2. Rezultate i discuii
n Tabelul 5 se prezint rezultatele determinrii cantitative spectrofotometrice a
totalului flavonozidic din florile recoltate de la cele trei specii de Forsythia, la trei intervale
de timp diferite. Se observ c totalul flavonozidic atinge concentraia maxim la nceputul
nfloririi, dup care scade odat cu apropierea perioadei de fructificare.
Tabelul 5 Determinarea cantitativ a totalului flavonozidic din florile recoltate de la
trei specii de Forsythia
Flavonozide [g%], exprimate n rutozid
Proba Data recoltrii (2014)
5.III. 15.III. 30.III.
Forsythiae suspensae flos 0.45 0.39 0.31
Forsythiae viridissimae flos 0.26 0.19 0.12
Forsythiae intermediae flos 0.37 0.30 0.23

40
 Concluzii

1. Speciile de Forsythia (F. koreana, F. japonica, F. suspnsa, F. viridssima, F. intermedia

etc.) sunt arbuti exotici, originari din Orientul ndeprtat (China, Japonia, Coreea). n
flora Romniei, sunt cultivate n scop ornamental, n parcuri i grdini.
2. Din punct de vedere fitochimic, florile, frunzele i fructele speciilor de Forsythia conin
numeroase principii active: lignani, flavonozide, antocianozide, triterpenoide, proteine,
acizi polifenolcarboxilici, iridozide, cafeoil-glicozide ale coniferolului, ulei volatil, principii
amare, lipide, enzime.
3. n fitoterapia tradiional chinezeasc, F. suspensa este considerat una dintre cele 50 de
specii fundamentale. Fructele de F. suspensa i de F. viridissima intr n compoziia reme-
diului lian qiao, vechi de peste 4000 de ani. De altfel, fructele unor specii de Forsythia
sunt oficinale n Farmacopeile Chinez, Japonez sau Coreean.
4. n medicina tradiional din Orientul ndeprtat speciile de Forsythia sunt utilizate pentru
o gam larg de aciuni farmacologice: antidoturi n diverse intoxicaii, antiinflamatoare,
diuretice, antioxidante, antibacteriene, antivirale, coleretice, antiemetice, antitusive, tonice,
laxative, emenagoge, antihelmintice, febrifuge, antitumorale etc., n gonoree, erizipel,
inflamaii, febr, ulcer, furuncule, helmintiaze, tromboflebite, hemoroizi, tumori, migrene,
scabie etc.
5. F. suspensa face parte din lista remediilor utilizate ca antitumorale, timp de milenii, n
medicina tradiional chinezeasc. Cercetri recente au evideniat efect antitumoral pentru
triterpenoidele cu structur dammaranic izolate din fructele speciilor de Forsythia.
6. Forsitialanul A i B i filirina din extractul metanolic din fructele de F. suspensa prezint
aciune antioxidant, evaluat prin efectul protector mpotriva stresului oxidativ indus de
peroxinitrit la nivelul celulelor epiteliale renale.
7. Arctigenolul izolat din Forsythiae fructus prezint aciune antiinflamatoare, pe culturi de
celule i pe model experimental de edem al labei de obolan. Efecte antiinflamatoare la
nivelul esutului microglial, prezint i pinorezinolul izolat din fructele de F. koreana.
8. Extractul din fructele de F. suspensa amelioreaz hipersensibilitatea indus de -congli-
cinina din seminele de soia, la purceii nrcai.

41
9. Florile speciei F. suspensa au un spectru antibacterial larg, prin inhibiia creterii
Staphylococcus aureus, Shigella dysenteriae, Streptococcus -hemolitic, Pneumococcus
sp., Bacillus typhi, Mycobacterium tuberculosis etc.
10. In vitro, extractul etanolic din F. suspensa inhib dezvoltarea virusului gripal A, n
celulele epiteliale bronice infectate cu HIV, dar i a virusului sinciial respirator.
11. Forsithida din frunzele de F. viridissima are efecte vasorelaxante asupra contraciei
induse de norepinefrin la nivelul aortei de obolan, cu sau fr endoteliu. Suspensazida
prezint o aciune hipotensiv marcat, n model experimental de hipertensiune arterial.
12. Partea experimental a lucrrii cuprinde testarea activitii antifungice pentru trei extracte
hidroalcoolice din flori de Forsythia (F. suspensa, F. viridissima i F. intermedia) i
determinarea cantitativ a totalului flavonozidic din florile celor trei specii de Forsythia.

42
 Bibliografie

1. ***: Flora Romniei, vol. VIII, Ed. Academiei Romne, Bucureti, 1961, 496, 497, 522524.
2. ***: William Forsyth (horticulturist), Wikipedia The Free Encyclopedia, http://en.wikipedia.
org/wiki/William_Forsyth_(horticulturist), 2014.
3. Borza Al.: Dicionar etnobotanic, cuprinznd denumirile populare romneti i n alte limbi ale
plantelor din Romnia, Ed. Academiei Romne, Bucureti, 1968, 70.
4. Ciocrlan V.: Flora ilustrat a Romniei. Pteridophyta et Spermatophyta, ediia a 2-a revizuit
i adugit, Ed. Ceres, Bucureti, 2000, 612.
5. Prvu C.: Universul plantelor, ediia a IV-a revizuit i completat, Ed. ASAB, Bucureti, 2006,
284.
6. Ti I.: Botanic farmaceutic, ediia a III-a, Ed. SITECH, Craiova, 2008, 591593.
7. ***: Forsythia suspensa, Wikipedia The Free Encyclopedia, http://en.wikipedia.org/wiki/
Forsythia_suspensa#mediaviewer/File:Forsythia_suspensa3.jpg, 2014.
8. ***: Forsythia suspensa (weeping Forsythia), Royal Botanic Gardens, Kew, http://www.kew.
org/science-conservation/plants-fungi/forsythia-suspensa-weeping-forsythia, 2014.
9. ***: Forsythia viridissima Klein Klein Greenstem Forsythia, Woody Ornamental Plants,
Division of Plant Sciences, College of Agriculture, Food and Natural Resources, University of
Missouri, http://plantsci.missouri.edu/ps2210/list5/images/forsyth_kline_hafl4.JPG, 2014.
10. ***: Forsythia intermedia Spectabilis, Gardens and Plants, http://www.gardensandplants.com/
images/plants/Forsythia%20intermedia%20Spectabilis.jpg, 2014.
11. Popescu Maria-Lidia, Dinu Mihaela: Contributions to the pharmacognostical and phytobiolo-
gical study on Forsythia viridissima L. (Oleaceae), Farmacia, 2008, 56(3):267274.
12. Cui Y.Y., Feng S.Y., Zhao G., Wang M.Z.: HPLC analysis of the active ingredients of Forsythia
suspensa, Yao Xue Xue Bao (Acta Pharmaceutica Sinica), 1992, 27(8):603608.
13. Nishibe S.: The plant origins of herbal medicines and their quality evaluation, Yakugaku Zasshi
(Journal of the Pharmaceutical Society of Japan), 2002, 122(6):363379.
14. Sedlk ., Boldizsr I., Borsodi L., Fzfai Z., Molnr-Perl I., Preininger ., Gyurjn I.: Identifi-
cation and quantification of lignans, carboxylic acids and sugars in the leaves of Forsythia species
and cultivars, Chromatographia, 2008, 68(1 Suppl):3541.
15. Cui Y., Wang Q., Shi X., Zhang X., Sheng X., Zhang L.: Simultaneous quantification of 14 bio-
active constituents in Forsythia suspensa by liquid chromatography-electrospray ionisation-mass
spectrometry, Phytochemical Analysis: PCA, 2010, 21(3):253260.

43
16. Luan L., Wang G.L., Lin R.C.: Studies on the chemical constituents of extract with water from
Forsythia suspensa, Zhong Yao Cai (Journal of Chinese Medicinal Materials), 2010, 33(2):220221.
17. Zou Q., Deng W., Jiang S., Zhang L., Peng S., Ding L.: Studies on chemical constituents from
fruits of Forsythia suspensa, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China Journal of Chinese Materia
Medica), 2012, 37(1):5760.
18. Zhang Q., Jia C., Xu H., Wang Y., Zhang M., Huo C., Shi Q., Yu S.: Chemical constituents of
plants from the genus Forsythia, Mini-Reviews in Organic Chemistry, 2012, 9(3):303318.
19. Jiao J., Gai Q.Y., Luo M., Wang W., Gu C.B., Zhao C.J., Zu Y.G., Wei F.Y., Fu Y.J.: Compa-
rison of main bioactive compounds in tea infusions with different seasonal Forsythia suspensa leaves
by liquid chromatography-tandem mass spectrometry and evaluation of antioxidant activity, Food
Research International, 2013, 53(2): 857863.
20. Tokar M., Klimek B.: Isolation and identification of biologically active compounds from
Forsythia viridissima flowers, Acta Poloniae Pharmaceutica, 2004, 61(3):191197.
21. Gross G.G., Kreiten W.: Reduction of coenzyme a thioesters of cinnamic acids with an enzyme
preparation from lignifying tissue of Forsythia, FEBS Letters, 1975, 54(2):259262.
22. Tokar M., Klimek B.: The content of lignan glycosides in Forsythia flowers and leaves, Acta
Poloniae Pharmaceutica, 2004, 61(4):273278.
23. Guo H., Liu A.H., Ye M., Yang M., Guo D.A.: Characterization of phenolic compounds in the
fruits of Forsythia suspensa by high-performance liquid chromatography coupled with electrospray
ionization tandem mass spectrometry, Rapid Communications in Mass Spectrometry: RCM, 2007,
21(5):715729.
24. Wang F.N., Ma Z.Q., Liu Y., Guo Y.Z., Gu Z.W.: New phenylethanoid glycosides from the fruits
of Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl, Molecules, 2009, 14(3):13241331.
25. Wang X., Bai Y., Chen Z., Gong H., Zhang W.: Determination of forsythoside A in Fructus
Forsythiae by NIR, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China journal of Chinese Materia Medica), 2009,
34(16):20712075.
26. Ye L.H., Li Y.X., Peng C., Gong X.H., Zheng X.G.: Determination of phillygenin in rat plasma
by high-performance liquid chromatography and its application to pharmacokinetic studies, European
Journal of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, 2013, 38(3):201207.
27. Liu X., Yu S., Huo H., Li F., Sheng N., Zhang L.: HPLC-ESI-MS/MS quantitative method
for simultaneous analysis of five bioactive constituents of Forsythia suspensa in rat bile after oral
administration of Forsythia suspensa extract, Journal of Liquid Chromatography and Related
Technologies, 2013, 36(1):4446.
28. Kitagawa S., Hisada S., Nishibe S.: Phenolic compounds from Forsythia leaves, Phytochemistry,
1984, 23(8):16351636.

44
29. Kim C.Y., Ahn M.J., Kim J.: A preparative isolation and purification of arctigenin and matai-
resinol from Forsythia koreana by centrifugal partition chromatography, Journal of Separation
Science, 2006, 29(5):656659.
30. Umezawa T., Davin L.B., Lewis N.G.: Formation of the lignan, () secoisolariciresinol, by cell
free extracts of Forsythia intermedia, Biochemical and Biophysical Research Communications, 1990,
171(3):10081014.
31. Umezawa T., Davin L.B., Lewis N.G.: Formation of lignans (-)-secoisolariciresinol and (-)-
matairesinol with Forsythia intermedia cell-free extracts, Journal of Biological Chemistry, 1991,
266(16):1021010217.
32. Seya K., Endo K., Hikino H.: Structures of rengyosides A, B and C, three glucosides of Forsythia
suspensa fruits, Phytochemistry, 1989, 28(5):14951498.
33. Rahman M.M.A., Dewick P.M., Jackson D.E., Lucas J.A.: Biosynthesis of lignans in Forsythia
intermedia, Phytochemistry, 1990, 29(6):18411846.
34. Rahman M.M.A., Dewick P.M., Jackson D.E., Lucas J.A.: Production of lignans in Forsythia
intermedia cell cultures, Phytochemistry, 1990, 29(6):18611866.
35. Kim H.J., Ono E., Morimoto K., Yamagaki T., Okazawa A., Kobayashi A., Satake H.: Metabolic
engineering of lignan biosynthesis in Forsythia cell culture, Plant & Cell Physiology, 2009, 50(12):
22002209.
36. Rahman M.M.A., Dewick P.M., Jackson D.E., Lucas J.A.: Lignans of Forsythia intermedia,
Phytochemistry, 1990, 29(6):19711980.
37. Broomhead A.J., Dewick P.M.: Biotransformation of Podophyllum lignans in cell suspension
cultures of Forsythia intermedia, Phytochemistry, 1991, 30(5):15111517.
38. Katayama T., Davin L.B., Lewis N.G.: An extraordinary accumulation of (-)-pinoresinol in cell-
free extracts of Forsythia intermedia: evidence for enantiospecific reduction of (+)-pinoresinol,
Phytochemistry, 1992, 31(11):38753881.
39. Davin L.B., Bedgar D.L., Katayama T., Lewis N.G.: On the stereoselective synthesis of (+)-
pinoresinol in Forsythia suspensa from its achiral precursor, coniferyl alcohol, Phytochemistry,
1992, 31(11):38693874.
40. Cui Y., Zhang L., Kong D., Zhu H., Kong Z.: HPCE fingerprints of Forsythia suspensa from
Hebei province, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China Journal of Chinese Materia Medica), 2010,
35(18):24402443.
41. Ma J.F., Yang G.H., Mao J.Z., Xu F.: Characterization of anatomy, ultrastructure and lignin
microdistribution in Forsythia suspensa, Industrial Crops and Products, 2011, 33(2):358363.
42. Morimoto K., Satake H.: Seasonal alteration in amounts of lignans and their glucosides and
gene expression of the relevant biosynthetic enzymes in the Forsythia suspensa leaf, Biological and
Pharmaceutical Bulletin, 2013, 36(9):15191523.

45
43. Katayama T., Davin L.B., Chu A., Lewis N.G.: Novel benzylic ether reductions in lignan
biogenesis in Forsythia intermedia, Phytochemistry, 1993, 33(3):581591.
44. Chu A., Dinkova A., Davin L.B., Bedgar D.L., Lewis N.G.: Stereospecificity of (+)-pinoresinol
and (+)-lariciresinol reductases from Forsythia intermedia, Journal of Biological Chemistry, 1993,
268(36):2702627033.
45. Ozawa S., Davin L.B., Lewis N.G.: Formation of (-)-arctigenin in Forsythia intermedia,
Phytochemistry, 1993, 32(3):643652.
46. Par P.W., Wang H.B., Davin L.B., Lewis N.G.: (+)-Pinoresinol synthase: a stereoselective
oxidase catalysing 8,8-lignan formation in Forsythia intermedia, Tetrahedron Letters, 1994, 35(27):
47314734.
47. Schmitt J., Petersen M.: Pinoresinol and matairesinol accumulation in a Forsythia intermedia
cell suspension culture, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 2002, 68(1):9198.
48. Schmitt J., Petersen M.: Influence of methyl jasmonate and coniferyl alcohol on pinoresinol and
matairesinol accumulation in a Forsythia intermedia suspension culture, Plant Cell Reports, 2002,
20(9):885890.
49. Li H.B., Chen F.: Preparative isolation and purification of phillyrin from the medicinal plant
Forsythia suspensa by high-speed counter-current chromatography, Journal of Chromatography A,
2005, 1083(12):102105.
50. Liu Y.Q., Tang X.C., Cai D.T.: Studies on callus growth and phillyrin accumulation of Forsythia
suspensa, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China Journal of Chinese Materia Medica), 2003, 28(4):
321323.
51. Deyama T., Kobayashi H., Nishibe S., Tu P.: Isolation, structure elucidation and bio-activities
of phenylethanoid glycosides from Cistanche, Forsythia and Plantago plants, Studies in Natural
Products Chemistry, 2006, 33(13):645674.
52. Ming D.S., Yu D.Q., Yu S.S.: New quinoid glycosides from Forsythia suspensa, Journal of
Natural Products, 1998, 61(3):377379.
53. Li X., Zhang Y., Yuan Z.: Determination of rutin and forsythin in fruit of Forsythia suspensa
(Thunb.) Vahl by capillary electrophoresis-electrochemical detection, Chromatographia, 2002, 5(34):
171174.
54. Wu Z.H., Tan X.M., Luo J.B., He F.: Preparation of forsythiaside from Forsythia suspensa by
high-performance liquid chromatography, Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao (Academic Journal of the
First Medical College of PLA), 2005, 25(11):13981399, 1404.
55. Guo H., Liu A.H., Li L., Guo D.A.: Simultaneous determination of 12 major constituents in
Forsythia suspensa by high performance liquid chromatography DAD method, Journal of Pharma-
ceutical and Biomedical Analysis, 2007, 43(3):10001006.

46
56. Ming D.S., Yu D.Q., Yu S.S.: Two new caffeyol glycosides from Forsythia suspensa, Journal of
Asian Natural Products Research, 1999, 1(4):327335.
57. Yang L.G., Zheng X.K., Zhang Y.L., Zhu B., Feng W.S.: Determination of forsythin, rutin and
quercetin in Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl by HPLC, Chinese Pharmaceutical Journal, 2011,
46(22):17561758.
58. Fu Y.F., Li Q., Bi K.S.: Determination of seven components in Forsythia suspensa by RP-HPLC,
Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2013, 44(8):10431046.
59. Piao X.L., Jang M.H., Cui J., Piao X.: Lignans from the fruits of Forsythia suspensa, Bioorganic
& Medicinal Chemistry Letters, 2008, 18(6):19801984.
60. Ming D.S., Yu D.Q., Yu S.S., Liu J., He C.H.: A new furofuran mono-lactone from Forsythia
suspensa, Journal of Asian Natural Products Research, 1999, 1(3):221226.
61. Kuang H.X., Xia Y.G., Liang J., Yang B.Y., Wang Q.H.: Lianqiaoxinoside B, a novel caffeoyl
phenylethanoid glycoside from Forsythia suspensa, Molecules, 2011, 16(7):567456781.
62. Zhang Q., Wei X., Wang J.: Phillyrin produced by Colletotrichum gloeosporioides, an endophytic
fungus isolated from Forsythia suspensa, Fitoterapia, 2012, 83(8):15001505.
63. Wang Y.Z., Ma Q.G., Zheng X.K., Feng W.S.: A new forsythenside from Forsythia suspensa,
Chinese Chemical Letters, 2008, 19(10):12341236.
64. Qu H., Li B., Li X., Tu G., L J., Sun W.: Qualitative and quantitative analyses of three
bioactive compounds in different parts of Forsythia suspensa by high-performance liquid chroma-
tography-electrospray ionization-mass spectrometry, Microchemical Journal, 2008, 89(2):159164.
65. Xia Y., Yang B., Wang Q., Liang J., Wei Y., Yu H., Zhang Q., Kuang H.: Quantitative analysis
and chromatographic fingerprinting for the quality evaluation of Forsythia suspensa extract by
HPLC coupled with photodiode array detector, Journal of Separation Science, 2009, 32(2324):
41134125.
66. Xia B., Zhu J., Wang Z., Lin L., Gao H.: Quantitative determination of forsythiaside in
Forsythia suspensa, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China Journal of Chinese Materia Medica), 2010,
35(16):21102112.
67. Kuang H.X., Xia Y.G., Yang B.Y., Liang J., Zhang Q.B., Li G.Y.: A new caffeoyl phenyl-
ethanoid glycoside from the unripe fruits of Forsythia suspensa, Chinese Journal of Natural Medi-
cines, 2009, 7(4):278282.
68. Boldizsr I., Fzfai Zs., Tth F., Sedlk ., Borsodi L., Molnr-Perl I.: Mass fragmentation study
of the trimethylsilyl derivatives of arctiin, matairesinoside, arctigenin, phylligenin, matairesinol,
pinoresinol and methylarctigenin: their gas and liquid chromatographic analysis in plant extracts,
Journal of Chromatography A, 2010, 1217(10):16741682.
69. Xia E.Q., Ai X.X., Zang S.Y., Guan T.T., Xu X.R., Li H.B.: Ultrasound-assisted extraction of
phillyrin from Forsythia suspensa, Ultrasonics Sonochemistry, 2011, 18(2):549552.

47
70. Jing H., Li J.S., Yang Y.J.: Studies on separation and purification of phenylethanoid glycosides
from leaves of Forsythia suspensa by macroporous adsorption resin, Zhong Yao Cai (Journal of
Chinese Medicinal Materials), 2010, 33(9):14871490.
71. Rosati C., Cadic A., Duron M., Amiot M.J., Tacchini M., Martens S., Forkmann G.: Flavonoid
metabolism in Forsythia flowers, Plant Science, 1998, 139(2):133140.
72. Rosati C., Cadic A., Duron M., Renou J.P., Simoneau P.: Molecular cloning and expression
analysis of dihydroflavonol 4-reductase gene in flower organs of Forsythia intermedia, Plant
Molecular Biology, 1997, 35(3):303311.
73. Rosati C., Cadic A., Duron M., Ingouff M., Simoneau Ph.: Molecular characterization of the
anthocyanidin synthase gene in Forsythia intermedia reveals organ-specific expression during
flower development, Plant Science, 1999, 149(1):7379.
74. Shamsur Rouf A.S., Ozaki Y., Rashid M.A., Rui J.: Dammarane derivatives from the dried
fruits of Forsythia suspensa, Phytochemistry, 2001, 56(8):815818.
75. Cai Q., Liu Y.Q., Feng X.: Studies on the chemical constituents from the seed of Forsythia
suspensa, Zhong Yao Cai (Journal of Chinese Medicinal Materials), 2009, 32(11):16911693.
76. Sun J.: Screening of traditional Chinese medicine with antitumor effect and the isolation of
effective chemical constituents from Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl (Oleaceae): studying the
mechanism of its apoptotic-induction, Biomedicine & Pharmacotherapy, 2009, 63(5):326.
77. Shin S.J., Park C.E., Baek N.I., Chung I.S., Park C.H.: Betulinic and oleanolic acids isolated
from Forsythia suspensa Vahl inhibit urease activity of Helicobacter pylori, Biotechnology and
Bioprocess Engineering, 2009, 14(2):140145.
78. Xue J., Xie L., Liu B.R., Yu L.X.: Triterpenoids from the fruits of Forsythia suspensa, Chinese
Journal of Natural Medicines, 2010, 8(6):414418.
79. Simpson D.J., Smallwood M., Twigg S., Doucet C.J., Ross J., Bowles D.J.: Purification and
characterisation of an antifreeze protein from Forsythia suspensa (L.), Cryobiology, 2005, 51(2):
230234.
80. Wang Y., Guo Z., Jin Y., Zhang X., Li W., Liang X.: Selective enrichment with click oligo
(ethylene glycol) column and TOF-MS characterization of simple phenylpropanoids in the fruits of
Forsythia suspensa, Journal of Separation Science, 2009, 32(17):29582966.
81. Damtoft S., Franzyk H., Jensen S.R.: Biosynthesis of iridoids in Forsythia spp., Phytochemistry,
1994, 37(1):173178.
82. Jensen S.R., Franzyk H., Wallander E.: Chemotaxonomy of the Oleaceae: iridoids as taxonomic
markers, Phytochemistry, 2002, 60(3):213231.
83. Fu G., Pang H., Wong Y.H.: Naturally occurring phenylethanoid glycosides: potential leads for
new therapeutics, Current Medicinal Chemistry, 2008, 15(25):25922613.

48
84. Zhai Y., Sun S., Song D., Sun Y., Zhang Y., Liu H., Zhang H., Yu A.: Rapid extraction of
essential oil from dried Cinnamomum cassia Presl. and Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl by ionic
liquid microwave extraction, Chinese Journal of Chemistry, 2010, 28(12):25132519.
85. Dang Q., Wei X.Y.: Preparation and evaluation of essential oil of Forsythia suspensa (Thunb.)
Vahl nanoemulsion in vitro, Pharmaceutical Biotechnology, 2011, 18(2):155159.
86. Jiao J., Fu Y.J., Zu Y.G., Luo M., Wang W., Zhang L., Li J.: Enzyme-assisted microwave
hydro-distillation essential oil from Fructus Forsythia, chemical constituents, and its antimicrobial
and antioxidant activities, Food Chemistry, 2012, 134(1):235243.
87. Duan W., Zheng Z., Geng Y., Liu J., Wang X.: Preparative isolation and purification of C 6-C 2
natural alcohol and benzyl ethanol from Frosythia suspensa by high-speed countercurrent chroma-
tography, Acta Chromatographica, 2011, 23(3):499507.
88. Matsuo K., Tokoroyama T., Kubota T.: Bitter constituents of Forsythia viridissima, Phyto-
chemistry, 1972, 11(4):15221523.
89. Dai S.J., Ren Y., Shen L., Zhang D.W.: New alkaloids from Forsythia suspensa and their anti-
inflammatory activities, Planta Medica, 2009, 75(4):375377.
90. Kameoka H., Miyazawa M., Haze K.: 3-Ethyl-7-hydroxyphthalide from Forsythia japonica,
Phytochemistry, 1975, 14(7):16761677.
91. Dumas C.: Lipochemistry of the progamic stage of a self-incompatible species: Neutral lipids
and fatty acids of the secretory stigma during its glandular activity, and of the solid style, the ovary
and the anther in Forsythia intermedia Zab. (Heterostylic species), Planta, 1977, 137(2):177184.
92. Jiao J., Gai Q.Y., Wei F.Y., Luo M., Wang W., Fu Y.J., Zu Y.G.: Biodiesel from Forsythia
suspensa [(Thunb.) Vahl (Oleaceae)] seed oil, Bioresource Technology, 2013, 143:653656.
93. Kang W., Wang J., Zhang L.: Alpha-glucosidase inhibitors from leaves of Forsythia suspensa in
Henan province, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China Journal of Chinese Materia Medica), 2010,
35(9):11561159.
94. Ono E., Kim H.J., Murata J., Morimoto K., Okazawa A., Kobayashi A., Umezawa T., Satake H.:
Molecular and functional characterization of novel furofuranclass lignan glucosyltransferases from
Forsythia, Plant Biotechnology, 2010, 27(4):317324.
95. ***: Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl, Plants for a Future Database, http://www.pfaf.org/user/
Plant.aspx?LatinName=Forsythia+suspensa, 2014.
96. ***: Forsythia suspensa Vahl. (Oleaceae) Lian-Jiao, Lien-Chiao, Dr. Dukes Phytochemical
and Ethnobotanical Databases, http://www.ars-grin.gov/cgi-bin/duke/farmacy2.pl, 2014.
97. ***: Forsythia viridissima (Oleaceae), Dr. Dukes Phytochemical and Ethnobotanical Databases,
http://www.ars-grin.gov/cgi-bin/duke/farmacy2.pl, 2014.
98. Bojor O., Popescu O.: Fitoterapie tradiional i modern, ediia a V-a, revizuit i adugit,
Ed. Fiat Lux, Bucureti, 2009, 281.

49
99. Hawas U.W., Gamal-Eldeen A.M., El-Desouky S.K., Kim Y.K., Huefner A., Saf R.: Induction
of caspase-8 and death receptors by a new dammarane skeleton from the dried fruits of Forsythia
koreana, Zeitschrift fr Naturforschung. C. A Journal of Biosciences, 2013, 68(12):2938.
100. Li Y.X., Jiang X.H., Huang L., Lu J., Zhou J.: Determination of phillyrin in rat plasma by
high-performance liquid chromatography and its application to pharmacokinetic studies, Journal of
Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2006, 41(2):628632.
101. Zhang Z., Peng J.: Quantitative determination of phillyrin in human plasma using HPLC with
fluorescence detection, Chromatographia, 2011, 73(34):415417.
102. Li Y.X., Peng C., Ye L.H., Zhang R.Q., Jiang X.H.: Investigation on the absorption of phillyrin
and forsythiaside in rat digestive tract, European Journal of Drug Metabolism and Pharmaco-
kinetics, 2011, 36(2):7985.
103. Chen C.C., Chen H.Y., Shiao M.S., Lin Y.L., Kuo Y.H., Ou J.C.: Inhibition of low density
lipoprotein oxidation by tetrahydrofurofuran lignans from Forsythia suspensa and Magnolia coco,
Planta Medica, 1999, 65(8):709711.
104. Qu H., Zhang Y., Wang Y., Li B., Sun W.: Antioxidant and antibacterial activity of two
compounds (forsythiaside and forsythin) isolated from Forsythia suspensa, Journal of Pharmacy
and Pharmacology, 2008, 60(2):261266.
105. Chang M.J., Hung T.M., Min B.S., Kim J.C., Woo M.H., Choi J.S., Lee H.K., Bae K.: Lignans
from the fruits of Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl protect high-density lipoprotein during oxidative
stress, Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2008, 72(10):27502755.
106. Piao X.L., Cho E.J., Jang M.H., Cui J.: Cytoprotective effect of lignans from Forsythia
suspensa against peroxynitrite-induced LLC-PK1 cell damage, Phytotherapy Research: PTR, 2009,
23(7):938942.
107. Kang W., Wang J.: In vitro antioxidant properties and in vivo lowering blood lipid of Forsythia
suspensa leaves, Medicinal Chemistry Research, 2010, 19(7):617628.
108. Qu H., Zhang Y., Chai X., Sun W.: Isoforsythiaside, an antioxidant and antibacterial phenyl-
ethanoid glycoside isolated from Forsythia suspensa, Bioorganic Chemistry, 2012, 40(1):8791.
109. Yang X.N., Kang S.C.: In vitro antioxidant activity of the water and ethanol extracts of
Forsythia koreana flowers, Natural Product Research, 2012, 26(4):375379.
110. Lu T., Piao X.L., Zhang Q., Wang D., Piao X.S., Kim S.W.: Protective effects of Forsythia
suspensa extract against oxidative stress induced by diquat in rats, Food and Chemical Toxicology,
2010, 48(2):764770.
111. Zhou W., Di L.Q., Shan J.J., Bi X.L., Chen L.T., Wang L.C., Cai B.C.: In vitro metabolism in
Sprague-Dawley rat liver microsomes of forsythoside A in different compositions of Shuang-Huang-
Lian, Fitoterapia, 2011, 82(8):12221230.

50
112. Chu Y., Wang X., Guo J., Li W., Ma X., Zhu Y.: Pharmacokinetic study of unbound forsy-
thiaside in rat blood and bile by microdialysis coupled with HPLC method, European Journal of
Drug Metabolism and Pharmacokinetics, 2012, 37(3):173177.
113. Zhou W., Qin K.M., Shan J.J., Ju W.Z., Liu S.J., Cai B.C., Di L.Q.: Improvement of intestinal
absorption of forsythoside A in weeping Forsythia extract by various absorption enhancers based
on tight junctions, Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology,
2012, 20(1):4758.
114. Zhou W., Wang H., Zhu X., Shan J., Yin A., Cai B., Di L.: Improvement of intestinal
absorption of forsythoside A and chlorogenic acid by different carboxymethyl chitosan and chito-
oligosaccharide, application to Flos LoniceraeFructus Forsythiae herb couple preparations, PLoS
One, 2013, 8(5):e63348.
115. Lim H., Lee J.G., Lee S.H., Kim Y.S., Kim H.P.: Anti-inflammatory activity of phylligenin,
a lignan from the fruits of Forsythia koreana, and its cellular mechanism of action, Journal of
Ethnopharmacology, 2008, 118(1):113117.
116. Kim J.H., Kim D.H., Baek S.H., Lee H.J., Kim M.R., Kwon H.J., Lee C.H.: Rengyolone
inhibits inducible nitric oxide synthase expression and nitric oxide production by down-regulation
of NF-kappaB and p38 MAP kinase activity in LPS-stimulated RAW 264.7 cells, Biochemical
Pharmacology, 2006, 71(8):11981205.
117. Wang Q., Kuang H., Su Y., Sun Y., Feng J., Guo R., Chan K.: Naturally derived anti-
inflammatory compounds from Chinese medicinal plants, Journal of Ethnopharmacology, 2013,
146(1):939.
118. Kang H.S., Lee J.Y., Kim C.J.: Anti-inflammatory activity of arctigenin from Forsythiae
fructus, Journal of Ethnopharmacology, 2008, 116(2):305312.
119. Ozaki Y., Rui J., Tang Y., Satake M.: Antiinflammatory effect of Forsythia suspensa Vahl and
its active fraction, Biological & Pharmaceutical Bulletin, 1997, 20(8):861864.
120. Ozaki Y., Rui J., Tang Y.T.: Antiinflammatory effect of Forsythia suspensa V(ahl) and its
active principle, Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2000, 23(3):365367.
121. Prieto J.M., Recio M.C., Giner R.M., Mez S., Giner-Larza E.M., Ros JL.: Influence of
traditional Chinese anti-inflammatory medicinal plants on leukocyte and platelet functions, Journal
of Pharmacy and Pharmacology, 2003, 55(9):12751282.
122. Park E., Kum S., Wang C., Park S.Y., Kim B.S., Schuller-Levis G.: Anti-inflammatory activity
of herbal medicines: inhibition of nitric oxide production and tumor necrosis factor-alpha secretion
in an activated macrophage-like cell line, American Journal of Chinese Medicine, 2005, 33(3):415
424.

51
123. Lee S., Shin S., Kim H., Han S., Kim K., Kwon J., Kwak J.H., Lee C.K., Ha N.J., Yim D.,
Kim K.: Anti-inflammatory function of arctiin by inhibiting COX-2 expression via NF-B pathways,
Journal of Inflammation (London), 2011, 8(1):16.
124. Zhong W.T., Wu Y.C., Xie X.X., Zhou X., Wei M.M., Soromou L.W., Ci X.X., Wang D.C.:
Phillyrin attenuates LPS-induced pulmonary inflammation via suppression of MAPK and NF-B
activation in acute lung injury mice, Fitoterapia, 2013, 90:132139.
125. Jung H.W., Mahesh R., Lee J.G., Lee S.H., Kim Y.S., Park Y.K.: Pinoresinol from the fruits
of Forsythia koreana inhibits inflammatory responses in LPS-activated microglia, Neuroscience
Letters, 2010, 480(3):215220.
126. Lee J.Y., Cho B.J., Park T.W., Park B.E., Kim S.J., Sim S.S., Kim C.J.: Dibenzylbutyro-
lactone lignans from Forsythia koreana fruits attenuate lipopolysaccharide-induced inducible nitric
oxide synthetase and cyclooxygenase-2 expressions through activation of nuclear factor-b and
mitogen-activated protein kinase in RAW264.7 cells, Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2010,
33(11):18471853.
127. Kim N.Y., Kang T.H., Song E.K., Pae H.O., Chung H.T., Kim Y.C.: Inhibitory effects of
butanol fraction of the aqueous extract of Forsythia koreana on the nitric oxide production by
murine macrophage-like RAW 264.7 cells, Journal of Ethnopharmacology, 2000, 73(12):323327.
128. Hao Y., Li D., Piao X., Piao X.: Forsythia suspensa extract alleviates hypersensitivity induced
by soybean -conglycinin in weaned piglets, Journal of Ethnopharmacology, 2010, 128(2):412418.
129. Kim M.S., Na H.J., Han S.W., Jin J.S., Song U.Y., Lee E.J., Song B.K., Hong S.H., Kim H.M.:
Forsythia fructus inhibits the mast-cell-mediated allergic inflammatory reactions, Inflammation,
2003, 27(3):129135.
130. Choi I.Y., Moon P.D., Koo H.N., Myung N.Y., Kim S.J., Lee J.H., Han S.H., Moon G., Seo S.Y.,
Sung H.J., Park R.K., Jeong H.J., Um J.Y., Kim H.M., Hong S.H.: Observations of Forsythia
koreana methanol extract on mast cell-mediated allergic reactions in experimental models, In Vitro
Cellular & Developmental Biology Animal, 2007, 43(7):215221.
131. Lee J.Y., Kim C.J.: Arctigenin, a phenylpropanoid dibenzylbutyrolactone lignan, inhibits type
IIV allergic inflammation and pro-inflammatory enzymes, Archives of Pharmacal Research, 2010,
33(6):947957.
132. Lee J.H., Lee J.Y., Kim T.D., Kim C.J.: Antiasthmatic action of dibenzylbutyrolactone lignans
from fruits of Forsythia viridissima on asthmatic responses to ovalbumin challenge in conscious
guinea-pigs, Phytotherapy Research: PTR, 2011, 25(3):387395.
133. Kuang H.X., Zhang N., Lu Z.B.: Antibacterial constituents of the unripe fruit of Forsythia
suspensa (Thunb.) Vahl, Zhong Yao Tong Bao (Bulletin of Chinese Materia Medica), 1988, 13(7):
3234, 6263.

52
134. Li Z.X., Wang X.H., Zhao J.H., Yang J.F., Wang X.: Investigation on antibacterial activity of
Forsythia suspensa Vahl in vitro with MuellerHinton agar, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China
Journal of Chinese Materia Medica), 2000, 25(12):742745.
135. Li Y., Li M., Cui L., Sheng Z., Cui Y., Bian D., Wang M., Yan Q.: The effects of ethanol
extracts from Forsythia suspensa against antibiotic-resistant Streptococcus suis isolates in vivo and
in vitro, 5th International Conference on Bioinformatics and Biomedical Engineering, iCBBE 2011,
ID 5780433.
136. Gu R.Y., Zhu A.H., Zhang L.: Study on synergistic antimicrobial effect of Origanum vulgare
L. and Forsythia suspensa essential oils, 2011 International Conference on Chemical Engineering
and Advanced Materials, CEAM 2011, Advanced Materials Research, 2011, 236238:23322335.
137. Ko C.H., Wei B.L., Chiou W.F.: Dual regulatory effect of plant extracts of Forsythia suspensa
on RANTES and MCP-1 secretion in influenza A virus-infected human bronchial epithelial cells,
Journal of Ethnopharmacology, 2005, 102(3):418423.
138. Ko H.C., Wei B.L., Chiou W.F.: The effect of medicinal plants used in Chinese folk medicine
on RANTES secretion by virus-infected human epithelial cells, Journal of Ethnopharmacology,
2006, 107(2):205210.
139. Wen S., Huifu X., Hao H.: Effects of the extract of Forsythia suspensa on influenza A H1N1
infection in vitro, Journal of Medicinal Plants Research, 2010, 4(14):14551458.
140. Li H., Wu J., Zhang Z., Ma Y., Liao F., Zhang Y., Wu G.: Forsythoside a inhibits the avian
infectious bronchitis virus in cell culture, Phytotherapy Research: PTR, 2011, 25(3):338342.
141. Zhang G.G., Song S.J., Ren J., Xu S.X.: A new compound from Forsythia suspensa (Thunb.)
Vahl with antiviral effect on RSV, Journal of Herbal Pharmacotherapy, 2002, 2(3):3540.
142. Chen Y., Li X., Zhou J.Y., Yang Q.W., Li H.: Effect of an active component from Forsythia
suspensa (Thunb.) Vahl against respiratory syncytial virus in vitro, Wei Sheng Yan Jiu (Journal of
Hygiene Research), 2009, 38(6):733735.
143. Li T., Peng T.: Traditional Chinese herbal medicine as a source of molecules with antiviral
activity, Antiviral Research, 2013, 97(1):19.
144. Iizuka T., Sakai H., Moriyama H., Suto N., Nagai M., Bagchi D.: Vasorelaxant effects of
forsythide isolated from the leaves of Forsythia viridissima on NE-induced aortal contraction,
Phytomedicine, 2009, 16(4):386390.
145. Iizuka T., Nagai M.: Vasorelaxant effects of forsythiaside from the fruits of Forsythia suspensa,
Yakugaku Zasshi (Journal of the Pharmaceutical Society of Japan), 2005, 125(2):219224.
146. Cho S.H., Rhee S.J., Choi S.W., Choi Y.: Effects of Forsythia fruit extracts and lignan on
lipid metabolism, BioFactors (Oxford, England), 2004, 22(14):161163.

53
147. Zhao Y., Li F., Yang J., An X., Zhou M.: Effect of phillyrin on the anti-obesity in nutritive
obesity mice, Zhong Yao Cai (Journal of Chinese Medicinal Materials), 2005, 28(2):123124.
148. Do M.T., Kim H.G., Choi J.H., Khanal T., Park B.H., Tran T.P., Hwang Y.P., Na M., Jeong H.G.:
Phillyrin attenuates high glucose-induced lipid accumulation in human HepG2 hepatocytes through
the activation of LKB1/AMP-activated protein kinase-dependent signalling, Food Chemistry, 2013,
136(2):415425.
149. Kim H.Y., Kim J.K., Choi J.H., Jung J.Y., Oh W.Y., Kim D.C., Lee H.S., Kim Y.S., Kang S.S.,
Lee S.H., Lee S.M.: Hepatoprotective effect of pinoresinol on carbon tetrachloride-induced hepatic
damage in mice, Journal of Pharmacological Sciences, 2010, 112(1):105112.
150. Yin L.L., Zeng Y.Y., Huang X.Y., Hou H.N.: Effects of Forsythia suspensa extract on cell
proliferation and activation of the mouse T lymphocytes in vitro, Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za
Zhi (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology), 2008, 24(1):1012.
151. Yin L.L., Zeng Y.Y., Hou H.N.: Effect of Forsythia suspensa extract on phagocytosis of
peritoneal macrophages and NO production in vitro, Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi
(Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology), 2008, 24(6):557559.
152. Fu Y.J., Yuan J.L., Chen J., Xie Y.: The effects and mechanisms of Forsythia suspensa on the
expression of Foxp3 on splenocytes and level of Treg in peripheral blood in severely burnt rats, Xi
Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology),
2009, 25(10):935937.
153. Park J.H., Hong Y.J., Moon E., Kim S.A., Kim S.Y.: Forsythiae fructus and its active com-
ponent, arctigenin, provide neuroprotection by inhibiting neuroinflammation, Biomolecules and
Therapeutics, 2011, 19(4):425430.
154. Wang H.M., Wang L.W., Liu X.M., Li C.L., Xu S.P., Farooq A.D.: Neuroprotective effects of
forsythiaside on learning and memory deficits in senescence-accelerated mouse prone (SAMP8)
mice, Pharmacology, Biochemistry, and Behavior, 2013, 105:134141.
155. Lin Y., Ma H., Lu Y., Nie K.: Effects of Forsythiae Fructus on guinea pig ileum contractility
in vitro, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China Journal of Chinese Materia Medica), 2012, 37(10):
14831486.
156. Iwakami S., Wu J.B., Ebizuka Y., Sankawa U.: Platelet activating factor (PAF) antagonists
contained in medicinal plants: lignans and sesquiterpenes, Chemical & Pharmaceutical Bulletin
(Tokyo), 1992, 40(5):11961198.
157. Lin Y., Ma H., Lu Y., Nie K.: Effects of Forsythiae Fructus on guinea pig ileum contractility
in vitro, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi (China Journal of Chinese Materia Medica), 2012,
37(10):14831486.

54
158. Kinoshita K., Kawai T., Imaizumi T., Akita Y., Koyama K., Takahashi K.: Anti-emetic
principles of Inula linariaefolia flowers and Forsythia suspensa fruits, Phytomedicine: International
Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology, 1996, 3(1):5158.
159. Saviuc C., Grumezescu A.M., Oprea E., Radulescu V., Dascalu L., Chifiriuc M.C., Bucur M.,
Banu O., Lazar V.: Antifungal activity of some vegetal extracts on Candida biofilms developed on
inert substratum, Biointerface Research in Applied Chemistry, 2011, 1(1):1523.
160. Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI): Development of in vitro susceptibility testing
criteria and quality control parameters. Approved Guideline, 3rd edition, CLSI document M23A3,
Clinical and Laboratory Standards Institute, Waine, PA, USA, 2008.
161. Lazr V., Balotescu M.C., Moldovan L., Vasilescu G., Petrache L.M., Bulai D., Cernat R.:
Comparative evaluation of qualitative and quantitative methods used in the study of antibacterial
and antifungal activity of hydroalcoholic vegetal extracts, Romanian Biotechnological Letters,
2005, 10(3):22252232.
162. Lazr Veronica: Aderena microbian, Ed. Academiei Romne, Bucureti, 2003.
163. Grd Cerasela Elena, Duu Ligia Elena, Popescu Maria Lidia, Pavel Mariana, Iordache Alina
Titina, Tudor Ioana: Bazele teoretice i practice ale analizei farmacognostice, vol. I, Ed. Curtea
Veche, Bucureti, 2008, 141, 137139.
164. Grd Cerasela Elena, Duu Ligia Elena, Popescu Maria Lidia, Pavel Mariana, Iordache Alina
Titina, Tudor Ioana: Bazele teoretice i practice ale analizei farmacognostice, vol. II, Ed. Curtea
Veche, Bucureti, 2009, 238259.

55