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ISSN: 0012-7353
dyna@unalmed.edu.co
Universidad Nacional de Colombia
Colombia
Recibido para revisar 14 de Mayo de 2005, aceptado 1 de Noviembre de 2005, versin final 16 de Marzo de 2006
PALABRAS CLAVE: cido ctrico, Suero de leche, Aspergillus niger, Hidrlisis, Carboximetil celulosa,
Gelatina, Metanol.
ABSTRACS: In order to take advantage of byproduct of white cheese production, the whey was
evaluated as a substrate for the production of citric acid utilizing Aspergillus niger NRRL 2270. For this
substrate the acid and enzymatic hydrolysis of the lactose are compared in order to provide the
microorganism with an easily assimilated source of carbon. In the entire whey (EW) and unprotein
hydrolyzed whey (UHW) was studied the effect of the pH, and the addition of nitrogen and phosphorus;
besides, in the hydrolyzed whey (HW) the complementation with sucrose afterwards it was studied the
addition of nitrogen and phosphorus in the (EW) and (UHW) the production of citric acid was evaluated
by adding magnesium, carboxymethyl cellulose (CMC), gelatin and methanol to the whey. The
fermentation process was carried out in a submerged, agitated batch cultivation. After determining the
better nutritional conditions a were monitoring in the time of the process.
KEY WORDS: Citric acid, Whey, Aspergillus niger, Hydrolysis, Carboxymethylcellulose, Gelatin,
Methanol.
Dyna, Ao 73, Nro. 150, pp. 39-57. Medelln, Noviembre de 2006. ISSN 0012-7353
40 Lpez et al
2003, Papagianni, 2004). El Aspergillus niger es hierro, magnesio, manganeso, potasio y zinc.
utilizado para la obtencin de enzimas a nivel Para cada suero de leche utilizado, se realiz el
industrial, como la -Amilasa, amiloglucosidasa, anlisis del contenido de lactosa, con el fin de
catalasa, celulasa, -Galactosidasa, - verificar en cada corrida experimental la
Galactosidasa, -Gluconasa, glucoamilasa, concentracin de sta. Para desproteinizar el
glucosa aerodeshidrogenasa, glucosa oxidasa, - suero de leche se llev a cabo el procedimiento
Glucosidasa, -D-Glucosidasa, -Glucosidasa, propuesto por Gallego y Cuenca, 1988, para la
hemicelulasa, hesperidinasa, invertasa, lipasa, precipitacin trmica de las protenas.
pectinasa, pitasa, proteasa y tanasa (Papagianni,
2004). 2.2 Pretratamiento del suero
concentrado, ya que la actividad enzimtica se ve and Legisa, 2002. Netik et al., 1997). En este
favorecida con la presencia de PO4-3. Para trabajo el microorganismo que se utiliz fue el
determinar las mejores condiciones de la Aspergillus niger NRRL 2270 suministrado por
hidrlisis enzimtica se trabaj con un diseo Microbial Genomics and Bioprocessing National
central compuesto realizado en dos bloques, el Center for Agricultural Utilization Research,
cual se presenta en la Tabla 2. Para el anlisis de Agricultural Research Service, USDA. Este
los resultados se utiliz el programa Statgraphics microorganismo (A. niger NRRL 2270) se
Plus encuentra en otras colecciones como: ATCC
11414; ATCC 26550; CECT 2806; IMI 075353;
Tabla 1. Diseo central compuesto para la hidrlisis Martin A-1-233; Perlman Wisconsin 72-4; strain
cida del suero de leche. A60; VTT D-77050; VTT D-77053; Wold NRC
Table 1. Central composed design for acid hydrolysis A-1-233. Esta cepa es de fcil manejo, tiene
of the milk whey. habilidad para fermentar una amplia variedad de
fuentes de carbono econmicas y presenta altos
Concentracin HCl Tiempo rendimientos (Grewal and Kalra, 1995).
Bloque
(g/kg lactosa) (min)
1 1,0 50 Para la activacin de la cepa se seleccion un
1 1,0 70 caldo de papa y dextrosa (PD). Se sembr una
1 1,5 60 cantidad de microorganismo liofilizado en 50 ml
1 2,0 70 de PD contenidos en un erlenmeyer de 150 ml. El
1 2,0 50 medio sembrado se incub por 5 das a una
2 0,8 60 temperatura de 30 C en un shaker orbital a 150
2 1,5 46 rpm. Despus de activada la cepa, se sembr
2 1,5 60 nuevamente el microorganismo en medio slido
2 1,5 74 (PDA) en caja de petri, manteniendo la
2 2,2 60 temperatura en 30 C y un tiempo de 5 das hasta
2 3.5 60 que germinaran las esporas. Al cabo del tiempo
de incubacin y habiendo esporulado el
Tabla 2. Diseo central compuesto para la hidrlisis microorganismo, se guard para su conservacin
enzimtica del suero de leche. en el refrigerador a 4 C. De las cajas de petri
Table 2. Central composite design for enzimatic refrigeradas se prepararon suspensiones de
hydrolysis of the milk whey. esporas con una concentracin aproximada de 2 x
107 esporas/ml. con el fin de favorecer la
Cantidad de enzima formacin de pellets (Berovic, 1999, Papagianni,
Bloque Tiempo (h)
(NLU/l) 2004).
1 1500 3,75
1 1000 2,50 2.4 Fermentacin
1 1000 5,00
1 2000 5,00 La fermentacin se dividi en cuatro procesos
1 2000 2,50 secuenciales: ensayos previos, para encontrar el
2 2207 3,75 mejor pH y el tipo de tratamiento que se realizara
2 1500 5,52 al sustrato; estudio de las mejores condiciones
2 1500 1,98 nutricionales; adicionando al medio nitrgeno
2 793 3,75 como (NH4)2SO4 y fsforo como KH2PO4; el
2 1500 3,75 seguimiento de las variables en el tiempo y el
estudio del efecto del magnesio, el metanol y las
2.3 Microorganismo sustancias viscosas. Para los ensayos previos, el
estudio de las condiciones nutricionales y el
Se seleccionaron varias cepas de A. niger (GCB- efecto de magnesio, metanol y las sustancias
47, GCMC-7 y NRRL 2270) con base en sus viscosas, se realizaron mediciones de biomasa,
rendimientos (Haq et al., 2002a, 2003. Jernejc cido ctrico y azcares reductores totales (TRS)
Dyna 150, 2006 43
Tabla 5. Diseo factorial del segundo bloque para SE 2.4.4 Efecto del magnesio, metanol y sustancias
Table 5. Factorial design of the second block for EW viscosas.
Usando las mejores condiciones nutricionales
NH4+ (ppm) PO4-3 (ppm) obtenidas previamente para el SE, se estim el
300 480 efecto del magnesio en 2 niveles (1000 ppm y
300 380 500 ppm) realizando las pruebas por duplicado;
300 280 adems, se evalu por triplicado el efecto del
150 480 metanol con una concentracin del 1% (v/v)
150 380 como aditivo para el SE con las mejores
150 380 condiciones nutricionales obtenidas y un ensayo
150 380 con metanol al 2% (v/v) (Grewal and Kalra,
150 380 1995). Posterior a este anlisis, se evalu por
150 380 duplicado la adicin de metanol a
150 380 concentraciones del 0,75 y 0,5% v/v, de CMC
150 380 entre 1,5 y 3,5 g/l y gelatina entre 2 y 6 g/l
150 280 (Rugsaseel et al., 1995).
0 480
0 380 3. MTODOS DE ANLISIS
0 280
El conteo de esporas por mililitro de solucin se
2.4.3. Estudio cintico. llev a cabo en la cmara de Neubauer. Se
Con las mejores condiciones obtenidas para SE y determin el contenido de lactosa por el mtodo
SDH, en el segundo bloque experimental para los de Teles (Teles et al., 1978). Para evaluar el
factores concentracin de NH4+ y concentracin porcentaje de hidrlisis se determin la glucosa
de PO4-3, se llev a cabo el seguimiento en el por el mtodo enzimtico GOD/POD (Werner et
tiempo de las variables cido ctrico, biomasa y al., 1970). Los azcares reductores se evaluaron
TRS. por el mtodo DNS (Miller, 1959). El cido
Tabla 6. Diseo factorial del segundo bloque para ctrico se estim por el mtodo
SDH espectrofotomtrico de la piridina anhdrido
Table 6. Factorial design of the second block for actico reportado por Marrier and Boulet, 1958.
UHW Los minerales se evaluaron por absorcin atmica
en un equipo Perkin Elmer A-Analyst 100,
NH4+ (ppm) PO4-3 (ppm) excepto el potasio el cual se determin por U.V.
300 775 visible en un espectfotometro Genesys 2 y el
300 475 azufre se analiz por el mtodo gravimtrico
300 175 (sulfato de bario).
150 775
150 475 4. RESULTADOS Y ANLISIS DE
150 475 RESULTADOS
150 475
150 475 4.1 Caracterizacin del suero
150 475
150 475 En la Tabla 7, se presentan los valores de los
150 475 parmetros evaluados en el Laboratorio de
150 175 Bromatologa de la Universidad Nacional de
0 775 Colombia, Sede Medelln.
0 475
0 175
Dyna 150, 2006 45
Tabla 7. Anlisis de suero de leche. compuestos tales como el FeS y FeSO4, los cuales
Table 7. Milk whey analysis precipitan durante el curso de la fermentacin,
Elemento Concentracin incrementndose la productividad de cido
ctrico; adems, reduce el crecimiento e induce
Azufre (%) 0,230 una prdida de la morfologa del micelio tipo
Cobre (ppm) 0,010 pellets (Grewal and Kalra, 1995, Haq, et. al.,
Fsforo (ppm) 71,000 2002a, Papagianni, 2004). Tambin se ha
Hierro (ppm) 1,000 reportado que la adicin de Mg+2 y Cu+2, en
Magnesio (ppm) 97,000 pequeas cantidades, aumenta significativamente
la produccin de cido ctrico (Jemejc and
Manganeso (ppm) 0,001 Legisa, 2002).
Nitrgeno (%) 0,123
Potasio (%) 0,170 4.2 Hidrlisis cida
Zinc (ppm) 0,200
Del anlisis estadstico se tiene que ninguno de
Para la fermentacin ctrica utilizando Aspergillus los puntos presenta un valor de residual que
niger es de gran importancia el control de los justifique su eliminacin. Como era de esperarse
metales; los cationes divalentes deben estar en los efectos significativos en el proceso son la
concentraciones muy bajas, sin llegar al punto de concentracin de cido y el tiempo con un nivel
su ausencia. Con los valores obtenidos para los de confianza del 95% (Pvalue de 0,0028 y 0,0289
metales se descarta un tratamiento de remocin respectivamente). No resultaron significativos el
de los mismos, previo a la fermentacin. El efecto cuadrtico del tiempo y el efecto de la
Aspergillus niger consume el cido ctrico en interaccin entre la concentracin de cido y el
medios con presencia del in Mn+2 (5 x10-5 M), tiempo. La ecuacin que correlaciona las
mientras que en medios con ausencia de ste la variables en la regin estudiada y permite estimar
secrecin aumenta significativamente (Netik et una superficie de respuesta y el ptimo es:
al., 1997). Los niveles bajos de Mn+2 reprimen las
enzimas del ciclo de Krebs a excepcin de la Y = - 86,9511 + 69,069 X1 + 0,956672 X2
citratosintetasa; se ha reportado que niveles de 1 11,401 X12
ppm de Mn+2 reduce el rendimiento del cido
ctrico en un 10 % (Grewal and Kalra, 1995). Y = Grado de hidrlisis, %.
Adems, el Mn+2 tiene efectos sobre la
morfologa del microorganismo favoreciendo la X1 = Concentracin de cido, g HCl/kg.
formacin de pequeos pellets esponjosos y lactosa.
redondeados, que son los deseados para una
mxima productividad de cido ctrico (Al et al., X2 = Tiempo, minutos.
2002b). Altos niveles de zinc en cultivos de
hongos mantienen el microorganismo en fase de R2 = 82,8967 %
crecimiento y el cido ctrico no se acumula
(Hossain and Ahmed, 1992, Grewal and Kalra, Las condiciones ptimas para la hidrlisis cida
1995). Papagianni (2004) cita para la produccin del suero de leche con una conversin de 88,59
de cido ctrico con A. niger, como valores %, son: 3,02899 g de cido/kg. de lactosa y un
ptimos 0,3 ppm de Zn+2 y 1,3 ppm de Fe+2; tiempo de 74,1421 minutos. Sin embargo, una
Yigitoglu (1992) menciona que niveles de Fe+2 mayor cantidad de cido podra llegar a degradar
superiores a 1 ppm son necesarios para la sustancias que mejoran la produccin de cido
produccin de cido ctrico, pero otros autores ctrico en la etapa fermentativa, como es el caso
afirman que las concentraciones de hierro deben de la riboflavina y la tiamina (Yigitoglu, 1992).
ser muy bajas, alrededor de 0,2 ppm. Sin
embargo, se ha reportado que la adicin de 2 x
10-5 M de CuSO4 a melazas de caa, reduce la
concentracin de Fe+2, debido a la formacin de
46 Lpez et al
otros tratamientos donde se vea claramente una Tabla 8.b. Resultados de los ensayos previos para
morfologa de pellets. Con los resultados cido ctrico
obtenidos en los diferentes montajes, se prob Table 8.b. Results of previous tests for
que el pH inicial de 4 en comparacin con los citric acid
dems pHs evaluados, favorece la produccin de
cido ctrico para el suero de leche hidrolizado Ctrico g/l
pH Sustrato
complementado con nitrgeno, valor un poco Promedio Desviacin
mayor al reportado por El-Samragy et al., 1996 y 2 SH +N 2,16 0,03
Betancourt, 2003 de 3,5 y 3,0, respectivamente. 4 SH +N 5,88 0,37
6 SH +N 1,41 1,22
El pH inicial requerido depende de la fuente de 4 SE 9,57 2,11
carbono usada. En el medio con pH 6 no se 4 SE +N 4,73 2,62
produjeron cantidades apreciables de cido ctrico 4 SDH 7,02 3,98
porque la ruta metablica se desva a cido 4 SDH +N 8,31 0,47
oxlico en medios con pH altos, para algunas 4 SH +N +B 7,08 1,90
fuentes de carbono (Grewal and Kalra, 1995, 4 SH +N +M 8,41 0,53
Scragg, 1996). La adicin de nitrgeno en el
SDH, increment la produccin de cido ctrico, Tabla 8.c. Resultados de los ensayos previos para
la biomasa y el consumo de azcares reductores. biomasa
Esto debido a que este tipo de sustrato contiene Table 8.c. Results of previous tests for biomass
una baja cantidad de fuente de nitrgeno, ya que
gran parte de las protenas fueron retiradas en la Biomasa g/l
desproteinizacin. pH Sustrato
Promedio Desviacin
2 SH +N 45,98 1,96
Tabla 8.a. Resultados de los ensayos previos para
TRS
4 SH +N 36,68 0,44
Table 8.a. Results of previous tests for 6 SH +N 20,33 6,19
TRS 4 SE 29,05 0,30
4 SE +N 25,16 4,66
TRS g/l 4 SDH 20,36 0,46
pH Sustrato
Promedio Desviacin 4 SDH +N 27,59 0,05
2 SH +N 38,95 0,79 4 SH +N +B 72,84 3,66
4 SH +N 13,41 0,11 4 SH +N +M 63,82 5,37
6 SH +N 3,21 1,36
Los medios suplementados con azcar, tanto
4 SE 14,94 0,91
morena como blanca, presentaron un alto
4 SE +N 15,18 2,84 crecimiento de biomasa debido a las condiciones
4 SDH 17,59 6,70 favorables del medio en cuanto a la fuente de
4 SDH +N 11,08 0,45 carbono y nitrgeno fcilmente asimilable por el
4 SH +N +B 43,04 2,04 microorganismo y en concentraciones altas.
4 SH +N +M 49,77 0,25 Aunque las cantidades de cido ctrico producidas
en este par de medios (8,405 y 7,08 g/l para
SE: suero de leche entero. azcar morena y blanca, en promedio,
SH: suero de leche hidrolizado. respectivamente) son comparables con las ms
SDH: suero de leche desproteinizado altas (9,565 y 8,31 g/l para suero de leche entero
hidrolizado. y suero de leche desproteinizado e hidrolizado
+N: complemento de nitrgeno. mas nitrgeno, en promedio, respectivamente) no
+B: complemento de azcar blanca. se consideraron para la siguiente etapa de
+M: complemento de azcar morena. fermentacin porque la adicin de azcares trae
consigo la adicin de metales que inhiben la
produccin de cido ctrico y la complementacin
48 Lpez et al
traera un costo adicional para el proceso y se variar algunas condiciones del proceso que
podra esperar que el consumo de azcares sea cambian las propiedades del medio. Sin embargo,
preferencial a la sacarosa, con lo que se dejara la del anlisis de varianza de este primer bloque se
lactosa del suero de leche sin utilizar como evaluaron las mejores condiciones en las cuales
sustrato para seguir siendo una carga se bas el segundo bloque experimental. De este
contaminante al final del proceso. De estos primer bloque se puede decir que concentraciones
ensayos previos, se estudi las mejores intermedias (349 ppm) de PO4-3 favorecen la
condiciones nutricionales para el SE y para el produccin de cido ctrico. Se nota un efecto no
SDH; fueron estos dos los que mayores tan marcado de la concentracin de NH4+, pero
cantidades de cido ctrico produjeron (9,565 y bajos niveles de este in mejoran la produccin.
8,31 g/l en promedio, respectivamente) Adems, se nota una variabilidad baja del proceso
dado que las 4 repeticiones del punto central
4.4.2. Condiciones nutricionales muestran poca desviacin (0,3673). De los
Suero de leche entero Los resultados del primer resultados obtenidos en el primer bloque se
bloque de estudio de las mejores condiciones propuso una nueva regin con niveles bajos de
nutricionales en el SE se presentan en la Figura 3. NH4+ (0 a 300 ppm) y valores intermedios de
La ecuacin que correlaciona las variables en la PO4-3 (280 a 480 ppm).
regin estudiada y permite estimar la superficie
de respuesta y el ptimo es: Los resultados del segundo bloque de estudio de
las mejores condiciones nutricionales en el SE se
Y = 1.84394 - 0.00292477* X1 + 0.0081757* X2 presentan en la Figura 4. La ecuacin que
+ 0.00000204156* X1 - 0.000011713* X2 2 correlaciona las variables en la regin estudiada y
permite estimar la superficie de respuesta y el
Y = Concentracin de cido ctrico. g/l ptimo es:
X1 = Concentracin de amonio, NH4+ ppm.
X2 = Concentracin de in fosfato, PO4-3, ppm Ln Y = -2.32935 + 0.0094737*X1 + 0.017464*X2
- 0.0000249308*X1*X2 - 0.0000161817*X22
anlisis de varianza arroj como resultados que regin en estudio, utilizar un diseo que cubra la
en esta regin evaluada no existe un factor regin no evaluada de este primer bloque
significativo en un nivel de significancia del 0,05. teniendo solo en cuenta que la concentracin de
NH4+ debe ser baja. La ecuacin que correlaciona
Se puede apreciar un comportamiento similar en las variables en la regin estudiada y permite
los dos bloques estudiados para el SE. Para estimar la superficie de respuesta es:
concentraciones altas de NH4+ en el segundo
bloque, se ve un mximo en la concentracin de
Ln Y = 1.7733 -0.00228059*X1 -
cido ctrico para valores intermedios de PO4-3.
0.0000747775*X2 + 0.00000214842*X12
Sin embargo, en concentraciones bajas de NH4+
se observ un aumento en la produccin de cido
Y = Concentracin de cido ctrico. g/l
ctrico con la variacin de PO4-3, sin que se
X1 = Concentracin de amonio, NH4+ ppm.
presente una tendencia que sugiera un mximo
X2 = Concentracin de in fosfato, PO4-3, ppm
cercano a la regin evaluada. En la bsqueda de
las mejores condiciones nutricionales el
microorganismo no present formacin de pellets
definida y si una morfologa que tiende a ser
filamentosa.
De los resultados mostrados en la Tabla 11, se Suero de leche entero Para el suero de leche
observa que la adicin del metanol al 0,75% entero con 480 ppm de PO4-3 y sin adicin de
mejor la produccin de cido ctrico (13,79 g/l) NH4+, se encontr un alto crecimiento de la
al compararla con el control (10,14 g/l); con la biomasa en los primeros tres das con un alto
CMC a las concentraciones evaluadas de 1,5, 2,5 consumo de azcares en el primer da, mientras
y 3,5 g/l se encontr que no se incrementaba la que el cido ctrico no alcanza concentraciones
produccin de cido ctrico, contrario a lo significativas. Se nota una desviacin estndar
reportado por Rugsaseel et al. (1995); la adicin alta para la mayora de los datos de biomasa,
de gelatina a la concentracin de 4 g/l, aument mientras que para los azcares residuales y el
ligeramente la concentracin de cido ctrico, cido ctrico esta desviacin es mucho menor en
pasando de 10,14 g/l (control) a 11,723 g/l. la mayora de los puntos. Al contrario de la
Rugsaseel et al. (1995), reportan un incremento morfologa presentada en la bsqueda de las
en la concentracin de cido ctrico de 3,4 veces mejores condiciones nutricionales, en esta etapa
el valor del control cuando se adiciona gelatina a del trabajo se present a partir del segundo da un
una concentracin de 2 a 6 g/l a un medio con crecimiento en forma de pellets pequeos y bien
glucosa como fuente de carbono. Se observ para definidos que no se apelmazaban y que no hacan
la CMC que, a mayor concentracin, disminuye variar la viscosidad del medio manteniendo una
buena agitacin del cultivo sumergido. Se ha
52 Lpez et al
concentracin mayor alcanzada de cido ctrico mientras que en el SDH se deben adicionar 135
en este caso, 7,02 g/l en el noveno da, es muy ppm de NH4+ y sin embargo no se alcanzan tan
similar a la hallada en los ensayos previos y en el altas concentraciones de cido ctrico. Este
segundo bloque estudiado en la bsqueda de las comportamiento indica que no es conveniente la
mejores condiciones nutricionales. eliminacin de protenas del suero de leche
puesto que este sustrato ofrece los nutrientes
El SDH result no ser un buen medio para la necesarios para esta fermentacin.
produccin de cido ctrico como se esperaba y
como se haba reportado en otros trabajos Tabla 12. Produccin de cido ctrico a partir del
(Betancourt, 2003, Snchez et al., 2005), cuando suero de leche por distintos autores.
es comparado con el SE. Table 12. Citric acid production from milk
whey reported by different authors.
En la Tabla 12 se presentan los resultados
Tipo ci
obtenidos por distintos autores que utilizan el Ti
de Microor Sus do
suero de leche como sustrato para la produccin Autor em
Cul ganismo trato ctri
de cido ctrico. po
tivo co
Hossai SDD
Sum 10
5. CONCLUSIONES n& A. niger + 12
ergi da
Ahmed MH15-15 lactos g/l
do s
Para alcanzar un alto grado de hidrlisis (1992) a
utilizando cido clorhdrico concentrado como El- SD +
Sum A. niger 9
catalizador se debe adicionar 3 g de HCl por kg. Samrag Sales 3,1
ergi CAIM da
de lactosa a una temperatura de 80 C por un y et al +Meta g/l
do 167 s
tiempo de 74 minutos. (1996) nol
El-Holi
En la hidrlisis enzimtica las mejores y Al- Supe A. niger SE + 16
106,
condiciones para un alto grado de hidrlisis se Delaim rfici ATCC Sacar da
5 g/l
dan utilizando 2392 NLU/ l suero de leche, en un y e 9642 osa s
tiempo de 5,52 horas, a una temperatura de 37 C, (2003)
un pH de 6,6 y con agitacin permanente. Betanc Sum 10
A. niger 6,7
ourt ergi SDHE da
NRRL 3 g/l
En la etapa de hidrlisis, el uso de enzimas es la (2003) do s
mejor alternativa ya que no presenta Sum A. niger 10
Este SE + 38
pardeamiento que es un indicio de la formacin ergi NRRL da
trabajo PO4 g/l
de subproductos ms difciles de asimilar que la do 2270 s
glucosa y la galactosa. La remocin de metales
divalentes o utilizacin de agentes quelantes en SE: suero de leche entero.
el suero de leche no es necesaria ya que los SDD: Suero de leche desproteinizado y
elementos de mayor influencia como el descationizado.
manganeso, el zinc y el hierro que se encuentran SD: Suero de leche desproteinizado.
en concentraciones de 0,001, 0,2 y 1 ppm, SDHE: suero desproteinizado hidrolizado y
respectivamente, estn dentro de los intervalos evaporado.
recomendados para la produccin de cido
ctrico con Aspergillus niger. El SE necesita una adicin de una fuente de
En el tiempo evaluado para la produccin de fsforo, 480 ppm de PO4-3, mientras que el suero
cido ctrico (6 das) la complementacin del de leche desprotenizado e hidrolizado necesita
medio con sacarosa no presenta ventajas con 775 ppm de este mismo in. El magnesio en
respecto al suero de leche. En el SE no se hace concentraciones de 500 y 1000 ppm inhibe la
necesaria la adicin de una fuente de nitrgeno produccin de cido ctrico a partir del SE con
para alcanzar altas producciones de cido ctrico, Aspergillus niger.
54 Lpez et al
Utilizar el SE como sustrato para la produccin [7] ATES, S.; DINGIL, N.; BAYRAKTAR,
de cido ctrico resulta ser la mejor opcin ya que E.; MEHMETOGLU, U. 2002. Enhancement of
no conlleva ningn tratamiento previo a su citric acid production by immobilized and freely
utilizacin como s ocurre con el SDH. suspended Aspergillus niger using silicone oil.
Process Biochemistry 38: 433-436.
La adicin de metanol (0,75 % v/v) y de gelatina
(4 g/l) incrementaron la produccin de cido [8] BEROVIC, M. 1999. Scale up of citric
ctrico en 1,4 y 1,15 veces respectivamente. La acid fermentation by redox potential control.
adicin de CMC no tuvo un efecto positivo. Biotechnology and Bioengineering, Vol. 64, No.
5. 552-557.
Aspergillus niger NRRL 2270 es un buen
microorganismo para la produccin de cido [9] BEROVIC, M. AND POPOVIC, M.
ctrico a partir de suero de leche ya que asimila 2001. Characterization of gas mixed bioreactors
fcilmente la lactosa sin necesidad de una in submerged citric acid fermentation. Chem.
hidrlisis previa. Biochem. Eng., Vol. 15, No. 2. 65-69.
[4] AMIOT, J. 1991. Ciencia y tecnologa [13] DI SERIO, M.; MATURO, C.; DE
de la leche. Principios y Aplicaciones. Zaragoza ALTERIIS, E.; PARASCANDOLA, P.;
Espaa: Acribia. TESSER, R.; SANTACESARIA, E. 2003.
Lactose hydrolysis by immobilized -
[5] ANASTASSIADIS, S; AIVASIDES, A. galactosidase: the effect of the supports and the
AND WANDREY, C. 2002 Citric acid kinetics. Catalysis Today. 79-80: 333-339.
production by Candida strains under intracellular
nitrogen limitation. Appl. Microbiol. Biotecnol. [14] DOUGLAS C. ELLIOTT,
60: 81-87. CHRISTOPHER F. WEND, MIKHAIL S.
ALNAJJAR. 2001. Lactose Processing
[6] ARIAS, M. Y OSORIO, C. 1994. Technology Creating New Utilization
Evaluacin de la enzima lactasa en el deslactosaje Opportunities. Proceedings of the 38 th Annual
de leche fluida. Trabajo dirigido de grado, Marschall Cheese Seminar, Tools of the Trade.
Universidad Nacional de Colombia Sede
Medelln.
Dyna 150, 2006 55
[15] EL-HOLI, M. A. AND AL-DELAIMY, [24] HAQ, I.-U.; ALI, S.; QADEER M.A.
K. S. 2003. Citric acid production from whey AND IQBAL, J. 2003a. Stimulatory effect of
with sugar and additives by Aspergillus niger. alcohols (methanol and ethanol) on citric acid
African J. Biotechnol. Vol. 2, No 10. 356-359. productivity by a 2-deoxy D-glucose resistant
culture of Aspergillus niger GCB-47. Bioresource
[16] EL-SAMRAGY, Y .A.; KHORSHID, Technology. 86: 227233.
M.A.; FODA, M.I.; SHEHATA, A.E. 1993.
Suitability of strains and mutants of Aspergillus [25] HAQ, I.-U.; ALI, S. AND IQBAL, J.
niger for the production of citric acid from cheese 2003B. Direct production of citric acid from raw
whey. Milchwissenschaft 48: 498-501. starch by Aspergillus niger Process
Biochemestry. 38: 921-924.
[17] EL-SAMRAGY, Y .A.; KHORSHID,
M.A.; FODA, M.I. AND SHEHATA, A.E. 1996. [26] HOSSAIN, M.; BROOKS, J.D. AND
Effect of fermentation conditions on the MADDOX, I.S. 1983. Production of acid citric
production of citric acid from cheese whey by from whey permeate using Aspergillus niger.
Aspergillus niger. International Journal of Food New Zealand Journal of Dairy Science and
Microbiology 29: 411-416. Technology 18: 161-168.
[19] GONZLEZ SISO, M. I. 1996. The [28] JERNEJC, K. AND LEGISA, M. 2002.
biotechnological utilization of cheese whey: A The influence of metal ions on malic enzyme
review. Bioresource Technology 57: 1-11. activity and lipid synthesis in Aspergillus niger.
FEMS Microbiology Letters 217: 185-190.
[20] GREWAL H. S.AND KALRA K. L.
1995. Fungal production of citric acid. [29] JIANLONG, W. AND PING, L. 1998.
Biotechnology Advances. Vol. 13, No 2. 209- Phytate as a stimulator of citric acid production
234. by Aspergillus niger. Process Biochemistry Vol.
33, No. 3. 313-316.
[21] HANG, Y. D. Enzymatic enhancement
of citric production by Aspergillus niger from [30] JIANLONG, W. 2000. Enhancement of
corn cobs. 2001 Lebensm Wiss. U. Technol. 34: citric acid production by Aspergillus niger using
484-486. n-dodecane as an oxygen-vector. Process
Biochemistry 35:1079-1083.
[22] HAQ, I.-U.; ALI, S.; QADEER, M.A.
AND IQBAL, J. 2002a. Effect of cooper ions on [31] JURADO, E.; CAMACHO, F.; LUZN,
mould morphology and citric acid productivity by G. AND VICARIA, J.M. 2004. Kinetic models of
Aspergillus niger using molassess based media. activity for -galactosidases: influence of pH,
Process Biochemistry 37: 1085-1090. ionic concentration and temperature. Enzyme
Microb Technol 34:3340.
[23] HAQ, I.-U.; AL, S.; QADEER, M.A.
IQBAL, J. 2002b. Citric acid fermentation by [32] KIM, K.S.; YOO, Y.J. AND KIM, M.H.
mutant strain of Aspergillus niger GCMC-7 using 1995. Control of intracellular ammonium level
molasses based medium. EJB Electronic Journal using specific oxygen uptake rate for
of Biotechnology Vol. 5, No. 2. 125 132. overproduction of citric acid by Aspergillus niger.
Journal of Fermentation and Bioengineering.
Vol. 79, No. 6. 555-559.
56 Lpez et al
[41] PAPAGIANNI, M.; MATTEY, M. AND [49] RUGSASEEL, S.; MORIKAWA, S.;
KRISTIANSEN, B. 1998. Citric acid production KIRIMURA, K.AND USAMI, S. 1995.
and morphology of Aspergillus niger as functions Stimulation of citric acid production in
of the mixing intensity in a stirred tank and a Aspergillus niger by addition of viscous
tubular loop bioreactor. Biochemical Engineering substances in shake culture. Applied
Journal 2: 197-205. Microbiology and Biotechnology 42: 839-843.
Dyna 150, 2006 57