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PORTAFOLIO DE GENETICA
Ciclo: Quinto A
Objetivos
Conocer los principios bsicos de la gentica aplicados a la agronoma.
Persuadir la importancia de la proteccin de la diversidad gentica,
Emplear los conocimientos genticos en la agricultura.
CLASE # 1
Fecha: martes 4 de Octubre del 2016
Evolucin e historia.
Desde la antigedad y an hoy se seleccionan plantas y animales con ciertas
caractersticas para que las hereden sus descendientes (Seleccin artificial) y de esta
forma promover el mejoramiento de algunos caracteres en la poblacin obtenida: mayor
produccin, mejor calidad, ms resistencia al medio, plagas, enfermedades y otros. En la
poca antigua este proceso se hizo en forma intuitiva, sin llegar a entender que
mecanismos intervenan en l. (Octavo., 2009)
poca pre mendeliana y teora de la mezcla.
Los filsofos antiguos expresan su concepto sobre la herencia biolgica en la llamada
teora gentica de la mezcla: "Los descendientes presentan caractersticas intermedias
entre sus progenitores, al igual que la mezcla de pinturas de diferentes colores". (Octavo.,
2009)
A partir del siglo XVIII la gentica tom gran impulso. Entre los principales
investigadores se destacaron:
Kolreuter, investigador alemn, quin cruz especies diferentes de tabaco que se
diferenciaban en varios caracteres, obteniendo una descendencia hbrida, la cual tena
caractersticas de sus antecesores, siento total o parcialmente estriles. (Octavo., 2009)
Knight y Gross, en Inglaterra, cruzan guisantes con el objeto de obtener variedades ms
vigorosas y productivas. (Octavo., 2009)
Nadn, botnico Francs, realiz ensayos de hibridacin en plantas; cruz hbridos entre
s y encontr que en las nuevas plantas se regeneraban caractersticas de sus progenitores.
(Octavo., 2009)
Darwin, lanz la teora de la pan gnesis, la cual explica que partculas pequeas llamadas
pangenes producidas por cada rgano pasan por va sangunea a los gametos y al
realizarse la fecundacin , la pangene genera en el embrin el rgano del cual proviene.
(Octavo., 2009)
Galton, estudi los caracteres de diferentes familias como el genio, la estatura, el color de
ojos, las enfermedades y otros, estableciendo dos principios o leyes de la herencia:
Herencia ancestral: "los dos progenitores contribuyen a la herencia en la proporcin de
una mitad de la facultad heredada".
Segregacin filial: "llamada tendencia a la mediocridad", la cual considera que las
caractersticas de tipo extremo son menos acentuadas en los hijos.
CLASE # 2
Fecha: martes 11 de Octubre del 2016
Caracterizacin Fenotpica
Un fenotipo es cualquier caracterstica o rasgo
observable de un organismo, como su
morfologa, desarrollo, propiedades
bioqumicas, fisiologa y comportamiento. Los
fenotipos resultan de la expresin de los genes
de un organismo, as como de la influencia de
los factores ambientales, y de las posibles
interacciones entre ambos.
El genotipo de un organismo es el conjunto de
instrucciones heredadas que lleva en su cdigo
gentico. No todos los organismos con el
mismo genotipo se parecen o actan de la
misma manera, porque la apariencia y el
comportamiento se modifican por condiciones
ambientales y de desarrollo. Del mismo modo, no todos los organismos que se parecen
tienen necesariamente el mismo genotipo. Esta distincin genotipo-fenotipo fue
propuesta por Wilhelm Johannsen en 1911, para dejar clara la diferencia entre la herencia
de un organismo y lo que esa herencia produce. La distincin es similar a la propuesta
por August Weismann, que distingue entre germoplasma (la herencia) y clulas somticas
(el cuerpo). Una versin ms moderna es el dogma central de la biologa molecular
propuesto por Francis Crick.
A pesar de que es una definicin simple en apariencia, el concepto de fenotipo tiene
algunas sutilezas ocultas. En primer lugar, la mayora de las molculas y estructuras
codificadas por el material gentico no son visibles en la apariencia de un organismo,
pero s son observables por algn procedimiento (por ejemplo, mediante una prueba
bioqumica), por lo que son parte del fenotipo. Los grupos sanguneos humanos son un
ejemplo. As que, por extensin, el trmino fenotipo debe incluir las caractersticas que
se pueden hacer visibles mediante procedimientos tcnicos.
Otra extensin del concepto aade al fenotipo el comportamiento del individuo, ya que
ste tambin se ve afectado tanto por el genotipo como por los factores ambientales.
El fenotipo no es simplemente un producto del genotipo, sino que se ve influido por el
medio ambiente en mayor o menor medida. Y, adems, si el genotipo se define en sentido
estricto, entonces hay que recordar que no toda la herencia est en el ncleo de la clula.
Por ejemplo, las mitocondrias transmiten su propio ADN directamente, no a travs del
ncleo, aunque se dividen al unsono con el ncleo.
Genotipo
El genotipo se refiere al conjunto real de genes que un organismo lleva dentro. Es toda la
informacin gentica que se encuentra en el ADN.
Bsicamente, el genotipo determina el tipo de rasgos que podrn observarse en el
fenotipo. Por ejemplo, los rasgos genotpicos de los organismos son los que determinan
su susceptibilidad ante determinada enfermedad.
Leyes de Mendel. Herencia mendeliana para uno, dos, tres o ms pares de genes
Retro cruzamiento
Retrocruzamiento de prueba.- En el caso de los genes que manifiestan herencia
dominante, no existe ninguna diferencia aparente entre los individuos heterocigticos
(Aa) y los homocigticos (AA), pues ambos individuos presentaran un fenotipo amarillo.
La prueba del retrocruzamiento, o simplemente cruzamiento prueba, sirve para
diferenciar el individuo homo- del heterocigtico. Consiste en cruzar el fenotipo
dominante con la variedad homocigtica recesiva (aa).
- Si es homocigtico, toda la descendencia ser igual, en este caso se cumple la primera
Ley de Mendel.
- Si es heterocigtico, en la descendencia volver a aparecer el carcter recesivo en
una proporcin del 50%.
Tercera ley de Mendel.
Se conoce esta ley como la de la herencia independiente de caracteres, y hace referencia
al caso de que se contemplen dos caracteres distintos. Cada uno de ellos se transmite
siguiendo las leyes anteriores con independencia de la presencia del otro carcter.
Experimento de Mendel. Mendel cruz plantas de
guisantes de semilla amarilla y lisa con plantas de semilla
verde y rugosa (Homocigticas ambas para los dos
caracteres).
Las semillas obtenidas en este cruzamiento eran todas
amarillas y lisas, cumplindose as la primera ley para
cada uno de los caracteres considerados, y revelndonos
tambin que los alelos dominantes para esos caracteres
son los que determinan el color amarillo y la forma lisa.
Las plantas obtenidas y que constituyen la F1 son di
hbridas (AaBb).
Metafase.- Fibras del huso alinean los cromosomas a lo largo del medio
del ncleo celular. Esta lnea es referida como, el plato de la metafase.
Esta organizacin ayuda a asegurar que en la prxima fase, cuando los
cromosomas se separan, cada nuevo ncleo recibir una copia de cada
cromosoma.
Anafase.- Los pares de cromosomas se separan en los cinetocoros y se
mueven a lados opuestos de la clula. El movimiento es el resultado de
una combinacin de: el movimiento del cinetocoro a lo largo de los
microtubulos del huso y la interaccin fsica de los microtubulos
polares.
Telofase.- Los cromatidos llegan a los polos opuestos de la clula, y
nuevas membranas se forman alrededor de los ncleos hijos. Los
cromosomas se dispersan y ya no son visibles bajo el microscopio
ptico. Las fibras del huso se dispersan, y la citocinesis o la particin
de la clula puede comenzar tambin durante esta etapa.
Citosinesis.- En clulas animales, la citocinesis ocurre cuando un anillo
fibroso compuesto de una protena llamada actna, alrededor del centro
de la clula se contrae pellizcando la clula en dos clulas hijas, cada
una con su ncleo. En clulas vegetales, la pared rgida requiere que un
placa celular sea sintetizada entre las dos clulas hijas.
Gametognesis.
Es la formacin de gametos por medio de la meiosis a partir de clulas germinales.
Mediante este proceso, el material gentico de cada clula se reduce a la mitad. As, el
nmero de cromosomas que existe en las clulas germinales se reduce de diploide:46
(doble) a haploide:23 (nico). (galindo, Avedao, & Angulo, 2009)
La espermatognesis. Este proceso se desarrolla en las testculos, aunque la maduracin
final de los espermatozoides se produce en el epiddimo. Tiene una duracin aproximada
de 64 a 75 das.
Las espermatogonias permanecen en mitosis durante 16 das, dando lugar a los
espermatocitos primarios. Estos invierten 24 das en completar la primera meiosis y dar
lugar a los espermatocitos secundarios que tardarn horas en convertirse en espermtides.
Las espermtides se diferencian, empleando otros 24 das en este proceso. (galindo,
Avedao, & Angulo, 2009)
Cuando termina todo el proceso, los espermatozoides presentan zonas bien diferenciadas:
la cabeza, el cuello y la cola. La cabeza, contiene los cromosomas de la herencia y lleva
en su parte anterior un pequeo saliente o acrosoma, cuya misin es perforar las
envolturas del vulo. En el cuello o segmento se localiza el centrosoma y las
mitocondrias, que garantizan el aporte energtico. La cola o flagelo es el filamento que
se encarga de generar la movilidad que le permite al espermatozoide moverse hasta el
vulo para poder fecundarlo. (galindo, Avedao, & Angulo, 2009)
La ovognesis es la gametognesis femenina, es decir, el desarrollo y diferenciacin del
gameto femenino u vulo mediante una divisin meitica y se lleva a cabo en los ovarios.
Este proceso se produce a partir de una clula diploide y se forman como productos una
clula haploide funcional (el vulo) y tres clulas haploides no funcionales (los cuerpos
polares). (galindo, Avedao, & Angulo, 2009)
Las clulas del organismo poseen una dotacin gentica compuesta por 46 cromosomas.
Las clulas germinales poseen slo 23. Al unirse tras la fecundacin un ovocito con 23
cromosomas y un espermatozoide con 23 cromosomas darn lugar a un EMBRIN con
clulas de 46 cromosomas. (galindo, Avedao, & Angulo, 2009)
a) Recombinacin intercromosmica.
La disposicin de dos luc con mxima frecuencia de recombinacin (esto es, de 0,5
o, lo que es lo mismo, del 50%) es sobre cromosomas separados, puesto que, as, si
slo se transmite las clulas germinales una copia del genoma y existen dos
cromosomas homlogos (el paterno y el materno) en la clula diploide de la lnea
germinal, su segregacin al azar dar lugar a la transmisin de uno de los dos, y 1/2
corresponde a la mencionada frecuencia de recombinacin de 0,5. Cuando los dos luc
se encuentran en cromosomas distintos se dice que no estn ligados: es una situacin
de no ligamiento.
Cuando p alcanza un valor de O, 5 quiere decir que la mitad de las gametas son
parentales (1/2 de cada tipo parental) y mitad son recombinates (1/2 de cada una de
las recombinaciones). Esto es lo mismo que decir que tendramos 4 posibles clases de
gametas en igual probabilidad (1/4) de cada clase y eso sera igual que dos genes que
se transmiten independientemente, como lo predijo Mendel cada di hbrido da 4 clases
de gametas igualmente probables. Quiere decir entonces que si p: 0,5 no sabremos ya
con certeza si los genes estn ligados o en diferentes pares de cromosomas. Por ello a
su vez la mayor distancia que podemos calcular es 50Um o cM. La frecuencia de
recombinacin es un estimador de la distancia hasta ese punto, ya a mayores
distancias p seguira valiendo 0,5.
Cromosoma
Un cromosoma es una estructura en la que el ADN est muy empaquetado y
protegido. Los cromosomas son un componente celular que solo se forman cuando la
clula est en divisin. Son los encargados de transportar el ADN (cido
desoxirribonucleico) y los genes durante la divisin celular.
Cromosoma
Vista general de las clulas en un pice de raz de cebolla (Allium cepa), observado
con 800 aumentos. (a) Clula sin dividirse, obsrvese la red de cromatina y el nuclolo
intensamente teido; (b) ncleos preparados para la divisin celular, puede observarse
que la cromatina se ha condensado; (c) Clulas en distintos estadios de divisin
mittica, se pueden observar que la cromatina se ha terminado de condensar y se han
formado los cromosomas.
En biologa, se denomina cromosoma (del griego , - chroma, color y ,
- soma, cuerpo o elemento) a cada uno de los pequeos cuerpos en forma de
bastoncillos en que se organiza la cromatina del ncleo celular durante las divisiones
celulares (mitosis y meiosis). La cromatina es un material microscpico que lleva la
informacin gentica de los organismos eucariotas y est constituida por ADN
asociado a protenas especiales llamadas histonas. Este material se encuentra en el
ncleo de las clulas eucariotas y se visualiza como una maraa de hilos delgados.
Cuando el ncleo celular comienza el proceso de divisin (cariocinesis), esa maraa
de hilos inicia un fenmeno de condensacin progresivo que finaliza en la formacin
de entidades discretas e independientes: los cromosomas. Por lo tanto, cromatina y
cromosoma son dos aspectos morfolgicamente distintos de una misma entidad
celular.
Cromosoma: Un cromosoma consiste de dos cromtides unidas por un centrmero
(Figura 1). El cromosoma se divide en dos brazos, el brazo corto denominado con la
letra p y el brazo largo denominado con la letra q.
Estructura externa de los cromosomas: nmero, forma y tamao
El estudio de la estructura externa de los cromosomas de cualquier especie eucaritica
consiste en analizar la forma, tamao y nmero de los cromosomas que posee. El
mejor momento para llevar a cabo dicho estudio suele ser aquel en el que los
cromosomas han alcanzado su mximo grado de contraccin y tienen sus bordes
perfectamente definidos. Dicho momento suele ser la metafase mittica. El estudio de
la estructura externa de los cromosomas culmina con la obtencin del cariotipo. Los
cromosomas se pueden estudiar en distintos momentos segn la especie y
dependiendo de los objetivos planteados. Algunas especies tienen cromosomas que
se pueden observar con gran detalle en interfase, tal es el caso de Drosophila
melanogaster, que posee cromosomas politnicos gigantes que se observan en las
glndulas salivales de dicho insecto, y el de Chironomus tentans, otro dptero. El
cariotipo se confecciona usualmente despus de un apropiado pre-tratamiento y
tincin de las clulas, para hacer ms visibles los cromosomas individuales. Al
diagrama simplificado de los cromosomas metafsicos del cariotipo se lo denomina
idiograma, que se construye con el nmero genmico. Para realizar el ordenamiento
de los cromosomas tanto en cariotipos como idiogramas se debe tener en cuenta el
tamao cromosmico (ubicados de mayor a menor, con el brazo corto bc o "p" hacia
arriba y el brazo largo bl o "q" hacia abajo); posicin del centrmero (generalmente
alineados) y presencia de constricciones secundarias y satlites.
Chi Cuadrado
El chi cuadrado es una medida no paramtrica de dispersin aplicada a poblaciones
binomiales. Una poblacin binomial es aquella en la que medimos un carcter
cualitativo que se distribuye de acuerdo con la expresin del binomio. El chi cuadrado
es una herramienta estadstica que permite estimar la probabilidad de determinar
discrepancias entre proporciones fenotpicas observadas y aquellas esperadas para un
patrn determinado de herencia, y si estas discrepancias son significativas o si son tan
pequeas que se pueden adjudicar al azar.
Ejemplo: de un cruce entre dos cepas puras de moscas de Drosophila melanogaster,
se obtuvo en la F2 un total de 524 individuos distribuidos en las siguientes clases
fenotpicas: 290 moscas de ojos rojos y cuerpo negro, 90 moscas de ojos rojos y
cuerpo amarillo, 100 moscas de ojos blancos y cuerpo negro y 44 moscas de ojos
blancos y cuerpo amarillo. ( a ) Proponer una hiptesis que explique estos resultados.
( b ) basndose en ella, esquematizar el cruzamiento y comparar los resultados
observados con los esperados.
a. Ho : O = E ; hay concordancia.
Se rechaza Ho si:
X2 X2 ( gl )
Se acepta Ho si:
X2 < X2 ( gl )
Para calcular las proporciones fenotpicas esperadas en la F2; nos basamos en los valores
y fenotipos obtenidos experimentalmente; por ello, se concluye que las caractersticas
dominantes son ojo rojo (AA) y cuerpo negro (BB) y los caracteres ojo blanco (aa) y
cuerpo amarillo (bb) son recesivos; por lo tanto el cruce es el siguiente:
AABB aabb
F1: Todos los individuos sern (AaBb); es decir de ojos rojos y cuerpo negro: al cruzarlos
entre s: tenemos:
AaBb AaBb
Que: 9/16 van a ser individuos A_B_ es decir de ojos rojos y cuerpo negro
3/16 van a ser individuos A_bb es decir de ojos rojos y cuerpo amarillo
3/16 van a ser individuos aaB_ es decir de ojos blancos y cuerpo negro
1/16 van a ser individuos aabb es decir de ojos blancos y cuerpo amarillo
De esta manera determinamos el nmero de individuos que se esperara para cada clase
fenotpica as:
9
16
16
16
16
Los grados de libertad para este caso corresponde a 3; ubicando el valor de chi cuadrado
obtenido en nuestro ejercicio para tres grados de libertad en una tabla de distribucin de
chi cuadrado; tenemos que este valor se encuentra entre el 20 y 30 por ciento de
probabilidad de ocurrencia; en otras palabras podemos decir que se acepta la hiptesis
nula.
Pedigr
Un pedigr (derivado del ingls pedigree, y ste a su vez del francs pied de grue)1 es un
documento que analiza las relaciones genealgicas de un ser vivo en el contexto de
determinar como una determinada caracterstica o fenotipo se hereda y manifiesta.
En un sentido ms coloquial, el trmino pedigr se refiere al documento emitido por
algunos organismos de acreditacin que certifican la pertenencia de un animal domstico
a una determinada raza.
El estudio del pedigr es un concepto utilizado desde tiempos remotos como mtodo de
seleccin y garanta de pureza de raza en la crianza de ciertas especies domsticas. Sin
embargo, desde comienzos del siglo XX el trmino tambin se aplica a cualquier
organismo cuya genealoga pueda ser estudiada. Un estudio genealgico o pedigr
constituye una herramienta de enorme valor en las ciencias biolgicas ya sean puras o
aplicadas. Entre estas ltimas destacan la medicina y la ingeniera gentica.
La palabra procede de la expresin pied de grue, pata de grulla, con la que los
franceses se referan a las marcas rectas con forma de pata de grulla que los primeros
criadores ingleses de caballos utilizaban a modo de rbol genealgico para
seleccionarlos.2 La pronunciacin inglesa de pied de grue acab convirtindola en
pedigree, castellanizndose luego a pedigr.
Un diagrama de pedigr es un grfico escrito en forma similar a un rbol genealgico, en
el cual se detalla por medio de una simbologa consensuada, la aparicin de un
determinado fenotipo a lo largo de la historia natural de una familia. Con frecuencia los
diagramas de pedigr comprenden tres o cuatro generaciones, pero un buen diagrama de
pedigr debera contener todas las que resultara posible rastrear.
Un diagrama de pedigr hace uso de cuatro smbolos bsicos dos cuadrados (uno vaco y
uno lleno) y dos crculos (uno vaco y uno lleno). Los crculos representan hembras, los
cuadrados machos, los smbolos llenos representan la aparicin fenotpica de la
caracterstica que se est rastreando, mientras que los smbolos vacos representan a
individuos que no la presentan.
El Material Gentico
Qu es el material gentico?
El material genetico es toda la totalidad de ADN que presenta un ser vivo.
Cmo est formado?
Nuestro material gentico est formado por molculas de ADN. Estas molculas estn
hechas de dos largas cadenas complementarias unidas y retorcidas entre s. (Andrade,
2009)
Las cadenas estn formadas por bloques o subunidades. Estos componentes del ADN
(polmero) son los nucletidos (monmeros); cada nucletido est formado por un
grupo fosfato, una desoxirribosa y una base nitrogenada, y son precisamente las bases
nitrogenadas las que portan la informacin (Andrade, 2009)
Para qu se emplea?
El material gentico se emplea para guardar la informacin gentica de una forma de
vida orgnica. Para todos los organismos conocidos actualmente, el material gentico
es casi exclusivamente cido desoxirribonucleico (ADN o DNA). Algunos virus usan
cido ribonucleico (ARN o RNA) como su material gentico. (Andrade, 2009)
Qu es el adn?
Constituye el material gentico de los organismos. Es el componente qumico
primario de los cromosomas y el material del que los genes estn formados. En las
bacterias el ADN se encuentra en el citoplasma mientras que en organismos ms
complejos y evolucionados, tales como plantas, animales y otros organismos
multicelulares, la mayora del ADN reside en el ncleo celular. (Andrade, 2009)
Replicacin de ADN
Es la capacidad que tiene el ADN de hacer copias o rplicas de su molcula. Este
proceso es fundamental para la transferencia de la informacin gentica de generacin
en generacin. Las molculas se replican de un modo semiconservativo. La doble
hlice se separa y cada una de las cadenas sirve de molde para la sntesis de una nueva
cadena complementaria. El resultado final son dos molculas idnticas a la original.
(Andrade, 2009)
Replicacin semiconservativa
El proceso de replicacin segn el modelo semiconservativo se realiza de la siguiente
manera:
Cuando las nuevas cadenas de ADN se unen en segmentos cortos, entra en accin
la protena ligasa, para juntarlos y formar las molculas hijas.
El resultado son dos nuevas molculas, cada una con una cadena original de la
madre y otra complementaria nueva. La informacin gentica de la cadena nueva es
idntica a la de la cadena madre.
Complementos en la rplica del ADN
Varias protenas especializadas denominadas enzimas actan como catalizadores
biolgicos, acelerando las reacciones de la replicacin del ADN: la helicasa, que se
encarga de abrir la doble hlice del ADN, la polimerasa sintetiza las nuevas hebras de
ADN en un solo sentido y la ligasa sella y une los fragmentos de ADN que se
sintetizaron. (Andrade, 2009)
CLASE # 10
Fecha: martes 13 de Diciembre del 2016
Genes y genoma
Son diversas las especies presentes en el mundo y cada una tiene un conjunto nico de
caractersticas hereditarias que las hacen diferentes de las otras. Estas caractersticas estn
codificadas en las molculas de ADN, presentes en las clulas. (Mazzotta, 2003)
Los genes y el genoma estn asociados con el ADN y se definen mediante las mismas
molculas. El ADN es la unidad bsica de la herencia que se encuentra principalmente en
los cromosomas presentes en el ncleo de las clulas de casi todos los organismos que
conocemos. Pero es importante que sepas que gen y genoma no es lo mismo, razn por
la cual a continuacin te explicamos en qu consiste la diferencia. (Mazzotta, 2003)
Gen
Un gen es una unidad molecular de la herencia en un organismo vivo. Los seres vivos
dependen de los genes y de las cadenas funcionales de ARN y protenas. (Mazzotta, 2003)
Los genes contienen la informacin para construir y mantener las clulas de un organismo
y pasar los rasgos genticos a la descendencia. Esto significa que son elementos que
determinan las caractersticas heredadas que se transmiten de los padres a su
descendencia en la reproduccin. (Mazzotta, 2003)
Se asocian con las molculas de ADN, que es el principal material gentico encontrado
en todos los organismos vivos. Los genes estn constituidos por segmentos o porciones
especficas del ADN. Estos segmentos especficos son capaces de controlar las
caractersticas especficas de la herencia. Esto se hace generalmente por la transcripcin
del ADN y procesos de traduccin del mismo. (Mazzotta, 2003)
Durante la reproduccin, la descendencia obtiene genes de ambos padres. Estas diferentes
formas de genes se denominan alelos. Un solo alelo o mltiples alelos son responsables
de controlar ciertas caractersticas y funciones de un organismo. (Mazzotta, 2003)
Genoma
En biologa molecular y gentica, el genoma es la totalidad de la informacin hereditaria
de un organismo. Est codificado en las molculas de ADN. El contenido total de ADN
en una clula nica se conoce como el genoma del organismo, pero algunos organismos
tienen slo ARN por lo que su genoma es la cantidad total de contenido de ARN.
De lo antes dicho se deduce que el genoma incluye tanto el ADN como el ARN. Por esta
razn, el genoma forma parte incluso de elementos genticos no cromosmicas como
virus, plsmidosEl contenido total de ADN en el ncleo de una clula se denomina
genoma nuclear y el contenido total de ADN en la mitocondria se llama genoma
mitocondrial.
El estudio del genoma y las caractersticas relacionadas con los organismos se llama
Genmica. La evolucin de los genomas puede ser estudiada e identificada por su
composicin, que incluye tamao, proporcin, ADN repetitivo y no repetitivo.
Ligasas
Las ligasas son una enzima capas de catalizar la unin de hebras del ADN rotas o
cortadas, en donde se da lugar a un nuevo enlace qumico, la ligasas son sumamente
importante a la hora de la duplicacin del ADN, ya que unen las hebras del ADN.
Topoisomerasas y helicasas
Polimerasas
A la hora de escoger que mtodo de extraccin de ADN utilizar se tienen en cuenta varios
factores:
Mtodo de salting-out
A partir de un lisado celular se pueden separar las molculas de protenas y otros
contaminantes del ADN mediante la adicin de altas concentraciones de sal que hacen
que disminuya la solubilidad de las molculas orgnicas en la fase acuosa. En este mtodo
se utiliza frecuentemente la proteinasa K, el TRIS-HCl para regular el pH y
otros reactivos qumicos que aseguren la total inactivacin de las enzimas que pueden
actuar sobre las molculas de ADN. Para la extraccin se utilizan sales inorgnicas como
el perclorato de sodio y el cloruro de sodio en concentraciones muy altas que hacen
precipitar a las molculas orgnicas. El precipitado formado se separa por centrifugacn
y luego se puede extraer el ADN de la disolucin acuosa mediante la adicin de alcohol,
por precipitacin.
Este mtodo es sencillo, pero no siempre es eficaz, por lo que el ADN obtenido en muchas
ocasiones debe ser purificado antes de ser usado en posteriores aplicaciones. La ventaja
es que se elimina el uso de disolventes orgnicos.
nico tubo
La compaa Wako pone a disposicin de los investigadores y empresas varios kit de
ADN que usan yoduro de sodio como agente caotrpico, que tienen la ventaja de que la
extraccin se realiza en un nico micro tubo de centrifugado. El yoduro de sodio adems
de provocar la lisis celular rompe la capa de hidratacin que rodea el ADN y logra que
las cargas negativas de los grupos fosfatos del ADN queden ms expuestas. En estos kits
despus del tratamiento de la muestra con yoduro de sodio en el mismo tubo se adicionan
detergentes aninicos como es el caso del N-lauril sarcosinato de sodio, proteinasa K y/o
otros reactivos que permiten separar las protenas y lpidos contenidos en las muestras
biolgicas del ADN.
Este mtodo a pesar de dar como resultado un ADN de alta calidad tiene una serie de
desventajas: es largo, imposible de automatizar, caro, requiere una ultracentrfuga y usa
compuestos qumicos txicos.
2. Proceso:
La mezcla de reaccin se somete a ciclos sucesivos, cada uno correspondiente a una fase
de desnaturalizacin, una de hibridacin o alineacin y una de elongacin.
a) Durante la desnaturalizacin, que se
realiza por calentamiento de la mezcla a
95C, se separan las dos cadenas del
ADN molde.
b) Durante la hibridacin, la
temperatura de incubacin se reduce
para permitir el apareamiento de las
bases de ambos cebadores en el sitio
donde encuentran una secuencia
complementaria.
c) Durante la fase de elongacin, la mezcla se calienta a 72C y la enzima Taq ADN
polimerasa se usa para replicar las hebras de DNA. La Taq polimerasa comienza el
proceso de extensin de la cadena complementaria a partir del extremo 3 de los
cebadores. Al finalizar cada ciclo, la cantidad de ADN molde disponible para el ciclo
siguiente aumenta al doble. (Gonzlez, 2012)
Entre muchas de las aplicaciones que la PCR pone a disposicin se encuentran la
deteccin precoz o prenatal de enfermedades genticas, la deteccin de infecciones
virales latentes o la produccin de grandes cantidades de fragmentos de ADN humano a
una velocidad muy superior a la posible mediante otros mtodos. Esta tcnica tambin se
aplica para estudios de identidad y filiacin.
PCR a partir de ARN.
El genoma de muchos virus de importancia clnica est compuesto de ARN en lugar de
ADN, los ms sobresalientes son el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), el
Virus de la Hepatitis C (HCV) y la familia de Enterovirus (EV). (Gonzlez, 2012)
Transcripcin Reversa- PCR (RT-PCR).
Dado que el ARN usualmente es de una sola hebra y es sensible al calor, es necesario
hacer una transcripcin reversa (RT) antes de iniciar la amplificacin por PCR. La
transcripcin reversa genera una copia de la hebra de RNA, pero esta copia es ADN
complementario (cADN) el cual es estable al calor y puede resistir la metodologa PCR.
Los pasos de la RT-PCR son:
Transcripcin reversa: Unin del partidor a la secuencia de ARN objetivo.
Transcripcin reversa: La polimerasa rTth cataliza la extensin del partidor mediante la
incorporacin de nucletidos complementarios.
Fin de transcripcin reversa, se obtiene la hebra del cADN complementario al ARN.
PCR
CLASE # 14
Fecha: martes 17 de Enero del 2017
Cuantificacin de ADN y Electroforesis
Electroforesis
La tcnica clsica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un
electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depsitos independientes que contienen
ambos al electrolito y estn unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra
se deposita en forma de un pequeo trazo transversal en la tira. La distancia de migracin
se mide en relacin un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul
de Coomassie, o reactivos en particular. (Becerril, 2003)
CLASE # 15
Fecha: martes 24 de Enero del 2017
Tipos De Mutaciones
Las mutaciones pueden darse en tres niveles diferentes:
1.-molecular (gnicas o puntuales)
2.- cromosmico
3.- genmico
Concepto de poblacin.
En trminos genticos, una poblacin se define como un conjunto de individuos que
pertenecen a una especie dotada de reproduccin sexual que constituyen una unidad
reproductiva, es decir, que se reproducen mediante cruzamientos entre sus miembros. La
poblacin se puede describir en cada generacin y en cuanto a la transmisin de una a
otra generacin. La descripcin de los caracteres hereditarios variables slo adquiere
pleno sentido en un contexto poblacional. (biotecnologia, 2000)
Dobzhansky (1950) defini el concepto de poblacin mendeliana como un grupo de
individuos que comparten, en el tiempo y en el espacio, un acervo gentico comn. En
una poblacin se pueden describir varios acervos o patrimonios gentico, dependiendo
de cuales sean las unidades genticas que consideremos: alelos, gametos o genotipos; en
todos los casos, la descripcin del correspondiente acervo se realiza enumerando los
elementos que lo componen, y se hayan observado en la poblacin, y sus respectivas
frecuencias. (biotecnologia, 2000)
El acervo allico se define como el conjunto de los alelos presentes en cada uno
de los loci y sus respectivas frecuencias.
El acervo gamtico se define como el conjunto de los grupos de alelos, a razn
de un alelo por locus, observados en la poblacin y sus respectivas frecuencias.
El acervo cigtico se define como el conjunto de los grupos de parejas de alelos,
a razn de una pareja por locus, observados en la poblacin y sus respectivas
frecuencias.
Las poblaciones que consideraremos son prcticamente infinitas, y sus acervos no estn
sometidas a fuerzas de cambio estocsticas (deriva) ni a sistemticas (seleccin, mutacin
o migracin). (biotecnologia, 2000)
Plantas transgnicas
Cuyo genoma ha sido modificado mediante ingeniera gentica, bien para introducir uno
o varios genes nuevos o para modificar la funcin de un gen propio. Como consecuencia
de esta modificacin, la planta transgnica muestra una nueva caracterstica. Una vez
realizada la insercin o modificacin del gen, ste se comporta y se transmite a la
descendencia como uno ms de los genes de la planta. En las plantas transgnicas la
modificacin gentica se realiza de forma dirigida y afecta a un nmero reducido de genes
perfectamente conocidos. Como resultado, las variedades transgnicas no difieren mucho
de las variedades no transgnicas y presentan caractersticas predecibles. (biotecnologia,
2000)
Cmo se hace una planta transgnica?
La Produccin de una planta transgnica consta de dos etapas fundamentales
denominadas transformacin y regeneracin. Se denomina transformacin al proceso de
insercin del gen que se pretende introducir (tambin llamado transgn) en el genoma de
una clula de la planta a transformar. La regeneracin consiste en la obtencin de una
planta completa a partir de esa clula vegetal transformada. Para introducir el nuevo gen
en el genoma de la clula vegetal se utilizan fundamentalmente dos m- todos. El ms
comn utiliza una bacteria del suelo, Agrobacterium, que en condiciones naturales es
capaz de transferir genes a las clulas vegetales. (biotecnologia, 2000)
El mtodo alternativo consiste en la introduccin directa de los genes en el ncleo de la
clula vegetal. Para ello una de las tcnicas ms utilizadas es la de disparar a las clulas
con microproyectiles metlicos recubiertos del ADN que penetran en la clula e integran
el nuevo ADN en su genoma. Una vez que una clula vegetal ha sido transformada, es
necesario regenerar la planta entera a partir de ella.
Este proceso se realiza en el laboratorio, cultivando los fragmentos de tejido vegetal que
han sido inoculados con Agrobacterium o disparados con microproyectiles en medios de
cultivo que favorecen la regeneracin de nuevas plantas.
Es importante que en este paso slo se regeneren las clulas del tejido que han sido
transformadas. Esto se consigue introduciendo junto con el transgn un gen adicional que
confiera una caracterstica selectiva.
Por ejemplo, se han utilizado genes de resistencia a antibiticos para que slo las clulas
modificadas sean capaces de sobrevivir en presencia del antibitico. Estos genes
responsables de caracteres selectivos estarn presentes posteriormente en todas las clulas
de la planta transgnica regenerada o pueden ser eliminados por diversos procedimientos.
De dnde provienen los nuevos genes de una planta transgnica?
Los Genes Que se introducen en una planta transgnica pueden proceder de cualquier ser
vivo, del que se copian mediante tcnicas de biologa molecular. Su origen puede ser una
planta relacionada u organismos tan distantes como bacterias o animales. Tambin es
posible construir genes sintticos en el laboratorio e introducirlos en plantas transgnicas.
Es muy importante conocer la funcin de los genes para poderlos utilizar en el diseo de
una nueva planta transgnica, y por ello, su uso se limita a los genes de funcin conocida.
En la actualidad, proyectos de investigacin de la secuencia del genoma de diversos
organismos, como el proyecto del genoma humano, estn contribuyendo a la
identificacin de nuevos genes y al conocimiento de su funcin. (biotecnologia, 2000)
Cultivos Transgnicos
Uno de los temas de ms controversia en estos momentos son los cultivos transgnicos,
la polmica est abierta debido a que son cultivos manipulados genticamente al cual se
le han insertados elementos extraos y que en teora vuelven al organismo que lo posee
ms resistente a una peste, enfermedades etc. la controversia se centra en que no se han
hecho las suficientes investigaciones para poder ver el impacta a largo plazo que estos
cultivos pueden producir en el organismo humano o en el ambiente, de igual forma se
est incrementando el uso de herbicidas y en ultima hay detrs de esto hay un
conglomerado econmico interesado en crear verdaderos monopolios que controles los
bancos de semillas , as que veamos un poco la controversia. (biotecnologia, 2000)
Los alimentos sometidos a ingeniera gentica o alimentos transgnicos son aquellos que
fueron producidos a partir de un organismo modificado genticamente mediante
ingeniera gentica. Dicho de otra forma, es aquel alimento obtenido de un organismo al
cual le han incorporado genes de otro para producir una caracterstica deseada. En la
actualidad tienen mayor presencia alimentos procedentes de plantas transgnicas como el
maz, la cebada o la soja.
La ingeniera gentica o tecnologa del ADN recombinante es la ciencia que manipula
secuencias de ADN (que normalmente codifican genes) de forma directa, posibilitando
su extraccin de un taxn biolgico dado y su inclusin en otro, as como la modificacin
o eliminacin de estos genes. En esto se diferencia de la mejora clsica, que es la ciencia
que introduce fragmentos de ADN (conteniendo como en el caso anterior genes) de forma
indirecta, mediante cruzamientos dirigidos.La primera estrategia, la de la ingeniera
gentica, se circunscribe en la disciplina denominada biotecnologa vegetal. Cabe
destacar que la insercin de grupos de genes mediante obtencin de hbridos (incluso de
especies distintas) y otros procesos puede realizarse mediante tcnicas de biotecnologa
vegetal que no son consideradas ingeniera gentica, como puede ser la fusin de
protoplastos. (biotecnologia, 2000)
Los alimentos sometidos a ingeniera gentica o alimentos transgnicos son aquellos que
fueron producidos a partir de un organismo modificado genticamente mediante
ingeniera gentica. Dicho de otra forma, es aquel alimento obtenido de un organismo al
cual le han incorporado genes de otro para producir una caracterstica deseada. En la
actualidad tienen mayor presencia alimentos procedentes de plantas transgnicas como el
maz, la cebada o la soja.
La ingeniera gentica o tecnologa del ADN recombinante es la ciencia que manipula
secuencias de ADN (que normalmente codifican genes) de forma directa, posibilitando
su extraccin de un taxn biolgico dado y su inclusin en otro, as como la modificacin
o eliminacin de estos genes. En esto se diferencia de la mejora clsica, que es la ciencia
que introduce fragmentos de ADN (conteniendo como en el caso anterior genes) de forma
indirecta, mediante cruzamientos dirigidos.
La primera estrategia, la de la ingeniera gentica, se circunscribe en la disciplina
denominada biotecnologa vegetal. Cabe destacar que la insercin de grupos de genes
mediante obtencin de hbridos (incluso de especies distintas) y otros procesos pueden
realizarse mediante tcnicas de biotecnologa vegetal que no son consideradas ingeniera
gentica, como puede ser la fusin de protoplastos.
Un transgnico u Organismo Modificado Genticamente (OMG) es un organismo vivo
que ha sido creado artificialmente manipulando sus genes. La manipulacin gentica
consiste en aislar segmentos del ADN (el material gentico) de un ser vivo (virus,
bacteria, vegetal, animal e incluso humano) para introducirlos en el de otro. Por ejemplo,
el maz transgnico que se cultiva en Espaa lleva genes de bacterias, para producir una
sustancia insecticida. (biotecnologia, 2000)
La diferencia fundamental con las tcnicas tradicionales de mejora vegetal es que la
manipulacin gentica permite franquear las barreras entre especies para crear seres vivos
que no existan en la naturaleza. Se trata de un experimento a gran escala en que se nos
involucra a todos en contra de nuestra voluntad. Adems, la manipulacin gentica est
basada en un modelo cientfico obsoleto y que est en entredicho. El sistema de
evaluacin de riesgos de la UE est repleto de trampas e irregularidades.
UNIVERSIDAD TCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADMICA DE CC. AGR.
ESCUELA DE INGENIERA AGRONMICA
GENETICA
Ciclo: Quinto A
GENETICA
Ciclo: Quinto A
GENTICA
Ciclo: Quinto A
EL CROMOSOMA
El cromosoma en metafase
TIPOS DE CROMOSOMAS
Un cromosoma es una estructura que se encuentra en el citoplasma del ncleo de las
clulas de todo ser vivo, la cual representa la mxima compactacin de la cromatina.
Los cromosomas estn formados por ADN y protenas. Son quienes contienen la
mayor cantidad de informacin gentica del individuo.
Cuando ocurren las divisiones celulares, llamadas meiosis y mitosis, el cromosoma
adquiere su forma ms conocida, la de una X, debido a la compactacin y la
duplicacin que sufren. Cada molcula de ADN es hasta 50 mil veces ms pequea y
corta que su forma extendida.
CICLO CELULAR
El ciclo celular es un conjunto ordenado de sucesos que conducen al crecimiento de
la clula y la divisin en dos clulas hijas. Las etapas, son G1-S-G2 y M. El estado
G1 quiere decir GAP 1 (Intervalo 1). El estado S representa la sntesis, en el que
ocurre la replicacin del ADN. El estado G2 representa GAP 2 (Intervalo 2). El
estado M representa la fase M, y agrupa a la mitosis o meiosis (reparto de material
gentico nuclear) y la citocinesis (divisin del citoplasma). Las clulas que se
encuentran en el ciclo celular se denominan proliferantes y las que se encuentran
en fase G0 se llaman clulas quiescentes.1 Todas las clulas se originan nicamente
de otra existente con anterioridad.2 El ciclo celular se inicia en el instante en que
aparece una nueva clula, descendiente de otra que se divide, y termina en el momento
en que dicha clula, por divisin subsiguiente, origina dos nuevas clulas hijas.
MITOSIS
Proceso celular que consiste en la formacin de dos clulas a partir de una
conservando el mismo nmero de cromosomas.
Profase
La replicacin del DNA ha ocurrido. Hay condensacin gradual de los cromosomas.
Cromticas hermanas unidas. Desaparicin gradual del nuclolo. La membrana
nuclear inicia su desintegracin.
Prometafase
La envoltura nuclear se ha roto y el huso mittico se comienza a organizar. Los
cromosomas han sido alcanzados por fibras del huso (microtubulos).
Metafase
Los centrmeros de los cromosomas estn unidos a las fibras del huso mittico. Se
forma la placa metafsica.
Anafase
Etapa muy corta en la que cada centrmero se divide en dos, por lo que las cromtidas
se convierten en cromosomas y los centrmeros inician su movimiento hacia los
polos, llevando hacia cada polo uno de los 2 cromosomas (cromtidas hermanas).
Telofase
La dotacin de cromosomas se agrupa en los polos y stos se comienzan a
descondensar y adoptan la forma de cromosomas interfsicos. Se forma la membrana
nuclear, se reconstituyen los nuclolos.
Meiosis
La meiosis es la divisin celular que permite la reproduccin sexual. Comprende
dos divisiones sucesivas: una primera divisin meitica, que es una divisin
reduccional, ya que de una clula madre diploide (2n) se obtienen dos clulas hijas
haploides (n); y una segunda divisin meitica, que es una divisin ecuacional, ya que
las clulas hijas tienen el mismo nmero de cromosomas que la clula madre (como
la divisin mittica). As, dos clulas n de la primera divisin meitica se obtiene
cuatro clulas n. Igual que en la mitosis, antes de la primera divisin meitica hay un
perodo de interfase en el que se duplica el ADN. Sin embargo, en la interfase de la
segunda divisin meitica no hay duplicacin del ADN.
UNIVERSIDAD TCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADMICA DE CC. AGR.
ESCUELA DE INGENIERA AGRONMICA
GENTICA
Ligamento y recombinacin
Ciclo: Quinto A
c) Recombinacin intercromosmica.
La disposicin de dos luc con mxima frecuencia de recombinacin (esto es, de 0,5
o, lo que es lo mismo, del 50%) es sobre cromosomas separados, puesto que, as, si
slo se transmite las clulas germinales una copia del genoma y existen dos
cromosomas homlogos (el paterno y el materno) en la clula diploide de la lnea
germinal, su segregacin al azar dar lugar a la transmisin de uno de los dos, y 1/2
corresponde a la mencionada frecuencia de recombinacin de 0,5. Cuando los dos luc
se encuentran en cromosomas distintos se dice que no estn ligados: es una situacin
de no ligamiento.
Cuando p alcanza un valor de O,5 quiere decir que la mitad de las gametas son
parentales (1/2 de cada tipo parental) y mitad son recombinates (1/2 de cada una de
las recombinaciones). Esto es lo mismo que decir que tendramos 4 posibles clases de
gametas en igual probabilidad (1/4) de cada clase y eso sera igual que dos genes que
se transmiten independientemente, como lo predijo Mendel cada di hbrido da 4 clases
de gametas igualmente probables. Quiere decir entonces que si p: 0,5 no sabremos ya
con certeza si los genes estn ligados o en diferentes pares de cromosomas. Por ello a
su vez la mayor distancia que podemos calcular es 50Um o cM. La frecuencia de
recombinacin es un estimador de la distancia hasta ese punto, ya a mayores
distancias p seguira valiendo 0,5.
GENTICA
Ciclo: Quinto A
Para formar molculas de DNA recombinante, se corta DNA de distintas fuentes con
EcoRI y se mezcla para que se unan formando molculas recombinantes. Despus se
utiliza la enzima DNA ligasa para unirlos covalentemente en molculas de DNA
recombinante.
Algunas enzimas de restriccin comunes, con sus sitios de reconocimiento y de corte,
el patrn de corte y la fuente de origen
Otras enzimas de restriccin de Tipo II, como SmaI, cortan el DNA formando
fragmentos romos. Los fragmentos de DNA con extremos romos tambin pueden
unirse y formar molculas recombinantes, pero primero deben modificarse. La enzima
desoxinucleotidil transferasa terminal se utiliza para crear extremos de cadena sencilla
mediante la adicin de colas de nucletidos. Si a uno de los DNA se le aade una
cola de polidA, y al otro DNA se le aade una cola de poli-dT, se forman colas
complementarias, y los fragmentos pueden unirse mediante puentes de hidrgeno.
Entonces, por ligacin, pueden formarse molculas recombinantes.
Las molculas de DNA recombinante pueden formarse a partir DNA cortado con
enzimas que dejan extremos romos. En este mtodo se utiliza la enzima
desoxinucleotidil transferasa terminal para crear colas complementarias mediante la
adicin de fragmentos de poli-dA y de poli-dT. Estas colas sirven para unir el DNA
de diferentes fuentes y para crear molculas de DNA recombinante, que son unidas
covalentemente por tratamiento con la DNA ligasa.
ADN ligasa
Si ya conoces la replicacin del ADN, tal vez ya te hayas encontrado con la ADN
ligasa. En la replicacin del ADN, el trabajo de la ADN ligasa es unir fragmentos de
ADN recin sintetizados para formar una cadena continua. Las ligasas utilizadas en
la clonacin de ADN hacen bsicamente lo mismo. Si dos fragmentos de ADN tienen
extremos complementarios, la ADN ligasa puede unirlos para formar una molcula
sin interrupciones.
Vectores
Despus de unirse a un vector o vehculo de clonacin, un segmento de DNA puede
llegar a entrar en una clula husped y replicarse o clonarse. Los vectores son,
esencialmente, molculas de DNA transportadoras. Para servir de vector, una
molcula de DNA debe tener unas determinadas caractersticas:
1. Debe poder replicarse independientemente junto con el segmento de DNA que
transporta.
2. Debe contener algunos sitios de corte para enzimas de restriccin, presentes slo
una vez en el vector. Estos sitios de restriccin se cortan con una enzima de restriccin
y se utilizan para insertar segmentos de DNA cortados con la misma enzima.
3. Debe tener algn marcador de seleccin (normalmente genes de resistencia a
antibiticos o genes de enzimas que la clula husped no tiene) para poder distinguir
las clulas husped que transportan el vector de las que no lo contienen.
4. El vector de la clula husped debe ser fcil de recuperar. Actualmente se utilizan
tres tipos principales de vectores: los plsmidos, los bacterifagos y los csmidos.
Plsmidos
Los plsmidos son molculas de DNA de doble cadena extracromosmicas de origen
natural que tienen un origen de replicacin (ori+) y que se replican autnomamente
en las clulas bacterianas. Para poder utilizarlos en ingeniera gentica, se han
modificado o diseado muchos plsmidos de manera que contengan un nmero
limitado de sitios de restriccin y genes de resistencia a antibitico s especficos. El
vector pBR322 fue uno de los primeros plsmidos diseados que se utiliz en DNA
recombinante. Este plsmido tiene un origen de replicacin (ori+), dos genes de
seleccin (resistencia a los antibiticos ampicilina y tetraciclina), y algunos sitios de
restriccin nicos.
Mapa de restriccin del plsmido pBR322, que muestra las localizaciones de los sitios
de las enzimas de restriccin que cortan el plsmido por un solo sitio. Estos sitios
pueden utilizarse para insertar los fragmentos de DNA a clonar. Tambin se muestran
las localizaciones de los genes de resistencia a antibiticos.
Marcadores genticos
Un marcador gentico es una secuencia de ADN especfica cuya localizacin exacta
ha sido identificada en su correspondiente cromosoma y cuya herencia puede ser
rastreada. La secuencia de ADN que forma un marcador gentico puede ser un gen
completo o slo una secuencia sin funcin conocida o no codificante. Se utilizan
principalmente en el mapeo gentico como sealadores de regiones del genoma de un
determinado organismo.
Una de las caractersticas ms destacadas de los marcadores genticos es que ponen
de manifiesto el polimorfismo gentico dentro de una misma especie. Por ejemplo, el
marcador gentico de la zona que codifica para el tipo de sangre en el humano; todos
los humanos necesitan sangre pero la sangre puede ser muy diferente de un individuo
a otro debido a este polimorfismo.
Es muy frecuente que se utilice el trmino marcador molecular como sinnimo,
aunque este trmino se refiere especficamente a un tipo de marcador gentico.
PCR
La tcnica de amplificacin de ADN mediante la reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR) es una tcnica que consiste en la amplificacin in vitro de un fragmento de
ADN especfico. Para llevar a cabo el experimento de amplificacin es necesario
conocer, al menos parcialmente, la secuencia del fragmento a amplificar (un gen, una
parte de un gen, una regin no codificadora,...). Bsicamente, se trata de replicar una
y otra vez un mismo fragmento de ADN y, para ello, debemos realizar in vitro lo que
hacen las clulas in vivo para replicar su ADN.
As, se trata de disponer en un tubo de ensayo el ADN de la especie objeto de estudio.
Adems debemos aadir en dicho tubo un par de oligonucletidos que acten como
cebadores para la ADN polimerasa. La eleccin de estos oligonucletidos (cebadores
o primers) es crucial dado que han de delimitar la regin a amplificar. En concreto,
deben ser complementarios a cada uno de los extremos 3 de la regin a amplificar:
Una vez tenemos todos los componentes en nuestro tubo de reaccin (Figura 1),
tenemos que favorecer de alguna forma que ocurra la sntesis de ADN. Para ello, lo
primero que debemos hacer es facilitar la desnaturalizacin del ADN. A continuacin,
permitir el alineamiento de los primers (apareamiento con su regin complementaria)
y, por ltimo, facilitar que la polimerasa lleve a cabo la sntesis de ADN utilizando
como cebadores los extremos 3 de los primers utilizados. As, nuestra reaccin
constara de 3 pasos:
1. Desnaturalizacin. Se conseguira elevando la temperatura del tubo de reaccin
hasta 94oC, durante, por ejemplo, un minuto (este tiempo puede variar entre
minuto y 2 minutos)
2. Alineamiento. Se desciende la temperatura hasta una temperatura que puede
oscilar entre 40 oC y 60 oC (dependiendo de diversos parmetros como la secuencia
de los primers, su especificidad,...). La duracin de este paso puede oscilar entre
minuto y 2 minutos.
3. Extensin. Se vuelve a aumentar la temperatura hasta los 72 oC y se deja actuar a
la Taq polimerasa durante 1 2 minutos.
Estos tres pasos constituyen un ciclo. La repeticin de este ciclo unas 40 veces, por
ejemplo, permite obtener, como resultado de un experimento de amplificacin,
millones de copias del fragmento de inters.
Todo esto, por supuesto, se realiza de forma automatizada. Para ello, los tubos de
reaccin se introducen en un termociclador que de forma automtica realiza los 40
ciclos de amplificacin.
ADNc
Se puede construir una biblioteca que represente los genes que se estn transcribiendo
en una clula eucaritica en un momento dado, utilizando el mRNA aislado de esa
clula. Casi todas las molculas de mRNA eucaritico tienen una cola de poli-A en
su extremo 3'. Primero, se hibrida la poblacin de molculas de mRNA que tienen
colas de poli-A 3' con oligo-dT (DNA corto de cadena sencilla formado slo por
desoxitimidina).
La secuencia de oligo-dT hibrida con la cola de poli-A, y sirve de cebador para la
sntesis de una cadena complementaria de DNA utilizando la enzima
retrotranscriptasa. Esta enzima es una DNA polimerasa dependiente de RNA que
copia un molde de RNA de cadena sencilla en un DNA de cadena sencilla. El
resultado es un dplex RNA DNA de doble cadena. La cadena de RNA se elimina
tratndola con la enzima ribonucleasa H. Entonces, la cadena sencilla de DNA se
utiliza como molde para sintetizar la cadena complementaria de DNA, utilizando la
DNA polimerasa I. El extremo 3' de la cadena sencilla de DNA se dobla sobre s
mismo formando una horquilla (un lazo), por lo que puede servir de cebador para
sintetizar la segunda cadena. El resultado es un DNA dplex con las cadenas unidas
por un extremo. La horquilla puede abrirse utilizando la enzima nucleasa S1
obtenindose una molcula de DNA de doble cadena (denominada DNA
complementario o cDNA), cuya secuencia nudeotdica deriva de una molcula de
RNA.
Si se aade un trozo corto de DNA con sitios de restriccin en cada uno de sus
extremos, el cDNA puede clonarse. Este sitio de clonacin puede cortarse con la
enzima de restriccin adecuada, produciendo extremos cohesivos, lo que permite que
el cDNA se inserte en el sitio de restriccin de un vector plasmdico o fgico.
Una biblioteca de cDNA es diferente a una biblioteca genmica ya que representa
slo un subconjunto de todos los genes del genoma, no contienen las secuencias
promotoras adyacentes al gen y tampoco contienen los intrones, ya que stos han sido
eliminados del pre-mRNA durante la maduracin del mismo. Las bibliotecas de
cDNA utilizan mRNA como punto de partida, de manera que slo representan a las
secuencias que se estn expresando en un tipo celular, en un tejido, o en un estadio
concreto del desarrollo embrionario. La decisin de construir una biblioteca genmica
o de cDNA depende del problema planteado. Si se est interesado en un gen
particular, podra ser ms fcil preparar una biblioteca de cDNA del tejido en el que
se expresa dicho gen. Por ejemplo, los glbulos rojos producen grandes cantidades de
hemoglobina, y la mayora del mRNA de estas clulas es mRNA de la -globina. Una
biblioteca de cDNA preparada utilizando mRNA aislado de glbulos rojos permite
aislar con facilidad un gen de la globina. Si nos interesasen las secuencias reguladoras
adyacentes al gen de la globina, necesitaramos construir una biblioteca genmica, ya
que estas secuencias reguladoras no se encuentran en el mRNA de la globina, y por
lo tanto no estaran representadas en la biblioteca de cDNA.
Produccin de cDNA a partir de mRNA. Puesto que muchos mRNA eucariticos
tienen una cola poliadenilada de longitud variable, en su extremo 3', un
oligonucletido poli-dT corto puede hibridarse a ella. El poli-dT acta de cebador de
la enzima retrotranscriptasa, que utiliza al mRNA como molde para sintetizar una
cadena de DNA complementaria. Se forma una horquilla caracterstica al terminarse
la sntesis de la cadena de DNA. Se elimina el mRNA por tratamiento alcalino del
complejo, y se utiliza la DNA polimerasa para sintetizar la segunda cadena de DNA.
La nucleasa S1 se utiliza para abrir la horquilla; el resultado es una molcula de cDNA
de doble cadena que puede clonarse en un vector adecuado, o utilizarse como sonda
para rastrear una biblioteca.
Sondas de ADN
Una sonda es un fragmento de ADN (o raramente ARN) de pequeo tamao
(normalmente entre 100 y 1000 bases) usado en biologa molecular como herramienta
para detectar la presencia de ADN o ARN de secuencia complementaria parecida o
igual.
En su uso, la sonda se une a la secuencia diana monocatenaria (ADN1c o ARN)
mediante un mecanismo de hibridacin que forma una estructura bicatenaria, una de
las hebras pertenece a la sonda, y la otra a la secuencia diana. Esta unin se establece
porque tanto la sonda como la diana tienen secuencias en parte o totalmente
complementarias, formndose pares de bases complementarias.
En definitiva una sonda de ADN es un mtodo molecular que consta de una secuencia
de ADN de un microorganismo de inters, que puede ser utilizada para detectar un
ADN homlogo o secuencias de ARN. El ADN de la sonda se hibrida con el ADN
del organismo que se quiere detectar, unin que como puedes suponer, se establece
porque ambas molculas tienen secuencias complementarias, formndose as pares de
bases complementarias. Para conocer si esto ha sucedido se utilizan marcadores
fciles de detectar en un equipo que mida el cambio. Estos marcadores pueden ser de
varios tipos. Los ms utilizados son los siguientes:
Radioistopos: para marcar radiactivamente la sonda se utilizan nucletidos que
contienen alguno de sus tomos un istopo radiactivo. Estos marcadores son muy
sensibles, pero entraan ciertos riesgos para la salud.
Anticuerpos: en este caso las sondas se marcan utilizando nucletidos que llevan
unida una molcula llamada digoxigenina. A esta molcula se unen anticuerpos
especficos que llevan asociados un compuesto luminiscente que permite conocer el
resultado del anlisis.
Una de las aplicaciones de las sondas de ADN es el anlisis de alimentos, ya que es
un mtodo rpido, especfico y sensible, que se puede utilizar por ejemplo para
detectar la presencia de patgenos y de organismos modificados genticamente.
Independientemente de la naturaleza de la sonda utilizada (ADN o ARN), las
hibridaciones efectuadas sobre cidos nucleicos inmovilizados en membranas o in
situ, sern de tipo Southern cuando se use ADN como diana a detectar y de tipo
northern cuando la diana a detectar sea mayoritariamente de ARN.
Southern blot, hibridacin Southern o, simplemente, Southern es un mtodo de
biologa molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una
mezcla compleja de este cido nucleico. Para ello, emplea la tcnica de electroforesis
en gel de agarosa con el fin de separar los fragmentos de ADN de acuerdo a su
longitud y, despus, una transferencia a una membrana en la cual se efecta la
hibridacin de la sonda. Su nombre procede del apellido de su inventor, un bilogo
ingls llamado Edwin Southern.
Northern blot es una tcnica de deteccin de molculas de cido ribonucleico (ARN)
de una secuencia dada dentro de una mezcla compleja (por ejemplo, un ARN
mensajero para un pptido dado en una extraccin de ARN total). Para ello, se toma
la mezcla de ARN y se somete a una electroforesis en gel a fin de separar los
fragmentos en base a su tamao. Tras esto, se transfiere el contenido del gel, ya
resuelto, a una membrana cargada positivamente en la cual se efecta la hibridacin
de una sonda molecular marcada radiactiva o qumicamente. El nombre de la tcnica
deriva de la tcnica anterior. El northern blot fue desarrollado en 1977 por James
Alwine, David Kemp y George Stark en la Universidad de Stanford.
Sntesis Gnica
El servicio de Sntesis de Genes de Biomedal est diseado para sintetizar genes de
novo a partir de la secuencia deseada. En contraste con la sntesis de oligonucletidos,
con la que solo se puede obtener ADN de cadena sencilla de hasta 140 pb
aproximadamente, con la Sntesis de Genes se pueden producir rutinariamente genes
sintticos de doble cadena de hasta 3.000 pb
Gel Electroforesis
La electroforesis en gel es un grupo de tcnicas empleadas por los cientficos para
separar molculas basndose en propiedades como el tamao, la forma o el punto
isoelctrico. La electroforesis en gel se utiliza generalmente con propsitos analticos,
pero puede ser una tcnica preparativa para purificar molculas parcialmente antes de
aplicar espectrometra de masas, PCR, clonacin o secuenciacin de ADN
Secuencia de ADN
En cierto sentido, la caracterizacin definitiva de un segmento de DNA clonado es la
determinacin de su secuencia de nucletidos. La capacidad de secuenciar DNA
clonado ha permitido grandes avances en el conocimiento de la estructura gnica y de
los mecanismos de regulacin. Aunque desde la dcada de los 40 hay tcnicas que
permiten determinar la composicin de bases del DNA, fue en la dcada de los 60
cuando se desarrollaron los mtodos para determinar la secuencia de los nucletidos.
En 1965, Robert Holley determin la secuencia de una molcula de tRNA que
contena 74 nucletidos. Se necesit un ao de esfuerzo para realizar este trabajo. En
la dcada de los 70 se desarrollaron mtodos ms eficientes de secuenciacin y,
actualmente, en un laboratorio de Biologa Molecular, es posible secuenciar ms de
1.000 bases en una semana.
Un mtodo de secuenciacin de DNA diseado por Alan Maxam y Walter Gilbert
utiliza productos qumicos para cortar el DNA. Este mtodo se utiliz para determinar
la secuencia de bases de los 4.362 nucletidos del plsmido pBR322. El segundo
mtodo, que es el que generalmente se utiliza, lo desarrollaron Frederick Sanger y sus
colaboradores. El mtodo de Sanger se basa en la elongacin 5' 3' de las molculas
de DNA por la DNA polimerasa. Ambas estrategias generan un conjunto de
molculas de DNA de cadena sencilla de diferentes longitudes. Para determinar la
secuencia de los nucletidos en un segmento de DNA, ambos mtodos utilizan una
serie de cuatro reacciones, realizadas en tubos separados. Estas secuencias, cuya
diferencia en tamao es de un solo nucletido, se separan por electroforesis en gel en
cuatro carriles adyacentes. El resultado es una serie de bandas que forman un patrn
parecido a una escalera. La secuencia puede leerse directamente del patrn de bandas
de los cuatro carriles. Los secuenciadores automticos de DNA utilizan colorantes
fluorescentes en vez de sondas radioactivas. Se utilizan cuatro colorantes,
produciendo un patrn de picos de colores que, al leerlos, proporcionan la secuencia
de DNA.
BIBLIOGRAFA
pea, a., arrollo, a., armandogomez, & Lopez, r. (2004). Bioquimica. mexico.
rodes, J., pique, J., & trilla, n. (2007). libros de salud del hospital clinico de barcelona y
fndacion bbva. barcelona: ISBN.
UNIVERSIDAD TCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADMICA DE CC. AGR.
ESCUELA DE INGENIERA AGRONMICA
GENTICA
Ciclo: Quinto A
GENTICA
Ciclo: Quinto A
BIBLIOGRAFA
Andrade, D. (13 de Agosto de 2009). Materialgeneticos Blog. Obtenido de
Materialgenitios Blog: https://materialgenetico.wordpress.com/adn-acido-
desoxirribonucleico/
Becerril, I. M. (2003). ELECTROFORSIS . Obtenido de ELECTROFORSIS :
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Exposicion_electroforesis_5087.pdf
biotecnologia, S. e. (2000). Plantas transgenicas . Espaa : Isebiot.
Brown, T. (2008). Genomas . Buenos aires : editorial medicinas panama.
Ecuared. (2007). Ecuared conocimientos con todos y para todos . Obtenido de Ecuared
conocimientos con todos y para todos :
https://www.ecured.cu/Transcripci%C3%B3n_del_ADN
galindo, a., Avedao, R., & Angulo, A. (2009). biologia basica bachillerato. Sinaloa.
Gonzlez, C. A. (2012). Bienvenidos al Gabinete de Botnica del CNBA. Obtenido de
Bienvenidos al Gabinete de Botnica del CNBA:
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/Dibulgeneral/PCR/PCR.htm
Komsk, L. (30 de junio de 2014). wako reactivo para investigaciones. Obtenido de wako
reactivo para investigaciones: http://www.wakolatinamerica.com/blog-
reactivos/post/10-metodos-de-extraccion-de-adn/
Mazzotta, G. C. (2003). Identificacion por ADN. Buenos aires .
Miarro, J. R. (2015). quimicaweb. Obtenido de quimica web:
http://www.quimicaweb.net/Web-
alumnos/GENETICA%20Y%20HERENCIA/Paginas/5.htm
Octavo., A. E. (14 de septiembre de 2009). Blog educativo para la mediacin en la
enseanza de Ciencias Naturales y Educacacin Ambiental. Obtenido de Blog
educativo para la mediacin en la enseanza de Ciencias Naturales y Educacacin
Ambiental.: http://rbastom08.blogspot.com/2009/09/concepto-y-generalidades-
de-genetica.html
solari, A. (2004). Genetica humana. Buenos Aires: Editoriales Panama.