Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia

Ingeniera Agronmica, Manejo de enfermedades

Elaborado por Mnica Patio

AISLAMIENTO DE HONGOS FITOPATOGENOS A PARTIR DE SUELO PROCEDENTE

DE CULTIVOS AFECTADOS.

El suelo contiene muchos microrganismos saprfitos los cuales pueden crecer si una
porcin de una solucin del suelo si se siembra en un medio de cultivo. Para aislar un
patgeno del suelo sin que haya interferencia de microorganismos saprofitos es necesario
realizar diluciones del suelo y sembrarlos en medios de cultivo ideales, de esta es forma es
posible aislarlos en forma selectiva.

Objetivo.
Ensearle al estudiante las diferentes formas de aislar y purificar hongos y bacterias
fitopatgenos del suelo.

Materiales

Suelo agrcola de diferentes lotes tamizado (250 gr)

Erlenmeyer de 200 ml con 100 ml de agua destilada estril
Tubos de ensayo con 9 ml de agua destilada estril (6)
Compoteros estriles
Jeringas de 5 ml estril (1)
Gradillas para tubos
Medios selectivos (para hongos o bacterias)
Mecheros.
Incubadora de precisin (25C)
Toallas esterilizadas.
Pauelos faciales sin olor

Procedimiento.

a) Pese 12 gramos de suelo hmedo o 10 gramos de suelo seco.

b) Agregue el suelo en un Compotero estril con 100 ml de agua destilada estril, esta
corresponde a la primera dilucin que corresponde a 1:10.
c) Agite en el recipiente durante 15 minutos sin permitir que las partculas del suelo se
sedimenten.
d) Rotule los tubos como se ve en la figura nmero 1.
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e) Con la aguja estril transfiera un 1 ml a un tubo de ensayo con 9 ml de agua destilada

estril agite por tres minutos vigorosamente, esta dilucin corresponde a 1:100.
f) A partir de la anterior dilucin transferir 1 ml al tubo marcado con 1:1000 agite por
tres minutos vigorosamente.
g) A partir de la anterior dilucin transferir 1 ml al tubo marcado con 1:10000 agite por
tres minutos vigorosamente.
h) A partir de la anterior dilucin transferir 1 ml al tubo marcado con 1:10000 agite por
tres minutos vigorosamente.
i) Tome 1 ml de las suspensiones de 1:100 y 1:1000 simbrelas por estriacin en las
cajas de Petri con medio de cultivo Papa dextrosa Agar
j) Tome 1 ml de las suspensiones de 1:10000 y 1:100000 simbrelas por estriacin en
las cajas de Petri con medio de cultivo Agar nutriente.
k) Distribuya en forma homognea la suspensin en cada medio de cultivo.
l) Deje en incubacin las cajas a una temperatura de 25C por 3 a cinco das.
m) Luego del periodo de incubacin seleccione las cajas que presenten colonias
aisladas, observe las diferencias en tamao, forma y pigmentacin
n) Segn el medio diferencial, seleccione las cajas que contengan mayor nmero de
hongos o bacterias y cuantifique

ACTIVIDADES.

Realice los clculos segn lo observado en el crecimiento en cajas de Petri.

Realice una descripcin de las colonias bacteriales
Describa la macromorfoga de las colonias fngicas.
Las colonias ms numerosas de hongos realicen montajes en microscopio con el
mtodo de cinta adhesiva y posteriormente realice su identificacin.
Clculos.
El nmero de hongos y bacterias por gramo de suelo, se calcula multiplicando la media
aritmtica de nmero de colonias por caja, por el factor de dilucin y dividiendo por el peso
seco del suelo, segn la frmula:

Microorganismos / gramos suelo = Media aritmtica nmero de colonias x factor de dilucin

Peso seco del suelo
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Clasificacin de las colonias bacteriales y fngicas.

Caractersticas macromorfolgica de las colonias fngicas.

Tipos de Forma Elevacin Margen Desarrollo
hongos
Ascomycetes o Circular o por
Pulvinada Entero Abundante
levaduriformes esporangios
Zigomycetes o
Filamentosa Convexa Lobulada Abundante
acuticos
Zygomyectes
Irregular Umbonada Ondulado Abundante
terrestres
Filamentosa
Basidiomycetes Umbonada Lobulada Abundante
definida
Deuteromycetes Rizoide Elevada Lobulada Abundante

Morfologa de las estructuras reproductivas de los hongos.

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