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FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES INSTITUTO DE BIOLOGIA GENETICA GENERAL y LABORATORIO Práctica de

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES INSTITUTO DE BIOLOGIA GENETICA GENERAL y LABORATORIO

Práctica de Laboratorio

Manejo de Drosophila melanogaster y Reconocimiento de Mutaciones

I. Introducción: La Drosophila empezó a ser utilizada en 1909 para la investigación

genética por T. Morgan y desde entonces es el organismo más ampliamente utilizado en todos los niveles, desde las más básicas demostraciones de los principios mendelianos, tales como cruces monohíbridos, dihíbridos y herencia ligada al sexo, hasta las más refinadas investigaciones en Genética Molecular. La preponderancia del uso de la Drosophila se debe a que ofrece entre otras, las siguientes ventajas:

a. Ciclo de vida relativamente corto

b. Gran número de hijos

c. Cultivo a bajo costo

d. Espacio reducido para el mantenimiento de los cultivos

e. Gran número de cepas con marcas específicas o con cromosomas especiales

f. Además, para estudios de citogenética, tiene la importancia de poseer sólo cuatro pares de cromosomas homólogos y de tener en sus glándulas salivares cromosomas politénicos, los cuales pueden ser unas 1000 veces más gruesos y 100 veces más largos que los cromosomas ordinarios.

II. Objetivos:

a. Familiarizar a los estudiantes con las técnicas necesarias para utilizar la Drosophila melanogaster en la experimentación.

b. Reconocer en forma práctica las diferentes etapas del ciclo biológico de la Drosophila melanogaster

c. Aprender a identificar los dos sexos en Drosophila melanogaster

d. Reconocer el fenotipo normal de Drosophila melanogaster e identificar algunas de las mutaciones utilizadas como marcas genéticas

III. Materiales: para todos los experimentos con Drosophila melanogaster:

a. Pincel suave (#0 ó #1)

b. Embudo de plástico

c. Esponja de espuma, caucho u otro material blando (10x15x4cm)

d. Cartón o lámina de plástico de superfície lisa y clara (15x8cm)

e. Frascos de vidrio de boca ancha de aproximadamente 200 mL

f. Gasa y algodón para fabricar los tapones

g. Eter etílico

h. Estereomicroscopio o lupa

i. Cepas con marcas (mutaciones) específicas

j. Medio de cultivo (Melasa 10%, harina de maíz 10%, ácido propiónico 0.5%, agar- agar 0.6%, levadura 3%)

IV.

Procedimiento:

a. Manejo de Drosophila melanogaster

i. Eterización de las moscas: Para observar las moscas adultas se deben dormir por medio de éter. Para el efecto se golpea suavemente la parte inferior del frasco de cultivo sobre una superficie blanda y luego invierte, rápidamente y sin el tapón, sobre la boca de un embudo que se ha introducido previamente por su parte angosta a un frasco limpio, luego con golpes suaves se hacen precipitar las moscas hacia el frasco limpio, una vez depositadas las moscas allí, rápidamente se cambia el embudo por un tapón de algodón impregnado con éter hasta que las moscas se hayan dormido (15-20 segundos). ii. Obtención de hembras vírgenes: para poder llevar a cabo un experimento controlado, es necesario obtener hembras que no hayan sido fecundadas. Esto se garantiza separándolas de los machos antes de que transcurran 12 horas después de su nacimiento.

b. Observación del ciclo de vida de la Drosophila melanogaster: el ciclo completo dura diez días a temperatura promedio de 25°C, pero puede alterarse su duración si se cambia la temperatura.

puede alterarse su duración si se cambia la temperatura.

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Genenzima/ciclovid.htm

i. Huevo: su tamaño aproximado es de 0.2 a 0.5 mm, se les encuentra en la superficie del medio de cultivo. Los huevos fecundados presentan, en la parte anterior, dos filamentos para flotar sobre el alimento y tienen una duración de un día. Es suficiente una sola fecundación para que la hembra continúe depositando huevos.

ii. Larvas: se alimentan a expensas del medio de cultivo abriendo surcos en éste. Existen tres estadios larvales, a saber: primer estadio, duran un día, sufren una muda y se convierten en larvas de segundo estadio, las cuales duran igualmente un día, éstas sufren otra muda y se convierten en larvas de tercer estadio, estas últimas duran dos días.

iii. Pupas: las larvas de tercer estadio migran del medio de cultivo a las paredes secas del recipiente y allí se transforman en pupas, las cuales no se alimentan y duran cuatro días.

iv. Adultos: salen directamente de la pupa y miden aproximadamente 0.3 cm. Las moscas recién nacidas son pálidas y poseen alas arrugadas, poco a poco las alas van abriendo y el cuerpo se va oscureciendo. Los adultos pueden vivir de uno a tres meses de acuerdo con los cuidados que tengan. Para la observación de los distintos estadios, retire del cultivo huevos, larvas, pupas y adultos, y obsérvelos bajo un estereomicroscopio.

c. Diferencias entre machos y hembras

un estereomicroscopio. c. Diferencias entre machos y hembras http://web.educastur.princast.es i. En los machos existe el

http://web.educastur.princast.es

i. En los machos existe el “peine sexual”, formado por cerdas más oscuras y localizado en el primer par de patas.

ii. En el abdomen de la hembra se observan siete segmentos, mientras que el macho sólo se observan cinco y presenta un oscurecimiento de la parte Terminal del abdomen.

iii. Los machos poseen arco genital en el extremo posteroventral del abdomen.

iv. Los machos tienen menor tamaño que las hembras.

d. Fenotipo normal en Drosophila melanogaster:

i. Cuerpo: color miel

ii. Ojos: redondos, color rojo

iii. Alas: rectas, con venas longitudinales y transversales

v. Halterios: vesículas para el balanceo durante el vuelo

e. Reconocimiento de mutaciones: una vez que usted ha estudiado el ciclo vital de la Drosophila melanogaster, ha aprendido a diferenciar los machos y las hembras y que ha reconocido las características morfológicas del adulto norma (silvestre o Canton) podemos estudiar algunas características diferentes debidas a mutaciones.

Mutación

Nombre

Ubicación

Fenotipo

vg

vestigial

Crs 2

Alas vestigiales

dp

dumpy

Crs 2

Alas truncadas y cuerpo más redondo y corto

v

vermillion

Crs 1 (X)

Ojo bermellón

se

sepia

Crs 3

Ojo color pardo oscuro

w

white

Crs 1 (X)

Ojo blanco

pm

plum

Crs 2

Ojo más oscuro que el silvestre, pero menos que el sepia

y

yellow

Crs 1 (X)

Cuerpo de color amarilo

e

ebony

Crs 3

Cuerpo oscuro (ébano)

bw

brown

Crs 2

Ojo color café

B

Bar

Crs 1 (X)

Ojo estrecho, en barra

Cy

Curly

Crs 2

Alas crespas

m

miniatura

Crs 1 (X)

Alas y cuerpo pequeño

f

forked

Crs 1 (X)

Quetas ahorquilladas y recortadas

cv

crossveinless

Crs 1 (X)

Alas sin venas transversales

 

f.

Símbolos utilizados para designar las mutaciones en Drosophila melanogaster: los genes que producen fenotipo normal se representan con el símbolo de la mutación acompañado del signo (+). Ej. e+ indica alelo normal para el color del cuerpo; las mutaciones recesivas se representan con letras minúsculas y las dominantes con letras mayúsculas. Las mutaciones que están en diferentes cromosomas se separan por punto y coma, ej. (♀ w;e = hembra de ojos blancos y cuerpo oscuro, ♂ w+;e+ = macho de ojos rojos y cuerpo miel)

V.

Referencias

 

a. Moreno J, Zuleta M. 1973. Técnicas empeladas en el manejo de la Drosophila y estudio de su ciclo biológico. Actual. Biol. vol 2, # 4.

b. Demerc and Haufman. 1969. Drosophila guide. Washington D.C. Crnegie Institution

of Washington.

c. Hudock GA. 1967. Experiments in genetic. New Yor, John Wiley and Sons, Inc.

d. Strickberger MW. 1962. Experiments in genetics with Drosophila. New York, John Wiley and Sons, Inc.