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FACULTAD DE CIENCIAS

EXACTAS Y NATURALES

GENETICA GENERAL
Prctica de Laboratorio

Aislamiento de ADN: a Partir de Cultivos Bacterianos

I. Introduccin

Todo estudio de gentica molecular implica la disponibilidad de muestras de cidos


nucleicos. En la gran mayora de los casos el material utilizado es el ADN. Las cantidades
necesarias de ADN para realizar estos estudios son nfimas, ya que con unos pocos
microgramos es suficiente.

La mayora de las tcnicas de aislamiento de cidos nucleicos son relativamente sencillas y


tan slo requieren evitar la destruccin enzimtica o mecnica de los mismos.

Para el aislamiento de ADN se han desarrollado diversos procedimientos que se pueden


llevar a cabo usando sistemas automticos o manuales.

II. Objetivos

a. Adquirir experiencia en el aislamiento de ADN de clulas procariticas


b. Comparar visualmente las diferencias en la separacin electrofortica de un ADN
procaritico y un ADN eucaritico

III. Materiales, Equipos y Reactivos

a. Caldo de cultivo con bacterias


b. Gradilla y tubos cnicos de 15 mL para centrfuga
c. Solucin NaOH 0.2N-SDS 1%
d. Etanol absoluto
e. Micropipetas y puntas de 1000, 200 y 10 L
f. Tubos de reaccin de 1.5 mL
g. Agua destilada estril
h. Agitador vrtex
i. Descartadores
j. Centrfuga Clnica
k. Cmara de electroforesis horizontal
l. Agarosa, buffer de carga y buffer de corrido
m. Muestras de ADN eucariticos (genmico y fragmentos)
IV. Procedimiento

a. Tomar 5 mL de cultivo de bacterias


b. Centrifugar durante 5 minutos, 1200 rpm
c. Descartar el sobrenadante
d. Resuspender el precipitado en 800 L de agua destilada con la ayuda del vrtex
e. Adicionar 1.6 mL de solucin NaOH 0.2N-SDS 1%
f. Mezclar por inversin suavemente
g. Adicionar 2.4 mL de etanol absoluto fro
h. Mezclar por inversin hasta que se forme la malla de ADN
i. Transferir el ADN a un tubo de reaccin, que contenga 200 L de agua, con la ayuda de
una punta de micropipeta o pipeta Pasteur
j. Realizar una separacin electrofortica de las muestras obtenidas en gel de agarosa,
incluyendo con el ADN eucaritico para comparacin

V. Referencias
a. Zuleta M y M Camargo. Experimento sobre segregacin de un par de genes alelos con
dominancia completa. Actualidades Biolgicas. Vol 2. No. 5. Jul-sept. 1973
b. Strickberger M W. Genetics. 1968. The McMillan Company. New York
c. SRB A M., Owen R D y Edgar R S. Gentica General. Ed. Omega S.A. 1968
d. Lamotte M y Heritier P L. Biologa General: Leyes y mecanismos de la herencia. Ed.
Alambra.
e. Stanfield W D. Gentica. 3 Edicin. McGraw-Hill Interamericana de Mxico S.A. 1992
f. Ramos P, Abundis H M, Gaytn J C y otros. Manual de Laboratorio de gentica para
Drosophila melanogaster. McGraw-Hill Interamericana de Mxico S.A. 1993

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