INFORME N 2

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL MEDICINA VETERINARIA

ASIGNATURA:
MVZ. PhD. Carola Trinidad Melo Rojas
DOCENTE:

DISCENTE:
 Informe N 2

EXTRACCIN, CUANTIFICACIN E INTEGRIDAD DEL DNA

Cristbal S. Huamani Carrin1

1. INTRODUCCIN

Ya que los procesos genticos son esenciales para la comprensin de la vida misma,
muchos piensan que la disciplina de gentica se asienta en el centro de la biologa. La
informacin gentica dirige la funcin celular, determina en gran medida la apariencia
externa de los organismos y sirve de unin entre generaciones en todas las especies. En s
mismo, el conocimiento gentico es esencial para la comprensin completa de otras
disciplinas, como la biologa molecular, la biologa celular, fisiologa, evolucin, ecologa,
sistmica y etologa. Por consiguiente, la gentica unifica la biologa y constituye su
ncleo (Klug y Cummings, 2006). El DNA est constituido por dos cadenas de
nucletidos, formando una doble hlice, a manera de escalera enrollada, su estabilidad se
debe a la formacin de puentes de hidrgeno, adems existe la presencia de enlaces entre
bases nitrogenadas (A-T; G-C) y enlaces disulfuro. El modo de replicacin es
semiconservativo. Y una extraccin del DNA tiene una gran importancia en los procesos
de investigacin, identificacin de la paternidad, para el diagnstico de enfermedades y los
trastornos genticos (enfermedades hereditarias), en caso de criminalsticas y en casos de
medicina forense (Bustoset al, 2011; Agostino, 2012). Orfao (2012), menciona el
procedimiento general de extraccin de cidos nucleicos, que consisten en tres etapas
consecutivas: disgregacin de las clulas o tejidos (lisis celular), inactivacin de las
nucleasas intracelulares y en separacin de los cidos nucleicos de los dems componentes
celulares. El objetivo de la extraccin y purificacin de las muestras est determinada por
la pureza, integridad y funcionalidad de las mismas, para un correcto anlisis en PCR. Por
tanto, una buena muestra implica siempre un correcto proceso de obtencin de esta
molcula a partir de material biolgico (Casademont, 2009). Para saber, qu cantidad y
calidad se obtuvo de la extraccin usamos tres metodologas. El uso de la plataforma Qubit
provee una medicin de las muestras rpida y fcil, obtenindose la lectura directamente en
la pantalla del instrumento Fluormetro Qubit (Invitrogen, 2007).

El presente informe rene, describe, compara y discute con las informaciones existentes y
los uso de metodologa y los resultados a partir de la extraccin, purificacin y
cuantificacin del DNA de la prctica realizada.

2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo general

- Obtener cantidad necesaria de muestras de DNA pura para su posterior secuenciacin.

1
Estudiante de Gentica animal; Medicina Veterinaria Sede Marangani; UNSAAC
Marangani; 28 de Julio de 2017
crishuaHC@gmail.com
1
2.2. Objetivos especficos

- Extraccin de DNA: Obtener DNA pura a partir de una muestra de sangre de vicua
para su posterior cuantificacin.
- Cuantificacin e integridad del DNA: Conocer si se hizo bien la extraccin del
DNA.

3. REVISIN BIBLIOGRFICA

Las caractersticas de un organismo estn especificadas en su informacin gentica, la cual

est representada como una secuencia de cidos nucleicos, donde la suma total de esta
secuencia es lo que conforma su genoma. El DNA es un cido nucleico, y los nucletidos
son las piezas que forman todas las molculas de DNA, estos unidades estructurales, que a
veces se denominan mononucletidos, constan de tres componentes esenciales: una base
nitrogenada (purinas; A, G y pirimidinas; C, T), azcar desoxirribosa, y un grupo fosfato.
La unin entre dos mononucletidos consiste en un grupo fosfato unido a dos azcares. Se
forman entonces un enlace fosfodister, ya que el cido fosfrico se une a dos alcoholes.
Cada estructura tiene un extremo C-5 uno C-3. La unin de muchos nucletidos forman
polinucletidos de cadenas largas. El emparejamiento especfico entre las bases A=T y
GC forma la complementariedad, que describe la afinidad qumica entre las bases
proporcionada por los puentes de hidrogeno. En 1953 Watson y Crick propusieron que la
estructura del DNA tiene la forma de una doble hlice (Klug y Cummings, 2006).

Muchas tcnicas anlticas son tiles para la investigacin del DNA y el RNA: absorcin
de la luz ultravioleta (UV) (los cidos nucleicos presentan mayor absorcin de luz
ultravioleta a 254-260 nm de longitud de onda debido a la interaccin entre la luz UV y los
sistemas anulares de las purinas y de las pirimidinas, el anlisis de UV se utiliza en muchos
protocolos establecidos para separar molculas), comportamiento de sedimentacin (las
mezclas de cidos nucleicos se puede separar sometindolas a uno o varios de los posibles
procedimientos de centrifugacin; se centrifuga esta mezcla a altas revoluciones en una
ultracentrfuga, entonces la mezcla de molculas emigrar hacia abajo, luego la
centrifugacin se detiene y se eluye el gradiente del tubo y se mide con espectrofotmetro),
desnaturalizacin y renaturalizacin de los cidos nucleicos, hibridacin molecular,
hibridacin in situ fluorescente, cintica de reabsorcin y DNA repetitivo,
electroforesis de cidos nucleicos (tcnica importante que separa o resuelve, fragmentos
de DNA de distintos tamaos hacindola migrar bajo la influencia de un campo elctrico;
se coloca la muestra en una sustancia porosa que puede ser un gel semislido) (Klug y
Cummings, 2006).

En la actualidad, el estudio de la variacin gentica entre individuos, poblaciones y

especies para explicar patrones y procesos ecolgico-evolutivos se aborda mediante
marcadores moleculares, segmentos de DNA con o sin funcin conocida que proporcionan
informacin sobre la variacin allica y permiten distinguir individuos. Estos marcadores
se obtienen con tcnicas como la PCR (por sus siglas en ingls Polymerase Chain
Reaction) y con un detalle sin precedentes. Los datos moleculares han permitido estudiar
con mayor precisin los patrones de diversidad gentica y su distribucin; el
comportamiento; la seleccin natural; las interacciones biolgicas, etc. La aplicacin de
tcnicas moleculares inicia con la extraccin de DNA y la obtencin exitosa de datos
confiables y reproducibles depende en gran medida, de la extraccin de DNA ntegro y
puro (Alejos et al, 2011).
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La extraccin de DNA a partir de muestras de distinta naturaleza, constituye la etapa
previa de todo anlisis gentico. Obtener DNA relativamente puro y amplificable resulta
fundamental para los posteriores usos a los que ser destinado. Esta tarea demanda una
puesta a punto de las tcnicas de extraccin utilizadas, con el objeto de determinar las
condiciones ideales en las que se obtendrn un mximo rendimiento. Quizs de los
procedimientos en biologa molecular, el ms bsico es la purificacin de cidos nucleicos,
en la forma de ADN o ARN. Por lo tanto se requiere mtodos seguros para la separacin
de estos componentes de las clulas. Para lograr esto, se utilizan diversos mtodos de
extraccin dependiendo del tipo de tejido a emplear, fresco, seco o congelado. En general,
los mtodos de extraccin de DNA tiene una serie de pasos bsicos, que se cumplen
independientemente del origen de muestra. Estos son: disrupcin celular (ruptura de la
bicapa lipdica de las membranas celulares por tratamiento con detergente, agentes
quilantes), eliminacin de las protenas (que constituyen los principales contaminantes del
extracto), concentracin del DNA (por precipitacin con alcoholes), lavados (para eliminar
restos de reactivos y solventes que puedan inhibir la Taq polimerasa) y resuspensin. Para
muestras de sangre en particular, distintos protocolos han sido descritos y publicados,
pudindose diferenciar bsicamente dos alternativas metodolgicas, las cuales difieren en
la etapa de purificacin de las protenas del extracto. As podemos encontrar mtodos que
aprovechan las propiedades desnaturalizantes que tienen ciertos disolventes como
cloroformo, fenol, etc., y aquellos fundamentados en el conocido cambio de solubilidad
que experimentan las protenas cuando son sometidas a modificaciones en la
concentraciones de sales (Reira et al, 2010).

Cada mtodo de la extraccin se caracteriza por su alcance, rendimiento y calidad de las

muestras de DNA obtenidas. La calidad de las muestras obtenidas est determinado por la
pureza, integridad, y funcionalidad de las mismas. La pureza de la muestra est relacionada
con el valor de mxima absorbancia de los cidos nucleicos detectada a una longitud de
onda de 260 nm, la electroforesis en gel de agarosa al 0.7% (p/v), permite la valoracin de
la integridad de la muestra de DNA. Si la una muestra es ntegra presentar una banda de
DNA nica perfectamente definida en la parte superior del gel agarosa. Una muestra de
DNA degrada presentar una estela o smear a lo largo del gel que ser ms pronunciada
cuanto mayor sea la degradacin de la muestra. El hecho de que una enzima de tipo DNA
polimerasa pueda actuar sobre una muestra de DNA como molde de la reaccin PCR es
indicativo de que la pureza de la muestra es ptima permitiendo observar su funcionalidad
(Orfao, 2012).

El mtodo de extraccin con kit comercial de columnas de purificacin: La extraccin

con kit comercial es un mtodo rpido para aislar DNA a partir de tejidos. En el laboratorio
se emplea un kit de INVITROGEN que usa una tecnologa avanzada membranas de
silicato para purificar rpidamente DNA celular total sin usar extracciones orgnicas ni
precipitaciones con etanol. El sistema permite una lisis directa seguida de fijacin selectiva
de DNA a la membrana. Los contaminantes e inhibidores enzimticos son removidos por
centrifugacin. Luego de la lisis, el procedimiento toma 20 minutos. Es necesario que se
ajusten el pH con amortiguadores para lograr mxima fijacin de DNA a la membrana,
durante una corta centrifugacin. Los contaminantes restantes son removidos en dos
lavados y el DNA es diluido en agua o en tampn amortiguador (Morillo y Mio, 2011). El
principio de extraccin de este tipo de mtodo se basa en la capacidad de adsorcin de los
cidos nucleicos en una columna de slice ante la presencia de altas concentraciones de
sales caotrpicas. Los contaminantes de la muestra son eliminados con los posteriores
lavados de la columna y finalmente el DNA es eludo. Este mtodo se puede usar solo en
algunas muestras como es la sangre perifrica; para ello existen kits con columnas de slice
3
con diferentes capacidades de retencin de tal manera que se puede procesar volmenes
que oscilen entre 0,02 ml y 10 ml de sangre (Orfao y Morent, 2011).

La cuantificacin de DNA consiste en realizar una estimacin de la concentracin de los

cidos nucleicos en una solucin o tampn amortiguador. En el laboratorio se emplea de
manera rutinaria el mtodo de fluorescencia detectado por la electroforesis horizontal. Esta
tcnica proporciona de una manera rpida y econmica una estimacin de la cantidad de
DNA. Otro mtodo empleado en el laboratorio para cuantificar una muestra de DNA
consiste en el uso de fluormetro, este proporciona un valor ms exacto de la
concentracin de las muestras. El mtodo de cuantificacin por fluorescencia tiene como
base una corrida electrofortica horizontal empleando geles de agarosa complementado
con el uso de sustancias intercalares de DNA, que permiten la visualizacin del cido. La
estimacin de la concentracin se realiza mediante la comparacin de la fluorescencia de la
muestra con un marcador de concentracin conocida, adicionalmente, este mtodo permite
ver la calidad de la muestra (DNA degradado) y la presencia de impurezas. Otras de las
ventajas que se obtiene con este mtodo es la cuantificacin de gran cantidad de muestras a
un costo relativamente bajo y en cortos periodos de tiempo. El proceso de cuantificacin
con fluormetro consiste en un fluormetro Qubit y kits de tecnologa Quant-iT. Dichos
kits emplean colorantes selectivos que se tornan fluorescentes cuando se unen al ADN,
ARN protenas. Estos colorantes son especficos para sus tragets y no se acoplan a
contaminantes como el fenol, sales, cloroformo y/o nucletidos libres. El resultado es una
lectura de fluorescencia que refleja exactamente la cantidad de producto de inters en
cuantificar (Morillo y Mio, 2011).

La plataforma de cuantificacin Qubit consiste en un fluormetro Qubit y kits de

tecnologa Quant-iT. Dichos kits emplean colorantes selectivos que se toman fluorescentes
cuando se unen al DNA, RNA o Protenas. Estos colorantes son especficos para sus
targets no se acoplan a contaminantes como fenol, sales, cloroformo y/o nucletidos libres.
El resultado es una lectura de fluorescencia que refleja exactamente la cantidad de
producto que el investigador tiene inters en cuantificar (Invitrogen, 2007). La
electroforesis en gel de agarosa es de las ms utilizados para analizar y caracterizar cidos
nucleicos de distintos procedencias. Los geles se comportan como un tamiz molecular y
permiten separa molculas cargadas en funcin de su tamao y forma. As, molculas de
DNA de diferente tamao van a emigrar de forma distinta en una electroforesis en gel de
agarosa. Adems, si en dicha electroforesis se aplican marcadores de peso molecular
(fragmento de DNA de tamao conocido) se puede calcular el tamao aproximado del
DNA en estudio (Paldilla et al, 2007).

Figura 1: Fluormetro Qubit 3.0 Life Technologies. (Technologies, 2016)

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4. MATERIALES

4.1. Para la extraccin del DNA

Tabla 1: Materiales de la prctica de extraccin del DNA

Campana de flujo laminar
Sangre
Micropipetas de (0.5-10; 10-
100; 100-1000 l)
Puntas (10; 200; 1000 l)
DNA ExitusPlus
Vortex (vibrador)
Accublock (bao mara o
bloque trmico)
Etanol absoluto al 100%
Kit de extraccin
Proteinasa K
RNAasa
Microcentrfuga
Genomic Flucion buffer
Tubos de coleccin

4.2. Para la cuantificacin e integridad del DNA

Tabla 2: Materiales de la cuantificacin e integridad del DNA

Campana de flujo
laminar
Qubit 3.0
Buffer (prubes)
Fluormetro
Estndar 1 y Estndar 2
Geles de Agaroza (2%)
Muestras de DNA
extrado
Vortex
Tubos colectores
Micropipetas con las
respectivas puntas

5. PROCEDIMIENTO

El mtodo del procedimiento se sigui de acuerdo a los protocolos ya establecidos:

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5.1. Para la extraccin del DNA
Tabla 3: Procedimiento de la extraccin del DNA (datos obtenidos a partir de Orfao y
Morent, (2011))

Paso 1: Esterilizamos primero con DNA

ExitusPlus a la campana de flujo laminar luego
irradiamos con rayos ultravioleta con todo los
materiales que se usarn para la extraccin de
DNA, incluyendo los guantes. Excepto la
muestra de la sangre que se descongela.
Paso 2: Los estudiantes responsables de prctica
proceden a desarrollar la extraccin. En primer
lugar se lleva la lisis de muestra. En este proceso
de lisado se adiciona las enzimas. Agregamos a
un tubo de coleccin 200 l de sangre con un
micropipeta de 1000 l, ms 20 l de proteinasa
K (destruye las protenas), 20 l de RNAsa
(produce lisis de RNA), ambos con micropipeta
de 100 l. Llevamos al vortex para la mezclarlo
la solucin. Y encubamos a temperatura
ambiente durante 2 minutos.
Paso 3: Luego agregamos 200l de la solucin
lisis a la solucin con una micropipeta de
1000 l. Llevamos al vortex durante 5 segundos.
Despus incubamos en Accublock a 55 C
durante 10 minutos hasta que se complete la lisis
o se lleve la digestin de las enzimas (no debe
observarse presencia de cuerpos celulares).
Paso 4: Nuevamente entramos la solucin a la
campana y agregamos 200 l de etanol absoluto
(una solucin de unin de cidos nucleicos a la
columna) con una micropipeta de 1000 l.
Llevamos al vortex durante 5 segundos para la
mezcla.
Paso 5: Transponemos la mezcla de solucin a
un tubo de coleccin con columna de slice que
se encuentra adaptada a un tubo vaco con una
micropipeta de 1000 l calibrado a 600 l.
Debajo del tubo con columna colocamos otro
tubo de coleccin para el filtrado. Llevamos a la
microcentrfuga y centrifugamos a 10,000 RPM
(se marca 1.20 min a causa de continuo
movimiento despus del cese del revoluciones
requeridas), mediante la centrifugacin el DNA
queda retenida en las columnas por las
adherencias producidas por los fosfatos a las
sales de slice mientras que las protenas y otros
contaminantes de la muestra son arrastrados con
la solucin lisado al tubo de filtrado.

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 Paso 6: Descartamos el tubo de coleccin del
filtrado junto con los contaminantes y
transferimos al tubo de columna a un nuevo tubo
de coleccin para el nuevo filtro de lavado.
Agregamos 500 l del buffer 1 en el tubo con la
columna con una micropipeta de 1000 l para
eliminar el resto de los contaminantes de la
muestra que son arrastrados en esta solucin por
centrifugacin de 10,000 RPM en una
microcentrfuga.
Paso 7: Finalmente nuevamente transferimos la
columna a un nuevo tubo y descartamos la
anterior. Agregamos 500 l de buffer 2 y se llev
a una nueva centrifugacin con la mxima
velocidad (en este caso, mx.V. de
microcentrfuga es 15,000 RPM) durante 3
minutos para asegurar una completa eliminacin
de los restos de la solucin de lavado de la
columna previamente a la elucin de DNA.
Paso 8: Descartamos el tubo del coleccin del
filtrado y colocamos a la columna a un nuevo
tubo de coleccin de 1,5 ml con tapa. Llevamos
a cabo la separacin de DNA de la columna de
slice aadiendo 100 l de tampn o buffer
(Genomic Elutin Buffer) de baja fuerza inica.
Incubamos durante 1 minuto la columna con el
buffer de resuspensin para aumentar el
rendimiento de DNA. Por ltimo, realizamos una
centrifugacin de mxima velocidad durante 1
minuto, esta nos permiti coleccionar el DNA en
solucin en el tubo de 1.5 ml y se desecha la
columna. Finalmente almacenamos la muestra a
una temperatura de 20 C hasta su prxima
cuantificacin y secuenciacin.

5.2. Para la cuantificacin e integridad del DNA

Tabla 4: Cuantificacin del DNA mediante dos mtodos (Technologies, 2016; Morillo y
Mio, 2011).

Procedimiento para cuantificacin de DNA por fluorometra

Paso 1: Preparamos dos tubos de
coleccin para los estndares y un tubo de
coleccin para toda la muestra Qubit.

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Paso 2: Preparamos la solucin Qubit,
trabajando con la solucin segn la lectura
de Qubit 1:200 en buffer Qubit.
Calculamos 199 l de buffer Qubit
dsDNA ms 1 l de colorante (tubo azul),
obteniendo 200 l de volumen total. Para
seis tubos de muestras y dos estndares
cada uno con 200 l preparamos ms
200 l de solucin Qubit. En tubo de
coleccin se prepara 1791 l (199 l x 9
tubos) y 9 l del Reangent. Total 1800 l
de solucin. Homogenizar con el vortex.
Paso 3: Preparamos 200 l para los
estndares y para las muestras. Para cada
solucin estndar se agreg 190 l de la
solucin buffer Qubit y 10 l de estndar.
Obteniendo 200 l de cada estndar
(estndar A, 200 l; estndar B, 200 l).
Hacemos vortex a cada uno.
Paso 4: Antes de lectura de las muestras al
equipo Qubit debe ser calibrada.
Calibramos con los dos estndares A y B.
Primero el estndar A es leda y este slo
grafica los dos primeros valores de la
curva, despus es leda el estndar B del
cual se grafica los tres puntos. Se coloca el
tubo de estndar a la cavidad de la parte
superior, se cierra la cubierta y se presiona
en leer el estndar. Seguidamente
cuantificamos.
Paso 5: Adicionamos 199 l de solucin
buffer Qubit a seis tubos de coleccin
respectivamente y 1 l de cada muestra de
DNA. Obteniendo 200 l de solucin.
Despus se hace vortex.
Paso 6: Finalmente se lee inmediatamente
en el Qubit. El valor final aparece dentro
de un crculo al terminar la lectura de la
muestra, estos datos no fueron exportados
al USB.

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 Procedimiento para cuantificacin e integridad de DNA por electroforesis en gel de
agarosa
Paso 1: Directamente las muestras se colocaron a 1-2,5 l a
cada pocillo de la caja de gel agarosa con una micropipeta.

Paso 2: Despus se llev directamente a la lectura

6. RESULTADOS Y DISCUSIN

6.1. Resultados

Tabla 6: Resultados obtenidos de la cuantificacin por electroforesis en gel y

cuantificacin por fluorometro Qubit.
Resultados de cuantificacin por electroforesis en gel de agarosa

Tubo 8 Pocillo 3

Tubo 3 Pocillo 1

Tubo 18 Pocillo 2

Tubo 19 Pocillo 4

Tubo 12 Pocillo 5

Tubo 20 Pocillo 6

Resultados de cuantificacin por fluoremetra de Qubit

Tubo 8 71.2 ng

Tubo 3 4.4 ng

Tubo 18 43.6 ng

Tubo 19 52.6 ng

Tubo 12 116 ng

Tubo 20 5.94 ng

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6.2. Discusin

A partir de la tabla 6 los resultados obtenidos son evidentes comparando los dos mtodos.
Desde luego, se puede analizar intuitivamente la integridad del DNA obtenido en el
mtodo de electroforesis en gel adems de la cuantificacin sin cifra. De toda las muestras
de DNA en los seis tubos de coleccin slo los que poseen alto valor de concentracin de
DNA entrar a la secuenciacin, la posterior prctica ms brillante en gentica. En la
metodologa por electroforesis en gel de agarosa se observa panormicamente a algunas
muestras de pocillos que se arrastran de manera variable con algunas regiones bien
pronunciadas. Unos se alejan a corta distancia y otras se alejan a larga distancia. Todo este
proceso se debe a la migracin de fragmentos de DNA de acuerdo a sus tamaos, cargas
influenciadas por un campo elctrico, segn Klug y Cummings, (2006). Algunas muestras
migran con una banda uniforme especialmente la muestra del pocillo 5 que pertenece al
tubo de coleccin 12, su caracterstica es evidente con una banda pronunciada, uniforme
de gran concentracin a diferencia de otras muestras la cual define su integridad del DNA
extrado (Orfao, 2012). Adems podemos concluir que dicha muestra ha tenido menor
degradacin la cual ha caracterizado su migracin uniforme. Sin embargo, observando en
otras muestras la migracin no es uniforme, producen unas estelas o smear aunque poseen
una regin de banda pronunciada, algunas de ellas migran ms rpido o tras migran
lentamente y sus posibles causas son la mayor degradacin de la muestra que
probablemente podra haber ocurrido por la congelacin y el mayor tiempo de su
almacenaje (Orfao, 2012). Del mismo modo, la concentracin de DNA difieren
cuantitativamente, la concentracin de DNA de las muestras dependen de muchos factores
que podra influenciar de manera inevitable (almacenaje de la muestra produce
degradacin, hemlisis por muchos factores, en la extraccin de DNA falta
homogenizacin, etc.). En este aspecto, se observa la misma muestra del pocillo 5 del tubo
de coleccin 12 una gran concentracin de DNA adems de su uniformidad, y el pocillo 1
del tubo de coleccin 3 tiene una concentracin bien poqusima por factores desconocidas.
Este ltimo no podr ser usado para los prximos usos especialmente en el PCR. Ya que el
PCR necesita una pureza ptima y concentracin necesaria para observar su funcionalidad.
En la metodologa por flourometra Qubit se calcula la concentracin del DNA con mayor
precisin y menor probabilidad del error mediante cifras de nmeros. A diferencia del
anterior mtodo este es ms preciso en la cuantificacin, pero no mide la integridad. La
precisin de la cuantificacin se debe al colorante azul (Reangent) que se acoplan
solamente a DNAs ntegros en la mayor parte. No se acoplan a los contaminantes como
fenoles, sales, cloroformo ni a nucletidos libres. Una razn por lo que los resultados de la
lectura de fluorescencia refleja exactamente la cantidad de producto que el investigador
tiene inters en cuantificar (Invitrogen, 2007). En este caso, la misma muestra del pocillo 5
en anterior mtodo del tubo de coleccin 12 tiene un alto valor de 116 ng medido en
fluormetro Qubit, y las razones son menor degradacin de la muestra y buen
procedimiento de la extraccin del DNA a partir de la sangre. Comparndola tambin con
el anterior mtodo la muestra del tubo de coleccin 3 tiene un valor mucho menor de 4,4
ng, un valor no adecuado para la lectura en PCR por lo que no se podra obtener una buena
funcionalidad del DNA. Esta muestra probablemente ha podido sufrir una mayor
degradacin y otro factor podra ser fallas en el procedimiento de la extraccin del DNA.
Comparamos ambos mtodos y las coincidencias son admirables, las diferencias son bien
pequeas. Es bien contundente que las muestras ms ntegras y de alta concentracin
puedan ingresar a los prximos procedimientos. Para tener mayor confiabilidad en la
cuantificacin e integridad del DNA hubiera sido mejor el uso del equipo nanodrop.

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7. CONCLUSIN

La extraccin del DNA tiene una gran importancia en los procesos de investigacin,
identificacin de la paternidad, para el diagnstico de enfermedades y los trastornos
genticos (enfermedades hereditarias), en caso de criminalsticas y en casos de medicina
forense, etc. Y la cuantificacion e integridad es fundamental para observar la funcionalidad
del DNA, la concentracin del DNA tiene lmites en algunos procedimientos. En esta
prctica se obtuvo muestras de DNA con diferentes purezas, integridad y concentracin.

8. BIBLIOGRAFA
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Alejos, L., Argn, M., & Cornejo, A. (2011). Extraccin y purificacin del DNA. Mxico:
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