METODOS DE ESTERILIZACION EN LABORATORIO

La esterilizacin es el conjunto de operaciones destinadas a eliminar cualquier forma de vida

microbiana en un material. El proceso de esterilizacin debe ser diseado, validado y llevado
a cabo para asegurar que es capaz de eliminar la carga microbiana del producto o un
microorganismo ms resistente.

Los procesos de esterilizacin pueden ser tanto fsico como qumico y los agentes
esterilizantes son:

1. ESTERILIZACION CON AGENTES FISICOS

Los agentes fsicos que consiguen la esterilizacin de materiales son el calor, las radiaciones
y la filtracin.

1.1 Esterilizacin por calor

El calor desnaturaliza estructuras y macromolculas (membranas, protenas, etc.). Todos los

microorganismos son susceptibles a la accin del calor. Su sensibilidad vara con la especie
y con el estado en que se encuentren.

En general las formas vegetativas bacterianas mueren por calentamiento a 50-70C. Las
endosporas, (las formas de vida ms termoresistentes), requieren mayores temperaturas
y tiempo de exposicin. El calor puede utilizarse de dos formas en presencia (esterilizacin
por calor hmedo) o ausencia de humedad (esterilizacin por calor seco).

1.1.1 Calor hmedo

Los materiales hmedos conducen mejor el calor que los secos : el agua tiene mayor
coeficiente de transferencia de calor que el aire. Por eso el vapor de agua es ms eficaz que
el calor seco matando a los microorganismos. As la esterilizacin en presencia de vapor de
agua requiere menos temperatura y tiempo que sin agua. El autoclave de vapor utiliza calor
hmedo para la esterilizacin.

Autoclave de vapor

Trabaja a presin superior a la atmosfrica. El agua a presin atmosfrica hierve a 100C. A

presiones superiores, la temperatura de ebullicin aumenta por lo que se pueden calentar
soluciones acuosas (como los medios de cultivo) a temperaturas superiores a 100C. El
autoclave permite elevar la presin de una a dos atmsferas sobre la presin atmosfrica.

El dispositivo trabaja aislado del exterior. En un sistema aislado del exterior, cada elevacin
de temperatura provoca un aumento de presin. La relacin entre temperatura y presin
depende de la composicin de la atmsfera incluida en el sistema

El autoclave de vapor es el aparato ms utilizado para la esterilizacin de medios de cultivo,

soluciones, ropa de laboratorio, y emulsiones que no se desnaturalicen a temperaturas
superiores a 100C.. En general la esterilizacin de estos materiales se realiza a (112-121C)
durante 15-20 minutos. Estas condiciones pueden variar en funcin del tipo de material, carga
microbiana y volmenes a esterilizar.

Tindalizacin o esterilizacin fraccionada a vapor fluente

La tindalizacin es un mtodo de esterilizacin por calentamiento discontinuo que debe su

nombre a John Tyndall, que la ide en 1887.
Consiste en someter una sustancia a esterilizar a un proceso seriado de elevacin y
disminucin de la temperatura, de modo tal que en cada una de esas etapas se eliminen
paulatinamente las formas vegetativas y de esporas presentes. Se requiere un mnimo de
tres sesiones de elevacin y disminucin de la temperatura.

a) el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100 C, durante 1 o 2 horas

b) el material se incuba en una estufa, a 30-37C durante 24 horas.

En a) mueren todas las clulas vegetativas de la muestra, pero permanecen viables las
esporas, q quedan activadas para germinar.
En b) se produce la germinacin de esas esporas. Al repetir el ciclo, en a) nuevamente,
mueren las clulas vegetativas procedentes de la germinacin en la fase anterior; y as
sucesivamente.

Pasteurizacin

Es un mtodo que reduce la cantidad de microorganismos viables. No es un mtodo de

esterilizacin pues no destruye esporas bacterianas. Es utilizada en la industria alimentaria.
En la pasteurizacin se emplean generalmente temperaturas por debajo del punto de
ebullicin (en cualquier tipo de alimento), ya que en la mayora de los casos las temperaturas
superiores a este valor afectan irreversiblemente ciertas caractersticas fsicas y qumicas del
producto alimenticio. Hay dos tipos de tratamiento: la pasteurizacin a baja temperatura y
mayor tiempo (63C/30 minutos) y la pasteurizacin a alta temperatura y corto tiempo
(72C/15 segundos).

1.1.2 Calor seco

Su accin letal se debe a la oxidacin de componentes celulares. El aire es mal conductor

del calor y el aire caliente entra ms lentamente que el vapor en los materiales. Por ello se
requiere ms temperatura y tiempo de exposicin que en la esterilizacin con calor hmedo.
Puede utilizarse mediante flameado (incineracin) o con hornos de aire caliente

Aire caliente

El aire caliente es uno de los mtodos de esterilizacin por calor seco ms utilizados. Este
proceso se lleva a cabo en hornos especiales que permiten la distribucin uniforme del calor
en su interior, donde el material se expone a temperaturas de aproximadamente 170oC
durante 2 horas. El tiempo de esterilizacion se debe determinar para cada tipo de material,
por ejemplo en el caso de materiales muy resistentes al calor, se pueden usar temperaturas
mas altas por tiempos mas cortos.

Entre las ventajas de este metodo de esterilizacion estan que no deja residuos, y es un
metodo rapido y economico. Ademas permite la esterilizacion de materiales no miscibles con
el agua como es el caso de polvos, aceites y grasas. Su principal desventaja es que solo
debe emplearse para esterilizar materiales termoestables.
Para controlar este proceso de esterilizacion se utilizan indicadores fis icos tales como los
termometros, los cuales permiten medir la uniformidad de la temperatura de la camara interna
del horno. Este metodo se emplea para la esterilizacion de material de vidrio, instrumentos
quirurgicos, agujas de metal, materiales no miscibles con el agua, etc.

Llama directa

Consiste en colocar el material directamente al fuego hasta que este se ponga al rojo vivo.
De esta forma se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas. Su eficacia depende
de la calidad de la llama.
Es un procedimiento muy sencillo que se realiza de rutina en los laboratorios de microbiologia
para esterilizar el asa o el filamento con la llama del mechero. Cuando se realiza este
procedimiento se debe evitar la formacion de aerosoles (pequena s gotas liberadas al aire)
n contaminar el ambiente.
que podria

Incineracion

El material a esterilizar se coloca en camaras especiales que alcanzan elevadas

temperaturas. Con este metodo se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas.
Es una forma efectiva de esterilizar el material contaminado a descartar tales co- mo bolsas,
papel, uniformes desechables, cadaveres de animales, etc.

1.2 Esterilizacin por Radiacin

1.2.1 Radiacin Ultravioleta

Radiacin con longitudes de onda entre 100 y 400 nm. Las de mayor actividad microbicida
son las comprendidas entre 260-270 nm. Son absorbidas por lo cidos nuclicos y
aminocidos aromticos. Afectan a los cidos nucleicos provocando errores en la duplicacin
y prdida de viabilidad. Tienen bajo poder de penetracin: solo se utilizan para la esterilizacin
de superficies, (quirfanos, salas de envasado de medicamentos). Producen daos en ojos y
piel.

1.2.2 Radiacion Ionizante

Tienen mayor energa que las ultravioleta y por tanto mayor poder de penetracin. Producen
iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nuclicos, protenas y otros
componentes celulares. Se utilizan para la esterilizacin de materiales termosensibles como
jeringas, sondas, suturas, guantes, etc. No se utilizan para medios de cultivo o soluciones
porque producen alteraciones de los componentes. Solo se utiliza a escala industrial por el
alto costo

1.3 Esterilizacion por filtracion

1.3.1 Filtros de membrana

Consiste en el paso de un liquido o gas a travs de filtros con poros lo suficientemente

pequeos para retener a los microorganismos por el tamao. Es un mtodo que no mata a
los microorganismos.

Utilizados para esterilizar soluciones termoestables. Retienen a los microorganismos en la

superficie. Pueden ser de diversos materiales (acetado de celulosa, nitrato de celulosa,
policarbonato o tefln) en funcin del fluido a filtrar. Varan de tamao de poro (0.22 m - 0.45
m) usualmente se utilizan los de 0.22 m. Hay que tener en cuenta que estos filtros usados
en el laboratorio no retiene virus ni Micoplasma. La filtracin tambin se utiliza para el
recuento de microorganismos cuando estn presentes en baja concentracin.

1.3.2 Filtros de profundidad

Retienen a los microorganismos atrapndolos en su matriz; es una combinacin de absorcin

y retencin mecnica. Un ejemplo es el tapn de algodn que se utiliza para tapar los tubos
de medios de cultivo.
2. ESTERILIZACION POR AGENTES QUIMICOS

Esta forma de esterilizacin se fundamenta en que algunas sustancias quim icas tienen la
capacidad de promover una o mas reacciones quim
icas capaces de producir la muerte de los
microorganismos.

Al emplear este metodo se pueden usar agentes quim

icos gaseosos o no gaseosos.

2.1 Agentes Gaseosos

Oxido de etileno

El oxido de etileno es un agente alquilante que se ha convertido en uno de los metodos de

esterilizacion quim
ica mas utilizados.
Cuando se emplea este metodo se debe determinar cuidadosamente el tiempo de exposicion
a emplear ya que este depende de factores como la temperatura, humedad, concentracion
del gas, la permeabilidad del material que recubre los instrumentos a esterilizar y el tipo de
microorganismo a eliminar.

Los indicadores biologicos mas utilizados para controlar el proceso de esterilizacion por oxido
de etileno son las esporas de Bacillus subtilis, las cuales son altamente resistentes a este
proceso. La esterilizacion por oxido de etileno se puede utilizar para esterilizar materiales
sensibles al calor y la humedad, tales como materiales plasticos desechables (placas Petri,
inyectadoras, etc.)

2.2 Agentes No Gaseosos

Glutaraldehido

Es un agente alquilante que se usa en soluciones al 2% como agente esterilizante. Este

agente tiene como ventajas que no es corrosivo y practicamente no tiene ningun efecto danino
para los instrumentos, mantiene su actividad aun en presencia de materia organica. Sin
embargo, hay que tener en cuenta que el glutaraldehido puede resultar irritante para los
trabajadores y que las soluciones diluidas al 2% pierden su efectividad aproximadamente en
dos semanas.

o se usa para la esterilizacion instrumentos o equipos como endoscopios,

El glutaraldehid
termometros, materiales de goma o plastico, equipos para terapia respiratoria y anestesia,
entre otros.

Acido peracetico

Es un agente oxidante que mantiene su eficacia en presencia de materia organica.

La esterilizacion con este agente tiene como ventajas que incluye ciclos de esterilizacion
relativamente cortos, el material se puede utilizar inmediatamente y el acido se puede eliminar
directamente a los sitios de drenaje. Sin embargo, tiene como desventajas que es sumamente
corrosivo y el material se debe enjuagar con agua destilada esteril despues del proceso.

Peroxido de hidrogeno

El peroxido de hidrogeno es un agente quim

ico no toxico que permite la destruccion de los
microorganismos por oxidacion de sus componentes celulares. Cuando se emplea este
metodo de esterilizacion se pone en contacto el material con una solucion de peroxido de
hidrogeno en agua bajo la forma de vapor.
 ESPECTRO DE RADIACION

El espectro de radiacin es una representacin grfica de la variacin de la energa de

radiacin en funcin de la longitud de onda a escala logartmica.
El espectro terico de radiacin solar y terrestre alcanza valores ms altos que el estimado
considerando la atmsfera.

Los espectros se pueden contemplar mediante espectroscopios que, adems de permitir

observar el espectro, permiten realizar medidas sobre el mismo, como son la longitud de
onda, la frecuencia y la intensidad de la radiacin. La longitud de una onda es el perodo
espacial de la misma, es decir, la distancia que hay de pulso a pulso .

El espectro electromagntico se extiende desde la radiacin de menor longitud de onda, como

los rayos gamma y los rayos X, pasando por la luz ultravioleta, la luz visible y los rayos
infrarrojos, hasta las ondas electromagnticas de mayor longitud de onda, como son las
ondas de radio. Se cree que el lmite para la longitud de onda ms pequea posible es la
longitud de Planck mientras que el lmite mximo sera el tamao del Universo aunque
formalmente el espectro electromagntico es infinito y continuo.

figura 1. Espectro electromagnetico

figura 2. Bandas y longitud de onda.

Efecto de las distintas bandas de este espectro sobre los sistemas ambientales y los
organismos

La radiacin ultravioleta ( < 400 nm) es absorbida por los electrones de tomos y
molculas, que pueden cambiar as su estructura y producir profundos cambios
qumicos, como la ionizacin del N en la atmsfera, la disociacin del ozono, o la
destruccin de determinadas sustancias en la piel humana. Tambin impide la sntesis
de ciertas sustancias, como la melanina.

La luz visible (400 < < 700 nm) es la parte del espectro donde la radiacin solar
alcanza su mximo, y ha tenido por ello un papel destacado en la adaptacin de los
seres vivos a su medio. Muchas sustancias de importancia biolgica se caracterizan
por una respuesta qumica selectiva en la parte visible del espectro solar que provoca
transformaciones de la estructura molecular con distintas funciones biolgicas como
la fotosntesis, asociada a la clorofila, y el sentido de la vista, asociada a clulas
fotorreceptoras.

El infrarrojo (700 < < 1000 nm) no tienen ya energa suficiente para provocar
reacciones qumicas, pero s para inducir movimientos de vibracin en las molculas;
a esto es a lo que desde un punto de vista macroscpico llamamos absorcin de
energa trmica, que se manifiesta casi siempre como un incremento de temperatura.

Las microondas (1000 nm < < 0.3 m) inducen movimientos moleculares de rotacin,
dando lugar a un incremento trmico. El agua las absorbe muy fuertemente, con el
 consiguiente calentamiento. Este hecho es importante en las transformaciones
trmicas de mares y ocanos.

BIBILIOGRAFIA

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Available at: https://fjferrer.webs.ull.es/Apuntes3/Leccion02/3_el_espectro_de_radiacin.html
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS

CARRERA PROFESIONAL DE BIOLOGIA

- INFORME DE METODOS DE ESTERILIZACION EN

LABORATORIO
- ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

ESTUDIANTE: DILLMAN DELGADO PAREDES

CODIGO: 073412

PROFESORA: LUZ MARINA PONCE ARANIBAR

CUSCO PERU
2017