SOUTHERN BLOT

La transferencia Southern, que recibe su nombre por Edwin Southern, que fue quien
desarroll la tcnica, consiste en la digestin del DNA por una enzima de restriccin
que despus es sometido a electroforesis en un gel de agarosa. As se separan el DNA o
los fragmentos de restriccin segn su tamao, los fragmentos ms pequeos migran
ms rpidos que los grandes. Los fragmentos de DNA en el gel se desnaturalizan
despus con lcali, convirtindolos en monocatenarios. Una copia permanente de
estos fragmentos monocatenarios se realiza transfirindolos a un filtro de nitrocelulosa
que fija el DNA monocatenario, la as denominada transferencia Southem. Se puede
visualizar un fragmento particular de inters del DNA diana recogido en el filtro
aadiendo una sonda de DNA monocatcnario marcado radiactivamente con 32P, que se
hibridar con los fragmentos de DNA homlogos en la transferencia Southern, y que
puede detectarse posteriormente mediante una autorradiografa.

Anlisis del tamao de los productos de la PCR

A veces se pueden detectar simplemente las mutaciones de delecin o de insercin
mediante la determinacin del tamao de un producto de la PCR. Por ejemplo, la
mutacin ms habitual que ocasiona una fibrosis qustica, t.FS08 (p.Phe508del), es una
delecin de 3 pb que puede detectarse en un gel de poliacrilamida.
Algunas mutaciones de expansin por repeticin de trinuclctidos pueden amplificarse
con la PCR.
Polimorfismo de longitud del fragmento de restriccin
Si la sustitucin de una base crea o elim ina el sitio de reconocimiento de una enzima de
restriccin, es posible comprobar la mutacin digiriendo un producto de la PCR con la
enzima apropiada y separando los productos por electroforesis.
PCR del sistema de mutacin refractario a la amplificacin (ARMS)
La PCR especfica del alelo utiliza cebadores especficos para las secuencias normal y
mutante. El diseo ms habitual es un anlisis en dos tubos con los cebadores normal y
mutante en reacciones separadas junco con los cebadores de control para asegurar que la
reaccin de la PCR ha funcionado.