INTRODUCCION A LA

ESPECTROSCOPIA DE
ABSORCION MOLECULAR
UV/VIS Y DE INFRARROJO
CERCANO
Cap. 13
 Medicin de la absorbancia y
la transmitancia
Recipiente produce prdidas por:
reflexin (aire/pared, pared/solucin)
dispersin (molculas grandes)
absorcin (paredes recipiente)

Comparar potencias de recipiente de muestra

con recipiente conteniendo disolvente
(blanco).
Ley de Beer
 Potencia radiante

Es la energia (joules) de la radiacion

incidente en el detector, por m2 y por
segundo.

La potencia del haz se atenua de Po hasta P

por la interaccin entre los fotones y las
partculas absorbentes.
 Transmitancia
Es la fraccion de radiacion incidente
transmitida por la solucion.

P
T
Po
P
%T x 100
PO
 Absorbancia

PO
A log 10T log
P
A abc
 Absortividad y absortividad
molar
La absorbancia es directamente proporcional
a la longitud b de la trayectoria a traves de la
solucin, y a la concentracin c de la especie
absorbente.

A abc
Donde a es la absortividad (constante de
proporcionalidad).
 La magnitud de a depende de las
unidades para b y c. Si b esta en cm y
c en g/L, a esta en L g-1 cm-1.
Si b esta en cm y c en mol/l, la
absortividad se denomina absortividad
molar, e (L mol-1 cm-1 )

A ebc
 Aplicacin de la ley de Beer a
mezclas
Suponiendo que no haya interaccin
entre las distintas especies:

Atotal A1 A2 ... An
Atotal e 1bc1 e 2bc 2 ...enbcn
Donde 1, 2, , y n son los componentes
absorbentes.
Limitaciones de la ley de Beer
La ley de Beer solo describe absorcion en
soluciones diluidas
A concentraciones > 0.01M la distancia promedio
entre las moleculas absorbentes hace que cada
molecula interactue con las moleculas vecinas,
alterando capacidad de absorber radiacion de
determinada l
Interaccion ocurre tambien a bajas
concentraciones de moleculas absorbentes pero a
alta concentracion de otras especies (electrolitos)
Algunos iones o molculas orgnicas de
gran tamano no cumplen estrictamente la
Ley de Beer aun en soluciones diluidas.

Los cambios de concentracin no deben

causar alteraciones significativas en el h de
la solucin.
 Desviaciones de la ley de Beer

Desviaciones qumicas
Ocurren cuando un analito se disocia,
asocia o reacciona con el disolvente,
resultando en un producto con espectro de
absorcin diferente.
Indicadores cido-base

HIn
H In
color2
color1
 Desviaciones instrumentales con
radiaciones policromticas
El cumplimiento estricto de la ley de Beer solo
se da con radiaciones monocromticas
Los dispositivos seleccionadores originan una banda
simtrica de longitudes de onda en torno al valor
deseado.
A medida que aumente la diferencia entre las
absortividades molares para las distintas longitudes
de onda, las desviaciones son mayores.
 Desviaciones instrumentales en
presencia de luz parsita
Radiacin proveniente del dispositivo
seleccionador esta contaminada con radiacin
dispersada o parasita (por dispersin y
reflexin en superficies interiores del aparato).
Se obtienen absorbancias menores a las
tericas.
 Efecto de la anchura de la rendija
en las mediciones de absorbancia
Anchura de la rendija: 1.0, 0.5 y 0.1 mm
(milmetro) se refiere a la anchura del
dispositivo mecnico (rendija) que limita la
cantidad de luz o radiacin que llega a la
muestra.

Rendija: dos piezas de metal con bordes

afilados, paralelos y en el mismo plano.
 Anchura de
Para conseguir rendija = 0.1 mm
espectros
complejos bien
resueltos se
requieren
Anchura de
anchuras de
rendija = 0.5 mm
rendija estrechas.

Anchura de
rendija = 1.0 mm
 Ancho de banda: se define como el
espacio de ajuste del monocromador
necesario para mover la imagen de la
rendija de entrada a travs de la rendija
de salida.

Se expresa en unidades de . Ejemplo:

0.5 nm, 9.0 nm, 20 nm.
 Anchura de banda efectiva: es la mitad
de la anchura de banda cuando las dos
anchuras de las rendijas son iguales; se
aprecia que es el intervalo de
longitudes de onda que salen del
monocromador para un ajuste dado de
longitud de onda.
Tambin se expresa en unidades de .
Ejemplo: 0.5 nm, 9.0 nm, 20 nm.
 A menor anchura de banda efectiva mayor resolucin espectral.

A menor ancho de rendija menor anchura de banda efectiva.

Instrumentacin
 Fotmetros:
utlizan filtros
como
selectores de
, son
sencillos y
econmicos,
hay de haz
simple y de
doble haz.
 Fotmetros
Sencillos
Econmicos
Filtros (cada uno para distinta regin
del espectro: sol roja, filtro verde)
Buena relacion senal/ruido
Cuando la pureza espectral no es
importante
Uno y doble haces
 Espectrofotmetros
Regin visible (380-800 nm)
Sencillos
Un haz
Monocromador de red
Anlisis cuantitativo
Spectronic 20
$1000 - 3000

UV/VIS (190 o 210 800 o 1000)

Lamparas intercambiables W / H2
Tubos fotomultiplicadores
Redes de dispersin
$2000 8000 un haz, $4000 15000 doble haz
Haz sencillo
Doble haz en el espacio
Dole haz en el tiempo
 RECIPIENTES PARA
MUESTRAS
Todos los instrumentos espectroscopicos a exepcin
de los de emision, requieren de recipientes para las
muestras: celdas o cubetas.

Cuarzo o slice fundida

UV (<350 nm), y vis e IR

Vidrios de silicato o plstico

350-2000nm

NaCl, KBr, TlBr o Tll cristalinos

IR
 Calibrar cubetas para detedctar diferencias
por rayaduras y desgaste

0.1-10 cm (1 cm + comn)

Planas (perpendiculares al haz) mejores que

cilndricas (minimizan prdidas por reflexin)

Limpieza
Eliminar huellas dactilares, grasa y otras manchas
Limpiar antes y despues superficie externa con
papel para lentes empapado con MeOH grado
espectromtrico
No tocar ventanas
 FUENTES DE RADIACION
Continua
Potencia no debe variar en el intervalo de l

Lmpara de D2 o H2
Espectro continuo de radiacin de 160-375 nm

D2 Ee D2* D' D' 'hv

E 2 ED 2* ED' ED' 'hv
La suma de las energas cinticas (ED y ED) pueden
variar desde 0 hasta ED2* (energa cuantizada fija del
D2*). La frecuencia del fotn puede variar de forma
continua.
 Deben tener ventanas de cuarzo (el vidrio absorbe
fuertemente las l menores a 350 nm).

La lmpara de deuterio produce una esfera de

radiacin algo ms grande e intensa (> 1 a 1.5 mm de
dimetro) que el hidrgeno.
 LAMPARAS DE FILAMENTO DE W

350-2500nm
Lmite inferior impuesto por cubierta de
vidrio que aloja filamento.
Control estricto del voltaje.
Tungsteno/halgeno mas eficientes, mayor
vida, tambin en regin UV.
PROBLEMA: La furosemida, peso molecular 330.7 g/mol,
es un diurtico, derivado del cido antranlico, que se
administra en casos de hipertensin, enfermedades renales,
cirrosis heptica, etc. En disolucin alcalina presenta en
espectro de absorcin UV/VIS con mximo de absorcin
centrado en 271 nm. Se analiz la cantidad de furosemida en
una tableta disolviendo su contenido en disolucin de NaOH
0.1 molar aforando en un baln de 100 ml. Un volumen de
1.0 ml de esta disolucin se transfiri a un baln de 50 y se
midi en un espectrofotmetro UV/VIS a 271 nm, dando
una absorbancia de 0.475 en una cubeta de 1.0 cm.
Para hacer la curva de calibracin se prepararon una serie de
disoluciones patrn de este frmaco, y se midieron a la
misma longitud de onda en una cubeta de 1.0 cm.

Obtener la ecuacin de la curva de calibracin

concentracin versus absorbancia.
Determinar la absortividad molar de la furosemida en las
condiciones dadas.
Determinar la cantidad de frmaco presente en la tableta
expresada en miligramos.
La sensibilidad del mtodo.
El lmite de deteccin del mtodo.
El porcentaje de transmitancia para una tableta de dicho
frmaco con un contenido de furosemida igual al doble de la
cantidad calculada en el inciso c).
Concentracin Seal (A, Desviacin
mol/L absorbancia a estndar de la
=271 nm) seal A
0.00 0.035 0.0089
1x10-5 0.197 0.0039
2x10-5 0.395 0.0099
3x10-5 0.59 0.0109
4x10-5 0.79 0.0118
5x10-5 0.985 0.0098