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Mecanismos moleculares generadores de mutaciones

Mecanismos de reparación del ADN

Anormalidades genéticas: Tipos y frecuencia de ocurrencia

TIPO

FRECUENCIA

Mal segregación cromosomica (ej.: aneuploidías)

10 -2 por división celular

Reordenamiento cromosomal (traslocaciones) o deleciones de largos segmentos cromosómicos

6 x 10 -4 por división celular

Mutaciones puntuales y pequeñas deleciones o inserciones

10 -10 por pb./ división celular o 10 -5 – 10 -6 por gen / generación

Polimorfismo en el genoma:

- 1 diferencia cada 500 pb

7

- 10 diferencias por genoma diploide.

- Estas diferencias fueron causadas por mutaciones Nuevas mutaciones en células germinales:

- cada espermátide contiene 100 nuevas mutaciones

1 de cada 10 espermátides contiene una nueva mutación perjudicial.

Las mutaciones son la causa de la evolución y divergencia de las especies

Las mutaciones son la causa de la evolución y divergencia de las es p ecies

Tipos de mutaciones puntuales

secuencia normal:

CAT T CACCTGTACCA GTA A GTGGACATGGT

Transición (T-A a CG) Transversión (T-A a GC) CAT C CACCTGTACCA CAT G CACCTGTACCA GTA G GTGGACATGGT GTA C GTGGACATGGT

Deleción

CATCACCTGTACCA

GTAGTGGACATGGT

Inserción CAT C T CACCTGTACCA GTA G A GTGGACATGGT

Deleciones e inserciones pueden involucrar a más de 1 pb.

Las transiciones son la forma más frecuente de mutaciones puntuales

Mecanismos que dan lugar a transiciones espontáneas:

1) Mal apareamiento de formas tautoméricas

2) Desaminaciones:

a) de C (origina U que se aparea con A dando lugar a transición G-C A-T)

b) de A (origina hipoxantina que se aparea con C dando lugar a transición A-T GC)

lugar a transición G-C A-T) b) de A (origina hipoxantina que se aparea con C dando

Mal apareamiento entre formas tautoméricas de las bases nitrogenadas

Mal apareamiento entre formas tautoméricas de las bases nitrogenadas

Mal apareamiento entre formas tautoméricas de las bases nitrogenadas

entre formas tautoméricas de las bases nitrogenadas - La relación de concentración de tautómero raro /

- La relación de concentración de tautómero raro / tautómero normal es de ~10 -4

- La actividad correctora de la ADN pol disminuye estos errores a ~10 -8

- Mecanismos de reparación post-replicativos bajan la tasa de mutaciones a ~10 -10 -10 -11

Si no son corregidos, estos cambios resultarán en mutaciones (se perpetuarán) en la 2da. ronda
Si no son corregidos, estos cambios resultarán en mutaciones (se perpetuarán) en la 2da. ronda

Si no son corregidos, estos cambios resultarán en mutaciones (se perpetuarán) en la 2da. ronda de replicación.

Resumen de las alteraciones espontáneas que requieren reparación del ADN. (A) Sitios modificados por daño
Resumen de las alteraciones espontáneas
que requieren reparación del ADN. (A) Sitios
modificados por daño oxidativo espontáneo
(flechas rojas), ataque hidrolítico (flechas
azules), y metilación no controlada por S-
adenosilmetionina (flechas verdes), con el
tamaño de las flechas indicando la frecuencia
del evento. (B) Los dímeros de pirimidicas (T
o C) introducidos por radiación UV.

Agentes mutagénicos (aumentan la frecuencia de mutaciones)

Mutágenos específicos:

Análogos de bases: 5-bromouracilo (análogo de T) y 2- aminopurina (análogo de A) producen transiciones A-T G-C Agentes desaminantes: Acido nitroso y sulfuroso desaminan A a hipoxantina y C a U. Otros: Hidoxilamina reacciona con C dando un derivado que aparea con A (transición G-C A-T). Radiaciones ionizantes: La ionización de una base desplaza el equilibrio hacia el tautómero raro

G-C A-T). Radiaciones ionizantes: La ionización de una base desplaza el equilibrio hacia el tautómero raro
G-C A-T). Radiaciones ionizantes: La ionización de una base desplaza el equilibrio hacia el tautómero raro

La alquilación de bases también puede generar mutaciones específicas

La alquilación de bases también pue de generar mutaciones específicas
La alquilación de bases también pue de generar mutaciones específicas

Mutágenos no específicos:

Agentes intercalantes: producen inserciones o deleciones (acridinas) Agentes que producen lesiones diversas en el ADN:

Radiaciones (UV, X, gamma), radicales libres y otros agentes químicos pueden alterar o eliminar bases, romper enlaces fosfodiester, formar uniones intra- o inter-hebras.

agentes químicos pueden alterar o eliminar bases, romper enlaces fosfodiester, formar uniones intra- o inter-hebras.
agentes químicos pueden alterar o eliminar bases, romper enlaces fosfodiester, formar uniones intra- o inter-hebras.

Detección de agentes mutagénicos

Cepas de Salmonella tiphimurium con una mutación que las hace dependientes de histidina

Extractos de hígado se usan para testear si una sustancia puede adquirir mutagenicidad luego de biotransformación

Se pueden diseñar cepas bacterianes sensibles a diferentes tipos de mutaciones

luego de b iotransformación Se pueden diseñar cepas bacterianes sensibles a diferentes tipos de mutaciones

Resumen de lesiones en el ADN y agentes causantes

Base faltante:

Base alterada:

Base incorrecta por radiaciones,

Deleción-inserción: reactivos intercalantes (acridinas, bromuro de etidio)

meros entre bases adyacentes:

Ruptura de hebras:

depurinación por ácido o calor (10 4 purinas diarias por célula en humanos) radiaciones ionizantes, agentes alquilantes

Base incorrecta:

por mal apareamiento de tautómeros o bases ionizadas

desaminación

radiación UV radiaciones ionizantes, radicales oxigenados, reactivos químicos (bleomicina) mitomicina C, derivados de psoralen

Unión covalente de ambas hebras:

Estas lesiones son contínuamente reparadas en la célula. Si el daño afecta a una sola hebra, la información de la otra hebra es usada en la reparación. Si afecta a ambas hebras, la información debe prevenir de otra molécula de ADN (recombinación)

Mecanismos de reparación más comunes:

a)

-Acción correctora de ADN polimerasas

b)

-Reparación post-replicación de mal apareamientos de bases por escición. -Reparación en cualquier tiempo

por

escición de bases o de nucleótidos

mal apareamientos de bases p or escición. - Reparación en cualquier tiempo por escición de bases

Actividad correctora de la ADN polimerasa

Ac ti v id ad correc t ora de la ADN polimerasa
- Si el dañ o es en una hebra, se usa l a otra como
- Si el dañ o es en una hebra, se usa l a otra como

- Si el daño es en una hebra, se usa la otra como molde para la reparación - Cuando ambas hebras están dañadas, se usa otra molécula de ADN homóloga como molde

Reparacn de par de bases erroneo (mismatch)

R eparac ió n d e par de bases erroneo (mismatch)

Diferentes exonucleasas son usadas dependiendo de la localización relativa del daño al sitio de corte

Diferentes exonucleasas son usadas dependie ndo de la localización relativa del daño al sitio de corte

Un sistema similar opera en eucariotes para reparar pares de bases erroneos

Un sistema similar opera en eucariotes para reparar pares de b ases erroneos

Reparación por escición de bases en procariotes

Reparación por escición de bases en procariotes

Reparación por escición de bases en eucariotes

Re paración p or escición de bases en eucariotes

Reparación de daños por escición de nucleótidos

Reparación de daños por escición de nucleótidos

Escición de nucleótidos en eucariotes

Escición de nucleótidos en eucariotes
Escición de nucleótidos en eucariotes

Reparación directa de O6-metilguanina

Reparación directa de O6-metilguanina

Reparación directa de metiladenina y metilcitosina

Reparación directa de metiladenina y metilcitosina

Reparación directa de dímeros de timina

Reparación directa de dí meros de timina
Reparación acoplada a la t ranscr ipc ió n La ARN p olimerasa p uede

Reparación acoplada a la transcripcn

La ARN polimerasa puede reclutar a las enzimas de reparación al encontrar un daño en el ADN