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Regulación por modificación covalente reversible: Proteín-quinasas y proteín-fosfatasas Fosforilación – defosforilación: El mecanismo más frecuente de
Regulación por modificación covalente reversible:
Proteín-quinasas y proteín-fosfatasas
Fosforilación – defosforilación:
El mecanismo más frecuente de regulación
covalente. La fosforilación puede activar o
inactivar a una enzima (modificando su
afinidad por S o la Vmax), cambiar su
especificidad de sustrato o la reacción
catalizada en enzimas multifuncionales, o la
interacción con ADN u otras proteínas.
Según el residuo de aminoácido
fosforilado, las proteín-quinasas
pueden ser serina/treonina
quinasas, o tirosina quinasas
Otros aminoácidos que pueden ser fosforilados en proteínas son: histidina, arginina, lisina,
cisteína, aspártico y glutámico
Las proteín-quinasas y proteín-quinasas son su vez reguladas por diferentes mecanismos
(alostéricos o covalentes) que dependen de señales endógenas o exógenas.
Según su mecanismo de activación tenemos diferentes proteín-quinasas. Ej:
Proteín-quinasa A (PKA): activada por cAMP
Proteín-quinasas C (PKC): activadas por Ca ++
CAM quinasas: activadas por Ca ++ /calmodulina
Proteín-quinasa activada por AMP (AMPK)
Adenilación-desadenilación: mecanismo menos frecuente. Ej: Glutamina sintetasa que es menos activa en la forma desadenilada. Uridilación
Adenilación-desadenilación: mecanismo menos frecuente. Ej: Glutamina sintetasa
que es menos activa en la forma desadenilada. Uridilación y ADP ribosilación son
otros mecanismos menos frecuentes de regulación por modificación covalente reversible.
Regulación covalente de la glucógeno fosforilasa Glucógeno (n+1) + Pi ↓ Glucógeno (n) + glucosa-1-P
Regulación covalente de la glucógeno fosforilasa
Glucógeno (n+1) + Pi
Glucógeno (n) + glucosa-1-P
El estado de fosforilación y la unión de efectores alostéricos actúan conjuntamente en la modulación del
El estado de fosforilación y la unión de efectores alostéricos actúan conjuntamente en la
modulación del equilibrio entre los estados R y T de la glucógeno fosforilasa
-
La fosforilación de la glucógeno fosforilasa favorece el estado R
-
Glucosa favorece el estado T aún cuando la enzima está fosforilada (isoforma hepática)
-
AMP favorece el estado R y ATP el estado T en la isoforma muscular
Fosforilación-defosforilación de la piruvato quinasa hepática
Fosforilación-defosforilación de la piruvato quinasa hepática
La fosforilación-defosforilación puede cambiar la especificidad de reacción en una enzima bifuncional La enzima bifuncional fosfofructoquinasa-2/Fructosa-2,6,bifosfatasa
La fosforilación-defosforilación puede cambiar la especificidad
de reacción en una enzima bifuncional
La enzima bifuncional fosfofructoquinasa-2/Fructosa-2,6,bifosfatasa (PFK2/FBPasa2) de
hígado tiene actividad PFK2 cuando está defosforilada, y actividad FBPasa2 cuando es
fosforilada por PKA. Esto controla los niveles de fructosa-2,6-bifosfato, que es un potente
activador alostérico de la fosfofructoquinasa-1 (enzima clave para el control de la glucólisis) y
un inhibidor de fructosa-1,6-bifosfatasa (enzima clave para el control de la gluconeogénesis).
La isoforma de músculo cardíaco es fosforilada por AMPK, lo que activa la función PFK2 y
favorece la glucólisis
Fosforilación- defosforilación del complejo piruvato deshidrogenasa en respuesta a señales endógenas (relación NADH/NAD+ y AcCoA/CoASH) activa
Fosforilación-
defosforilación del
complejo piruvato
deshidrogenasa en
respuesta a señales
endógenas (relación
NADH/NAD+ y
AcCoA/CoASH)
activa
inactiva
Algunas enzimas tienen más de un sitio de fosforilación, algunos pueden ser activadores y otros inhibitorios.
Algunas enzimas tienen más de un sitio de fosforilación, algunos
pueden ser activadores y otros inhibitorios.
Algunas protein-quinasas actúan como conmutadores que integran
varias señales de entrada
El intercambio de GDP por GTP es un mecanismo usado por las proteínas G para su
El intercambio de GDP por GTP es un mecanismo usado
por las proteínas G para su activación
Analogía
entre
fosforilación
y el
intercambio
de GDP por
GTP
Cambios conformacionales alostéricos inducidos por unión de ligandos y fosforilación son utilizados por proteínas motoras, bombas
Cambios conformacionales alostéricos inducidos por unión de
ligandos y fosforilación son utilizados por proteínas motoras,
bombas
y
trans ortadores
p
La fosforilación reversible impulsa el transporte activo de iones
por las bombas tipo P
Ca ++ -ATPasa de retículo sarcoplásmico/endoplásmico
Dos iones
Ca ++ se unen
fuertemente, el residuo de
aspártico es fosforilado por
ATP creando un enlace de
alta energía
Un cambio conformacional
disminuye la energía del
aspartil-fosfato; el Ca++
ahora está unido débil-
mente, y se libera al lumen
Luego de la liberación del
Ca ++ , el aspartil-fosfato
es hidrolizado dejando a
la proteína lista para el
próximo ciclo
Proteínas que actúan como motores lineales La interconversión entre las tres conformaciones de la izquierda pueden
Proteínas que actúan como motores lineales
La interconversión entre las tres
conformaciones de la izquierda pueden mover
a la proteína sobre un filamento, pero la
reversibilidad impide el movimiento
unidireccional.
Si una de las etapas es irreversible, como la
hidrólisis de ATP en la etapa 2 del diagrama de
la derecha, el movimiento puede hacerse
unidireccional
Esta es la estrategia utilizada por las miosinas
para “caminar” sobre los filamentos de actina
(en la contracción muscular o para transportar
vesículas u organelas en la célula). Dineínas y
kinesinas “caminan” en sentido contrario sobre
la red de microtúbulos
Al desplazarse sobre las fibras del citoesqueleto (microfilamentos de actina o microtúbulos), las proteínas motoras pueden
Al desplazarse sobre las fibras del citoesqueleto
(microfilamentos de actina o microtúbulos), las
proteínas motoras pueden transportar vesículas,
organelas u otros “cargos”; o desplazar entre sí a
distintos filamentos
Clases de miosinas (proteínas motoras que “caminan sobre los microfilamentos de actina)
Clases de miosinas (proteínas motoras que “caminan sobre los
microfilamentos de actina)
Kinesinas: proteínas motoras que “caminan” sobre los microtúbulos
Kinesinas: proteínas motoras que “caminan” sobre los microtúbulos
Dineínas: otras proteínas motoras que se desplazan por los microtúbulos
Dineínas: otras proteínas motoras que se desplazan por los microtúbulos
La dineína y las kinesinas tienen diferente direccionalidad en su desplazamiento por los microtúbulos
La dineína y las kinesinas tienen diferente direccionalidad en su
desplazamiento por los microtúbulos