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Plant extracts and its potential as biological control agents.

Secondary metabolites
Extractos vegetales y su potencial como controladores biolgicos. Metabolitos secundarios

Jos Daniel Herrera Gonzlez, Isaas Ruiz


ID: 402200165, 208260871
Laboratorio de Biotecnologa, Bachillerato en Qumica Industrial, Lic. Sandra Valdez Daz
Escuela de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Costa Rica
Fecha de entrega: 2016-08-31

Abstract

The secondary metabolites are organic chemical compounds synthesized by living beings who do not
have an essential role in the growth or reproduction, i.e., unlike of primary metabolites the absence of a
secondary metabolite does not affect or prevent the survival of the organism. In plants, secondary
metabolites differ from the primary metabolites, since usually have a restricted distribution in the plant
kingdom, i.e., are often in a single plant species. The secondary metabolites are involved in the
ecological interactions between the plant and its environment, accomplishing different functions for
example, alkaloids (confer bitter taste and neuronal inhibition), saponins (affects metabolism, enzyme
inhibition), and cyanogenic glycosides (produce hydrocyanic acid, toxic). In this practice was carried
out identification of different secondary metabolites through qualitative tests (color appearances,
precipitate formation) and the bactericidal capacity and fungicidal capacity of aqueous and ethanol
extracts of plant tissues of leaves of the tree Persea americana (avocado) was studied by preparing
sensitivity discs in Petri dishes with different bacterial cultures.

Keywords: metabolites, secondary, alkaloids, saponins, cyanogenic, avocado.

Resumen

Los metabolitos secundarios son compuestos qumicos orgnicos sintetizados por los seres vivos que
no tienen un rol esencial en el crecimiento o reproduccin, es decir, a diferencia de los metabolitos
primarios la ausencia de un metabolito secundario no afecta o impide la supervivencia del organismo.
En las plantas, los metabolitos secundarios difieren de los metabolitos primarios, ya que por lo general
presentan una distribucin restringida en el reino vegetal, es decir, se encuentran con frecuencia en una
sola especie vegetal. Los metabolitos secundarios intervienen en las interacciones ecolgicas entre la
planta y su ambiente cumpliendo diferentes funciones, por ejemplo, los alcaloides (confieren sabor
amargo e inhibicin neuronal), las saponinas (afectan metabolismo, inhibicin enzimtica), y los
glucsidos cianognicos (producen cido cianhdrico, txico). En esta prctica se llev a cabo la
identificacin de diferentes metabolitos secundarios por medio de ensayos cualitativos (aparicin de
colores, formacin de precipitados) y se estudi la capacidad bactericida y fungicida de extractos
acuosos y etanlicos de los tejidos vegetales de hojas del rbol Persea americana (aguacate) mediante
la preparacin de discos de sensibilidad en placas de Petri con diferentes cultivos bacterianos.

Palabras clave: metabolitos, secundarios, alcaloides, saponinas, cianognicos, aguacate.

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Introduccin
En hbitats naturales, las plantas estn rodeadas El estudio de los metabolitos secundarios fue
por un gran nmero de enemigos potenciales. Casi iniciado por los qumicos orgnicos del siglo XIX
todos los ecosistemas contienen una amplia y principios del siglo XX, quienes se interesaron
variedad de bacterias, virus, hongos, nematodos, en estas sustancias y las llamaron productos
arcnidos, insectos, mamferos y otros animales naturales, debido a su importancia como drogas,
herbvoros. Por su naturaleza, las plantas no venenos, sabores y materias industriales [2]. Ms
pueden escapar estos seres que las pueden recientemente, se descubri que muchos
amenazar, por lo que deben protegerse de otras metabolitos secundarios tenan importantes
formas. funciones ecolgicas en las plantas, entre las que
se pueden mencionar:
La cutcula (una capa externa cerosa de la planta)
y la peridermis (tejido protector secundario), Protegen a las plantas de la ingestin por
adems de dificultar la prdida de agua, herbvoros y de la infeccin por patgenos
constituyen una barrera a la entrada de bacterias y microbianos (funciones de defensa).
hongos. Adems, un grupo de compuestos Sirven como atrayentes de polinizadores,
vegetales conocidos como metabolitos dispersadores de semillas y como agentes en
secundarios, defienden a las plantas de los la competencia entre plantas.
herbvoros y microbios patgenos. Los Intervienen en las interacciones ecolgicas
compuestos secundarios pueden tener otras entre la planta y su ambiente [3].
funciones, como en el caso de las antocianinas [2].
La lista de metabolitos secundarios en las plantas
Los metabolitos secundarios son una gran es amplia, pero aun as los ms identificados y
cantidad y diversidad de compuestos orgnicos utilizados hoy en da en amplios campos de la
que no parecen tener una funcin directa con el industria son: alcaloides, quinonas, antocianinas,
crecimiento y desarrollo; tampoco tienen funcin cumarinas, saponinas, esteroides, flavonoides,
reconocida en los procesos de fotosntesis, leucoantocianidinas y cardiotnicos, entre otros
respiracin, transporte de solutos, sntesis de ms. En general, los metabolitos secundarios se
protenas, asimilacin de nutrientes, dividen en tres grupos: Terpenoides, fenlicos y
diferenciacin o formacin de carbohidratos, compuestos nitrogenados [2].
protenas y lpidos. Los metabolitos secundarios
tambin difieren de los metabolitos primarios El control biolgico es un mtodo que emplea
(aminocidos, nucletidos, azcares, acil lpidos) organismos vivos para reducir la densidad de la
en que tienen una distribucin restringida en el poblacin de otros organismos plaga. Una plaga
reino vegetal. Es decir, un metabolito secundario es cualquier organismo que produce un dao o
determinado se encuentra con frecuencia en una o reduce la disponibilidad y la calidad de un recurso
algunas especies vegetales o grupos de especies humano (Hajek, 2004) [4]. Los recursos abarcan
relacionadas, por ejemplo los alcaloides, mientras desde la salud humana hasta plantas o animales
que los metabolitos primarios se encuentran en destinados a fines alimenticios, de produccin, o
todo el reino vegetal [2]. al esparcimiento como las mascotas y plantas en
reas recreativas. Para el manejo de plagas existen

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varios mtodos alternativos: el uso de productos En funcin de esto, diversas estrategias han sido
de sntesis qumica (plaguicidas); cultivos empleadas objetivando aumentar los valores de
genticamente modificados resistentes a plagas; productividad de compuestos bioactivos en
control biolgico; o bien la combinacin de una o sistemas de cultivo de clulas y tejidos vegetales
ms de estas tcticas, el manejo integrado de incluyendo la manipulacin epigentica la
plagas. elucidacin de vas biosintticas y la aplicacin de
tcnicas de biologa molecular, segn un abordaje
El empleo de qumicos como los plaguicidas no
de ingeniera de vas metablicas.
siempre es la mejor estrategia para combatir una
plaga especfica debido a que frecuentemente est Metodologa
asociado a efectos negativos como la resurgencia
de la plaga blanco luego de un lapso de tiempo, Se realiz la preparacin de extractos vegetales
los estallidos de plagas secundarias como del rbol frutal de aguacate, primeramente de
consecuencia de la mortandad de los enemigos extracto seco con anticipacin de una semana en
naturales que la controlaban (resultado de la baja secado y luego la maceracin de extracto fresco
especificidad del plaguicida) y/o la adquisicin de durante la seccin del laboratorio. Para cada una
una resistencia al plaguicida por parte de la plaga. de las evaluaciones de los metabolitos secundarios
Es as, que el uso del control biolgico, al no dejar y sus respectivas pruebas cualitativas, se realiz
residuos qumicos y al actuar de manera ms una preparacin del extracto segn correspondiera
especfica y permanente sobre la poblacin al metabolito a analizar, ya fuese en seco o fresco,
problema, fue ganando terreno como alternativa seguidamente se les aadi los reactivos y
viable en el manejo de la salud vegetal [1]. soluciones para que favorecieran la observacin
del resultado. El procedimiento y anlisis de
Adicionalmente, los metabolitos secundarios son extractos vegetales y su potencial como
utilizados en escala industrial para la produccin controladores biolgicos se realiz siguiendo la
de insecticidas, colorantes, saborizantes, metodologa empleada en el manual de
aromatizantes y medicamentos en general. Con Laboratorio de Biotecnologa Industrial escrito
respecto del alto valor econmico de algunos de por Lic. Sandra Valds et al 2016.
estos biofrmacos, bajos niveles de productividad
Seccin Experimental
han sido usualmente encontrados en los sistemas
de produccin agrcola convencionales, Reactivos
ocurriendo por una serie de motivos.
Agar PDA y Agar Mueller Hinton.
Este hecho genera la necesidad de desarrollar Reactivo de Dragendorff y Reactivo Mayer.
sistemas alternativos de produccin y en este HCl al 5%.
contexto el cultivo de clulas y tejidos vegetales Diclorometano.
ha sido considerado como un sistema de alto H2SO4 .
potencial para la superacin de este problema; FeCl3 al 1%.
ms all que se presentan algunas dificultades a su Etanol al 95%.
viabilidad econmica que an no han sido NaOH diluido.
superadas. NaOH al 5% en amonaco al 2%.
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Objetivos Identificacin de los metabolitos secundaros del
tejido vegetal del rbol de aguacate
Realizar el anlisis qumico de los extractos de
las plantas.
Realizar la prueba de susceptibilidad de
microorganismos, ante los extractos vegetales.
Determinar el efecto bactericida y fungicida
de extractos acuosos y etanlicos de plantas
colectadas del Valle Central, va in vitro.

Resultados
Foto 1. Presencia de alcaloides. Foto tomada
Cuadro 1. Identificacin de los metabolitos
desde una cmara de celular por Jos Daniel
secundaros del tejido vegetal del rbol de
Herrera.
aguacate.

Metabolito
Resultado
secundario
Alcaloides Positivo (+)
Esteroides Positivo (+)
Saponinas Negativo (-)
Fenlicos y taninas Positivo (+)
Flavonoides
Leucoantocianidinas Negativo (-)
Cardiotnicos
Quinonas Negativo (-) Foto 2. Presencia de esteroides. Foto tomada
Antocianinas Positivo (+) desde una cmara de celular por Isaas Ruiz.
Cumarinas Positivo (+)

Foto 3. Ausencia de saponinas. Foto tomada


desde una cmara de celular por Jos Daniel
Herrera.

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Foto 4. Presencia de fenlicos. Foto tomada desde Foto 7. Presencia de antocianinas. Foto tomada
una cmara de celular por Jos Daniel Herrera. desde una cmara de celular por Jos Daniel
Herrera.

Foto 5. Ausencia de flavonoides,


Foto 8. Presencia de cumarimas. Foto tomada
leucoantocianidinas y cardiotnicos. Foto tomada
desde una cmara de celular por Isaas Ruiz.
desde una cmara de celular por Jos Daniel
Herrera.

Foto 6. Ausencia de quinonas. Foto tomada desde Foto 9. Ausencia de cardiotnicos, Foto tomada
una cmara de celular por Isaas Ruiz. desde una cmara de celular por Jos Daniel
Herrera.
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Anlisis de resultados

Al observar los resultados obtenidos, en la de colores naranaja, rojo o violetas para


fotografa 1 se puede observar la formacin de flavonoides, coloraciones rojas para
turbidez en los tubos de ensayo, indicador de un leucoantocianidinas y coloraciones prpuras o
positivo para la presencia de alcaloides en el violetas para cardiotnicos, sin embargo, durante
extracto, esto se explica por el hecho, de que los estas pruebas no se obtuvo dichas coloraciones,
alcaloides son bases nitrogenadas que en indicativo de la ausencia de estos compuestos en
presencia de un cido diluido pueden convertirse los extractos, evidenciable en las fotografas 5 y 9
en sus respectivas sales [3]. [3].

Para el reconocimiento de esteroides y En la identificacin de quinonas, se considera


triterpenoides en la fotografa 2 se observ la positivo la aparicin de un color rojo cereza en la
aparicin de una coloracin verde oscuro casi capa acuosa del extracto que indica la presencia
negra, indicador positivo de la presencia de de quinonas en la muestra, en la fotografa 6 se
esteroides, lo cual se genera debido a que al evidencia la ausencia de las mismas al no
reaccionar con los reactivos anhdrido actico y encontrarse rastro de dicha coloracin.
cido sulfrico, que actan como agentes Para el reconocimiento de antocianinas, se
deshidratantes en grupos hidroxilos que propician considera positiva la prueba ya que estos
un aumento en la conjugacin de la insaturacin compuestos se reconocen por generar diferente
en el anillo fusionado adyacente, generando color a pH alcalino y a pH cido, en la fotografa
grupos cromforos que permiten su determinacin 7 se evidencia la presencia de stas en el extracto,
[5]. ya que a pH cido hay una coloracin amarillenta
En los ensayos realizados para la identificacin de tenue y a pH alcalino hubo una coloracin marrn
saponinas, se considera positiva la prueba si rojiza [3].
despus de una agitacin vigorosa del extracto En la identificacin de cumarinas, se considera
hay formacin de espuma que persista al menos positivo la aparicin de coloraciones verdes,
por cinco minutos, los resultados obtenidos fueron amarillas o rojizas, bajo la luz ultravioleta a
negativos para dicha prueba, indicativo de la 365nm aproximadamente, en la fotografa 8 se
ausencia de saponinas en el extracto, evidenciable logr observar una coloracin rojiza en el papel
en la fotografa 3. filtro, indicativo de la presencia de cumarinas en
En el reconocimiento de compuestos fenlicos y el extracto.
taninos, en la fotografa 4 se logr visualizar en Finalmente con respecto a la evaluacin de la
los tubos de ensayo la aparicin de una coloracin capacidad bactericida y fungicida no se
de azul violeta, indicador positivo de la presencia observaron halos de inhibicin significativos para
de compuestos fenlicos y/o taninos en el las bacterias E. coli y Serratia por lo que se
extracto, esto se explica por el hecho de el cloruro concluye que los extractos acuosos de las hojas de
frrico con fenol forma un complejo coloreado aguacates no tienen componentes bioactivos que
llamado tetrakis fenol hierro III [6]. las defiendan ante dichos microorganismos.
En los ensayos realizados para el reconocimiento
de flavonoides, leucoanocianidinas y
cardiotnicos, se considera positiva la aparicin
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Conclusiones
En los ltimos tiempos el desarrollo de la
prctica del control biolgico ha surgido
principalmente de la necesidad de
encontrar una alternativa a mtodos de
elevada toxicidad y persistencia como el
control qumico.

Referencias

1. Villacide J & Corley J. 2012. Introduccin a


la teora del control biolgico de plagas.
INTA EEA Bariloche. Argentina.
2. Taiz L & Zeiger E. 2006. Fisiologa vegetal.
Volumen 1. Universitat Jaume. USA.
3. Valds S. Manual de laboratorio de
Biotecnologa para qumica industrial.
Catedra de qumica orgnica y bioqumica;
2016, p 17.
4. Hajek A.E. 2004. Natural Enemies. An
introduction to biological control. Cambridge
University Press, New York.
5. Sandoval, M. (2013). Reconocimiento del
Colesterol. Accesado el 15/10/16. Disponible
en
http://es.slideshare.net/Milisanm/reconocimien
to-del-colesterol-quimica
6. Universidad Privada San Juan Bautista.
Identificacin de algunos compuestos
orgnicos. Accesado el 15/10/16. Disponible
en
http://html.rincondelvago.com/identificacion-
de-algunas-clases-de-compuestos-
organicos.html

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