34 / Extraccin pigmentos colorantes tipo flavonoides, flor de pomo/ N. Bonilla, F. Varn, L. Garzn.

EXTRACCIN DE PIGMENTOS COLORANTES TIPO FLAVONOIDES,

FLOR DEL POMO (Syzygium jambos). ZONA VERDE DEL IEAR.
FLORENCIA CAQUET.

Norma Constanza Bonilla Ros1; Flor Angela Varn 2; Leidy Paola Garzn3

Recibido: 19 de agosto de 2014. Aceptado: 17 de septiembre de 2014

Resumen

La presente investigacin fue desarrollada en el marco de la convocatoria de proyectos

en la lnea abierta del programa Ondas Colciencias liderado por la Universidad de la
Amazonia de Florencia Caquet. La investigacin estuvo orientada a: la extraccin de los
pigmentos colorantes tipo flavonoides en medio metanlico, identificacin a travs de
pruebas colorimtricas y cromatogrficas y la cuantificacin espectrofotomtrica de los
flavonoides totales, presentes en la flor de pomo (Syzygium jambos) colectada en la zona
verde de la sede San Juan Bosco de la IEAR ubicada en Florencia Caquet. Los pigmentos
colorantes tipo flavonoides identificados fueron: catequinas, antocianinas,
leucoantocianidinas, calconas, flavanonas. Los flavonoides totales expresados como mg
de catequinas por gramo de extracto seco fueron 3.580,8614.

Palabras claves: flavonoides, tamizaje fitoqumico, cromatografa, cuantificacin de

flavonoides totales.

ABSTRACT

This research was carried out in the framework of Colciencias call for projects in the open
line of Ondas program led by Amazonia University in Florencia, Caquet. The study was
oriented to the extraction of coloring flavonoid pigments in methanolic medium, the
identification - through chlorimetric and chromatographic tests and spectrophotometric
quantification - of total flavonoids in the Syzygium jambos, the Pomo tree flower, gathered
in the green area of San Juan Bosco, part of the IEAR (Antonio Ricaurte School) in
Florencia, Caquet. The flavonoid pigments identified were: catechins, anthocyanins,
leucoanthocyanidins, chalcones, and flavanones. The total flavonoids expressed as mg of
catechins per gram of dry extract was 3,580.8614.

1
Licenciada en Qumica, MSc. en Docencia de la Qumica. Docente de Qumica en la IEAR. Florencia
(Caquet). Colombia
2
Zootecnista. MSc en Pedagoga. Docente de Ciencias Naturales en la IEAR. Florencia (Caquet).
Colombia
3
Ingeniera Agroecloga. Docente de la Especialidad en Gestin Ambiental en la IEAR. Florencia
(Caquet). Colombia
 Florencia, Colombia, 3 (5): 34-42 /Julio-diciembre 2014/ 35

Key words: falvonoids, phytochemical screening, chromatography, total flavonoid

quantification

Introduccin

Los colorantes son definidos como: Aquellas sustancias naturales que aaden o
devuelven algn color; se encuentran presentes como pigmentos en plantas, hojas y
frutos (Cceres, 1996, citado por Vzquez, p. 23 ). Por otra parte, Los colorantes se
dividen en varios grupos, a saber: colorantes naturales, tintes naturales y pigmentos
naturales. Los colorantes naturales son productos que se adicionan a los alimentos para
proporcionarles un color especfico y hacerlos ms agradables a la vista. Los tintes
naturales se usan para teir telas, madera y cuero. Los pigmentos naturales son los
compuestos responsables del color visible de una planta; adems, son los utilizados por
la industria farmacutica.

Asimismo, los colorantes naturales pueden ser clasificados segn su naturaleza

qumica en diversos grupos. Como fuentes naturales de estos colorantes se pueden
considerar las plantas superiores, las algas, hongos y lquenes, algunos insectos, as como
algunos organismos marinos vertebrados.

Son muchas las plantas superiores que producen colorantes; sin embargo, a pesar de
su universalidad no estn suficientemente concentrados para permitir una rpida y
econmica extraccin y, en consecuencia, son escasas las que tienen gran importancia
comercial como fuente de colorantes. La Tabla 1 muestra una clasificacin de colorantes
naturales propuesta por Lock en 1997, la cual permite visualizar que los flavonoides son
pigmentos vegetales que contribuyen a darle color a las flores, frutos y hojas.

Tabla 1. Clasificacin de colorantes naturales segn composicin qumica

Naturaleza qumica Algunos ejemplos Color

Tetrapirroloe Ficobilinas Azul-verde

Clorofila Verde

Carotenoides Carotenoides Amarillo-

anaranjado

Flavonoides Flavonas Blanco-crema

Flavanoles Amarillo-blanco

Chalconas Amarillo

Auronas Amarillo
36 / Extraccin pigmentos colorantes tipo flavonoides, flor de pomo/ N. Bonilla, F. Varn, L. Garzn.

Antocianinas Rojo-azul

Xantonas Xantonas Amarillo

Quinonas Naftoquinonas Rojo-azul-verde

Derivados indioides e ndoles Indio Azul-rosado

Betalanas Amarillo-rojo

Pirimidinas sustituidas Perinas Blanco-amarillo

Flavinas Amarillo

Fenoxanizinas Amarillo-rojo

Fenazinas Amarillo-
prpura

Es importante aclarar que los flavonoides son pigmentos vegetales que poseen un
esqueleto carbonado C6-C3-C6 designadas como A, B y C (Figura 1.). Dependiendo del
grado de oxidacin y de sustitucin del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas, flavonoles, flavanonas, isoflavonas, flavanos y antocianinas. El anillo pirano
puede ser abierto (chalconas) y reciclado en un anillo furano (auronas).

Figura 1. Estructura bsica de un Flavonoide

Segn estudios realizados los flavonoides poseen una gran importancia en la

utilizacin de las plantas como colorantes naturales. Los flavonoides en forma natural se
encuentran libres como glicsidos o derivados metilados en las clulas vivas de las
plantas. Como glicsidos, uno o ms grupos hidroxilos fenlicos estn combinados con
residuos de mono o disacridos (Hurtado, Citado por Valencia, 1985).

Estos compuestos se encuentran en todas las plantas superiores, tanto en angiospermas

como gimnospermas, dentro de las primeras se acumulan principalmente en los
cromoplastos o vacuolas, otros se encuentran en una fraccin lpido-soluble y estn
presentes en la superficie de las plantas en ceras de las hojas y exudados de los botones
florales. Dicha combinacin es importante debido a que se encuentran como glicsidos
 Florencia, Colombia, 3 (5): 34-42 /Julio-diciembre 2014/ 37

en las clulas vivas, en el caso de pigmentos de flores, al proveer solubilidad, proteccin

de la oxidacin enzimtica y estabilidad de la luz.

Por otra parte, una flor poco estudiada desde el punto de vista fitoqumico es la del
pomo (Syzygium jambos). Sin embargo, existen muchas posibilidades que sus flores
presenten un alto contenido de flavonoides. En la sede San Juan Bosco de la Institucin
Educativa de Florencia Caquet abunda el rbol de pomo (Syzygium jambos), pero poco
se sabe acerca de las propiedades fitoqumicas de sus flores. De ah que el interrogante a
resolver es cules son los pigmentos colorantes del tipo flavonoides contenidos en la flor
del pomo proveniente de la zona verde de la San Juan Bosco, Institucin Educativa
Antonio Ricaurte?

Extraer a nivel de laboratorio los pigmentos colorantes de la flor de pomo a nivel

escolar es una oportunidad para profundizar en el estudio de las funciones orgnicas, las
tcnicas de extraccin, las tcnicas de identificacin colorimtricas, cromatrogrficas y
espectrofotomtricas caractersticas en los procesos de identificacin y caracterizacin de
compuestos orgnicos.

Se plantea como objetivo de la presente investigacin, extraer los pigmentos

colorantes del tipo flavonoides contenidos en la flor del pomo proveniente de la zona
verde de esta Institucin Educativa; identificarlos mediante pruebas colorimtrica y
cromatogrficas y cuantificar los flavonoides totales mediante espectrofotometra.

Materiales y Mtodo.

- Material Vegetal. Se colectaron las flores de Pomo en la zona verde de la Sede San
Juan Bosco de la Institucin Educativa Antonio Ricaurte del municipio de Florencia
Caquet, ubicada en la avenida Roberto Claros con avenida Uniamazonia esquina
entre las coordenadas 13710,38" de Latitud Norte y 753623,07" de longitud Oeste
con relacin al meridiano de Greenwich. La extensin de la sede San Bosco es de
24.647 m2 aproximadamente. Limita al norte con la Institucin Educativa Jorge
Eliecer Gaitn; al sur con el Instituto de Bienestar Familiar. En ella, se encuentra un
rea natural en ambiente urbano con cobertura de rboles y arbustos de importancia
ecolgica y/o econmica, con un rea aproximada de 612 m2 donde se encuentran 59
rboles de pomo.

- Preparacin del extracto vegetal de la flor de pomo. El extracto se prepar a

temperatura ambiente. Para la preparacin del extracto en fro se pes 20 g de la
muestra y se agreg 175 ml de metanol. Se coloc en un frasco color mbar por dos
semanas. Luego se procedi a filtrar utilizando equipo de filtracin al vaco y papel
filtro Watmann 1. Se concentr el extracto metanlico en el rotaevaporador hasta
completa evaporacin del disolvente. Se procedi a realizar un tamizaje qumico,
38 / Extraccin pigmentos colorantes tipo flavonoides, flor de pomo/ N. Bonilla, F. Varn, L. Garzn.

posteriormente cromatografa en capa fina y finalmente, determinacin de

flavonoides totales.

- Tamizaje qumico. Para realizar este ensayo, se extrajeron alcuotas de 1 ml del

extracto metanlico obtenido, realizando las reacciones especficas para este tipo de
metabolito (flavonoides), a travs de las reacciones colorimtricas correspondientes.
Las reacciones qumicas que se llevaron a cabo fueron las siguientes:

- Ensayo de Shinoda. Se tom una alcuota de 1 ml del extracto metanlico; se le

aadi 1 ml de HCl(c) y unas virutas de Mg(s) y al terminar la reaccin se le adicion
alcohol amlico y se agit. Se dejaron separar las fases y se observ la coloracin del
alcohol amlico, siendo la evidencia positiva:
- Flavonas: amarillo, naranja o rojo.
- Flavonol o flavanonol: rojo a carmes, rojo magenta.
- Flavanonas: carmes a magenta, rojo, magenta, violeta, azul.
- Isoflavonas: amarillo.
- Isoflavanonas, calconas y auronas: incoloras.

- Ensayo con cido sulfrico concentrado. Se tom una alcuota de 1 ml del extracto
alcohlico; se concentr a sequedad; se aadi unas gotas de H2SO4 concentrado y se
observ la coloracin, siendo la evidencia positiva una coloracin diferente al
carmelita claro:
- Flavonas y flavonoles: amarillo intenso.
- Flavanonas: anaranjado o guinda.
- Calconas o auronas: rojo guinda o rojo azulado.

- Ensayo con lcalis. Se tom una alcuota de 1 ml del extracto metanlico y se

basific con hidrxido de sodio al 5 %, siendo la evidencia positiva:
- Flavonas, flavanonol e isoflavonas: amarillo.
- Flavanonas y flavonol: amarillo a naranja.
- Calconas: naranja a rojo.

-Ensayo de Rosenheim. Se tom una alcuota de 1 ml del extracto metanlico y se le

adicion 1 ml de HCl(c) y se calent durante 10 min; se enfri y adicion 1 ml de
agua y 2 ml de alcohol amlico y se agit; se dej en reposo separndose las fases, y
se observ la coloracin de la fase amlica, siendo la evidencia positiva:
- Leucoantocianidinas: rojo a marrn.
- Antocianidinas: anaranjado o rojo azuloso

- Ensayo de catequinas. Se tom una gota del extracto metanlico con ayuda del
capilar en un papel de filtro. Sobre la mancha, se aplic carbonato de sodio y se coloc
bajo la luz UV. Una evidencia positiva es la aparicin de una mancha verde carmelita.
 Florencia, Colombia, 3 (5): 34-42 /Julio-diciembre 2014/ 39

-Determinacin de la presencia de Antocianinas. Se tom una alcuota de 1 ml del

extracto metanlico, se elev el pH de la solucin a 9-10, coloracin verde, castao o
azul representa la presencia de antocianinas.

- Cromatografa en capa fina

- Preparacin de la fase mvil. Se mezcl por separado en tres beacker, en su

respectivo orden; los siguientes sistemas de solventes:
I- Cloroformo-acetona-cido frmico (7,5: 1,65: 0,85)
II- Acetato de etilo-cido frmico-cido actico-agua (8: 0,9: 0,9: 0,2)
III- Tolueno-cloroformo-acetona (4: 2,5: 3,5),
Se agit cada mezcla durante 5 minutos con un agitador magntico (vortex) y al beacker
que contiene cada una de las mezclas se le coloca un vidrio de reloj para taparlo. Pasados
5 minutos se traslad cada mezcla a una cmara cromatogrfica, la cual permaneci
tapada.

- Preparacin de las soluciones estndares. Se pes 5 mg del estndar y se mezcl con

10 ml de metanol. Se agit la solucin para homogenizarla. Cada solucin se prepar
en un beacker para luego ser guardada en un recipiente sellado, debidamente
identificado.

- Preparacin de la placa cromatogrfica. Se cortaron varias placas de

aproximadamente: 2 cm x 10 cm de rea de un cromatofolio de aluminio de slice gel
60F254 y se realizaron los siguientes trazos: un centmetro arriba de la parte inferior
de la placa se traz una lnea horizontal con lpiz, y a lo largo de esa lnea se colocaron
2 puntos, separados uno de otro por 1 cm de distancia.

- Corrida de la placa cromatogrfica. Se coloc 5 L del extracto metanlico en cada

punto trazado en la placa cromatogrfica, respectivamente, mediante el uso de
capilares. Esto mismo se realiz con las soluciones estndares que se prepararon. Se
coloc la placa en la cmara cromatogrfica que contiene a la fase mvil. Se dej que
las lneas que aparecen con el tiempo llegaran a una distancia de 2 cm de la parte
superior de la placa. Se retiraron las placas y se colocaron en la campana durante un
corto tiempo con la finalidad de que se secara la fase mvil.

- Preparacin de la solucin reveladora. Para visualizar mejor las manchas que

aparecieron en las placas, se colocaron en cmaras de cromatografa con yodo
sublimado.

Las caracterizaciones parciales se realizaron utilizando la razn de recorrido (Rf),

reportado por Harborne 1979, cuyos valores de Rf se calcularon segn la ecuacin:

Rf Distancia recorrida por la muestra

Distancia recorrida por el solvente
=
40 / Extraccin pigmentos colorantes tipo flavonoides, flor de pomo/ N. Bonilla, F. Varn, L. Garzn.

- Contenido total de Flavonoides

La mezcla de reaccin consisti en 400 L de agua destilada, seguidamente se adicion

de 10 a 100 L de extracto (Completando a volumen de 500 L), luego, se agreg 30 L
de NaNO2 5% (Se esper 5 min), luego 30 L AlCl3 al 10% (Se esper 5 min.), despus
se agreg 200 L NaOH 1M (Se esper 15 min) y por ltimo se adicion 240 L de agua
destilada. Se guard en la oscuridad y a temperatura ambiente, por 30 min. Se ley, la
Absorbancia a 510 nm (ZHISHEN et al, 1998). Se realiz una curva patrn usando como
referencia (+)-catequina, con un rango de concentracin (5-80 g/ml), donde se obtuvo
la siguiente ecuacin lineal y = 0,0250x - 0,0578, R = 0,9981.

Determinacin de flavonoides en una muestra. Se pes 1 ml de extracto, se coloc en caja

de Petri, se calent hasta sequedad durante seis horas a una temperatura de 60 C. Se dej
enfriar y se procedi a pesar el conjunto. Se determin la masa del extracto seco. El
proceso se replic cinco veces.

Resultados

En este estudio se utiliz como mtodo de extraccin, la percolacin a temperatura

ambiente (29 C), teniendo en cuenta que si se aumentaba la temperatura era posible
degradar o evaporar ciertos flavonoides voltiles que pudieran estar presentes en el
extracto; empleando como solvente metanol (reactivo analtico), con el propsito de
obtener el metabolito secundario de inters (flavonoides) en dicho solvente, en un
perodo de tiempo de dos semanas.

- Tamizaje qumico. Se realiz la determinacin cualitativa preliminar de flavonoides

en el extracto metanlico, a travs de un tamizaje qumico, de lo cual se obtuvo una
evidencia positiva de flavonoides como se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2. Resultados del tamizaje qumico

Metabolito Ensayos Evidencia Tipo flavonoide Color

Flavonoides Shinoda + Flavanonas Carmes

Calconas,
Rojo
H2SO4 (conc.) +
guinda

Alcalis + Calconas Rojo

Rosenheim + leucoantocianidinas marrn

Catequinas + Catequinas Verde

 Florencia, Colombia, 3 (5): 34-42 /Julio-diciembre 2014/ 41

Antocianinas + Antocianinas verde

En cuanto a la prueba de shinoda, se present el cambio de color de una solucin

amarilla a una solucin carmes. Con ello se demostr la presencia de flavanonas. La
prueba de reaccin con cido sulfrico concentrado (H 2SO4) present un cambio de color
de una solucin amarilla clara a una solucin roja guinda. Con ello se demostr la
presencia de calconas.

- Anlisis cromatogrfico. La caracterizacin cromatogrfica del extracto metanlico

en los sistemas de solventes evaluados, despus de realizado el cromatograma y
visualizados con yodo sublimado, se muestran en la Tabla 3.

Tabla 3. Evaluacin cromatogrfica del extracto metanlico

Solvente Rf Yodo

Se observ mancha pegada a la

Fase I 0.15
lnea de inicio.

Se observ mancha ovalada

Fase II 0,34
difusa.

Fase III 0.06 Se observ mancha muy difusa.

En la corrida con el sistema de solvente I: cloroformo-acetona-cido frmico no se

observ ningn cambio, al igual que con el sistema III: tolueno-cloroformo-acetona. En
cambio, en el sistema de solvente II: acetato-cido frmico-cido-agua, s se observ
separacin de los pigmentos colorantes, atribuidos a antocianinas segn el Rf calculado.

No obstante, la caracterizacin cromatogrfica del extracto metanlico en los sistemas

de solventes estudiados no result satisfactoria para la separacin y deteccin de los
compuestos flavonlicos, cuya respuesta positiva fue obtenida a travs del tamizaje
qumico efectuado previamente, lo cual pudo estar relacionado con los efectos de
polaridad de las fases estudiadas.

No se puede proponer un flavonoide especfico porque las fases empleadas en este

estudio son generales para determinar tipos de flavonoides. Adems, la resolucin de las
manchas en las fases empleadas, no result satisfactoria, permitiendo solamente, definir
el tipo de flavonoide. Para obtener un resultado concluyente, al respecto, se deben evaluar
sistemas de solventes especficos para estos tipos de flavonoides.

- Anlisis de flavonoides totales. La curva de calibracin obtenida para este ensayo se

presenta en la figura. 2. Teniendo en cuenta los datos de absorbancia para los extractos
42 / Extraccin pigmentos colorantes tipo flavonoides, flor de pomo/ N. Bonilla, F. Varn, L. Garzn.

preparados, se encontr que los flavonoides totales fueron 3.580,8614 mg de

catequina por g de extracto seco de flor de pomo.

Figura 2. Curva de calibracin utilizando catequina como estndar a 510 nm.

1,4
A y = 0,015393x + 0,006314
b 1,2 R = 0,999087
s
1
o
r 0,8
b
a 0,6
n
c 0,4
i
0,2
a
0
0 20 40 60 80 100
mg de catequina

Sera adecuado seguir analizando con ms detalle esta flor y sus efectos en relacin
con el hombre. Investigaciones revelan que los flavonoides son metabolitos secundarios
que poseen propiedades antioxidantes, son tenidos en cuenta para el tratamiento de
trastornos cardacos y del sistema nervioso.

Discusin

La flor de pomo contiene un alto contenido de flavonoides los cuales deben ser
identificados a travs de otras tcnicas ms especficas como la cromatografa lquida de
alta resolucin, HPLC. Con este trabajo queda abierto el espacio para futuras
investigaciones que permita la caracterizacin de metabolitos secundarios distintos a los
flavonoides y sus posibles aplicaciones.

Conclusiones

Se puede concluir que, la presencia de pigmentos colorantes del tipo flavonoides en el

extracto de flor de pomo se demostr mediante pruebas colorimtricas, cromatogrficas
y espectrofotomtricas. Se realizaron 6 pruebas colorimtricas: la reaccin de Shinoda, la
reaccin con cido sulfrico concentrado, reaccin con lcalis, ensayo de Rosenheim,
ensayo de catequinas, ensayo de Antocianinas (ver tabla 2). En todas las pruebas se
presentaron cambios de colores, lo que demuestra la presencia de flavonoides, tales
como: calconas, antocianinas, leucoantocianidinas, catequinas y flavanonas.

En la cuantificacin espectrofotomtrica de los flavonoides totales expresados como mg

de catequinas por g de extracto seco de flor de pomo fue de 3.580,8614.
 Florencia, Colombia, 3 (5): 34-42 /Julio-diciembre 2014/ 43

Agradecimientos
A la MSc. Paula Liliana Galeano, profesora de la Universidad de la Amazonia por la
asesora durante el desarrollo del presente proyecto de investigacin.
A Jos Ramn. Qumico de la Universidad de la Amazonia. Joven Investigador del
programa Conciencias, quien apoy de manera desinteresada y constante muchos de los
ensayos fitoqumicos en los laboratorios de la Universidad de la Amazonia.
A la Qumica Marcela por facilitar las instalaciones de los laboratorios de la Universidad
de la Amazonia , equipos y algunos de los reactivos requeridos para efectuar esta
investigacin que no se pudieron comprar con el recurso asignado al proyecto.
Al profesor Marco Correa por su apoyo en el proceso de caracterizacin taxonmica de
la especie vegetal, (Syzygium jambos) y personal del Jardn Botnico y Herbario.

Referencias Bibliogrficas

Cceres, A. (1996). Plantas de uso medicinal en Guatemala. Guatemala: Editorial

Universitaria.

Lock, O. (1997). Colorantes naturales. Per: Fondo editorial de la Pontificia Universidad

Catlica del Per.

Lock, O. Anlisis Fitoqumico y Metabolitos Secundarios. Pontificia Universidad

Catlica del Per. [serie en Internet]. Disponible en:
http://www.macaperuana.com/analisis.htm

Ruiz, S. (2008). Determinacin de la tcnica de extraccin de flavonoides totales de las

hojas de Mangifera indica. Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad
Nacional de Trujillo.

Valencia, C. (1985). Los productos de las plantas: una visin integral. Mxico

Vsquez , H. (2004) y Cano Morales, T. Extraccin, a nivel de laboratorio, de los

pigmentos colorantes del tipo flavonoides contenidos en la flor del subn (acacia
farnesiana l. Willd) proveniente de un bosque silvestre guatemalteco. Trabajo de grado.
Universidad de San Carlos de Guatemala. Facultad de Ingeniera. Escuela de Ingeniera
Qumica Guatemala. Mxico.