Generacin de adenovirus CELO recombinante

Para la generacin de adenovirus CELO recombinantes, primero construimos el vector

plsmido lanzador pCBEd13Kb como se describe por Francois et al. Este vector plasmdico
permite la construccin de virus CELO recombinantes con insertos de hasta 5 Kb. Para su
construccin, clonamos un fragmento del genoma CELO (36248-40065 pb) en el vector
plasmdico pBluescript 11 KS (+) (Fermentas, Lituania). A continuacin, el fragmento del gen
CELO mencionado anteriormente se subclon en el vector plsmido lanzador pCBEdlRV en
lugar del fragmento del genoma celo de 38897 a 41731 pb, dando como resultado el plsmido
pCBEdl3kB. Esta plamida contiene dos fragmentos del genoma CELO (36248-40065 pb y 43685-
43804 pb) capaces de dirigir la recombinacin homloga con el ADN del virus CELO nativo en la
lnea celular LMH.

Se clon un casete de expresin que contena el gen hLf bajo el control del promotor del
citomegalovirus humano (CMV), la secuencia lder bipartita (BPL) de CELO y la secuencia seal
p (A) de la hormona del crecimiento bovino (BGH) p (A) en el vector obtenido pCBEdl3Kb . El
plsmido resultante se denomin pCBEdl3Kb-BPL-Lf.

La construccin de los adenovirus recombinantes CELO-Lf y CELOdl3Kb (control negativo que

carece de un cassette de expresin) se form de la siguiente manera: Las clulas LMH se co-
transfectaron con pCBEdl3Kb o pCBEdl3Kb-BPL / Lf junto con ADN del virus CELO escindido con
endonucleasa de restriccin Swa I. La recombinacin homloga dio lugar a adenovirus aviar
recombinantes CELOdl3K con una delecin de 3620 bp del fragmento del genoma (y sin inserto
de ADN extrao) y CELO-Lf- que contena el gen Lf humano en lugar de la delecin de 40045-
43000 bp del genoma del virus CELO.