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Que es la resonancia magnetica nuclear

VENTAJAS

Una de sus principales ventajas es que se trata de una tcnica per se no

destructiva, eso significa que una vez finalizado el experimento, se puede

recuperar el material biolgico y volver a ser empleado en sucesivos

experimentos.

Al estar en disolucin, estamos ralizando un estudio bsicamente en su estado

nativo y ms cercano al que se podra encontrar en un sistema vivo. Es de suma

importancia en el rea biomdica el poder emular experimentos lo ms cercanos a

lo que se encontrara in vivo.

Obtenemos informacin tridimensional de la molcula en su estado plegado,

parcialmente plegado, o desplegado (como las protenas intrnsecamente

desplegadas) o ver distintas conformaciones y encontrar la mayoritaria en el caso

de los pptidos. Todas estas posibilidades se pueden encontrar en la naturaleza y

estudiarse por RMN a escala atmica.

Otra de las enormes ventajas que tenemos, es el estudio de la dinmica

molecular. Las biomolculas no son entes rgidos, la dinmica les otorga

funcionalidad biolgica y el ser capaces de estudiar dicha capacidad de

movimiento es un gran plus a la RMN en comparacin con otras tcnicas.

Podemos ver tambin cmo afectan los cambios de temperatura, de pH, el tipo de

disolvente o comparar una protena en su estado libre o unido a su ligando

haciendo titulaciones.
LIMITACIONES

Como no todo son ventajas, algunas de las limitaciones las podemos encontrar en

su bajo nivel de sensibilidad y debido a ello, la tcnica est actualmente limitada a

determinado tamao de molculas, hacia alrededor de los 30kDa, el tamao

mximo de las protenas susceptibles de ser investigadas por RMN est en torno a

los 60-80 kDa para las tcnicas de rutina pero estos lmites pueden ir aumentando

a medida que haya avances en la tecnologa.

Tambin debido a su sensibilidad, la cantidad de material de estudio necesario

tiene que ser grande, en el rango de los miligramos por cada 500 microlitros y el

tiempo de adquisicin vara entre un da o semanas.

Esta tcnica es muy costosa, no nicamente en el instrumental necesario y su

mantenimiento como el tener que rellenar los espectrmetros con nitrgeno y helio

lquidos, sino que las muestras para estudio pueden necesitar un marcaje

isotpico (no asociemos istopo con radiactividad, hay istopos no radiactivos y

son los que empleamos) que lo encarece muchsimo.

El personal tiene que tener una formacin muy especializada en RMN, por ello en

el equipo contamos con fsicos, qumicos y bioqumicos que trabajan sinergia. Esta

tcnica no es de la que los fundamentos se aprenden en un par de das y se

necesitan cursos especficos de capacitacin para los que empleamos estas

tcnicas.
Finalmente, para asignar un espectro de resonancia, hace falta dedicar mucho

esfuerzo y tiempo.

MATERIAL DE PARTIDA

Para adquirir los espectros de RMN, es necesario que las muestras estn en

presencia de un campo magntico. Para el estudio estructural de protenas se

requieren campos magnticos de al menos 500 MHz o una frecuencia de

precesin de 11.7 T, llegndose en la actualidad a conseguirse hasta

espectrmetros de 1 GHz.

Los ncleos empleados para estudio, como he mencionado antes, tienen que

tener un spin nuclear distinto a cero y contamos para ello con distintos istopos

como el carbono 13, nitrgeno 15, fsforo 31.

Marcamos isotpicamente porque la abundancia natural de estos ncleos es

realmente baja, como el 13C que ronda el 1.1%, mientras que el 15N del 0.37%.

En funcin del tamao de la molcula a estudiar, ser necesario o no el marcaje

isotpico mediante el empleo de tcnicas de Biologa Molecular.

La magnitud del campo magntico de los espectrmetros de RMN suele

expresarse como la frecuencia de resonancia del protn, siendo la sensibilidad y la

dispersin de las seales mayores al aumentar el campo magntico. Cuanto

mayor sea el tamao de la biomolcula, mayor ser el campo magntico mnimo

requerido para su estudio estructural.


S = seal

N = ruido (noise)

B0 = Campo magntico

La sensibilidad (S/N) est relacionada con el campo magntico, como podemos

ver en esta ecuacin en el numerador.

Los ncleos con espn diferente a cero pueden considerarse como pequeos

imanes que colocados dentro de un campo magntico tienen una energa que

depende de su orientacin respecto al campo. Estas energas se encuentran

cuantizadas. El nivel de menor energa est ms poblado que el de mayor

energa, la diferencia de poblaciones entre los dos niveles es muy pequea y esto

hace que la sensibilidad de la RMN sea pequea y hagan falta muestras

concentradas para la adquisicin de los espectros, debido a que la seal de RMN

es consecuencia de las transmisiones entre los niveles de energa.

Las transiciones entre los niveles de energa ocurren al aplicar pulsos de

radiofrecuencia.

Por otra parte, una criosonda hace que RT en el denominador sean muy bajos y

por lo tanto, la relacin seal/ruido sea mayor.


ELUCIDACIN DE LA ESTRUCTURA

Las etapas para la determinacin de las estructuras no son independientes entre

s, sino que en funcin de los resultados que se vayan obteniendo, puede ser

necesario volver a pasos anteriores.

Es necesario tener una muestra adecuada para el estudio, optimizar las

condiciones de experimentacin, adquirir los espectros de resonancia y proceder

al clculo y obtencin de estructuras finales.

Hay que tener en cuenta que las macromolculas son molculas grandes y que a

medida que su peso molecular aumenta, el tiempo de correlacin tambin lo hace

y las seales del espectro sern ms anchas. Es por eso que se recurre a la

espectroscopa multidimensional y al etiquetado isotpico de las molculas de

estudio.

Durante la preparacin de la muestra, hay que tener en cuenta el tamao con el

que trabajamos, si estamos con pptidos puede no hacer falta un etiquetado

isotpico y bastar con espectros homonucleares (como un espectro bidimensional

de protn o protn-protn). Por otro lado, en el caso de molculas ms grandes,

esto no puede se una opcin porque se obtendra un espectro muy difcil de

analizar en el que se se ve la presencia de un gran nmero de seales, adems

del gran solapamiento de seales que caeran en el mismo sitio.

Para estos casos, es necesario recurrir a la espectroscopa multidimensional en

2D, 3D, 4D y un marcado isotpico.


En cuanto al marcaje isotpico, estamos hablando de una etapa muy costosa

durante la obtencin del material de estudio. Para obtener las protenas

etiquetadas en nitrgeno 15 y/o carbono 13, hace falta emplear tcnicas de

Biologa Molecular para producir protenas recombinantes como hacer crecer en

un medio de cultivo ricos en istopos los organismos que sintetizarn la protena

de inters. Es un proceso caro, lento y muy difcil de conseguir.

Para el etiquetado isotpico, se puede marcar la protena completa, alguno de los

dominios, una parte de la protena, el ligando, el receptor, ambos o incluso el DNA

o RNA.

En un espectro protn-protn de grandes molculas se ven un solapamiento de

las seales. Para poder separar esas seales un espectro heteronuclear da

rangos de separacin mucho ms amplios. Gracias a la variacin de los

desplazamientos qumicos del 15N, se pueden separar.

Las condiciones deben ser ptimas para la adquisicin de los espectros de

resonancia y para ello, la muestra tiene que ser soluble, estar muy concentrada,

muy bien purificada, estar correctamente plegada en la forma que se desee

estudiar ya que no aplica igual para pptidos o protenas intrnsecamente

desestructuradas, tambin debe ser una muestra monodispersa o que no haya

agregados, que no tenga partculas slidas ni impurezas paramagnticas y sea

estable a una determinada temperatura y pH a lo largo del tiempo de adquisicin

de los espectros.
Se pueden variar distintos parmetros como el pH, la temperatura, los tampones,

la fuerza inica, la concentracin para tener las condiciones ptimas de

adquisicin. Pero siempre tomando en consideracin el problema biolgico acerca

del que se pretende obtener informacin, as como la estabilidad y la solubilidad

de la protena.

Se trata de encontrar las condiciones que mejor reproduzcan aquellas en que la

protena es biolgicamente activa y en las que a su vez sea posible la adquisicin

de espectros de RMN. Por esta razn, la estructura suele determinarse en

disoluciones acuosas, a temperaturas menores o iguales a 35C y a pH inferior a 7

ya que por encima de 7 dejan de observarse algunas seales de RMN de inters.

ADQUISICIN DE LOS ESPECTROS DE RESONANCIA

Las transiciones entre los niveles de energa ocurren al aplicar pulsos de

radiofrecuencia.

En una muestra que contenga un gran nmero de ncleos con la misma

frecuencia de Larmor, existir una magnetizacin neta paralela al campo.

Dependiendo de la duracin del pulso de radiofrecuencia, el vector de

magnetizacin girar en un ngulo distinto en el plano yz. Un pulso de 90 lleva la

magnetizacin al eje y.

Despus del pulso de 90, la magnetizacin precesa en el plano xy alrededor del

campo magntico situado en el eje z, generando seales de radio que decaen

exponencialmente con el tiempo y dan origen a la FID (Free Induction Decay).


La transformada de Fourier de la FID pasa del dominio de los tiempos al de las

frecuencias, dando lugar al espectro de RMN.

En funcin de la naturaleza de la biomolcula a estudiar, se decidirn distintos

tipos de experimentos.

Una vez seleccionadas las condiciones de preparacin de la disolucin de la

molcula bajo estudio, si la calidad y caractersticas del espectro 1D de protn son

adecuadas, se puede proseguir con la obtencin de los espectros

multidimensionales requeridos para la determinacin de su estructura. En caso

contrario, se modifican las condiciones hasta encontrar unas apropiadas para la

obtencin de espectros de RMN. Mediante el examen del espectro

monodimensional, se evala el estado de la muestra en cuanto a la presencia de

impurezas, relacin seal-ruido y estado nativo o desnaturalizado.

De esta forma, la informacin del 2D se puede resolver en la tercera dimensin.

CLCULO DE LA ESTRUCTURA DE RMN

Se basa en convertir la informacin de las intensidades de seales y valores de

desplazamientos qumicos en restricciones de distancia y valores angulares.

El clculo de una estructura consiste en encontrar el conjunto de estructuras o

confrmeros cuyas coordenadas atmicas satisfagan todas las restricciones

experimentales, de distancia, angulares y de orientacin, proporcionadas por los

parmetros de RMN. El mtodo de clculo debe ser capaz de ajustar todas las
restricciones experimentales y de explorar adecuadamente el espacio

conformacional.

Los algoritmos de clculo empleados son mtodos de geometra de distancias que

consisten en la minimizacin de una funcin blanco variable operando

generalmente en el espacio de ngulos de torsin. La funcin blanco es cero si se

cumplen todas las restricciones experimentales.

Tras n iteraciones, se pueden aadir o generar restricciones adicionales hasta que

se procede al refinamiento para obtener los confrmeros finales.

Para que la estructura resultante sea vlida, el nmero y la magnitud de las

denominadas violaciones de las restricciones, debe ser mnimo. El mapa de

Ramachandran tambin se emplea para la validacin de estructuras obtenidas.

Por RMN se obtiene un conjunto de estructuras, la estructura calculada (o los

confrmeros) se representa como la superposicin de entre las 10 y 20 estructuras

que mejor satisfacen las restricciones experimentales. La convergencia de los

datos experimentales a una nica estructura se mide mediante la desviacin

cuadrtica media entre los tomos de las estructuras o RMSD. La convergencia de

los datos experimentales a una nica estructura se mide por el valor RMSD.

Las estructuras calculadas pueden representar regiones muy bien definidas y

otras desordenadas, los parmetros dinmicos de RMN permiten comprobar si

esta falta de orden refleja la existencia de una regin muy flexible en la estructura

de la protena.
DINMICA

Las protenas no son rgidas, para tener su funcionalidad biolgica hace falta que

acten con cierta flexibilidad. Dicha flexibilidad les otorga la capacidad de

reconocer ligandos y adaptarse a ellos o de realizar funciones enzimticas.

Por RMN se puede estudiar los grados y las regiones de mayor flexibilidad, lo cual

correctamente analizado puede ser indicio de la presencia de dinmica. Al obtener

distintos confrmeros por RMN, podemos observar qu zonas se mantienen ms

estables en el espacio-tiempo y por tanto, los valores de RMSD sern inferiores

mientras que las zonas de mayor movimiento presentarn valores de RMSD

mayores.

Tipos de RMN[editar]
Espectroscopia de RMN con Onda Continua (CW: Continuous
Wave)[editar]
Desde sus comienzos hasta finales de los 60, la espectroscopia de
RMN utiliz una tcnica conocida como espectroscopia de onda
continua (CW). La manera de registrar un espectro de RMN en el
modo de CW era, bien mantener constante el campo magntico e ir
haciendo un barrido de frecuencias con un campo oscilante, o bien, lo
que era usado ms a menudo, se mantena constante la frecuencia del
campo oscilante, y se iba variando la intensidad del campo magntico
para encontrar las transiciones (picos del espectro). En la RMN de CW
las seales del espectro se registran como seales en resonancia.

La espectroscopia CW est limitada por su baja sensibilidad, ya que


cada seal se registra una sola vez por cada barrido y la tcnica de
resonancia magntica nuclear ya es de por s no demasiado sensible;
esto quiere decir que la tcnica sufre de una baja relacin seal-ruido.
Afortunadamente, en RMN es posible mejorar la relacin seal-ruido
mediante el promediado de seal. El promediado de seal consiste
en repetir la adquisicin del experimento e ir sumando los espectros
que se obtienen. De esta manera, las zonas del espectro en que
existen seales se suman de manera constructiva, mientras que, por
su parte, las zonas en que hay ruido, por su carcter aleatorio, se
acumula ms lentamente que la seal. Mediante el promediado de
seal se incrementa la relacin seal-ruido en un valor que es la raz
cuadrada del nmero de espectros que se han acumulado. Esta
relacin se cumple con espectros de RMN en los que intervienen un
slo tipo de ncleos, por ejemplo, slo 1H, 13C, etc., tambin llamados
espectros homonucleares.

Espectroscopia de RMN de pulsos y Transformada de


Fourier[editar]
La tcnica de RMN con transformada de Fourier (FT-NMR) es la que
se utiliza en los espectrmetros actuales. Uno de los pioneros en este
campo es Richard R. Ernst, que la desarroll a partir del ao 1966 y
por la que fue galardonado con el Premio Nobel de Qumica en 1991.
FT-NMR permite disminuir drsticamente el tiempo que requiere
adquirir una acumulacin (scan) del espectro completo de RMN. En
vez de realizar un barrido lento de la frecuencia, una en cada instante,
esta tcnica explora simultnea e instantneamente todo un rango de
frecuencias. Dos desarrollos tcnicos fueron fundamentales para
poder hacer realidad la tcnica FT-NMR: ordenadores capaces de
llevar a cabo las operaciones matemticas necesarias para pasar
desde el dominio de tiempo al de la frecuencia, es decir, para obtener
el espectro; y el conocimiento sobre cmo poder excitar
simultneamente todo un rango de frecuencias.

La FT-NMR funciona con la muestra (espines nucleares) sometida a


un campo magntico externo constante. Se irradia la muestra con un
pulso electromagntico de muy corta duracin en la regin de las
radiofrecuencias. La forma que suele usarse para este pulso es
rectangular, es decir, la intensidad de la radiofrecuencia oscila entre
un mximo y un mnimo que es constante mientras dura el pulso. Un
pulso de corta duracin tiene una cierta incertidumbre en la frecuencia
(principio de indeterminacin de Heisenberg). La descomposicin de
fourier de una onda rectangular contiene contribuciones de una de
todas las frecuencias. El pulso que se genera es por tanto
policromtico y cuanto ms corto sea, es capaz de excitar un mayor
rango de frecuencias.

La aplicacin de un pulso policromtico en una regin estrecha de la


banda de radiofrecuencias (MHz) afecta a aquellos espines nucleares
que resuenen en esa regin. Un pulso policromtico con una anchura
en frecuencia de unos pocos kHz puede llegar a excitar
simltaneamente slo a los espines nucleares de un mismo tipo de
ncleo atmico dentro de una molcula, por ejemplo, todos los ncleos
de hidrgeno (1H). Antes del pulso el vector de polarizacin neta de
cada uno de los espines nucleares se encuentra en situacin de
equilibrio alineado en la direccin del campo magntico. Durante el
tiempo que se aplica el pulso, el pulso introduce un segundo campo
magntico en una direccin perpendicular al campo principal del imn
y el vector polarizacin realiza un determinado movimiento
de precesin. Tras cesar el pulso, el vector polarizacin de todos los
espines afectados puede formar un cierto ngulo con el eje del campo
magntico principal. En este momento, los espines, comportndose
como pequeos imanes polarizados, comienzan a precesionar con su
frecuencia caracterstica en torno al campo magntico externo,
induciendo una pequea corriente oscilante de RF en una bobina
receptora situada en las inmediaciones de la muestra. A medida que
los ncleos van regresando poco a poco a la situacin inicial de
equilibrio alineados con en el campo magntico principal, la seal
detectada va disminuyendo de intensidad hasta hacerse cero. Esta
cada de la seal se conoce como cada libre de la induccin (Free
Induction Decay) (FID) y da lugar al espectro de RMN.

La seal que se detecta FID (Free Induction Decay) es una seal oscilante que
contiene todas las seales del espectro y decae hasta hacerse cero.

La FID es una onda que contiene todas las seales del espectro en
una forma que es dependiente del tiempo. Esta onda puede
convertirse en un espectro de seales en funcin de su frecuencia.
Para ello se utiliza una funcin matemtica conocida
como Transformada de Fourier. El resultado es lo que se conoce como
un espectro de RMN (espectro de frecuencias).

RMN Multidimensional[editar]
La posibilidad de excitar la muestra con uno o ms pulsos de
radiofrecuencia (RF), cada uno de ellos aplicado con una potencia,
duracin, frecuencia, forma y fase particulares, e introducirlos en
momentos especficos de tiempo durante el experimento de RMN,
generalmente antes de que el sistema haya regresado al equilibrio por
relajacin, permite disear toda una gama de secuencias de pulsos de
las que se puede extraer informacin molecular muy variada.

Una secuencia de pulsos es una distribucin en el tiempo de alguno


o varios de los siguientes elementos: i) un cierto nmero de pulsos de
RF que afecten a uno o ms tipos de ncleos, ii) tiempos de espera en
los que no se hace nada sino esperar a que el sistema evolucione de
una determinada forma. Estos tiempos de espera pueden ser fijos o
bien incrementables si su duracin se va aumentando a medida que
se repite el experimento. iii) gradientes de campo magntico y iv) una
etapa final en la que se adquiere la FID.

En un experimento de RMN multidimensional la secuencia de pulsos


debe constar de al menos dos pulsos y stos deben separados por un
periodo de espera incrementable. La secuencia de pulsos se repite un
nmero de veces adquirindose una FID en cada ocasin. La fase de
alguno de los pulsos puede alterarse en cada repeticin as como
incrementarse la duracin de uno o ms tiempos de espera variables.
Si la secuencia de pulsos tiene un tiempo de espera incrementable el
experimento tendr dos dimensiones, si tiene dos ser de tres
dimensiones, si tiene tres el experimento ser de cuatro dimensiones.
Aunque en teora no existe lmite en el nmero de dimensiones de un
experimento, experimentalmente hay limitaciones impuestas por la
consiguiente prdida de seal por relajacin que conlleva la deteccin
de las distintas dimensiones. Los tiempos de registro de los
experimentos de RMN multidimensional se pueden acortar
drsticamente con lastcnicas rpidas de RMN desarrolladas en la
presente dcada.

Los experimentos multidimensionales se pueden clasificar en dos tipos


principales:

Experimentos de correlacin homonuclear: Son aquellos en los que


todas las dimensiones corresponden al mismo ncleo. Ejemplos:
COSY (COrrelation SpectroscopY), TOCSY (TOtal Correlation
SpectroscopY), NOESY (Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY).

Experimentos de correlacin heteronuclear: En este experimentos se


obtienen espectros cuyas dimensiones pertenecen a diferentes
ncleos. Ejemplos: HMQC (Heteronuclear Multiple Quantum
Correlation), HSQC (Heteronuclear Simple Quantum Correlation),
HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Correlation), HOESY
(Heteronuclear Overhauser Effect SpectroscopY).

Grosso modo, las interacciones que pueden detectarse por RMN se


pueden clasisficar en dos tipos:

1. Las interacciones a travs de enlaces se basan en el


acoplamiento escalar
2. Las interacciones a travs del espacio se basan en el
acoplamiento dipolar. En el caso de muestras en disolucin, el
acoplamiento dipolar se manifiesta como efecto Overhauser
nuclear que permite determinar la distancia entre los tomos.

Richard Ernst en 1991 y Kurt Wthrich en el 2002 fueron galardonados


con el premio Nobel de Qumica por su contribuciones al desarrollo de
la RMN de 2-dimensiones y multidimensional con transformada de
Fourier. Los avances conseguidos por ellos y por otros grupos de
investigadores han expandido la RMN a labioqumica, y en particular a
la determinacin de la estructura en disolucin
de biopolmeros como protenas o incluso cidos nucleicos de tamao
pequeo.

Slidos[editar]
La RMN en disolucin es complementaria de la cristalografa de rayos
X ya que la primera permite estudiar la estructura tridimensional de
las molculas en faselquida o disuelta en un cristal lquido, mientras
que la cristalografa de rayos-X, como su nombre indica, estudia las
molculas en fase slida.

La RMN puede utilizarse tambin para el estudio de muestras en


estado slido. Si bien en su estado actual queda lejos de poder
proporcionar con buen detalle la estructura tridimensional de una
biomolcula.

En el estado slido las molculas estn estticas y no existe, como


ocurre con las molculas en disolucin, un promediado de la seal de
RMN por el efecto de la rotacin trmica de la molcula respecto a la
direccin del campo magntico. Las molculas de un slido estn
prcticamente inmviles, y cada una de ellas experimenta un entorno
electrnico ligeramente diferente, dando lugar a una seal diferente.
Esta variacin del entorno electrnico disminuye la resolucin de las
seales y dificulta su interpretacin. Raymond Andrew fue uno de los
pioneros en el desarrollo de mtodos de alta resolucin
para resonancia magntica nuclear en estado slido. l fue quien
introdujo la tcnica de la rotacin en el ngulo mgico Magic Angle
Spinning (MAS) que permiti incrementar la resolucin de los
espectros de slidos varios rdenes de magnitud. En MAS, las
interacciones se promedian rotando la muestra a una velocidad de
varios kilohertzios.

Alex Pines en colaboracin con John Waugh revolucionaron tambin


la RMN de slidos introduciendo la tcnica de la polarizacin cruzada
(CP) que consigue incrementar la sensibilidad de ncleos poco
abundantes gracias a la transferencia de polarizacin de los protones
a los ncleos ms insensibles cercanos, generalmente 13C, 15N o 29Si.

A caballo entre la RMN en disolucin y en fase slida, se encuentra la


tcnica de HR-MAS (High Resolution with Magic Angle Sinning), cuya
aplicacin fundamental es el anlisis de geles y materiales
semislidos. El fundamento del HR-MAS es hacer girar la muestra, al
ngulo mgico, a una velocidad muy superior que en slidos
habituales. El efecto conseguido son espectros mono y
bidimensionales de gran calidad, prxima a la RMN en disolucin. La
principal aplicacin de esta tcnica es el anlisis de matrices
biolgicas y polimricas, como resinas para sntesis en fase
slida solvatadas.

Sensibilidad[editar]
Debido a que la intensidad de la seal de RMN, y por tanto, tambin la
sensibilidad de la tcnica depende de la fortaleza del campo
magntico, desde los inicios de la RMN ha existido gran inters por el
desarrollo de imanes ms potentes. En la actualidad los imanes
comerciales ms potentes estn en torno a los 22.31 T, o 950 MHz
frecuencia de resonancia de 1H. Los avances en la tecnologa audio-
visual e informtica tambin han mejorado los aspectos de generacin
de pulsos y la recepcin de seal y el procesado de la informacin.

La sensibilidad de las seales tambin depende de la presencia de


ncleos magnticamente-susceptibles a la RMN y, por tanto, de la
abundancia natural de tales ncleos. Para el caso de biomolculas los
ncleos ms abundantes y magnticamente susceptibles son los
istopos de hidrgeno 1H y fsforo 31P. Por el contrario, ncleos como
carbono y nitrgeno tienen istopos tiles a la RMN, 13C y 15N,
respectivamente, pero se presentan en baja abundancia natural. Para
hacer frente a esta dificultad existe la posibilidad de enriquecer las
molculas de la muestra con estos istopos (ej. sustitucin de 12C
por 13C y/o de 14N por 15N) para poder estudiarlos por RMN con la
suficiente sensibilidad. Se trata de istopos perfectamente estables
que no producen ms que una pequea variacin en la masa
molecular de la molcula, sin afectar para nada a otras propiedades
estructurales o qumicas de la muestra.

Instrumentacin en Resonancia Magntica Nuclear: el


espectrmetro[editar]
Un espectrmetro de RMN consta de las siguientes partes
fundamentales:

Un imn que genere un campo magntico estable, el cual puede


ser de una intensidad variable, definiendo la frecuencia de
resonancia de cada ncleo. Generalmente se identifica cada
espectrmetro por la frecuencia de resonancia del protn, as en un
imn de 7.046 Tesla, los ncleos de 1H resuenan a 300 MHz, y por
tanto sera un espectrmetro de 300 MHz. Por el momento el imn
de mayor campo magntico del mundo lo ha instalado Bruker en la
Unviersiad de ciencia y tecnologa Rey Abdullah en Arabia Saudita,
de 950 MHz (22.3 Tesla).2
Una sonda, que se sita dentro del imn, en la que se introduce la
muestra y que consta de las bobinas responsables de emitir y
recibir las radiofrecuencias(RF). El nmero de bobinas y su
disposicin determinan el tipo y las aplicaciones de cada sonda.
Una consola en la que se generan los pulsos de RF y se controla
el resto de la parte electrnica del espectrmetro.
Un ordenador que sirve de interfaz con el espectrmetro y con el
que se analiza toda la informacin obtenida.

Informacin obtenida mediante RMN[editar]


La aplicacin fundamental de la espectroscopia de RMN es la
determinacin estructural, ya sea de molculas orgnicas,
organometlicas o biolgicas. Para ello es necesario la realizacin de
diferentes tipos de experimentos de los cuales se obtiene una
determinada informacin.

Para la elucidacin estructural de molculas orgnicas y


organometlicas los experimentos ms utilizados son los siguientes:
Ejemplo de un espectro 1H de RMN.

Espectro monodimensional de 1H: Da informacin del nmero y tipo


de hidrgenos diferentes que hay en la molcula. La posicin en el
espectro (desplazamiento qumico) determina el entorno qumico
del ncleo, y por tanto da informacin de grupos funcionales a los
que pertenecen o que estn cerca. La forma de la seal da
informacin de los protones cercanos acoplados escalarmente.

13
Ejemplo de un espectro APT, un tipo de experimento de C.

Espectro monodimensional de 13C: Al igual que en 1H el


desplazamiento qumico da informacin de los grupos funcionales.
Dependiendo del tipo de experimento realizado se puede obtener
informacin del nmero de hidrgenos unidos a cada carbono.
Ejemplo de un espectro COSY.

Espectros bidimensionales homonucleares: Los experimentos


COSY y TOCSY dan informacin de las relaciones entre los
protones de la molcula, por acomplamiento escalar o dipolar
(NOESY)
Espectros bidimensionales heteronucleares: Los experimentos
HMQC y HSQC indican qu hidrgenos estn unidos a qu
carbonos. El experimento HMBC permite determinar relaciones
entre protones y carbonos a mayor distancia (2 o 3 enlaces)
Experimentos con otros ncleos: Si la molcula posee otros
ncleos activos en RMN es posible su medida a travs de
experimentos monodimensionales o bidimensionales (por deteccin
indirecta)
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/RMN_proteinas_4792.pdf

http://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2099.1/9988/05_RMN.pdf?sequence=5