PRACTICA AISLAMIENTO Y SIEMBRA DE BACTERIAS AEROBIAS

I. INTRODUCCION

En la naturaleza, la mayora de los microorganismos no se encuentran aislados, sino

integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos
microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y
trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axnicos o puros.

II. OBJETIVOS

- Adquirir conocimientos bsicos y prcticos de la siembra y aislamiento de

bacterias.

III. MARCO TEORICO

Para aislar e identificar una especie bacteriana del medio y de otra especie que
pueda confundirse morfolgicamente es necesario usar medios de cultivos, ya que
nos permiten diferenciar las caractersticas del crecimiento de las bacterias y
establecer su identidad segn el medio de cultivo que se use.
Los medios de cultivo se clasifican dependiendo de las caractersticas que se
necesiten para su ptimo desarrollo los cuales segn su consistencia pueden ser:

- Lquidos: no contienen agar y favorecen el crecimiento bacteriano ya que las

bacterias poseen una gran libertad de movimiento y al difundirse por todo el
medio encuentran su componente nutritivo y requerimiento de oxigeno ms
ptimo con gran facilidad, por ejemplo: las aerobias estrictas crecen en los
primeros 10-15mm de la superficie del medio, las microaerofilas ligeramente por
la superficie del medio, las anaerobias estrictas en los 10-20mm del fondo y las
facultativas por todo el medio.

- Solidos: su concentracin de agar es de 1.5% a 2%, en estos las bacterias

crecen con mayor dificultad, ya que los nutrientes pueden agotarse fcilmente,
se utilizan para ver colonias, aislar microorganismos, caractersticas de
crecimiento, color, tamao, taxonoma, entre otros.

- Semi-solido: su concentracin de agar es de 0.5% y se utiliza para estudiar el

movimiento y algunas propiedades bioqumicas.

Tambin segn su aplicacin se usa:

- Simples: son apropiados para la mayora de microorganismos ya que poseen

requisitos nutricionales mnimos para desarrollarse.
- Enriquecidos: permiten el crecimiento de bacterias difciles de cultivar, puesto
que se aade ciertos componentes muy ricos en nutrientes.
- Selectivos: estos medios contienen componentes que inhiben el crecimiento de
algunas bacterias cuyo crecimiento no interesa, permitiendo as aislar una
determinada especie.
- Diferenciales: en este se les adiciona sustancias para el crecimiento de
determinadas bacterias y al actuar sobre dichas sustancias adquieren un color
que las diferencia de otras colonias.
- Enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen la multiplicacin de
bacterias cuando la muestra obtenida es pobre.

De acuerdo con su aplicacin los componentes usuales de los medios de cultivo son:

- Extracto de carne: constituye una fuente de carbono, nitrgeno, sales orgnicas

y otros nutrientes.
- Peptonas: son protenas degradadas, ricas en nitrgeno y carbono.
 - Cloruro de sodio: importante para proporcionar un adecuado equilibrio osmtico.
- Tampones estabilizadores del pH: necesarios para contrarrestar las variaciones
del pH debido a los productos del metabolismo bacteriano.

Nutrientes para medios de enriquecimiento:

- Extracto de levadura: rico en vitaminas del complejo B, protenas y cidos

nucleicos.
- Extracto de glbulos rojos: suministra los factores X (hemina) y V (difosfopiridin-
adenin-nucleotido o coenzima I) imprescindibles para el crecimiento bacteriano
de algunos microorganismo.
- Infusin de hgado o corazn y cerebro: son infusiones ricas en aminocidos
azufrados que reducen el potencial de xido reduccin.

Los medios de cultivo usados en el laboratorio fueron:

- Agar nutritivo: est compuesto de extracto de carne, peptona, ClNa, agar y agua
destilada. Se usa como medio de cultivo general para la mayor parte de los
microorganismos y como base para la preparacin de medios selectivos y
enriquecidos.

- Agar sangre: compuesto por extracto de carne, peptona, ClNa, sangre, agra y
agua destilada. Lleva como base el agar nutritivo y se le adiciona sangre
desfibrinada en una porcin del 5-10%, principalmente sangre de conejo,
carnero y caballo ya que ofrecen buenas reacciones hemolticas. No se usa
sangre humana procedente de banco puesto que contiene citrato que puede
inhibir el crecimiento de algunos microorganismos y glucosa que falsea las
reacciones de hemolisis, aparte de anticuerpos y agentes antimicrobianos.

- Agar MacConkey: est compuesto por peptona, lactosa, ClNa, sales biliares,
cristal violeta, rojo neutro, agar y agua destilada. Los medios usados para el
aislamiento selectivo de enterobacterias se caracterizan por contener lactosa y
un indicador de cambio de pH que detecta la actividad fermentadora sobre este
azcar.

- Agar EMB (Eosina azul de metileno): compuesto por peptona, fosfato dipotsico,
lactosa, eosina azul de metileno, agar y agua destilada. Su uso es prcticamente
el mismo del agar MacConkey. El azul de metileno acta como indicador e
inhibidor al mismo tiempo.

- Agar AMS (Manitol sal): es un medio de cultivo altamente selectivo, pues tiene
una alta concentracin de cloruro de sodio que impide el crecimiento de la
mayora de las bacterias, sin embargo tolera los estafilococos.

-
IV. MATERIALES Y METODO

- 4 cajas Petri con agar nutritivo (AN) - 1 incubadora a 30C

- 4 cajas Petri con agar eosina azul de
metileno
- 4 cajas Petri con agar papa dextrosa
(PDA)
- 4 tubos inclinados con AN
- 2 mecheros Fischer
- 2 asas de inoculacin
- 1 piceta con agua destilada
- 1 refrigerador
- 2 partes de guantes de asbesto
- Escobillones, fibra, detergente y
toallas de papel estraza, algodn y
gasa.
- 2 autoclaves con base, canastilla y
vlvula.
- 2 balanzas analticas.
V. RESULTADOS
VI. ANEXOS