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Presentacin del
nmero extraordinario:
Microbiologia Industrial
yBiotecnologia Microbiana
Toms Gonzlez Villa. Universidad de Santiago de Compostela.
Presidente del Grupo.

A fuer de parecer irreverente me he permitido iniciar


esta presentacin con un pequeo prrafo que he sacado
de Wikipedia al buscar para el nombre de nuestro grupo.
Comienza asi:
Microbiologa industrial o biotecnologa microbia-
na es el mbito de la Microbiologa orientado a la produc-
cin de elementos de inters industrial mediante procesos
en los cuales intervenga, en algn paso, un microorga-
nismo. Por ejemplo, la produccin de: alimentos (fermen-
tacin del vino, pan o cerveza) y suplementos dietticos
(como los cultivos de algas, vitaminas o aminocidos);
biopolmeros, como el xantano, alginato, celulosa, cido
hialurnico, polihidroxialcanoatos, bioremediacin de en-
tornos contaminados o tratamiento de desechos; as como
la produccin de principios activos de inters en medicina,
como la insulina y hormona del crecimiento o de sustan- Elaboracin de pan en el Antiguo Egipto
cias implicadas en el diagnstico, como las Taq polimera- (bajo imperio, poca de Ramss II)
sas empleadas en PCR cuantitativa. (fuente. www.scienticpsychic.com).
Vemos cmo, a pesar de contener una pequea inco-

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rreccin cuando sugiere que ciertos procesos de Microbio-
loga Industrial pueden no ser llevados a cabo por microor-
ganismos, la sensatez del prrafo es evidente y se adapta Al principio se elaboraban vinos muy inestables debido
poco ms o menos a lo que cada uno de nosotros entiende a la mala calidad y baja acumulacin de azcar en las ba-
por Microbiologa Industrial y la proyeccin mas moderna, yas de Vitis sp (de hecho los romanos recurran frecuente-
sustentada en la ingeniera gentica, de Biotecnologa. mente a la adicin de sal para su mantenimiento y evitar
La Microbiologa Industrial naci hace muchos miles de el deterioro). La seleccin y mejora de la vid para obte-
aos con las manipulaciones de alimentos que los hombres ner mejores caldos ocup mucho tiempo a los jardineros 29
de edades pretritas hacan y que haban visto por inconta- y monjes y poco a poco consiguieron nuevas variedades
bles repeticiones prevenan la putrefaccin de los mismos. ptimas para la elaboracin de vino. De hecho, en el siglo
Evidentemente ellos no saban lo que ocurra pero s apren- V ya se conocan distintos tipos de uvas y con ellas hacan
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dieron rpidamente a controlar los efectos que los microorga- los vinos blancos, tintos o dulces. La viticultura europea a
nismos presentes en los alimentos ejercan. El captulo de las partir de los siglos VI-VII, estuvo casi siempre en manos de
bebidas fermentadas constituye un captulo aparte pues su los monasterios ya que la iglesia era una de las principales
elaboracin estaba ligada a aspectos especialsimos de las di- demandantes de vino para el sacramento de la Comunin.
ferentes culturas. La cerveza y el vino comenzaron a utilizarse El vino era rebajado con frecuencia con agua, ya que el
no hace menos de unos 9000 aos y entendemos que desde uso de uvas muy maduras para su elaboracin daba lugar
Mesopotamia y Egipto se extendi a toda Eurasia. En este a caldos de elevada graduacin (este puede ser el origen
caso la presin selectiva que el hombre ejerci sin saberlo del rito cristiano de aadir agua al vino). El vino en estado
sobre la levadura que conduce los fenmenos fermentativos puro parece que se reservaba para los brbaros, ya que
y que hoy llamamos Saccharomyces cerevisiae fue tal que in- griegos y romanos pensaban que sin mezclar poda dar 1<5
cluso forz la aparicin de la especie taxonmica como tal. lugar a la aparicin de enfermedades mentales. 

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celosamente los fermentos para la elaboracin del pan.


Solamente en el siglo XX y lo que llevamos del actual se ha
podido comprender el comportamiento bioqumico y sobre
todo gentico de estas estirpes de levaduras tan especia-
les, sin las que sin duda no dispondramos de tantas varie-
dades de pan. Hoy ya somos capaces, como en el caso de
las bebidas fermentadas de afrontar racionalmente la me-
jora gentica de todo este tipo de estirpes, incluso cuando
se trata del dominio y mejora de caracteres polignicos
Otro grupo de alimentos de importancia en la historia del
desarrollo de la alimentacin humana son los productos
La arqueologa revela la actividad biotecnolgica
fermentados de la leche, denominados tambin derivados
emprica del hombre en la antigedad. lcteos fermentados, debido a la accin de las bacterias
del cido lctico (BAL) tales como las especies de los
gneros Lactobacillus, Lactococcus o Leuconostoc. El pro-
ceso origina productos con una dualidad importante, por
No cabe duda que todo lo que rodea al vino tiende a una parte incrementa la vida til y por otra parte me-
tener una gran trascendencia y no solamente por razones jora la digestibilidad del mismo frente a la leche. Exis-
culturales o religiosas, sino simplemente por razones eco- ten evidencias que demuestran la existencia de produc-
nmicas ya que solamente hay una cosecha de uvas al ao tos fermentados de la leche ya desde hace 10.000 aos.
y si se estropeaba el caldo (o se estropea) la trascendencia Estos aspectos de la Microbiologa Industrial han gene-
a la sociedad era alta. No ocurra as con la cerveza (bebi- rado en los ltimos 50 aos un campo de investigacin
da fermentada surgida al tiempo que el vino) ya que poda aplicada y biotecnolgica muy creativa e interesante y que
prepararse en cualquier momento si se dispona de un ce- como en los casos anteriores han propiciado un campo de
real libre de aatoxinas que pudiese germinar e iniciar as encuentro para genticos, expertos de produccin animal,
la produccin de lo que con el devenir de los siglos se vino virlogos y tecnlogos de alimentos, lo que ha dado lugar
en denominar como mosto cervecero. Tambin en este a la mejora de procesos conocidos desde la antigedad y
tipo de bebida participan estirpes especiales de S. cerevi- al desarrollo de otros nuevos que han generado nuevos
siae que de nuevo han sido seleccionadas por el hombre productos lcteos obtenidos por fermentacin.
a lo largo de milenios y similares PERO diferentes de las Existen muchos tipos de lcteos fermentados Algunos
que participan en la elaboracin del vino; en este caso de ellos son:
muchas veces resultan ser estirpes heterotlicas mientras
que la mayora de las vnicas resultan ser homotlicas. La Yogur
trascendencia de esta aparentemente pequea diferencia Suero de mantequilla(EE.UU., Canad)
es, sin embargo, alta, como bien conocen todas aquellas leche acidophilus (EE.UU., Canad)
personas que hayan trabajado con ellas. Estas pocas lneas kiselo mlyako (Bulgaria)
sobre el vino que he plasmado aqu han delimitado (hoy sauermilch o dickmilch (Alemania)
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todava) un campo biotecnolgico muy activo pues dene zure melk (Pases Bajos)
un punto de encuentro para silogos vegetales, genti- lapte btut (Rumana)
cos (de plantas y levaduras), microbilogos, bioqumicos y lmjlk o l (Suecia)
tecnlogos de alimentos. surmelk o kulturmelk (Noruega)
Otro alimento al que no podramos renunciar tanto cul- piim y viili (Finlandia)
tural como nutricionalmente es el pan; a pesar de que no amasi (Sudfrica)
30 se sabe con exactitud los diferentes tipos de pan que se
elaboran en el planeta, algunos autores lo acercan al mi- Pero la utilidad de las BAL no acaba aqu, ya que tam-
llar, lo que sin duda da idea de la importancia que se le ha bin se utilizan en las fermentaciones secundarias de vi-
dado como alimento bsico de la humanidad. Como todos nos (fermentacin malolctica) as como en la maduracin
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sabemos ste alimento se puede catalogar en dos grandes de productos crnicos.


apartados: i) panes zimos o panes elaborados sin leva- El trmino Biotecnologa -literalmente tecnologa de
dura y ii) panes elevados o fermentados. Los primeros no lo vivo-, despert en la dcada de los aos 70, despus
sufren procesos de fermentacin pero los segundos se ela- de la reunin de Asilomar en California, un enorme inte-
boran mediante el uso de las llamadas levaduras panade- rs incluso para la gente de la calle, contemplndosela
ras (estirpes de S. cerevisiae, de nuevo seleccionadas por como una especie de piedra losofal que iba a librarnos
el hombre a lo largo de milenios), capaces de fermentar a los humanos de todas nuestras miserias. Sin embargo,
oligosacridos de las harinas de diferentes cereales y con- en la ltima dcada del siglo XX comenzaron a aparecer
secuentemente producir CO2 y etanol (eliminado durante el detractores hasta alcanzar en la actualidad cotas de se-
1<5 horneado). Todas las culturas antiguas desde Mesopotamia, vero rechazo en ciertos sectores parcialmente informados
 pasando por Egipto, Grecia y Roma conocan y guardaban de la sociedad.

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ALGUNOS SECTORES DE IMPORTANCIA
Este es un rea muy dinmica en el seno de nuestro grupo ya que posee proyecciones a medios
hdricos, suelo y aire. Se pretende no solamente preservar de la mejor manera posible los
ecosistemas que hemos recibido, sino de recuperar aquellos que han sido particularmente
daados (hasta hacerlos inservibles) mediante la aplicacin sistemtica de procesos de
Microbiologa Industrial y Biotecnologa.
En la actualidad se hace particular nfasis en el aprovechamiento de residuos de origen qumico y
Agroalimentacin deorigen biolgico y en el desarrollo de metodologas biolgicas para la deteccin de contaminantes.
La puesta a punto, mediante el empleo de tcnicas de biologa molecular, de nuevos mtodos de
anlisis que permiten vigilar de forma continua la contaminacin en los entornos naturales, as
como el anlisis de las comunidades microbianas y de los procesos metablicos implicados en
la eliminacin de substancias txicas o contaminantes estn revolucionando la forma de conocer,
prevenir y, en ltimo extremo, controlar los procesos contaminantes si los hubiera.

En este rea los pases darn prioridad a diferentes aspectos segn su localizacin geogrca
e irn encaminados a resolver los problemas relacionados con aquellas enfermedades
humanas o de animales que tengan una mayor relevancia socioeconmica en las zonas
Sanidad humana en cuestin. Se desarrollarn nuevas metodologas para el diagnstico de enfermedades,
y animal as como estrategias y mtodos para la obtencin de vacunas altamente protectoras de la
poblacin humana y/o animal. Por ltimo se prevn grandes inversiones para el desarrollo
de modelos para el tratamiento de enfermedades o el anlisis de frmacos e identicacin y
caracterizacin molecular de dianas de accin farmacolgica.

El sector agroalimentario es de especial transcendencia econmica para el mundo, sin el cual


no se podra alimentar a la creciente poblacin mundial. Los pases propugnarn la formacin
en el conocimiento y adquisicin de tecnologas que tienen su origen en la biologa molecular y
celular, con el aislamiento y caracterizacin de genes de inters agronmico y su utilizacin en el
diseo de plantas transgnicas que permitan la obtencin de mayor cantidad de alimentos y de
nuevas estirpes capaces de colonizar ambientes degradados por la actividad industrial humana.
Medio ambiente La aplicacin de las tcnicas de ingeniera gentica al estudiode las interacciones entre plantas y
otros organismos propiciar el desarrollo de una agricultura ms respetuosa con el medio ambiente.
De igual manera, la utilizacin de tcnicas de ingeniera gentica en microorganismos de inters
en procesos de transformacin agroalimentaria as como el desarrollo de nuevas tcnicas de
ingeniera gentica, generarn nuevas estirpes de microorganismos que presenten caractersticas
de inters en la produccin de alimentos, en particular en lo que hace referencia a la nutricin,
estabilidad de los mismos e inocuidad.

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La palabra Biotecnologa es en realidad vieja, a pesar
de lo que normalmente se cree, ya que fue acuada por el
ingeniero hngaro Karl Ereky en 1917 para un proceso de
produccin en masa de cerdos, utilizando remolacha azu-
carera como alimento primario biotransformable. Utiliza el
principal invento de nuestro planeta como es la clula 31
y mediante su manipulacin (microorganismos y clulas
de plantas y animales), la Biotecnologa produce bienes y
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servicios para la industria alimentaria, farmacutica, qu-


mica y ambiental de indudable benecio. En el cuadro ad-
junto se resumen las principales ciencias convencionales
que han contribuido al nacimiento de la Biotecnologa,
as como de macrologros del ltimo tercio del siglo XX y
perspectivas de futuro.
Un descubrimiento clave inici el cambio dramtico
que conocemos hoy como ingeniera gentica o ADN re-
combinante: en 1970 Hamilton Smith y Daniel Nathans
Diversos productos
descubren una enzima (restrictasa) capaz de reconocer y
cortar el ADN en secuencias especcas, que les vali el lcteos fermentados. 1<5


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Premio Nobel de siologa o medicina, compartido con


Werner Arber, en 1978. Este descubrimiento (consecuen-
cia de un hallazgo accidental, en el que los investigadores
profundizaron con gran sentido) dio origen a una sucesin
de nuevos descubrimientos y potenci el desarrollo de lo
que hoy entendemos por Ingeniera Gentica o simplemen-
te Biotecnologa que nos permite clonar cualquier gen en
un virus, microorganismo, clula de animal o de plantas.
En denitiva, aunque solamente he esbozado algunos
aspectos de la Microbiologa Industrial y Biotecnologa,
que delimita el nombre de nuestro grupo especializado, no
son mas que eso unas ideas para que el lector sea cons-
ciente de la amplia proyeccin e imbricacin de la Micro-
biologa Industrial en todas las facetas de la vida humana.
Se recogen a continuacin aspectos de investigacin
de diversos grupos que mantienen con sus contribuciones
el dinamismo de nuestro grupo.

Felicidades a todos!

Elaboracin del vino en el antiguo Egipto en un


fresco datado alrededor del 1400 A.C. (Metropolitan
Museum of Art).

Fundacin MEDINA - Investigacin


en Terapias Innovadoras a partir de
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Productos Naturales aislados


de Microorganismos

32 M Francisca Vicente, Gerald Bills, Fernando Reyes, Olga Genilloud


Fundacin MEDINA, Centro de Excelencia en Investigacin de Medicamentos Innovadores
en Andaluca, Parque Tecnolgico de Ciencias de la Salud, Avda. del Conocimiento 3, E-18100
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Armilla, Granada. www.medinaandalucia.es

La Fundacin MEDINA es un consorcio pblico-privado terapias innovadoras que permitan dar respuesta a necesi-
sin nimo de lucro establecido a partir de la alianza entre dades mdicas no cubiertas.
Merck Sharp & Dohme de Espaa S.A. (MSD), la Junta de En el ao 2008 la Fundacin MEDINA se ha establecido
1<5 Andaluca y la Universidad de Granada. La Fundacin est en el Parque Tecnolgico de Ciencias de la Salud en Granada
 enfocada en la investigacin y descubrimiento de nuevas a partir del proyecto desarrollado en el antiguo Centro de In-

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Miembros del grupo de la Fundacin MEDINA.

vestigacin Bsica de Merck Sharp & Dohme de Espaa (CIBE- mdicas no cubiertas en reas prioritarias para la salud
MSD) en Madrid. El equipo actual de MEDINA procede en su mediante el descubrimiento de terapias innovadoras, y
gran parte de uno de los ms antiguos Programas de Descu- en especial de nuevos candidatos a frmacos a partir de
brimiento de frmacos a partir de productos naturales de la compuestos de origen microbiano. MEDINA es lder en el
industria farmacutica y que durante sus ms de 50 aos de desarrollo de frmacos a partir de molculas de origen mi-
existencia dentro la divisin de investigacin de Merck (Merck crobiano, y es una referencia internacional en el campo de
Research Laboratories) ha contribuido como uno de los cen- los productos naturales para las instituciones acadmicas
tros con mayor xito en cuanto al nmero de productos en el y el sector industrial.
mercado procedentes de sus lneas de investigacin. La Fundacin MEDINA centra sus programas de des-
MEDINA se ha consolidado como un nuevo Centro de cubrimiento de frmacos en diferentes reas teraputicas
Excelencia para la investigacin y desarrollo en el descu- como las enfermedades infecciosas y las enfermedades
brimiento de frmacos sobre la base del conocimiento, la olvidadas, especialmente en la bsqueda de nuevos agen-
tecnologa y el equipamiento transferidos desde MSD, as tes frente a bacterias Gram negativas multirresistentes, la
como sobre la experiencia de una buena parte de su perso- oncologa, la neurodegeneracin y las enfermedades raras.
nal con una larga trayectoria anterior en dicha compaa. MEDINA tiene una amplia experiencia en el desarrollo de
El equipo de investigacin actual de la Fundacin ha sido campaas de cribado de alto rendimiento (High Through-

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reclutado tanto desde la empresa farmacutica como del put Screening HTS) con colecciones de extractos de pro-
sector biotecnolgico y del acadmico, y opera como un ductos naturales y libreras de compuestos de sntesis en
equipo multidisciplinar con amplia experiencia en biolo- una amplia variedad de formatos de ensayo automatizado.
ga molecular y celular, microbiologa clnica e industrial, Actualmente desarrolla programas de investigacin cola-
informtica y automatizacin, gestin de libreras de com- borativa en estas reas a travs de lneas de nanciacin
puestos, y qumica analtica y de productos naturales. interna y competitiva.
Esta experiencia ha podido ser complementada y en- La Fundacin MEDINA ofrece un amplio portafolio de 33
riquecida a travs de las oportunidades de colaboracin ensayos HTS in vitro y en lneas celulares, y ha imple-
con empresas biotecnolgicas, grupos acadmicos e Insti- mentado tecnologas de vanguardia como el High Content
tutos de Investigacin Sanitarios en Andaluca que ofrece Bioimaging, que van a permitir identicar nuevos candida-
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el Parque Tecnolgico de Ciencias de la Salud, una red de tos a frmacos mediante una combinacin de ensayos em-
investigacin nica en Andaluca para favorecer las posi- pricos y ensayos funcionales basados en diferentes dianas
bilidades de interaccin y desarrollo de una investigacin teraputicas.
traslacional en la clnica. MEDINA tiene una experiencia colectiva as como los
vnculos histricos con frmacos comercializados desde
DESCUBRIMIENTO DE FRMACOS hace aos con enorme xito (Cefoxitina, Mevacor, Imipe-
nem, Cancidas) as como con algunos de los ms importan-
A PARTIR DE PRODUCTOS tes descubrimientos de productos naturales de las ltimas
NATURALES dcadas (entre otros, moriniafungina, parnafunginas, en-
La principal misin de la Fundacin MEDINA como cen- fumafungina, platensimicina, platencina, lucensimicina, 1<5
tro de investigacin consiste en responder a necesidades philipimicina, kibdelomicina). 

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Antagonismo entre especies de endtos


aislados de Retama sphaerocarpa, La Malah,
Granada, Espaa.

LA COLECCIN DE PRODUCTOS candidatos, y nuevas estructuras que puedan ser desarro-


NATURALES lladas por MEDINA o en colaboracin con compaas que
operen en los sectores de la salud y agroqumico.
La Fundacin MEDINA pone a disposicin del scree- Adems de estas actividades de investigacin, la Fun-
ning una de las mayores y ms productivas colecciones dacin MEDINA pone a disposicin de la comunidad cient-
de hongos lamentosos, actinomicetos y bacterias para el ca as como de la industria farmacutica, biotecnolgica
descubrimiento de metabolitos secundarios con actividad y agroqumica, una plataforma singular de descubrimiento
biolgica. La Fundacin invierte una gran parte de sus de frmacos a partir de productos naturales derivados del
recursos y personal en el mantenimiento y expansin de enorme y diverso arsenal microbiolgico que est perfec-
esta coleccin de ms de 110.000 microorganismos. La tamente gestionada y optimizada para el desarrollo de
coleccin se ha construido para satisfacer las necesidades nuevos programas de bsqueda de molculas bioactivas
de una librera de productos naturales en el marco de la en el laboratorio. MEDINA proporciona la experiencia y las
empresa farmacutica, por lo que ha perseguido la incor- herramientas necesarias para maximizar las posibilidades
poracin de una amplia representacin de actinomicetos de xito a partir del cribado de la coleccin.
y hongos productores de metabolitos secundarios. Dicha
librera, que actualmente consta ms de 100.000 extrac-
tos y fracciones enriquecidas de productos naturales, est LA PLATAFORMA DE SEGURIDAD
extensamente anotada con datos qumicos y biolgicos. PRECLNICA
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MEDINA ofrece el acceso a los diferentes Mdulos de la


Librera de extractos y fracciones de productos naturales con La plataforma integrada de ensayos de preclnica pro-
caractersticas nicas para el descubrimiento de frmacos: cede del antiguo CIBE, Centro de Referencia en MSD para
la evaluacin temprana de candidatos a frmacos, y ha
Se caracterizan por la enorme diversidad en sus evolucionado para responder a las necesidades internas y
fuentes, mtodos de preparacin y el espacio qumi- externas de identicar los potenciales riesgos de seguridad
34 co nico que representan. cardiovascular y neuronal, las interacciones medicamento-
Estn disponibles en diferentes formatos y alcuotas sas y el metabolismo de los frmacos en etapas tempranas
completamente integrados con plataformas roboti- del desarrollo de los candidatos a frmacos. Dicha pla-
zadas, lo que permite su ensayo de manera eciente taforma ofrece la evaluacin de los compuestos en dife-
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y automatizada. rentes ensayos de metabolismo de frmacos (ensayos de


Estn anotados extensivamente con datos referentes a estabilidad metablica y evaluacin de la interaccin me-
sus caractersticas qumicas y propiedades biolgicas. dicamentosa mediada por citocromos P450), ensayos de
cardiotoxicidad (interaccin con canales inicos), ensayos
Sobre la base de esta experiencia en la identicacin de de neurotoxicidad (interaccin con receptores de neuro-
compuestos producidos por microorganismos con potencial para transmisores), y ensayos de genotoxicidad. La calidad de
su desarrollo como frmacos, se ofrecen oportunidades para el los servicios de ensayo que ofrece MEDINA as como los
descubrimiento de nuevas estructuras no descritas a partir de cortos tiempos de respuesta asegurados por el grado de
libreras de compuestos generados mediante sntesis qumica. automatizacin de la plataforma de screening permiten to-
1<5 Los productos naturales permiten identicar molculas mar rpidas decisiones go/no-go que conllevan a una im-
 que sean el punto de partida del descubrimiento de nuevos portante reduccin de los costes de desarrollo preclnico.

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COLABORACIONES CIENTFICAS Throughput Screening of Microbial Natural Extracts against Aspergillus
fumigatus Using Resazurin. J. Biomol. Screen. En prensa.
La Fundacin MEDINA est desarrollando programas de Parish CA, de la Cruz M, Smith SK, Zink D, Baxter J, Tucker-Samaras S,
investigacin derivados de sus lneas internas y de sus co- Collado J, Platas G, Bills G, Dez MT, Vicente F, Pelez F, Wilson K.
laboraciones internacionales con grupos de investigacin (2009). Antisense-guided isolation and structure elucidation of pan-
acadmicos en instituciones pblicas europeas y de los nomycin, a substituted cis-decalin from Geomyces pannorum. Journal of
EEUU, as como de compaas biotecnolgicas y farmacu- Natural Products 72: 59-62.
ticas. Estos proyectos se enfocan en el descubrimiento de Pelez F, Collado J, Platas G, Overy DP, Martn J, Vicente F, Gonzlez del
nuevos frmacos que puedan responder a necesidades m- Val A, Basilio A, de la Cruz M, Tormo JR, Fillola A, Arenal F, Villareal
dicas no cubiertas en enfermedades infecciosas (patgenos M, Rubio V, Baral HO, Galn R, Bills, GF. (2011). The phylogeny and in-
multirresistentes Gram negativos y Mycobacterium tuber- tercontinental distribution of the pneumocandin-producing anamorphic
culosis, y tratamiento de Aspergillosis invasiva), y para el fungus Glarea lozoyensis. Mycology, 2:117.
tratamiento de malaria. Adems, MEDINA ha implementado Prez M, Crespo C, Schleissner C, Rodriguez P, Zuniga P, Reyes F. (2009).
un programa de investigacin estratgico en cncer dirigido Tartrolon D, a cytotoxic macrodiolide from the marine-derived actino-
a la identicacin de nuevos agentes antitumorales enfo- mycete Streptomyces sp. MDG-04-17-069. Journal of Natural Products
cados selectivamente a determinadas rutas de sealizacin 72: 2192-2194.
Phillips JW, Goetz MA, Smith SK, Zink DL, Polishook J, Onishi R, Salowe S,
celular, as como un programa en medicamentos hurfanos
Wiltsie Allocco J, Sigmund J, Dorso K, Lee S, Skwish S, De la Cruz M,
para enfermedades raras. En este ltimo campo est traba-
Martn J, Vicente F, Genilloud O, Jun Lu, Ronald E. Painter, Katherine
jando especcamente en el tratamiento de la Esclerosis La-
Young, Karen Overbye, Robert G.K. Donald, and Singh SB. (2011).
teral Amiotrca con potencial aplicacin en enfermedades
Discovery of Kibdelomycin, A Potent New Class of Bacterial Type II To-
neurodegenerativas vinculadas al envejecimiento.
poisomerase Inhibitor by Chemical-Genetic Proling in Staphylococcus
MEDINA tiene como objetivo establecer acuerdos de cola-
aureus. Chemistry & Biology 18: 955965.
boracin y alianzas con empresas del sector farmacutico que
Reyes F, Fernndez R, Rodriguez A, Francesch A, Taboada S, Avila C, Cue-
puedan contribuir a llevar nuevos candidatos a frmacos hasta
vas, C. (2008). Aplicyanins A-F, new cytotoxic bromoindole derivatives
las fases preclnicas y a un posible desarrollo en la clnica.
from the marine tunicate Aplidium cyaneum. Tetrahedron 64: 5119-5123.
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Gonzlez I, Basilio A, Vicente F, Genilloud O, Pelez F, Jayasuriya H,
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Herath K, Harris G, Jayasuriya H, Zink D, Smith S, Vicente F, Bills G, Col-


lado J, Gonzlez A, Jiang B, Kahn JN, Galuska S, Giacobbe R, Abruzzo Young K, Cully DF, Singh SB. (2007). Discovery of platencin, a dual FabF
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tion, structure and biological activity of phomafungin, a cyclic lipodep- tional Academy of Sciences of the United States of America 104:7612-7616.
sipeptide from a widespread tropical Phoma sp. Bioorganic & Medicinal Wang J, Soisson SM, Young K, Shoop W, Kodali S, Galgoci A, Painter
Chemistry 17:1361-1369. R, Parthasarathy G, Tang YS, Cummings R, Ha S, Dorso K, Motyl
Martn MJ, Fernandez R, Francesch A, Amade P, Matos-Pita SSd, Reyes F, M, Jayasuriya H, Ondeyka J, Herath K, Zhang C, Hernandez L,
Cuevas C. (2010). Plumisclerin A, a diterpene with a new skeleton from Allocco J, Basilio A, Tormo JR, Genilloud O, Vicente F, Pelez
the soft coral Plumigorgia terminosclera. Organic Letters 12: 912-914. F, Colwell L, Ho Lee S, Michael B, Felcetto T, Gill C, Silver LL,
Monteiro MC, de la Cruz M, Cantizani J, Moreno C, Tormo JR, Mellado Hermes JD, Bartizal K, Barret J, Schmatz D, Becker JW, Cully D,
E, de Lucas JR, Asensio F, Valiante V, Brakhage AA, Latg JP, Genil- Singh S.B. (2006). Platensimycin is a selective FabF inhibitor with 1<5
loud O, Vic ente F. (2012). A New Approach to Drug Discovery: High- potent antibiotic properties. Nature 441: 358-361. 

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,:7,*0(340*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(

Biotecnologa para la Biomasa


Lignocelulsica

Mara Jess Martnez y ngel Martnez.


Centro de Investigaciones Biolgicas, CSIC,
c/ Ramiro de Maeztu 9, 28040 Madrid
54,96

36
:,4'-696

El grupo de Biotecnologa para la Biomasa Lignocelulsica del CIB-CSIC.

El grupo de investigacin Biotecnologa para la Bio- Biologa en Espaa. El grupo comenz su andadura el ao
masa Lignocelulsica, coordinado por los Dres. ngel T. 1985, dentro del antiguo Departamento de Microbiologa
Martnez y M Jess Martnez, forma parte del Departa- Molecular del CIB, estudiando tanto los aspectos bsicos
mento de Biologa Medioambiental del Centro de Investi- de la degradacin de la lignocelulosa por los hongos como
gaciones Biolgicas (CIB) del CSIC en Madrid, uno de los el potencial de estos microorganismos y sus enzimas en
1<5 centros pluridisciplinares de mayor tradicin en el rea de diferentes aplicaciones biotecnolgicas. Inicialmente los


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trabajos se centraron en conocer los mecanismos enzim- cin de modernas tcnicas analticas (basadas en la NMR
ticos de los hongos de podredumbre blanca, especialmente bidimensional disponible en el CIB) para el estudio de la
de Pleurotus eryngii, para degradar la lignina, un paso cla- lignina y sus usos industriales. Las lneas de investigacin
ve para el reciclado del carbono en la Tierra y caracterizar en curso, nanciadas por proyectos nacionales, europeos
las enzimas extracelulares que intervenan en el proceso y proyectos de colaboracin y contratos con empresas, se
(lacasas, peroxidasas y enzimas productoras de perxido resumen a continuacin:
de hidrgeno). Todas estas enzimas presentan una amplia
especicidad de sustrato, lo que ha permitido comprobar Estudios estructura-funcin de oxidorreductasas
tambin su ecacia para degradar otros compuestos aro- involucradas en los procesos de degradacin (pe-
mticos recalcitrantes que producen problemas medioam- roxidasas, lacasas y aril-alcohol oxidasas), median-
bientales (hidrocarburos aromticos policclicos, coloran- te mutagnesis y evolucin dirigida, destinados a
tes, residuos de produccin aceite de oliva, etc.). mejorar las propiedades fsico-qumicas y catalticas
Inicialmente los proyectos se relacionaron con la apli- de estas enzimas y su versatilidad para diferentes
cacin de estos hongos y sus enzimas en el sector pape- aplicaciones.
lero. La introduccin de tecnologas menos agresivas con Estudios bioqumicos y moleculares de esterol es-
el medio ambiente, como la eliminacin del cloro en el terasas, enzimas capaces de realizar reacciones de
blanqueo de la pasta, llev consigo la aparicin de otros hidrlisis o sntesis, dependiendo de las condiciones
problemas en el sector. En este sentido destacar que las de reaccin, con nuevas aplicaciones en el sector de
investigaciones del grupo dieron lugar a diferentes traba- los nutracuticos.
jos y patentes en los que se propone que tanto la aplica- Estudios de celulasas y hemicelulasas para la degra-
cin de los hongos como sus enzimas podran contribuir dacin de los polisacridos de la pared vegetal y su
a reducir estos problemas: i) las lacasas, utilizando me- transformacin en etanol de segunda generacin.
diadores de bajo peso molecular, y las peroxidasas podan Estudios de lacasas y peroxidasas en la degradacin
participar en el blanqueo enzimtico de las pastas, man- de compuestos recalcitrantes contaminantes de
teniendo sus propiedades, ii) el pretratamiento biolgico aguas y suelos y la produccin de qumicos deriva
de las astillas disminua los problemas de depsitos en las dos del tratamiento de la biomasa.
pastas y iii) estos problemas de depsitos tambin podran
mejorar utilizando esterol esterasas o el sistema lacasa- El grupo colabora con diferentes centros de investiga-
mediador, reduciendo o eliminando compuestos presentes cin, universidades y empresas, tanto nacionales como in-
en los extrables de las maderas e involucrados en la for- ternacionales y la informacin detallada de sus publicacio-
macin de depsitos. nes recientes y los proyectos en curso puede encontrase en
Los trabajos sobre el empleo de mediadores para po- su pgina WEB (www.cib.csic.es/lignina/lignina_en.html).
tenciar la actividad de la lacasa (esta enzima oxida de
forma natural compuestos aromticos fenlicos y slo en
presencia de mediadores puede degradar compuestos aro- PUBLICACIONES RECIENTES
mticos no fenlicos de mayor potencial redox), llevaron Babot ED, Rico A, Rencoret J, Kalum L, Lund H, Romero J, del Ro
a describir una nueva familia de mediadores naturales. La

54,96
JC, Martnez AT and Gutirrez A (2011) Towards industrially fea-
Dra. Susana Camarero, investigadora del grupo, fue pio- sible delignication and pitch removal by treating paper pulp with
nera en la descripcin de estos compuestos, derivados Myceliophthora thermophila laccase and a phenolic mediator. Biores.
de la degradacin de la lignocelulosa, y su utilizacin Technol. 102: 6717-6722.
para degradar compuestos contaminantes y deslignicar Camarero S, Pardo I, Caas AI, Molina P, Record E, Martnez AT, Mar-
materiales lignocelulsicos, experiencia que aplica en la tnez MJ, Alcalde M (2012) Engineering Platforms for Directed
actualidad a la ingeniera de lacasas fngicas. Por otra Evolution of Laccase from Pycnoporus cinnabarinus. Appl Environ
parte, la incorporacin al grupo de la Dra. Alicia Prieto, Microbiol 78: 13701384. 37
investigadora con gran experiencia en el estudio de poli- Faulds CB, Prez-Boada M, Martnez AT (2011) Inuence of organic
sacridos, ha permitido abordar con ms ecacia las dife- co-solvents on the activity and substrate specicity of feruloyl este-
rentes aplicaciones de la biomasa vegetal. Finalmente hay rases. Biores. Technol. 102: 4962-4967.
:,4'-696

que mencionar la aproximacin genmica para la bsqueda Fernandez-Fueyo E, Ruiz-Dueas FJ, Ferreira P,..., Martnez AT, Vicua
de nuevas peroxidasas y otras oxidorreductasas de inters R, Cullen D (2012) Comparative genomics of Ceriporiopsis subverm-
biotecnolgico que est desarrollando el Dr. Javier Ruiz- ispora and Phanerochaete chrysosporium provide insight into selective
Dueas. ligninolysis. Proc Natl Acad Sci USA (DOI: 10.1073/pnas.1119912109).
La mayor parte de los proyectos vigentes en la ac- Fernandez-Fueyo E, Ruiz-Dueas FJ, Miki Y, Martnez MJ, Hammel KE,
tualidad estn relacionados con el aprovechamiento de Martnez AT (2012) Lignin-degrading peroxidases from the genome
la biomasa vegetal, de acuerdo con el concepto de bio- of the selective ligninolytic fungus Ceriporiopsis subvermispora. J.
renera, abordando aspectos bsicos y aplicados para tra- Biol. Chem. DOI: 10.1074/jbc.M112.356378
tar de estudiar las posibles aplicaciones biotecnolgicas, Garca-Ruiz E, Gonzlez-Prez D, Ruiz-Dueas FJ, Martnez AT and Al-
entre las que se encuentran la produccin sostenible de calde M (2012) Directed evolution of a temperature-, peroxide- and 1<5
combustibles y productos qumicos, junto con la utiliza- alkaline pH-tolerant versatile peroxidase. Biochem. J. 441: 487-498. 

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,:7,*0(340*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(

Gutierrez A, Babot ED, Ullrich R, Hofrichter M, Martnez AT and del Martnez AT, Rencoret J, Nieto L, Jimnez-Barbero J, Gutirrez A, del
Ro JC (2011) Regioselective oxygenation of fatty acids, fatty al- Ro JC (2011) Selective lignin and polysaccharide removal in natu-
cohols and other aliphatic compounds by a basidiomycete heme- ral fungal decay of wood as evidenced by in situ structural analyses.
thiolate peroxidase. Arch. Biochem. Biophys. 514: 33-43.. Environ. Microbiol. 13: 96-107.
Hernndez-Ortega A, Borrelli K, Ferreira P, Medina M, Martnez AT Miki Y, Calvio FR, Pogni R, Giansanti S, Ruiz-Dueas FJ, Martnez
and Guallar V (2011) Substrate diffusion and oxidation in GMC oxi- MJ, Basosi R, Romero A and Martnez AT (2011) Crystallographic,
doreductases: an experimental and computational study on fungal kinetic, and spectroscopic study of the rst ligninolytic peroxidase
aryl-alcohol oxidase. Biochem. J. 436: 341-350. presenting a catalytic tyrosine. J. Biol. Chem. 286: 15525-15534.
Hernndez-Ortega A, Ferreira P, Martnez AT (2012) Fungal aryl-al- Ruiz-Dueas FJ, Fernandez E, Martnez MJ, Martnez AT (2011) Pleurotus
cohol oxidase: a peroxide-producing avoenzyme involved in lignin ostreatus heme peroxidases: An in silico analysis from the genome se-
degradation. Appl. Microbiol. Biotechnol. 93: 1395-1410. quence to the enzyme molecular structure. C. R. Biologies 334: 795-805.
Hernndez-Ortega A, Lucas F, Ferreira P, Medina M, Guallar V, Mar- Salvacha D, Prieto A, Lpez-Abelairas M, Lu-Chau T, Martnez AT,
tnez AT (2011) Modulating O2 reactivity in a fungal avoenzyme: Martnez MJ (2011) Fungal pretreatment: An alternative in second-
Involvement of aryl-alcohol oxidase Phe-501 contiguous to catalytic generation ethanol from wheat straw. Biores. Technol. 102: 7500-7506.
histidine. J. Biol. Chem. 286: 4110514. Taboada-Puig R, L-Chau T, Moreira MT, Feijoo G, Martnez MJ and
Ibarra D, Monte MC, Blanco A, Martnez AT and Martnez MJ (2012) Lema JM (2011) A new strain of Bjerkandera sp. production, puri-
Enzymatic deinking of secondary bers: cellulases/hemicellulases versus cation and characterization of versatile peroxidase. World J Micro-
laccase-mediator system. J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 39: 1-9. biol Biotechnol. 27: 115-122.
Jurado M, Saparrat M, Martnez AT, Martnez MJ (2011) Application of Waters DM, Murray PG, Miki Y, Martnez AT, Tuohy MG and Faulds CB
White-Rot Fungi in Transformation, Detoxication, or Revalorization (2012) A thermostable fungal acetylxylan esterase from Talaromyces
of Agriculture Wastes: Role of Laccase in the Processes. Comprehen. emersonii: Cloning, over-expression in Escherichia coli and characteriza-
Biotechnol. 6: 595-603. tion. Appl. Environ. Microbiol. doi:10.1128/AEM.05659-11.

Degradacin de lignocelulosa
por estreptomicetos y sus
implicaciones tecnolgicas
y medioambientales
(Grupo BIODEG)
54,96

Manuel Hernndez, Juana Rodrguez, Francisco Guilln, Javier Mrida, Raquel Moya,
Ana Beln Garca, Alba Blnquez, Jos Manuel Molina-Guijarro, Mara Isabel Prez-
Leblic y Mara Enriqueta Arias. Departamento de Microbiologa y Parasitologa. Universidad
38 de Alcal. 28871 Alcal de Henares (Madrid). E-mail: enriqueta.arias@uah.es
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El grupo de investigacin del Departamento de Micro- ticos implicados en la degradacin de los componentes
biologa y Parasitologa de la Universidad de Alcal co- estructurales de los materiales lignocelulsicos por estos
ordinado por la Dra. M Enriqueta Arias Fernndez, se ha microorganismos, as como al anlisis de las modicacio-
centrado desde hace ms de 20 aos en la elucidacin nes qumicas producidas, tanto en maderas como en resi-
de los mecanismos bsicos implicados en la degrada- duos herbceos, por cepas seleccionadas. Con este estu-
cin de lignocelulosa por cepas seleccionadas del gnero dio se pretende a su vez satisfacer la demanda actual de
Streptomyces, as como en el estudio del potencial bio- determinadas industrias contaminantes (papelera, textil,
tecnolgico y medioambiental de estos microorganismos petroqumica, etc.), para sustituir total o parcialmente
1<5 y/o sus enzimas. Nuestras investigaciones se han dirigido los procesos qumicos habitualmente utilizados, causan-
 en una primera etapa a desentraar los sistemas enzim- tes de un signicativo impacto ambiental, por mtodos

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biolgicos amigables con el medio ambiente y que a su
vez puedan incrementar el ratio coste-benecio en dichas
industrias. Ms recientemente, hemos iniciado una nueva
lnea de trabajo sobre procesos de bio-oxidacin avanzada
(PBOA) con microorganismos ligninolticos seleccionados
(actinobacterias y hongos), con vistas a su aplicacin en
la descontaminacin de suelos, aguas residuales y euen-
tes industriales.

ESTUDIOS BSICOS
DE DEGRADACIN DE
LIGNOCELULOSA
POR STREPTOMYCES
Nuestros estudios iniciales se dirigieron al aislamien-
to y seleccin de cepas de estreptomicetos de distintos
habitats naturales, con objeto de conocer su capacidad
para degradar distintos residuos lignocelulsicos, tanto de Grupo BIODEG. De izquierda a derecha, Javier
tipo herbceo (paja de trigo, bagazo de maz, cascarilla de Mrida, Mara Enriqueta Arias, Francisco Guilln,
arroz y pulpa de caf) como leoso (maderas de picea y Raquel Moya, Cristina Escudero, Juana Rodrguez,
eucalipto, entre otras). Mara Isabel Prez, Manuel Hernndez, Ana Beln
El anlisis qumico de los residuos lignocelulsicos Garca y Alba Blzquez.
transformados por cepas seleccionadas de Streptomyces en
condiciones de fermentacin en estado slido, puso de
maniesto que dichas cepas son capaces de atacar oxida-
tivamente las unidades estructurales de la lignina, hasta
lograr, en algunos casos, una signicativa mineralizacin. lera, lo cual conlleva una decoloracin muy signicativa
Asimismo, se puso de maniesto que la mayor parte de de los mismos y una disminucin del impacto ambiental
las cepas degradan el componente hemiceluloltico de los causado por su vertido en las aguas continentales.
sustratos, sin atacar la celulosa.
Posteriormente, se han elucidado los sistemas enzim-
ticos implicados en la degradacin de estos materiales. De DEMOSTRACIN DE LA
hecho, se han puricado y caracterizado enzimas de tipo IMPORTANCIA BIOTECNOLGICA
xilanasa, mananasa, esterasa, peroxidasa y lacasa, produ- Y MEDIOAMBIENTAL DE LAS
cidas en distintas condiciones de cultivo. Como fruto de
los resultados obtenidos, algunas de estas cepas selec-
LACASAS DE STREPTOMYCES

54,96
cionadas y/o sus enzimas han sido aplicadas con xito en Y DE LOS SISTEMAS
procesos de biopasteo y bioblanqueo de residuos lignoce- LACASA-MEDIADOR
lulsicos y pastas qumicas, respectivamente. Asimismo,
hay que destacar que en nuestro grupo se ha demostrado Entre las enzimas puricadas y caracterizadas en nues-
por primera vez el potencial industrial de la cepa Strep- tro grupo, presentan especial relevancia las lacasas pro-
tomyces cyaneus CECT 3335, para ser utilizada en el pasteo ducidas por las cepas Streptomyces cyaneus CECT 3335
biomecnico de madera de picea, debido a la capacidad de y Streptomyces ipomoea CECT 3341. El inters suscitado
por su estudio radica, por un lado, en la corriente actual 39
este microorganismo para deslignicar dicho sustrato, con
el consiguiente ahorro energtico en la etapa de desbra- existente por profundizar en el conocimiento bsico de
do, uno de los cuellos de botella del pasteado mecnico. estas enzimas, ya que al tratarse de enzimas recientemen-
:,4'-696

Asimismo, el pretratamiento de la madera con el microor- te descubiertas en bacterias, su estructura y funcin son
ganismo, supuso una mejora importante en los parmetros prcticamente desconocidas, y por otro, en la necesidad
de calidad de las pastas obtenidas. creciente de encontrar sistemas enzimticos oxidativos de
En relacin al proceso de bioblanqueo, enzimas de tipo alta efectividad y bajo coste, que puedan ser aplicados en
xilanasa, mananasa, peroxidasa y lacasa, producidas por la resolucin de problemas industriales y medioambienta-
distintas especies de Streptomyces, han demostrado su les. As, en estos ltimos aos, hemos clonado y caracte-
efectividad en la mejora de las propiedades fsico-qumi- rizado ambas lacasas y, si bien la producida por S. cyaneus
cas y pticas de distintas pastas kraft de eucalipto. presenta una estructura y comportamiento similares a los
Por ltimo, tambin hemos demostrado la implicacin de lacasas producidas por hongos lamentosos (tres do-
de estos microorganismos en la degradacin de la lignina minios de cupredoxina y pH cido de actuacin), la lacasa
1<5
presente en los euentes generados por la industria pape- de S. ipomoea es estructural y catalticamente nica. Esta


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lacasa presenta slo dos dominios de cupredoxina en su puestos xenobiticos de estructura qumica diversa. En la
estructura y su actividad depende del pH, siendo activa actualidad estamos desarrollando y optimizando los sis-
sobre compuestos fenlicos a pHs alcalinos, lo que supo- temas de produccin extracelular de radicales hidroxilo a
ne una gran ventaja para ser aplicada en procesos indus- travs del ciclo redox de quinonas. En este sentido, cabe
triales tradicionalmente llevados a cabo a elevados pHs, destacar que se ha demostrado por primera vez la induc-
o para degradar compuestos contaminantes presentes en cin de este ciclo en Streptomyces, resultando tan ecaz
euentes alcalinos. como el descrito anteriormente en el hongo lamentoso
En cuanto al aspecto ms aplicado, hemos diseado de la podredumbre blanca, Pleurotus eyngii. Con estos sis-
sistemas lacasa-mediador (lo cual supuso la seleccin temas oxidativos inespeccos hemos logrado hasta el mo-
previa de mediadores de oxidacin de origen natural), mento, la degradacin de compuestos xenobiticos como
que han demostrado su utilidad en la degradacin y de- benceno, tolueno, etilbenceno y xileno (BTEX) y un gran
toxicacin de colorantes textiles de tipo azo, cuyo ver- nmero de colorantes textiles, poniendo de maniesto en
tido a las aguas continentales supone un riesgo medio- la mayor parte de los ensayos una completa detoxica-
ambiental muy notable con consecuencias para la salud cin. Nuestro objetivo a corto plazo es ampliar el rango de
humana. La ecacia de estos sistemas tambin se ha aplicacin de estos sistemas a una gran variedad de con-
puesto de maniesto en el bioblanqueo de pastas kraft taminantes emergentes (antibiticos, antiinamatorios,
de eucalipto. As, el tratamiento de las mismas con el disruptores endocrinos y productos de cuidado personal),
sistema lacasa-acetosiringona a pH alcalino, se tradujo es decir, los denominados PPCPs.
en un mayor grado de deslignicacin y un aumento de
la blancura de la pasta de papel, as como en la mejora
de las propiedades pticas (CIE L*a*b* y CIE L*C*), in- PUBLICACIONES RECIENTES
cluso despus de un proceso de envejecimiento acelera- Aranda E, Marco-Urrea E, Caminal G, Arias ME, Garca Romera I., Gui-
do en laboratorio. Por otro lado, el ahorro de reactivos lln F (2010) Advanced oxidation of benzene, toluene, ethylben-
(perxido de hidrgeno) en las pastas biotratadas y la zene and xylene isomers (BTEX) by Trametes versicolor. J Hazardous
posibilidad de recuperar gran parte de la actividad en- Materials. 181: 181-186.
zimtica tras el proceso, avalan el potencial del sistema Arias ME, Rodrguez J, Prez MI, Hernndez M, Polvillo O, Gonzlez-
lacasa-mediador para ser utilizado a mayor escala en el Prez JA, Gonzlez-Vila FJ (2010) Analysis of chemical changes in
bioblanqueo de pastas de papel. Picea abies wood decayed by different Streptomyces strains showing
evidences for biomechanical pulping. Wood Science Technology. 44:
BIOOXIDACIN AVANZADA 179-188.
Eugenio ME, Hernndez M, Moya R, Martn-Sampedro R, Villar JC,
DE COMPUESTOS Arias ME (2011) Evaluation of a new laccase produced by Strep-
Y POLMEROS AROMTICOS tomyces ipomoea on biobleaching and ageing of kraft pulps. BioRe-
POR MICROORGANISMOS sources. 6: 3231-3241.
Hernndez M, Moya R, Molina-Guijarro JM, Guilln F, Arias ME (2011).
LIGNINOLTICOS Y SISTEMAS
Exploring the biotechnological applications of a halotolerant pH-
LACASA-MEDIADOR
54,96

versatile laccase produced by Streptomyces ipomoea CECT 3341. En:


Microorganisms in Industry and Environment. From Scientic and
Tal como hemos comentado, entre los mecanismos de-
Industrial Research to Consumer Products. A. Mendez-Vila (Ed). Pp.
gradativos de los microorganismos ligninolticos destacan
350-354. ISBN: 13 978-981-4322-10-2. World Scientic Publishing
preferentemente enzimas de tipo lacasa. La potenciacin
Company Pte. Ltd. Singapur.
de la actividad oxidativa de estas enzimas se ha logra-
Molina-Guijarro JM, Prez J, Muoz-Dorado J, Guilln F, Moya R, Her-
do merced al descubrimiento de los llamados mediadores,
nndez M, Arias ME (2009). Molecular and physico-chemical cha-
agentes oxidantes de bajo peso molecular y elevado po-
40 tencial redox, que incrementa notablemente el rango de racterization of a novel pH-versatile and haloresistant laccase from
Streptomyces ipomoea CECT 3341. A tool for the detoxication of azo
compuestos susceptibles de degradacin.
dyes. Int Microbiol. 2:13-21.
Estos agentes incluyen radicales fenoxilo, derivados
Moya R, Hernndez M, Garca-Martn AB, Ball AS, Arias ME (2010) Con-
:,4'-696

de la oxidacin monovalente de los mediadores fenlicos


tributions to a better comprehension of redox-mediated decolouration
por lacasas (sistemas lacasa-mediador o LMS), y radicales
and detoxication of azo dyes by a laccase produced by Streptomyces
hidroxilo, generados entre otros mecanismos, mediante
cyaneus CECT. Bioresource Technology. 101: 2224-2229.
ciclos redox de quinonas. La aplicacin de estos agentes
Moya R, Saastamoinen P, Hernndez M, Suurnkki A, Arias ME, Mattinen
oxidativos altamente reactivos y poco selectivos produ-
M-L (2011) Reactivity of bacterial and fungal laccases on lignin in
cidos por bacterias y hongos ligninolticos a la degrada-
alkaline conditions. Bioresource Technology. 102: 10006- 10012.
cin de compuestos y polmeros aromticos, podra ser
Orozco AL, Prez MI, Guevara O, Rodrguez J, Hernndez M, Gonzlez-
considerada como un Proceso de Bio-Oxidacin Avan-
Vila FJ, Polvillo O, Arias ME (2008) Biotechnological enhancement
zada (PBOA).
of coffee pulp residues by solid-state fermentation with Streptomy-
En estudios anteriores hemos demostrado la ecacia de
1<5 los sistemas lacasa-mediador en la degradacin de com- ces. Py-GC/MS analysis. Journal of Analytical and Applied Pyrolysis.
 81: 247-252

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Bacterias Lcticas del Vino y Otros
Alimentos (Grupo BL-URV)

Albert Bordons*, Cristina Reguant, Nicolas Rozs, Isabel Araque, Nair Olgun, Albert
Hurtado. Dpto. Bioqumica y Biotecnologa, Facultad de Enologa de Tarragona, Universitat
Rovira i Virgili. * albert.bordons@urv.cat

Los miembros del equipo BL-URV, Albert Bordons


(2 la, 4 por la izquierda), Cristina Reguant
(2 la, 3 izquierda), Nicolas Rozs (3 la,
1 izquierda), y las doctorandas Mar Margalef
(1 la, 2 izquierda) y Paloma Torao (1 la,
1 derecha), con otros componentes del grupo
de Biotecnologa Enolgica del que forman
parte.

Nuestro equipo BL-URV investiga sobre todo en las Bac- En la actualidad trabajan en el equipo BL-URV, ade-
terias Lcticas (BL) del vino pero tambin en las de otros ali- ms de los tres profesores mencionados, tres becarias pre-
mentos, sobre todo de aceitunas, en la Facultad de Enologa doctorales: Meritxell Bordas (no aparece en la foto, est
de Tarragona, de la Universitat Rovira i Virgili. El equipo est realizando una estancia en Burdeos), Mar Margalef y Palo-

54,96
coordinado por A. Bordons, que con los otros dos profesores ma Torao, as como Isabel Araque, tcnica postdoctoral
C. Reguant y N. Rozs, forman parte de un grupo de investi- (tampoco aparece en la foto, est de baja maternal). Los
gacin ms numeroso, llamado Biotecnologa Enolgica (ver trabajos de nuestro equipo han sido nanciados por varios
foto, Figura 1). Este grupo en su conjunto, cuyo responsa- proyectos del Plan Nacional (AGL) y tambin por empresas
ble es Albert Mas, es un grupo reconocido como consolidado del sector, como las bodegas Torres o el consorcio de em-
por la Generalitat, con prestigio por la investigacin en los presas del proyecto Demter del programa Cenit del CDTI
diversos microorganismos relacionados con el vino, o sea, (2008-2012). Parte de la investigacin la hemos realizado 41
levaduras, bacterias lcticas y bacterias acticas. en colaboracin con otros grupos de Valencia, Reus, Vero-
En 1988, coincidiendo con la puesta en marcha de los na, Burdeos, Dijon, Pars, Tnez y Tucumn.
primeros estudios universitarios de Enologa en Tarrago-
:,4'-696

na (y los primeros de Espaa), varios profesores de esta CARACTERIZACIN DE LAS


universidad empezaron a realizar investigacin en temas
de enologa, y en concreto entonces A. Bordons empez a
BACTERIAS LCTICAS DEL VINO
trabajar con las BL del vino. Desde entonces se han rea- Las bacterias lcticas (BL) del vino son las que llevan a
lizado 9 tesis doctorales en el equipo BL-URV, y con sus cabo la fermentacin malolctica (FML) o segunda fermen-
publicaciones internacionales, el equipo constituye hoy en tacin de bastantes vinos tintos y algunos blancos y es-
da uno de los principales grupos de referencia sobre BL pumosos, principalmente cepas de Oenococcus oeni (Figu-
del vino en Espaa. Cabe sealar la relevancia internacio- ra2). La FML es la descarboxilacin de L-mlico a L-lctico,
nal de los grupos espaoles en este mbito, cuyas publi- que conlleva un ligero descenso de la acidez. Otras venta-
caciones en estos 5 ltimos aos constituyen un tercio de jas que estas bacterias coneren al vino son la produccin 1<5
todas las del mundo (Bordons et al., 2011). de otros metabolitos, como diacetilo a partir de ctrico, 

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)(50(17$&,10$/2/&7,&$ )0/

+22&&+&+2+&22+ &+&+2+&22+

/PiOLFR /OiFWLFR &2

Oenococcus oeni, la bacteria


lctica del vino, y la
2HQRFRFFXV RHQL fermentacin malolctica.

que tambin suponen mejoras organolpticas, y la estabi- que se recurra a la inoculacin de cepas comerciales. El
lizacin microbiolgica del vino, al haberse consumido du- vino es un medio difcil para el desarrollo de O. oeni, ya
rante la FML los restos de compuestos como azcares, que que es un medio muy variable (depende de la vendimia,
podran provocar contaminaciones posteriores en botella. de la varietal de uva, de la levadura usada, etc), con-
En los primeros aos de trabajo del equipo BL-URV se es- tiene otros microorganismos, y sobretodo, es inhspito
tudi el efecto de diversos componentes del vino sobre la ya que tiene etanol (hasta 15% v/v), un pH cido (3-4)
viabilidad y el metabolismo de O. oeni y sobre la cintica de la y pocos nutrientes porque la levadura los ha agotado
FML, como pesticidas, compuestos fenlicos y otros. Al mismo casi todos. Adems, con el cambio climtico estas di-
tiempo se procedi a realizar aislamientos de BL de vinos del ficultades se acrecientan, ya que se est constatando
sur de Catalua, con lo que se ha conseguido tener un buen un aumento del grado alcohlico y una menor acidez,
banco de cepas, y a partir de ellas realizar ensayos de selec- con menor contenido en mlico, que es necesario para
cin para la FML. Tambin se pusieron a punto tcnicas mole- O.oeni (Reguant et al., 2010).
culares de identicacin de especie, sobre todo de O. oeni, y La principal lnea de trabajo actual es el estudio de
de tipicacin de cepas, como una tcnica multiplex (Araque
54,96

los mecanismos de respuesta de O. oeni para adaptarse


et al., 2009a). stas tcnicas han permitido realizar estudios y sobrevivir a estas condiciones estresantes. Los me-
de dinmica de poblaciones de las diversas cepas, inoculadas canismos pueden ser: a) modificaciones en la compo-
o no, en FML en diversas condiciones. sicin de cidos grasos de membrana para compensar
Aparte de los benecios comentados, algunas de las BL en los efectos del etanol; b) activacin de la ATPasa ex-
ciertas condiciones pueden producir compuestos perjudiciales pulsando protones y al mismo tiempo generando ATPs
para la salud humana, como las aminas bigenas o el carba- mediante las decarboxilaciones de mlico y ctrico; y
42 mato de etilo (CE), que es carcingeno. Hemos estudiado la c) la activacin de una serie de protenas de estrs,
produccin de precursores del CE, como la citrulina, a partir como chaperonas o protenas de mantenimiento del
de arginina por la ruta ADI (arginina deiminasa) en las BL. equilibrio redox, como la tiorredoxina. Mediante PCR
Mediante cebadores degenerados se ha detectado la presencia cuantitativa, hemos demostrado que unos de los genes
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de los genes arc de dicha ruta en diversas especies y cepas, y que ms se expresan en presencia de etanol son los de
se ha encontrado correlacin entre los genes y la degradacin la ruta del citrato (Olgun et al., 2009), y que tambin
de arginina (Araque et al., 2009b). se sobreexpresan genes de protenas de estrs como
hsp18 o clpP (Olgun et al., 2010). Tambin hemos
conseguido analizar la expresin de estos genes ms
ADAPTACIN DE OENOCOCCUS significativos extrayendo RNA directamente del vino.
OENI A LAS CONDICIONES Actualmente estamos confirmando estos resultados
ESTRESANTES DEL VINO mediante anlisis transcriptmico con microarrays de
O. oeni. Por otro lado, estamos viendo el papel protec-
1<5 Los enlogos saben bien que la FML a menudo tiene tor del glutatin como antioxidante frente a los daos
 problemas para realizarse o para terminar, incluso aun- del etanol en O. oeni.

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LAS BACTERIAS LCTICAS Araque I, Reguant C, Rozs N, Bordons A. (2011) Inuence of wine-
like conditions on arginine utilization by lactic acid bacteria. Inter-
EN LA ELABORACIN DE LA nat. Microbiol. 14: 225-233
ACEITUNA ARBEQUINA DE MESA Bordons A, Reguant C, Rozs N. (2011) Investigacin de calidad en fermen-
tacin malolctica y bacterias lcticas del vino en Espaa. ACEnologa, 128
Las aceitunas arbequinas de mesa se consumen tradicio- Hurtado A, Reguant C, Esteve-Zarzoso B, Bordons A, Rozs N. (2008)
nalmente en Catalua. El proceso de elaboracin es muy ar- Microbial population dynamics during the processing of Arbequina
tesanal y, a diferencia de las tpicas aceitunas espaolas, no table olives. Food Res. Inter. 41: 738-744
tiene un previo tratamiento alcalino para eliminar el amargor. Hurtado H, Reguant C, Bordons A, Rozs N. (2009) Inuence of fruit
ste se elimina parcialmente en un proceso de fermentacin ripeness and salt concentration on the microbial processing of Arbe-
natural, del cual no se haba estudiado el proceso microbio- quina table olives. Food Microbiol. 26: 827-833
lgico, y que hemos ido caracterizando desde 2004. En los Hurtado H, Reguant C, Bordons A, Rozs N. (2010) Evaluation of a single
primeros das del proceso de fermentacin predominan las and combined inoculation of a Lactobacillus pentosus starter for process-
levaduras, entre las que hemos identicado diversas espe- ing cv. Arbequina natural green olives. Food Microbiol. 27: 731-740
cies de Candida y Pichia, pero a las pocas semanas las BL Hurtado A, Reguant C, Bordons A, Rozs N. (2011a) Expression of
ya son prevalentes: Lactobacillus pentosus, L. plantarum y L. Lactobacillus pentosus B96 bacteriocin genes under saline stress.
paraplantarum (Hurtado et al., 2008) y ellas son la clave del Food Microbiol. 28: 1339-1344
proceso para conseguir la maduracin y comestibilidad de las Hurtado A, Ben Othman N, Chammem N, Hamdi M, Ferrer S, Reguant
aceitunas. Hemos aislado cepas de L. pentosus que pueden C, Bordons A, Rozs N. (2011b) Characterization of Lactobacillus
funcionar com estrters (Hurtado et al., 2010) y tambin he- isolates from fermented olives and their bacteriocin gene proles.
mos caracterizado unos cien aislados de diferentes orgenes Food Microbiol. 28: 1514-1518
de las tres especies de Lactobacillus, relacionndolos con sus Hurtado A, Reguant C, Bordons A, Rozs N. (2012) Lactic acid bac-
perles de genes de bacteriocinas (Hurtado et al., 2011b). teria from fermented table olives (Review). Food Microbiol., doi:
Recientemente hemos publicado una revisin sobre el papel 10.1016/j.fm.2012.01.006
relevante de las BL en el proceso de fermentacin de las acei- Olgun N, Bordons A, Reguant C. (2009) Inuence of ethanol and pH
tunas de mesa en general (Hurtado et al., 2012). on the gene expression of the citrate pathway in Oenococcus oeni.
Food Microbiol. 26: 197-203
PRINCIPALES PUBLICACIONES Olgun N, Bordons A, Reguant C. (2010) Multigenic expression analysis
as an approach to understanding the behaviour of Oenococcus oeni
RECIENTES in wine-like conditions. Inter. J. Food Microbiol. 144: 88-95
Araque I, Bordons A, Reguant C. (2009a) A multiplex PCR method for Olgun N, Alegret JO, Bordons A, Reguant C. (2011) Beta-Glucosidase
simultaneous species identication and strain typication of Oeno- activity and bgl gene expression of Oenococcus oeni strains in model
coccus oeni. World J. Microbiol. Biotech. 25: 15-18 media and Cabernet Sauvignon wine. Amer. J. Enol. Vitic 62: 99-105
Araque I, Gil J, Carret R, Bordons A, Reguant C.(2009b) Detection of Reguant C, Olgun N, Bordas M, Rozs N, Bordons A. (2010) Nuevos
arc genes related with the ethyl carbamate precursors in wine lactic retos para Oenococcus oeni como consecuencia del cambio climtico.
acid bacteria. J. Agric. Food Chem. 57: 1841-1847 ACEnologa, 122

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Diversidad de actinomicetos
y sus aplicaciones biotecnolgicas

Gonzalo Cuesta. Departamento de Biotecnologa. Universidad Politcnica de Valencia.


Camino de Vera, 14. 46022 Valencia. Tel: 963877423 (goncueam@btc.upv.es)

Integrantes del grupo de investigacin:


de izquierda a derecha, Ana Gonzlez
(Tcnico Superior de Laboratorio), Roco
Olmo (Becaria), Albert Soler (Doctor por la
Universidad Politcnica de Valencia), Nelson
Talavera (Becario), Gonzalo Cuesta (Profesor
Contratado Doctor), Alfred Fillol (Becario).
54,96

El grupo de Actinomicetos de la Universidad Politc- depuracin de aguas ms frecuentemente utilizado consis-


nica de Valencia tiene una reciente historia. Comenz en te en el sistema de fangos activados, en el que el agua re-
2004 cuando el que escribe estas lneas defendi la te- sidual se somete a una aireacin controlada para reducir la
44 sis doctoral que trataba sobre el estudio de actinomicetos DBO (Demanda Biolgica de Oxgeno) a la vez que se forma
nocardioformes presentes en estaciones depuradoras y que un culo sedimentable. En este proceso intervienen una
ocasionan problemas de espumas biolgicas. La eleccin enorme diversidad de microorganismos, unos beneciosos
del tema de dicha tesis tena como objetivo cubrir el vaco y otros perjudiciales. Si todo funciona correctamente, la
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que exista en nuestro laboratorio donde tradicionalmente DBO se reduce al mximo y se forman culos de un tama-
se haba trabajado en microbiologa de alimentos. As pues, o adecuado que sedimentan en el decantador secunda-
me propusieron realizar la tesis doctoral sobre actinomice- rio, obtenindose un euente claro que puede ser vertido
tos. Este grupo de microorganismos es muy amplio y diver- sin causar graves problemas medioambientales. Dentro de
so y por lo tanto haba que acotar el grupo microbiano a los microorganismos que intereren en este proceso se
estudiar. Despus de realizar las bsquedas bibliogrcas encuentran los actinomicetos nocardioformes. Este grupo
preliminares y a propuesta del que sera mi director de te- de microorganismos pertenecen al suborden Corynebacte-
sis, el Dr. Jos Luis Alonso Molina, me sent atrado por un rineae incluido en la clase Actinobacteria y se caracterizan
tema que no haba sido estudiado en Espaa. Se trataba de por tener cidos miclicos en su supercie celular, lo que
1<5 estudiar un grupo de actinomicetos que intereren en el les conere alta hidrofobicidad. Esta hidrofobicidad unida
 proceso de depuracin de aguas residuales. El proceso de al hecho de que muchas especies forman lamentos rami-

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cados es la principal causa de la produccin de espumas servacin de que muchos composts tienen la capacidad de
biolgicas en depuradoras que intereren en el proceso de inhibir ciertas enfermedades en plantas causadas por hon-
depuracin. Tradicionalmente la formacin deestas espu- gos topatgenos. Nuestro grupo ha aislado e identicado,
mas biolgicas se ha asociado a la presencia de laespecie a partir de diferentes tipos de compost, actinomicetos con
Gordonia amarae. El resultado de la tesis mostr que ade- capacidad inhibitoria frente hongos topatgenos. Esto de-
ms de G.amarae existen otras muchas especies de nocar- muestra que la capacidad inhibitoria del compost descrita
dioformes implicados en la formacin de espumas biolgi- en diversas referencias se debe a los actinomicetos presen-
cas. Por lo tanto la produccin de espumas biolgicas se tes en l y que intervienen en la fase nal de maduracin
debe a una asociacin compleja de diferentes microorga- del proceso de compostaje. Por lo tanto, cabe la posibilidad
nismos pertenecientes al suborden Corynebacterineae, algo de utilizar estas cepas de actinomicetos como inculo en
importante a tener en cuenta por el operador de planta que el proceso de compostaje, conriendo al producto nal la
hasta ahora consideraba la produccin de espumas vincu- capacidad de inhibir agentes topatgenos.
lada casi exclusivamente a la presencia de G. amarae como Actualmente la actividad de nuestro grupo consiste en
nica productora de espumas. buscar aplicaciones biotecnolgicas prcticas a los acti-
Como extensin a los estudios de biodiversidad de no- nomicetos aislados de diferentes muestras ambientales.
cardioformes en depuradoras, recientemente Albert Soler Entre las aplicaciones estudiadas estn las actividades an-
Hernndez defendi su tesis doctoral en la que se aislaron tibiticas frente a patgenos emergentes, hongos topa-
e identicaron ms de 150 actinomicetos de diversas esta- tgenos, actividades enzimticas diversas, degradacin de
ciones depuradoras. Todos estos actinomicetos se identi- compuestos derivados del petrleo, herbicidas, etc. Todos
caron mediante taxonoma polifsica. Resulta sorprenden- los actinomicetos con actividades interesantes se identi-
te el resultado de esta tesis por la enorme diversidad de can mediante el anlisis de las secuencias del gen 16S
especies encontradas, si lo comparamos con estudios simi- rDNA y por taxonoma polifsica.
lares en plantas europeas. Se han encontrado especies de
nocardioformes que nunca haban sido aisladas en estacio- PUBLICACIONES RECIENTES
nes depuradoras, patgenos oportunistas como Gordonia
bronchialis, G. sputi, Tsukamurella pulmonis, Dietzia maris Alonso JL, Cuesta G, Ramrez GW. (2009) Manual de Tcnicas Avanza-
y Williamsia maris y un buen nmero de micobacterias am- das para la Identicacin y Control de Bacterias Filamentosas. Ed.
bientales. Adems, y segn los criterios que denen la es- Epsar-Generalitat Valenciana. D.L: 1157-2009. ISBN: 978-84-482-
pecie en procariotas, nos hemos encontrado con una serie 5161-1.
de posibles especies nuevas que generarn publicaciones Baeza A, Alonso JL, Berncer I, Morenilla JJ, Cuesta G. (2011) Estu-
en un futuro. dio de morfotipos de Nostocoida limicola mediante tcnica FISH aso-
Uno de los aspectos prcticos que realiza nuestro gru- ciados a problemas de espumas por Microthrix en EDAR. TECNOLOGA
po es el estudio de actinomicetos con capacidad de bio- DEL AGUA. ISSN: 0211-8173. Dep. Legal: B. 4156-84.
degradacin de compuestos txicos. De hecho, muchos Castillo MA, Felis N, Aragn P, Cuesta G, Sabater C. (2006) Biodegra-
de los actinomicetos aislados de depuradoras industriales dation of the herbicide diuron by Streptomycetes isolated from soil.
tienen la capacidad de degradar derivados aromticos del International Biodegradation and Bioremediation. 58: 196-202.
petrleo como el fenol y el naftaleno. Esta capacidad se Cuesta G, Garca de la Fuente R, Abad M, Forns F. (2012) Isolation

54,96
ha estudiado mediante cultivo en placa utilizando medios and identication of actinomycetes from a compost-amended soil
de cultivo donde la nica fuente de carbono disponible es with potential as biocontrol agents. Journal of Environmental Man-
el fenol y el naftaleno. Adems, para estudiar el potencial agement. 95: S280-S284.
catablico de estas cepas degradadoras hemos detectado Cuesta G, Soler A, Alonso JL, Morenilla JJ, Bernacer I. (2011) Diver-
por PCR el gen que codica para la catecol 1,2-dioxigenasa sity of foaming producing nocardioform actinomycetes from waste-
(CatA) que es la enzima que cataliza el primer paso en la water treatment plants in Spain. Microorganisms in Industry and
biodegradacin de compuestos aromticos. Tenemos pues Envoronment. Ed. World Scientic Publishing Co. ISBN: 978-981-
45
unos buenos candidatos microbianos para realizar estudios 4322-10-2
de biorremediacin en ambientes contaminados por deri- Cuesta G, Morales L, Garca de la Fuente R, Botella S, Forns F, Abad
vados del petrleo, tanto acuticos como terrestres. M. (2009) Identication of actinomycetes with antifungal activity
:,4'-696

Sin dejar de estudiar la biodiversidad de actinomicetos isolated from soil amended with compost. Current Research Topics in
en depuradoras, hemos ampliado el estudio a otros grupos Applied Microbiology and Microbial Biotechnology. Ed. World Scien-
de actinomicetos y a otras fuentes de aislamiento. Una de tic Publishing Co. ISBN: 978-981-283-754-7. Pag.: 55-58
las lneas de trabajo actuales es la bsqueda de actinomice- Soler A, Alonso JL, Cuesta G. (2009) Diversidad de actinomicetos no-
tos aislados de diferentes tipos de compost y vermicompost cardioformes productores de espumas biolgicas aislados de plantas
con capacidad de inhibir el crecimiento de hongos topat- depuradoras de aguas residuales de la Comunidad Valenciana. TEC-
genos. La utilidad prctica de estos estudios viene de la ob- NOLOGA DEL AGUA. ISSN: 0211-8173. Dep. Legal: B. 4156-84

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Biotecnologa Microbiana para


la Industria Agroalimentaria

Coordinadores: Pilar Calo Mata y Jorge Barros Velzquez. Facultad de Veterinaria, Universidad
de Santiago de Compostela, C/Carballo Calero s/n, Campus Universitario Norte, 27002 Lugo.

Miembros del Grupo de Investigacin. Delante


(izqda. a dcha.): Mohamed El Sayed, Leonardo
Acua, Pilar Calo-Mata, Conchi Fernndez, Karola
Bhme, Sonia Caamao, Santiago Aubourg y
Minia Sanxus; detrs (izqda. a dcha.): Marcos
Quintela, Jorge Barros, Jos M. Gallardo, Benito
Caas e Ignacio Ortea.

Nuestro grupo comenz su andadura hace aproxima- Estas lneas de investigacin han requerido la con-
damente 10 aos. Desde entonces hemos desarrollado feccin de una amplia coleccin de microorganismos de
lneas de investigacin orientadas a la caracterizacin inters en la industria alimentaria, las cuales han sido
de microorganismos de inters para la industria alimen- caracterizadas a nivel genmico y protemico. En el m-
taria y, por otra parte, al desarrollo de tcnicas mole- bito de la protemica, hemos tenido la oportunidad de
culares de trazabilidad de ingredientes en alimentos. colaborar desde el principio de nuestra existencia como
En el mbito microbiolgico hemos abordado la carac- grupo, con los equipos dirigidos por el Prof. Jos M. Ga-
terizacin de microorganismos de inters en procesos llardo en el IIM-CSIC y por el Prof. Benito Caas en la
54,96

fermentativos y de bioconservacin, as como el estudio UCM. En el mbito de la tecnologa de microarrays basa-


de aquellas especies microbianas ms problemticas por dos en la deteccin de la reaccin de ligacin, venimos
su carcter patgeno o alterante de alimentos frescos e colaborando desde hace varios aos con el grupo dirigi-
industrializados. do por la Dra. Bianca Castiglioni en el IBBA-CNR (Miln,
Dentro de este gran mbito que representa la aplica- Italia) y con el Dr Stefano Morandi del grupo dirigido
cin de herramientas biotecnolgicas a la industria ali- actualmente por la Dra Milena Brasca en el ISPA-CNR (Mi-
46 mentaria, en los ltimos aos hemos desarrollado espec- ln, Italia). Ms recientemente, y gracias a la participa-
camente los siguientes proyectos: cin en un proyecto INNPACTO, tenemos la oportunidad
de aplicar dicha tecnologa a problemticas especcas
Desarrollo de microarrays basados en la deteccin de de la industria lctea. Dicho proyecto es posible gracias
:,4'-696

la reaccin de la ligasa para la deteccin y cuanti- a la participacin de cinco socios industriales de Madrid,
cacin directa en alimentos de microorganismos de Pas Vasco y Galicia.
inters industrial. Asimismo, la presente investigacin ha permitido la
Denicin de biomarcadores proteicos para la iden- creacin de una base de datos de acceso libre, Spectra-
ticacin directa de microorganismos y otros ingre- bank (www.spectrabank.org o www. spectrabank.eu), que
dientes de inters en la industria alimentaria, utili- permite acceder a los perles MALDI-TOF de las principales
zando tcnicas de espectrometra de masas MALDI- especies microbianas de inters alimentario, a sus listas
TOF y fragmentacin peptdica. de masas, etc. Dicha base de datos ha sido realizada en co-
Identicacin de SNPs de inters para la identi- laboracin con la USC y el Centro de Supercomputacin de
1<5 cacin precisa de especies logenticamente muy Galicia, gracias a sendos proyectos nanciados por el MEC
 prximas y de relevancia alimentaria. y la Xunta de Galicia y representa actualmente la WEB de

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acceso libre ms completa a nivel internacional en el m- el equipo dirigido por el Prof. Santiago Aubourg en el IIM-
bito de la identicacin microbiana mediante MALDI-TOF. CSIC as como con diversas empresas del sector marino,
Esta lnea de investigacin, coordinada en la USC por Pilar para el desarrollo de lminas biodegradables que incluyan
Calo-Mata y Jorge Barros Velzquez, cuenta con la participa- bioconservantes naturales. Dichas lminas, en contacto
cin de los doctorandos Karola Bhme, Inmaculada Fernndez con alimentos frescos, inhiben el crecimiento microbia-
No, Marcos Quintela Baluja, Sonia Caamao Antelo y Moham- no de las principales especies patgenas y alterantes en
med Elsayed, as como con los alumnos de postgrado Isabel alimentos, tanto Gram(+) como Gram(-), permitiendo una
Fernndez, Beatriz Toimil y David Prez. Asimismo colabora extensin de la vida comercial de dichos alimentos. Asi-
con nosotros el investigador post-doctoral Ignacio Ortea. mismo, esta lnea se complementa con la investigacin de
Caracterizacin de bacterias cido lcticas probiticas y nuevos mtodos de refrigeracin basados en hielo lquido y
productoras de bacteriocinas, aisladas de nuevas fuentes, ta- en escamas que incluyen bioconservantes y que han permi-
les como esponjas marinas, leche de camella, etc. tido extender la vida til de especies marinas refrigeradas.
Esta lnea de investigacin, si bien se haba iniciado en Esta lnea de investigacin cuenta con la participacin
nuestro grupo con el aislamiento a partir de especies acu- de las doctorandas Minia Sanxus y Bibiana Garca, as
cuolas de cepas de Enterococcus faecium productoras de en- como con el alumno de postgrado Alberto Fernndez.
terocina P y con actividad probitica, se ha visto enriquecida
en los ltimos aos con la colaboracin con diversos grupos
de investigacin. De entre ellos, destacar el del Dr. Stefano DIEZ PUBLICACIONES
Morandi en el ISPA-CNR de Miln (Italia), grupo con el que se DE LOS LTIMOS TRES AOS
ha colaborado en el aislamiento de microbiota cido lctica de
Bhme K, Fernndez-No I, Barros-Velzquez J, Gallardo JM, Caas B,
inters para la industria lctea a partir de leche y productos
Calo-Mata P (2010) Species differentiation of food spoilage and
lcteos de diversas regiones de Italia. Ms recientemente, y pathogenic Gram-negative bacteria present in seafood by MALDI TOF
gracias a diversos proyectos de la AECID, hemos venido co- mass ngerprinting. J Proteome Res 9: 3169-3183.
laborando con el INSTM de Tnez y la Universidad de Orn Bhme K, Fernndez-No I, Barros-Velzquez J, Gallardo JM, Caas B, Ca-
(Argelia). Estas colaboraciones nos han permitido acceder a lo-Mata P (2010) Comparative analysis of protein extraction methods
organismos de la costa mediterrnea norteafricana escasa- for the identication of seafood-borne pathogenic and spoilage bacteria
mente estudiados, tales como esponjas marinas, donde nues- by MALDI-TOF mass spectrometry. Anal Meth 2: 1941-1947.
tro equipo, en colaboracin con el grupo de la Prof. Monia Bhme K, Fernndez-No I, Gallardo JM, Caas B, Barros-Velzquez J
Elbour (Tnez) ha logrado el aislamiento de cepas de entero- Calo-Mata P (2011) Rapid species identication of seafood spoila-
cocos multiproductoras de diversas enterocinas con actividad ge and pathogenic Gram-positive bacteria by MALDI-TOF mass nger-
frente a patgenos humanos y de peces y que actualmente se printing. Electrophoresis, 32: 2951-2965.
estn evaluando como ingredientes de piensos en la industria Chahad OB, El Bour M, Calo-Mata P, Boudabous A, Barros-Velazquez
acuicola. En esta lnea vienen trabajando las doctorandas tu- J (2012) Discovery of novel preservation agents with inhibitory ef-
necinas Ouissal Chahad y Rym El Jeni. fects on growth of food-borne pathogens and their applications in
Por otra parte, esta lnea se complementa con el aisla- seafood products. Res Microbiol 163: 44-54.
miento de nuevas cepas bacteriocinognicas de Leuconos- Fernandez-No I, Bhme K, Calo P, Barros-Velzquez J (2011) Char-
toc mesenteroides a partir de alimentos escasamente cono- acterization of histamine-producing bacteria from farmed blackspot

54,96
cidos en Occidente, tal es el caso de la leche de camella, seabream (Pagellus bogaraveo) and turbot (Psetta maxima). Int J
alimento que exhibe interesantes propiedades probiticas Food Microbiol 151: 182-189.
gracias a la presencia de ciertas especies de BAL escasa- Fernndez-No I, Bhme K, Calo-Mata P, Caas B, Gallardo JM, Barros-
mente estudiadas hasta ahora. Actualmente nos encon- Velzquez J (2012) Isolation and characterization of Streptococ-
tramos caracterizando, en colaboracin con el grupo de cus parauberis from vacuum-packaged refrigerated seafood products.
Food Microbiol. 30: 91-97.
la Prof. Zineb Benmechermene (Orn, Argelia), un nuevo
Fernndez-No I, Bhme K, Gallardo JM, Barros-Velzquez J, Caas
tipo de mesenterocina con potencial aplicacin industrial. 47
B, Calo-Mata P (2010) Differential characterization of biogenic
Asimismo, y gracias a un programa de cooperacin inter-
amine-producing bacteria involved in food poisoning by MALDI TOF
nacional auspiciado por el Banco Santander, venimos desarro- peptide mass ngerprinting. Electrophoresis 31: 1116-1127.
llando una colaboracin con el grupo de investigacin dirigido
:,4'-696

Fernndez-No I, Guarddon M, Boehme K, Cepeda A, Calo-Mata P, Bar-


por el Prof. Augusto Bellomio del CONYCET (Tucumn, Argen- ros-Velzquez J (2011) Detection and quantication of spoilage
tina), para la aplicacin de bacteriocinas hbridas, creadas por and pathogenic Bacillus cereus, Bacillus subtilis and Bacillus licheni-
fusin de los genes codicantes para mundticina y colicina, formis by real-time PCR. Food Microbiol 28: 605-610.
en la bioconservacin de productos alimentarios, tema de in- Hosseini SV, Arlindo S, Bhme K, Fernndez-No I, Calo-Mata P, Barros-
vestigacin del doctorando argentino Leonardo Acua. Desa- Velzquez J (2009) Genetic and probiotic proling of bacteriocin-
rrollo de nuevos envases laminados incluyendo extractos producing Enterococcus faecium strains isolated from non-fermented
de algas y nuevos mtodos de refrigeracin basados en animal foods. J Appl Microbiol 107: 1392-1403.
aceites esenciales y otros agentes antimicrobianos con ac- Sanjus Rey M, Garca-Soto B, Fuertes-Gamundi JR, Aubourg S, Bar-
tividad bioconservante y su aplicacin en alimentos. ros-Velzquez J. (2012) Effect of a natural organic acid-icing sys-
En el campo de la inhibicin de la microbiota patgena tem on the microbiological quality of commercially relevant chilled 1<5
y alterante en alimentos frescos, venimos colaborando con sh species. LWT-Food Science and Technology 46, 217-223. 

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Grupo de Microbiologia Industrial


y Biotecnologia Microbiana
en Santiago
reas de Inters: El grupo de investigacin posee amplia experiencia en clonacin y explotacin
de genes con potencial industrial en los mbitos farmacutico, ingeniera de procesos y
tecnologade alimentos. En sus investigaciones destacan los trabajos en gentica de levaduras
y hongos filamentosos mediante estrategias alternativas a la ingeniera gentica, basndose en
conocimientos de gentica clsica de microorganismos eucariotas.

Tomas Gonzlez Villa.

Componentes del Grupo (de izquierda a


derecha): Koke Araya-Garay, Luca Feijoo
Siota, Jos Manuel Ageitos Martnez, Trinidad
de Miguel Bouzas, Tomas Gonzlez Villa,
Margarita Poza Domnguez, Patricia Veiga
Crespo, Juan Vallejo Vidal y Luca Blasco.
54,96

LNEAS DE INVESTIGACIN provoca prdida cromosmica. Adems se ha conseguido


de esta forma, aumentar el nmero de ascas con cuatro
esporas producidas tras varias meiosis en comparacin con
Anlisis y mejora del vino las obtenidas a partir de cepas en las que no se ha emplea-
do ningn tipo de tratamiento.
48 La industria vnica trata de mejorar el cultivo y la ca- Tambin se llev a cabo la identicacin y caracteriza-
lidad de las distintas variedades de uva y, tambin, me- cin de genes de S. cerevisiae implicados en la formacin de
jorar determinados caracteres de las cepas de levadura espuma en el vino con la nalidad de clonarlos en levaduras
Saccharomyces cerevisiae, que son empleadas como pie cerveceras, Saccharomyces carlsbergiensis, para aumentar la
:,4'-696

de cuba. Se persigue as obtener un producto de la ca- cantidad y calidad de la espuma obtenida en la cerveza.
lidad y caractersticas que demandan los consumidores.
Por ello, las lneas de investigacin estn centradas en
la mejora de cepas vnicas de S. cerevisiae mediante el Utilizacin de enzibiticos como
empleo de ingeniera gentica y en el anlisis bioqumico herramientas teraputicas contra
del vino para establecer la edad del mismo. Por una parte cepas multirresistentes
se trata de facilitar el trabajo con cepas vnicas en el la-
boratorio reduciendo su nivel de ploida, incrementando su El uso abusivo de antibiticos convencionales ha pro-
capacidad de esporulacin y hacindolas heterotlicas me- vocado la aparicin de microorganismos resistentes a un
1<5 diante la interrupcin del gen HO. El nivel de ploida se ha amplio espectro de estos frmacos, por lo que la efecti-
 reducido empleando el agente antifngico benomilo, que vidad de terapias antibacterianas se ha visto mermada.

40*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(
Por esta razn se hace necesaria la bsqueda de nuevos por estratigrafa. Es posible obtener muestras de mbar
agentes teraputicos para el tratamiento de enfermeda- formadas durante el Mioceno, el Oligoceno o, incluso, el
des infecciosas causadas por microorganismos multirre- Cretcico.
sistentes. El gran desarrollo de tcnicas como la PCR ha facilitado
Estos posibles agentes teraputicos son los enzibiti- enormemente el estudio de DNA fsil. La gran dicultad
cos. Los enzibiticos son enzimas lticos que emplean los de estos trabajos radica en la contaminacin con muestras
virus bacterifagos en algn momento durante su ciclo recientes y la degradacin del DNA ancestral. Para evitar
ltico. Con estos enzimas, matan y lisan las bacterias que ambos problemas es necesario el desarrollo de controles
infectan. Hay dos tipos: lisozimas y holinas. Las lisozimas estrictos durante todo el proceso de manipulacin de las
son -1,4-acetilmuramidasas que actan rompiendo enla- muestras, un mtodo estricto de esterilizacin y un es-
ces entre el cido N-acetilmurmico y la N-acetilglucosa- tricto y critico anlisis de todos los resultados obtenidos.
mina del peptidoglucano que forma la pared bacteriana. Este grupo de investigacin ha desarrollado un mtodo
Las holinas forman poros en la membrana para que las de esterilizacin de la supercie de las piedras de mbar
lisozimas puedan acceder a la pared bacteriana. que le ha permitido, tras estrictos anlisis para evitar la
Aunque se conocen desde principios del siglo XX, los contaminacin con DNA actual, el aislamiento de distin-
enzibiticos quedaron olvidados cuando se descubrieron tos fragmentos de genes ancestrales valindose de herra-
los antibiticos convencionales, pero ahora resurgen debi- mientas tan potentes como la pirosecuenciacin, que ha
do a las amplias posibilidades que nos presenta la Biotec- permitido hasta la fecha, la obtencin de ms de 100.000
nologa en la manipulacin de microorganismos. amplicones, de los que ya se han identicado ms de 500
Si el concepto de enzibitico se extiende a aquellas secuencias pertenecientes a distintos organismos tanto
enzimas capaces de actuar sobre las paredes fngicas, procariotas como eucariotas.
como las actividades glucansicas y las quitinasas produci-
das por hongos como Trichoderma harzianum o la bacteria
Bacillus circulans, la batera teraputica se ampla enorme-
POLIGALACTURONASAS
mente. Este grupo de investigacin, ha estado trabajando Las pectinas o sustancias pcticas son polisacridos
en la aplicacin de las enzimas endoglucanasa para el tra- que se componen principalmente de cidos poligalactu-
tamiento de enfermedades fngicas. rnicos coloides. Se hallan en los tejidos de las plantas.
Las grandes ventajas que presenta la terapia con enzi- Las pectinas son tiles por su capacidad para formar geles
biticos son su gran especicidad hacia la especie bacte- o jaleas con compuestos polihidroxilados, como los az-
riana que causa la infeccin, no producen efectos secun- cares o con cantidades diminutas de iones polivalentes.
darios, no presentan resistencias, los costes de produccin Sin embargo la capacidad de formar geles produce que las
son bajos y no atacan a la microora normal debido a su pulpas obtenidas de los vegetales sean muy densas, lo que
gran especicidad. diculta su procesado.
Las poligalacturonasas rompen estas cadenas pcticas,
PALEOMICROBIOLOGA: produciendo la licuacin del zumo. Las poligalacturonasas
BSQUEDA se pueden clasicar por su modo de actuacin, as se ha-
bla de exopoligalacturonasas cuando la accin del enzima

54,96
DE MICROORGANISMOS FSILES se realiza por los extremos de las cadenas, o endopoli-
Y GENES ANCESTRALES galacturonasas que cortan en cualquier punto interno de
EN PIEDRAS DE MBAR las cadenas. Este ltimo tipo tiene una actividad mucho
mayor que el anterior, dado que tiene muchos ms lugares
El estudio de la evolucin y de los orgenes de las espe- donde actuar.
cies ha sido y ser uno de los grandes retos de la Ciencia. En el grupo de investigacin se ha trabajado con las
La gran dicultad a la hora de abordar el estudio de la poligalacturonasas de Saccharomyces cerevisiae, Kluyve- 49
evolucin de los microorganismos fue localizar muestras romyces marxianus y Medicago sativa. Se han caracteri-
de microorganismos fsiles no contaminadas y aisladas de zado, clonado y expresado en diferentes organismos tales
las especies actuales. como Escherichia coli, Schizosaccharomyces pombe, Pichia
:,4'-696

El mbar es una resina de origen vegetal, secretada pastoris y Arabidopsis thaliana. Como resultado de esta ex-
principalmente por conferas y leguminosas, como meca- periencia se han aislado y conseguido cepas superproduc-
nismo de defensa. Durante su proceso de fosilizacin, esta toras de poligalacturonasa, tanto de modo natural como
resina forma una matriz en la que quedan embebidos los recombinante, susceptibles de aplicacin industrial con
organismos presentes en la supercie del rbol durante su excelentes resultados. Fruto de estas investigaciones, se
secrecin. Este hecho convierte al mbar en el material han conseguido numerosas publicaciones y patentes, tan-
ideal para la bsqueda de microorganismos ancestrales. to espaolas como internacionales. Con el n de mejorar
Adems, el mbar va a formar una barrera de proteccin la actividad de la cepa productora Kluyveromyces mar-
del DNA ancestral frente a agentes como las radiaciones xianus CCEBI 2011 se ha conseguido un fenotipo oculan-
ultravioletas y el agua. Adems, el mbar facilita el proce- te inducible por anaerobiosis para conseguir la produccin 1<5
so de datacin de las muestras ya que es posible datarlo continua de pectinasa y etanol. 

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,:7,*0(340*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(

PROTEASAS microbianas de carotenoides as como la optimizacin de la


produccin de carotenos de las fuentes actuales.
Las proteasas son enzimas que degradan los enlaces Las lneas de investigacin abordadas en nuestro grupo
peptdicos de las protenas. Intervienen en gran variedad de investigacin han sido: La bioproduccin de carote-
de funciones biolgicas esenciales para la vida en todos noides de origen natural mediante la construccin y uti-
los organismos. Las proteasas representan uno de los tres lizacin de cepas superproductoras de la levadura Phafa
grandes grupos de enzimas utilizados a nivel industrial. rhodozyma como factoras celulares comercialmente com-
Los microorganismos representan dos tercios de la pro- petitivas en el campo de la produccin de antioxidantes,
duccin comercial mundial de proteasas. Estos pueden principalmente astaxantina.
ser cultivados en grandes cantidades en poco tiempo Transformacin de bacterias y levaduras de inters biotec-
estableciendo procesos de fermentacin. Con estos pro- nolgico para produccin de molculas antioxidantes median-
cesos de fermentacin se pueden obtener las cantidades te el control de los genes y las rutas de biosntesis de caro-
deseadas de producto. Los microorganismos recombinan- tenoides, como es el caso de Gordonia jacobea que es capaz
tes representan una excelente fuente de produccin de de sintetizar y acumular grandes cantidades de cantaxantina.
proteasas heterlogas debido a su rpido y econmico En otra de las lineas de actuacin se realiz la bs-
crecimiento. queda, clonacin y expresin de los genes -caroteno de-
En nuestro grupo de investigacin se ha caracterizado saturasa (zds-Fc) y licopeno -ciclasa (-lyc-Fc) de Ficus
y producido una proteasa procedente de Candida casei- carica. Finalmente, se logr por primera vez en la levadu-
nolytica. Esta proteasa alcalina con amplio rango de pH ra P. pastoris la produccin de -caroteno y astaxantina,
podra tener inters en la industria de los detergentes o aportando una fuente microbiolgica alternativa para la
en la del cuero. Se ha trabajado con una proteasa de tipo biosntesis de carotenoides.
asprtico producida por Myxococcus xanthus. Esta proteasa
ha sido caracterizada, clonada y expresada en E. coli y le-
vaduras. Este enzima tiene la capacidad de coagular leche LAS 10 PUBLICACIONES MS
por lo que podra tener inters en la industria lctea. REPRESENTATIVAS
Se ha clonado y expresado la proteasa codicada por el
gen XPR2 procedente de Yarrowia lipolytica en Pichia pas-
DE LOS LTIMOS 10 AOS
toris. La proteasa codicada por este gen es una proteasa Ageitos JM, Vallejo JA, Veiga-Crespo P, Villa TG (2011) Oily yeasts as
alcalina que podra ser til en la industria de los detergen- oleaginous cell factories. Appl Microbiol Biot 90: 1219-1227.
tes y en la del cuero. Araya-Garay JM, Feijoo-Siota L, Veiga-Crespo P, Villa TG (2011) cDNA
Se ha clonado y expresado con xito la quimosina de cloning of a novel gene codifying for the enzyme lycopene -cyclase
Bubalus arnee bubalis y Capra hircus. Estas dos quimosinas from Ficus carica and its expression in Escherichia coli. Appl Microbiol
se han comparado con las existentes en el mercado y se Biotech 92: 769-777.
ha realizado un estudio bioqumico. La quimosina es una Feijoo-Siota L, Villa TG (2011) Native and biotechnologically engi-
proteasa asprtica utilizada en la elaboracin de quesos neered plant proteases with industrial applications. Food Bioprocess
para coagular la leche. Tech, 4: 1066-1088.
En esta lnea de proteasas, tambin se ha puricado y Poza M, Prieto-Alcedo M, Sieiro C, Villa TG (2004) Cloning and expres-
54,96

caracterizado una sern proteasa de Bacillus licheniformis sion of clt genes encoding milk-clotting proteases from Myxococcus
con capacidad coagulante y esta sern proteasa se ha ex- xanthus 422. Appl Environ Microbiol 70: 6337-6341.
presado con xito en E. coli. Poza M, Sestelo ABF, Ageitos JM, Vallejo JA, Veiga-Crespo P, Villa
TG (2007) Cloning and expression of the XPR2 gene from Yarrowia
CAROTENOIDES lipolytica in Pichia pastoris. J Agr Food Chem 55:, 3944-3948.
Sieiro C, Poza M, Vilanova M, Villa TG (2003) Heterologous expression
50 Los carotenoides son pigmentos naturales ampliamente of the Saccharomyces cerevisiae PGU1 gene in Schizosaccharomyces
distribuidos en la naturaleza, responsables del color amarillo, pombe yields an enzyme with more desirable properties for the food
naranja y rojo de plantas y animales, en el mundo microbiano industry. Appl Environ Microb 69: 1861-1865.
se encuentran en las algas, bacterias, hongos y levaduras. Se Sieiro C, Sestelo ABF, Villa TG (2009) Cloning, Characterization, and
:,4'-696

estima que la naturaleza produce aproximadamente 100 millo- Functional Analysis of the EPG1-2 Gene: A New Allele Coding for
nes de toneladas de carotenoides al ao. an Endopolygalacturonase in Kluyveromyces marxianus. J Agr Food
Los carotenoides son utilizados tanto en la industria ali- Chem, 57: 8921-8926.
mentaria, como colorantes, como en la industria cosmtica. Vallejo JA, Ageitos JM, Poza M, Villa TG (2008) Cloning and Expression
Se les han atribuido funciones y acciones biolgicas, como la of Buffalo Active Chymosin in Pichia pastoris. J Agr Food Chem 56:
actividad de pro-vitamina A, aumento del sistema inmune y 10606-10610.
una disminucin del riesgo de enfermedades degenerativas. Veiga-Crespo P, Ageitos JM, Poza M, Villa TG (2007) Enzybiotics: a
Los pigmentos naturales actuales no son capaces de satisfacer look to the future, recalling the past. J Pharm Sci-US 96: 1917-1924.
las demandas actuales de la industria y el uso de pigmentos Veiga-Crespo P, Fuste E, Vinuesa T, Vinas M, Villa TG (2011) Synergism
1<5 sintticos cuenta cada vez con un mayor rechazo social. Se between outer membrane proteins and antimicrobials. Antimicrob Agents
 hace, pues, necesaria la bsqueda de nuevas fuentes naturales Chemother 55: 2206-2211.

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Microbiologa Molecular
y Biotecnologa de Hongos

Jess Manuel Cantoral, Mara Carb, Mara Esther Rodrguez, Francisco Javier
Fernndez-Acero, Carlos Garrido, Eugenia Muoz-Bernal, Victoria Eugenia Gonzlez-
Rodrguez, Eva Lieiro. Dpto. Biomedicina, Biotecnologa y Salud Pblica. Lab. Microbiologa.
Facultad Ciencias del Mar y Ambientales. Centro Andaluz de Investigaciones Vitivincolas.
Universidad de Cdiz. Pol. Ro San Pedro, 11510. jesusmanuel.cantoral@uca.es

Nuestro grupo de investigacin desarrolla su labor do-


cente e investigadora en la Universidad de Cdiz desde
hace 20 aos, siendo reconocido como Grupo de Investi-
gacin de Excelencia por la Junta de Andaluca. La labor
investigadora se centra fundamentalmente en el estudio
de los hongos, tanto lamentosos como levaduriformes,
siempre con un claro enfoque de investigacin aplicada
al mundo agroalimentario. En el grupo se diferencian dos
reas de investigacin: la del estudio de los hongos topa-
tgenos y la de microbiologa enolgica. En ambos casos,
el objetivo principal es suministrar nuevos conocimientos
que permitan desarrollar nuevas estrategias de control mi-
crobiolgico y mejora en los procesos industriales.

MICROBIOLOGA DE HONGOS
FITOPATGENOS
Caracterizacin, Diagnstico El grupo de Microbiologa Molecular y Biotecnologa
y Estudios Protemicos de Hongos de la Universidad de Cadiz.

54,96
La agricultura es histricamente una de las principa-
les actividades del hombre. Andaluca es la primera regin
agrcola espaola gracias a su clima, a la fertilidad de sus Durante estos aos hemos realizado un profundo estu-
tierras, y al continuo esfuerzo de mejora llevado a cabo dio de microbiologa clsica con ambos hongos. Se aisla-
por todo el sector, incluyendo sobre todo a los empresa- ron numerosas cepas a partir de cultivos de tomate, vid y
rios agrcolas, cada vez ms orientados a la innovacin. fresa, y se realiz una caracterizacin morfolgica, permi-
Sin embargo, este avance corre peligro por la aparicin tiendo obtener en el laboratorio cada una de las fases del 51
de nuevas enfermedades vegetales, destacando aquellas ciclo de vida de B. cinerea, as como un completo estudio
causadas por hongos lamentosos topatgenos. morfolgico del hongo Colletotrichum (Garrido, 2008). To-
Nuestro grupo comenz su actividad investigadora con dos estos trabajos han permitido disponer de una amplia
:,4'-696

el estudio del hongo Botrytis cinerea, y posteriormente con Coleccin Micolgica en la Universidad de Cdiz. Tambin
Colletotrichum acutatum y C. gloeosporioides. Ambos gne- se han aislado y caracterizado compuestos procedentes de
ros han sido catalogados segn la revista Molecular Plant caldos de cultivo, algunos de los cuales han resultado ser
Pathology, entre los 10 hongos ms peligrosos por las txinas claves en el ciclo de infeccin de estos hongos.
prdidas que ocasionan en agricultura. Nuestros estudios La caracterizacin se complet con la utilizacin de
se han centrado principalmente en los cultivos de fresa, tcnicas moleculares. Para ambos hongos se ha descrito el
tomate y vid, dada la importancia econmica de estos cul- cariotipo electrofortico mediante electroforesis en cam-
tivos en nuestra regin. La investigacin desarrollada ha po pulsante. En B. cinerea se demostr el alto grado de
sido nanciada por proyectos de investigacin europeos, polimorsmo que presentan las cepas estudiadas; y con
nacionales y autonmicos, y por la colaboracin con em- C.acutatum, se realiz la primera descripcin del cariotipo 1<5
presas del sector agroalimentario. hasta la fecha, determinando tamao y nmero de cromo- 

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somas en esta especie (Garrido, 2009a). Aprovechando las vaduras que participan durante el proceso de fermentacin es
ventajas de nuevas tcnicas moleculares, se desarrollaron muy importante para establecer las ms representativas,estu-
protocolos para la deteccin e identicacin de Colletotri- diar propiedades de inters enolgico y poder seleccionarlas
chum spp., C. acutatum y C. gloeoesporiodes en plantas de para su utilizacin en bodega como cultivos iniciadores.
fresa mediante Real-Time PCR. Hasta la fecha, el diagns- Nuestro grupo ha centrado sus estudios en levaduras eno-
tico de estos hongos se realizaba mediante aislamiento, lgicas que participan en distintos procesos de elaboracin de
cultivo y por PCR convencional. Los protocolos desarro- vinos, tanto jvenes como de crianza biolgica (nos y man-
llados para Real-Time PCR, mejoraron los existentes del zanillas) colaborando con diversas Bodegas, tanto del Marco
orden de 100 veces en sensibilidad de deteccin a partir vitivincola de Jerez, como en el marco de la D. O. Ribera del
de materialvegetal asintomtico (Garrido, 2009b). Actual- Duero. Mediante la utilizando de distintas tcnicas molecula-
mente, se estn desarrollando estudios de biotecnologa res hemos llevado a cabo la caracterizacin y seleccin de un
de hongos mediante la obtencin de mutantes knock-out amplio nmero de levaduras, lo que nos ha permitido describir
en bsqueda de nuevos factores de patogenicidad. un original modelo de adaptacin al ambiente de las levaduras
Nuestro grupo ha sido pionero en la aplicacin de la pro- de velo de or, as como la seleccin de las levaduras enol-
temica al mbito agroalimentario. Esta tcnica se ha reve- gicas ms adecuadas, permitiendo mejorar, tanto la eciencia
lado como una tecnologa emergente, capaz de aportar una del proceso de fermentacin, como la calidad de los vinos
gran informacin biolgica relevante. Nuestro grupo desarro- obtenidos (Cantoral, 2010; Rodrguez, 2010).
ll el primer mapa proteico de Botrytis cinerea. La natura- Recientemente hemos comenzado a desarrollar aproxi-
leza indita de este trabajo hizo necesaria la optimizacin maciones protemicas al estudio de levaduras enolgicas.
de todo el proceso, desde la extraccin de protenas hasta Se ha estudiado que existen cambios sustanciales en los
la identicacin de las mismas (Fernndez-Acero, 2006). niveles de protena durante la fermentacin alcohlica,
Desde esa fecha se han identicado ms de 1000 protenas poniendo de maniesto la relevancia que tiene su anli-
de este hongo, desarrollando diferentes aproximaciones que sis para entender las adaptaciones de las levaduras vni-
incluyen: estudios diferenciales con cepas de distinta viru- cas durante el proceso fermentativo. Mediante distintas
lencia (Fernndez-Acero, 2007), estudio de metabolismo con aproximaciones experimentales estamos poniendo de ma-
diferentes fuentes de carbono (Fernndez-Acero, 2009), y niesto el proteoma de S. bayanus var. uvarum, y la posi-
la caracterizacin de subproteomas, como el secretoma o el ble relacin de las protenas identicadas con patrones de
fosfoproteoma (Fernndez-Acero, 2010). Estos estudios han calidad organolptica en los vinos.
aportado pruebas de la validez de la protemica para deter-
minar nuevos factores de patogenicidad. La utilidad de esta
informacin para comprender el mecanismo de infeccin y BIBLIOGRAFA MS RELEVANTE
dilucidar nuevas estrategias de control de estos patgenos ha LTIMOS 5 AOS
sido una de las lneas del grupo desde entonces (Fernndez-
Cantoral JM y Rodrguez ME. (2010). El singular mundo de las levadu-
Acero, 2011), y contina mediante la realizacin de nuevas
ras enolgicas. Actualidad-SEM 49:35-40.
aproximaciones protemicas a la biologa de B. cinerea y Co-
Fernndez-Acero FJ, Jorge I, Calvo E, Vallejo I, Carb M, Camafeita,E,
lletotrichum acutatum.
Lopez JA, Cantoral JM y Jorrin J. (2006). Two-dimensional elec-
54,96

trophoresis protein prole of the phytopathogenic fungus Botrytis


MICROBIOLOGA ENOLGICA cinerea. Proteomics 1 6(1):88-96.
Fernndez-Acero FJ, Jorge I, Calvo E, Vallejo I, Carb M, Camafeita
Seleccin de Levaduras y Mejora LE, Garrido C, Lpez JA, Cantoral JM y Jorrin J. (2007). Proteomic
de Procesos Fermentativos analysis of phytopathogenic fungus Botrytis cinerea as a potential
tool for identifying pathogenicity factors, therapeutic targets and
La levadura Saccharomyces cerevisiae es un hongo unicelu- for basic research. Arch Microbiol 187:207-215.
52 lar que ha acompaado al hombre desde las primeras civiliza- Fernndez-Acero, FJ, Colby, T, Harzen, A, Cantoral, JM y Schmidt, J
ciones. Tradicionalmente, la mayora de estudios moleculares (2009). Proteomic analysis of the phytopathogenic fungus Botrytis
se han realizado en levaduras de laboratorio, utilizadas como cinerea during cellulose degradation. Proteomics 9:2892-2902.
modelo de organismos eucariotas para investigaciones en Fernndez-Acero FJ, Colby T, Harzen A, Carb M, Wieneke U, Cantoral
:,4'-696

ciencia bsica. A diferencia de estas levaduras, la mayora de JM y Schmidt J. (2010). 2-DE proteomic approach to the Botrytis
las levaduras vnicas son diploides, tienen una baja frecuen- cinerea secretome induced with different carbon sources and plant-
cia de esporulacin y un elevado polimorsmo cromosmico, based elicitors. Proteomics 10:2270-2280.
presentando un amplio rango de fenotipos diferentes que pue- Fernndez-Acero, FJ, Carb M, El-Akhal MR, Garrido C, Gonzlez-Ro-
denser aprovechados en enologa. drguez VE y Cantoral JM (2011). Development of Proteomics-Ba-
El desarrollo de tcnicas de biologa molecular ha permi- sed Fungicides: New Strategies for Environmentally Friendly Control
tido identicar y caracterizar cepas de levaduras en muchas of Fungal Plant Diseases. Int J Mol Sci, doi:10.3390.
regiones productoras de vino, mostrando, i) que existe una Garrido C, Carb M, Fernndez-Acero FJ, Budge G, Vallejo I, Colyer A y
amplia variabilidad gentica dentro de una misma especie, y Cantoral JM. (2008). Isolation and pathogenicity of Colletotrichum
1<5 ii) la ecologa y dinmica de poblaciones en las fermentacio- spp. causing anthracnose of strawberry in south west Spain. Eur J
 nes espontneas. El conocimiento de las distintas cepas de le- Plant Pathol 120:409-415.

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Garrido C, Carb M, Fernndez-Acero,FJ, Vallejo I y Cantoral JM. of Colletotrichum acutatum and monitoring of strawberry anthracno-
(2009a). Phylogenetic relationships and genome organization of se using real-time PCR. Plant Pathol 58:43-51.
Colletotrichum acutatum causing anthracnose in strawberry. Eur J Rodrguez ME, Infante JJ, Molina M, Domnguez M, Rebordinos L y
Plant Pathol 125:397-411. Cantoral JM. (2010). Genomic characterization and selection of
Garrido C, Carb M, Fernndez-Acero FJ, Boonham N, Colyer A, Canto- wine yeast to conduct industrial fermentations of a white wine pro-
ral JM y Budge G. (2009b). Development of protocols for detection duced in a SW Spain winery. J Appl Microbiol 108: 1292-1302.

Enzimas Microbianas de Aplicacin


Industrial
Francisco Javier Pastor y Pilar Diaz. Departamento de Microbiologa. Facultad de Biologa.
Universidad de Barcelona. Av. Diagonal 643. 08028 Barcelona. Tel: 934034626; Fax: 934034629.
fpastor@ub.edu; pdiaz@ub.edu

54,96

53
Grupo de Enzimas Microbianas de Aplicacin Industrial. De izquierda a derecha: Fikret Uyar, Beln Infanzn, Mai
Nielsen, ngels Mateu, Mnica Estupin, Liliana Cerda, Francisco Javier Pastor, Pilar Diaz, Josena Martnez,
:,4'-696

Susana Valenzuela, Silvia Cesarini y Amanda Fillat.

La aplicacin de enzimas en la fabricacin de productos nuevas. El grupo de enzimas microbianas para aplicaciones
de consumo es una prctica de creciente implementacin industriales trabaja en el aislamiento, caracterizacin y
industrial debido a las ventajas que puede suponer en los produccin de enzimas para el desarrollo de procesos pro-
procesos productivos. La introduccin de la biotecnologa ductivos de impacto ambiental minimizado: tecnologas
enzimtica en la industria permite, entre otras aportacio- sostenibles. Los temas principales de la investigacin
nes, minimizar la generacin de contaminantes, aumentar son el estudio de la biologa molecular y la bioqumica
el rendimiento de las materias primas, y hace posible la de carbohidratasas y lipasas, as como la identicacin y 1<5
obtencin de productos con propiedades y caractersticas mejora de enzimas para aplicaciones biotecnolgicas en 

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el blanqueo y reciclado de papel, la produccin de bio- su evaluacin en procesos industriales. Las xilanasas activas
combustibles, la mejora de las bras textiles, la industria y estables en las condiciones del proceso industrial papelero
alimentaria, y el desarrollo de materiales de nueva genera- han sido ensayadas en el blanqueo de la pasta de papel, en
cin basados en derivados grasos o en lignocelulosa. colaboracin con el grupo de Ingeniera Papelera de la Univer-
El grupo de investigacin posee una amplia coleccin sidad Politcnica de Catalua. Los resultados han permitido
de cepas microbianas productoras de enzimas hidrolticas, identicar xilanasas ecientes para eliminar cidos hexenu-
aisladas de suelos agrcolas y bosques tropicales. Entre ellas rnicos, causantes del amarillamiento de papel (Valls et al.,
destaca la nueva especie Paenibacillus barcinonensis aislada 2010), y poner de maniesto el sinergismo entre xilanasas de
a partir de arrozal del delta de Ebro y seleccionada por su las familias GH11 y GH30 en el blanqueo de la pasta de papel
potente actividad hidroltica sobre polisacridos (Snchez et de eucalipto, y el ahorro de blanqueantes qumicos con la
al., 2005). El anlisis protemico del secretoma de esta es- consiguiente disminucin en la generacin de residuos txicos
pecie ha permitido la identicacin de al menos 6 xilanasas (AOX) que su uso posibilita. (Gallardo et al., 2010a). Los ensa-
distintas, responsables de su actividad xilanoltica. Cuatro de yos papeleros han identicado adicionalmente la nueva celu-
estas xilanasas han sido clonadas y caracterizadas hasta el lasa modular Cel9B cuya aplicacin modica supercialmente
momento, mostrando diferencias tanto en actividad espec- las bras y permite notables ahorros de energa en el proceso
ca como en estructura (Valenzuela et al., 2010). Entre estas de renado del papel (Cadena et al, 2010).
enzimas cabe destacar la xilanasa Xyn30D por pertenecer a La estabilidad trmica es una caracterstica fundamen-
la familia 30 de glicosil hidrolasas (inusual para xilanasas) tal de las enzimas industriales. Con el n de aumentar la
y poseer actividad exclusiva sobre xilanos de angiospermas termoestabilidad de la xilanasa Xyn10B se ha realizado un
(glucuronoxilanos) (Valenzuela et al., 2012). proceso de evolucin dirigida mediante gene shufing. Se
El potencial de la utilizacin de la celulosa para la ob- ha obtenido un doble mutante que presenta un aumento en
tencin de bioetanol y para la generacin de nanomateria- la vida media de la enzima de ms de un orden de magnitud.
les propicia la bsqueda de nuevas celulasas con actividad El anlisis de la estructura del mutante muestra los cam-
y selectividad incrementadas. Entre las cepas microbianas bios en la supercie de la enzima responsables de su mayor
de la coleccin guran tanto bacterias como hongos con compactacin (Gallardo et al., 2010b). Mediante ingeniera
gran actividad celuloltica. A partir de ellas se han puri- proteica se ha obtenido tambin una celulasa derivada de
cado y caracterizado varias celulasas y -glucanasas con Cel9B, conteniendo nicamente su mdulo cataltico y un
potencial biotecnolgico tanto para la sacaricacin de mdulo adicional, que produce un efecto de biorenado de
la celulosa y glucano como para la modicacin super- las bras superior a la enzima original, evidenciando el po-
cial de las bras de lignocelulosa. La gran actividad de tencial de la ingeniera proteica en la mejora de enzimas
la -glucanasa Cel12A de Stachybotrys atra sobre glucano con aplicacin biotecnolgica (Chiriac et al. 2010).
de cebada evidencia su utilidad en la industria cervecera
(Picart et al., 2012). Por este motivo la enzima se ha ex- PUBLICACIONES RECIENTES
presado y secretado en cepas industriales de Aspergillus
para su produccin a escala. Bassegoda A, Pastor FIJ y Diaz P. (2012). Rhodococcus sp. strain CR-53
En los ltimos aos se han aislado, clonado y carac- LipR, the rst member of a new bacterial lipase family (family X)
terizado numerosas enzimas con actividad sobre lpidos displaying an unusual Y-type oxyanion hole, similar to the Candida
54,96

(Prim et al. 2006; Bassegoda et al., 2012), expresndolas antarctica clan. Appl Environ Microbiol 78: 1724-1732.
con xito en Escherichia coli, Pseudomonas o Saccharomy- Picart P, Goedegebuur F, Diaz P y Pastor FIJ. (2012). Expression of
ces (Mormeneo et al., 2008; Boll et al., 2010). Tambin novel -glucanase Cel12A from Stachybotrys atra in bacterial and
se ha evaluado la posibilidad de utilizar las lipasas como fungal hosts. Fungal Biol 116: 443-451.
dianas teraputicas para infecciones como el acn o la Torrego-Solana N, Martin-Arjol I, Bassas-Galia M, Diaz P y Manresa A.
lcera pilrica (Ruiz et al., 2007), y se ha llevado a cabo (2012). Hydroxy-fatty acid production in a Pseudomonas aerugino-
54 la modicacin de algunas lipasas por diseo racional, sa 42A2 PHA synthase mutant generated by directed mutagenesis.
mutagnesis iterativa o por evolucin dirigida. Las varian- Appl Microbiol Biotechnol 93: 2551-61.
tes enzimticas mejoradas se han inmovilizado y ensayado Valenzuela SV. Diaz P y Pastor FIJ. (2012). A modular glucuronoxylan-
en procesos de qumica na para la produccin de com- specic xylanase with a carbohydrate binding module of family
:,4'-696

puestos quirales de inters en la industria farmacutica y CBM35. Appl Environ Microbiol (en prensa).
cosmtica (Bassegoda et al., 2010; Martnez et al. 2010; Bassegoda A, Nguyen GS, Schmidt M, Kourist R, Diaz P y Bornscheuer
Torrego et al., 2012), y en algunos casos se han desa- UT. (2010). Rational protein design of Paenibacillus barcinonensis
rrollado variantes enzimticas con mejores propiedades esterase EstA for kinetic resolution of tertiary alcohols. Chemcat-
para los procesos de sntesis o hidrlisis, as como para la chem 2: 962-967.
transestericacin de aceites residuales en la produccin Boll C, Prim N, Mormeneo M, Manresa A, Pastor FIJ y Diaz P. (2010).
de biodiesel. Differential behaviour of Pseudomonas sp 42A2 LipC, a lipase showing
La caracterizacin bioqumica de las enzimas, incluyen- greater versatility than its counterpart LipA. Biochimie 92: 307-316.
do el estudio de las condiciones ptimas de actividad (pH y Cadena EM, Chiriac AI, Pastor FIJ, Diaz P, Vidal T y Torres AL. (2010).
1<5 temperatura), estabilidad, y efecto de iones metlicos y ten- Use of cellulases and recombinant cellulose binding domains for re-
 sioactivos, permite seleccionar las enzimas ms robustas para ning TCF krft pulp. Biotechnol Prog 26: 960967.

40*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(
Chiriac AI, Cadena EM, Vidal T, Torres AL, Diaz P y Pastor FIJ. (2010). Valls C, Gallardo O, Vidal T, Pastor FIJ, Diaz P y Roncero MB. (2010).
Engineering a family 9 processive endoglucanase from Paenibacillus New xylanases to obtain modied eucalypt bres with high-cellulose
barcinonensis displaying a novel architecture. Appl Microbiol Biote- content. Bioresour Technol 101: 74397445.
chnol 86:11251134. Mormeneo M, Andrs I, Boll C, Daz P y Zueco J.(2008). Efcient
Gallardo O, Fernndez-Fernndez M, Valls C, Valenzuela SV, Roncero M B, secretion of Bacillus subtilis lipase A in Saccharomyces cerevisiae by
Vidal T, Diaz P y Pastor FIJ. (2010a). Characterization of a family GH5 translational fusion to the Pir4 cell wall protein. Appl Microbiol Bio-
xylanase with activity on neutral oligosaccharides and evaluation as a technol 80: 437445.
pulp bleaching aid. Appl Environ Microbiol 76: 6290-6394. Ruiz C, Falcocchio S, Pastor FIJ, Saso L y Diaz P. (2007). Helicobacter
Gallardo O, Pastor FIJ, Polaina J, Diaz P, ysek R, Vogel P, Isorna P, pylori EstV: identication, cloning, and characterization of the rst
Gonzlez B y Sanz-Aparicio J. (2010b). Structural insights into the lipase isolated from an epsilon-proteobacterium. Appl Environ Mi-
specicity of Xyn10B from Paenibacillus barcinonensis and its improved crobiol 73: 24232431.
stability by forced protein evolution. J Biol Chem 285: 2721-2733. Prim N, Boll C, Pastor FIJ y Diaz P. (2006). Esterase EstA6 from Pseu-
Martnez E, Hamberg M, Busquets M, Diaz P, Manresa A y Oliw, EH. domonas sp. CR-611 is a novel member in the utmost conserved clus-
(2010). Biochemical characterization of the oxygenation of unsatu- ter of family VI bacterial lipolytic enzymes. Biochimie 88: 859867.
rated fatty acids by the dioxygenase and hydroperoxide isomerase of Snchez MM, Fritze D, Blanco A, Sprer C, Tindall BJ, Schumann
Pseudomonas aeruginosa 42A2. J Biol Chem 285: 9339-9345. P, Kroppenstedt RM, Diaz P y Pastor FIJ. (2005). Paenibacillus
Valenzuela SV. Diaz P y Pastor FIJ. (2010). Recombinant expression barcinonensis sp. nov., a xylanase-producing bacterium isolated
of an alkali stable GH10 xylanase from Paenibacillus barcinonensis. J from a rice eld in the Ebro River delta. Int J Syst Evol Microbiol
Agric Food Chem 58: 4814-4818. 55: 935-939.

Microbiologa Industrial
y Biotecnologa Alimentaria en la
Universidad de Vigo
Carmen Sieiro Vzquez. Grupo de Microbiologa Industrial y Biotecnologa Alimentaria.
Edificio de Ciencias Experimentales. Universidad de Vigo. Lagoas - Marcosende. 36310 Vigo.
mcsieiro@uvigo.es

54,96
El grupo de investigacin en Microbiologa Industrial reconocidos como dos de los principales indicadores de
y Biotecnologa Alimentaria dirigido por la profesora Car- calidad de los vinos. Con relacin a estos dos criterios y
men Sieiro Vzquez pertenece al Departamento de Biolo- en colaboracin con distintas empresas de la regin, se
ga Funcional y Ciencias de la Salud de la Universidad de caracterizaron y seleccionaron distintas cepas para su uso
Vigo. Las lneas de investigacin principales a las que se en fermentaciones dirigidas, que originan tanto productos
dedica el grupo desde su creacin estn relacionadas fun- que mantienen la tipicidad tradicional como nuevos pro-
damentalmente con la caracterizacin, seleccin y mejora ductos diferenciados. 55
de microorganismos industriales, con particular inters en Otra de las lneas de investigacin en las que trabaja
la seleccin y mejora de levaduras y bacterias vnicas, y el grupo es la bsqueda y estudio de nuevas enzimas de
con el estudio de nuevas enzimas microbianas de inters inters para la industria alimentaria, centrando nuestros
:,4'-696

para la industria alimentaria. Estas lneas de investigacin trabajos especialmente en las aplicaciones de las poliga-
se iniciaron con el profesor Toms Gonzlez Villa en la lacturonasas de levaduras en la industria enolgica. En
Universidad de Santiago de Compostela de cuyo labora- este campo se han clonado y caracterizado nuevos genes
torio procede la investigadora principal de este grupo. En y nuevas enzimas pcticas producidas por Kluyveromyces,
colaboracin con el grupo de la Universidad de Santiago obtenindose cepas mejoradas, hiperproductoras de las
y con la Misin Biolgica de Galicia (CSIC), desde el ao protenas recombinantes, que permiten la explotacin de
2005, las investigaciones continuaron estudiando por un las mismas a escala industrial a costes competitivos, as
lado, el efecto de levaduras y bacterias vnicas y, por otro, como producirlas en cantidad suciente para abordar los
el de diversos tratamientos enzimticos, sobre el perl estudios de sus posibles aplicaciones, bien emplendolas
aromtico y el color de los vinos gallegos elaborados con de forma individual, o en combinaciones con otras enzi- 1<5
distintas variedades de uva, por tratarse de parmetros mas, optimizadas para las aplicaciones que se proponen. 

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,:7,*0(340*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(

Grupo de Microbiologa Industrial


y Biotecnologa Alimentaria de la
Universidad de Vigo.

Mediante estas investigaciones se analiz la posibilidad quitoligosacridos que, como tales o en forma de nanoma-
de utilizar las poligalacturonasas de K. marxianus como teriales, muestren diferentes actividades biolgicas, con
alternativa a los preparados pcticos comercializados con especial inters en aquellos con actividad antimicrobiana
distintos nes. Los resultados demostraron la ecacia de y que puedan ser utilizados como agentes de biocontrol en
la enzima producida por esta levadura para llevar a cabola la industria agroalimentaria.
claricacin de zumos de frutas, incluyendo el mosto uti-
lizado para las fermentaciones vnicas y, sobre todo, su
excelente comportamiento para favorecer la extraccin de BIBLIOGRAFA
precursores y potenciar de forma diferenciada, dependien- Vilanova, M. and Sieiro, C. 2006. Determination of free and bound
do de las concentraciones y condiciones de uso, el perl terpene compounds in Albario wine. Journal of Food Composition
aromtico de los vinos. En la misma lnea se demostr, and Analysis 19: 694-697.
igualmente, la ideoneidad de esta enzima para incremen- Vilanova, M. and Sieiro, C. 2006. Contribution by Saccharomyces cere-
tar signicativamente el contenido en polifenoles de los visiae yeasts to fermentative avour compounds in wines from cv.
vinos obtenidos, as como para intensicar el color en Albario. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 33:
losmismos. La ecacia de la pectinasa de Kluyveromyces 929-933.
en estas aplicaciones result comparable a la de prepara- Vilanova, M., Zamuz, S., Vilario, F. and Sieiro C. 2007. Effect of
54,96

dos que contienen mezclas enzimticas, evitando los efec- terroir on the volatiles of Vitis vinifera cv. Albario. Journal of the
tos secundarios, no deseables, que estos ltimos pueden Science of Food and Agriculture 87: 1252-1256.
ocasionar en los productos tratados. Vilanova, M., Zamuz, S., Masa, A. and Sieiro, C. 2007. Evaluation of PFGE
Todos estos trabajos se han llevado a cabo en el marco and mtDNA restriction anlisis methods to detect genetic diversity of
de diferentes proyectos y contratos de transferencia con Saccharomyces cerevisiae strains associated to Vitis vinifera. Journal In-
empresas conseguidos en convocatorias competitivas. ternational des Sciences de la Vigne et du Vin 41: 155-159.
Recientemente, y aprovechando su experiencia en la Sieiro, C., Sestelo A.B.F. and Villa, T.G. 2009. Cloning, Characterization
56 caracterizacin y produccin de enzimas microbianas de and functional analysis of the EPG1-2 gene: a new allele coding for
inters alimentario, el grupo ha conseguido nanciacin an endopolygalacturonase in Kluyveromyces marxianus. Journal of
para iniciar una nueva lnea de investigacin sobre micro- Agricultural and Food Chemistry 57: 8921-8926.
organismos quitinolticos y las quitinasas que producen.
:,4'-696

Vilanova, M., Zamuz, S.A., da Silva, A.F., Masa, A. and Sieiro, C. 2011.
Hasta el momento se han aislado, identicado y caracteri- Intraspecic diversity of yeast associated to Vitis vinifera Albario
zado ya varias cepas bacterianas procedentes de distintos must from different vineyard ecosystems. Journal of the Institute of
hbitats y asociadas a diferentes organismos, que produ- Brewing 117: 8921-8926.
cen nuevas enzimas quitinolticas con diferentespropie- Rodrguez-Argelles, M. C., Sieiro, C., Cao, R. and Nasi, L. 2011. Chi-
dades y modos de accin. Adems, para algunas de las tosan and silver nanoparticles as pudding with raisins with antimi-
cepas seleccionadas se han clonado y caracterizado los crobial activity. Journal of Colloid and Surface Science 363: 80-84.
genes que codican dichas quitinasas y construido cepas Sieiro, C., Garca-Fraga, B., Lpez-Seijas, J., da Silva, F.A. and Villa,
recombinantes para su produccin. El objetivo es el em- T.G. 2012. Microbial pectic enzymes in the food and wine industry.
pleo de estas enzimas para la transformacin de los re- In: The Food Industrial Processes-Methods and Equipment. InTech
1<5 siduos de quitina que genera la industria alimentaria en (ISBN 978-953-307-709-2).


40*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(
Grupo de Microbiologa Industrial
y Biotecnologa de la Universidad
de Len
Area de Microbiologa, Universidad de Len e Instituto de Biotecnologa de Len
Campus de Vegazana s/n 24071 Len. paloma.liras@unileon.es

El grupo de investigacin en 2005.

El grupo se inici en 1980 en la Universidad de Len


y fund en 1991 el Instituto de Biotecnologa. A lo largo PERSONAL QUE FORMA EL GRUPO
de estos aos se han defendido ms de 90 tesis doctorales EN EL MOMENTO PRESENTE
por miembros del grupo.
Prof. Juan F. Martn Martn

LINEAS DE TRABAJO Lic. Marta Fernndez Aguado

54,96
EN LA ACTUALIDAD Lic. Rebeca Domnguez Santos
Biosntesis de penicilinas y cefalosporinas en Peni- Lic. Pedro Hidalgo Yaez
cillium chrysogenum y Acremonium chrysogenum. Se
clonaron y analizaron por primera vez muchos de los Prof. Antonio Rodrguez Garca
genes de biosntesis de penicilinas y cefalosporinas.
Se han estudiado los mecanismos moleculares que Dr. Fernando Santos Beneit
57
conducen a la superproduccin de estos antibiticos Lic. Mara Ordoez Robles
mediante tcnicas micas, concretamente anlisis
transcriptmicos y protemicos. Lic. Siomara Martn Martn
:,4'-696

Metabolitos secundarios producidos por hongos -


lamentosos. Estn siendo estudiados a nivel molecular Prof. Paloma Liras Padn
la produccin del antitumoral andrastina o de las mico-
toxinas roquefortina y melagrina, en especies del gne- Dra. Irene Santamarta Hernndez
ro Penicillium. Tambin se ha estudiado la produccin Lic. Alma Botas Muoz
de pigmentos por especies del gnero Monascus.
Biosntesis de tacrolimus y anlisis del genoma en Lic. Rubn lvarez lvarez
cepas de Streptomyces productoras de tacrolimus. Se
ha secuenciado el genoma completo de S. tsukubaensis, Lic. Vanesa Robles Rodrguez
localizndose los genes de produccin de tacrolimus y 1<5
Lic. Yolanda Martnez Burgo
analizndose la agrupacin gnica para su biosntesis. 

40*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(
,:7,*0(340*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(

Control por fosfato de la biosntesis de metabolitos expression of the isopenicillin N epimerization, ring expansion, and
secundarios en Streptomyces. El nivel de fosfato es acetylation genes. Chem. Biol. 14: 329-339.
limitante para la produccin de antibiticos y de otros Rodrguez-Garca A, Barreiro C, Santos-Beneit F, Sola-Landa A y Mar-
metabolitos secundarios por especies de Streptomyces. tn JF (2007) Genome-wide transcriptomic and proteomic analysis of
El mecanismo de control est mediado por el sistema the primary response to phosphate limitation in Streptomyces coeli-
PhoR-PhoP, que ha sido estudiado mediante el anli- color M145 and in a phoP mutant. Proteomics 7: 2410-2429
sis de la interaccin del regulador PhoP con secuencias Godio RP, Fouces R y Martn JF (2007) A squalene epoxidase is involved in
especcas de los promotores de los genes regulados. biosynthesis of both the antitumor compound clavaric acid and sterols
Biosntesis y gentica de la produccin de cido cla- in the basidiomycete H. sublateritium. Chemistry & Biology. 14: 1334-46.
vulnico por Streptomyces clavuligerus. Se han clona- Santamarta I, Lpez-Garca MT, Prez-Redondo R, Koekman B, Martn
do las agrupacines de cefamicina C y cido clavulnico JF y Liras P (2007) Connecting primary and secondary metabolism:
de S. clavuligerus, analizndose la funcin de sus genes AreB, an IclR-like protein, binds the AREccaR sequence of S. clavu-
mediante obtencin de mutantes y/o puricacin de las ligerus and modulates leucine biosynthesis and cephamycin C and
protenas que codican. Se han llevado a cabo estudios clavulanic acid production. Molecular Microbiology. 66: 511-24.
de transcriptmica y protemica comparando la cepa Sola-Landa A, Rodrguez-Garca A, Apel AK y Martn JF (2008) Target
silvestre y diferentes mutantes. genes and structure of the direct repeats in the DNA binding sequen-
Transcriptmica y protemica de la formacin de ces of the response regulator PhoP in Streptomyces coelicolor. Nucleic
arginina en cepas de Streptomyces y su correlacin Acids Research 36:1358-1368.
con la produccin de metabolitos secundarios. Den- Van den Berg MA, Albang R, Albermann K, Badger JH, Daran JM,
tro del estudio de los precursores del cido clavulnico Driessen AJ, Garcia-Estrada C, Fedorova ND, Harris DM, Heijne
en S.clavuligerus se han aislado, secuenciado y anali- WH, Joardar V, Kiel JA, Kovalchuk A, Martn JF. et al (2008) Ge-
zado las agrupaciones para la utilizacin de glicerol y nome sequencing and analysis of the lamentous fungus Penicillium
la biosntesis de arginina. Esta ltima agrupacin ha chrysogenum. Nat Biotechnol 26: 1161-1168.
sido tambin analizada en S. coelicolor, microrganismo Rodrguez-Garca A, Sola-Landa A, Apel K, Santos-Beneit F y Martn
modelo, mediante transcriptmica y protemica. JF (2009) Phosphate control over nitrogen metabolism in Streptomy-
ces coelicolor: direct and indirect negative control of glnR, glnA,
glnII and amtB expression by the response regulator PhoP. Nucleic
PUBLICACIONES Acids Research 37: 3230-3242.
De las 500 publicaciones internacionales del grupo se indi- Santos-Beneit F, Rodrguez-Garca A, Sola-Landa A y Martn JF (2009)
can algunas de las ms relevantes durante los ltimos 10 aos: Crosstalk between two global regulators in Streptomyces: PhoP and
Ulln RV, Casqueiro J, Bauelos O, Fernndez FJ, Gutirrez S y Martn AfsR interact in the control of afsS, pstS and phoRP transcription.
JF (2002) A novel epimerization system in fungal secondary meta- Molecular Microbiology 72:53-68.
bolism involved in the conversion of isopenicillin N into penicillin Jami MS, Barreiro C, Garca-Estrada C y Martn JF (2010). Proteome
N in Acremonium chrysogenum. J. Biol. Chem. 277:46216-46225 analysis of the penicillin producer Penicillium chrysogenum: Charac-
Hijarrubia MJ, Aparicio JF y Martn JF (2003) Domain structure characte- terization of protein changes during the industrial strain improve-
rization of the mulfunctional a-aminoadipate reductase from Penicillium ment. Mol Cel Proteomics;9:1182-98.
Martn JF y Liras P. (2010). Engineering of Regulatory Cascades Con-
54,96

chrysogenum by limited proteolysis. J. Biol. Chem. 278: 8250-8256


Sola-Landa A, Moura RS y Martn JF (2003) The two component PhoR- trolling Antibiotic Biosynthesis in Streptomyces Signaling Genes.
PhoP system controls both primary metabolism and secondary metabo- Current Opinion in Microbiology 13: 263-273.
lite biosynthesis in Streptomyces lividans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Santamarta I, Lpez-Garca MT, Kurt A, Nrdiz N, Prez-Redondo R,
100:6133-6138 lvarez-lvarez R, Martn JF y Liras, P. (2011). Characterization of
Recio E, Colinas A, Rumbero , Aparicio JF y Martn JF. (2004) PI DNA-binding sequences for CcaR in the cephamycinclavulanic acid
factor, a novel type quorum-sensing inducer elicits pimaricin produc- supercluster of Streptomyces clavuligerus. Mol. Microbiol. 81: 968-981.
58 tion in Streptomyces natalensis. J.Biol. Chem. 279: 41586-41593. Garca-Estrada C, Ulln RV, Albillos SM, Fernndez-Bodega M, Durek
Santamarta I, Prez-Redondo R, Lorenzana LM, Martn JF y Liras P P, von Dhren H, y Martn JF. (2011). A single cluster of coregula-
(2005) Two different proteins bind to the butyrolactone receptor ted genes encodes the biosynthesis of the mycotoxins roquefortine C
protein ARE sequence located upstream of the regulatory ccaR gene and meleagrin in Penicillium chrysogenum. Chem. Biol. 18:1499-512.
:,4'-696

of S.clavuligerus. Mol. Microbiol. 56: 824-835. Teijeira F, Ulln RV, Fernndez-Aguado M, y Martn JF.(2011). CefR
Sola-Landa A, Rodrguez-Garca A, Franco-Domnguez E y Martn JF modulates transporters of beta-lactam intermediates preventing the
(2005) Binding of PhoP to promoters of phosphate regulated genes loss of penicillins to the broth and increases cephalosporin produc-
in Streptomyces coelicolor: Identication of PHO boxes Mol. Microbiol. tion in Acremonium chrysogenum. Metab Eng. 13(5):532-43.
56: 1373-1385 Teijeira F, Ulln RV, Fernndez-Aguado M, y Martn JF.(2011). CefR
Gmez-Escribano JP, Liras P, Pisabarro A y Martn JF (2006) An rplKD29-PALG-32 modulates transporters of beta-lactam intermediates preventing the
mutation leads to reduced expression of the regulatory genes ccaR and loss of penicillins to the broth and increases cephalosporin produc-
claR and very low transcription of the ceaS2 gene for clavulanic acid tion in Acremonium chrysogenum. Metab Eng. 13(5):532-43.
biosynthesis in Streptomyces clavuligerus. Mol. Microbiol. 61: 758-770. Prez-Redondo R, Rodrguez-Garca A, Botas A, Santamarta I, Martn
1<5 Ulln RV, Campoy S, Casqueiro J, Fernndez FJ y Martn JF (2007) JF y Liras P. (2012). ArgR of Streptomyces coelicolor, is a versatile
 Deacetylcephalosporin C production in Penicillium chrysogenum by regulator. PlosOne 2012;7(3):e32697

40*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(
Biosntesis de compuestos bioactivos
por microorganismos (BIOMIC)
Jos Antonio Salas Fernndez
y Carmen Mndez Fernndez
rea de Microbiologa, Dpto. Biologa Funcional e I.U.O.P.A. (Instituto Universitario de Oncologa
del Principado de Asturias), Universidad de Oviedo.

LNEAS DE INVESTIGACIN lizacin de tcnicas de Ingeniera gentica. As, se pueden


crear microorganismos recombinantes con combinaciones de
El grupo de Biosntesis de compuestos bioactivos por genes de rutas de biosntesis de compuestos bioactivos no
microorganismos (BIOMIC) pertenece al rea de Micro- existentes en la naturaleza, que potencialmente puedan dar
biologa del Departamento de Biologa Funcional y al Ins- lugar a la produccin de nuevos compuestos. La puricacin
tituto Universitario de Oncologa del Principado de Astu- posterior de estos compuestos, su caracterizacin qumica y
rias (I.U.O.P.A.) de la Universidad de Oviedo. Est ubicado el ensayo de sus actividades biolgicas (antibitica, antifn-
en la Facultad de Medicina, coordinado por los Catedr- gica, antitumoral, neuroprotectora), as como su toxicidad en
ticos de Universidad, Dr. Jos Antonio Salas Fernndez y ratones, permite determinar la potencialidad de los nuevos
Dra. Carmen Mndez Fernndez, y forman parte del mismo compuestos para ser patentados y desarrollados posterior-
el Dr. Alfredo F. Braa (Profesor Titular de Universidad), mente. Utilizando esta estrategia, el grupo ha generado ms
el Dr. Carlos Olano (Investigador del I.U.O.P.A.), as como de 90 nuevos compuestos derivados de compuestos bioac-
varios investigadores postdoctorales y predoctorales y un tivos, algunos de los cuales poseen mayor bioactividad y/o
tcnico de laboratorio. menor toxicidad que los compuestos originales.
Las principales lneas de investigacin del grupo son:
Estudio de procesos de regulacin
Aislamiento y caracterizacin de las rutas de biosntesis de
de agrupaciones de genes de compuestos bioactivos
biosntesis de compuestos Uno de los aspectos importantes en relacin con las
bioactivos (antibiticos rutas de biosntesis de compuestos bioactivos, es conocer
y compuestos antitumorales) los procesos de regulacin a los que estn sometidas. Este

54,96
producidos por actinomicetos conocimiento permitir actuar sobre los mismos y mejorar
la produccin de los compuestos codicados por las rutas
El grupo posee una amplia experiencia en el aislamien- correspondientes. En nuestro grupo se estn estudiando
to y caracterizacin de rutas de biosntesis de antibi- los procesos de regulacin que afectan a la biosntesis de
ticos y compuestos antitumorales sintetizados por acti- mitramicina, estreptolidigina y colismicina.
nomicetos. Se han aislado y caracterizado diversas rutas
de biosntesis de compuestos bioactivos pertenecientes a 59
distintas familias de compuestos policetnicos (polyke-
Aplicacin de estrategias de
tides), como oleandomicina, borrelidina, oviedomicina, Ingeniera metablica a la mejora
elloramicina, estemicina, estreptolidigina, mitramicina y de la produccin de compuestos
:,4'-696

cromomicina. Asimismo se han caracterizado las rutas de bioactivos


biosntesis de otros compuestos no policetnicos como,
tiocoralina, tienamicina, rebecamicina y estaurosporina. Uno de los potenciales cuellos de botella que pueden
existir en la produccin de un compuesto por un microor-
ganismo es la disponibilidad de los precursores metabli-
Utilizacin de la Biosntesis cos a partir de los cuales se lleva a cabo la biosntesis del
Combinatoria para generar nuevos compuesto. En nuestro grupo se estn aplicando estrate-
compuestos bioactivos gias de Ingeniera Metablica (sobreexpresin y/o inacti-
vacin de genes del metabolismo primario), con el n de
La Biosntesis Combinatoria es una estrategia que per- potenciar la formacin y la canalizacin de los precursores 1<5
mite generar nuevos compuestos bioactivos mediante la uti- metablicos de compuestos bioactivos hacia las rutas de 

40*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(
,:7,*0(340*96)0636.(05+<:;90(3@)06;,*5636.(40*96)0(5(

biosntesis de inters, y mejorar de esta manera los niveles premithramycins: hybrid aromatic polyketides using genes from three di-
de produccin de estos compuestos. fferent biosynthetic pathways. J Am Chem Soc. 124: 6056-6062.
Rodrguez L, Aguirrezabalaga I, Allende N, Braa AF, Mndez C y Salas JA.
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Los actinomicetos son un grupo de bacterias conocido Lomb F, Gibson M, Greenwell L, Braa AF, Rohr J, Salas JA y Mndez C
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secuenciacin de muchos genomas de actinomicetos ha pues- chain sugar pathways and novel derivatives from the antitumor tetrace-
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to de maniesto que estos contienen agrupaciones de genes
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para la formacin de 10-30 compuestos bioactivos, que por Combinatorial biosynthesis of antitumor indolocarbazole compounds.
razones desconocidas, o no se expresan o se expresan poco Proc Nat Acad Sci U S A. 102: 461-466.
en condiciones de cultivo de laboratorio, lo que implica que Prez M, Lomb F, Zhu L, Gibson M, Braa AF, Rohr J, Salas JA y Mndez C.
gran parte del potencial de estos microorganismos como (2005). Combining sugar biosynthesis gene cassettes to generate two
productores de compuestos bioactivos est por descubrir. En glycosylated antitumor tetracenomycins. Chem Commun. 12: 1604-1606.
nuestro laboratorio, se est analizando el genoma de diferen- Salas AP, Zhu L, Snchez C, Braa AF, Rohr J, Mndez C y Salas JA. (2005).
tes estreptomicetos con el n de identicar agrupaciones de Deciphering the late steps in the biosynthesis of the anti-tumor indo-
genes de biosntesis de compuestos bioactivos desconocidas, locarbazole staurosporine: sugar donor substrate exibility of the StaG
activarlas (utilizando estrategias de Ingeniera gentica) para glycosyltransferase. Mol Microbiol. 58: 17-27.
de esta manera descubrir nuevos compuestos. Lomb F, Velasco A, Castro A, Calle F, Braa AF, Snchez-Puelles JM, Mndez
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