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AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE GRAU____

Ingeniera en Universidad
industrias Nacional Jorge
Alimentarias Basadre Grohmann

Practica N 1: NUMERACIN DE

MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS


VIABLES

NOMBRE: Yoselin Noelia Jalanoca Quispe


PROFESOR: Amelia Castro Gamero
CURSO: Laboratorio de Microbiologa
AO: Tercero
HORARIO: Lunes 11:00am 01:00pm

Tacna Per

2016

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AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE GRAU____

Prctica N1:

NUMERACIN DE MICROORGANISMOS
AEROBIOS MESFILOS VIABLES

1.- INTRODUCCION:

En la presente practica de laboratorio que lleva por ttulo: NUMERACIN DE


MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS VIABLES Teniendo en
cuenta que las tcnicas para poder encontrar la numeracin de aerobios
mesfilos viables son: el recuento de colonias en placa por profundidad,
superficie o por goteo; otro el Mtodo del nmero ms probable (MPN) de
grmenes como clculo estadstico del nmero de clulas viables. En la prctica
se usara el mtodo del recuento de colonias en placas por profundidad, en la
cual se observara y recontara los microorganismos en la placa volteada y a
contraluz o usando un contador de colonias.

Sabiendo que Este mtodo del recuento total de bacterias en placa es un


mtodo til para obtener una idea del grado de frescura o pronta alteracin de
los alimentos, dependiendo de la cantidad de bacterias presentes. La mayora
de los alimentos deben ser considerados como inadecuados para el consumo
cuando contienen un gran nmero de microorganismos, aun cuando estos
microorganismos no sean conocidos como patgenos y no hayan
alterado de forma apreciable los caracteres organolpticos del alimento.
(Thatcher y Clark, 1973)

La presencia de microorganismos aerobios mesfilos en los alimentos puede ser


relacionada directamente con la manipulacin, el estado de frescura o de
descomposicin del producto y la temperatura de conservacin del producto.
Un nmero relativamente bajo de estas bacterias no es sinnimo de buena
calidad bacteriolgica del alimento, ya que puede contener
microorganismos que producen enterotoxinas o son patgenos. (Venegas y
col., 1990).

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2.- OBJETIVOS:

Conocer el mtodo para determinar el nmero de microorganismos


aerobios mesfilos viables.

Determinar si el producto alimenticio que se analiza est en condiciones


aptas para el consumo humano.

Determinar cuntos microorganismos presenta la muestra que


analizamos.

3.- FUNDAMENTO TEORICO:

En el grupo de los mesfilos aerobios se incluyen


todas las bacterias, mohos y levaduras capaces
de desarrollarse a 30 C en las condiciones
establecidas.

RECUENTO MICROORGANISMOS VIABLES TOTALES:

Se trata de conocer el nmero total de microorganismos presentes en el


alimento. Este nmero no guarda relacin con el de microorganismos
patgenos por lo que no puede usarse como ndice de su presencia y slo
debe considerarse un indicador de las caractersticas higinicas generales
del alimento.

Dependiendo de las caractersticas del medio utilizado (medio rico, medio


limitado en nutrientes para medida de la flora no lctica de alimentos
fermentados) y de las condiciones de incubacin (mesfilos, psicrfilos)
los microorganismos analizados sern miembros de poblaciones
diferentes.

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En general se investiga la presencia de


microorganismos aerobios o
aerotolerantes (anaerobios facultativos);
aunque, en ciertas situaciones (alimentos
envasados al vaco), puede ser de inters
hacer recuentos de anaerobios totales. Se
han desarrollado tcnicas que hacen
posible la automatizacin del proceso, hay
cuatro tcnicas biolgicas bsicas tcnicas de recuento de viables:

Contaje de Placa: Consiste en el plaqueo de una muestra de


volumen conocido del alimento que se analiza. El resultado es
funcin de una serie de factores como son el mtodo de muestreo,
el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y las caractersticas
del medio de cultivo. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa
como en superficie, aunque hay que considerar que los cultivos en
masa son letales para la flora psicotrofa. Cada bacteria viable
formar una colonia, el plaqueo puede hacerse en una placa normal
o por medio de un plaqueador en espiral que va depositando
concentraciones progresivamente ms diludas de la muestra.

Filtros de membrana: Utilizados cuando el nmero de bacterias


es bajo. Son filtros con un poro de 0,45 mm que retienen las
bacterias. Se filtra un volumen dado y se coloca el filtro sobre una
placa del medio de cultivo apropiado. La muestra puede haber sido
procesada para epifluorescencia previamente, lo que facilita el
recuento (la epifluorescencia se puede provocar con naranja de
acridina que tie especficamente los cidos nucleicos).

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Microcolonias en DEFT: DEFT son las iniciales en ingls de Direct


Epifluorescence Filter Technique ( tcnica deepifluorescencia
directa en filtro ). En esta tcnica las bacterias se filtran para
retenerlas en una membrana apropiada que posteriormente se trata
con un agente fluorescente (como la naranja de acridina) para teir
las clulas bacterianas (se somete el filtrado a un tratamiento previo
con detergentes para destruir las clulas somticas). La deteccin
de los microorganismos ha de hacerse mediante microscopa de
fluorescencia o por cualquier otro mtodo de medida de la
epifluorescencia. En ciertos casos, las membranas se incuban para
producir colonias que son ms fcilmente detectables.

Contaje de microcolonias al microscopio: Se aade un pequeo


volumen de agar-cultivo a un porta y se incuba para seguir la
formacin de microcolonias al microscopio.

Gotitas de agar: Se hacen diluciones de la muestra (solucin


madre) y se depositan gotitas de 10 ml en una placa Petri (gotitas de
cultivo + agar). Se examina el crecimiento de las colonias en las
gotitas tras la incubacin.

Films secos (Petrifilm): Son pelculas deshidratadas de medios de


cultivos generales o selectivos en las que se deposita 1 ml de la
muestra que rehidrata el medio. Tras la incubacin se hace el
recuento.

Mtodo del nmero ms probable: Basado en series de


diluciones y clculo estadstico del nmero de bacterias presentes
en las diluciones ms altas. Se puede hacer con 3 5 tubos. El
mtodo es popular aunque poco excto.

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Mtodos basados en la reduccin de colorantes: Usando azul


de metileno o resazurina. Colorantes reducidos por las bacterias; al
reducirse cambian de color y esto es medible. Usado en medios
lquidos (lcteos).

Tubos rodantes: Son tubos hermticamente cerrados en los que


hacindolos girar se forma una fina capa de agua. Utiles para
recuento de anaerobios.

Contaje microscpico directo: Usando cmaras de cuenta, se


coloca un volumen determinado y se recuentan las bacterias.

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4.- MATERIALES:

Equipos:

- 01 Cocinilla elctrica.
- 01 Bao Mara:
- 01 Estufa.
- 01 Balanza.
- 01 Mechero Bunsen.
- Contador de Colonias.

Materiales:

- 19 placas Petri.
- 19 Tubos de Ensayo.
- 02 Matraces Erlenmeyer.
- 03 Morteros con sus timones.
- Pipetas.
- Agar PlateCount (PC).
- Agua Peptonada.
- Alcohol de 96 C.

Muestras:

- 02 Sandwich de pollo.
- 01 Sandwich de hamburguesa.

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5.- PROCEDIMIENTO:

Preparacin de la Muestra:

a) Preparar con anterioridad el agar PC, segn


las indicaciones dadas por el frasco y
conservar en el refrigerador.

b) Prender la cocinilla elctrica y poner ah el


matraz con el agar PC, hasta que este deje de
estar gelatinizado y sea lquido.

c) Llevar el matraz con el agar lquido al Bao Mara mientras seguimos


preparando nuestra muestra.

d) Esterilizar la mesa de trabajo, primero limpiar con el alcohol,


esperar un momento y luego pasar con el mechero.

e) Triturar la muestra en el mortero.

f) Pesar 10 g de la muestra en un matraz y


agregar 90 ml de agua peptonada.

g) Agitar nuestra muestra durante 1 min, y


rotularemos con -1.

h) Rotular 5 tubos de ensayo con -2, -3, -4, -5 y -6 y agregar a cada uno 9
ml de agua peptonada.

i) Agregar 1 ml de -1 a -2, luego 1 ml de -2 a -3 y asi sucesivamente hasta


agregar 1 ml de -5 a -6.

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j) Poner en orden las placas Petri e ir


agregando a cada una en orden 1 ml
de cada tubo de ensayo por placa,
empezando por el tubo -6 y por
incorporacin una vez que este en la
placa agregaremos el agar a la altura
que no sobrepase la mitad del fondo de la placa y realizaremos
movimientos de vaivn, luego continuar con la placa -5 y
sucesivamente.

k) Rotular la placa indicando el nmero de grupo, el agar usado y el


nmero de dilucin realizado y dejar unos minutos para que el agar
gelatinice.

l) En otra placa aparte solo agregaremos el agar y rotularemos con la letra


T que significa testigo, esto para comprobar que se realizo el cultivo en
un ambiente esterilizado.

m) Llevar las placas a la estufa a temperatura de 30 31 C por 48 horas en


posicin invertida.

Recuento de colonias:

a) Poner las placas en orden y seleccionar las placas en las que se sea
posible contar sus colonias.

b) Elegir el mtodo por el que contar las colonias, si estas son pocas,
entonces podemos contarlas mirando hacia la luz con la placa y en caso
de que sean muchas pero sea posible contar contaremos las colonias en
el contador de colonias.

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6.- RESULTADOS:

SANDWICH DE POLLO, GRUPO I:

Placas escogidas para el conteo: -3 y -4

- Placa -3: 49 Colonias. 49 000 +


- Placa -4 : 3 Colonias. 30 000

79 000 2 = 39 500= 395x102ufc/g

SANDWICH DE POLLO, GRUPO II:

Placas escogidas para el conteo: -3 y -4

- Placa -4: 232 Colonias. 2 320 000 +


- Placa -5: 13 Colonias. 1 300 000
3 620 000 2 = 1 810 000= 181x104 ufc/g

Sandwich de hamburguesa, grupo III:


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SANDWICH DE HAMBURGUESA, GRUPO III:

Placas escogidas para el conteo: -4y -5

- Placa -4: 18 Colonias. 180 000 +


- Placa -5: 1 Colonias. 100 000

280 000 2 = 140 000= 14x104ufc/g

7.-CONCLUSIONES:

Se observ que en la muestra del sndwich de pollo a diferencia de la


hamburguesa esta posee mayor cantidad de colonias, esto debido a que al
momento de preparar ese sndwich el pollo pasa por un deshilachado en
el que no se toma un buen cuidado, mientras la hamburguesa pasa por una
plancha para poder cocinarla, lo cual elimina a algunos microorganismos,
esta prctica nos demostr que el recuento de mesfilos nos puede indicar
las condiciones de salubridad por las que pas un alimento.

RECOMENDACIONES:
Realizar cada procedimiento de la prctica al lado del mechero, esto
nos permitir tener un ambiente mejor esterilizado y evitar errores
al momento de ver nuestros resultados.

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8.- BIBLIOGRAFIA:

https://es.scribd.com/doc/232184397/Numeracion-deMicroorganismos-
Aerobios-Mesofilos-Viables-docx
http://myslide.es/documents/determinacion-de-bacterias-aerobios
mesofilos-viables.html
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
https://es.scribd.com/doc/31881556/Numeracion-de-Microorganismos-
Aerobios-Mesofilos-Viables
http://www.analizacalidad.com/docftp/fi178arm2004-4.pdf
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-
metodos%20de%20recuento.htm

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