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AUTORES:
ELISA MARCELA CARRILLO ZAPATA
AURA MARA LOZANO CAICEDO
TRABBAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar el titulo de
MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus
trabajos de tesis. Solo velar por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral
catlica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien
se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia
VALIDACIN DEL MTODO DE DETECCIN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN
AGUA POTABLE UTILIZANDO AGAR CHROMOCULT
AUTORES
ELISA MARCELA CARRILLO ZAPATA
AURA MARA LOZANO CAICEDO
APROBADO
___________________________ __________________________
CINDY MARLENE FERNANDEZ ZULMA VALBUENA
Microbiologa industrial Bacteriologa
JURADO JURADO
VALIDACIN DEL MTODO DE DETECCIN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN
AGUA POTABLE UTILIZANDO AGAR CHROMOCULT
AUTORES:
ELISA MARCELA CARRILLO ZAPATA
AURA MARA LOZANO CAICEDO
APROBADO
A Dios, porque nunca nos abandono en el largo andar de nuestro aprendizaje, porque
cuando mas necesitamos de su ayuda, el estuvo all, sostenindonos entre sus brazos
para que no nos doliera el caminar en los momentos difciles.
A nuestras familias porque gracias a su eterno amor para cada una de nosotras, llenaron
nuestros corazones de fortaleza para que este largo andar, se hiciera mas corto y
placentero; por su apoyo incondicional sin importar las circunstancias, porque pece a
todos los momentos vividos, siempre estn presentes para brindarnos el amor que
reconforta nuestro ser.
Aura y Marcela
A mi padre que esta en el cielo porque mientras estuvo a mi lado fue un ejemplo de
sabidura y superacin, un apoyo incondicional, un padre lleno de esperanza y amor
para conmigo y porque ahora que esta en el cielo se que desde all ilumina todos mis
caminos, ayudndome a seguir siempre por el mejor y porque se que este donde este
siempre velara mis sueos.
Aura M
AGRADECIMIENTOS
A Dios por acompaarnos siempre y por estar a nuestro lado en los buenos y malos momentos.
A la Dra. Jeinny Romero, nuestra directora por aceptar guiarnos en la realizacin de este
trabajo, por llenarse de paciencia, por transmitirnos su conocimiento y experiencia, por ser mas
que una amiga, por su colaboracin y apoyo durante el desarrollo de este trabajo.
RESUMEN
La validacin realizada en este trabajo de grado tuvo como propsito utilizar el agar Chromocult,
como mtodo alternativo en la deteccin de microorganismos indicadores de la calidad del agua
potable, gracias a su fcil manejo y rpida recuperacin para reducir costos y desarrollar
procedimientos con mayor eficacia y seguridad en el laboratorio INTHERPHARM DE COLOMBIA
Ltda, basados en la USP 31, realizando un anlisis que garantice resultados confiables y la
disminucin de los riesgos de reanlisis que aumentan el tiempo de anlisis y los costos.
Se realiz una revisin y recopilacin bibliogrfica, para obtener toda la informacin necesaria y se
verific que el programa de calibracin y mantenimiento de los equipos, estuviera vigente, para de
esta manera poder garantizar el procedimiento realizado y los resultados obtenidos. Luego se
realizaron pruebas preliminares en donde se llevo a cabo la estandarizacin de los inculos,
realizando diluciones de un cultivo de 24 horas y comparando con el tubo 1 de la escala de Mac
farland para E.coli ATCC 8739, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Enterobacter aerogenes
ATCC 13048, posteriormente se estandariz la tcnica filtracin por membrana con tres muestras
de tres replicas cada una y despus de obtener los resultados esperados (30 UFC\ml
aproximadamente) se realiz la metodologa para la validacin de la tcnica filtracin por membrana,
analizando diez muestras de agua potable diferentes, con tres replicas para cada una, mediante
las cuales se realizaron recuentos de cada uno de los microorganismos con los cuales fueron
contaminadas las muestras de agua, bajo condiciones alternadas, variando los analistas y los das
de anlisis; se llevo acabo el anlisis de una prueba estndar (agua estril para inyeccin, inoculada
con cada uno de los microorganismos a evaluar Escherchia coli ATCC 8739, Salmonella
typhimurium ATCC 14028 y Enterobacter aerogenes ATCC 13048), una solucin de prueba (agua
potable inoculada con los microorganismos utilizados como prueba: Escherchia coli ATCC 8739,
Salmonella typhimurium ATCC 14028 y Enterobacter aerogenes ATCC 13048), un control negativo
(agua potable con tiosulfato de sodio al 1% y sin inocular) y una prueba combinando la muestra de
agua con los microorganismos a evaluar (agua potable + Escherchia coli ATCC 8739 + Salmonella
typhimurium ATCC 14028; agua potable + Escherichia coli ATCC 8739 + Enterobacter aerogenes
ATCC: 13048; agua potable + Escherichia coli ATCC 8739 + Enterobacter aerogenes ATCC 13048
) de esta manera se obtuvieron, 30 recuentos por da para un total de 300 recuentos por analista,
por lo tanto se obtuvieron 600 datos en total, por los dos analistas, luego de obtener todos los datos,
se procedi a realizar el anlisis y se determinaron los parmetros cuantitativos para la validacin
del mtodo.
La metodologa se llevo a cabo con muestras de agua potable, provenientes del acueducto de
Bogot que cumplen con las especificaciones descritas segn la resolucin 2115 de 2007
Finalmente se logro concluir que el mtodo es reproducible y repetible, tambin se logro establecer
que el mtodo es especifico para la demostracin de coliformes Fecales, debido a que para este
grupo de microorganismos indicadores se logro obtener un porcentaje de recuperacin superior al
96%, comparado con los otros microorganismos.
ABSTRACT
The corroboration undertook in this examination paper pretended to utilize the agar chromocult
as an alternative method in the detection of indicating micro-organisms of drinking waters
quality thanks to its handling capability and short period ability to recuperate in order to reduce
costs and to develop more efficient and safer procedures at INTHERPHARM DE COLOMBIA
Ltda. laboratories, based on the USP 31, and developing the montage which warranties reliable
results and a decrease in repetition risks which generate an increase in analysis time and costs.
As a start up, a bibliographic revision and compilation took place in order to obtain the required
amount of information. The tune-up and maintenance of the equipment was also verified aiming
to warranty the undertook procedure and the obtained results. Then, some preliminary testing
were developed for the standardization of the inocules, also effecting dilutions of a 24 hours
crop with Pipe 1 of Mac Falrlands scale for E.coli ATCC 8739, Salmonella typhimurium ATCC:
14028, Enterobacter aerogenes ATCC: 13048. Later, the set up of the membrane filtration
technique was standardised analyzing ten different samples of drink water with three replicas
for each one in which it was determined the keeping of the contaminating micro-organisms in
the membrane filters with a pore size of 0.45um under alternated conditions, with variation of
annalists and days; it also took place the analysis of and standard test (sterilized water,
inoculated with each of the micro-organisms to be evacuated Escherchia coli, Salmonella
typhimurium y Enterobacter aerogenes), a test solution (drinking water inoculated with the
micro-organisms used for the test Escherchia coli, Salmonella typhimurium y Enterobacter
aerogenes ), a negative control (Drinking water with 1% thiosulfate without inoculation) and a
test combining the sample water with the micro-organisms to be examined (drinking water +
Escherchia coli + Salmonella typhimurium; drinking water + Escherichia coli + Enterobacter
aerogenes; drinking water + Escherichia coli + Enterobacter aerogenes ) in which way 30
recounts were obtained for an aggregated amount of 310 recounts per analyst, amounting to a
total data of 620, between the two analysts. After obtaining all the data, the next step consisted
in determining the quantitative parameters for the validation of the method.
The methodology was undertaken with drinking water samples taken from Bogotas water
purification plant which follow the specifications prescribed by Resolution 2115/07. Finally, it
was possible to conclude that the utilized method is reproducible and repeatable; in addition, it
was ascertained that the method is specific for the demonstration of fecal coliforms, ought to the
fact that for this group of indicating micro-organisms it was possible to obtain a recuperation
percentage superior to 96%, compared with other micro-organisms.
TABLA DE CONTENIDO
PAG.
1. INTRODUCCIN..1
2. MARCO TERICO Y REVISIN DE LITERATURA..2
2.1. AGUA POTABLE.2
2.1.1 Caractersticas del agua potable..3
2.1.2. Anlisis microbiolgico del agua..3
2.1.3. Proceso de potabilizacin del agua.4
2.1.3.1 Inactivacin del cloro en el agua potable4
2.2. MICROORGANISMOS INDICADORES DE LA CALIDAD DEL AGUA.5
2.2.1. Coliformes Totales..5
2.2.1.1. Enterobacter aerogenes..6
2.2.2. Coliformes Fecales....7
2.2.2.1. Escherichia coli..8
2.2.3. Salmonella spp9
2.3. TCNICA DE FILTRACIN POR MEMBRANA PARA DETECCIN DE COLIFORMES
TOTALES Y FECALES10
2.3.1. Filtros de membrana..11
2.3.2. Tipos de filtros de membrana...12
2.3.2.1. Filtros de profundidad..12
2.3.2.2. Filtros de superficie o membrana..12
2.3.2.2.1. Membrana de nitrato de celulosa..13
2.3.2.2.2. Membrana de acetato de celulosa...13
2.4. MEDIOS DE CULTIVO.14
2.4.1. Medios cromgenos.15
2.4.1.1. Medio Chromocult para Coliformes..15
2.4.1.2. Ventajas de los medios cromgenos frente a los
convencionales...16
2.5. VALIDACIN..16
2.5.1. Parmetros de desempeo de la validacin ..............17
2.5.1.1. Especificidad.17
2.5.1.2. Eexactitud 18
2.5.1.3. Precisin ......18
2.5.2 Datos requeridos para la validacin....18
I
2.6. VALIDACIN Y SELECCIN DE MTODOS DE ENSAYO
MICROBIOLGICO.19
2.6.1. Pruebas cualitativas para detectar la presencia o
Ausencia de microorganismos.20
2.6.2. Pruebas cuantitativas para microorganismos..20
2.6.3 Mtodos normalizados..21
2.6.4. Mtodos desarrollados por el laboratorio..21
2.6.5. Mtodos normalizados con modificaciones..21
2.7. PRERREQUISITOS DE LA VALIDACIN21
2.7.1. Monitoreo ambiental.21
2.7.2. Escala de Mc Farland..24
2.7.3. Medios de cultivo..24
2.7.3.1. Esterilizacin del medio de cultivo24
2.7.3.2. Incubacin25
2.7.3.3. Control de autoclave..25
2.7.4. Documentacin.26
2.7.5. Desarrollo del protocolo de validacin..26
2.7.6. Informe Final de Validacin27
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN..28
3.1. FORMULACIN DEL PROBLEMA....28
3.2. JUSTIFICACIN DEL PROBLEMA...28
4. OBJETIVOS..29
4.1 OBJETIVO GENERAL...29
4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS.29
5. MATERIALES Y MTODOS.30
5.1 DISEO EXPERIMENTAL.....30
5.2. POBLACIN DE ESTUDIO Y MUESTRA POBLACION DE ESTUDIO..30
5.3. VARIABLES DE ESTUDIO..31
5.4. PRUEBAS PRELIMINARES32
5.4.1. Recopilacin de la informacin...32
5.4.2. Calibracin y mantenimiento de equipos..32
5.4.3. Preparacin del inoculo32
5.4.4. Prueba de esterilidad de los medios de cultivo ..33
5.4.5. Prueba de promocin de crecimiento33
5.5. MATERIALES Y METODOS EN LA EVALUACION DE PARAMETROS
CUANTITATIVOS...34
5.5.1. Materiales..34
5.5.2. Microorganismos Estndar.35
5.5.3. Mtodos.35
5.5.3.1. Control de ambiente, superficie y operarios.....35
II
5.5.3.2. Control negativo-muestra..36
5.5.3.3. Prueba Estndar37
5.5.3.4. Solucin de prueba38
5.5.3.5. Solucin de prueba combinando los microorganismos39
5.6. VARIABLES DE ESTUDIO..41
5.7. RECOLECCION DE LA INFORMACION..41
5.8. ANALISIS DE LA INFORMACION.42
5.8.1. Anlisis de datos...42
5.8.1.1. Media....42
5.8.1.2. Desviacin Estndar..42
6. RESULTADOS.44
6.1. ESTANDARIZACION DE LOS INOCULOS DE TRABAJO..44
6.2. VERIFICACION DE PROGRAMA DE CALIBRACION Y MANTENIMIENTO
DE EQUIPOS.46
6.3. PRUEBAS PRELIMINARES46
6.3.1. Prueba de Esterilidad de los medios de cultivo...46
6.3.2. Prueba de Promocin de crecimiento47
6.3.3. Controles microbiolgicos durante el proceso.47
III
LISTA DE TABLAS
PAG.
TABLA 1. Caractersticas fsicas del agua potable...3
TABLA 2. Caractersticas qumicas de sustancias presentes en el agua.3
TABLA 3. Caractersticas microbiolgicas del agua.4
TABLA 4. Comparacin de pruebas bioqumicas de E. coli y E. aerogenes...7
TABLA 5. Caractersticas de coliformes totales y E. coli.9
TABLA 6. Aplicaciones de los filtros de membrana14
TABLA 7. Datos requeridos para la validacin19
TABLA 8. Parmetros de validacin por tipo de prueba microbiolgica.20
TABLA 9. Lmites microbiolgicos ambientales, rea de recuentos de
INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda...22
TABLA 10. Lmites microbiolgicos de superficies, rea de recuentos de
INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda.23
TABLA 11. Lmites microbiolgicos de dotacin guantes, rea de recuentos de
INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda....23
TABLA 12. Caractersticas morfolgicas y enzimticas de los microorganismos evaluados..41
TABLA 13. Estandarizacin de inculos: Escherichia coli ATCC 8739, Enterobacter aerogenes
ATCC: 13048 y Salmonella typhimurium ATCC 14028 Analista 1.....44
TABLA 14. Estandarizacin de inculos: Escherichia coli ATCC 8739, Enterobacter aerogenes
ATCC 13048 y Salmonella typhimurium ATCC 14028 Analista 2...45
TABLA 15. Programa de Calibracin y mantenimiento de los equipos utilizados
en la validacin..46
TABLA 16. Prueba de promocin de crecimiento......47
TABLA 17. Resultados del control microbiolgico de ambiente, superficie y analista durante
los ensayos realizados. Analista 1 .47
TABLA 18. Resultados del control microbiolgico de ambiente, superficie y analista durante
los ensayos realizados. Analista 2. 48
TABLA 19. Resutados control Negativo. Analista 1.....49
TABLA 20. Resultados control Negativo. Analista 2....49
TABLA 21. Porcentaje de recuperacin de E. coli ATCC 8739en la solucin de
prueba (analista 1) .....50
TABLA 22. Porcentaje de recuperacin de E. aerogenes ATCC: 13048 en la solucin de
prueba (Analista 1).52
TABLA 23. Porcentaje de recuperacin de S. typhimurium ATCC 14028 en la solucin de
prueba (Analista 1)...54
TABLA 24. Porcentaje de recuperacin de E. coli ATCC 8739 en la solucin de prueba
IV
(Analista 2)...56
V
LISTA DE FIGURAS
PAG.
FIGURA 1. Fuente de agua..2
FIGURA 2. Enterobacter aerogenes..6
FIGURA 3. E. coli en agar EMB..9
FIGURA 4. Salmonella en agar XLD....10
FIGURA 5. Trampa de filtracin....11
FIGURA 6. Filtros de profundidad.12
FIGURA 7. Filtros de membrana o superficie..13
FIGURA 8. Preparacin de inoculos ....33
FIGURA 9. Diagrama de flujo de Control negativo-muestra.36
FIGURA 10. Diagrama de flujo de la Prueba estndar..37
FIGURA 11. Diagrama de flujo de la solucin de Prueba 38
FIGURA 12. Diagrama de flujo de la solucin de prueba combinando los
Microorganismos.40
FIGURA 13. Porcentaje de recuperacin de E. coli (analista 1)..51
FIGURA 14. Porcentaje de recuperacin de E. aerogenes (analista 1).53
FIGURA 15. Porcentaje de recuperacin de S. typhimurium (analista 1).....55
FIGURA 16. Porcentaje de recuperacin de E. coli (analista 2)...57
FIGURA 17. Porcentaje de recuperacin de E. aerogenes (analista 2).59
FIGURA 18. Porcentaje de recuperacin de S. typhimurium (analista 2)..61
FIGURA 19. Prueba de promocin de crecimiento de E. coli en agar chromocult....68
FIGURA 20. Prueba de promocin de crecimiento de E. aerogenes en agar chromocult..68
FIGURA 21. Prueba de promocin de crecimiento de S. typhimurium en agar chromocult69
FGURA 22. Solucin de prueba: E coli....69
FIGURA 23. Solucin de prueba S. typhimurium69
VI
VII
1. INTRODUCCIN
El agua es una de las principales fuentes de vida en nuestro planeta, son infinitos los
usos del agua, para consumo humano, para labores domesticas y en la industria
farmacutica, es utilizada en las diferentes actividades como el lavado de materiales,
utensilios, reas accesorias, de anlisis, y como base para la preparacin de
medicamentos y/o cosmticos, en este caso el agua debe cumplir unos estndares mas
estrictos y su sistema de purificacin debe ser muy eficiente, para obtener un alto grado
de pureza y estar libre de contaminantes que puedan afectar la calidad del producto
terminado y ms an, la salud del paciente a quien se le suministren los medicamentos
elaborados. (Walter, J. 2003).
Es por esto, que los laboratorios de anlisis microbiolgico, buscan validar las tcnicas
desarrolladas para el anlisis de este tipo de aguas, que en la mayora de los casos
buscan detectar bacterias coliformes totales y fecales, mediante la tcnica de filtracin
por membrana, tcnica que es aceptada y utilizada a nivel nacional e internacional por
entes reguladores, debido a su fcil manejo y empleo y de esta manera contribuir a que
el agua suministrada al consumo humano sea de excelente calidad y que su sistema de
potabilizacin logre eliminar la mayor cantidad de organismos contaminantes que
puedan llegar a afectar la salud de los consumidores. (Walter, J. 2003).
1
2. MARCO TERICO Y REVISIN DE LITERATURA
Es aquella que por cumplir las caractersticas fsicas, qumicas y microbiolgicas, es apta
para el consumo humano; se utiliza en bebida directa, en la preparacin de alimentos o
en la higiene personal (Resolucin 2115, 2007).
Fuente: quincher.wordpress.com/2008/06/30/el-agua/
2
2.1.1 Caractersticas del agua potable
3
Tabla 3. Caractersticas microbiolgicas del agua potable
El cloro fue descubierto en 1774 por el qumico sueco Karl Wihellm Scheele como
producto de la reaccin entre cido hipoclorhdrico y dixido de manganeso. Es una
sustancia tan energtica y activa que solo existe en la naturaleza en combinacin con
otros elementos, es aplicado en exceso de manera que pueda satisfacer la demanda
para oxidar compuestos como nitritos, iones de hierro, plomo, sulfuros y eliminar
bacterias, de manera que as se reste una cantidad de cloro residual en los ductos del
agua; parte de este cloro residual queda para continuar desinfectando el agua desde que
sale de la planta de tratamiento hasta que llega al consumidor.
Debe ser aplicado en el agua a tratar en forma gaseosa o como un slido ionizado; al ser
adicionado al agua, este reacciona con el amonaco y materia orgnica formando
cloraminas y compuestos rgano clorados, los cuales son reducidos a un valor mnimo y
queda como resultado el cloro residual libre (Ocasio, N et al., 2004).
Segn la resolucin 2115 de 2007, el valor aceptable del cloro residual en cualquier
punto de la distribucin del agua potable, debe ser comprendido entre 0.3 y 2.0 mg/L.
4
2.2. MICROORGANISMOS INDICADORES DE LA CALIDAD DEL AGUA
Las bacterias coliformes, son el principal indicador de la adecuacin del agua para uso
domstico, industrial, o de otro tipo. La experiencia ha demostrado que la densidad del
grupo de los coliformes es un indicador del grado de contaminacin y por tanto, de la
calidad sanitaria (APHA - AWWA - WPCF, 2000)
Desde hace tiempo, se reconoce que los organismos del grupo coliforme son un buen
indicador microbiano de la calidad del agua potable, debido principalmente a que son
fciles de detectar y enumerar en el agua. La presencia de E. coli en muestras de agua
potable, indica la existencia de fallas en la eficacia de tratamiento de aguas, integridad,
sistema de distribucin y por tanto es una evidencia de contaminacin de diferentes
orgenes: suelo, superficies de agua dulce y tracto digestivo (Organizacin
Panamericana de la Salud, 1987)
El grupo coliforme se define como todas las bacterias Gram negativas en forma bacilar
que fermentan la lactosa a temperatura de 35 a 37 C, produciendo cido y gas (CO2) en
24 horas, aerobias o anaerobias facultativas, son oxidasa negativa, no forman esporas y
presentan actividad enzimtico de la B-galactosidasa (Ministerio de salud, 1998). Entre
ellos se encuentran los diferentes Escherichia coli, Citrobacter, Enterobacter y Klebsiella.
(Organizacin Panamericana de la Salud, 1987)
5
D- Galactosidasa. Ambos monosacridos (la galactosa despus es transformada en
glucosa por reacciones bioqumicas) posteriormente son metabolizados a travs del ciclo
glicoltico y ciclo del citrato. Los productos metablicos de estos ciclos son cidos y/o
CO2. Para la determinacin de la B- Galactosidasa se utilizan medios cromgenos tales
como chromocult. (MANAFI, 1998).
Fuente: www.wales.nhs.uk/sites3/page.cfm?orgid=379...
6
Tabla 4. Comparacin de pruebas bioqumicas de E.coli y E. aerogenes
Prueba Bioqumica E.coli Enterobacter aerogenes
Produccin de Indol + -
Rojo de Metilo + -
Voges Proskauer - +
Citrato - +
Lisina descarboxilasa +
Hidrlisis de la esculina +
Utilizacin de malonato - +
Arginina deshidrolasa +
Fuente: Gamazo .C, et al. 2005
Los coliformes fecales integran el grupo de los coliformes totales, pero se diferencian de
los dems microorganismos que hacen parte de este grupo, en que son indol positivo, su
rango de temperatura ptima de crecimiento es muy amplio (hasta 45C) y son mejores
indicadores de higiene en alimentos y en aguas, la presencia de estos indica presencia
de contaminacin fecal de origen humano o animal, ya que las heces contienen dichos
microorganismos, presentes en la flora intestinal y de ellos entre un 90% y un 100% son
E. coli mientras que en aguas residuales y muestras de agua contaminadas este
porcentaje disminuye hasta un 59%. (GOMES; 1999).
7
2.2.2.1 Escherichia coli
Originalmente llamada Bacterium comune, fue aislada por primera vez en 1985 a partir
de heces de nios; son bacilos estrechos de 1,1 a 1,5 m de dimetro y de 2 a 6 m de
longitud, se encuentran solos o en parejas, Gram negativos, mviles por flagelos
pertricos o inmviles, anoxignicos facultativos, poseen metabolismo respiratorio y
fermentativo. (LEMINOR, 1994).
E. coli es la nica especie dentro de las Enterobacterias que presenta la enzima B-D-
Glucoronidasa, que degrada el sustrato 4-metilumberiferil--D-glucornico (MUG),
formando 4-metilumbeliferona, este producto tiene la propiedad de emitir fluorescencia
azul/verde cuando se ilumina con luz ultravioleta. (MANAFI, 1998).
8
Figura 3. Escherichia coli en Agar EMB
Fuente: science.kukuchew.com/category/microbiology/
9
fotosensibles y se destruyen a 60C en unos 15 20 minutos, siendo incapaces de
crecer por debajo de los 7 u 8C (Doyle; et al.; 1997)
Fuente: bioinfo.bact.wisc.edu/.../Salmonella.html
10
El equipo de soporte del filtro (Fabricado en vidrio, plstico resistente a autoclave,
porcelana o acero inoxidable) consiste en un embudo, unido a una base por un artefacto
de cierre que se mantiene en su lugar mediante una fuerza magntica. El diseo debe
permitir que la membrana se mantenga con seguridad sobre la placa porosa, sin que
sufra dao mecnico, de manera que todo el lquido pase a travs de la membrana
durante la filtracin. (APHA, 1992)
Fuente. fbio.uh.cu/educacion_distancia/laboratorios_virtuales/Laboratorio%20Virtual%20
micro.pps
Se deben utilizar filtros de membrana con un dimetro de poro que permita una completa
retencin de las bacterias coliformes. Solo se emplean filtros en los que se haya
comprobado, mediante una adecuada prueba de control de calidad y por garanta del
fabricante, que permita una retencin de las bacterias coliformes. (APHA, 1992).
Se debe tener en cuenta, que dichos filtros deben ser libres de qumicos susceptibles de
inhibir el crecimiento y desarrollo bacteriano, que posean una velocidad de filtracin
satisfactoria, ausencia de influencias significativas sobre el pH del medio (no mas de +/-
0.2 unidades) y que no produzcan un aumento en el nmero de colonias confluentes o
expansivas, en comparacin con los filtros de membrana de control (APHA, 1992).
El mecanismo de accin es muy simple: retienen todas las partculas que posean un
tamao mayor que los poros, estos poros quedan formados por los espacios que
11
resultan de la superposicin de las fibras de las distintas capas que forman la
membrana, as algunas partculas de menor tamao son retenidas por otros mecanismos
como las fuerzas de Van der Waals o por la suma de partculas retenidas previamente
(PEARCE, 2007)
Fuente: http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/esterilfilt.pdf
12
Figura 7. Filtros de membrana o superficie.
Fuente: http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/esterilfilt.pdf
Tienen una estructura de poro muy uniforme, lo que asegura una excelente retencin y
un ptimo crecimiento microbiolgico en muestras de agua, bebidas, frmacos
(PEARCE, 2007).
13
Tabla 6. Aplicaciones de los filtros de membrana
Filtros de nitrato de celulosa Filtros de acetato de celulosa
Filtracin de aguas Esterilizacin de muestras de protenas
Anlisis microbiolgico Esterilizacin de fluidos biolgicos
Anlisis gravimtrico Filtracin de alcoholes
Anlisis cualitativos de partculas Filtracin de aceites
Esterilizacin de muestras Filtracin de muestras de aguas
Determinacin de protenas
Identificacin de cidos nucleicos
Pre filtracin de muestras
Clarificacin de muestras
Fuente. http://www.fanoia.com/filterlab/micro-8-15.pdf
14
productividad. Su productividad se refiere a la formulacin bsica del medio de tal forma
que favorezca el crecimiento de microorganismos con las caractersticas macroscpicas
y microscpicas esperadas. (Tortora, G. 1993).
15
2.4.1.2. Ventajas de los medios cromgenos frente a los convencionales.
La identificacin bacteriana se basa generalmente en una extensa batera de pruebas
bioqumicas convencionales, que permiten determinar sus caractersticas de desarrollo y
de metabolismo; estos mtodos requieren una colonia bacteriana pura, tomada de una
placa de aislamiento primario, su siembra en diferentes medios y su posterior lectura e
interpretacin. En la mayora de los casos el diagnstico lleva tiempo y varios pasos de
manipulacin.
2.5. VALIDACIN
El proceso de validacin se inicia con las actividades de pre validacin, las cuales
consisten en la recopilacin de la informacin relacionada con el proceso, en la revisin
de las evaluaciones de riesgos, la calificacin tcnica a las instalaciones locativas y a los
equipos, existencia de procedimientos para las tareas u operaciones y el entrenamiento
a los trabajadores. Posteriormente se procede a elaborar los protocolos en donde se
define los objetivos especficos de las evaluaciones a efectuar, las responsabilidades de
cada una de las reas involucradas en la validacin, se establecen las variables de
16
inters que se quieren monitorear y el plan de monitoreo respectivo, adems de incluir
los criterios de aceptacin que no son otra cosa que la comparacin de los resultados
con los niveles permisibles o los resultados esperados. (Estrada C, 1999)
2.5.1.1. Especificidad
Capacidad de un mtodo de determinar inequvocamente un analto/parmetro en
presencia de los otros componentes de la muestra. La especificidad puede ser afectada
por la presencia de interferentes (como precursores de sntesis, impurezas, productos de
degradacin, entre otros). (OGA-016,2004).
17
2.5.1.2. Exactitud
La exactitud, es la cercana de un resultado al valor verdadero por comparacin con los
valores de referencia de un material caracterizado (material de referencia). Los valores
de referencia deberan ser trazables a las normas internacionales; los materiales de
referencia certificados (MRC) generalmente se aceptan como trazables. Es ideal que el
material de referencia sea de matriz natural lo mas similar posible a las muestras de
inters. (RODRGUEZ, 2004). Usualmente, la exactitud se expresa como el porcentaje
de recuperacin de los microorganismos mediante el mtodo de validacin. (USP 31,
2008).
2.5.1.3. Precisin
Las dos medidas ms comunes de la precisin, que generalmente se define en trminos
de desviacin estndar o el coeficiente de variacin (desviacin estndar relativa) son la
repetibilidad y la reproducibilidad. La repetibilidad, da una idea de la variabilidad que se
espera cuando un proceso es aplicado por un solo analista en un equipo durante un
periodo corto (anlisis por duplicado). La reproducibilidad, es la que representa la
variabilidad que se obtiene cuando un proceso es analizado por diferentes analistas, lo
cual tiene un valor ms amplio. La precisin intermedia y ms til en casos especficos
se obtiene cuando se evala reproducibilidad entre analistas en un mismo laboratorio.
(RODRGUEZ, 2004).
Los requisitos de las pruebas farmacopeicas varan desde valoraciones analticas muy
rigurosas hasta evaluaciones subjetivas de atributos. Considerando esta amplia
variedad, es lgico que diferentes procedimientos de prueba requieran diferentes
esquemas de validacin. Las categoras ms habituales para las que se exigen datos de
validacin son:
Categora I: Los procedimientos analticos para la cuantificacin de componentes
principales de frmacos a granel o ingredientes activos (incluyendo conservantes) en
productos farmacuticos terminados.
Categora II: Los procedimientos analticos para la determinacin de impurezas en
frmacos a granel o productos de degradacin en productos farmacuticos terminados.
Estos procedimientos incluyen anlisis cuantitativos y pruebas de lmite.
Categora III: Los procedimientos analticos para la determinacin de las caractersticas
de desempeo.
Categora IV: Pruebas de identificacin
18
Para cada categora, se requiere de diferente informacin analtica. La validez de un
procedimiento analtico puede verificarse slo mediante estudios de laboratorio. Por lo
tanto, la documentacin final de dichos estudios constituye un requisito bsico para
determinar si un procedimiento es adecuado para sus aplicaciones previstas. (USP 31,
2008)
Para decidir si un mtodo es apropiado o no, se debe tener en cuenta: si ese mtodo es
aplicable a la muestra analizar a analizar, la cantidad de muestra necesaria para el
ensayo, si usando esta metodologa se puede evaluar el cumplimiento de las exigencias
requeridas para el analto. El laboratorio debe elegir los mtodos que mejor se adecuen
a sus objetivos y debe documentarlos debidamente. (GUARNIZO, 2005).
19
Existen tipos principales de determinaciones propias de las pruebas microbiolgicas,
entre las que se incluyen: Pruebas para determinar si los microorganismos estn
presentes en una muestra y pruebas para cuantificar el nmero de microorganismos.
(USP 31, 2008)
Un laboratorio debe validar los mtodos no normalizados, los mtodos que disea o
desarrolla, los mtodos normalizados empleados fuera del alcance previsto, as como las
ampliaciones y las modificaciones de los mtodos normalizados, para confirmar que son
aptos para el fin previsto. La validacin debe ser tan amplia como sea necesario para
satisfacer las necesidades del tipo de aplicacin o del campo de aplicacin dados. El
laboratorio debe registrar los resultados obtenidos, el procedimiento utilizado para la
20
validacin y una declaracin sobre la aptitud del mtodo para el uso previsto. (ENAC,
2002).
El laboratorio debe confirmar que puede operar correctamente los mtodos normalizados
antes de introducir los ensayos. Si el mtodo normalizado cambia se debe repetir la
confirmacin.
Son mtodos tomados de una norma, pero con alguna modificacin, tal es el caso de
una filtracin con membrana utilizando otro medio de cultivo diferente; aqu se debe
realizar lo mismo a como si se estuviera realizando la validacin de un mtodo
desarrollado por el laboratorio, debido a que ya existe una modificacin sobre el mtodo
normalizado (G-ENAC. 1997).
21
El programa de muestreo para monitoreo ambiental incluye:
22
Tabla 10. Lmites microbiolgicos superficies, rea de recuentos
INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda.
No. de microorganismos
Superficie del rea / No. de microorganismos viables hongos y levaduras
2
25cm viables bacterias UFC/ 25 cm2
UFC/ 25 cm2
En el caso de algunos equipos que no se pueden esterilizar por los diversos mtodos
como: Equipos elctricos y electrnicos, balanzas, bateras, etc.; la desinfeccin de estos
equipos debe ser ms rigurosa debido a su potencial de contaminacin con un gran
nmero de microorganismos. (CARLENTON, 1999)
23
2.7.2. Escala de Mc Farland
Cada uno de los tubos del patrn de acuerdo con la turbidez, representa un nmero de
bacterias, para suspensiones de igual turbidez, que ha sido determinado por recuentos
de colonias. De esta forma al comparar una emulsin de bacterias con el tubo del patrn
de Mc farland que ms se asemeje se puede saber aproximadamente el numero de
bacterias en la emulsin (ESCOBAR, 2002)
Los medios de cultivo seleccionados debern ser evaluados con la prueba de promocin
de crecimiento de bacterias, mohos y levaduras. Las unidades de promocin de
crecimiento deben ser inoculadas con un nmero menor de 100 UFC. Si las pruebas de
promocin de crecimiento fallan, se debe investigar el origen de cualquier contaminacin
encontrada durante la simulacin y repetir la prueba. (ROGANTI, 2004)
24
Despus de la esterilizacin del medio este debe ser manejado realizando las mismas
practicas usadas para las operaciones de produccin rutinarias. Algunas empresas
siguen algunos pasos adicionales como la preincubacin del medio antes de empezar la
corrida de la prueba, para asegurarse de la esterilidad del medio antes del envase de
este. (CARLENTON, 1999)
2.7.3.2. Incubacin
Los medios se deben incubar en condiciones adecuadas de modo que se puedan
evidenciar los microorganismos que podran de otra manera ser difciles de cultivar. Se
deben establecer las condiciones de incubacin de acuerdo con las siguientes pautas
generales:
25
certificados de compra), ubicacin, requisitos de servicios bsicos y cualquier
caracterstica de seguridad del equipo (fcil acceso a todos los planos, manuales, listas
de repuestos, direccin del vendedor y numero telefnico de contacto).
2.7.4. Documentacin
26
Cualquier control o condicin especial que se coloque en los procesos
precedentes durante la validacin
Parmetros de proceso que se van a monitorear, y mtodos para controlar y
monitorear
Caractersticas de producto o proceso que se van a monitorear y mtodos para
monitorear
Mtodos estadsticos para recoleccin y anlisis de datos
Este informe resume y presenta todos los protocolos, resultados y deriva conclusiones
relacionadas con el estado de validacin del proceso. Debe ser revisado y aprobado por
el equipo de validacin y la administracin. (RODRGUEZ. 2004)
27
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN
La validez en los resultados de los anlisis microbiolgicos se ven afectados por factores
como: La preparacin del inculo, la naturaleza de los microorganismos utilizados, las
condiciones especficas de la prueba, las condiciones de recuperacin, entre otros. Por
lo anterior, todos los mtodos y especialmente los relacionados con el anlisis
microbiolgico del agua potable, dada la importancia como materia prima, ingrediente y
disolvente en el procesamiento, formulacin, fabricacin de productos farmacuticos y
para el consumo humano, deben ser validados.
Por esta razn, en este trabajo de grado se demuestra que el mtodo de filtracin por
membrana utilizado por el laboratorio INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda, para la
deteccin de coliformes totales y fecales en agua potable utilizando agar chromocult, es
confiable, reduce costos y tiempo.
28
4. OBJETIVOS
29
5. MATERIALES Y MTODOS
Las cepas utilizadas corresponden al cuarto pase, (cepas de trabajo) segn POE DCM
013 MANEJO DEL CEPARIO (Codificacin correspondiente al Sistema de Gestin de
Calidad de INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda.)
30
13048), una solucin de prueba (agua potable inoculada con los microorganismos
utilizados como prueba: Escherchia coli ATCC 8739, Salmonella typhimurium ATCC
14028 y Enterobacter aerogenes ATCC 13048 ), un control negativo (agua potable con
tiosulfato al 1% y sin inocular) y una prueba combinando la muestra de agua con los
microorganismos a evaluar (agua potable + Escherchia coli ATCC 8739 + Salmonella
typhimurium ATCC 14028); (agua potable + Escherichia coli ATCC 8739 + Enterobacter
aerogenes ATCC 13048 ) y (agua potable + Salmonella typhimurium ATCC: 14028 +
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 ) de esta manera se obtienen, 30 recuentos por
da para un total de 300 recuentos por analista, por lo tanto se obtienen 600 datos en
total por los dos analistas, para determinar posteriormente parmetros cuantitativos para
la validacin del mtodo.
Precisin
Repetibilidad
Reproducibilidad
Especificidad
Exactitud
31
5.4. PRUEBAS PRELIMINARES
Para obtener toda la informacin que puede influir en la validez de la prueba se realiza
una revisin de los siguientes factores: personal, equipos e instalaciones, medios de
cultivos utilizados en la prueba, reactivos, entre otros.
32
de 100UFC\ml, para de esta manera iniciar la estandarizacin del inoculo con el cualk se
trabajar en la diferentes pruebas realizadas en la validacin; segn POE - DCM 043
PREPARACIN Y MANEJO DE INCULOS A PARTIR DE LA ESCALA DE MC
FARLAND (Codificacin correspondiente al Sistema de Gestin de Calidad de
INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda.).
1 2 3 4 5
Cultivo
de 24 Patrn 9.0 9.9 9.0 9.0
9.9 ml
horas 9.0 ml ml ml ml
ml
-6 -7 -8
-2 -4 3X10 3X10
3X10
-1
3X10 3X10 3X10
UFC/ml UFC/ml UFC/ml UFC/ml UFC/ml
UFC/ml
33
evidenciar las caractersticas tpicas de crecimiento de cada microorganismo, tambin se
realizan pruebas cuantitativas para evidenciar la recuperacin de las colonias, esta fase
de la prueba se realiza en la preparacin de cada inoculo de trabajo; en la cual se
inocula 0.1 ml de cada suspensin a utilizar (tubo # 5 que contiene una concentracin de
30 UFC\ml), tanto en agar chromocult, como en agar casoy.
5.5.1. Materiales
Tiosulfato de Sodio al 0.1N
Colorantes de tincin de Gram.
Reactivo de Kovacks
Aceite de Inmersin
Alcohol al 70%
Alcohol al 96%
Frascos Schott por 250ml
Frascos Schott por 500ml
Pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10ml
Cajas de petri desechables estriles
Bolsas de polietileno resistentes al calor
Membranas para filtracin con poro de 0,45 m y dimetro de 47mm
Guantes estriles
Pera pipeteadora
Agar Chromocult
Agar Casoy
Cepa de Escherichia coli ATCC 8739
Cepa de Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Cepa de Salmonella typhimurium ATCC 14028
Papel kraft
Pinzas de acero inoxidable estriles
34
Asa redonda
Asa recta
Cabina de flujo laminar horizontal
Microscopio
Incubadora de 20-25C
Incubadora de 30-35C
Equipo de filtracin
Bomba de vaco
Contador de colonias
Mangueras
Tijeras estriles
Vasos de filtracin
Autoclave
5.5.3 Mtodos
35
5.5.3.2. Control negativo - muestra
Se toma una muestra de 100 ml de agua potable en frasco schott estril de 250 ml segn
I DCM 007 MUESTREO DE AGUA PARA EL CONTROL MICROBIOLOGICO
procedente del rea de lavado del laboratorio INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda.
Posteriormente se lleva al rea de recuentos y bajo cabina de flujo laminar se adiciona
tiosulfato de sodio al 1% (para inactivar el cloro procedente del proceso de
potabilizacin) y se deja actuar durante 30 minutos. A continuacin se adiciona la
muestra (100 ml) a la copa de filtracin y se hace pasar a travs de la membrana y una
vez filtrado todo el lquido se coloca la membrana sobre la superficie de una caja petri
con agar chromocult y se lleva a incubar durante 24 horas a una temperatura entre 30-
35C. Este procedimiento se realiza tres veces, por cada operario.
Control Negativo
Armar equipo de
filtracin
Fuente: Autor
36
5.5.3.3. Prueba estndar
Para la prueba estndar, a 100 ml de agua estril para inyeccin se adiciona 1 ml de la
dilucin 3x10-8 (30 UFC/ml) para cada uno de los microorganismos utilizados:
Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Escherichia coli ATCC 8739 y Salmonella
typhimurium ATCC 14028, para cada microorganismo por separado; seguidamente se
filtra y se coloca la membrana sobre la superficie de agar plate count, se lleva a incubar
durante 24 horas a una temperatura entre 30-35C, luego de este tiempo se realiza el
recuento, se evidencian las caractersticas tpicas de crecimiento y se realiza coloracin
de Gram a las colonias; este procedimiento se realiza por triplicado.
Prueba estndar
(Control positivo) Armar equipo de
filtracin
Frascos schott con 100 ml de agua estril para inyeccin cada uno
Fuente: Autor
37
5.5.3.4. Solucin de prueba
Para llevar a cabo la solucin de prueba, se toma una muestra de 100 ml de agua
potable en frasco schott estril de 200 ml y se adiciona tiosulfato de sodio al 1% (para
inactivar el cloro procedente del proceso de potabilizacin) y se deja actuar durante 30
minutos, transcurrido el tiempo, se adiciona 1 ml de la dilucin 3x10-8 (30 UFC/ml), de los
microorganismos a evaluar por separado: Enterobacter aerogenes ATCC 13048,
Escherichia coli ATCC 8739 y Salmonella typhimurium ATCC 14028; este procedimiento,
se realiza por separado para cada uno de los microorganismos utilizados y por triplicado.
38
Filtrar 100 ml, Filtrar 100 ml, Filtrar 100 ml,
tres veces tres veces tres veces
Informar resultados
Fuente: Autor
39
FIGURA 12. Diagrama de flujo de la solucin de prueba combinando los
microorganismos
Realizar la prueba
de Indol y
Realizar recuento coloracin de Gram
Informar resultados
Fuente: Autor
40
5.6 VARIABLES DE ESTUDIO
Para llevar a cabo la validacin del mtodo de filtracin por membrana para la deteccin
de coliformes totales y fecales en agua potable, utilizando agar chromocult y teniendo en
cuenta su carcter cuantitativo se analizan variables como: exactitud, repetibilidad,
reproducibilidad, especificidad.
41
5.8 ANLISIS DE INFORMACIN
Para determinar el control del proceso, se realiza un anlisis de los resultados obtenidos
a lo largo de la validacin de la tcnica, adems de tener en cuenta los recuentos
obtenidos en los anlisis microbiolgicos de ambientes, superficies y personal.
5.8.1.1 Media. ( )
Se define como un valor representativo de una serie de mediciones de un parmetro
determinado. Estas mediciones deben ser tomadas bajo las mismas condiciones de
modo tal que el valor resultante represente en forma objetiva dicho parmetro. Este
concepto seala la tendencia de centralizacin de los datos con respecto al valor
nominal de la especificacin. (Montgomery, 1991)
= sumatoria
= media
N = nmero de elementos
X = valores o datos
42
: sumatoria
X: valor de la serie
: Media
N: nmero total de mediciones
43
6. RESULTADOS
Recuento Recuento
Prueba microorganismo Tubo DILUCION UFC/ml UFC/ml
# Replica 1 Replica 2
-7
Escherichia 4 3x10 28x10=280 29x10=290
-8
coli 5 3x10 3x10=30 3x10=30
ATCC 8739
Salmonella 4 3x10-7 27x10=270 29x10=290
-8
typhimurium 5 3x10 3x10=30 3x10=30
ATCC 14028
44
Tabla 14. Estandarizacin de inculos Escherichia coli ATCC 8739, Enterobacter
aerogenes ATCC 13048 y Salmonella typhimurium ATCC 14028, La cantidad de inoculo
utilizada para el recuento fue de 0.1ml segun La figura 8 Analista 2
Recuento Recuento
Prueba Microorganism Tubo DILUCION UFC/ml UFC/ml
o # Replica 1 Replica 2
-7
Escherichia 4 3x10 26x10=260 28x10=280
coli -8
5 3x10 3x10=30 3x10=30
ATCC 8739
-7
Salmonella 4 3x10 26x10=260 29x10=290
typhimurium
1 5 3x10-8 3x10=30 3x10=30
ATCC 14028
-7
Enterobacter 4 3x10 28x10=280 29x10=290
aerogenes
5 3x10-8 3x10=30 3x10=30
ATCC 13048
Escherichia 4 3x10-7 28x10=280 29x10=290
coli
5 3x10-8 3x10=30 3x10=30
ATCC 8739
Salmonella 4 3x10-7 26x10=260 29x10=290
typhimurium -8
5 3x10 3x10=20 3x10=30
2 ATCC 14028
Enterobacter 4 3x10-7 29x10=290 28x10=280
aerogenes
5 3x10-8 3x10=30 3x10=30
ATCC 13048
Escherichia 4 3x10-7 28x10=280 28x10=180
coli
5 3x10-8 3x10=30 3x10=30
ATCC 8739
-7
Salmonella 4 3x10 29x10=290 28x10=280
typhimurium -8
5 3x10 3x10=30 3x10=30
ATCC 14028
3 Enterobacter 4 3x10
-7
29x10=290 28x10=280
aerogenes
5 3x10-8 3x10=30 3x10=30
ATCC 13048
45
6.2. VERIFICACIN DE PROGRAMA DE CALIBRACIN Y MANTENIMIENTO DE
EQUIPOS DE INTERPHARM DE COLOMBIA Ltda.
Para evaluar la prueba de esterilidad del agar chromocult, se escoge el 10% del medio
o
preparado y se lleva a incubar a temperatura 30-35 C, durante 24 horas, pasado el
tiempo de incubacin, no se observ ningn tipo de crecimiento microbiano, asegurando
el cumplimiento de la prueba de esterilidad para el agar chromocult.
46
6.3.2 Prueba de promocin de crecimiento
Ensayo 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ensayo 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2 1
Ensayo 3 0 0 BG- 1H 0 0 BG- 0 0 0 0 0
Ensayo 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ensayo 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ensayo 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ensayo 7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ensayo 8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ensayo 9 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ensayo 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
CUMPLE SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI
47
M: bactrias mesfilas
L: Levadura
H: hongo
BG+: Bacilos Gram positivos
BG-: Bacilos Gram negativos
SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI
CUMPLE
M: bactrias mesfilas
L: Levadura
H: hongo
BG+: Bacilos Gram positivos
BG-: Bacilos Gram negativos
48
6.4. MTODO DE FILTRACIN POR MEMBRANA PARA DETECCIN DE
COLIFORMES TOTALES Y FECALES
Los resultados del control negativo en la prueba, fueron satisfactorios, debido a que en
ningn anlisis realizado se presento crecimiento.
Muestras 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Recuentos 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
UFC/100ml
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Muestras 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Recuentos 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
UFC/100ml
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 1, para el ensayo de la
solucin prueba mas E. coli ATCC 8739, comparados con los resultados de la prueba estndar
(agua estril), tambin llamada control positivo
49
Solucin de prueba: Agua potable + E.coli ATCC 8739
Analista 1: Aura Mara Lozano
Solucin Replica Solucin Prueba Porcentaje de Desviacin Coeficiente de
recuperacin estndar variacin
de prueba de prueba estandar
(%)
UFC/100ml UFC/100ml
1 32 34
1 2 29 31
3 34 31
Promedio 32 32 100 2.5 7.0
1 30 35
2 32 32
3 30 30
Promedio 31 32 97 1.1 3.0
2
1 28 31
2 27 33
3 31 30
Promedio 29 31 92 2.0 6.0
3
1 29 31
2 28 30
3 30 29
Promedio 29 30 93 1.0 3.0
4
1 31 28
2 29 29
3 28 30
Promedio 29 29 100 1.5 5.0
5
1 16 18
2 17 18
3 18 19
Promedio 17 18 94 1.0 5.0
6
1 30 31
2 31 33
3 28 29
Promedio 30 31 97 1.5 5.0
7
1 29 30
2 27 30
3 30 31
Promedio 29 30 97 1.5 5.0
8
1 30 31
2 31 33
3 29 29
Promedio 30 31 97 1.0 3.0
9
1 31 33
2 33 33
3 32 35
97 1.0 3.0
10 Promedio 32 33
Tabla 21. Comparativo del porcentaje de recuperacin E.coli ATCC 8739 en la solucin de
prueba y prueba estndar
50
FIGURA 13. Porcentaje de recuperacin de E.coli ATCC 8739
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 1, para el ensayo de la
solucin prueba mas Enterobacter aerogenes ATCC 13048, comparados con los resultados
51
Solucin de prueba: Agua potable + Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Analista 1: Aura Mara Lozano
Solucin Replica Solucin de Prueba Porcentaje de Desviacin Coeficiente de
recuperacin estndar variacin
de prueba prueba estndar
(%)
UFC/100ml UFC/100ml
1 29 30
1 2 30 35
3 28 33
Promedio 29 33 88 1.0 3.4
1 31 31
2 27 30
3 29 32
Promedio 29 31 93 2.0 6.8
2
1 30 30
2 25 30
3 28 31
Promedio 28 30 2.5 10
3 93
1 28 30
2 27 31
3 28 28
Promedio 28 30 0.5 1.7
4 93
1 29 32
2 29 29
3 27 28
Promedio 28 30 93 1.1 3.9
5
1 29 30
2 29 30
3 30 30
Promedio 29 30 96 0.5 1.7
6
1 32 36
2 30 35
3 29 30
Promedio 30 33 90 1.5 5.0
7
1 31 33
2 27 30
3 29 30
Promedio 29 31 93 2.0 6.8
8
1 30 30
2 26 29
3 29 30
Promedio 28 30 93 2.0 7.0
9
1 29 33
2 30 31
3 29 29
93 0.5 1.7
10 Promedio 29 31
52
FIGURA 14. Porcentaje de recuperacin de E. aerogenes ATCC 13048
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 1, para el ensayo de la
solucin prueba mas Salmonella typhimurium ATCC 14028, comparados con los resultados
de la prueba estndar (agua estril), tambin llamada control positivo.
53
Solucin de prueba: Agua potable + Salmonella typhimurium ATCC 14028
Analista 1: Aura Mara Lozano
Solucin Replica Solucin Prueba Porcentaje de Desviacin Coeficiente de
recuperacin estndar variacin
de prueba de prueba estndar
(%)
UFC/100ml UFC/100ml
1 26 31
1 2 27 29
3 29 33
Promedio 27 31 87 1.5 5.5
1 29 29
2 30 31
3 27 33
Promedio 29 31 93 1.5 5.0
2
1 27 31
2 29 30
3 28 29 93 1.0 3.5
3 Promedio 28 30
1 29 31
2 27 29
3 28 30
Promedio 28 30 93 1.0 3.5
4
1 30 30
2 29 29
3 27 28
Promedio 29 29 100 1.5 5.0
5
1 26 29
2 29 31
3 28 29
Promedio 28 30 93 1.5 5.0
6
1 27 30
2 29 32
3 28 29
Promedio 28 30 93 1.0 3.5
7
1 25 27
2 27 29
3 29 32
Promedio 27 29 93 2.0 7.4
8
1 29 30
2 26 31
3 26 28
Promedio 27 30 90 1.7 6.2
9
1 26 30
2 30 31
3 29 27
96 2.0 7.0
10 Promedio 28 29
54
FIGURA 15. Porcentaje de recuperacin de S. typhimurium ATCC 14028
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 2, para el ensayo de la
solucin prueba ms E.coli ATCC 8739, comparados con los resultados de la prueba estndar
(agua estril), tambin llamada control positivo
55
Solucin de prueba: Agua potable + E.coli ATCC 8739
Analista 2: Marcela Carrillo
Solucin Replica Solucin de Prueba Porcentaje de Desviacin Coeficiente
recuperacin estndar de variacin
de prueba prueba estndar
(%)
UFC/100ml UFC/100ml
1 35 31
1 2 29 32
3 29 30
Promedio 31 31 100 3.4 10.9
1 26 32
2 29 35
3 30 34
Promedio 28 34 82 2.0 7.1
2
1 29 30
2 29 32
3 30 30
Promedio 29 31 93 0.5 1.7
3
1 29 30
2 29 29
3 28 28
4 Promedio 29 29
100 0.5 1.7
1 27 29
2 28 29
3 29 31
5 Promedio 28 30
93 1.0 3.5
1 18 18
2 19 20
3 19 21
6 Promedio 19 20
95 0.5 2.6
1 29 30
2 28 29
3 30 32
7 Promedio 29 30
97 1.0 3.4
1 26 29
2 30 29
3 29 31
Promedio 28 30 93 2.0 7.1
8
1 29 30
2 30 30
3 28 28
9 Promedio 29 29
100 1.0 7.1
1 30 32
2 29 33
3 32 30
10 Promedio 30 32
94 1.5 5.0
56
FIGURA 16. Porcentaje de recuperacin de E. coli ATCC 8739
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 2, para el ensayo de la
solucin prueba mas Enterobacter aerogenes ATCC 13048, comparados con los resultados
de la prueba estndar (agua estril), tambin llamada control positivo
57
Solucin de prueba: Agua potable + Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Analista 2: Marcela Carrillo
Solucin Replica Solucin Prueba Porcentaje de Desviacin Coeficiente de
recuperacin estndar variacin
de prueba de prueba estndar
(%)
UFC/100ml UFC/100ml
1 28 32
1 2 31 32
3 30 34
Promedio 30 33 91 1.5 5.0
1 29 30
2 27 31
3 29 33
Promedio 29 31 93 1.1 3.7
2
1 26 30
2 30 32
3 27 29
3 Promedio 28 30
90 2.0 7.1
1 29 30
2 29 29
3 27 30
Promedio 28 30 93
4 1.1 4.0
1 30 31
2 26 28
3 27 29
5 Promedio 28 29
96 2.0 7.1
1 32 36
2 33 35
3 29 30
6 Promedio 31 34
91 2.0 6.4
1 29 30
2 28 32
3 30 33
7 Promedio 29 32
91 1.0 3.4
1 31 33
2 31 33
3 29 31
8 Promedio 30 32
94 1.1 3.6
1 29 32
2 29 30
3 28 32
9 Promedio 29 31
93 0.5 1.7
1 29 30
2 27 33
3 29 30
10 Promedio 29 31
93 1.1 3.7
58
FIGURA 17. Porcentaje de recuperacin de E. aerogenes ATCC 13048
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 2, para el ensayo de la
solucin prueba mas Salmonella typhimurium ATCC 14028, comparados con los resultados
de la prueba estndar (agua estril), tambin llamada control positivo.
59
Solucin de prueba: Agua potable + Salmonella typhimurium ATCC 14028
Analista 2: Marcela Carrillo
Solucin Replica Solucin de Prueba Porcentaje de Desviacin Coeficiente de
recuperacin estndar variacin
de prueba prueba estndar
(%)
UFC/100ml UFC/100ml
1 35 31
2 28 33
1 3 27 34
Promedio 30 33
91 4.3 14.3
1 26 31
2 28 30
3 29 34
2 Promedio 28 32
87 1.5 5.3
1 27 30
2 28 31
3 28 29
3 Promedio 28 30
93 0.5 1.7
1 27 30
2 26 27
3 29 31
4 Promedio 27 29
93 1.5 5.5
1 29 29
2 26 28
3 30 30
5 Promedio 28 29
96 2.0 7.1
1 27 28
2 29 30
3 30 32
6 Promedio 29 30
97 1.5 5.1
1 28 32
2 29 35
3 30 34
7 Promedio 29 34
85 1.0 3.4
1 33 34
2 30 32
3 29 31
8 Promedio 31 32
97 2.0 6.4
1 30 30
2 30 33
3 28 29
9 Promedio 29 31
93 1.1 3.7
1 29 29
2 29 32
3 30 30
10 Promedio 29 30
97 0.5 2.5
60
FIGURA 18. Porcentaje de recuperacin de S. typhimurium ATCC 14028
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 1, para el ensayo de
-8
recuentos combinados, en donde se adicion al agua potable 0.5 ml de la dilucin 3x10
(30 UFC/ml) de Escherichia coli ATCC 8739 y 0.5 ml de la dilucin 3x10-8 de Salmonella
typhimurium ATCC 14028, comparados con los resultados de la prueba estndar (agua estril),
tambin llamada control positivo
61
Analista 1: Aura Lozano
Solucin Replica Solucin de Prueba Recuento Control (+)
de prueba prueba estndar UFC/100ml
S. typhimurium
E. coli UFC/100ml UFC/100ml
UFC/100ml
1 12 34 14 31
2 10 31 15 29
1
3 14 31 12 33
Promedio 12 32 13 31
1 15 35 12 29
2 17 32 14 31
3 12 30 11 33
2 Promedio 14 32 12 31
1 7 31 13 31
2 6 33 12 30
3 7 30 11 29
3 Promedio 6 31 12 30
1 15 31 16 31
2 13 30 14 29
3 10 29 12 30
4 Promedio 12 30 14 30
1 13 28 15 30
2 12 29 12 29
3 14 30 14 28
5 Promedio 13 29 13 29
1 15 18 12 29
2 12 18 16 31
3 13 19 14 29
6 Promedio 13 18 14 30
1 15 31 13 30
2 13 33 14 32
3 14 29 12 29
7 Promedio 14 31 13 30
1 12 30 15 27
2 16 30 12 29
3 15 31 11 32
8 Promedio 14 30 12 29
1 13 31 13 30
2 14 33 15 31
3 12 29 13 28
9 Promedio 13 31 13 30
1 14 33 12 30
2 15 33 14 31
3 11 35 11 27
10 Promedio 13 33 12 29
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 1, para el ensayo de
recuentos combinados, en donde se adicion al agua potable 0.5 ml de la dilucin 3x10-8
-8
(30 UFC/ml) de Enterobacter aerogenes ATCC 13048 y 0.5 ml de la dilucin 3x10 de
Salmonella typhimurium ATCC 14028, comparados con los resultados de la prueba estndar
(agua estril), tambin llamada control positivo.
62
Analista 1: Aura Lozano
Solucin Replica Solucin de Prueba Recuento Control (+)
de prueba prueba estndar UFC/100ml
S. typhimurium
E. aerogenes UFC/100ml UFC/100ml
UFC/100ml
1 14 30 16 31
2 12 35 13 29
1
3 16 33 15 33
Promedio 14 33 14 31
1 12 31 13 29
2 14 30 14 31
3 13 32 12 33
2 Promedio 13 31 13 31
1 12 30 16 31
2 14 30 15 30
3 14 31 16 29
3 Promedio 13 30 15 30
1 12 30 15 31
2 11 31 16 29
3 15 28 14 30
4 Promedio 12 30 15 30
1 12 32 16 30
2 14 29 15 29
3 11 28 15 28
5 Promedio 12 30 15 29
1 12 30 13 29
2 12 30 12 31
3 11 30 15 29
6 Promedio 11 30 13 30
1 14 36 12 30
2 13 35 13 32
3 13 30 11 29
7 Promedio 13 33 12 30
1 16 33 14 27
2 12 30 12 29
3 13 30 15 32
8 Promedio 13 31 13 29
1 17 30 13 30
2 13 29 16 31
3 12 30 11 28
9 Promedio 14 30 13 30
1 13 33 13 30
2 12 31 12 31
3 14 29 14 27
10 Promedio 13 31 13 29
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 1, para el ensayo de
-8
recuentos combinados, en donde se adicion al agua potable 0.5 ml de la dilucin 3x10
(30 UFC/ml) de Enterobacter aerogenes ATCC 13048 y 0.5 ml de la dilucin 3x10-8 de
Escherichia coli ATCC 8739, comparados con los resultados de la prueba estndar (agua
estril), tambin llamada control positivo.
63
Analista 1: Aura Lozano
Solucin Replica Solucin de Prueba Recuento Control (+)
de prueba prueba estndar UFC/100ml
E. coli
E. aerogenes UFC/100ml UFC/100ml
UFC/100ml
1 12 30 13 34
2 16 35 15 31
1
3 14 33 13 31
Promedio 14 33 13 32
1 12 31 11 35
2 13 30 13 32
3 14 32 13 30
2 Promedio 13 31 12 32
1 12 30 9 31
2 15 30 7 33
3 12 31 8 30
3 Promedio 13 30 8 31
1 15 30 12 31
2 16 31 10 30
3 14 28 14 29
4 Promedio 15 30 12 30
1 10 32 15 28
2 10 29 16 29
3 10 28 14 30
5 Promedio 10 30 15 29
1 12 30 13 18
2 10 30 11 18
3 14 30 14 19
6 Promedio 12 30 12 18
1 8 36 12 31
2 10 35 12 33
3 9 30 15 29
7 Promedio 9 33 13 31
1 12 33 12 30
2 15 30 15 30
3 11 30 15 31
8 Promedio 12 31 14 30
1 13 30 12 31
2 12 29 13 33
3 14 30 13 29
9 Promedio 13 30 12 31
1 11 33 11 33
2 14 31 10 33
3 15 29 13 35
10 Promedio 13 31 11 33
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 2, para el ensayo de
-8
recuentos combinados, en donde se adicion al agua potable 0.5 ml de la dilucin 3x10
(30 UFC/ml) de Escherichia coli ATCC 8739 y 0.5 ml de la dilucin 3x10-8 de Salmonella
typhimurium ATCC 14028, comparados con los resultados de la prueba estndar (agua estril),
tambin llamada control positivo.
64
Analista 2: Marcela carrillo
Solucin Replica Solucin de Prueba Recuento Control (+)
de prueba prueba estndar UFC/100ml
S. typhimurium
E. coli UFC/100ml UFC/100ml
UFC/100ml
1 13 31 16 31
2 10 32 14 33
1
3 12 30 13 34
Promedio 12 31 10 33
1 12 32 15 31
2 11 35 12 30
3 14 34 11 34
2 Promedio 12 34 13 32
1 12 30 14 30
2 15 32 13 31
3 13 30 15 29
3 Promedio 13 31 14 30
1 15 30 14 30
2 17 29 13 27
3 13 28 11 31
4 Promedio 15 29 13 29
1 12 29 16 29
2 14 29 15 28
3 12 31 12 30
5 Promedio 13 30 14 29
1 13 18 14 28
2 12 20 12 30
3 15 21 10 32
6 Promedio 13 20 12 30
1 10 30 12 32
2 10 29 15 35
3 13 32 14 34
7 Promedio 11 30 14 34
1 13 29 13 34
2 12 29 12 32
3 14 31 15 31
8 Promedio 13 30 13 32
1 13 30 14 30
2 16 30 12 33
3 11 28 15 29
9 Promedio 13 29 14 31
1 12 32 11 29
2 15 33 14 32
3 10 30 14 30
10 Promedio 12 32 13 30
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 2, para el ensayo de
recuentos combinados, en donde se adicion al agua potable 0.5 ml de la dilucin 3x10-8
(30 UFC/ml) de Enterobacter aerogenes ATCC 13048 y 0.5 ml de la dilucin 3x10-8 de
Salmonella typhimurium ATCC 14028, comparados con los resultados de la prueba estndar
(agua estril), tambin llamada control positivo.
65
Analista 2: Marcela carrillo
Solucin Replica Solucin de Prueba Recuento Control (+)
de prueba prueba estndar UFC/100ml
S. typhimurium
E. aerogenes UFC/100ml UFC/100ml
UFC/100ml
1 15 32 16 31
2 13 32 15 33
1
3 14 34 15 34
Promedio 14 33 15 33
1 15 30 12 31
2 17 31 10 30
3 12 33 13 34
2 Promedio 15 31 12 32
1 13 30 16 30
2 12 32 15 31
3 11 29 12 29
3 Promedio 12 30 14 30
1 15 30 14 30
2 13 29 12 27
3 11 30 13 31
4 Promedio 13 30 13 29
1 14 31 13 29
2 12 28 16 28
3 10 29 10 30
5 Promedio 12 29 13 29
1 10 36 14 28
2 12 35 10 30
3 11 30 11 32
6 Promedio 11 34 12 30
1 13 30 12 32
2 15 32 14 35
3 12 33 13 34
7 Promedio 13 32 13 34
1 12 33 12 34
2 15 33 14 32
3 10 31 11 31
8 Promedio 12 32 12 32
1 12 32 13 30
2 14 30 11 33
3 13 32 10 29
9 Promedio 13 31 11 31
1 15 30 14 29
2 12 33 15 32
3 14 30 11 30
10 Promedio 14 31 13 30
La siguiente tabla indica los recuentos obtenidos por el analista 2, para el ensayo de
recuentos combinados, en donde se adicion al agua potable 0.5 ml de la dilucin 3x10-8
-8
(30 UFC/ml) de Enterobacter aerogenes ATCC 13048 y 0.5 ml de la dilucin 3x10 de
Escherichia coli ATCC 8739, comparados con los resultados de la prueba estndar (agua
estril), tambin llamada control positivo.
66
Analista 2: Marcela carrillo
Solucin Replica Solucin de Prueba Recuento Control (+)
de prueba prueba estndar UFC/100ml
E. coli
E. aerogenes UFC/100ml UFC/100ml
UFC/100ml
1 15 32 16 31
2 13 32 14 32
1
3 14 34 15 30
Promedio 14 33 15 31
1 15 30 12 32
2 17 31 15 35
3 12 33 10 34
2 Promedio 15 31 12 34
1 13 30 14 30
2 12 32 15 32
3 11 29 12 30
3 Promedio 12 30 14 31
1 15 30 14 30
2 13 29 12 29
3 11 30 13 28
4 Promedio 13 30 13 29
1 14 31 16 29
2 12 28 16 29
3 10 29 14 31
5 Promedio 12 29 15 30
1 10 36 14 18
2 12 35 10 20
3 11 30 13 21
6 Promedio 11 34 12 20
1 13 30 12 30
2 15 32 14 29
3 10 33 13 32
7 Promedio 13 32 13 30
1 12 33 15 29
2 10 33 12 29
3 15 31 11 31
8 Promedio 12 32 13 30
1 14 32 13 30
2 12 30 10 30
3 10 32 14 28
9 Promedio 12 31 12 29
1 15 30 12 32
2 12 33 10 33
3 10 30 15 30
10 Promedio 12 31 12 32
67
FIGURA 19. Prueba de promocin de crecimiento de E. coli en agar chromocult
Fuente: Autor
Fuente: Autor
68
FIGURA 21. Prueba de promocin de crecimiento de S. typhimurium
Fuente: Autor
FIGURA 22. Solucin de prueba: E. coli en agar chromocult
Fuente: Autor
FIGURA 23. Solucin de prueba: S. typhimurium en agar chromocult
69
7. DISCUSIN DE RESULTADOS
Para evaluar la prueba de esterilidad en cada uno de los medios de cultivo preparados y
utilizados, se escogi el 10% de los medios de cultivo preparados en cada prueba (USP,
31) y se llev a incubar a la temperatura y tiempo especficos (24 h a 30-35oC) para
cada uno de los medios, pasado el tiempo de incubacin no se observ ningn tipo de
crecimiento microbiano, asegurando que los resultados obtenidos en la prueba de
esterilidad de los medios es confiable dentro del proceso de validacin.
70
crecimiento demostr que el medio de cultivo (agar chromocult) contiene los nutrientes
necesarios para el desarrollo y crecimiento de coliformes totales y fecales debido a que
se obtuvo una recuperacin mayor del 70% de los microorganismos que fueron
inoculados; (tablas 21- 26) esto concuerda con lo establecido en la USP 31 (Seccin
1227 validacin de mtodos de neutralizacin comparaciones de recuperacin), en la
que se detalla claramente que el numero de UFC recuperadas del producto (para
nuestro caso muestras de agua) no debe ser menor del 70% del numero recuperado del
control del inoculo (prueba estndar control positivo); por otro lado como se puede ver
en cada una de las figuras los limites oscilan entre 50 y 200, debido a que segn la
USP 31 en su capitulo 61 EXAMEN MICROBIOLOGICO DE PRODUCTOS NO
ESTERILES: PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO, especifica que para medios
slidos, el crecimiento obtenido no debe diferir en un factor mayor de dos a partir del
valor calculado para un inoculo estandarizado, lo cual concuerda con los resultados
obtenidos debido a que ningn recuento obtenido se sale se los limites establecidos, de
acuerdo con el limite de tendencia central obtenido gracias a los recuentos de nuestro
control positivo (prueba estndar 100%), los cuales sirvieron como base para la
comparacin con los recuentos obtenidos en la solucin de prueba, como se puede ver
en cada una de las graficas, los porcentajes de recuperacin en cada una de las pruebas
estn muy cercanos al valor central lo que nos indica que los resultados con muy
coherentes con los obtenidos en la prueba estndar.
Igualmente, al inocular las cepas ATCC sobre el agar chromocult se obtuvieron las
caractersticas macroscpicas tpicas de cada una (Ver tabla No 16) y tambin se realiz
coloraciones de Gram a las colonias para evaluar las caractersticas microscpicas.
Adems, el crecimiento de los microorganismos se obtuvo en un tiempo de 24 horas, de
esta manera, se establece que los medios cromognicos poseen una ventaja sobre los
medios tradicionales, debido a que la deteccin de coliformes totales y fecales se obtiene
de una manera rpida (M.A YANEZ et al., 2005); esto gracias a que los sustratos que
presenta el medio son los especficos para que las enzimas que presentan tanto E.coli
como Enterobanter aerogenes, sean escindidos y de esta manera se puede, se produzca
un reaccin rpida y sensible (Rompre,A et al., 2001).
En los ensayos estndar (control positivo) del mtodo de recuento para coliformes
fecales, (Escherichia coli ATCC 8739), coliformes totales (Enterobacter aerogenes ATCC
13048) y Salmonella typhimurium ATCC 14028, la recuperacin de los microorganismos
fue de 16-36 UFC/100ml, tal como se puede ver en las tablas 21 26, donde se
compara la prueba estndar y la solucin de prueba. Cabe destacar que para la prueba
estndar, el vehculo de transporte de los microorganismos evaluados fue agua estril
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para inyeccin, debido a que es un agua en la que no se va a encontrar ninguna
interferencia (como cloro u otros elementos) que impida el crecimiento, lo que nos
llevara a reportar falsos positivos y para la solucin de prueba se utiliz agua potable.
Debido a que validar es demostrar con un alto grado de confianza, por medio de
evidencia documentada que un proceso especifico producir de forma consistente
productos que reunirn las caractersticas de calidad predefinidas (CORTES, 2002; FDA,
1987) para tal fin, se identificaron los factores que influyen en la validez de la prueba y
los pasos a seguir para el desarrollo de la validacin del mtodo de filtracin por
membrana empleado para la deteccin de coliformes totales y fecales en agar
chromocult para agua potable, en donde se emple una serie de datos para determinar
que realmente es eficaz y se obtienen resultados confiables; para esto se evaluaron
parmetros cuantitativos de validacin como: especificidad, precisin (repetitividad y
reproducibilidad), y exactitud.
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coliformes totales solo pueden escindir uno de los sustratos, mientras que E. coli puede
escindir los dos sustratos.
Segn la USP 31, 2008 la repetibilidad es la medida de la precisin del mtodo cuando
ste se realiza por el mismo analista, el mismo da, mismos reactivos y mismo
instrumento, y la reproducibilidad se mide cuando el ensayo se realiza por diferentes
analistas, diferentes das y diferentes instrumentos, por lo tanto estos parmetros nos
indican la precisin del mtodo de recuento, la cual se mide con la dispersin de la
medida alrededor de un valor medio o central y mide la concordancia entre ensayos
individuales cuando el mtodo se aplica repetidas veces a muestras separadas e
idnticas, obtenidas del mismo lote de material homogneo ( en este caso muestras de
agua potable obtenidas de la misma fuente, la llave del rea de lavado del laboratorio).
De esta manera y de acuerdo a los resultados se determinaron los valores de las
medias, las desviaciones estndar y los coeficientes de variacin obtenidos en cada una
de los ensayos y con cada uno de los analistas.
De igual manera segn los resultados obtenidos de las medias determinadas por cada
muestra de agua y microorganismo, se establece que el mtodo es preciso (Tablas 21 -
26).
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lado el coeficiente de variacin nunca supera un valor de 10, lo cual es un valor aceptado
y utilizado en la industria farmacutica (Tablas 21 - 26).
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8. CONCLUSIONES
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9. RECOMENDACIONES
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10. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
77
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Interamericana. Mxico. Pgs. 478-489.
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microbiolgicos.
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Ministerio de la Proteccin Social. 2007. Resolucion 2115. Por medio de la cual
se sealan caractersticas, instrumentos bsicos y frecuencias del sistema de
control y vigilancia para la calidad del agua para consumo humano
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airborne bacteria. Journal of Ethnopharmacology, 3, 446-451.
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11. ANEXOS
Agar Casoy: peptona de casena 15g, peptona de harina de soya 5g, cloruro
sdico 5g, agar-agar 15g.
Agar Plate Count: peptona de casena 5.0g, extracto de levadura 2.5g, D(+)-
glucosa 1.0g, agar-agar 14.0g
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