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DIRECTORA:
GLORIA EDITH GUERRERO A.
PEREIRA
2007
MONOGRAFIA SOBRE
PRUEBAS DE ACTIVIDAD BIOLOGICA CON DOS ORGANISMOS MODELOS
EN ACETOGENINAS DE ANNONACEAE CON ACTIVIDAD BIOPESTICIDA
DIRECTORA:
GLORIA EDITH GUERRERO A.
PEREIRA
2007
NOTA DE ACEPTACION
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i
DEDICATORIA
Este trabajo esta dedicado a nuestras familias los cuales nos impulsaron en el
transcurso de nuestros estudios y que nos apoyaron para lograr que culminramos
esta meta. Gracias.
ii
AGRADECIMIENTOS
iii
GLOSARIO
iv
solucin tentadora, que por otro lado, puede interferir en los tratamientos
teraputicos.
La Artemia salina tal cual como lo indica su nombre, no es un habitante directo del
mar sino de salinas, que no son sino lagunas y estuarios cercados, cercanos a las
costas martimas. En ocasiones se pueden hallar en masas de agua saladas
atrapadas dentro de los continentes como en caso del famoso lago Salt Lake.
v
BIOTERIO: Conjunto de instalaciones, muebles e inmuebles destinados al
alojamiento y manutencin de animales de laboratorio durante una o varias de las
fases de su ciclo vital; esto es, nacimiento, desarrollo, reproduccin y muerte.
vi
CRUSTCEO: Clase de artrpodos de respiracin branquial, cubiertos
generalmente de un caparazn duro o flexible y con dos pares de antenas:
los cangrejos y las langostas son crustceos.
DOSIS LETAL DL 50: La dosis letal 50 es la dosis nica que, obtenida por
estadstica, de una sustancia de la que puede esperarse que produzca la muerte
del 50% de los animales a los que se haya administrado. El valor de la DL50 se
expresa en peso de la sustancia por unidad de peso del animal (miligramos por
kilo, mg/kg).
ENCFALO: Conjunto de rganos que forman parte del sistema nervioso de los
vertebrados y estn contenidos en la cavidad del crneo.
ix
MICROORGANISMO: organismos microscpicos pertenecientes por regla general
a virus, bacterias, algas, hongos o protozoos.
x
OVPARO: Un animal ovparo (del latn ovum, "huevo", y parire, "parir") es un
animal cuya modalidad de reproduccin incluye el depsito de huevos en el medio
externo, donde completar su desarrollo antes de la eclosin. Son ovparos la
mayora de los insectos, los peces, los anfibios y los reptiles, as como la totalidad de
las aves. Entre los mamferos slo son ovparos los monotremas (el ornitorrinco y los
equidnas).
PECIOLO: (del latn "petiolus", forma diminutiva de "pes" "pedis", pie, tronco de
una planta) es el rabillo que une la lmina de una hoja a su base foliar o al tallo.
Falta en las hojas ssiles. El peciolo puede ser una caracterstica determinante
para la identificacin de la planta.
xi
Estos productos qumicos tambin pueden ser utilizados para el control de
vectores de enfermedades humanas y animales en reas abiertas o dentro del
domicilio. A estas sustancias tambin se las llama ocasionalmente biocidas.
xii
CONTENIDO
Pg.
1.0 JUSTIFICACION 1
2.0 OBJETIVOS 5
2.1 OBJETIVO GENERAL 5
2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS 5
3.0 GENERALIDADES DE LAS ANNONACEAE 6
3.1 CLASIFICACION BOTANICA DE LAS ANNONACEAE 6
3.2. ALGUNAS ANNONAS 9
3.2.1. Annona cherimola chirim. 9
3.2.2. Annona muricata L. 9
3.2.3. Annona diversifolia Safford. 10
3.2.4. Annnona purpurea L. 11
3.2.5. Annona reticulata L. 12
3.3 ANNONACEAE EN COLOMBIA 14
3.4 Compuestos Activos De Las Annonaceae 15
3.4.1 Clasificacin De Las Acetogeninas De Annonaceae 15
3.4.2 Separacin e Identificacin de las Acetogeninas 17
3.4.3 Mecanismo De Accin De Las Acetogeninas De Annonaceae 18
4.0 ACTIVIDAD BIOLOGICA 19
4.1 Actividad Biolgica Biopesticida 21
4.1.1. Clasificacin De Los Biopesticidas 23
4.1.1.1. Bioinsecticidas. 23
4.1.1.2.Biofungicidas. 24
4.1.1.3.Bioherbicidas. 25
4.1.1.4.Biobactericidas. 25
4.1.1.5.Bionematicidas. 25
4.1.2. Biopesticidas a Partir de Extractos Vegetales. 26
4.1.2.1. Insecticidas Derivados de Plantas y
Productos Naturales. 26
4.2. PRUEBAS DE ACTIVIDAD BIOLOGICA Y ORGANISMOS
MODELOS. 28
4.2.1. LOS MOSQUITOS (DIPTERA: CILICIDAE) 31
4.2.1.1. Gneros de la Familia Culicidae 33
4.2.2 LA ARTEMIA SALINA O BRINE SHRIMPS Y SU CLASIFICACION 36
4.2.2.1. Distribucin De La Artemia salina 37
4.2.2.2. Ciclo De Vida De La Artemia salina 38
4.2.2.3. La Importancia De La Artemia salina
En Las Investigaciones 41
4.3. ACTIVIDAD BIOLOGICA DE LAS ACETOGENINAS
xiii
DE ANNONACEAE 42
5.0. PROTOCOLOS 49
5.1. PROTOCOLOS CON ARTEMIA SALINA 49
5.1.1. Procedimiento Del Laboratorio UNAL-Departamento 49
de Qumica, Grupo de Productos Naturales.
5.1.2. Procedimiento De La Universidad Del Quindo 53
5.1.3. Procedimiento De La Universidad Nacional De Colombia 54
5.2. PROTOCOLOS CON MOSQUITOS. 56
5.2.1. Procedimiento #1 Para La Evaluacin De Toxicidad Con
Mosquito Culex. quinquefasciatus . 56
5.2.2. Procedimiento #2 Para La Evaluacin De Toxicidad Con
Larvas Del IV Estadio De Anopheles. 58
5.2.3. Procedimiento #3 Para La Evaluacin De Toxicidad Con
Mosquito Culex. quinquefasciatus. 59
5.3. PROTOCOLOS RECOMENDADOS PARA EVALUAR POSIBLE
ACTIVIDAD BIOLGICA BIOPESTICIDA. 62
5.3.1. Diagrama De Flujo #1: Bioensayo Preliminar Con Artemia salina 62
5.3.2. Diagrama De Flujo #2: Bioensayo Especfico Con El
Mosquito Culex quinquefasciatus 66
6.0. DISCUSION GENERAL 69
7.0. CONCLUSIONES 72
BIBLIOGRAFIA 74
ANEXOS 86
xiv
LISTA DE FIGURAS
Pg.
FIGURA 1. ACETOGENINAS UTILIZADAS COMO BIOPESTICIDAS 1
FIGURA 2. Frutos de Annona chirimoya 9
FIGURA 3. Fruto de Annona muricata 10
FIGURA 4. Frutos de Annona diversifolia 10
FIGURA 5. Frutos de Annona purpurea 12
FIGURA 6. Fruto de Annona reticulata 13
FIGURA 7. CICLO DE VIDA DE UN MOSQUITO 32
FIGURA 8. MOSQUITO DEL GENERO CULEX 33
FIGURA 9. MOSQUITO DEL GENERO AEDES 34
FIGURA 10. MOSQUITO DEL GENERO ANOPHELES 35
FIGURA 11. ARTEMIA SALINA 36
FIGURA 12. CICLO DE VIDA DE LA ARTEMIA SALINA 38
FIGURA 13. TANQUE PARA HUEVOS DE ARTEMIA 50
FIGURA 14. MADURACION DE BRINE SHRIMPS 50
FIGURA 15. VIALES AGRUPADOS DE A TRES 51
FIGURA 16. EVALUANDO MOVILIDAD DE LARVAS 52
FIGURA 17. MOSQUITERO 59
FIGURA 18. ALGODN CON AZUCAR 59
xv
LISTA DE TABLAS
Pg.
xvi
LISTA DE ANEXOS
Pg.
xvii
1. JUSTIFICACION
Las acetogeninas, son compuestos bioactivos presentes tanto en las races como
en las semillas de algunos frutas, son componentes naturales los cuales presentan
una extensa gama de actividades biolgicas: antitumoral, citotxica,
antimicrobiana, plaguicida, antiprotozoaria y antihelmintica, (1, 2).
1
Se encuentran presentes en semillas de plantas de la familia Annonaceae como la
Annona cherimolia, Annona glabra, Annona muricata, Annona esquamosa y otras.
Algunos estudios han sugerido que ciertas acetogeninas de la guanbana y de
otras anonceas tienen un excelente potencial como biopesticidas, (1, 2).
2
Adems, de los experimentos, los animales son indispensables para probar la
potencia e inocuidad de muchas de las sustancias biolgicas utilizadas en
medicina humana y veterinaria. Las pruebas de actividad biolgica son, adems,
esenciales para las numerosas sustancias sintticas que jams existieron en la
naturaleza: productos farmacuticos, aditivos alimentarios y productos qumicos
agrcolas, y es evidente que dichas pruebas slo pueden realizarse con animales,
aunque los sujetos de las pruebas definitivas tengan que ser seres humanos en
contacto directo o indirecto con las mencionadas sustancias, (3).
Algunos ejemplos de los organismos modelos utilizados para las pruebas de
Actividad Biolgica son: levadura (Saccharomyces cerevisiae), gusano
(Caenorhabditis elegans), mosca (Drosophila melanogaster) y ratn (Mus
musculus), los cuales comparten con los seres humanos un gran nmero de
genes, protenas e incluso vas genticas; de igual forma como ejemplos de
estudios realizados con pruebas de actividad biolgica se presentan algunos
estudios de Acetogeninas de Annonaceae con organismos modelos como se
muestra en la siguiente tabla:
3
Acetogeninas de Leptinotarsa Evaluar dos
Annonaceae, 1- decemlineata Acetogeninas de
Escuamocina, 2- (escarabajo de la papa Annonaceae y sus
(5)
Anonacina rosada), Spodoptera Efectos Insecticidas
littoralis (Lepidoptera: y Mutagnico sobre
Noctuidae) Polifago y diferentes especies
Myzus persicae con distintos hbitos
(Homoptera:Aphididae) alimentarios
4
2. OBJETIVOS
5
3. GENERALIDADES DE LAS ANNONACEAE
La familia Annonaceae cuenta con 130 gneros y se estima que hay 2.300
especies en el mundo; algunas de estos gneros con sus especies se pueden
observar en la tabla 2. Entre ellas hay numerosos frutales, especialmente en los
gneros Annona y Rollinia; la mayora de las especies del genero Annona y todas
las del genero Rollinia son originarias del Nuevo Mundo, (6).
El gnero Annona se caracteriza por tener sus hojas alternas, simples, enteras,
finas o coraceas, decduas o persistentes y sin estpulas. Las flores son
bisexuales, con frecuencia en tonos de color caf y amarillo, solitarias o en
racimos, compuesta de 3 spalos y 6 ptalos, generalmente el cliz es tubular.
Los estambres son numerosos, aglomerados, con filamentos carnosos portando
anteras largas y espirales. La fruta es grande, carnosa, estando formada por la
fusin de los pistilos y los receptculos, (6, 7).
6
TABLA 2. Lista De Algunos Gneros De La Familia Annonaceae
GENERO ESPECIE
crassipetala Hemsl.
dolichocarpa Sprague & Sandwith
Anaxagorea panamensis Standl.
phaeocarpa Mart.
amazonica R. E. Fr.
cherimola Mill.
glabra L.
montana Macfad.
muricata L.
pittieri Donn. Sm.
Annona pruinosa G. E. Schatz
purpurea Mo. & Sess ex Dunal
reticulata L.
squamosa L.
volubilis Lundell
7
aeruginosa Standl.
amplifolia Triana & Planch.
chiriquiensis R. E. Fr.
costaricensis R. E. Fr.
diospyroides Baill.
dolichopoda Donn. Sm.
Guatteria elegantissima R. E. Fr.
lucens Standl.
oliviformis Donn. Sm.
recurvisepala R. E. Fr.
tonduzii Diels
verrucosa R. E. Fr.
hammelii G. E. Schatz
panamensis R. E. Fr.
Unonopsis pittieri Saff.
storkii Standl. & L. O. Williams
theobromifolia N. Zamora &
Poveda
8
3.2. ALGUNAS ANNONAS
La chirimoya (ver figura 2), se considera originaria de los valles fros, pero libres
de heladas de los Andes, entre 700 a 2400 m, (6).
9
FIGURA 3. Fruto de Annona muricata
10
las rajaduras cicatrizan. En Guatemala se acostumbra recogerlos de esta manera
madurndolos en cajones u otros lugares cerrados, (6).
Este rbol se distingue de las otras especies de Annonaceae porque tiene dos
clases de hojas, las corrientes obovadas, glabras, con pecolo, y otras en forma de
brcteas, redondas, caedizas, sin pecolo, que crecen en la base de las ramillas.
En el lado inferior de las hojas, ramillas y frutos, la superficie tiene un aspecto
pulverulento, blancuzco, que es ms notable en las variedades de pulpa blanca.
Las flores tienen tres ptalos externos, de 2 a 5 cm de largo, y tres internos
diminutos; el color de las flores es una caracterstica varietal y va de rosado a rojo
prpura. El fruto, de unos 12 cm de largo, tiene pulpa blanca, rosada o rojiza, con
aroma tpico y sabor dulce y exquisito, segn la mayora de las opiniones superior
al de la chirimoya. Los frutos son muy resistentes, o tal vez completamente
inmunes a los ataques del insecto barrenador de las semillas, (6, 7, 9).
11
FIGURA 5. Ejemplos de Frutos de Annona purpurea
Por lo comn en los tallos jvenes, los pecolos y nervios de la hoja, muestran
pubescencia rojiza. Las flores son grandes, con los ptalos externos de 4 a 5 cm
de largo, flexibles y amarillentos con manchas violetas en el lado interno; los
ptalos internos son ms cortos, de 3 a 4 cm de largo. El receptculo cnico mide
alrededor de 2 cm de largo por 1.5 cm de ancho y en su parte inferior est cubierto
de estambres y al pice por un anillo de carpelos. El fruto es ovoide a esfrico,
mide de 10 a 14 cm de ancho y est cubierto de un tomento amarillo o rojizo. Los
carpelos tienen prominencias piramidales muy desarrolladas, hasta de 2 cm de
largo, con los pices curvos hacia la base de la fruta. La pulpa es dura, amarilla a
anaranjada, aromtica. Las semillas elpticas, de color caf claro, miden de 2.5 a 3
cm de largo, (6, 7).
12
FIGURA 6. Fruto de Annona reticulata
13
3.3. LAS ANNONACEAE EN COLOMBIA
14
3.4. COMPUESTOS ACTIVOS DE LAS ANNONACEAE
15
TABLA 3. CLASIFICACION DE ACETOGENINAS DE ANNONACEAE, (14), (15).
CON ANILLOS:
O O O
OH R OH R
OH OH
O
O
SIN ANILLOS:
A c e to g e n in a s s in a n illo s - T H F
(R)
O
R 1= H 1O H R
O O
R 2=H 1O H
O O
16
3.4.2 SEPARACION E IDENTIFICACION DE LAS ACETOGENINAS.
Otra de las formas de identificacin que viene siendo utilizada es el mtodo del
Ester Mosher, el cual permite la determinacin estereoqumica absoluta por medio
de epimeros y enantiomeros de las acetogeninas, (23), (24), (25).
17
3.4.3 MECANISMO DE ACCION DE LAS ACETOGENINAS DE ANNONACEAE
18
4. ACTIVIDAD BIOLOGICA
19
Alcaloide Realizar la extraccin,
Aislado de elucidacin estructural y
Antifngica berberis actividad antifngica de (32)
serrato- Lauberina.
dentata.
Determinar el efecto
Antibacterial Infusin del t antibacterial de la infusin
verde. del t verde en la formacin (33)
de placa bacteriana por
Streptococcus mutans.
20
Extractos Estudiar cinco especies de
Acuosos holoturidas que muestran
Antimictico Obtenidos a actividad hemoltica:
Partir de Ludwigothuria mexicana, (38, 39)
Invertebrados L.grisea,Fossothuria cubana,
Marinos. Istchopus badionotus y
Trachytionidium occidentale.
Extractos de Demostrar
Acetogeninas la eficiencia de acetogeninas (4)
Biopesticida de Annonaceae para el manejo
Annonaceae integrado de plagas en
cultivos.
21
nuevos derivados botnicos resultan mas amigables con el medio ambiente, y
adems se pueden convertir en una herramienta til para los cultivos de alimentos
donde no se pueda fumigar, (17, 43, 44).
Ventajas:
1. La especificidad en su actuacin
2. Respeto al medio ambiente
3. Los patgenos tienden a desarrollar menor resistencia a productos
microbianos que a productos qumicos, (45).
Desventajas:
1. Una efectividad de control en general menor que los productos qumicos
2. Generalmente su accin no es inmediata
3. Dificultades de produccin a nivel comercial
22
4. Necesidad de resolver problemas tcnicos como la sensibilidad a
factores ambientales (temperatura, radiacin UV, humedad) que
presentan la mayora de estos productos, (45).
4.1.1.1. Bioinsecticidas
23
b. Virus: otra estrategia consiste en utilizar diferentes virus que poseen una
elevada especificidad en sus huspedes. Estos productos no han tenido el xito
que cabra esperar, debido a su bajo nivel de virulencia, poca estabilidad a la luz
UV, dificultades en la reproduccin y una pobre persistencia en el entorno, (46).
4.1.1.2. Biofungicidas
Muchos han sido los organismos que de manera experimental han sido aislados y
se ha probado su actividad fungicida, aunque no todos han desarrollado un
producto comercial. En general son productos formulados a base de bacterias u
hongos, (47).
24
4.1.1.3. Bioherbicidas
4.1.1.4. Biobactericidas
4.1.1.5. Bionematicidas
25
chlamydosporium Goddard son parsitos de nemtodos. Pero su produccin a
nivel comercial no existe debido a su lento crecimiento en condiciones in vitro, el
poco tiempo de supervivencia del cultivo, sus requerimientos nutricionales y
algunas inconsistencias entre los distintos ensayos de campo, (46, 47).
26
Rotenona: Se utiliza en forma de aspercin y de polvo. En los animales
de sangre caliente produce baja toxicidad y no deja ningn residuo daino
en los cultivos de la huerta; este es txico para los peces, insectos
beneficiosos, huevos, larvas y en menor grado para los adultos de las
mariquitas y altamente txico para las moscas neurpteras verdes adultas,
algunas abejas parsitas y para los caros depredadores y para las abejas
melferas, (49).
27
se descompone de forma rpida con la presencia de la luz dejando pocos
efectos residuales. Es txico para las plagas de moscas, pulgones,
tisanpteros, moscas blancas y otras plagas de insectos al igual que para
las mariquitas, avispas parsitas y peces, (48, 49).
28
Tanto las investigaciones biolgicas bsicas como las investigaciones aplicadas,
han determinado muchos adelantos importantes de la ciencia mdica. Por eso
resulta indispensable seguir realizando investigaciones de ambas clases con el fin
de descubrir las causas, mecanismos, prevencin y tratamiento de enfermedades
que an no son bien conocidas por el hombre, as como para probar la eficacia e
inocuidad de muchos de los principios activos utilizados en medicina humana y
veterinaria, y en general para avanzar en el conocimiento biolgico, (4).
Un requisito importante estipulado en los cdigos de tica internacionales y en
muchas legislaciones nacionales para experimentacin en seres humanos, es que
no se deben emplear nuevas sustancias ni dispositivos en seres humanos, a
menos que las pruebas previamente efectuadas en animales, permitan hacer una
suposicin razonable de su inocuidad, (4, 52)
Los organismos modelos comnmente empleados en medicina humana y
veterinaria se utilizan animales tales como: levadura (Saccharomyces cerevisiae),
gusano (Caenorhabditis elegans), mosca (Drosophila melanogaster) y ratn (Mus
musculus), en investigaciones fisiolgicas, patolgicas, farmacolgicas,
toxicolgicas, teraputicas y de conducta, en ciruga experimental, en ensayos de
medicamentos y preparados biolgicos, y tambin con fines docentes en todas
estas disciplinas, incluyendo la formacin quirrgica, (52, 53)
Adems de los experimentos, los animales son indispensables para probar la
potencia e inocuidad de muchas de las sustancias biolgicas utilizadas en
medicina humana y veterinaria, (53).
Las pruebas de actividad biolgica son, adems, esenciales para las numerosas
sustancias sintticas que jams existieron en la naturaleza: productos
farmacuticos, aditivos alimentarios y productos qumicos agrcolas, y es evidente
que dichas pruebas slo pueden realizarse con animales, aunque los sujetos de
las pruebas definitivas sean seres humanos en contacto directo o indirecto con las
mencionadas sustancias, (53, 54).
Particularmente los dos organismos modelos mas empleados (Ver tabla 2) para
evaluar posible actividad biolgica biopesticida son: la Artemia salina y los
29
Mosquitos (Diptera: Culicidae). A pesar de sus obvias diferencias de tamao y
forma de vida, estos organismos modelos producen protenas que realizan las
mismas funciones bsicas que en los seres humanos: le indican al organismo
cundo y cmo crecer, reproducirse, combatir el estrs y eventualmente morir,
(51, 54).
En la siguiente tabla se presenta una breve descripcin de los dos organismos
modelos seleccionados.
CARACTERISTICAS
Culicidae) Shrimps)
30
165 millones de pares de bases Presenta 42 cromosomas, de
de ADN. 13.600 genes, de los 1 a 3 centromeros, diploides.
cuales cerca del 50% Posee un contenido elevado
GENOMA equivalentes humanos en protenas y sirven como
alimento para invertebrados,
crustceos y peces marinos,
de acuerdo a su fase de
evolucin (larva o adulto).
Los mosquitos son insectos del orden Dpteros y de la familia Culicidae, que se
caracterizan por su pequeo tamao, con abdomen delgado, alas estrechas,
antenas largas y extremadamente plumosas en los machos; presentan un aparato
bucal adaptado para picar, con una trompa o pico largo y no articulado, constituido
por el labio inferior, por lo que son chupadores labiales. El pico les sirve a los
machos para chupar el jugo o nctar de los vegetales y a las hembras, que son
hematfagas, para chupar la sangre de los vertebrados, (55, 56).
31
alcanzar la longitud de un adulto. Nadan desordenadamente alcanzando la
superficie para respirar (ver figura 7), (56, 57).
32
vectores. Estas enfermedades han cobrado a lo largo de la historia millones de
vidas y muchas de ellas continan siendo hoy da problemas de salud prioritarios
especialmente en los trpicos y subtrpicos. Adems, diversos factores como el
cambio climtico global, la colonizacin humana de nuevos ambientes, el mercado
internacional, el transporte moderno, entre otros, favorecen la posibilidad de que
se establezcan poblaciones de vectores exticos y que circulen patgenos en
reas que previamente estaban libres de ellos, (55, 56, 57).
33
Los estadios inmaduros se desarrollan preferiblemente en depsitos de agua y los
criaderos son variados, constituidos por aguas con un alto grado de
contaminacin, abundante contenido de materia orgnica, con detritos en proceso
de fermentacin y en ambientes sombreados cercanos al ambiente domiciliario,
(58, 59).
Debido a su antropofilia acentuada, la resistencia a los insecticidas, su capacidad
vectorial y a las altas densidades que puede llegar a alcanzar, Culex
quinquefasciatus es un factor de riesgo para las poblaciones urbanas. Por tanto, el
conocimiento de los aspectos biolgicos, fisiolgicos y bioqumicos de la especie
se constituyen en el primer paso que conlleva a la implementacin de medidas
que conduzcan al control de las poblaciones de mosquitos en las reas urbanas,
(58, 59, 60).
34
formas clsica y hemorrgica. Desde 1947, cuando se lanza el Programa
Continental de Erradicacin del mismo, hasta 1980, este vector se haba eliminado
de la mayora de los pases de la regin, (61).
Anopheles: Las abundantes espcies de Anopheles (Ver figura 10) varan mucho
en cuanto a el hbitat, encontrandose en campo abierto, reas boscosas,
comunidades urbanas o rurales y a diversas altitudes. Las diversas especies
tienen muchas variaciones en cuanto a preferencias de hbitat, por lugares
sombrios o soleados, aguas dulces o muy saladas, estancadas o de corrientes
moderadas, tambin con amplios lmites en contenido de oxgeno libre. Los
mosquitos anofelinos son los nicos transmisores del paludismo transmiten las
filariasis de Bancroft y de Malaya, (55, 56).
35
Esta especie se reproduce en una gran diversidad de hbitats acuticos. La
calidad del agua va desde clara a moderadamente turbia, puede ser salobre o
fresca, relativamente limpia o con moderada polucin y la vegetacin en sus
criaderos es diversa, (63).
Clase: Crustacea
Subclase: Branchiopoda
Super Orden: Anostraca
Familia: Artemiidae
Gnero: Artemia
36
Originalmente la Artemia salina ha sido descrita como la nica especie dentro del
gnero Artemia. Y desde el principio del siglo 20 investigaciones citolgicas y
genticas complementaron los mtodos tradicionales de clasificacin basados en
aspectos morfolgicos. El gnero Artemia ha sido dividido en 6 especies
hermanas, (67, 68):
Hasta hoy se conoce que la Artemia se encuentra en casi 400 sitios esparcidos
sobre los cinco continentes. Su amplia distribucin es atribuida a la dispersin
natural por el viento o por aves migratorias y/o introduccin deliberada realizada
por el hombre con fines comerciales. Estos hbitas presentan caractersticas
climatolgicas, ecolgicas y fisico-qumicas particulares, las cuales se reflejan en
variaciones en rasgos de la historia de vida, plasticidad fenotpica y/o
heterogeneidad gentica, (66).
37
La Artemia es un filtrador no-selectivo y se alimenta filtrando materia particulada
de origen biolgico (detritus orgnico de aguas de manglares) as como tambin
de organismos vivos de tamao apropiado (bacterias y algas microscpicas). De
hecho debido a la ausencia de predadores y competidores por alimento, la Artemia
frecuentemente se desarrolla en grandes monocultivos, y las densidades son
principalmente controladas por la limitacin de alimento. La reproduccin
ovovivpara (nauplios como descendencia) ocurre mayormente en niveles de baja
salinidad, considerando que los quistes (reproduccin ovpara) son producidos en
salinidades ms all de 150 ppt, (67, 69).
38
La larva Instar I es incapaz de tomar el alimento, ya que su sistema digestivo no
es an funcional (la boca y el ano estn todava cerrados). Despus de alrededor
de 12 horas el animal muda en la segunda etapa larval (Instar II). A partir de esta
etapa el sistema digestivo es funcional y pequeas partculas de tamao que
oscilan entre 1-40 mm pueden ser ingeridas (clulas de algas, bacterias, detrito),
(67).
Los machos tienen un par de penes en la parte posterior de la regin del tronco
mientras que las hembras pueden ser fcilmente reconocidas por el distintivo saco
embrionario o tero que se ubica inmediatamente detrs el undcimo par de
39
toracpodos. El par de ovarios se sitan detrs los toracpodos sobre ambos
lados del tracto digestivo lineal, (67, 68).
40
4.2.2.3. LA IMPORTANCIA DE LA ARTEMIA SALINA EN LAS
INVESTIGACIONES.
41
4.3. ACTIVIDAD BIOLOGICA DE LAS ACETOGENINAS DE ANNONACEAE
Annonacina
Annona muricata Corossolina
(Semillas) Corossolona
Diepomuricanina
Gigantetrocina
Gigantetrocina A
Gigantetriocina
Muricatetrocina
Muricatetrocina A
Murisolina
Rolliniastatina 1
Guanbana Rolliniastatina2
Solamina
42
Annona squamosa
(Corteza)
Nombre comn o vulgar: Ann, Bullatacina
Annona, Annona blanca, Annona del Bullatacinona
Per, Rin Squamona
El Ann es una fruta parecida a la
chirimoya, con escamas exteriores
muy pronunciadas.
Annona squamosa
(Semillas)
Annonacina
Annonacina A
Annonastatina
Annonin VI
Annonin I
Asimicina
Bullatalicina
Bullatanocina
Neoannonina
43
Asimina triloba
(Corteza-Tallo) Annonacina
Cis-Annonacina-A-one
Trans-Annonacina-Aone
Asimicina
Bullatacina
Bullatacinona
Cis-Gigantetrocinona
Tran- Gigantetrocinona
Squamocina
Trilobacina
44
TABLA 7. ACETOGENINAS CON MAYOR ACTIVIDAD BIOPESTICIDA (16,
22,42).
ACETOGENINAS ESTRUCTURAS
ACETOGENINAS
DEL TIPO OH
CH3
ASIMICINA O
H3C O
Bullatacina o O
Asimicina, OH OH
O
Rolliniastatina-1,
Rolliniastatina-2.
OH
O
SQUAMOCINA CH3
O
O CH3 CH3
HO O
OH OH
CH3
H3C O
O O
ANONACINA
OH O
45
TABLA 8. ESTUDIOS REALIZADOS CON ACETOGENINAS DE ANNONACEAE
EN ARTEMIA SALINA Y MOSQUITOS (DIPTERA:CULICIDAE).
Extractos de Demostrar la
Annona muricata, Culex accin larvicida de
Ambrosia quinquefasciatus diferentes (59)
artemisiaefolia y extractos sobre el
Annona squamosa mosquito Culex
quinquefasciatus.
Evaluar la
toxicidad larvicida
de suspensiones
Extractos de Aedes aegypti acuosas de
Annona muricata extractos de las (80)
semillas, flores,
hojas, corteza de
ramas y corteza
de raices de la
annona muricata.
46
Extractos de Larvas del IV Estudiar el efecto
semillas de Estadio de bioinsecticida de
Annona cherimolia Anopheles ambos extractos (81)
y Annona muricata sobre larvas del IV
estadio de
Anopheles.
47
TABLA 9. DIFERENCIA ENTRE MOSQUITOS SANOS
Y AFECTADOS POR LA ACETOGENINA ANONACINA, (45).
48
5.0 PROTOCOLOS
49
FIGURA13. TANQUE PARA HUEVOS DE ARTEMIA
50
5.1.1. 2. Preparacin de extractos y adicin de larvas:
Se debe pesar 20mg del extracto a evaluar la cual se disuelve en un vial de boca
ancha, agregar 2mL de solvente el cual puede ser: etanol, metanol, hexano o
clroroformo, depende del extracto a usar; esta solucin de (20mg/2mL) se
reparten en los viales que estn agrupados de a tres (Ver figura 15), en los
cuales se deben tener tres concentraciones y un control, (82).
51
Contar 10 larvas o nauplis las cuales se separan y se decantan de las
cscaras con ayuda de una pipeta pasteur y un vaso de precipitado,
(82).
Analizar los datos con un programa de computador para de terminar los valores
del DL50 (Ver anexo 3 y 4), (82).
52
5.1.2 PROCEDIMIENTO DE LA UNIVERSIDAD DEL QUINDIO, (83).
A partir del residuo seco del extracto obtenido de la especie vegetal, se prepara
con agua destilada un patrn de 1000 mg de extracto por litro de solucin, del cual
se preparan ocho diluciones de 6, 10, 24, 50, 100, 240, 500 y 1000 ppm de
concentracin. Se adiciona un mililitro de cada dilucin de extracto en un vial, se
transfirieren diez larvas de Artemia salina, tomadas con una pipeta pasteur, en
aproximadamente un mililitro de solucin salina y se completa hasta cinco mililitros
con la misma solucin salina en la que estaban las larvas, paralelamente se
prepararan cinco blancos por dilucin de extracto de la siguiente forma: se toman
10 larvas en un vial y se completa el volumen de cada uno a 5 mililitros con
solucin salina en la cual estaban las larvas. Se incuban los tubos a la luz de una
bombilla durante 24 horas, al cabo de los cuales se cuenta el nmero de larvas
muertas en cada tubo, despus de este primer conteo se dejan los viales en las
53
mismas condiciones y se cuentan las larvas muertas al cabo de 48 horas de
sembradas, (83).
Con los datos obtenidos se determina la DL50 con el 95% de confianza utilizando
el mtodo Probit, (83).
54
5.1.3 PROCEDIMIENTO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA,
(84).
55
5.2 PROTOCOLOS CON MOSQUITOS
Para iniciar la cra se colectan huevos, larvas y pupas del mosquito Cx.
quinquefasciatus en estanques con agua sucia y en floreros, se deben colocar en
bandejas de plstico (47x35x12 cm) con agua, para su desarrollo en el laboratorio.
Las pupas formadas se colectan diariamente y se depositan en una bandeja de
plstico (24x19x9 cm) con agua. La bandeja con pupas se introduce en una jaula
entomolgica (60x60x60cm) y a los adultos emergidos dentro de sta se les
alimenta de dos maneras: con agua azucarada para los machos y adicionalmente
para las hembras se coloca un pollo (inmovilizado en una pequea jaula) como
recurso hematofgico. Los huevos depositados en la superficie del agua, se
colectan diariamente y se colocan en bandejas de plstico (47x35x12 cm) con
agua para su eclosin. En estas bandejas se desarrollan las larvas, a las cuales se
les proporciona alimento para peces tilapia (Apitilapia nivel 1), previamente molido,
cada dos das. Al terminar el desarrollo larval y al formarse las pupas, se trasladan
a jaulas de emergencia de adultos, para as continuar cotidianamente con todas
las actividades de cra de Cx. quinquefasciatus con la finalidad de disponer
constantemente de larvas de cuarto estadio larval para efectuar los bioensayos,
(85).
56
esencias. Al testigo no se le aplic ningn tratamiento. Para cada dosis evaluada
se utilizaron tres repeticiones, (85).
57
5.2.2 PROCEDIMIENTO #2 PARA LA EVALUACIN DE TOXICIDAD CON
LARVAS DEL IV ESTADIO DE ANOPHELES, (81).
58
5.2.3 PROCEDIMIENTO #3 PARA LA EVALUACIN DE TOXICIDAD CON
MOSQUITO CULEX. QUINQUEFASCIATUS , (82).
Tomar las larvas y colocarlas en una jaula de madera (Ver figura 17) de 60cm x
60cm x60cm que esta cubierta con nylon en unas bandejas con agua y un
algodn empapado en agua con azcar (Ver figura 18). A los dos o tres das las
hembras ovipositan sobre el agua formando unas balsitas, se llaman balsitas
porque flotan, (82).
FIGURA 17. MOSQUITERO
59
Colocar las balsitas en vasos de icopor de 1 litro y llenar bien con agua de la
llave, encima se debe colocar una galleta de perro molida para las larvas, las
larvas comienzan a eclosionar alrededor de 2 o 3 das, presentan respiracin
aerbica; estas salen a la superficie a tomar aire y luego bajan, permaneciendo
en continuo movimiento, de arriba a bajo, (82).
Se dejan all, mas o menos el ciclo hasta el 4 periodo, el ciclo es de 21 das, luego
se registra la fecha de inicio y su crecimiento, (82).
Utilizar una placa de 96 posos, esta placa de 96 posos emplea 8 larvas como
replica y las concentraciones que usa varan mas o menos desde 5000, 500, 50,
5.0 y 0.5 ppm, segn la disponibilidad de muestra y se usa un control. Por cada
placa de 96 pozos se debe poner dos muestras; el pozo tiene un volumen de 250
L de los cuales se colocan 240L de agua y 10 L de la muestra; los 10 L de
muestra debe dar por dilucin las diferentes concentraciones que se quiere aplicar
de la solucin madre de 10000 ppm que se deja al 1% (la solucin madre tiene
solventes orgnicos involucrados, estos se dejan evaporar ya que cualquier traza
de cloroformo o de hexano mata la larva); luego se toman las larvas con una
pipeta pasteur larga y se adiciona una larva en cada poso, (82).
Hacer una lectura a las 48h y medir la mortalidad, utilizar el programa Probit (ver
anexo 3 y 4) para evaluar la concentracin efectiva para matar el 50% de la
poblacin, (82).
60
Protocolo de la OMS:
61
5.3. PROTOCOLOS RECOMENDADOS PARA EVALUAR POSIBLE ACTIVIDAD
BIOLGICA BIOPESTICIDA.
5.3.1. Diagrama De Flujo #1: Bioensayo Preliminar Con Artemia salina, (82).
Crianza De Larvas:
62
Preparacin de Extractos:
63
Adicin de Larvas:
64
Anlisis De Mortalidad:
65
5.3.2. Diagrama De Flujo #2: Bioensayo Especfico Con El Mosquito Culex.
quinquefasciatus, (82).
Crianza de Larvas:
66
GUARDAR Las balsitas en la nevera.
67
240L de agua y 10 L de la muestra, los
10 L de muestra deben ser las
ADICIONAR diferentes concentraciones que se quiere
aplicar de la solucin madre de 10000
ppm que se deja al 1%.
Anlisis De Mortalidad:
68
6.0 DISCUSIN GENERAL
69
guanbana en Colombia fue de 9600 toneladas, en un rea de 1.441 Ha, las
cuales estn distribuidas entre 10 departamentos (Antioquia, Bolivar, Cordoba,
Cundinamarca, Huila, Norte de Santander, Risaralda, Santander, Tolima y Valle),
siendo los mas grandes productores, Tolima (Faln, Guamo y San Luis) Y Valle
(Toro) con el 76% de la produccin total nacional, (Ver anexo 5), (86).
El principal uso de la guanbana (Anona muricata) en Colombia industrialmente es
para la elaboracin de jugos nctares, conservas, jarabes, helados, compotas,
dulces, sorbetes, concentrados, entre otros; sin embargo, se desechan su
cscara, semillas y hojas. Teniendo en cuenta los compuestos bioactivos que
estn presentes y que de las especies de annonaceae estudiadas por varios
autores, las mas enriquecidas en acetogeninas de actividad biopesticida
(Asimicina, Squamocina y Anonacina), se encuentran en las especies muricata,
triloba y squamosa, valdra la pena aprovechar estos deshechos principalmente de
las semillas para la obtencin de sus compuestos activos, iniciando como lnea de
investigacin en la Escuela de Tecnologa Qumica de la Universidad Tecnolgica
de Pereira, con la obtencin y evaluacin de extractos de semillas por contener la
mayor concentracin de compuestos activos y por ser el desecho mas importante,
(22, 42).
Por esta razn se elabor la presente documentacin y a partir del anlisis de esta
informacin, se propone como siguiente paso en una lnea de investigacin
encaminada al estudio y aprovechamiento de compuestos activos de Annonaceae,
iniciar con la obtencin de extractos de semillas como principal desecho; en este
proyecto se propone iniciar con la evaluacin de la actividad biopesticida de
extractos crudos por la facilidad de implementacin de los ensayos, puesto que la
actividad anticancergena y antiparasitaria implica un alto costo y requiere de
licencias; sin embargo, estas pueden evaluarse simultneamente en institutos
mdicos especializados y otras universidades.
70
industrias despulpadoras de la regin, seguido por su transporte a la Universidad
Tecnolgica de Pereira al Laboratorio de Oleoquimica, para la obtencin de
extractos con actividad biolgica siguiendo los protocolos previamente realizados
en investigaciones hechas por integrantes del grupo de Oleoquimica (referencia
bibliogrfica, 87) a los cuales se les realizara la caracterizacin qumica e
identificacin preliminar de los compuestos reportados por varios autores con
actividad biopesticida (Asimicina, Squamocina y Anonacina), utilizando
Cromatografa Liquida de Alta Resolucin (HPLC), comparando tiempos de
retencin relativos, contra perfiles reportados en la literatura de estudios previos y
la identificacin de compuestos nuevos utilizando tcnicas cromatografas y
tcnicas espectroscpicas (RMN, H, 13 C, IR, EM), (22, 23, 24).
La caracterizacin biolgica se realizara a partir de bioensayos con diferentes
organismos modelos, implementando en la UTP la Artemia salina como bioensayo
preliminar por ser un organismo verstil de fcil adquisicin y los mosquitos como
bioensayo especifico (Culex quinquefasciatus, Anopheles, y Aedes aegypti) por
disponibilidad, economa y por ser un organismo transmisor de agentes vectores
de enfermedades; se recomienda evaluar actividad con el mosquito Culex
quinquefasciatus pues los bioensayos con Anopheles se podran realizar en FIDIC
(Fundacin-Instituto de Inmunologa de Colombia) y lo bioensayos con Aedes
aegypti en la Universidad del Quindo. Igualmente seria importante realizar un
estudio minucioso de los costos de la investigacin y la elaboracin de estas
pruebas de actividad biolgica.
71
7.0 CONCLUSIONES
72
5. Es importante crear una investigacin encaminada a la evaluacin de la
actividad biolgica de las acetogeninas de Annonaceae como biopesticidas;
comenzando con el aprovechamiento de las semillas de desecho de las
industrias de pulpas existentes en Colombia.
73
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85
ANEXOS
86
ANEXO 1. MATERIAL Y REACTIVOS A UTILIZAR
Bioensayo Para La
Bioensayo Estndar De Evaluacin De
Toxicidad Con Artemia Toxicidad Con El Protocolo de la OMS
Salina Mosquito Culex.
quinquefasciatus
Recipiente plstico
dividido en dos Succionadores Pipetas
secciones
Papel carbn Jaula de madera de Erlenmeyers de 500ml.
60cm x 60cm x60cm.
38 gramos de sal marina Nylon Extracto de la Anoncea
Agua destilada Bandejas con agua Beakers
200 mg de huevos de Agua con azcar Pipeta pasteur larga
Artemia salina
Una lmpara Algodn
5
Cajas de petri pequeas Extracto de la anoncea.
Beakers.
Pgina - 2 -
.
Continuacin tabla 1.
LAS LARVAS LARVAS
Pgina - 3 -
cuelgan con la cabeza hacia abajo
oblicuo respecto a la superficie del
agua.
LAS PUPAS
(estado evolutivo en el que el
insecto NO se alimenta) se
diferencian por las caractersticas de
las trompetillas.
Pgina - 4 -
ESQUEMA CORPORAL DE UN MOSQUITO
PROGRAMA PROBIT:
Pgina - 5 -
determinar los lmites de resistencia de insectos, por ejemplo, ante ciertos
biocida, (83).
Pgina - 6 -
La toxicidad de una droga puede medirse con el conocimiento de la dosis letal
50 (DL50), que es la dosis capaz de provocar la muerte del 50% de los animales
de laboratorio (88).
Pgina - 7 -
ANEXO 5. PRODUCCION DE GUANABANA EN COLOMBIA EN EL AO
2003.
Pgina - 8 -
ANEXO 6.
Hacienda Calamar
Ubicada en la vereda la
Honda
Desechos de guanbana
(annona muricata)
preferiblemente semillas,
TOMA DE MUESTRAS en la regin.
Hacienda Halcones
Ubicada en la cadena
el Tigre va cerritos.
Al laboratorio de
Oleoquimica de la UTP
TRANSPORTE
Biolgica
Realizar bioensayos
ELABORACION DE
UN Mezclando con Anopheles y Aedes aegypti
BIOINCECTICIDA extractos de plantas Enviar extracto a otras Universidades
NATURAL sinrgicas. y Centros de Investigacin
ANEXO 7. CONDICIONES AMBIENTALES PARA EL MANTENIMIENTO DE
ORGANISMOS MODELOS:
Aire y ventilacin.
Los locales debern contar con las siguientes exigencias de aire y ventilacin:
Pgina - 10 -
En caso de poseer un bioterio doble pasillo con locales centrales
(Circulacin limpia y sucia), el gradiente de presin ser del limpio al sucio, (4).
Temperatura y humedad.
Los locales debern contar con las siguientes exigencias de intensidad y tipo de
iluminacin:
La luz deber ser artificial y provista por tubos fluorescentes con incidencia
oblicua, de forma tal que todas las jaulas, independientemente de su ubicacin,
reciban intensidades similares, (4).
Condiciones de alojamiento.-
Pgina - 11 -
acuerdo a la especie, un espacio adecuado, preservando mnimas condiciones
de higiene y de proteccin contra depredadores, roedores y otras plagas, (4).
Los animales sern alojados en jaulas adecuadas para cada especie, (4).
Adquisicin de animales
Pgina - 12 -
ANEXO 8. LISTA AMPLIADA DE GNEROS DE LA FAMILIA ANNONACEAE
CON SUS RESPECTIVAS ESPECIES, (5, 6, 7).
GENEROS ESPECIE
Alphonsea boniana
Alphonsea elliptica
Alphonsea javanica
Alphonsea kinabaluensis
Alphonsea Alphonsea sp. Kessler 3112
Alphonsea sp. Kessler 3186
Alphonsea sp. Mols 16
Pgina - 13 -
Anaxagorea angustifolia
Anaxagorea borneensis
Anaxagorea brachycarpa
Anaxagorea brevipedicellata
Anaxagorea brevipes
Anaxagorea crassipetala
Anaxagorea dolichocarpa
Anaxagorea floribunda
Anaxagorea gigantophylla
Anaxagorea guatemalensis
Anaxagorea inundata
Pgina - 14 -
Asimina Asimina angustifolia
Asimina longifolia (polecat bush)
Asimina parviflora (dwarf pawpaw)
Asimina triloba (pawpaw)
Cremastosperma brevipes
Cremastosperma bullatum
Cremastosperma Cremastosperma cauliflorum
Cremastosperma cenepense
Cremastosperma gracilipes
Cremastosperma leiophyllum
Cremastosperma macrocarpum
Cremastosperma magdalenae
Cremastosperma megalophyllum
Cremastosperma microcarpum
Cremastosperma monospermum
Cremastosperma napoense
Cremastosperma novogranatense
Cremastosperma oblongum
Cremastosperma panamense
Cremastosperma pedunculatum
Cremastosperma pendulum
Cremastosperma peruvianum
Cremastosperma venezuelanum
Cremastosperma westrae
Cremastosperma yamayakatense
Cremastosperma sp. Chatrou 268
Cremastosperma sp. Chatrou et al.
103
Pgina - 15 -
Cremastosperma sp. Escobar
3309
Cremastosperma sp. Foster 3418
Cremastosperma sp. Gentry
45510
Cremastosperma sp. Graham 635
Cremastosperma sp. Killip 28961
Cremastosperma sp. Maas 9148
Cremastosperma sp. Pirie et al. 57
Cremastosperma sp. Pirie et al. 71
Cremastosperma sp. Smith 1577
Cremastosperma sp. Steyermark
94314
Cremastosperma sp. Tello 3416
Cremastosperma sp. Woytkowski
7128
Pgina - 16 -
Diclinanona Diclinanona tessmannii
Duguetia bahiensis
Duguetia cadaverica
Duguetia calycina
Duguetia cauliflora
Duguetia chrysea
Duguetia confinis
Duguetia confusa
Duguetia echinophora
Duguetia guianensis
Duguetia hadrantha
Duguetia Duguetia lucida
Duguetia macrocalyx
Duguetia macrophylla
Duguetia marcgraviana
Duguetia megalocarpa
Duguetia moricandiana
Duguetia neglecta
Duguetia odorata
Duguetia panamensis
Duguetia peruviana
Duguetia pycnastera
Duguetia quitarensis
Duguetia riedeliana
Duguetia salicifolia
Duguetia sessilis
Duguetia sooretamae
Duguetia staudtii
Duguetia stelechantha
Duguetia surinamensis
Duguetia ulei
Duguetia uniflora
Duguetia yeshidan
Pgina - 17 -
Ellipeia Ellipeia dulcis
Enicosanthum fuscum
Enicosanthum membranifolium
Enicosanthum Enicosanthum paradoxum
Enicosanthum sp. Ambriansyah et
al. 2067
Ephedranthus boliviensis
Ephedranthus parviflorus
Ephedranthus Ephedranthus sp. Chatrou et al.
173
Ephedranthus sp. Maas et al. 8826
Goniothalamus curtisii
Goniothalamus giganteus
Goniothalamus griffithii
Goniothalamus holttumii
Goniothalamus lanceolatus
Goniothalamus laoticus
Goniothalamus macrophyllus
Pgina - 18 -
Goniothalamus malayanus
Goniothalamus montanus
Goniothalamus Goniothalamus rotundisepalus
Goniothalamus scortechinii
Goniothalamus tapis
Goniothalamus tenuifolius
Goniothalamus tomentosus
Goniothalamus tortilipetalus
Goniothalamus umbrosus
Goniothalamus uvarioides
Goniothalamus wrayi
Guatteria aeruginosa
Guatteria alata
Guatteria allenii
Guatteria alta
Guatteria alutacea
Guatteria amplifolia
Guatteria anomala
Guatteria atra
Guatteria Guatteria australis
Guatteria aff. australis Lobo and
Fiaschi 499
Guatteria blainii
Guatteria boliviana
Guatteria brevicuspis
Guatteria brevipedicellata
Guatteria cf. candolleana Harley et
al. 17360
Guatteria caribaea
Guatteria chiriquiensis
Guatteria diospyroides
Guatteria discolor
Guatteria dolichopoda
Guatteria dumetorum
Pgina - 19 -
Guatteria dusenii
Guatteria elata
Guatteria elegantissima
Guatteria ferruginea
Guatteria foliosa
Guatteria galeottiana
Guatteria glabrescens
Guatteria gracilipes
Guatteria guianensis
Guatteria heterotricha
Guatteria cf. hilariana Gottsberger
and Gottsberger 21-9274A
Guatteria hyposericea
Guatteria inuncta
Guatteria inundata
Guatteria jefensis
Guatteria cf. lasiocalyx Krukoff
11086
Guatteria cf. lasiocalyx Maas et al.
9000
Guatteria latifolia
Guatteria latisepala
Guatteria liesneri
Guatteria cf. lucens Gomez et al.
23305
Guatteria macropus
Guatteria maypurensis
Guatteria megalophylla
Guatteria cf. meliodora Maas et al.
9231
Guatteria mexiae
Guatteria modesta
Guatteria multivenia
Guatteria notabilis
Guatteria oligocarpa
Guatteria olivacea
Guatteria oliviformis
Guatteria ouregou
Guatteria pacifica
Guatteria paraensis
Guatteria parvifolia
Guatteria pittieri
Guatteria poeppigiana
Pgina - 20 -
Guatteria pogonopus
Guatteria pohliana
Guatteria polyantha
Guatteria polycarpa
Guatteria pubens
Guatteria pudica
Guatteria punctata
Guatteria puncticulata
Guatteria recurvisepala
Guatteria reflexa
Guatteria rigidipes
Guatteria rotundata
Guatteria rupestris
Guatteria salicifolia
Guatteria scandens
Guatteria schlechtendaliana
Guatteria schomburgkiana
Guatteria schunkevigoi
Guatteria scytophylla
Guatteria sellowiana
Guatteria sessilicarpa
Guatteria sessilis
Pgina - 21 -
Guatteria sp. Pirie et al. 50
Guatteria sp. Prevost 4247
Klarobelia candida
Klarobelia cauliflora
Klarobelia inundata
Klarobelia megalocarpa
Klarobelia Klarobelia stipitata
Klarobelia sp. Meier and Llamozas
3685
Malmea dielsiana
Malmea dimera
Malmea Malmea surinamensis
Malmea sp. Chatrou et al. 8
Meiogyne cylindrocarpa
Meiogyne stenopetala
Meiogyne Meiogyne virgata
Pgina - 22 -
Meiogyne sp. Kessler 3219
Miliusa campanulata
Miliusa cuneata
Miliusa Miliusa horsfieldii
Miliusa lineata
Miliusa longipes
Miliusa thorelii
Miliusa velutina
Miliusa mollis Miliusa sp. Middleton and Lamxay
269
Mitrephora alba
Mitrephora celebica
Mitrephora Mitrephora keithii
Mitrephora maingayi
Mitrephora polypyrena
Pgina - 23 -
Monodora crispata
Monodora myristica
Monodora Monodora tenuifolia
Orophea brandisii
Orophea celebica
Orophea creaghii
Orophea enneandra
Orophea Orophea enterocarpa
Orophea kerrii
Orophea cf. malayana Hoffmann
11
Orophea myriantha
Orophea polycarpa
Oxandra asbeckii
Oxandra espintana
Oxandra euneura
Oxandra laurifolia
Oxandra longipetala
Pgina - 24 -
Oxandra macrophylla
Oxandra nitida
Oxandra Oxandra polyantha
Oxandra sphaerocarpa
Oxandra venezuelana
Oxandra xylopioides
Piptostigma fasciculatum
Piptostigma mortehani
Piptostigma Piptostigma pilosum
Polyalthia borneensis
Polyalthia cauliflora
Polyalthia celebica
Polyalthia cerasoides
Polyalthia cinnamomea
Polyalthia congesta
Polyalthia debilis
Polyalthia discolor
Polyalthia flagellaris
Polyalthia cf. glabra Rastini 224
Polyalthia glauca
Polyalthia lateriflora
Polyalthia littoralis
Polyalthia longifolia
Polyalthia Polyalthia cf. longifolia Mols 14
Polyalthia longipes
Polyalthia obliqua
Polyalthia pendula
Polyalthia rumphii
Pgina - 25 -
Polyalthia sclerophylla
Polyalthia stenopetala
Polyalthia stuhlmannii
Polyalthia subcordata
Polyalthia suberosa
Polyalthia sumatrana
Polyalthia viridis
Polyalthia xanthopetala
Polyalthia sp. Ridsdale DV-M1-
12314
Pseudomalmea diclina
Pseudomalmea sp. Idarraga 13
Pseudomalmea
Pseudoxandra bahiensis
Pseudoxandra longipes
Pseudoxandra Pseudoxandra lucida
Pseudoxandra aff. pacifica van
Rooden et al. 565
Pseudoxandra polyphleba
Pseudoxandra spiritus-sancti
Pgina - 26 -
Pseuduvaria brachyantha
Pseuduvaria coriacea
Pseuduvaria Pseuduvaria pamattonis
Pseuduvaria rugosa
Rollinia edulis
Rollinia herzogii
Rollinia Rollinia mucosa (wild sweetsop)
Pgina - 27 -
Trivalvaria Trivalvaria macrophylla
Unonopsis elegantissima
Unonopsis pittieri
Unonopsis Unonopsis rufescens
Unonopsis stipitata
Xylopia ferruginea
Xylopia frutescens
Xylopia Xylopia hypolampra
Xylopia peruviana
Pgina - 28 -