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POLIPLOIDA EN PECES:

IMPACTOS EN LA ACUICULTURA

NELSON F. DIAZ
FACULTAD DE CIENCIAS AGRONOMICAS
UNIVERSIDAD DE CHILE
NATURALEZA DE LAS BIOTECNOLOGIAS.

(Daz y Neira, 2005)

Las biotecnologas son esencialmente de dos


categoras:

aquellas de naturaleza fisiolgica, que inciden sobre


las caractersticas funcionales de la reproduccin de
los individuos sobre los cuales se aplican, y

aquellas de naturaleza gentica, que inciden sobre


las caractersticas genticas de los individuos en que
se aplican o de su descendencia.
DIAZ, 2006
MEIOSIS

FECUNDACION

EN PECES.
BIOTECNOLOGAS CROMOSOMICAS
APLICABLES EN PECES.

Modificado de Chourrout, 1986


POLIPLOIDIA

Piferrer et al., 2009

Fig. 3. Methods
commonly used to
identify the ploidy
level in fish and
shellfish.
A qu problemas apunta la induccin de poliploidas ?
- En el caso de los triploides, siendo stos total o parcialmente estriles, al
reducir el gasto de energa en la maduracin sexual tiene aplicacin en
aumentar la eficiencia de produccin de carne incrementando el crecimiento
y evitando el deterioro en la calidad de la carne y del color de la piel.

- Algunas evaluaciones productivas en salmnidos concluyen que con los


peces triploides cuando se controla la maduracin temprana se logra un
mayor crecimiento de juveniles; en algunos casos se logran mejores
conversiones de alimento con reduccin de costos y se obtienen peces con
buena calidad de carne para su procesamiento y ahumado (Pepper, 1991).

- Al evitarse la maduracin sexual pueden adems retrasarse las cosechas,


logrando peces de mayor edad y peso. Tambin se evita la aparicin de
machos precoces entre los peces destinados a cosecha.

- En el caso de los tetraploides, que presentan fertilidad normal, son


potencialmente tiles en la produccin de triploides mediante cruzamientos
con individuos normales.
ESTERILIDAD
Piferrer et al., 2009

Fig. 5. Gonads of adult diploid


and triploid male and female
European sea bass,
Dicentrarchus labrax, showing
the characteristic pattern of
triploidy effects at different
ages.

A and B, 2-year-old fish;


C and D, 3-year-old fish;
E and F, 4-year-old fish.
In each photograph, the
testis is in the top and the
ovary at the bottom.
Modified from Felip et al. (2001).
INDUCCIN DE TRIPLOIDAS EN TURBOT (Scophthalmus maximus).
I.- Determinacin de ploidas y de efectos de shock fros.
Piferrer et al. Aquaculture 188:79-90, 2000.

Mtodos.
Aplicacin de choques trmicos:
2 hembras para cada tratamiento, pool de
huevos divididos en 15 grupos:
3 controles
12 grupos tratados, en cuadriplicado.
Grupos de 500 huevos expuestos a choque
Objetivos. de fro a 0,2,4C / 5,10,20 y 40 min.
Investigar efectos de la Controles y tratamientos se incubaron a 13-
temperatura y duracin de los 14 C.
choques de fro en la
sobrevivencia y % de triploidas. Determinacin de ploida:
Ploida se determin en larvas mantenidas
Validar el uso de NOR (Regiones en solucin de Colchicina a 0,0005% / 6 hrs
Organizadoras Nucleolares) para Contando nmero de NOR en 50 clulas
chequear los niveles de ploidas. c/larva (32 larvas / grupo)
RRESULTADOS
INDUCCIN DE TRIPLOIDAS EN TURBOT (Scophthalmus maximus).
II.- Efectos de shock trmicos fros en la induccin de triploides a escala comercial.
Piferrer et al. Aquaculture 220:821-831, 2003

Objetivos: Mtodos:

Investigar los efectos del Experimento 1.


tiempo del shock trmico fro
en la sobreviviencia y en los Determinar mejor tiempo post fecundacin (PF)
porcentajes de tripliodas, en para el choque trmico; Grupos de 500 huevos
orden para obtener un 100 % expuestos a tiempos de
de triploides con la mejor
supervivencia de larvas. 0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,15 y 20 min PF a 0C /
Investigar los efectos del 20 min. Incubaciones PF a 13-14 C.
shock a temperaturas bajo Experimento 2.
cero grados.
Desarrollar un protocolo para
Evaluar la triploida a gran escala y los efectos
la produccin masiva de de T sub cero; 3 Grupos de 150 - 300 ml;
triploides usando la mejor choques a 5 min PF/20 min/-1,4C; de 6,5 min
combinacin de tiempos y
temperatura. PF/25 min/0,4C y de 6,5 min PF/25 min/-0,1C
Comparar la sobrevivencia Experimento 3.
temprana y el crecimiento de Se us la mejor combinacin de choques en
triploides v/s diploides.
grandes volmenes de huevos (200 a 400 ml)
para verificar la viabilidad y crecimiento de los
peces triploides; choques 6,5 min PF/25 min / T
de -0,5 a -1,2 C.
RESULTADOS
Experimento 1 Experimento 2

Experimento 3
Aquaculture 114 : 33-40. 1993.
Daz et al.
Physiological factors affecting triploid production in rainbow trout,
Oncorhynchus mykiss

Abstract
The influence of three physiological factors related to triploid production was
examined for rainbow trout. Individual spawnings of 46 females were used to
perform triploid production experiments from 1989 to 1991, with various water
temperatures (6-13.8C) at stripping and egg incubation. The percentage of
triploids was similar for a heat shock of 26.5C for 15 min applied 15 or 25 min
after fertilization (73.4 5.6% vs 78.6 4.5%).

A tendency to a higher percentage of triploids (85.9 5.7%) was observed for


water temperatures of 6-8.0C at stripping and incubation, compared to at higher
water temperatures of 12.1-14C (63.0 8.4%). Analysis of variance indicated
an effect of four categories of water temperature (6-8, 8.1-10, 10.1-12, 12.1-14C)
on triploid product at P= 0.14. Regression analysis confirmed these as significant
(r = -0.36; P< 0.02). A significant increase in percentage of triploids was observed
when eggs remained 2, 6 and 10 days in the body cavity. The mean % triploidy
was 46.1, 54.7 and 76.8, respectively. Similar results were observed for survival of
the eggs.
Colihueque et al., 2005
Produccin de progenies triploides en trucha caf (Salmo trutta) mediante
tratamientos de choque trmico.
Avances en Produccin Animal 30:71-81
PERFORMANCE DE CRECIMIENTO EN PECES TRIPLOIDES Y
DIPLOIDES EN BAGRE CHINO (Clarias fuscus)

Objetivos:

Comparar las caractersticas productivas de


peces triploides con peces diploides en
aspectos como: Sobrevivencia, Crecimiento,
Factor de condicin.
A dos temperaturas de cultivo: 21,5 C y 25 C.

Mtodos:

Induccin Ovulacin con inyeccin de 4 UI de


Gonadotropina corinica humana / gr de pez.
Recoleccin gametos por masaje abdominal de
hembras y machos maduros .
Huevos fertilizados separados en 2 grupos:
triploides y diploides.
RESULTADOS
No se observaron diferencias entre las t de cultivo en los primeros 80 das,
sin embargo, luego de 120 das se aprecian diferencias entre 3n y 2n.
Tanto la sobrevivencia como el factor de condicin no mostraron diferencias
significativas en los diferentes tratamientos.
Peces triploides presentaron mejores factores productivos que los diploides
siendo las diferencias significativas.
Methods.
- 1st group: optimal moment of induction (1,2,3,4,5 min after fertilization) with
pressure shock at 7000 psi (2 min)
- 2nd group: combinations of 3 pressures (7000, 7500, 8000) and two shock
durations (2 or 3 min)

Results.
- 7500 psi for 3 min shock at 3 min shock at 20C = 100% triploids
- Significant advantage of triploids in body weight and length at 12 months age
Piferrer et al., 2009

Table 3. Effects of induced triploidy on growth performance and gonadal


development in some commercially important fish, shellfish and crustaceans.

Atlantic salmon, Salmo salar


3N = 2N in juveniles; full gonadal sterility in females; aneuploid sperm in males
3N > 2N in adults

Rainbow trout, Oncorhynchus mykiss


3N < 2N immature; retarded ovarian development, rare presence of oocytes.
Males produced small amount of aneuploid sperm capable of fertilisation
3N > 2N mature

Brook trout, Salvelinus fontinalis


3N = 2N immature
3N > 2N mature

Coho salmon, Oncorhynchus kisutch


3N = 2N in juveniles, full gonadal sterility in females; retarded gonad growth in
males at 30 months
3N < 2N in adults
Tabla 3. Piferrer et al, 2009

Tilapia:

Oreochromis mossambicus 3N < 2N up to 8 months. Penman et al. (1987)

Oreochromis aureus 3N = 2N up to 6 months. Don and Avtalion (1986)


3N = 2N mature. Byamungu et al. (2001)

Oreochromis niloticus 3N = 2N immature. Brmick et al. (1995)


3N > 2N mature. Pechsiri and Yakupitiyage (2005)
Tabla 3. Piferrer et al, 2009

Channel catfish, Ictalurus punctatus 3N = 2N in juveniles; 3N > 2N in adults. Wolters et al. (1982)
European catfish, Silurus glanis 3N < 2N up to 5 months Retarded ovarian development. Linhart et al.
(2001) 3N > 2N mature. Krasznai and Marian (1986)
Chinese catfish, Clarias fuscus 3N > 2N at 6 months. Qin et al. (1998)
Asian catfish, Clarias macrocephalus 3N > 2N at 8 months. Fast et al. (1995)
Indian catfish, Heteropneustes fossilis 3N >2N mature. Tiwary et al. (1997)
Plaice, Pleuronectes platessa European flounder, Platichtys flesus, hybrids 3N=2N in juveniles
Purdom (1972) 3N 2N in mature. Lincoln (1981b)
Turbot, Scophthalmus maximus 3N=2N during first year 3N > 2N after two years. Full gonadal sterility in
both sexes. Cal et al. (2006)
Cyprinid loach, Misgurnus anguillicaudatus 3N < 2N immature 3N > 2N at 1 yea.r Matsubara et al. (1995)
Full gonadal sterility in both sexes. Females produced euploid eggs. Suzuki et al. (1985)
Tench, Tinca tinca 3N >2N in adults Full gonadal sterility in females; aneuploid/euploid sperm in males.
Flajhans et al. (1993), Flajhans (1997), Linhart et al. (2006)

Grass carp, Ctenopharyngodon idella 3N 2N immature Production of aneuploid eggs and sperm,
partly capable of fertilisation. Cassani and Caton (1986), Goudie (1988), van Eenennaam et al. (1990)
Common carp, Cyprinus carpio 3N < 2N in juveniles; 3N < 2N in adults. Occasional ovarian
development, aneuploid sperm. Cherfas et al. (1994, 1995b)
Perch, Perca flavescens 3N < 2N in juveniles. Malison et al. (1993b)
European sea bass, Dicentrarchus labrax 3N=2N up to 2 years; 3N < 2N in adults up to 4 years Full
gonadal sterility in both sexes. Felip et al. (1999, 2001b), Perruzi et al. (2004)
Shi drum, Umbrina cirrosa 3N < 2N in adults. Segato et al. (2006)
Tabla 3 Continuacin

African catfish, Clarias gariepinus 3N = 2N at 7 months. Henken et al. (1987)


Japanese flounder (hirame), Paralichthys olivaceus 3N = 2N in immature and mature. Tabata (1991) in
Arai (2001)
Mud loach, Misgurnus mizolepis 3N = 2N at 9 months. Kim et al. (1994)
Red seabream, Pagrus major 3N = 2N up to 10 months. Males produced euploid sperm up to the
heptaploid level. Sugama et al. (1992), Kawamura et al. (1995)
Gilthead sea bream, Sparus aurata 3N = 2N up to 17 months (all-male) 3N remained male when diploids
sex-changed to female Haffray et al. (2005). No spermatozoa
Ayu or sweet fish, Plecoglossus altivelis 3N = 2N at 6 months. Reduced gonadal development in both
sexes, rare presence of vitellogenic oocytes or spermatids. Lee et al. (1998), Ueno et al. (1986)
Fighting fish, Betta splendens 3N = 2N immature. Kavumpurath and Pandian (1992)

________________________________________________________________________________________________

3N > 2N mature = 13 especies

3N < 2N in adults = 7 especies

3N = 2N in immature and mature = 8 especies


Capozza 2009; Tetraploidia Tilapia
Yoon 2001; Tetraploid Much Load
CONTROL DEL SEXO GENETICO Y LA PROPORCION DE SEXOS
ALEVINES
XX
XX
XY DESARROLLO NORMAL

XY
PRIMERA
GENERACIN

XY

ELIMINAR MACHOS POR GINOGNESIS


TRATAMIENTO HORMONAL

XX XX
NEOMACHO

ESPERMATOZOIDE X X OVOCITO NORMAL


DE NEOMACHO

Choque trmico SEGUNDA


XX XXX retencin del segundo polocito
GENERACIN

STOCK TODO HEMBRA NORMAL (2n) STOCK TODO HEMBRA TRIPLOIDE (3n)
un grupo de ellos pueden ser revertidos para utilizarlos
como reproductores en la prxima generacin. Peces estriles, se cosechan.
Avances en Produccin Animal 26(1-2):96-102
Manejos con "neomachos" aplicados al cultivo de peces.

Daz, 2002.

Resumen:
En este trabajo se describe la obtencin de neomachos y la utilizacin
de su semen en la produccin de lotes todo hembra y todo hembra
estriles. Se trabaj con trucha arco iris, aplicando metodologas de
produccin de ginogenticos, reversin del sexo gonadal, y
triploidizacin. Se utilizaron tcnicas citogenticas con tinciones
fluorescentes para el diagnstico de cromosomas sexuales en
progenitores y progenies.

Individuos ginogenticamente XX produjeron espermios viables, con


los que se produjeron progenies todo hembra y todo hembra estriles;
cromosmicamente se confirm un 96% de hembras diploides en el
primer caso y 80,6% de hembras triploides en el segundo, con
supervivencias al estado de ojo de 71,7 y 67,3% respectivamente.
A partir de progenies todo hembra se produjeron neomachos por
tratamiento con 17 metil-testosterona a alevines a la primera
alimentacin, con un promedio de 86,2% de machos revertidos.
- Daz, N. F. y Neira, R.
Biotecnologa Aplicada a la Acuicultura. I. Biotecnologas clsicas aplicadas a la
reproduccin de especies cultivadas.
Ciencia e Investigacin Agraria. 32:39-52, 2005.

- Daz N. F.
Manual de Biotecnologas para el Manejo Reproductivo en Peces.
Imprenta Salesianos. Santiago. 2006. 112 pgs.

- Daz, N.F., Iturra, P., Veloso, A., Estay, F. and Colihueque, N.


Physiological factors affecting triploid production in rainbow trout, Oncorhynchus
mykiss
Aquaculture 114 : 33-40. 1993.

- Daz, Nelson F.
Manejos con "neomachos" aplicados al cultivo de peces.
Avances en Produccin Animal 26(1-2):96-102, 2002.