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MICROBIOLOGA

AGRCOLA

Leonor Carrillo
Dra. en Ciencias Qumicas (Orientacin Biolgica)
Profesora Titular en
Facultad de Ciencias Agrarias, UNJu
y Facultad de Ingeniera, UNSa

Universidad Nacional de Salta


ISBN 987-9381-16-5

(http://www.unsa.edu.ar/matbib)

2003
CONTENIDO

1.Microorganismos.
Reinos. Organismos procariticos: eubacterias, arqueobacterias, actinomicetos, cianobacterias,
mixobacterias. Organismos eucariticos: mohos levaduras, macromicetos, mixomicetos, protozoos,
algas, lquenes. Organismos acelulares: virus, viroides, priones. Transferencia gentica en bacterias:
conjugacin, transformacin, transduccin, fusin de protoplastos.

2. Vida y muerte de los microorganismos.


Crecimiento. Tipo de nutricin. Factores de crecimiento orgnicos y minerales. Transporte de solutos.
Factores ambientales: agua y presin osmtica, tensin superficial, pH, oxgeno, potencial redox,
temperatura. Medios de cultivo. Esterilizacin. Accin del calor, radiaciones, luz ultravioleta,
microondas y ultrasonido. Separacin por filtracin. Desinfeccin. Interacciones microbianas: antibiosis,
mutualismo y simbiosis. Fijacin simbitica del nitrgeno. Micorrizas. Biopelculas. Predacin.

3. Actividad microbiana.
Suelo. Metabolismo. Degradacin de biopolmeros: celulosa, almidn, levanos, xilanos y otras
hemicelulosas, pectinas, quitina, lignina, lpidos, protenas, polinucletidos. Metabolismo productor de
energa. Respiracin: degradacin de hexosas, ciclo del cido tricarboxlico, cadena de transporte de
electrones, fosforilaciones. Fermentaciones: lcticas, alcohlica, propinicas, frmicas, butrico-
butanlica, acticas, de aminocidos. Oxidaciones incompletas. Respiracin anaerbica. Desnitrificacin,
reduccin a nitritos, sulfatorreduccin y metanognesis. Bacterias autotrficas. Nitrificacin,
sulfooxidacin, ferrooxidacin. Biosntesis. Sntesis de protenas y otros compuestos.

4. Estructuras fngicas.
Estructuras somticas. Estructuras reproductoras anamrficas y teleomrficas.

5. Rumen y biogas.
Metanognesis, diversidad de las arqueobacterias metanognicas. Rumen, un digestor natural.
Caractersticas del biogas. Digestores anaerbicos, materia prima, factores ambientales, criterios de
diseo y construccin, operacin, peligros potenciales y seguridad.

6. Micotoxinas.
Hongos en el campo y el almacenamiento. Honhos toxignicos y micotoxinas naturales. Produccin
de micotoxinas. Peligros. Prevencin.

7. Hongos.
Clasificacin. Macromicetos. Ascomycota y Basidiomycota. Hongos micorrizantes, inoculacin de
plantines. Cultivo del champin, obtencin del micelio, preparacin del compost, siembra del inculo,
produccin. Cultivo de hongos lignvoros, preparacin del substrato, inoculacin y produccin de las
setas, cultivo sobre troncos.

Apndice
Medios de cultivo y esterilizacin. Aislamiento y cultivo de microorganismos. Fijacin simbitica de
nitrgeno en leguminosas. Microorganismos del suelo. Inhibidores y desinfectantes. Digestin
anaerbica de residuos agrcolas. Morfologa microscpica de hongos. Identificacin de mohos
toxignicos. Micorrizas. Microorganismos del agua.
eucariticas 1-10
procariticas 1-3
NDICE Cianobacterias 1-9, 3 -25
Actinomicetos 1-8 Ciclo del
fijadores de nitrgeno 2-7 azufre 3-21
Aerobio 2-7 citrato 3-16
Agua 2-5 nitrgeno 3 -21
actividad 2-5 Colonias de bacterias 1-6
humedad relativa 2-5 Coloraciones A-10
microorganismos A-31 Crecimiento 2-1
potencial 2-6 Cultivos
Algas 1-13 bacterias 2-9, A-8
Amonificacin A-16 hongos 7-11, 7-12, A-11
Anaerobio 2-7, 3-19 medios 2 -9, A-2
Antibacteriano 2-14, A-21 Degradacin de
Antibiosis 2-14 almidn 3-8
Antifngico 2-14, A-21 biopolmeros 3-4
Arqueobacterias 1-7, 3-21, 5-2 celulosa 3-6, A-18
Autottrofo 2-2, 3-21, A-2 hemicelulosas 3-9
Bacterias hexosas 3-15
butricas 3-19 levanos 3-15
celulolticas 3-6 lignina 3-11
eubacterias 1-4 lpidos 3-12
fijadoras simbiticas 2 -16 pectinas 3-10
fijadoras vida libre 3-24 polinucletidos 3 -14
formas 1-7 protenas 3-13
gram-positivas 1-4 quitina 3-11
gram-negativas 1-4 xilanos 3-9
halfilas 1-8 Desinfeccin 2-13, A-21
lisognicas 1-14 Desnitrificacin 3-19, A-16
metangenas 1-8, 3-21, 5-1 Digestin anaerbica 5-2, A-23
ruminales 3-21, 5-4 carga 5-13, 5-14
termoacidfilas 1-8 construccin 5-10
Bactericida 2-14 criterios de diseo 5-10
Bacteriocinas 2-14 digestores rurales 5-5
Bacterifago 1 -14 etapas 5-2
Bacteriosttico 2-14 factores ambientales 5-9
Bacteroide 2-16, 3-25 microorganismos 5-2
Biodegradacin 3-5 operacin 5 -13
Biogas 5 -1 otros digestores 5-6
caractersticas 5-8 parmetros 5-7. 5-11
Biopelcula 2-18 residuos 5-6
Biosntesis 3-20, 3-23 seguridad 5 -14
cidos grasos 3-25 Divisin celular 1-7
aminocidos 3-23 Endosporos bacterianos 1-6
glcidos 3-26 termorresistencia 2-11
nucletidos 3-25 Esporas fngicas 1-11, 4-2
protenas 3 -23 Esterilizacin
Cadena respiratoria 3-16, 3 -20 calor 2-11, A-3
Capacidad de campo 2-6, 3-3 filtracin 2-13, A-4
Catabolismo 3-14 presin autoclave 2-11
Clulas radiaciones 2-12
Factores de crecimiento 2-3 deteriorantes 6-1
Factores ambientales 2-5, 3-3, 5-9 estructuras somticas 4-1
actividad agua 2-5 estruct. reproductoras 4-1
luz ultravioleta 2 -13 levaduras 1 -12
microondas 2-13 lignvoros 3 -11, 7 -12
oxgeno 2-7 macromicetos 1-12, 7-3
pH 2 -6 mohos 1-11
potencial agua 2-6 micorrizantes 2-18, 7-8, A -29
potencial de reduccin 2-8 teleomorfos 4-4
presin osmtica 2-5 Humedad relativa 2-5
radiaciones 2-12 Inoculantes
temperatura 2-8, 3-3 bacterianos 2-17, A-13
tensin superficial 2-6, 2-14 fngicos 7-10
ultrasonido 2-13 Interacciones microbianas 2-15
Facultativo 2-7 Levaduras 1-12, 4-1
Fermentaciones 3-17 Lquenes 1-13
actica 3-19 Macromicetos 1-12, 7 -3
cida mixta 3-18 Medios de cultivo 2-9, A-2
aminocidos 3-19 Membranas bacterianas
butanodilica 3 -18 citoplasmtica 1-4
butrico-butanlica 3-19 internas 3-22
etanlica 3-18 Mesfilo 2-8
frmicas 3 -18 Metabolismo 3-4
lcticas 3-17 bacteroides 3-25
propinicas 3-18 productor de energa 3-14, 3 -20
Ferrooxidacin 3-22 Metabolitos secundarios 3 -26, 6 -1
Fijacin del CO2 3-26 Metanognesis 3-21, 5-1
Fijacin de nitrgeno Micorrizas
vida libre 3-24, A-17 ectomicorriza 2-18, 7-9, A-29
inoculante 2-17, A-13 endomicorriza 2-18, 7-9, A-29
mecanismo 3 -24 inoculacin 7-10. A-29
simbitica 2-16, A-13 Micotoxinas 6-1
Flagelos bacterianos 1-5 mohos toxignicos 6-3, A-27
Fotosntesis bacteriana 3-26 prevencin 6-6
Fottrofo 2-2, 3-26 principales toxinas 6-3
Gentica bacteriana 1-15 produccin 6-2
conjugacin 1-16 toxicidad 6-4
genoma 1-4 Microorganismos 1-1
plsmidos 1-6 agua A-31
recombinacin 1-16 amilolticos 3-8
replicacin 1-15 celulolticos 3-6
transduccin 1-18 desnitrificantes 3 -19
transforma cin 1-17 eucariotas 1-10
Halfilo 2-6 lignvoros 3 -11, 7 -12
Hetertrofo 2-2, A-2 pectinolticos 3-10
Hongos 4-1, 7-1, A-25 procariotas 1-3
ascomicetos 4-4, 7 -3 quitinolticos 3-11
anamorfos 4-2 suelo 3-1
basidiomicetos 4-5, 7-4 tamao 1-1, A-12
clasificacin 7-1 Micronutrientes 2-3
champin 7-11 Mixobacterias 1-9
cultivo 7-11, 7-12 Mixomicetos 1-12
Mohos 1 -11 anaerbica 3-19
Mutualismo 2 -15 Rizobios 2-16, 3-24
Nitratos Rizsfera 3-2
desnitrificacin 3-19 fijadores 3-24
reduccin 3-20 Rumen 5-3
Nitrificacin 3-21, A -16 Simbiosis 2-15
Nitrgeno Suelo 3-1
fijacin vida libre 3-24, A-17 bacterias 3-1
fijacin simbitica 2-16, 3-24, A-13 biomasa 3-5
incorporacin 3 -23 efecto rizosfrico 3 -3
mecanismo fijacin 3 -24 horizontes 3-1
Ndulos radicales 2-16, 2-17, A -13 humedad 3-3
Nutricin 2-2 microorganismos 3-1, A-16
Oxgeno 2 -7 temperatura 3-3
Oxidacin del piruvato 3 -16 Sulfatorreduccin 3-20, A-17
Oxidaciones incompletas 3-19 Sulfooxidacin 3-22, A-17
Pared celular Termfilo 2-8
arqueobacterias 1-7 Temperaturas cardinales 2-8
Gram-positiva 1-3 Tiempo reduccin decimal 2-12
Gram-negativa 1-3 Transferencia gen tica 1-15
Pelos de conjugacin 1-6, 1-17 Transporte de electrones
Plsmidos 1-6, 1-17 respiracin aerbica 3-16
Predacin 2-19 respiracin anaerbica 3-20
Priones 1-15 fotosntesis bacteriana 3-28
Proteobacterias 1-4 Transporte de solutos 2-3
Protoplastos 1 -19 Va de
Protozoos 1 -1, 1-13 cetodesoxifosfogluconato 3-15
Psicrfilo 2-8 fructosa difosfato 3 -14
Psicrotrofo 2-8 pentosas 3-15
Quimiotrofo 2 -2 Viroides 1 -15
Radiaciones 2 -12 Virus 1-14
Reinos microbianos 1-2 Vitaminas 2-3
Respiracin Xenobiticos 3 -5
aerbica 3 -15
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 1

1. Microorganismos
Los ambientes capaces de albergar vida
microbiana reflejan el amplio espectro de la
evolucin de estos organismos. Se han encontrado
especies que viven a temperaturas comprendidas
entre el punto de congelacin y el punto de
ebullicin del agua, en agua salada y en agua
dulce, en presencia y en ausencia de aire. Algunos
han desarrollado ciclos de vida que incluyen una
fase de latencia en respuesta a la falta de nutrientes.
Los microorganismos se hallan capacitados para
acometer una extensa gama de reacciones
metablicas y adaptarse a muchos ambientes
diferentes (1). Por su poco peso pueden ser
transportados por las corrientes de aire y estar en
todas partes, pero las caractersticas del ambiente
determinan cules especies pueden multiplicarse.
Existen varias clases de microorganismos: mohos,
levaduras, bacterias, actinomicetos, protozoos,
algas, virus. La figura 1 muestra el tamao
comparativo de algunos microorganismos.
El suelo es uno de los ambientes donde un conjunto ingobernable de
microorganismos compiten entre s para obtener lo que todos ellos necesitan: nutrientes
y energa. Al mismo tiempo, los productos de su metabolismo alteran la composicin
qumica del suelo donde habitan. Ms an, los propios microorganismos evolucionan
en respuesta a la presin del ambiente (3). En un suelo agrcola estn presentes
alrededor de 1010 organismos por g de suelo y constituyen una biomasa de
aproximadamente 1500 kg por Ha, lo cual corresponde a un cordero por cien m2 . Un
gramo de suelo frtil puede contener 5 m de micelio fngico, 10 8 clulas bacterianas, 106
esporos de actinomicetos (4).
En los animales monogstricos la poblacin bacteriana alcanza su mximo nivel en el
intestino grueso y el impacto metablico de la microbiota es considerable. En el
rumiante la accin de los microorganismos contenidos en el rumen es an ms
espectacular, pues al degradar la celulosa permiten al animal alimentarse de forrajes (5).
Numerosas especies bacterianas y algunas veces incluso algas microscpicas o
protozoos, proliferan en las superficies expuestas a la humedad formando una
biopelcula de microorganismos contenidos en una matriz de polisacridos, cuyo
espesor puede oscilar entre algunos micrmetros y pocos milmetros, que se adhiere
fuertemente a la base. Las biopelculas se forman en todas las superficies sumergidas,
tanto en agua dulce como de mar, o bien sobre soportes constantemente hmedos tales
como paredes de la caera de agua, pisos o dientes. El 99% de toda la actividad
microbiana en un ecosistema abierto ocurre sobre las superficies (6).
Los mohos y levaduras forman parte de los hongos. Las levaduras son unicelulares en
condiciones normales mientras que los mohos crecen como un sistema ramificado de
filamentos (micelio). Se trata de organismos eucariticos cuyas clulas, al igual que las
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

de vegetales y animales, tienen un ncleo cerrado por una doble membrana porosa y
llevan como mnimo dos cromosomas, a ms de veinte en algunas especies (7). Las
eubacterias y los actinomicetos son procariticos. Sus clulas carecen de membrana
nuclear y mitocondrias, adems poseen un solo cromosoma que se encuentra libre en el
citoplasma y una pared celular rgida.
Las clulas de los procariotas son, en general, mucho menores que las de los
eucariotas; unas 10 veces menor en medidas lineales y por lo tanto unas 1000 veces
menor en volumen (1). Los protozoos del suelo se alimentan de bacterias y presentan
movimientos ligados a la fagocitosis que es la ingestin de partculas mediante
invaginacin de la membrana citoplasmtica y formacin de vesculas intracelulares (4).
Las eubacterias presentan diversa morfologa: esfrica, cilndrica, espiralada e incluso
filamentosa. Los actinomicetos incluyen muchos gneros que desarrollan en forma de
delgado micelio.
Las eubacterias son organismos pequeos, que miden uno o varios micrmetros. Las
levaduras, en cambio, miden entre 6 y 12 m. Los mohos son pluricelulares y aunque
sus clulas aisladas miden a lo sumo 25 m de largo, su conjunto se distingue a simple
vista. Los hongos con reproduccin sexual pueden tener cuerpos fructferos de tamao
notable como los championes y otras setas, formados por millones de clulas (7). La
figura 2 es un esquema de las clulas procaritica y eucaritica.

1.1. Dominios y reinos


Las dificultades lgicas para ubicar a los microorganismos en los vegetales o los
animales desaparecieron al admitir un tercer reino, el de los protistas. Este reino inclua
a todos aquellos organismos que se diferencian de las plantas y los animales, por su
falta de especializacin morfolgica, siendo la mayora unicelulares. Luego los protistas
fueron divididos en dos grupos claramente definidos sobre la base de su estructura
celular. Los eucariticos eran protistas superiores. Este grupo comprenda a los
protozoos, hongos y algas. Los procariticos eran protistas inferiores e incluan a las
diversas bacterias y cianobacterias (2). Otra clasificacin de los seres vivos estaba
fundada en el reconocimiento de cinco reinos (9).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 3

Los estudios ultraestructurales, bioqumicos y de la biologa molecular hicieron


insostenible la permanencia de estos reinos, y los procariotas fueron ubicados en los
dominios Bacteria y Archaea mientras que el dominio Eukarya comprende a los
microorganismos en tres reinos (10). La importancia de esto ltimo radica en que los
organismos estudiados por los fitopatlogos han sido distribuidos entre los reinos
Chromista, Fungi y Protozoa, aunque se ha sugerido transferir los hongos que estn en
Chromista al nuevo reino Straminipila (11).
Los virus no fueron considerados pues son partculas acelulares, diferentes de todos
los otros microorganismos, que pueden proliferar y replicarse solamente dentro de
clulas vivas (12). Por otra parte, parece que las clulas eucariticas surgieron de
antepasados procariticos, pues hay pruebas del origen bacteriano de mitocondrias y
cloroplastos (13).

Dominio Reino Tipo celular Ejemplos


Archea procaritico arquibacterias
Bacteria " eubacterias, actinomicetos, mixobacterias,
cianobacterias
Eukarya Chromista eucaritico oomicetos, algas
Protozoa " mixomicetos, protozoos
Fungi " levaduras, mohos, setas, bejines
Plantae " musgos, hepticas, conferas, plantas con
flores
Animalia " esponjas, corales, gusanos, moluscos,
. insectos, vertebrados

1.2. Organismos procariticos


La clula procaritica tiene solamente dos sistemas internos principales: una molcula
circular de ADN con cadena helicoidal doble y un citoplasma no diferenciado donde se
halla inmerso ese ADN. La longitud del anillo de ADN que codifica toda la
informacin gentica de la clula apenas es superior a un milmetro (7). El citoplasma
contiene gran nmero de
ribosomas, grnulos
constituidos por ARN y
protenas, que cumplen
la funcin de enlazar los
aminocidos formando
protenas. Los ribosomas
procariticos son ms
pequeos que los
eucariticos (1).
La replicacin del
ADN comienza cuando
ambas cadenas se
separan, permitiendo la
sntesis de una cadena
complementaria a cada
una de ellas mediante la
ADN polimerasa. La
nueva hlice es un hbrido consistente de una cadena original y una recin formada
(replicacin conservativa) (14). La duplicacin del cromosoma de Escherichia coli en
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

condiciones favorables tarda 20 minutos. Un gen, o unidad de informacin gentica,


est representado por una secuencia especfica del ADN y determina la estructura de
un polipptido. El conjunto de genes se denomina genoma.
La informacin contenida en la secuencia del ADN es transferida al ARN mensajero
(ARN-m) durante la transcripcin. Los aminocidos son reunidos en una cadena
polipeptdica segn la secuencia determinada por el ARN-m en un proceso de
traduccin que implica la participacin del ARN-t (ARN que transfiere los
aminocidos), los ribosomas, varias enzimas y ATP.
Los microorganismos procariticos poseen una cubierta celular muy diferente de la
de los eucariotas. Las paredes celulares de muchos de los procariotas poseen un
componente qumico comn, el pptidoglucano (murena), que es el responsable de la
forma y consistencia de la pared. El pptidoglucano es un extenso polmero que se
halla integrado por subunidades alternas de N-acetilglucosamina (que es tambin el
constituyente de la quitina en los eucariotas) y el cido N-acetilmurmico. Esta ltima
molcula es similar a la N-acetilglucosamina, pero tiene una unidad de cido lctico
unida al tercer tomo de carbono de la glucosa. El cido lctico sirve como punto de
unin de una cadena lateral lineal constituda por cuatro aminocidos D o L. Las
molculas de pptidoglucano que rodean la clula estn entrelazadas por puentes
formados por los aminocidos (1). Algunas bacterias filamentosas forman una envoltura
tubular constituda por heteropolisacridos que se conoce como vaina (12).
La flexibilidad metablica de una bacteria es enorme. Debido al pequeo tamao, una
bacteria esfrica tiene espacio para no ms que cien mil molculas de protenas. Las
enzimas no estn corrientemente dentro de la clula, sino que su sntesis es inducida
por la presencia del substrato en el ambiente (1).

1.2.1. Eubacterias
La cantidad de pptidoglucano de la pared de las clulas bacterianas vara
enormemente, desde el 90% en la pared de algunas bacterias gram-positivas hasta
menos del 10% en las bacterias gram-negativas. El trmino Gram-positivo hace
referencia a la capacidad de ciertas bacterias de retener el colorante violeta cristal en
presencia de yodo cuando se agrega alcohol, al hacer la coloracin de Gram sobre un
portaobjetos con las bacterias fijadas. Las bacterias negativas no retienen a este
colorante (7). La penicilina y otros antibiticos -lactmicos que interfieren con la
biosntesis de la pared celular llevan a la produccin de protoplastos carentes de pared
bajo condiciones osmticas apropiadas (1). El trmino esferoplasto se usa para los casos
en que persisten restos de pared. La figura 3 muestra un esquema de las paredes
celulares.
La pared celular de las bacterias Gram-
positivas contiene pequeas cantidades de
protenas y polisacridos, a menudo tambin
cidos teicoicos (polmeros de ribitol-fosfato o
glicerol-fosfato unidos mediante enlaces
fosfodister) o de cidos teicournicos. Estos
cidos estn unidos al pptido-glucano por los
fosfatos (12). En las proteobacterias (Gram-
negativas) la capa interna de la pared celular es
pobre en pptidoglucano y la capa externa rica
en lipoprotena y lipopolisacridos, los cuales
constituyen ms del 80% del peso seco de la
pared. El espacio entre la membrana externa y la
capa de pptidoglucano, llamado periplsmico,
contiene un gran nmero de protenas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 5

enzimticas. La capa de pptido-glucano est rodeada por una membrana externa


compuesta de lpido A y fosfolpidos con protenas en tnel (porinas) que la atraviesan.
El lpido A consiste de un disacrido de glucosamina cuyos grupos hidroxilo estn
esterificados con cidos grasos de 12, 14 16 carbonos (12).
Los micoplasmas son bacterias carentes de pared celular y parecen protoplastos, pero
son ms resistentes a la lisis osmtica debido a la naturaleza de su membrana
citoplasmtica, la que contiene esteroles en un grupo y carotenoides u otros
compuestos en los dems (1).
La membrana citoplasmtica bacteriana contiene alrededor del 70-90% de los lpidos
celulares mientras que la membrana constituye solamente 8-15% del peso celular seco.
La membrana, con un grosor de 5 nanmetros, consiste de una doble capa lipdica con
los extremos hidrofbicos de los fosfolpidos en el interior y las cabezas hidroflicas
expuestas sobre ambas superficies. Tambin tiene incorporadas protenas que la
atraviesan o estn inmersas parcialmente en ella. Otras protenas unidas a la membrana
son conocidas como protenas perifricas (17). Las substancias hidrofbicas difunden
fcilmente pero no los iones. Las protenas de la membrana intervienen en la entrada y
salida de substancias de la clula, y son especficas para un grupo de molculas
estrechamente relacionadas. En la figura 4 se observa un esquema de la membrana
citoplasmtica
La membrana citoplasmtica se extiende y repliega hacia el interior del citoplasma
formando los sitios de la generacin de energa respiratoria (mesosomas) y fotosinttica
(tilacoides y cromatforos) en las bacterias que posean tales actividades metablicas.
Otras bacterias (por ejemplo Nitrobacter, Nitrosomonas, Nitrosococcus)
tienen paquetes de lminas paralelas, algunas de las cuales estn
conectadas a la membrana citoplasmtica (12).
Muchas bacterias estn dotadas de flagelos que les permiten
moverse, insertados en la superficie celular. Si los flagelos se
encuentran concentrados en un extremo de la clula se denominan
polares ; si estn distribudos por toda la superficie celular, reciben el
nombre de peritricos (7). La figura 5 muestra la ubicacin de los
flagelos en las bacterias.
Los flagelos posibilitan la quimiotaxis, que es el movimiento hacia
la fuente de nutrientes o el alejamiento de un entorno qumicamente
hostil. La protena del flagelo, flagelina, est unida a un gancho
asociado a un cuerpo basal que causa el movimiento giratorio del
flagelo. La base del flagelo est anclada en la membrana
citoplasmtica, asociada en las gram negativas al pptido glucano y a
la membrana externa para estabilizar la estructura flagelar (1). Las
bacterias sin flagelos carecen de movimiento excepto aqullas que se deslizan sobre el
substrato. La superficie bacteriana gram negativa tambin suele tener otras estructuras
proteicas filamentosas las fimbrias o pili I que participan en la adhesin a diversas
superficies, por ej. las mucosas animales, y los pelos de conjugacin o pili F (18).
A veces las bacterias acumulan capas de poliscaridos sobre la superficie exterior (ej.
Xanthomonas), pero algunas tienen una cpsula polipeptdica (ej. Bacillus). La cpsula
no es esencial para la vida y no siempre est presente. Para observarla se suspende al
microorganismos en una solucin de nigrosina o rojo Congo y como la cpsula no es
teida se ve como un halo claro alredor de la clula. En muchos casos el material
capsular puede ser separado en forma de limo, por agitacin u homogeinizacin. Por
ejemplo, Leuconostoc mesenteroides convierte rpidamente a una solucin de azcar de
caa en una jalea de dextrano (1,6--glucano). Por otra parte Acetobacter aceti var.
xylinum secreta celulosa formado una cubierta coricea que rodea a las clulas y da
cohesin a la colonia (12).
6 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

Numerosas eubacterias y tambin arqueobacterias, poseen una envoltura exterior


proteica o capa S que suelen perder en las condiciones ptimas del laboratorio. Esta
capa favorece la adhesin al substrato para permitir la accin de las exoenzimas y a la
virulencia de las bacterias patgenas (19).
Un pequeo grupo de eubacterias que se
encuentran en el suelo (Bacillus, Clostridium,
Sporosarcina, etc.) poseen endosporos. Son
paquetes de ADN y otras molculas que
pueden permanecer en estado latente por
muchos aos, y resultan altamente
resistentes al calor (incluso al agua
hirviendo), productos quimiotxicos y otros
agentes que ocasionan la muerte a las
clulas. Ya en el ambiente apropiado, el
endosporo puede dar origen a una nueva
bacteria (7). Si se calienta una suspensin de suelo a 80-100C durante 10 minutos, slo
sobreviven los endosporos bacterianos. stos contienen cido dipicolnico, una
substancia no hallada en la forma somtica, en la proporcin de 10-15% del peso seco
del esporo. Son varias las cubiertas que rodean al citoplasma del endosporo: membrana
citoplasmtica, pared celular, crtex (pptidoglucanos), envoltura interna, envoltura
externa (polipptidos) y, en ocasiones, exosporio (10). La figura 6 muestra un esquema
de la formacin y estructura de un endosporo bacteriano.
Los plsmidos son pequeos anillos (hay algunos lineales) de ADN extracromosomal
que se multiplican independientemente en las clulas que los alojan y pueden portar
genes que confieren ciertas ventajas a las mismas, por
ejemplo resistencia a los antibiticos. Las bacterias
hospedadoras a su vez, dejan que el ADN plasmdico
se replique en ellas hasta cierto punto, asegurando
as la presencia continuada del plsmido en las
clulas hijas (20). Los tumores de las plantas
producidos por la infeccin con Agrobacterium
tumefaciens se deben al plsmido Ti que es el agente
infeccioso real. El ADN plasmdico penetra en la
clula vegetal y parte del mismo se incorpora al
genoma de la planta. Este proceso se llama
transformacin oncognica. La parte integrada del
plsmido lleva la informacin para la produccin de
opinas que son substancias utilizadas solamente por
la bacteria. Otra especie, Agrobacterium rhizogenes
desencadena el crecimiento anormal de las races
mediante el plsmido Ri (21).
La conjugacin es una forma de transferencia de
genes y para que se produzca debe haber contacto
entre las clulas bacterianas a travs de los pili F o
pelos de conjugacin que retienen juntas a las clulas
dadora y receptora. Los sistemas de conjugacin en
bacterias gram-negativas produce la transferencia de
una parte del ADN del cromosoma o de un
plsmido de la clula dadora a la receptora (20).
Las bacterias forman colonias caractersticas sobre la superfice del substrato, que
tienden a adoptar una forma circular creciendo por adicin de clulas a su permetro.
Al extenderse la colonia sobre el agar se observa que en el crecimiento participan unos
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 7

elementos en anillos y otros en sectores. A todos los sectores los va formando, por
propagacin centrfuga, la progenie de un antepasado comn. Algunos sectores se
diferencian del resto porque las clulas difieren en su ADN de las de los sectores
contiguos debido a mutaciones espontneas. Las bacterias de un anillo comparten
algunas propiedades entre s pero no estn emparentadas, pues tienen parentesco
directo con las de la zonas precedente y la siguiente (9). La figura 7 presenta algunas
colonias de bacterias de distinto aspecto.

Las bacterias generalmente se multiplican por fisin binaria. Despus del crecimiento
de la clula, aparece el septo y las clulas se separan o permanecen unidas con formas
caractersticas: pares de bacterias, cadenas, paquetes cbicos y acmulos planos
irregulares entre las bacterias esfricas (cocos), o pares y cadenas en las cilndricas
(bacilos) (12). La multiplicacin por brotacin es rara en los procariotas pero se observa,
por ejemplo, en la bacteria del agua estancada Hyphomicrobium. La figura 8 muestra un
esquema de las diversas formas de bacterias.
La segregacin del ADN es el proceso que distribuye igualitariamente el material
gentico en las clulas hijas. Es producida en las bacterias debido a un mecanismo
parecido al mittico. La replicacin de los plsmidos en la clula, sobre el replisoma,
entraa la formacin de un
complejo de separacin o particin
donde se adhiere el plsmido cual
regin centromrica. Una vez
formadas las copias, stas se alejan
activamente unidas a las protenas
de particin hasta que la clula se
divide. La divisin del cromosoma
parece ocurrir de igual manera (23).
La figura 9 presenta un esquema
de la divisin de una bacteria.
1.2.2. Arqueobacterias
Este grupo de procariotas en su
bioqumica y en la estructura de
los ribosomas, membrana y pared,
difieren tanto de los procariotas
como de los eucariotas. Se los
denomina arqueobacterias pues
algunas poseen un metabolismo
particularmente adecuado a las condiciones que se supone prevalecieron en los
primeros tiempos de la vida sobre la tierra. Comprende tres clases muy diferentes: las
metangenas, las halfilas extremas y las termoacidfilas (8).
Las arqueobacterias no tienen pptidoglucano en la pared. La membrana est
formada por lpidos no habituales, compuestos por un grupo glicerol ligado a dos
cadenas de alquil-isoprenoides por un enlace tipo ter (-O-) (24). Algunas de estas
bacterias tiene histonas y nucleosoma de tipo eucaritico (25).
8 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

Las metangenas (Methanobacterium, etc.) viven solamente en ambientes libres de


oxgeno y liberan metano mediante la reduccin del CO2 . Su apariencia externa es la de
las dems bacterias pero su pared celular vara. Algunas metanobacterias contienen
pseudomurena donde el cido acetilmurmico est reemplazado por el cido N-
acetilalosaminurnico pero en otras predominan las protenas o los heteropolisacridos
en la pared celular. Viven en estrecha asociacin con otras bacterias, como los
clostridios, que metabolizan materia orgnica en descomposicin y desprenden
hidrgeno como producto de desecho. Se encuentran en agua estancadas, en las plantas
de tratamiento de aguas residuales, en la panza del ganado, en el intestino de los
animales, en el fondo del ocano y en los manantiales de aguas termales (1) (ver
captulo 5).
Las halfilas extremas son bacterias que, para sobrevivir, requieren elevadas
concentraciones de sal. Algunas de ellas crecen fcilmente en salmuera saturada.
Pueden conferir color rojo a los estanques de evaporacin donde se obtiene la sal y
alteran al pescado salado. Mantienen fuertes gradientes en la concentracin de ciertos
iones a travs de la membrana celular y utilizan esos gradientes para transportar
diversas substancias hacia adentro o hacia afuera de la clula. Poseen un mecanismo
fotosinttico sencillo que se basa en un pigmento ligado a la membrana: la rodopsina
bacteriana. La pared de Halobacterium est formada por protenas pero la de Halococcus
por heteropolisacridos (12).
Entre las termoacidfilas se encuentra Sulfolobus que se halla en los manantiales de
aguas termales sulfurosas. Crecen a ms de 80C y a pH inferior a 2. Otro gnero es
Termoplasma, un micoplasma que slo posee membrana celular y crece a ms de 55C.
El medio interior de la clula tiene un pH prximo a la neutralidad; ello exige mantener
un considerable gradiente de pH a travs de la membrana celular. El gradiente es
empleado para bombear molculas hacia dentro o fuera de la clula (8).
1.2.3 . Actinomicetos
Los actinomicetos constituyen un importante grupo de organismos procariticos
habitantes del suelo y del material vegetal compostado. El gnero principal del grupo
es Streptomyces cuyas especies suelen excretar antibiticos y el olor a tierra mojada se
debe a compuestos voltiles fabricados por los mismos. Cuando se los cultiva en medio
slido, no slo forman un fino micelio ramificado, sino que tambin producen una hifa
area que se diferencia en cadenas de conidiosporos. Cada conidiosporo puede, a su
vez, generar una colonia micelial. Otro
gnero de inters es Nocardia cuyas
colonias carecen de micelio areo o es
escaso, con unos pocos conidiosporos
en los extremos de las cortas ramas
hifales o sin ellos, y finalmente las
hifas se fragmentan totalmente en
elementos bacilares (7).
Thermoactinomyces, a diferencia de los
otros gneros de actinomicetos, forma
endosporos similares a los de Bacillus y
Clostridium, en el extremo de pequeas
ramificaciones (29). La figura 10
muestra un esquema de la morfologa
de algunos actinomicetos.
Nocardia, como la bacteria
Mycobacterium, no se tie fcilmente por el colorante de Gram ni por otros, para
colorearla se recurre al mtodo de Ziehl Neelsen donde el colorante (fucsina fenicada)
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 9

se aplica en caliente y con el fin de diferenciarla se decolora a los otros organismos con
un cido mineral diluido. Esto se debe a que el pptidoglucano est unido a los
arabino-galactanos esterificados con cidos miclicos de naturaleza cerosa (1).

1.2.4. Cianobacterias
Son organismos procariticos, unicelulares o filamentosos (por reunin de clulas
individuales adheridas por sus extremos) que contienen, adems de la clorofila, un
pigmento azulado llamado ficocianina. Estn presentes en suelos, y aguas dulces o
saladas. A veces colonizan ambientes
extremadamente inhspitos. Algunos convierten
el nitrgeno atmsferico en compuestos que los
vegetales aprovechan y fertilizan los campos y
de manera muy especial los arrozales (1). Ciertas
especies producen metabolitos secundarios
txicos (por ej. un fosfato orgnico letal) que son
liberados de las clulas en el tracto digestivo de
los animales al beber agua con verdn (27).
Algunas son unicelulares adheridas por un
limo o dentro de una cpsula, ej. Gloeocapsa.
Otras tambin unicelulares generan multiples beocitos en su interior, ej. Dermocarpa.
Las que forman cadenas de clulas (tricomas) que pueden deslizarse, suelen tener
clulas especiales donde ocurre la fijacin del nitrgeno molecular (heterocistos) y
clulas de reposo (acinetos), ej. Nostoc, o carecer de ellas, ej. Oscillatoria. Unas pocas
tienen una vaina alrededor del tricoma (12). La figura 11 presenta un esquema de la
morfologa de cianobacterias. Los gneros Anabaena, Aphanizomenon, Microcystis y
Nodularia contienen especies txicas (27). En cambio el gnero Spirulina es comestible y
apreciado por el alto tenor de protenas, del orden del 50-60% del peso seco, con un
aminograma similar al de la harina de soja. Las cianobacterias tambin pueden convivir
en simbiosis con las plantas, debido a su capacidad de fijar el nitrgeno molecular, por
ej. Anabaena en las cavidades dorsales de las hojas del helecho acutico Azolla, y Nostoc
en los ndulos caulinares del arbusto tropical Gunnera (28).
1.2.5. Mixobacterias
Las mixobacterias son organismos sociales
cuyas clulas son flexibles y no tienen una
pared celular rgida, generalmente estn
embebidas en un limo espeso. Al desplazarse
segregan un material mucoso extracelular que
se convierte en grandes avenidas por donde
avanzan miles de clulas. El movimiento es
muy coordinado. Cuando la poblacin emigra
sobre el agar, se desplaza como una unidad
indivisa. Incluso las especies que entran en
letargo como esporos unicelulares, exhiben
hbitos sociales durante buena parte de su ciclo
vital. Muchas de ellas nunca se presentan
aisladas, por el contrario, entran en una etapa
de letargo en forma de cisto pluricelular que
luego germina y libera una nueva poblacin de
millares de mixosporos (29).
Las mixobacterias son organismos del suelo y
los cuerpos fructferos se encuentran sobre material vegetal en descomposicin o
estircol. Algunas, como Myxococcus, forman cuerpos fructferos como gotitas con
10 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

menos de 1 mm de dimetro. Otras, como Sporocytophaga forman adems de los bacilos


delgados, unas clulas ovales como esporos llamadas microcistos. Pero Cytophaga no
forma ni microcistos ni cuerpos fructferos (12).
En el conjunto de la poblacin de mixobacterias se dejan sentir ondas pulstiles
rtmicas. Las oleadas de mixobacterias que se acercan al centro o se alejan hacia el
borde de la colonia en crecimiento, forman agregados en puntos especficos para
construir los cistos o, en algunas gneros como Chondromyces, complejos cuerpos
fructferos. La produccin de estas estructuras responde a cambios fsicos y
nutricionales en el ambiente. Las clulas perciben estos cambios y transforman esta
percepcin en una serie de hechos que implican agregacin, construccin del cuerpo
fructfero pluricelular y la conversin de las clulas alargadas en mixosporos redondos,
resistentes y metablicamente en reposo. Durante estos procesos monitorean la
densidad celular, controlan el cronometrado de una serie de acontecimientos
evolutivos, emprenden comportamientos tcticos, sufren autlisis evolutiva y se
orientan en el espacio tridimensional (29). Las mixobacterias depredadoras se alimentan
segregando enzimas en los huecos de las colonias para evitar su dilucin en el medio
acuoso, que disuelven la cubierta celular externa de otros microorganismos. Cuando
stos estallan, las mixobacterias absorben el contenido (22). La figura 12 muestra el
diagrama del ciclo de vida de una mixobacteria (Myxococcus xanthus) .

1.3. Organismos eucariticos


Los cromosomas eucariticos estn asociados a una clase de protenas bsicas
llamadas histonas, y experimentan movimientos en el momento de la divisin celular.
Como en los procariotas, la informacin contenida en el ADN es transportada por los
ARN mensajeros del ncleo hacia el citoplasma, donde esta informacin es
descodificada y da lugar a la sntesis de las protenas en los ribosomas (14).
Una clula eucaritica contiene orgnulos definidos por membranas que cumplen
funciones esenciales, tales como las mitocondrias (produccin la energa), el retculo
endoplsmico (sntesis de protenas en los ribosomas adheridos), el aparato de Golgi o
dictiosoma (sntesis y almacenamiento de glicoprotenas), y en algas los cloroplastos
(fotosntesis) (12).
Las protenas son dirigidas hacia la ruta secretora por una secuencia terminal (seal
pptido) que es reconocida por una partcula reconocedora de la seal. Despus de la
unin del complejo ribosoma-partcula a la membrana del retculo endoplsmico, el
traslado contina y el polipptido naciente llega al lumen del retculo endoplsmico
donde una endoproteasa especfica quita la seal y, tiene lugar el ensamblaje (plegado
y formacin de puentes disulfuro) y la N-glicosilacin de la protena. Despus las
protenas dejan el retculo endoplsmico en vesculas y son transportadas al aparato de
Golgi donde ocurren ulteriores modificaciones. De all salen las protenas para sus
diversos destinos, otra vez en vesculas, hacia la membrana citoplasmtica (secrecin) o
los lisosomas (digestin de molculas) (24).
La mayor parte de la energa obtenida por la oxidacin de glucosa y cidos grasos es
transformada en energa qumica utilizable por la clula mediante la sntesis del
trifosfato de adenosina (ATP) en la cadena respiratoria. Estas reacciones ocurren en las
mitocondrias. Tienen dos membranas, la interna est invaginada en crestas. Los
pliegues contienen los componentes de la cadena de transporte de electrones y la ATP
sintasa. Tambin un pequeo nmero de protenas es sintetizado en los ribosomas de la
matriz mitocondrial, la que contiene tambin su propio ADN pues estos orgnulos
estn dotados de la capacidad de multiplicarse (30).
Todas las estructuras se desplazan por el citoplasma a lo largo de pequeos tubos
huecos, los microtbulos, que son polmeros de tubulina nucleados por el centrosoma
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 11

(31). La organizacin de los microtbulos en flagelos y cilios, permite a algunos


eucariotas unicelulares nadar en el medio en que se encuentra (32).

1.3.1. Mohos
Los mohos se caracterizan por tener ncleo verdadero, carecer de pigmentos
fotosintticos, poseer micelio con pared celular constituida por glucanos, quitosano y
quitina (polmeros de glucosa, glucosamina y N-acetil-glucosamina, respectivamente)
(7). En pocas ocasiones la pared est constituida enteramente de quitina. La pared
celular del micelio de los hongos semeja un extenso sistema tubular por el que avanza
protegido el citoplasma para su dispersin y bsqueda de nutrientes (1).
Los elementos somticos tubulares que constituyen el micelio reciben el nombre de
hifas. Las hifas pueden estar separadas en secciones, generalmente multinucleadas, por
medio de septos perforados o bien carecer de ellos. Los hongos pueden reproducirse
tanto sexual como asexualmente. Los hongos asexuales (anamorfos) generan varias
clases de esporas asexuales por mitosis del ncleo celular (mitosporas) (33).
La morfologa de las estructuras que contienen las esporas es muy variable y
constituye una de las bases de la clasificacin de los hongos. El micelio somtico no es
suficientemente discriminador para
utilizarlo en la clasificacin. El
color de muchos mohos que viven
en la materia orgnica en
descomposicin se debe al color de
sus esporas asexuales. stas
presentan varias tonalidades de
color blanco, amarillo, azul, verde,
rojo, pardo o negro (7).
Los mohos generan varias clases
de esporas asexuales, mono o
pluricelulares. Las esporas se
desarrollan en los esporforos, estructuras especializadas que se extienden en el aire a
partir del micelio vegetativo, y las esporas se acumulan en el extreno superior de los
mismos. Si las esporas estn encerradas en un esporangio (en forma de bolsa) se las
llama esporangiosporas. Los conidios son esporas externas o sea no estn encerradas.
Al madurar, estas esporas son esparcidas por el viento.
Muchos mohos pueden reproducirse tambin a travs de esporas sexuales, generadas
por meiosis, o divisin reductora, de un ncleo diploide (meiosporas). En la meiosis, el
nmero de cromosomas se divide por la mitad. Las esporas sexuales contienen slo un
cromosoma de cada par homlogo. La condicin diploide se restablece cuando dos
estructuras haploides se unen, completando el ciclo vital. Los mohos a los que no se les
conoce ciclo sexual, se consideran hongos imperfectos (33).
Los mohos con estructuras reproductoras sexuales (teleomorfos) corresponden a tres
grupos: ascomicetos, basidiomicetos y zigomicetos. Los ascomicetos producen sus
esporas en ascos, que generalmente se forman dentro de un complejo cuerpo fructfero,
el ascoma. De forma similar, los basidiomicetos desarrollan sus esporas sexuales
externamente, en los basidios que se hallan en un complejo cuerpo fructfero: el
basidioma. Pero este grupo tambin comprende a los carbones y las royas, organismos
de inters agronmico por ser parsitos vegetales. Los zigomicetos producen
zigosporas a veces visibles a ojo desnudo. En condiciones naturales, los mohos se
reproducen en la mayora de los casos asexualmente, las estructuras reproductoras
sexuales slo aparecen ocasionalmente en circunstancias favorables (33). La figura 13
muestra un moho (Rhizopus stolonifer).
12 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

1.3.2. Levaduras
La mayora de la numerosas especies de levaduras se han clasificado desde el punto
de vista de la reproduccin, que puede ser sexual o asexual. En la reproduccin
vegetativa, generalmente, una clula madre da lugar a diversas clulas hijas por la
formacin repetida de yemas en la superficie celular; en unas pocas levaduras la
divisin asexual se hace por escisin celular luego de la duplicacin del ncleo (34).
Tres grupos de hongos acogen a las levaduras: los ascomicetos, los basidiomicetos y
los hongos imperfectos. El primer grupo incluye las levaduras cuyas estructuras
reproductoras sexuales son o l s ascos sencillos que contienen ascosporas. Una clula
diploide de levadura sufre meiosis y forma de cuatro a ocho ascosporas, encerradas en
el asco. Una ascospora es una clula haploide que al germinar genera una progenie de
clulas haploides por mitosis (reproduccin asexual). Las clulas de diferente polaridad
sexual se combinan para formar un
nuevo organismo diploide. Entre las
levaduras que pertenecen a los
ascomicetos se encuentra
Saccharomyces cerevisiae empleada
para la fabricacin del pan y la
fermentacin alcohlica. Los
basidiomicetos agrupan un nmero
reducido de levaduras. Los hongos
imperfectos incluyen levaduras que se
reproducen slo de forma asexual, ej.
Candida tropicalis (7). En la figura 14 se
muestra el aspecto de una levadura
que se divide por escisin y forma
meiosporas.
1.3.3. Macromicetos
Son hongos con cuerpos fructferos (ascoma o basidioma) que se miden en
centmetros. Entre ellos son de inters los que forman asociaciones simbiticas con
rboles (ectomicorrizas), por ej. Amanita, Boletus, Cortinarius, Lactarius, Russula,
Scleroderma, Suillus, Tricholoma, y los que crecen sobre troncos descomponiendo la
madera, por ej. Schyzophyllum, Polyporus, Coriolus, Xylaria (35). La figura 14 tambin
muestra una seta venenosa.

1.3.4. Mixomicetos
Los mixomicetos son organismos eucariticos
mucosos que forman plasmodio y luego un cuerpo
fructfero de colores destacados, sobre troncos y hojas
en descomposicin o postes viejos, de 0,5 a 1 cm (36).
La asociacin celular en los hongos mucilaginosos
est mediada por la interaccin entre protenas unidas
a carbohidratos de una clula y receptores formados
por oligosacridos especficos de otra. De este modo, la
diferenciacin de los hongos mucilaginosos desde una
forma somtica (unicelular) hasta la forma cohesiva
(agregada) va acompaada de la aparicin de lectinas
y glicoprotenas especficas en la superficie celular (17).
Las esporas liberadas de los cuerpos fructferos
germinan sobre una superficie hmeda y producen mixoflagelados que nadan o bien
mixamebas. stos se alimentan de los nutrientes lquidos o por fagocitosis de bacterias,
levaduras, esporas fngicas, etc. Las clulas flageladas pierden luego su flagelo y
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 13

entran en un estado ameboide. Estas clulas son mononucleadas. Ocasionalmente se


fusionan en pares para dar mixozigotos. Estas amebas diploides se fusionan para dar
un plasmodio (estructura multinucleada). Luego el plasmodio da origen al cuerpo
fructfero o esporangio con numerosos esporas haploides (33). La figura 15 muestra las
estructuras de un mixomiceto.

1.3.5. Protozoos
Los protozoos constituyen un grupo muy
heterogneo de microorganismos eucariticos,
unicelulares y mviles (con algunas excepciones).
El ciclo de vida comprende dos fases: una de
actividad, durante la cual se desplazan, nutren y
reproducen; otra de reposo o enquistamiento. Se
alimentan de bacterias, levaduras, algas y otros
protozoos.
Se los agrupan en: rizpodos que se desplazan
por pseudpodos (amebas y testceos o foraminferos), flagelados con uno o ms
flagelos, ciliados dotados de cilias y dos ncleos, y esporozoos parsitos. Se observa un
esquema de los mismos en la figura 1 y 16. La poblacin de flagelados y amebas es del
orden de 103 - 10 5 por gramo de suelo, la de ciliados 103/g y la de rizpodos testceos
10 3 - 104 /g. Participan en el equilibrio biolgico del suelo pues consumen grandes
cantidades de bacterias, una ameba ingiere unas 40.000 bacterias entre cada divisin
celular (4).

1.3.6. Algas
Son organismos fotosintticos eucariticos. Las algas
del suelo viven en la proximidad inmediata a la
superficie o sobre la misma. Predominan, arriba las
diatomeas y abajo las clorofceas y xantofceas
ubicuas. La humedad ptima es del 40 al 60% de la
capacidad de retencin del agua por el suelo. Las
algas libres o liquenizadas constituyen el estado
inicial de la vegetacin rocas y suelos minerales
infrtiles (4). En la figura 17 se muestra un alga roja
del suelo.

1.3.7. Lquenes
Un lquen est constitudo por un hongo (el
micobionte) junto con una o ms algas y/o
cianobacterias (el fotobionte) viviendo en una
relacin simbitica y formando un cuerpo estable e
identificable (39). La figura 18 muestra una rama con
varios lquenes.

1.4. Organismos acelulares


1.4.1. Virus
Un virus es un programa gentico que lleva de una clula a otra el mensaje
"reprodceme". Consiste de un cido nucleico y una cubierta protenica conocida como
14 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

cpside, a veces tambin tiene una envoltura. Hay muchas clases de virus y se los
puede agrupar por el tipo de material gentico que portan.
Algunos tienen una molcula de ARN
monocatenario (cadena "ms") compuesto por
varios miles de subunidades nucleotdicas, que
puede ser ledo directamente por el aparato de
traduccin del hospedador, el ribosoma, como
si fuera un ARN mensajero propio. Un ejemplo
de este tipo de virus es el del mosaico del
tabaco.
Otros virus, por ej. el de la rabia, cifran sus
mensajes en cadenas "menos" de ARN, las que
en el interior de la clula deben transcribirse en
cadenas complementarias de tipo "ms" para
que empiece la replicacin.
Los retrovirus constituyen una tercera clase de
virus de ARN monocatenario. Cuando un
retrovirus infecta a una clula, la enzima
retrotranscriptasa transforma la cadena de ARN
vrico en ADN monocatenario y ste es copiado
por la ADN-polimerasa celular a ADN
bicatenario que puede integrarse al genoma del
hospedador.
Los reovirus, patgenos de plantas y animales,
tienen ARN bicatenario. Ejemplos de virus con
ADN monocatenario son los inovirus y con
ADN bicatenario los miovirus, ambos patgenos de bacterias (39).
Un fago (virus que infecta a bacterias) posee una sola molcula de cido nucleico que
se inyecta en la clula bacteriana. La figura 19 muestra la forma de un tipo de
bacterifago. En la figura 20 se observa el ciclo de un fago lambda con ADN bicatenario
lineal cuyos extremos se unen una vez dentro de la bacteria y los genes dispuestos
sobre ese anillo dirigen la sntesis de las protenas vricas, valindose de la maquinaria
bacteriana de sntesis. Parte de las protenas son enzimas implicadas en la replicacin
del cido nucleico del fago, tarea que realizan en conjuncin con enzimas de la propia
bacteria. El virus se reproduce, es decir fabrica nuevas molculas de ADN y protenas
de la cpsula. Los nuevos ADN se
introducen en las cpsulas recin
formadas y el hospedador acaba
lisndose (40). Por otra parte, el fago
puede insertarse en el ADN de la
bacteria hospedadora. En el estado
integrado, el ADN del fago es replicado
junto con el ADN bacteriano y no se
expresa la informacin contenida en el
primero. Este fago no infeccioso, que
puede pasar de clula en clula por
herencia, se denomina profago. La
excisin del fago en la clula lisognica
le devuelve la virulencia.
Otra forma de agrupar los virus es por
la forma. Se llama nucleocpside al
cido nucleico (o virin) con la cpside,
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 15

y puede estar desnuda o recubierta por una membrana. Una cpside consta de
capsmeros, y en la mayora de los casos es simtrica. Se observan dos tipos de
estructuras simtrcas: helicoidal e icosahdrica (12). En la figura 21 se muestra la forma
de algunos virus.

1.4.2. Viroides
Los viroides son ms sencillos que los virus, pues son slo filamentos muy cortos de
ARN. Producen enfermedades especficas de las plantas (42).
1.4.3. Priones
Se llama as a las protenas que actan como agentes infecciosos en algunas
enfermedades del sistema nervioso de ovejas, vacas y otros animales (43), pero es
discutible si se pueden considerar microorganismos.

1.7. Transferencia gentica en bacterias


En una bacteria la informacin gentica est codificada en una molcula de ADN
larga y muy plegada para caber en la clula. El cromosoma bacteriano circular tiene al
menos un milmetro de largo. La doble hlice formada por dos cadenas de nuclotidos
consta de varios
millones de pares
de bases y la
informacin total
de la bacteria se
despliega en un
conjunto de
varios miles de
genes
estructurales.
En los
procariotas y
eucariotas la
clave gentica y
la bioqumica
esencial de la
transcripcin y la traduccin son las mismas, pero no as las seales de control. En las
bacterias la informacin gentica codificada en un segmento contnuo de la doble hlice
de ADN, que constituye el gen estructural, se transcribe directamente en un ARN
mensajero cuya traduccin da lugar a una protena, generalmente una enzima (44).
Antes de que una clula bacteriana se divida (transferencia vertical) ha de duplicarse
su ADN (figura 22). Durante la replicacin del ADN se separan los pares de bases al
alejarse ambas cadenas helicoidales. Las ADN polimerasas copian cada una de las
hebras. Mientras se va construyendo la nueva hebra, sta se empareja con la que le
sirve de molde. Pueden darse errores de replicacin por corrimiento cuando alguna de
las hebras se desliza y establecen un emparejamiento inadecuado. En cada tanda de
divisin bacteriana asexual habr alguna clula que porte una mutacin. La mutacin
altera los genes de un microorganismo. La recombinacin reoordena los genes o parte
de los mismos, y agrupa en un mismo individuo la informacin gentica de dos o ms
organismos (44).
Los tres mecanismos principales de intercambio horizontal de material gentico entre
bacterias son: conjugacin, transformacin y transduccin. En todos estos procesos se
transfiere ADN de la clula donadora a la receptora, pero difieren en la manera en que
es transportado. La transferencia es seguida por la recombinacin y as el ADN de la
16 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

bacteria donadora se integra al


de la receptora. El intercambio
de genes en las bacterias no est
confinado dentro de una
especie o especies afines,
acontece entre bacterias de
gneros o familias diferentes.
La recombinacin homloga
ocurre cuando los ADN que
poseen secuencias de bases
similares, se renen e
intercambian segmentos
mediante la rotura y ensamblaje
de las cadenas. Otra forma de
recombinacin que aade
nuevas porciones al ADN que
ya posee el microorganismo, es
la especfica de sitio y requiere
solo pequeos fragmentos de
ADN homlogo para el
reconocimiento. Cuando ambos ADN poseen una secuencia de reconocimiento se habla
de recombinacin especfica de sitio doble, por ejemplo la insercin de un fago. Si
solamente una molcula de ADN transporta esa secuencia la recombinacin especfica
de sitio es simple y permite la insercin de una secuencia mediante la transposicin (12).

Ambientes en los que ha observado transferencia gentica horizontal (41)

Ambientes Transduccin Conjugacin Transformacin


Terrestres Suelos, superficies Suelos, superficies Suelos
de plantas de plantas
Acuticos Lagos, ocanos, ros, Lagos, ocanos, sedimentos Sedimentos
zonas de tratamiento marinos, ros, epiliton (capas marinos, ros,
de aguas residuales gelatinosas que recubren epiliton de las
las piedras de los ros), piedras de los ros
zonas de tratamiento de
aguas residuales
Interior de Crustceos, ratones Plantas, insectos, gallinas, Plantas, insectos,
organismos ratones, humanos ratones

1.7.1. Conjugacin
Se descubri cuando se mezclaron mutantes nutricionales (auxotrficos) con
diferentes requerimientos de la bacteria Gram-negativa Escherichia coli y crecieron sobre
un medio mnimo siendo que, separadamente, necesitaban un suplemento de
determinados nutrientes para poder multiplicarse. Los genes silvestres de una cepa
completaron los genes mutados de la otra (figura 23). Este proceso requiere el contacto
entre las clulas y se transfiere el factor sexual F (fertilidad) que es una molcula
pequea de ADN circular de doble cadena (plsmido) desde la clula donadora (F+) a
la receptora (F-). Las clulas donadoras tienen en la superficie los pelos de conjugacin
(pili F) que sirven para facilitar el contacto (figura 24). La presencia de un plsmido
altera la capacidad para sintetizar el pelo F y el desplazamiento del ADN para su
transferencia a otra clula, adems modifica los receptores superficiales.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 17

Slo unas pocas bacterias F+ pueden transferir


ADN cromosomal. Son las que tienen el factor F
integrado al cromosoma. Tales bacterias, llamadas
Hfr, transfieren sus genes con una frecuencia muy
alta. Durante la transferencia el ADN bacteriano se
replica a partir del punto de insercin del factor F
y la cadena recin formada entra en la clula
aceptora. Este proceso es seguido de la
recombinacin homloga del ADN de ambas
clulas dentro de la bacteria receptora (figura 25).
La introduccin de unas cuantas bacterias con
plsmidos en una poblacin receptora, puede
convertirla en portadora de plsmidos en poco
tiempo (45).
En las bacterias Gram-positivas la conjugacin
no est mediada por pili. Antes del intercambio
gentico, la clula receptora secreta substancias
que estimulan la
sntesis de protenas
aglutinantes por las
potenciales
donadoras. Una vez
que las bacterias se
asocian, se forman
los poros necesarios
para la transferencia
del ADN (41).

1.7.2. Transformacin
Algunas bacterias pueden captar ADN desnudo, por ejemplo las clulas de una colonia
rugosa de Streptococcus pneumoniae al ser mezcladas con el ADN de una cepa virulenta
con colonias lisas adquieren la cualidad de producir colonias lisas. La transformacin
suele ocurrir tanto en bacterias Gram-positivas como en Gram-negativas, y es utilizada
para introducir genes extraos en una bacteria (12).
Un fragmento de ADN se puede insertar en un plsmido pequeo especializado
conocido como vector de clonacin usando una enzima especfica. Este ADN
recombinante se usa para transformar las bacterias que crecern luego en un medio
selectivo apropiado para detectarlas. La capacidad de aislar ADN de un organismo e
inducir su incorporacin en otro no relacionado constituye el fundamento de una de las
manipulaciones del ADN recombinante (figura 26). El plsmido sirve as de vector para
genes que no tienen equivalente en el organismo receptor y que, por lo tanto, no
podran heredarse de forma estable mediante recombinacin homloga. Estos genes
pueden as transmitirse a travs de generaciones sucesivas conforme el plsmido va
replicndose (44). Pero a veces la bacteria pierde el plsmido espontneamente.
La mayora de las especies de rizobios, bacterias de gran importancia agronmica,
contienen plsmidos con la informacin gentica para la simbiosis en leguminosas (46).

1.7.3. Transduccin
Los genes bacterianos se pueden transferir de una cepa a otra usando bacterifagos
como vectores (figura 19), pero este fenmeno no ocurre en todas las especies de
bacterias. Segn el comportamiento del bacterifago la transduccin puede ser:
18 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1

a) general o inespecfica
Comnmente el bacterifago se replica dentro de la clula que infecta y con la
ruptura de la misma se liberan las nuevas partculas vricas. Estas partculas infectan
otras clulas completando el ciclo de lisis. Ocasionalmente durante el proceso ltico el
genoma bacteriano se fragmenta y algunos segmentos pasan a formar parte del nuevo
bacterifago. stos suelen carecer de parte de su propio genoma, pero aunque
defectuosos son capaces de
infectar nuevas bacterias y
dejarles la porcin de ADN
bacteriano que transportan.
Este ADN suele recombinarse
con el genoma de la clula
infectada (figura 27).
La porcin de genoma
bacteriano transportada por
bacterifagos es por lo
general menor que 1% del
ADN total. La mayora de las
partculas vricas son
normales y no participan en
la transduccin (12).

b) especializada
Los bacterifagos
moderados tambin son
capaces de formar una
relacin estable con sus
hospedadores. Luego de la
infeccin suelen incorporarse
al genoma bacteriano como
profago. ste suele codificar
otras funciones adems de las
especficas del bacterifago,
por ejemplo la produccin de
toxinas. La bacterias que
albergan profagos se llaman
lisognicas (figura 20).
Los profagos suelen vivir en
armona con su hospedador hasta
que una situacin de stress
ambiental induce el ciclo ltico.
Cuando el bacterifago se escinde
del genoma bacteriano puede
acarrear una porcin de este
ltimo. Estos fagos defectuosos
invaden nuevas bacterias. La
integracin al genoma de la clula
hospedadora es esencial para la
trasferencia de los genes. Como
cada profago tiene un particular
lugar de insercin en el genoma
de la bacteria, solamente los
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 19

genes adyacentes pueden ser transferidos por este proceso (12 ). La transposicin es la
recombinacin que presentan los transposones o las secuencias de insercin. Las
secuencias de ADN cambian de lugar en el genoma y se insertan en una regin que no
guarda homologa con ella. Si esta integracin sucede dentro de un gen se produce una
mutacin, pues se rompe la continuidad de la informacin codificada (47).

1.7.4. Fusin de protoplastos


Las barreras naturales a la
recombinacin entre organismos
diferentes pueden romperse a menudo
mediante la preparacin de
protoplastos, clulas bacterianas cuyas
paredes externas se han eliminado
poniendo al descubierto la membrana
celular. Como las membranas celulares
poseen aproximadamente la misma
composicin en la mayora de los
organismos, puede inducirse la fusin
de protoplastos de especies distintas,
formando un clula hbrida en la que
los genes quedan expuestos a la
recombinacin (figura 28). Tambin es
una tcnica eficaz para aumentar la
frecuencia de recombinacin
intraespecfica en los que el apareamiento natural es raro. La operacin se lleva a cabo
en una solucin cuya presin osmtica equilibra la presin interior de las clulas, para
que no estalle la membrana celular. Despus se induce la regeneracin de la pared de
los protoplastos hbridos y se obtiene un cultivo normal (44).

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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 1

2. Vida y muerte de los


microorganismos
2.1. Crecimiento
Es el incremento ordenado de todos los componentes de la clula viva, arribando a la
duplicacin de todas las estructuras, orgnulos y componentes celulares, as como la
biognesis de mitocondrias y cromoplastos cuando ciertos microorganismos se ven
sbitamente expuestos a las condiciones en que dichos orgnulos son esenciales. En la
mayora de los organismos unicelulares, la reproduccin es consecuencia del
crecimiento y lleva al incremento en el nmero de individuos de la poblacin, mientras
que en los pluricelulares el crecimiento conduce al aumento del tamao del organismo
(1). La figura 1 muestra una curva general del crecimiento de un microorganismo
unicelular .
Despus de la inoculacin de
una porcin de medio con unas
pocas clulas, transcurre un
perodo de tiempo (fase de
latencia) antes de que se
establezca una velocidad
constante de crecimiento, debido
a que el microorganismo tiene
una intensa actividad metablica
para adaptarse al nuevo medio
de cultivo antes de poder
duplicarse. Cuando el cultivo
alcanz una velocidad constante
de crecimiento se dice que est
en la fase exponencial debido a
que el nmero de clulas se
puede expresar como funcin de 2n, donde n es el nmero de ciclos de duplicacin
experimentado por la poblacin (3). Una bacteria originar cuatro clulas (2 2 ) despus
de dos ciclos, dieciseis (24 ) despus de cuatro ciclos, etc.
Cada clula de bacteria o levadura da, por escisin o gemacin, dos clulas y el
nmero inicial X o de clulas (en el instante to=0) se convierte, despus de n
generaciones en un tiempo t, en X = X o. 2n
Como n representa el nmero de divisiones celulares durante el intervalo de tiempo t,
el tiempo de generacin g = t/n, y X = Xo.2t/g o sea ln X = ln X o + t.ln 2/g *
El trmino ln 2/g es la velocidad especfica de crecimiento () de la poblacin o sea
= 0,69/g
La ecuacin * puede escribirse bajo la forma lnX - lnX o = .t por lo tanto X = X o.et
y dX/dt = X
En el curso de la fase exponencial la velocidad especfica de crecimiento alcanza su
valor ms elevado (mx).
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

En condiciones ideales el tiempo de generacin de las bacterias puede ser de 20


minutos, de esta forma una nica clula producir 2.097.152 bacterias al cabo de 7
horas.
Finalmente el cultivo entra en la fase estacionaria del crecimiento, en la que
permanece constante el nmero de clulas. Esta fase puede durar mucho tiempo, por
ejemplo dcadas en el caso de las bacterias endosporuladas, pero siempre ser seguida,
ms temprano o ms tarde, por la fase de muerte (3).
En los estudios de la cintica del crecimiento individual de los microorganismos
pluricelulares, tales como actinomicetos y mohos, se observ que:
a) la velocidad de extensin de las hifas cortas es proporcional a la longitud de las
mismas y a la velocidad especfica de crecimiento, es decir que estas hifas pueden
crecer exponencialmente;
b) cada pice hifal puede extenderse a una velocidad independiente de la velocidad
de aumento de la biomasa;
c) cuando la capacidad de la hifa para extenderse supera las posibilidades brindadas
por los puntos de crecimiento existentes, se generan otros nuevos (ramificacin) (4).

2.2. Tipos de nutricin


Los organismos fotosintticos y los que obtienen energa por oxidacin de
compuestos inorgnicos suelen usar generalmente CO2 como fuente nica o principal
de carbono (auttrofos). Pero, la mayora de los microorganismos del laboratorio son
heterotrficos, es decir necesitan fuentes de carbono orgnico y nitrgeno asimilables,
as como sales minerales y en ciertos casos vitaminas. Pueden sintetizar todos sus
constituyentes celulares a partir de un nico compuesto orgnico que sirve tanto de
fuente de carbono y de energa, y de una fuente inorgnica u orgnica de nitrgeno (1).

Metabolismo energtico de los microorganismos (1)


tipo de organismos dependientes de
fottrofos radiacin solar
fotolittrofos= auttrofos dadores de electrones inorgnicos
fotoorgantrofos dadores de electrones orgnicos
quimitrofos compuestos qumicos
quimiolittrofos= auttrofos oxidacin de compuestos inorgnicos
quimioorgantrofos= hetertrofos oxidacin o fermentacin de compuestos
. orgnicos

Algunas bacterias, por ejemplo Azotobacter que vive libre en el suelo, y Rhizobium que
crece como simbionte en los ndulos de la raz de leguminosas, as como
cianobacterias, pueden fijar el nitrgeno gaseoso de la atmsfera, es decir reducirlo
convirtindolo en nitrgeno orgnico. Por otra parte, las formas parsitas obligadas
obtienen del hospedador los complejos constituyentes de su materia viva (5).
En tanto que los sulfatos pueden ser utilizados por casi todas las bacterias y hongos,
los nitratos son a menudo menos adecuados como nutrientes. Sin embargo, la mayora
de los microorganismos hace uso del amonio como fuente nica o principal de
nitrgeno. Sin embargo, algunas bacterias requieren fuentes de azufre reducido, tal
como sulfuro o tiosulfato. Los organismos vivos necesitan tambin muchos otros
elementos, como fsforo, potasio, magnesio, manganeso, calcio, hierro, cobalto, cobre,
cinc y molibdeno (1)
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 3

2.3. Factores de crecimiento


Son los compuestos, necesarios en pequea cantidad, que debe suministrar el medio
para que tenga lugar el crecimiento de algunos microorganismos. Los organismos que
requieren un determinado factor de crecimiento son auxotrficos para ese compuesto.
Por ejemplo, Lactobacillus arabinosus crece normalmente en presencia de 10 -4 g/mL de
biotina, pero no en ausencia de esta vitamina (6).

2.3.1. Factores orgnicos


Algunos microorganismos carecen de la capacidad de sintetizar ciertos aminocidos,
nucletidos o vitaminas. stos son generalmente aportados por los extractos de
levadura y carne, agregados al medio (3). A veces son adicionados en cantidades
demasiado elevadas interfiriendo en el metabolismo microbiano, por ejemplo, las
clulas de Corynebacterium glutamicum cultivadas en un medio rico en biotina no
excretan cido glutmico, mientras que si son suspendidas en un medio pobre en
biotina ocurre lo inverso. Generalmente los microorganismos requieren L-aminocidos,
por ejemplo Leuconostoc mesenteroides, pero algunas bacterias necesitan D-alanina (6).

Vitaminas del grupo B Funcin (1)


cido nicotnico (niacina) precursor de piridn-nucletidos (NAD y NADP)
cido pantotnico coenzima A
riboflavina (B2 ) flavn-nucletidos (FMN, FAD)
cido flico participa en transferencia de grupos metilo
biotina biosntesis de cidos grasos, fijacin de CO2
cobalamina (B12 ) sntesis de desoxirribosa y transferencia de
restos monocarbonados
piridoxal- piridoxina (B6 ) transformaciones de aminocidos y cetocidos
tiamina (B1 ) -descarboxilaciones

2.3.2. Factores minerales


La ausencia total de metales comporta la muerte o enfermedades carenciales en todos
los seres vivos, pero todo es cuestin de dosis pues, el efecto es beneficioso hasta un
cierto nivel, traspasado el cual se observan trastornos fisiolgicos. Algunos elementos
esenciales, por ejemplo cinc, cobre, cobalto, hierro, molibdeno, son necesarios para la
actividad de enzimas especficas (1). Adems, algunos seres vivos tienen requerimientos
minerales especiales, como el silicio que es parte esencial de la pared celular de las
diatomeas (7).

2. 4. Transporte de solutos
El transporte de nutrientes a travs de la membrana citoplasmtica es especfico
porque son captados por la clula solamente aqullos para los cuales existe un sistema
transportador. Existen dos tipos principales de transporte. El primario comprende los
procesos que conducen a la transferencia de iones (H +, Na+, K +) produciendo
alteraciones en el potencial electroqumico. Las fuerzas que intervienen son el
transporte de electrones respiratorio o fotosinttico, o las bombas inicas dependientes
del ATP o de la descarboxilacin de metabolitos. El transporte secundario est guiado
por gradientes en el potencial electroqumico (9).
La difusin pasiva o simple est gobernada por el tamao molecular y las
propiedades lipoflicas del material, permitiendo la entrada de agua, toxinas no-polares
y ciertos inhibidores. La difusin facilitada se lleva cabo debido a la presencia de una
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

permeasa especfica para el substrato y depende de la concentracin de substrato en el


medio. El nutriente no puede ser acumulado dentro de la clula.
El transporte activo y la trasladacin del grupo se parecen a la anterior en que
participan protenas especficas y difieren en que necesitan la provisin de energa. El
nutriente puede ser acumulado dentro de la clula. En el transporte activo la molcula
liberada en el interior de la clula es idntica a la del exterior, mientras que en la
trasladacin del grupo la molcula fue modificada durante el transporte, por ejemplo
por fosforilacin en el caso de un azcar (9).
Se distinguen diferentes procesos de transporte activo segn la va por la cual se
dispone de la energa necesaria: potencial protn, ATP o fosfoenolpiruvato. El
transporte de muchas substancias (azcares, iones inorgnicos y orgnicos) es
empujado por el potencial protn, La clula bacteriana mantiene dicho potencial por
bombeo constante de protones y otros iones (Na+) al exterior, en el cual intervienen
protenas de transporte localizadas en la membrana (9). Cada una de estas protenas
tiene una funcin especfica. Por ejemplo, una protena cataliza el transporte
simultneo de una molcula de azcar (lactosa, melibiosa o glucosa) y un protn en la
misma direccin, lo que se conoce como un simporte de dos (a veces ms) substancias.
Otras protenas
catalizan el transporte
simultneo de dos
substancias en
direcciones opuestas,
por ejemplo un protn
y otro in (Na+ o un
cido orgnico), lo
que se llama
antiporte, como se
muestra en la figura 2.
En las clulas
procariticas la
entrada de azcares a
la clula es favorecida
por un simporte
acoplado a H +,
mientras que en las
eucariticas est casi
siempre acoplado a
Na+. Adems de los
sistemas de transporte
que dependen del potencial de la bomba de protones hay otros que dependen del ATP,
donde intervienen las protenas del espacio periplsmico en las proteobacterias (8) .
Cuando el transporte ocurre mediante trasladacin de grupos, la molcula
transportada es modificada qumicamente. Por ejemplo, la glucosa (manosa, fructosa u
otro azcar) es captada por el sistema fosfotransferasa dependiente del
fosfoenolpiruvato y se libera en el interior glucosa-6-fosfato (ver figura 2).
En condiciones aerobias y a pH 7,0 la concentracin del Fe+++ es a lo sumo 10 -18
moles/L pues se forma el hidrxido frrico casi insoluble, por lo que algunas bacterias
excretan substancias que tienden a solubilizar al hierro formando complejos con Fe+++
que permitan transportado. Tales substancias se denominan siderforos y son
compuestos fenlicos e hidroxamatos (9).
La levadura de cerveza posee distintos sistemas especficos para la captacin de cada
in metlico (Cu++, Fe+++, Mn+, Zn++). En el caso del hierro primero es reducido a
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 5

Fe++ por las reductasas de la membrana citoplasmtica, luego interviene un sistema de


baja afinidad para su incorporacin a las clulas con hierro, pero cuando hay una
deficiencia limitante del crecimiento acta otro sistema de captacin de alta afinidad.
La levadura tambin tiene dos sistemas de captacin para la incorporacin de
manganeso. Por otra parte, en algunas bacterias patgenas la virulencia depende de la
capacidad del microorganismo para obtener iones metlicos del hospedador.
El conocimiento de los genes que generan los sistemas de captacin de iones metlicos
de los microorganismos permite obtener vegetales transgnicos que aprovechan mejor
los nutrientes del suelo o secuestran metales txicos como, por ejemplo unas plantas
donde se haba expresado un gen que les posibilit convertir el Hg++ en Hgo (11).

2.5. Factores ambientales


El suelo, o material de la superficie terrestre en el que se sustenta la vida vegetal, es
uno de los sitios ms dinmicos en interacciones biolgicas de la naturaleza.
Comprende organismos vivos, minerales disgregados, agua, aire y materia orgnica
muerta. El agua y el aire representan aproximadamente la mitad del volumen del suelo
(12).

2.5.1. Agua y presin osmtica


La disponibilidad de agua en el ambien te se expresa indirectamente en trminos de
actividad del agua (aw), la que se define como la razn entre la presin de vapor de
agua del substrato o solucin (p ) y la presin de vapor del agua pura (po) a la misma
temperatura, es decir, aw = p/p o
Este concepto se asocia al de humedad relativa de la atmsfera en equilibrio con el
sistema, de la siguiente manera HRE = aw . 100
La mayor parte de las bacterias no crecen a una a w por debajo de 0,91 mientras que los
mohos pueden desarrollarse con cifras de 0,80. Los valores ms bajos obtenidos para
arqueobacterias halfilas son del orden de 0,75 mientras que los mohos xerfilos
(amantes de la sequedad) y las levaduras osmfilas (que prefieren presiones osmticas
elevadas) se multiplican muy lentamente an con valores de 0,65 y 0,60
respectivamente. Los lmites de aw dentro de los cuales hay crecimiento, son ms
amplios a la temperatura ptima de multiplicacin. La capacidad de los organismos
para crecer a una temperatura dada, disminuye a medida que se reduce al aw . La
presencia de ciertos elementos nutritivos ampla los lmites de aw dentro de los cuales
los organismos pueden sobrevivir (3).
La presin osmtica () est relacionada con la actividad del agua a travs una
expresin = -RT.ln aw/v que comprende a la constante de los gases (R ), la
temperatura absoluta (T), el logaritmo natural de la actividad del agua (aw) y el
volumen molar parcial del agua (v ) (3).
El potencial agua de un suelo es la suma de los potenciales osmtico, matricial (o
capilar) y gravitacional. La humedad relativa de la fase vapor en equilibrio con el suelo
es tambin una medida indirecta del potencial agua.
El potencial osmtico de la solucin del suelo ( ) puede expresarse mediante la
ecuacin = -RT m /109 donde es la densidad del agua, los iones por
molcula de soluto, m la molalidad, el coeficiente osmtico a la molalidad m y la
temperatura TK.
El potencial matricial () est dado por la ecuacin = (RT ln p/p o) /106 M
donde M es el peso molecular del agua.
6 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

El trmino capacidad de campo se refiere al contenido en agua de un suelo, drenado


despus de la saturacin, cuando la velocidad de la prdida de agua debida a la
gravedad es pequea. No es una medida precisa (12).
Las bacterias mantienen siempre su osmolaridad muy por encima de la del medio, y
estn protegidas por una pared celular capaz de resistir una considerable presin
osmtica interna (1). En contraposicin a la diversidad de concentraciones de potasio y
sodio en los distintos ambientes, los organismos vivos contienen potasio a una
concentracin ms elevada que la del medio externo. Adems de neutralizar las cargas
negativas de la clula y de regular la funcin enzimtica, el potasio acta como un
soluto implicado en la regulacin osmtica de algunos organismos Algunos
organismos halfilos que viven en ambientes de alta salinidad sdica, por ejemplo
Halobacterium, son la excepcin a esta regla (10). Los organismos que son capaces de
crecer a elevadas concentraciones de azcar se denominan osmfilos.
Basados en sus respuestas, o tolerancia, a la sequedad los microorganismos se pueden
distribuir entre tres grupos definidos por el potencial agua () ptimo y mnimo para
el crecimiento:
grupo 1. ptimo 0.1 MPa, mnimo alrededor de 2MPa; contiene algunos hongos y
una variedad de bacterias Gram-negativas;
grupo 2. ptimo alrededor de 1 MPa, mnimo alrededor 5MPa; contiene
principalmente zigomicetos, bacterias Gram-negativas y actinomicetos;
grupo 3. ptimo alrededor de 1MPa, mnimo 10 a 15 MPa; contiene una variedad de
ascomicetos y basidiomicetos y bacterias Gram-positivas (12).

2.5.2. Tensin superficial


La tensin superficial de los medios de cultivo afecta al desarrollo de un
microorganismo. Por ejemplo BaciIIus subtilis tiende a crecer en la superficie a modo de
pelcula o velo en los medios corrientes con una tensin superficial entre 57 y 63 dinas,
pero si se disminuye a menos de 40 dinas por el agregado de un detergente crece en
forma difusa (13). La humectabilidad es funcin de la tensin superficial. Las soluciones
de detergentes pueden penetrar en grietas y espacios muy pequeos e incluso hasta el
centro de los agregados de bacterias, donde el agua quedara por encima sin mostrar
penetracin alguna.

2.5.3. pH
El pH del medio puede influir sobre la expresin de genes y regular el transporte de
protones, la degradacin de los aminocidos, la adaptacin a condiciones acdicas o
bsicas y an la virulencia. Las clulas perciben los cambios del pH ambiente a travs
de diferentes mecanismos. La protonacn y desprotonacin de los aminocidos
inducida por el pH, puede alterar la estructura protenica secundaria y por lo tanto la
funcin que seala el cambio. La clula puede responder slo a una de las formas de las
molculas de seal. Por ejemplo, los cidos orgnicos atraviesan la membrana
citoplasmtica solamente en la forma protonada y un aumento de la concentracin
intracelular indicara un incremento en la acidez ambiental. El gradiente de protones a
travs de la membrana puede servir, por s mismo, como un sensor para ajustar los
procesos dependientes de la energa (8).
El pH intracelular puede ser mantenido sobre un valor crtico en el cual las protenas
internas se desnaturalizan irreversiblemente. En Salmonella typhimurium hay tres
mecanismos para mantener el pH interno compatible con la vida: la respuesta
homeosttica, la respuesta de tolerancia al cido y la sntesis de protenas de shock
acdico (14).
A pH ambiental mayor que 6,0 las clulas bacterianas ajustan su pH interno a travs
de la respuesta homeosttica modulando la actividad de las bombas de protones,
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 7

antiportes y simportes, para aumentar la velocidad a la cual los protones son expelidos
del citoplasma. El mecanismo homeosttico es constitutivo y funciona en presencia de
inhibidores de la sntesis proteica.
La respuesta de tolerancia al cido es iniciada por un pH externo de 5,5 a 6,0. Este
mecanismo es sensible a los inhibidores de la sntesis proteica y puede mantener el pH
interno por sobre 5,0 teniendo el pH externo valores tan bajos como 4,0. La prdida de
la actividad ATPasa, causada por las mutaciones que desorganizan genes o los
inhibidores metablicos, anula la respuesta de tolerancia al cido pero no el mecanismo
homeosttico. Esta respuesta tambin puede conferir proteccin cruzada frente a otros
agentes ambientales de estrs.
La sntesis de protenas de shock acdico es la tercera va por la que la clula regula
el pH interno. Esta sntesis es generada por un pH ambiental de 3,0 a 5,0 proveyendo
un conjunto de protenas reguladoras distintas de las protenas de la respuesta de
tolerancia al cido.

Rango de pH para el crecimiento (2)


Bacterias lmite inferior ptimo lmite superior
Thiobacillus thiooxidans 0,5 2,0-3,5 6,0
Azotobacter sp. 5,5 7,0-7,5 8,5
Erwinia carotovora 5,6 7,1 9,3
Clorobium limicola 6,0 6,8 7,0
Thermus aquaticus 6,0 7,5-7,8 9,5
Nitrobacter spp. 6,6 7,6-8,6 10,0
Hongos
Aspergillus oryzae 1,6 9,3
Fusarium oxysporum 1,8 11,1
Penicillium italicum 1,9 9,3
Rhizoctonia solani 2,5 8,5
Botrytis cinerea <2,8 7,4
Aspergillus niger 2,8 8,8

Aunque para la mayora de las bacterias el pH ptimo para el crecimiento se


encuentra entre 8,5 y 7,5; pocas especies son acidfilas (Thiobacillus), algunas son cido-
tolerantes (lactobacilos), pero muchas crecen en condiciones alcalinas (nitriificadores,
rizobios, actinomicetos y bacterias ureolticas). Por su parte, los hongos prefieren
valores bajos de pH, y predominan cuando se siembra una muestra de suelo en un
medio de pH 5, pero no a pH 8 (15). Algunos organismos productores de cidos no son
cido-tolerantes y si el medio no posee un regulador de pH se autoenvenenan, por
ejemplo ciertas enterobacterias (2).

2.5.4. Oxgeno
El metabolismo de los microorganismos est fuertemente infludo por el oxgeno
molecular. Los organismos que dependen de la respiracin aerbica, para los cuales el
oxgeno es el aceptor final de electrones, se conocen como aerbicos estrictos. Un
ejemplo de stos es la actinobacteria Streptomyces. Por el contrario para los organismos
anaerbicos estrictos el oxgeno es generalmente txico. Las clulas somticas de las
bacterias del gnero Clostridium son muy sensibles al oxgeno mientras que los
endosporos estn protegidos de su efecto letal. Un grupo intermedio de organismos,
los anaerbicos facultativos, pueden crecer en presencia o ausencia de oxgeno
molecular, por ejemplo la levadura Saccharomyces cerevisiae que puede obtener su
energa tanto de la fermentacin como de la respiracin. Por otro lado estn los
organismos que nicamente toleran al oxgeno, como algunas bacterias lcticas que
8 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

obtienen su energa exclusivamente de la fermentacin sin ser daadas por el oxgeno.


Ciertas bacterias aerbicas se cultivan mejor en ambientes donde la concentracin de
oxgeno es reducida y se las denomina microaeroflicas (14).

2.5.5 Potencial de reduccin


El potencial de reduccin de un substrato es aquel en que dicho substrato gana
electrones con mayor facilidad. Cuando pasan electrones de un compuesto a otro, se
crea una diferencia de potencial entre ambos, la que se expresa en milivoltios (mV).
Cuanto ms oxidada est una substancia ms positivo ser su potencial elctrico, y
cuanto ms reducida el potencial ser ms negativo.
El potencial de reduccin de un sistema se expresa con el smbolo Eo. Los
microorganismos aerobios crecen en ambientes con valores Eo positivos mientras que
los anaerbicos necesitan para su desarrollo un medio con Eo negativo. Entre las
substancias que ayudan a mantener condiciones reductoras en el medio de cultivo se
encuentran los aminocidos con un grupo tiol (-SH) y los azcares con un grupo
aldehdo libre (15).

2.5.6. Temperatura
En muestras de agua recogidas en las proximidades inmediatas a las surgencias
termales se han hallado hasta 108 - 109 clulas bacterianas por mL. Las bacterias
adaptadas a elevadas presiones hidrostticas (250260 bares o sea 25-26 MPa) muestran
adems una notable adaptacin a las altas temperaturas, por ejemplo unas bacterias
metanognicas tenan tiempos de duplicacin entre 37 y 65 minutos a 100C bajo tales
presiones (16).

Temperaturas cardinales en C para microorganismos procariticos (17)


grupo mnima ptima mxima
termfilos 40-45 55-75 60-90
mesfilos 5-15 30-45 35-47
psicrotrofos -5-+5 25-30 30-35
psicrfilos -5-+5 12-15 15-20

Los valores de las temperaturas cardinales (mnima, ptima, mxima) varan


ampliamente entre las bacterias como se muestra en el cuadro siguiente, pero algunas
tienen una amplitud mayor, como por ejemplo Clostridium perfringens que crece entre 12
y 50C. Los organismos aislados de ambientes fros crecen a temperaturas por debajo
de 0C si las altas concentraciones de solutos impiden la congelacin del medio (1).

Temperaturas en C para el crecimiento de bacterias (1)


especie mnima ptima
mxima
Listeria monocytogenes 1 30-37 45
Pseudomonas maltophila 4 35 41
Escherichia coli 10 37 45
Clostridium kluyveri 19 35 37
Bacillus flavothermus 30 60 72
Thermus aquaticus 40 70-72 79
Sulfolobus acidocaldarius 70 75-85 90
Pyrobacterium brockii 80 102-105 115

Los mohos psicrotrofos pertenecen a los gneros Cladosporium, Fusarium, Penicillium,


Trichothecium y las levaduras a Candida, Cryptococcus, Torulopsis, Rhodotorula (18).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 9

Temperaturas cardinales de algunos hongos (18,19)


temperatura C
grupo mnima ptima mxima
Alternaria solani 2 27 45
Aspergillus fumigatus 12 35 55
Botrytis cinerea 0 20 30
Fusarium moniliforme <5 25 35
Rhizoctonia solani 2 25-30 35
Trichothecium roseum <10 30 35

La velocidad de crecimiento se ve afectada por los cambios de temperatura y en los


rangos inferiores el tiempo de generacin puede sobrepasar las cien horas. Los
microorganismos eucariticos, por ejemplo protozoos, son ms sensibles a las bajas
temperaturas que los procariticos, y entre estos ltimos los gram negativos son ms
afectados que los gram positivos (17).

2.6. Medios de cultivo


El medio sirve de reservorio para los nutrientes. El componente dominante es casi
siempre el agua. Tambin en el caso en el que los microorganismos se hallen sobre un
substrato slido, por ejemplo cereales o forrajes, ste debe estar hmedo para permitir
la accin microbiana o enzimtica.

Medios complejos para el enriquecimiento de bacterias hetertrofas (21)


base: extracto de levadura 1%, KH 2PO4 0,1%, MgSO4 0,02%
incubacin: 30C, en la obscuridad
fuente condiciones agregado organismos
suelo pH 7,0 - aerobiosis --- oxidantes de aminocidos
" pH 3,0 - anaerobiosis glucosa 2% Sarcina sp.
suelo pasterizado pH 7,0 - aerobiosis --- Bacillus spp.
" pH 7,0 - anaerobiosis --- Clostridium fermentadores
de aminocidos
" pH 8,0 - aerobiosis urea 5% Bacillus pasteurii
" pH 7,0 - anaerobiosis glucosa 2%, Clostridium fermentadores
CaCO3 2% de azcares
vegetales, leche, pH 6,5 - anaerobiosis glucosa 2% bacterias lcticas
frutas, cerveza pH 6,0 - aerobiosis etanol 4% bacterias acticas
suelo, agua pH 7,0 - anaerobiosis glucosa 2%, bacterias coliformes
residual CaCO3 2%
queso suizo pH 7,0 - anaerobiosis lactato Na 2% bacterias propinicas

Los microorganismos heterotrficos pueden utilizar azcares, alcoholes y


aminocidos como fuente de energa. Algunos son capaces de emplear polisacridos,
como almidn y celulosa, al tener la posibilidad de hidrolizar estos compuestos hasta
azcares sencillos. Loa aminocidos y nucletidos suelen constituir la fuente primaria
de nitrgeno y para obtenerlos, algunos organismos son capaces de degradar pptidos,
protenas y polinucletidos. Tambin las grasas son utilizadas como fuente de energa,
aunque slo un nmero relativamente pequeo de microorganismos las atacan (20).
Adems del carbono, los nutrientes primordiales son nitrgeno y fsforo que se
incorporan como amonio o nitrato, y fosfato. Otros nutrientes, tales como vitaminas e
iones metlicos, se requieren en pequea cantidad (micronutrientes) y suelen estar,
como contaminantes, en los componentes principales de los medios de cultivo e incluso
10 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

en los recipientes de vidrio que los contienen. Cuando el oxgeno es necesario para el
metabolismo, la fuente usual de suministro es el aire filtrado (5).
La mayora de los mohos, as como unas pocas bacterias y levaduras, cuando crecen
sin alteraciones, forman una pelcula fuerte y contnua en la superficie del medio. En
cambio, si crecen bajo el efecto de una agitacin vigorosa, originan bolitas de una pulpa
fibrosa dispersadas por todo el medio fludo (20).
Los requerimientos nutritivos de los mohos son muy parecidos a los de las levaduras,
salvo que los mohos presentan ms diversidad en los tipos de substratos orgnicos que
pueden asimilar (5). En el laboratorio un medio corriente es el extracto de malta, con o
sin extracto de levadura y agar. Para el crecimiento de algunos mohos se utiliza un
medio definido constitudo por sacarosa y sales minerales conocido como agar Czapek,
a veces adicionado de extracto de levadura. Cuando se desea aislar hongos osmfilos se
le agrega 20 a 50% de sacarosa (18).
Un medio con cloruro de amonio y otras sales, sin ninguna fuente de carbono, cuando
se incuba aerbicamente tendr disuelto CO2 atmosfrico y en presencia de luz
permitir el crecimiento de algas y cianobacterias. Pero si se incuba en la obscuridad
facilitar el desarrollo de bacterias que obtienen energa por oxidacin del amonio (20).

Medios para el enriquecimiento de bacterias fotosntetizantes (21)


base: NH 4 Cl 0,1%; K2 HPO 4 0,1%; MgSO4 0,02%; FeSO4 0,005%; CaCl2 0,002%; MnCl2
0,0002%; NaMoO4 0,0001%
incubacin: 25 - 30C, iluminacin constante, sin aire
agregado pH organismos
Na2S 0,2% + NaHCO3 0,5% 7,5 bacterias verdes del azufre
Na2S 0,2% + NaHCO3 0,5% 8,0 - 8,5 bacterias purpreas del azufre
Na malato 0,5% + ext de levadura 0,05% 7,0 - 7,5 bacterias purpreas no del azufre

Medios sintticos para el enriquecimiento de bacterias autotrficas (21)


base: K2 HPO4 0,1%; MgSO4 0,02%; FeSO4 0,005%; CaCl2 0,002%; MnCl2 0,0002%;
NaMoO4 0,0001%
incubacin: 25 - 30C, en la obscuridad
agregado pH atmsfera organismos
NH4 Cl 0,15% + CaCO3 0,5% 8,5 aire Nitrosomonas
NaNO2 0,3% 8,5 aire Nitrobacter
NH4 Cl 0,1% + Na2 S2 O3 0,7% 7,0 aire Thiobacillus
NH4 NO3 0,3% + Na 2 S 2 O3 0,7% + NaHCO3 0,5% 7,0 sin aire T. denitrificans
NH4 Cl 0,1% 7,0 H 2 85%,
O2 10%, bacterias
. CO2 5% del hidrgeno

Sea cual fuere la composicin qumica del medio, es necesario que todos los
componentes estn perfectamente mezclados, de modo que el microorganismo tenga
acceso a todos los nutrientes. La mayora de las bacterias y algunas levaduras crecen
comnmente como clulas individuales o como agregados de varias de ellas, y
permanecen suspendidas en el medio. Cuando se trata de una poblacin densa o las
clulas secretan polmeros, el medio fludo se vuelve viscoso y adems, pueden formar
grandes agregados o crecer como una pelcula mucosa sobre la superficie.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 11

2. 7 Esterilizacin
2.7.1. Accin del calor
Con el fin de evitar el crecimiento de microorganismos extraos introducidos por la
contaminacin, se esterilizan con vapor de agua a presin todos los materiales que
integran el medio de cultivo. El vapor tambin se suele emplear para esterilizar
recipientes y otras superficies con las que el medio est en contacto (20).

Tiempo de destruccin de algunos endosporos bacterianos (2)

calor hmedo minutos a


organismo 100 105 110 115 120 125 130 1340 C
bact. termfilas ... 400 100-300 40-110 11-35 4-8 3,5 1
Bacillus anthracis 2-15 5-10 ... ... ... ... ... ...
B. subtilis horas ... 40
Clostridium tetani 5-90 5-25
C. perfringens 5-45 5-27 10-15 4 1 ...
C. botulinum 300-530 40-120 32-90 10-40 4-20 ... ... ...
C.sporogenes 150 45 12 ... ... ... ... ...
calor seco minutos a
organismo 120 130 140 150 160 170 1800 C
bacilos termfilos ... ... ... 180 30-90 15-60 15
B. anthracis ... ... >180 60-120 9-90 3
C. botulinum 120 60 15-60 25 20-25 10-15 5-10
C.pefringens 50 15-35 5
C. tetani 20-40 5-15 30 12 5 1

Los factores que afectan a la termodestruccin pertenecen a tres tipos generales:


(a) factores intrnsecos, por ejemplo diferencias entre cepas y especies, entre
endosporos y clulas somticas;
(b) factores ambientales que ejercen su influencia durante el crecimiento y la
formacin de las clulas o los endosporos, como edad, temperatura y medio de
cultivo;
(c) factores ambientales que actan durante el tratamiento trmico de las clulas o los
endosporos, por ejemplo pH, aw , medio de suspensin, tipo de substrato, sales y
otros compuestos org nicos o inorgnicos.
Los endosporos bacterianos son muy resistentes a la temperatura, algunos pueden
incluso sobrevivir tratamientos de varios minutos a 120C en ambiente hmedo.
Cuando se utiliza el calor para destruir los microorganismos presentes en una pelcula
lquida es posible utilizar tratamientos muy cortos, pero la esterilizacin de algunos
slidos exige horas debido a las dificultades impuestas por la penetracin del calor (17).
El autoclave es un aparato cuyo funcionamiento se basa en que la temperatura de
ebullicin del agua aumenta con la presin. Por consiguiente si la presin absoluta del
vapor en el recipiente cerrado se eleva a 2,02 kg/cm2 la temperatura subir hasta 1200 C.
La presin absoluta es la suma de la presin atmosfrica y la presin manomtrica del
autoclave. La temperatura de una mezcla de vapor y aire a determinada presin es
inferior a la del vapor solo, por lo que debe evacuarse todo el aire de la cmara de
esterilizacin (1). Otra precaucin importante es la de que el vapor se introduzca bien en
los materiales sometidos a esterilizacin. El tiempo de funcionamiento depende de la
naturaleza y volumen del material que se esteriliza, as como del tipo de envase.
12 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

El orden de la termodestruccin microbiana es logartmico, lo que permite desarrollar


combinaciones de tiempo y temperatura que aseguren un efecto destructivo. La figura
3 muestra una recta tpica de supervivencia microbiana obtenida representando, en
funcin del tiempo, el logaritmo del nmero de los supervivientes a la exposicin a una
determinada temperatura. A partir de este grfico se puede determinar el tiempo de
reduccin, decimal (D) que es el nmero de minutos precisos para destruir el 90% de
una poblacin. La lnea recta se extiende tericamente hasta la zona de logaritmos
negativos, por ejemplo log 10-3 = 1 clula por cada 1000 g (14).
La muerte de los microbios por una fuente
de calor, u otro agente letal, se expresan
mediante la ecuacin cintica de primer
orden N = No .e-kt donde N es el nmero
de clulas (UFC/g), No el nmero inicial de
clulas, t el tiempo, k la constante de
velocidad, luego 2,3 log(N/No) = - (kt)
y entonces t = - [2,3 log(N/N o)] / k
El tiempo de reduccin decimal es la
constante cintica usada con ms frecuencia
en la industria de conservas vegetales e igual
a D = 2,3 / k estando D y k definidos para
una temperatura dada.
La interrelacin entrek y T est relacionada
con la energa de activacin Ea mediante la
ecuacin de Arrhenius k=s -Ea/RT donde s es
la constante de frecuencia, R la constante de
los gases ideales, T temperatura en grados
Kelvin.
La interrelacin entreD y T est dada por el valor z y est relacionado con E a por la
ecuacin E a = [2,3 R. T1. T 2 / z]. 9/ 5 siendo T 1 la temperatura de referencia y T2 la
del ensayo, en grados Kelvin (14).

2.7.2. Accin de las radiaciones


La irradiacin consiste en proyectar una cierta cantidad de energa sobre un cuerpo
para expulsar los electrones perifricos fuera de los tomos y producir de esta manera
iones. Estos ion es, as como los electrones expulsados, reaccionan a su vez con otros
tomos. El resultado es la rotura de enlaces entre los tomos y las molculas que
constituyen la substancia tratada. En las clulas, la radiacin afecta en primer lugar a
los cidos nucleicos y las protenas, sin que se produzca un calentamiento apreciable.
Algunas de las alteraciones que una radiacin ionizante puede producir en un cido
nucleico son reparables por el microorganismo, por ejemplo la hidratacin de la
citosina. Otras alteraciones son ms perjudiciales, como la formacin de puentes entre
ambas cadenas del ADN impidiendo la duplicacin del mismo y por tanto de la
bacteria.
Se emplean tres formas de radiacin: los rayos gamma, los electrones acelerados y los
rayos X. Los irradiadores de rayos gamma funcionan con cobalto 60, emitiendo estos
rayos con gran poder de penetracin, de hasta varias decenas de centmetros, lo que
permite tratar productos a granel. La irradiacin tambin inhibe la germinacin de las
papas y las cebollas, prolongando el tiempo de almacenamiento, as como afecta a las
larvas y huevos de insectos en los cereales.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 13

El gray es la cantidad de energa absorbida correspondiente a un joule por kg de


substancia ionizada y reemplaza al rad (1 Gy = 100 rad) en el sistema internacional (22).

2.7.3. Accin de la luz ultravioleta


El rango de la radiacin UV que ms afecta a los microorganismos est entre 240 y
280 nm, y se utiliza para el tratamiento de superficies contaminadas pues tienen poco
poder de penetracin. La radiacin germicida (254 nm) es absorbido por el material
celular pero de manera ms significativa por los cidos nucleicos, a los que causa el
mayor dao. Los endosporos bacterianos son 7 a 50 veces ms resistentes a la radiacin
UV de 254 nm que las clulas vegetativas (23).
El principal efecto de la luz UV es causar la formacin de dmeros, mediante enlaces
transversales, entre pirimidinas adyacentes, especialmente residuos de timina del
ADN. Estos residuos unidos por enlaces transversales, alteran el proceso normal de
replicacin dando como resultado mutaciones. Muchas bacterias poseen un eficiente
mecanismo de fotorreactivacin para reparar el dao causado por la radiacin UV
cuando se exponen inmediatamente despus a la luz visible (2).

2.7.4. Accin de las microondas


Las microondas son una parte del espectro de ondas electromagnticas cuya banda se
extiende desde los 500 megahertz hasta los 10 gigahertz, es decir incluye ondas cuyas
frecuencias de oscilacin van desde los 500 millones a los 10.000 millones de ciclos por
segundo, y se usan para generar calor interno en diversos productos (24).
Las molculas de agua son dipolos elctricos y cuando se aplica un campo de
microondas, se reorientan con cada cambio en la direccin del campo produciendo
calor por la friccin intermolecular. Las caractersticas fsicas, trmicas, dielctricas del
tejido biolgico, su masa y la frecuencia de la radiacin, causan un calentamiento
diferencial de los distintos constituyentes. Esta falta de uniformidad trmica ha
limitado el uso de las microondas para la inactivacin microbiana, pues el
calentamiento heterogneo puede dejar puntos donde sobrevivan microorganismos,
aunque tericamente estas clulas son calentadas especficamente dentro de la matriz
del producto que las contiene. La frecuencia comnmente usada, por distintas razones,
es 2,45 GHz y no parece ser la ms conveniente (23).

2.7.5. Accin del ultrasonido


Las ondas sonoras de alta frecuencia (ultrasonido) tambin se usan para desintegrar
clulas microbianas y eliminar microorganismos de un equipo (2). Se ha usado para
productos lquidos un proceso combinado de inactivacin microbiana que incluye calor
(112C) y ultrasonido (20kHz) bajo una presin de 300 kPa (23).
2.7.6. Separacin por filtracin
Las preparaciones que contienen productos sensibles al calor se esterilizan mejor por
filtracin. El material filtrante se prepara con un ster de celulosa u otros polmeros con
poros de tamao preciso y uniforme. Es muy delgado, con un espesor de unos 150 m
y por eso se le denomina membrana filtrante. Los filtros ms usados tienen un
dimetro de poro de 0,2 m de 0,45 m. Para su uso se suele colocar la membrana
preesterilizada sobre el disco que la soporta en la unidad de filtracin estril.
Los filtros de aire de elevada eficiencia (HEPA) permiten suministrar aire libre de
polvo y microorganismos a una cmara de siembra, y estn acoplados a un sistema de
flujo laminar (2).

2. 8. Desinfeccin
Los desinfectantes son substancias qumicas que matan a las clulas somticas
adheridas a las superficies inanimadas, pero no necesariamente a las formas
14 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

esporuladas. Los antispticos destruyen o inhiben el crecimiento y la actividad de los


microorganismos que estn sobre los tejidos vivos (1).
Se llama bactericida a la substancia que mata las clulas bacterianas y bacteriosttico a
la que impide el crecimiento y multiplicacin de las mismas. Un agente antimicrobiano
interfiere con el crecimiento y metabolismo de los microorganismos y cuando se refiere
a grupos especficos se usan los trminos antibacteriano o antifngico (2).
Varios factores influyen sobre la velocidad con que son inhibidos o destrudos los
microorganismos. A medida que aumenta la concentracin del agente las clulas
mueren ms rpido, por ejemplo 4,25 g de fenol/L requieren unas 10 horas para
obtener el mismo resultado que una concentracin de 6,04 g/L en 1,5 horas. Un ligero
aumento de la temperatura permite aumentar grandemente la efectividad de un
desinfectante por ejemplo, para una solucin de fenol de 4,62 g/L, un incremento de 30
a 42C permite obtener el mismo resultado en un tiempo diez veces menor (2).
Las especies de microorganismos difieren en la sensibilidad a los diversos agentes
antimicrobianos. Los endosporos bacterianos son las clulas ms resistentes por su
capacidad de sobrevivir a las condiciones qumicas adversas. La presencia de materia
orgnica puede reducir significativamente la efectividad de un antimicrobiano,
inactivndolo por combinacin con el mismo o protegiendo al microorganismo al
dificultar el contacto con el desinfectante. Cuando estn en un ambiente con un pH
cido los microorganismos son destrudos a temperatura ms baja y en menor tiempo
que en un medio ligeramente alcalino (1).
Los compuestos fenlicos pueden ser bactericidas o bacteriostticos segn la
concentracin usada, pero algunos son fungicidas. La actividad es reducida por un pH
alcalino o la presencia de materia orgnica. El alcohol etlico en concentraciones de 50 a
70% v/v es efectivo contra clulas somticas. Los productos que contienen 5 a 7% de
hipoclorito de sodio se usan para higienizar diversos equipos, pero es muy afectado
por la presencia de materia orgnica.
Los detergentes disminuyen la tensin superficial y no son afectados por las aguas
duras. Los agentes que al ionizarse tienen la propiedad detergente en el anin son
conocidos como detergentes aninicos, por ejemplo el lauril sulfato sdico o los
jabones. Producen la eliminacin mecnica de los microorganismos al atraparlos en la
espuma. Los que tienen la propiedad detergente en el catin son llamados catinicos,
por ejemplo los cloruros de amonio cuaternario. Son bactericidas frente a las
grampositivas pero tienen poca accin contra las gramnegativas (2).
El formaldehdo es un gas que se comercializa como una solucin acuosa (formol o
formalina) que contiene entre 37 y 40 % de formaldehdo. Se emplea en soluciones del 3
al 8%. Tiene una alta actividad microbicida. Se lo suele usar para esterilizar ambientes
cerrados bajo c ondiciones apropiadas pues los vapores son nocivos (2).

2. 9. Interacciones microbianas
2.9.1. Antibiosis
Un microorganismo puede producir metabolitos que hagan el ambiente desfavorable
para el desarrollo de otros o que perturben su metabolismo hasta el punto de que
mueran o sean incapaces de reproducirse. El fenmero recibe el nombre de antibiosis o
antagonismo.
Los antibiticos constituyen un grupo heterogneo de molculas orgnicas
relativamente pequeas, producidas por unos microorganismos para inhibir a otros a
una concentracin muy baja. La mayora de los microorganismos notoriamente
productores de antibiticos se alojan en el suelo (8).
Otro grupo se molculas antagonistas son las bacteriocinas. Constituyen un grupo
relativamente heterogneo de pequeas protenas sintetizadas en los ribosomas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 15

microbianos. Actan sobre bacterias estrechamente relacionadas al agente productor


pero no afectan a ste. Algunas bacteriocinas son: nisina producida por Lactococcus
Iactis, subtilina por B. subtilis, colicinas por E. coIi, pediocina por Pediococcus acidilactici
(26).

Productos metablicos microbianos que actan como antibiticos (1, 25)


antibacterianos producido por modo de accin
aminoglucsidos
estreptomicina Streptomyces griseus induce sntesis anormal de protenas
neomicina Streptomyces fradiae
cefalosporinas Acremonium cephalosporium inhiben sntesis de pared celular
cloranfenicol Streptomyces venezuelae
eritromicina Saccharopolyspora erythraea interfiere con sntesis de protenas
lincomicina Streptomyces lincolnensis
penicilinas Penicillium chrysogenum inhiben sntesis de pared celular
polipptidos
polimixinas BaciIIus polymyxa deterioro de membrana celular
bacitracina BaciIIus subtilis inhibe formacin de pared celular
rifamicinas Amycolatopsis mediterranei interfiere con sntesis de protenas
tetraciclinas Streptomyces spp.
vancomicina Arnycolatopsis orientalis
viomicina Streptomyces griseus
antifngicos
anfotericina B Streptomyces nodosus interfiere con funcin de membrana
griseofulvina PeniciIIium griseofulvum daa la membrana celular
lipopptidos
iturina A BaciIIus subtilis interfiere con funcin de membrana
surfactina BaciIIus subtilis
nistatina Streptomyces noursei daa la membrana celular

2.9.2. Mutualismo y simbiosis


Los microorganismos que habitan en un ecosistema presentan varios tipos de
asociaciones e interacciones entre las especies. A veces se asocian diferentes especies
bacterianas, o bien bacterias y otra clase de organismos, como levaduras, mohos, algas,
protozoos e incluso plantas, u hongos con plantas como en el caso de las micorrizas. En
muchos casos, el crecimiento y la reproduccin son ms vigorosos en asociaciones
favorables de dos tipos de organismos que en cultivos de una sola especie (9).
El mutualismo es la vida en comn de dos o ms organismos asociados en beneficio
mutuo pero no implica necesariamente el contacto fsico. Simbiosis es una asociacin
especfica entre dos tipos de organismos que estn en contacto fsico. Generalmente el
de menor tamao (simbionte) vive dentro o est adherido a la superficie del mayor
(hospedador). La simbiosis no siempre implica mutualismo. El hospedador es siempre
un organismo eucaritico y puede mantener al simbionte (eubacteria, actinomiceto,
hongo o alga) intracelular o albergarlo en el interior de cavidades u rganos (12). Por
otra parte, la sintrofia es la accin cooperante de dos microorganismos con
metabolismos complementarios (un tipo de mutualismo) alcanzando un efecto que no
es logrado separadamente por ninguno de ellos (9).
Un organismo puede ser incapaz de crecer en presencia de cierto substrato, pero si
coincide con un microorganismo capaz de degradarlo y producir molculas tiles para
el primero, se observa su crecimiento. Esta asociacin recibe el nombre de
comensalismo o vida en comn de dos especies con beneficio para una de ellas y sin
16 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

dao ni provecho para la otra, por ejemplo cuando los microbios colonizan la superficie
externa de una planta obteniendo energa de la metabolizacin de exudados
producidos por el hospedador. Otro ejemplo es la influencia favorable de un microbio
facultativo sobre el desarrollo de uno anaerobio, el primero reduce la tensin de
oxgeno y crea un ambiente adecuado para que prospere el segundo (27).
Las comunidades microbianas estn caracterizadas por siete diferentes mecanismos
biolgicos:
a) provisin de nutrientes especficos por los diferentes miembros de la comunidad,
b) moderacin de la inhibicin del crecimiento,
c) interacciones que causan la alteracin de los parmetros de crecimiento de las
poblaciones individuales, produciendo un desempeo de la comunidad ms
eficiente y/o competitivo,
d) actividad metablica combinada no expresada por las poblaciones individuales
aisladas,
e) cometabolismo,
f) reacciones de transferencia de hidrgeno,
g) interaccin entre varias especies dominantes (28).
2.9.2.1. Fijacin simbitica del nitrgeno
Una particularidad de las plantas leguminosas es su capacidad para asociarse con
bacterias fijadoras de nitrgeno pertenecientes a los gneros Rhizobium, Sinorhizobium,
Bradyrhizobium y Azorhizobium. Esta simbiosis se traduce en el desarrollo del ndulo en
cuyo interior las bacterias se multiplican y transforman el nitrgeno del aire en amonio
(ver 3.10). La asimilacin de ese amonio por parte
de las plantas les permite crecer en suelos pobres
en nitrgeno.
En la primera etapa, la planta secreta en su
exudado radicular unos flavonoides que atraen a
los rizobios por quimiotactismo y activan en la
bacterias la expresin de ciertos genes que
determinan la produccin, en los rizobios, de
molculas fundamentales para el reconocimiento
y la infeccin de la planta hospedadora
induciendo la formacin de los ndulos. Las
bacterias se adhieren a los pelos absorbentes de la
raz e inducen la curvatura del extremo de los
mismos (29).
Los rizobios infectan la planta mediante un filamento de infeccin que avanza hacia
la base del pelo y el interior de la raz, simultneamente las clulas de la corteza interna
de la raz se dividen y forman el primordium nodular. La multiplicacin muy intensa
de estas clulas provoca la aparicin del ndulo, que es un verdadero rgano
especializado en el intercambio metablico entre ambos asociados.

Algunas especies de bacterias fijadoras de nitrgeno en simbiosis (33)


Gnero, especie, biovar Planta hospedadora
Sinorhizobium meliloti alfalfa
Rhizobium leguminosarum biovar trifolii trbol
Rhizobium leguminosarum biovar phaseoli poroto
Rhizobium ciceri garbanzo
Bradyrhizobium japonicum soja
Azorhizobium caulinodans Sesbania (ndulos en el tallo)
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 17

Las simbiosis entre rizobios y leguminosas son muy especficas, por ejemplo R.
leguminosarum induce la nodulacin en el poroto pero no en la alfalfa (30). Las bacterias
no se mezclan con los orgnulos citoplasmticos, sino que se mantienen confinadas en
los simbiosomas que son vesculas protegidas por membranas. Los simbiosomas del
lupino tienen una sola bacteria, los de la soja varias. La figura 4 muestra el corte de un
ndulo.
La membrana del simbiosoma acta a modo de
barrera que controla el flujo de cidos carboxlicos
(malato, succinato, fumarato). stos constituyen la
fuente de carbono para los bacteroides. Tales cidos
proceden de la oxidacin de azcares sintetizados en
las hojas por la fotosntesis. Durante el proceso de
formacin de los simbiosoma s, las bacterias se van
transformando en bacteroides que expresan diversas
protenas especficas como la enzima nitrogenasa y
algunos citocromos. Las clulas intersticiales sin
infectar intervienen en las ltimas etapas de la sntesis
de ureidos, asparagina o glutamina, por incorporacin
del nitrgeno fijado. stos se exportan hacia la parte
area a travs de los vasos del xilema.
Para que los ndulos de las leguminosas fijen
nitrgeno es imprescindible que contengan
leghemoglobina cuyo grupo hemo es sintetizado por el
vegetal (32). La fijacin de nitrgeno requiere gran
cantidad de energa que se produce en los bacteroides
durante la oxidacin de los cidos dicarboxlicos y la
leghemoglobina transporta el O2 a una concentracin
baja pero estable que permite mantener una elevada
actividad respiratoria sin afectar la nitrogenasa, pues
esta enzima se inactiva en presencia de oxgeno (30).
La rizsfera de algunas plantas contienen acumulaciones de bacterias fijadoras, tal
como Azotobacter paspali sobre la superficie de la raz de Paspalum notatum y
Azospirillum brasilense en la de caa de azcar. Las bacterias se hallan en el espacio
intercelular del crtex radical, en una simbiosis donde se benefician los dos
participantes de la asociacin. Por otra parte, el helecho de agua Azolla contiene a la
cianobacteria Anabaena azollae en las cavidades de las hojas. Nostoc vive
simbiticamente en el lquen Peltigera y sobre las races areas de Cycas y Gunnera (29).
Varias dicotiledneas que no pertenecen a las leguminosas, tambin contiene ndulos
en las races capaces de fijar N2 . En la mayora de los casos se trata de actinomicetos del
gnero Frankia. En la figura 5 se esquematiza la forma en que los filamentos penetran a
las clulas de la raz y produce ndulos donde tambin se encuentra una hemoglobina
que facilita la provisin de O2 al endfito (32).
Un inoculante para enriquecer el suelo con la bacteria simbitica deseada, contiene
altas concentraciones celulares en un substrato que favorece largos perodos de
supervivencia sin prdidas de las caractersticas fisiolgicas del microorganismo. Los
pasos a seguir comprenden:
a) seleccin de las cepas convenientes por su mayor eficiencia;
b) cultivo del microorganismo en un medio lquido;
c) eleccin, preparacin y esterilizacin del material de soporte;
d) impregnacin del soporte con el cultivo lquido que posee un alto nmero de clulas,
e) control del nmero de bacterias vivas en el producto terminado (34).
18 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2

No todas la cepas infectivas en un hospedador


particular son capaces de fijar nitrgeno, debido
a la interrrelacin varietal y a la interaccin con
los suelos y sistemas de produccin. La cepa
seleccionada debe ser genticamente estable,
tener una alta competencia frente a las cepas
menos eficientes propias del suelo, crecer en los
medios corrientemente utilizados en la industria
y sobrevivir en el soporte a las condiciones de
comercializacin.
El empleo de turba estril como soporte, el
almacenamiento refrigerado del producto y el
control de calidad, permiten mantener altos
niveles de rizobios vivos en la distribucin del
inoculante. Esto se traduce en un incremento de
rizobios por semilla. Se suele exigir 2*109
bacterias/g de inoculante a la salida de la fbrica, para as asegurar que el momento de
aplicacin permanezcan vivos unos mil millones por gramo. Las condiciones de
transporte, almacenamiento y uso determinan el xito de la inoculacin (34).
2.9.2.2. Micorrizas
Una de las funciones ms importantes
de las micorrizas (asociaciones entre
hongos y plantas) es absorber los
elementos minerales menos mviles del
suelo (fosfato, cobre, zinc) y
transferirlos a la planta hospedadora,
as como amonio. La planta proporciona
azcares al hongo (36).
Las ectomicorrizas se caracterizan por
una modificacin de la raz, que pierde
sus pelos absorbentes. El hongo rodea la
raz con un manto de filamentos, del
cual parte una red micelial externa que
se extiende por el suelo y una red micelial interna que penetra la raz en el espacio
intercelular. Los hongos implicados son macromicetos que solamente en simbiosis
pueden formar basidiomas (por ejemplo Amanita, Boletus, Lactarius, Pisolithus, Suillus) o
ascomas (como las trufas) (ver 7.3).
En las endomicorrizas el micelio entra en la raz donde
inicialmente es intercelular, luego penetra en las clulas
y se ramifica formando los arbsculos que son ms o
menos digeridos por el hospedador, y unas vesculas.
Los hongos de las endomicorrizas son micromicetos
(Glomus). En la figura 6 se observa un esquema de una
endomicorriza y en la 7 de una ectomicorriza.

2.9.2.3. Biopelculas
Las biopelculas que se forman en el forraje ingerido
por el ganado vacuno y otros rumiantes, estn
inicialmente formadas por microorganismos que
digieren la celulosa del material vegetal y producen
cidos grasos y otros metabolitos. Luego las clulas de
otras especies invaden la pelcula y comienzan a usar
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 19

esas sustancias para su propio metabolismo. As es como el forraje desaparece y es


transformado en una masa bacteriana que el animal digiere ms tarde. Estas pelculas
son imprescindibles para los rumiantes.
Menos de la tercera parte de la biopelcula est constituda por microcolonias de
bacterias, el resto es una sustancia blanda y pegajosa (matriz extracelular) secretada por
ellas que absorbe agua, atrapa partculas pequeas y mantiene unidas a las
microcolonias (figura 8). La pelcula biolgica est atravesada por diminutos conductos
que baan a cada agrupacin bacteriana, aportando nutrientes disueltos y eliminando
productos de desecho (37).

2.9.3. Predacin
Algunos microorganismos predadores se alimentan de las bacterias, como los
protozoos, mixobacterias, acrasiomicetos y varios flagelados fotosintetizantes que no
siempre estn clasificados como algas.
Siempre que existen protozoos en estado trfico hay una poblacin bacteriana que le
sirve de presa. Debido a que una sola clula de protozoo consume entre divisiones 10 3 a
10 4 bacterias, una comunidad con 103 protozoos por mL g est caracterizada por una
predacin activa. Un suelo suele tener 109 bacterias/cm3, pero en solucin los
protozoos reducen el nmero de clulas a 106 /cm3
Sin embargo, a pesar de su abundancia y actividad, los protozoos no suelen eliminar
sus presas porque esto acarreara la desaparicin consecuente del predador. Con una
baja densidad de presas el protozoo debe utilizar gran cantidad de energa para llegar a
las pocas clulas que le sirven de alimento y puede morir cuando se acaben o bien
enquistarse (27).

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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 1

3. Actividad microbiana
3.1. Suelo
El medio donde se desarrollan los microrganismos telricos est dividido en una
multitud de microambientes donde las condiciones pueden ser muy diferentes unas de
otras, confirindole una microheterogeneidad inusual. El soporte orgnico y mineral no
es inerte y los diversos procesos fsicos, qumicos y biolgicos que ocurren en el suelo
estn ntimamente intrincados. La energa necesaria para el desarrollo de los
microorganismos hetertrofos, que son la mayora de las micropoblaciones del suelo,
proviene indirectamente de la fotosntesis. Hay tambin una microfauna que a veces
interviene activamente al lado de la microbiota (1).
El suelo est formado por cinco componentes principales: materia mineral, agua, aire,
materia orgnica y seres vivos. La cantidad de estos constituyentes no es la misma en
todos los suelos. El aire y el agua juntos representan aproximadamente la mitad del
volumen del suelo. El agua que se mueve por la gravedad se encuentra en los poros
ms grandes del suelo, que frecuentemente estn llenos de aire. Parte del agua es
retenida por interacciones con otros constituyentes del suelo y slo una fraccin de sta
es aprovechable por los organismos vivos. La aireacin y la humedad estn
directamente relacionados ya que los poros que no contienen agua estn llenos de gas.
La atmsfera subterrnea es diferente de la superficial porque contiene generalmente
de diez a cien veces ms CO2, y menos O2, debido a la actividad biolgica (2).
Un corte vertical del suelo revela un perfil definido por capas horizontales:
O) una mantillo superficial, delgado o grueso, de restos orgnicos en descomposicin;
A) un horizonte del cual han desaparecido algunos constituyentes inorgnicos durante
el largo perodo de formacin del suelo pero ms o menos rico en materia orgnica,
que contiene races, pequeos animales y la mayora de los microorganismos;
B) otro horizonte en el cual se depositan algunos constituyentes provenientes de las
capas superiores, que contiene poca materia orgnica, algunas races y escasos
microorganismos;
C) un estrato de composicin semejante al material original del cual se origin el
suelo, donde hay pocas formas de vida (3).

Distribucin de los microorganismos en un suelo expresado como miles por gramo (3)
Profundidad Bacterias Bacterias Actinomicetos Hongos Algas
cm aerobias anaerobias
3-8 7.800 1.950 2.080 119 25
20-25 1.800 379 245 50 5
35-40 472 98 49 14 0,5
65-75 10 1 5 6 0,1
135-145 1 0,4 ... 3 ...

Los microorganismos no estn distribudos regularmente en el suelo pues hay un


mosaico discontnuo de microambientes, aqullos favorables para el desarrollo
microbiano se caracterizan por su limitada extensin en el tiempo y en el espacio. La
dispersin de los microorganismos, con excepcin de los fotosintetizantes, sigue la
distribucin vertical de los nutrientes pero es alterada por varios factores: la
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

composicin de la atmsfera del suelo, el pH, la humedad, la cantidad de minerales


asimilables, la presencia de substancias antimicrobianas (1).

Tipos de bacterias del suelo (3)


Gram-negativas 19 24%
Gram-positivas formadoras de endosporos 12 18 %
Gram-positivas no formadoras de endosporos 2 6%
Actinomicetos 11 25 %
Pleomrficas 36 46 %

La figura 1 muestra los


principales tipos de
distribucin de las
bacterias en un suelo.
En la curva ms
frecuente, de tipo
decreciente, la densidad
microbiana que alcanz un
mximo muy cerca de la
superficie disminuye
progresivamente con la
profundidad. La reduccin en los primeros centmetros de suelo se debe a la luz solar y
la desecacin. En la curva de tipo convexo, la densidad microbiana aumenta en un
horizonte intermedio, por ejemplo en el caso de ciertos suelos forestales donde el
mantillo aporta substancias inhibidoras de Azotobacter y otras bacterias que no son
biodegradadas rpidamente en el horizonte superior. La curva de tipo cncavo muestra
que la densidad microbiana en el horizonte intermedio es menor que en la superficie y
la profundidad, esto ocurre cuando se acumulan compuestos inhibitorios, vegetales o
producidos por microorganismos, mientras que la estimulacin de la profundidad
suele deberse a un aumento del pH por la proximidad del material calcreo de base (1).
La distribucin microbiana horizontal est ligada a la macroheterogeneidad del suelo
y puede ser debida a la induccin de la vegetacin que modifica el ambiente superficial
a la vez que por el efecto de las races. La
figura 2 muestra la heterogeneidad del pH
debida a la acidificacin por el mantillo de
Pinus .
Las interacciones entre los vegetales y los
microorganismos del suelo se manifiesta de
modo especial en zona que est en contacto
con las races o rizsfera. La microbiota es
modificada por la estimulacin, en algunos
casos inhibicin, debida a los exudados
radicales y los restos tisulares. No solamente la
intensidad del efecto rizosfrico sino tambin
la intensidad de la colonizacin del rizoplano,
vara en las diferentes partes de un mismo
sistema radical (2).
Cada especie o variedad de planta induce un
efecto rizosfrico caracterstico., pero cuando
las races envejecen desaparece
progresivamente este efecto dando lugar a la
proliferacin de los microorganismos que
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 3

intervienen en la descomposicin de los tejidos vegetales muertos (2).

Efecto rizosfrico del trigo sobre varios grupos microbianos (1)


Grupo Densidad fuera de Densidad en R/S
la rizsfera (S)* la rizsfera (R)*
Bacterias totales 52.700.000 1.121.000.000 21,3
Hongos 120.000 1.160.000 9,7
Protozoos 990 2.400 2,4
Algas y cianobacterias 26.900 4.500 0,17
Bacterias nitrificantes 100.000 100.000 1,0
Bacterias esporuladas 575.000 927.000 1,6
Bacterias celulolticas aerobias 2.700 720.000 267
Bacterias celulolticas anaerobias 120.000 409.000 3,4
Otras bacterias anaerobias 33.000 389.000 11,8
Bacterias amonificantes 1.800.000 >100.000.000 > 50
Bacterias desnitrifiantes 140.000 12.650.000 90,4
* unidades formadoras de colonias (o nmero de individuos) por gramo de suelo

Los factores ecolgicos fsicos (humedad, temperatura, luz) actan directamente


sobre la microbiota rizosfrica o indirectamente por intermedio de la planta
modificando la calidad y cantidad de los exudados radicales. La elevacin de la
humedad del suelo por sobre un cierto nivel puede modificar considerablemente el
equilibrio microbiano (2).

Variacin de la poblacin fngica, en miles por gramo, a diferentes niveles de humedad (3)
Humedad promedio Total Hifas Esporas Esporas como
del suelo % % del total
8,9 99 60 39 39,4
11,2 89 57 32 36,0
18,5 142 113 29 20,5
24,2 149 133 16 10,7
27,1 173 153 20 11,5

Influencia del anegamiento sobre la densidad, en miles por gramo, de diferentes grupos
microbianos en la risfera de maz cultivado en un suelo salino (1)
Suelo a la capacidad de campo Suelo anegado
Grupos Densidad en Densidad R/S Densidad en Densidad R/S
microbianos la rizsfera fuera de la la rizsfera fuera de la
(R) rizsfera (S) (R) rizsfera
Sulfato-
reductores 44 17 2,6 550 11 50
Azotobacter 0,8 0,8 1,0 6 1 6
Amonificantes 4.200 15 280 22.000 4.500 5

La temperatura acta directamente sobre los microorganismos del suelo no


rizosfrico como se observa en el cuadro siguiente, pero tambin indirectamente
controlando los exudados radicales correspondientes a las temperaturas ptimas de
crecimiento de las plantas consideradas, 30-32C para soja y 13-16C para trigo (1).
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

Influencia de la temperatura sobre la densidad microbiana, en millones por gramo, en la rizsfera y


el rizoplano de trigo y soja (1)
C Suelo no Rizosfera R/S Rizoplano Rizsfera R/S Rizoplano
rizosfrico de trigo trigo de trigo de soja soja de soja
30-32 167 266 1,6 147 3.570 21,4 138
21-24 120 710 5,9 150 230 1,9 62
13-16 78 1.165 14,9 308 186 2,4 28

3.2. Metabolismo
La energa requerida para el mantenimiento de la vida y para la sntesis de los
componentes celulares es obtenida por la transformacin ordenada de las substancias
que ingresaron a la clula. stas son modificadas por una serie de reacciones
enzimticas sucesivas, a travs de rutas metablicas especficas.
Las vas metablicas
tienen las funciones
de proveer los
precursores para los
componentes
celulares y obtener
energa para los
procesos de sntesis y
otros que requieran
energa. Primero, los
nutrientes son rotos
en pequeos
fragmentos durante el
catabolismo y luego
convertidos por las
reacciones del
metabolismo
intermediario en
cidos orgnicos y
steres de fosfato. La
mayora de los
compuestos de bajo peso molecular que representan las unidades para sintetizar la
clula, son aminocidos, bases pricas y pirimidnicas, fosfatos de azcares, cidos
orgnicos y otros metabolitos, algunos producidos al final de largas cadenas de
reacciones. Estas substancias sirven para la sntesis de las macromolculas (cidos
nucleicos, protenas, materiales de reserva, constituyentes de la pared celular) durante
el anabolismo (6). La figura 3 representa las vas metablicas de organismos que
respiran aerbicamente.

3.3. Degradacin de biopolmeros


Los carbohidratos son los productos predominantes de la fotosntesis vegetal y son,
tambin, los principales nutrientes de la mayora de los microorganismos en los
ambientes naturales. Las macromolculas son comnmente degradadas fuera de las
clulas a unidades mono o dimricas por la accin de exoenzimas y esos productos son
absorbidos por las mismas.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 5

La mayor parte de la biomasa es


descompuesta aerbicamente por pro
y eucariotas, predominando estos
ltimos en la red de alimentacin.
Tambin participan en esta red los
invertebrados tales como gusanos,
moluscos, insectos y sus larvas. Por
otra parte, los microorganismos
siempre participan en la digestin de
los nutrientes en el tracto intestinal
de los animales, e inclusive en la
degradacin de substancias fibrosas,
tales como lignocelulosa y celulosa
que constituyen ms de la mitad de
la biomasa vegetal. Esta actividad
ocurre bajo condiciones anaerbicas.
Otros ecosistemas anxicos son los
sedimentos de aguas estancadas, los
campos de arroz, las cinagas, los
suelos inundados, los depsitos de
deshechos y los silos (5).
Los carbohidratos constituyen el 5 a
25% de la materia orgnica del suelo. Los restos vegetales contribuyen en forma de
azcares simples, hemicelulosas y celulosa, los que son descompuestos en distinto
grado por bacterias, actinomicetos y hongos. Estos organismos a su vez sintetizan sus
polisacridos y otros carbohidratos que constituyen la mayor parte de los glcidos
hallados en el suelo (5).
Las protenas son las molculas orgnicas ms abundantes en el interior de las clulas
y constituyen ms del 50% de su peso seco. Los polinucletidos forman parte del
ncleo celular y del
citoplasma. Los diversos
lpidos estn en las
membranas
citoplasmticas, las
paredes celulares y los
materiales de reserva de
vegetales y
microorganismos. Los
polmeros son degradados
mediante enzimas
extracelulares que
producen mono y
oligmeros convenientes
para la nutricin
microbiana (6).
Los xenobiticos son
substancias sintetizadas
qumicamente que no se
encuentran en la
naturaleza. Muchos son
agregados voluntariamente
al suelo. Entre los
6 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

polmeros xenobiticos se encuentran polietileno y polipropileno que son


prcticamente no-degradables.
La composicin de la biomasa del suelo aproximadamente est representada por la
figura 4. La figura 5 muestra el curso de la descomposicin de la materia orgnica en el
suelo.

3.3.1. Degradacin de la celulosa


La celulosa es el componente bsico de los vegetales y consta de unidades de -D-
glucopiranosa reunidas por enlaces 1,4-glicosdicos. La molcula de celulosa tiene
regiones cristalinas alternadas con zonas amorfas. La insolubilidad de la celulosa y su
alta resistencia mecnica se debe a la presencia de puentes hidrgeno inter e
intramoleculares y a fuerzas de Van der Waals (4). Los aportes de celulosa al suelo
varan mucho con la regin, el clima y los cultivos (3).
La celulolisis es catalizada por un sistema constitudo por tres enzimas:
endo--1,4-glucanasa que ataca los enlaces -1,4 en las regiones amorfas internas de
la macromolcula dando largos fragmentos solubles (oligosacridos),
exo--1,4-glucanasa que separa el disacrido celobiosa desde los extremos de la
molcula,
-glucosidasa que hidroliza la celobiosa con formacin de glucosa (8).
La hidrlisis de la celulosa intacta se
cumple mejor cuando estas tres enzimas
operan al unsono, como ocurre en el
celulosoma de Clostridium thermocellum
que se encuentra entre la clula y el
substrato al cual hidroliza. El celulosoma
est constitudo por nueve sitios
polipeptdicos de adhesin a la molcula
de celulosa, unidos a segmentos
duplicados que a su vez se unen a otro
polipptido sobresaliente de la capa S en
la pared celular (7).
En los suelos bien aireados la celulosa
es degradada y utilizada por varios
microorganismos aerobios (hongos,
mixobacterias y otras eubacterias). En el
rumen, bajo condiciones anaerbicas, la
celulosa es atacada por bacterias y unos
pocos hongos anaerbicos del grupo
Chytridiomycetes (4).
Los hongos tienen ms xito que las bacterias durante la celulolisis en los suelos
cidos o en la madera (lignocelulosa). Excretan celulasas que pueden ser aisladas del
medio de cultivo as como del micelio. Las bacterias deslizantes y las mixobacterias no
excretan celulasas al medio, pero se adhieren a las fibras de celulosa para digerirlas. En
los ambientes anaerbicos la celulosa es degradada por eubacterias meso y termoflicas,
por ejemplo Clostridium thermocellum. Esta bacteria crece en un medio mineral con
celulosa pero no con glucosa. La digestin de la celulosa por diversas bacterias est
acompaada de la secrecin de una substancia carotenoide amarilla que sirve como
indicador de la hidrlisis. En el rumen, el 90% de la celulosa es metabolizada, siendo el
sistema natural ms eficiente (4). En la figura 6 se muestra un esquema de la celulosa y
las microfibrillas.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 7

Los principales factores ambientales que afectan la descomposicin de la celulosa en el


suelo son el nivel de nitrgeno disponible, la temperatura, la aireacin, la humedad, el
pH, la presencia de otros glcidos y la proporcin de lignina en los restos vegetales (3).
Algunos microorganismos que digieren celulosa (4, 7)
Organismos eucariticos
Quitridiomicetos Hongos mitospricos Ascomicetos Basidiomicetos
Neocallimastix Aspergillus Chaetomium Coprinus
Orpinomyces Botrytis Fomes
Piromonas Fusarium Pleurotus
Sphaeromonas Humicola Polyporus
Myrothecium Trametes
Trichoderma Rhizoctonia
Organismos procariticos
Mixobacterias Bacterias Bacterias Bacterias Actinomicetos
deslizantes aerobias anaerobias
Archangium Cytophaga Cellulomonas Bacteroides Micromonospora
Polyangium Sporocytophaga Pseudomonas Butyrivibrio Streptomyces
Sorangium Clostridium Streptosporangium
Eubacterium
. Ruminococcus

En suelos con pH 6,5 - 7,5 se encuentra Cellulomonas, a pH 5,7 - 6,2 an desarrolla


Cytophaga y si la acidez desciende predominan los hongos. Se pueden encontrar
bacterias celulolticas anaerobias tambin en suelos cidos con pH 4,3. Las
mixobacterias son las ms sensibles a la acidez por lo que se las encuentra en el
mantillo de huertos, en suelos abonados y en los ricos en calcio. Los actinomicetos se
hallan en suelos muy diversos, entre pH 4,6 y 9,5. Al tratar el suelo con cal cambia la
composicin de la microbiota activa (3).
La celulolisis puede producirse en un amplio rango de temperatura, de 5 a 65C.
Entre los microorganismos termfilos se encuentran Clostridium, Streptomyces,
Chaetomium, Humicola, presentes en el estircol y los vegetales en descomposicin. Los
microorganismos celulolticos del suelo son principalmente mesfilos.
Una humedad por debajo del 50 al 60% de la capacidad de camp o favorece a las
formas filamentosas. En un suelo anegado la degradacin se debe a las bacterias
anaerobias. Los actinomicetos persisten a un 20% de la capacidad de campo.
La influencia de la salinidad suele encontrarse en la naturaleza enmascarada por los
otros factores. En el horizonte A de los suelos halomorfos hay mayor diversidad de
organismos, mientras que en el B por la acumulacinlas sales se hallan solamente
hongos halotolerantes (1).
Las substancias con las que est asociada la celulosa en los desechos vegetales
influyen sobre la velocidad de la descomposin. La degradacin de 30 g de celulosa, de
los cuales 20 a 30% sirven para la sntesis microbiana, exigen la provisin de 1 g de
nitrgeno. Cuando la presencia de lignina hace ms lenta la celulolisis se requiere
menos cantidad de nitrgeno, porque ste es poco a poco reciclado. Para los hongos
que hidrolizan lignina y celulosa la relacin C/N es mayor que 300. Los nitratos
favorecen la actividad de las bacterias mientras que el amonio y los aminocidos son
mejor utilizados por las mixobacterias y los hongos. Azotobacter y otros organismos que
fijan nitrgeno atmosfrico junto a las bacterias solubilizadoras de fosfatos, favorecen la
celulolisis (1). La aplicacin de nitratos, amonio, urea y estircol elevan la velocidad de
la descomposicin (3).
El clculo del nitrgeno necesario durante la degradacin de 100 kg de material
vegetal supuestamente libre del mismo, parte de considerar que solamente el 80% se
8 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

puede descomponer con facilidad y la mitad es carbono. Entonces se tiene 40 kg de C


para transformar, de los cuales 2/3 se convertirn en CO2 y 1/3 (13 kg) sern
incorporados a las clulas microbianas involucradas en el proceso. Estas clulas vivas
contienen aproximadamente 1 parte de N por cada 10 partes de C y como el 50% del
material celular es C, entonces el 5% es N. Por lo tanto los 13 kg de C producirn 26 kg
de biomasa microbiana si hay disponible 1,3 kg de N, durante la descomposicin de los
100 kg de material vegetal (3). Pero debido a la formacin de complejos tanino-protenas
en ciertos mantillos (lo que inactiva a las exoenzimas) y a que las substancias hmicas
son fuentes de N (aunque mediocres), la relacin C/N en los restos vegetales no es
suficiente para determinar la velocidad de la degradacin (1).
3.3.2. Degradacin de almidn

El almidn es el material de reserva que predomina en las plantas y comnmente se


presenta en grnulos con una tpica estructura en capas. Est compuesto de dos
glucanos: amilosa y amilopectina. La amilosa es soluble en agua caliente y se tie de
azul con una solucin acuosa de yodo. Consiste de una cadena helicoidal no ramificada
de unas 200 - 500 unidades de D -glucosa con enlaces 1,4--glicosdicos. La amilopectina
se hincha en agua caliente dando una pasta y toma un color pardo violceo con yodo.
Es tambin un polmero 1,4--D-glucosa que, como el glicgeno, est ramificado por
enlaces 1,6--glucosdicos aproximadamente cada 25 unidades de glucosa (8). Los
almidones de distinto origen difieren mucho en su ramificacin, el nmero de unidades
por cadena y los residuos fosfato e iones calcio y magnesio que los acompaan.
Hay tres tipos de descomposicin enzimtica de los glucanos: fosforlisis, hidrlisis y
transglicosilacin. La fosforlisis por la -1,4-glucanfosforilasa slo ocurre
intracelularmente. La transglicosilacin es la formacin de ciclodextrinas con 6-8
unidades de glucosa a partir del almidn, por accin de Bacillus macerans y otros (4). El
ataque extracelular del almidn es debido a la accin hidroltica de las amilasas, segn
se observa en el esquema de la figura 7.
La -amilasa ataca los enlaces 1,4--glicosdicos an en el centro de la cadena, por lo
que se la conoce como endoamilasa, produciendo glucosa, maltosa y oligmeros de 3 a
7 unidades. Est presente en plantas, animales y microorganismos. La viscosidad de la
solucin de almidn y el color de su reaccin con yodo se reducen rpidamente
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 9

durante la hidrlisis. Producen amilasas muchos hongos del suelo as como bacterias
de los gneros Bacillus, Pseudomonas, Streptomyces entre otras.
La -amilasa, presente en plantas y bacterias, tambin degrada los enlaces 1,4--
glucosdicos pero comienza su accin por el extremo libre no reductor del almidn,
liberando maltosa mientras contina el color frente al yodo. La hidrlisis se detiene en
los puntos de ramificacin de la amilopectina y el residuo se conoce como dextrina
lmite (6). La pululanasa o isoamilasa hidroliza los enlaces 1,6--glicosdicos quitando
las ramas de la amilopectina o las dextrinas. La maltasa hidroliza la maltosa a glucosa
(3). Si estas enzimas acompaan a las anteriores se logra una degradacin total del
almidn.
Las amilasas son inducibles, pero
su produccin depende del tipo de
almidn empleado. Las -amilasas
de Bacillus stearothermophilus y B.
licheniformis son termo estables as
como las excretadas por algunos
clostridios termfilos, los que
tambin excretan pululanasas (4).
La actividad amiloltica vara a
veces con el tipo de vegetacin, la
humedad y las caractersticas del
suelo. El almidn es degradado por
clostridios fijadores de nitrgeno en
los suelos anegados, a los que
recientemente se incorpor material
vegetal rico en polisacridos (3).

3.3.3. Degradacin de levanos


Los levanos (polifructosanos) son substancias de reserva producidas por algunas
plantas, por ejemplo la inulina de los tubrculos de dalia con enlaces -2,1 glicosdicos
(figura 8), pero otros levanos tienen uniones -2,6 glicosdicas. Los levanos constituyen
el 12-15% del peso seco de algunas pasturas y son degradados por numerosas bacterias,
actinomicetos y hongos (4). La inulinasa produce unidades de levulosa (fructosa).
Algunos Streptomyces tienen tambin 2,6-
fructosanasa que forma levanobiosa (fructobiosa) y
ciertos hongos una 2,1-fructosanasa que origina
oligmeros (3).

3.3.4. Degradacin de xilanos y otras


hemicelulosas
Las hemicelulosas consisten en polmeros de
pentosas (xilosa, arabinosa), hexosas (glucosa,
manosa, galactosa) o cidos urnicos (glucurnico,
galacturnico). Son substancias de soporte o de
almacenamiento en las plantas (4). La figura 9
representa las hemicelulosas en la pared vegetal.
El xilano es el polisacrido ms abundante
despus de la celulosa. La corteza de los rboles y
la paja contienen hasta 30% de xilano, la madera de
conferas 7 - 12% y la de rboles de hojas caducas
20 - 25%. La cadena consta de 30 - 100 unidades de
-D-xilopiranosa con enlaces 1,4 -glicosdicos.
10 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

Algunos xilanos tambin presentan arabinosa, glucosa, galactosa y glucuronato en


ramas laterales unidas al C3 de la xilosa. El xilano es degradado ms rpidamente que
la celulosa. La xilanasa que es constitutiva en algunos clostridios e inducible en otros
organismos, produce xilosa, xilobiosa y oligmeros de 2 a 6 unidades. Muchos
organismos excretan xilanasas, en los suelos neutros o alcalinos predominan Bacillus,
Sporocytophaga, Clostridium y otras bacterias pero en los cidos, los hongos (4). La
temperatura ptima para la descomposicin es 37C, y para los actinomicetos
termfilos entre 45 y 50C.
Los mananos constituyen el 11% del peso seco de la madera de algunas conferas. Son
hidrolizados por muchos organismos que tambin actan sobre galactomananos y
glucomananos. Los galactanos son degradados ms lentamente que otras
hemicelulosas y tienen enlaces -1,4 y -1,3 glicosdicos. Las galactanasas microbianas
producen galactosa, galactobiosa y galactotriosa. Algunos organismos producen varias
enzimas simultneamente, como Fusarium oxysporum que creciendo en tomate sintetiza
arabanasa, xilanasa, galactanasa y glucanasa. Las enzimas extracelulares pueden ser
adsorbidas por las arcillas, disminuyendo su actividad (3).
La degradacin de las hemicelulosas est determinada la disponibilidad de
nitrgeno como ocurre con la descomposicin de la celulosa. Las hemicelulosas de
plantas maduras son degradadas ms lentamente que las del tejido ms joven. Por otra
parte, al mismo tiempo que se degradan los polmeros vegetales, los microorganismos
sintetizan otros polisacridos como los glucanos y pentosanos de los mohos, los
mananos de las levaduras, los glucanos y levanos de las cpsulas bacterianas (1).

3.3.5. Degradacin de pectinas


Las pectinas son substancias intercelulares de los tejidos de plantas jvenes y
abundantes en las frutas. Estn constitudas por cadenas no ramificadas de cido D-
galacturnico con enlaces 1,4--glicosdicos, parcial o completamente esterificadas con
metanol (4), como se presenta en la figura 10. En las pectinas insolubles (protopectina)
las cadenas estn entrecruzadas por cationes Ca ++ y Mg++ unidos a los grupos
carboxilos (3).

La degradacin microbiolgica de las pectinas es llevada a cabo por esterasas y


despolimerasas. La pectinesterasa hidroliza los steres y libera metanol. La
poligalacturonasa hidroliza las uniones glucosdicas de los cidos poligalacturnicos
residuales (coloidales o solubles), produciendo monmeros y oligmeros del cido D-
galacturnico. La polimetilgalacturonasa hidroliza los enlaces glucosdicos de las
pectinas (1). Las enzimas que fragmentan las cadenas por transferencia de protones
generando desoxicidos (transeliminacin) se denominan pectinliasa o pectatoliasa
segn acten sobre pectinas o cidos pcticos. Alrededor del 1-10% de los
microorganismos del suelo hidrolizan las pectinas, estimulados por el substrato (3). La
fitopatogenicidad de algunos microorganismos (Erwinia, Botrytis, Fusarium) es debidad
a la capacidad de excretar "pectinasas". Los microorganismos que descomponen
pectinas intervienen en el enriado de lino y camo, liberando los haces de fibras de
celulosa del tejido vegetal. Los hongos intervienen en el proceso aerobio mientras en el
anaerobio intervienen bacterias butricas como Clostridium pectinovorum (4). Las
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 11

bacterias anaerbicas pectinolticas son ms abundantes en los suelos anegados y en los


abonados con estircol (1).

3.3.6.Degradacin de quitina
La quitina le sigue a la
celulosa en abundancia. Forma
parte del exoesqueleto de
artrpodos y de la pared celular
de hongos filamen -tosos. Est
constituda por unidades de N-
acetil-glucosamina con enlaces
-1,4-glicosdicos (6). La
degradacin por la quitinasa
produce poca N-acetil-
glucosamina y predominan los
oligmeros (quitobiosa,
quitotriosa). Los oligmeros son
convertidos en monmero por la
-N-acetil-glucosaminidasa. La
quitin-desacetilasa transforma la
quitina en quitosano y acetato
por hidrlisis de los grupos
acetamida (10). Un gran nmero
de bacterias y actinomicetos
pueden hidrolizar quitina. Entre los hongos con tal propiedad se encuentran Mucor y
algunos Aspergillus (4). La sntesis de quitinasas es inducida en las plantas por los
agentes patgenos. La figura 11 muestra fibrillas de quitina obtenidas de la pared
fngica.

3.3.7. Degradacin de lignina


El contenido en lignina del tejido leoso vara entre 18 y 30% del peso seco. Est
ubicada en la lmina secundaria de las paredes celulares y es el componente de las
plantas degradado ms lentamente. No es qumicamente uniforme y tiene una
estructura muy
compleja (3).
Los monmeros
son todos derivados
del fenilpropano,
principalmente
alcohol coniferilo.
La complejidad
resulta del gran
nmero de
diferentes enlaces
que unen a los
monmeros. Las
diferencias en la
composicin de la
ligninas se
manifiestan en el
contenido de
grupos metoxi: 21%
en rboles de hojas
12 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

caducas, 16% en abeto, 14% en gram neas (4). Las


unidades fenilpropano estn entrecruzadas por
mltiples enlaces ter y C-C, que son
extremadamente resistentes al ataque
enzimtico. La lignina es un producto final
inerte del metabolismo vegetal y solamente es
degradada por microorganismos (1).
Dos grupos de hongos se distinguen entre los
destructores de madera: los que causan la
podredumbre parda que degradan celulosa y
hemicelulosas dejando la lignina como residuo.
y los que provocan la podredumbre blanca que
degradan lignina. Entre estos ltimos se
encuentran Stereum, Phanerochaete, Pleurotus,
Ganoderma, Polyporus, Xylaria (3).
La degradacin de lignina ocurre en presencia
de oxgeno y glucosa. El sistema enzimtico
contiene peroxidasas que catalizan la ruptura
oxidativa de los enlaces -O-4 ter y los C-C de
la lignina y requieren H2 O2 proveniente de la
oxidacin por la glucosa-oxidasa. La formacin
de peroxidasas es promovida por la limitacin
de nitrgeno y la descomposicin de la lignina
parece tener como principal objetivo el acceso a los componentes nitrogenados de la
madera. Sobre los compuestos fenlicos de bajo peso molecular liberados actan luego
las fenoloxidasas (4). En la figura 12 se observa un esquema simplificado de la lignina,
mientras que la figura 13 muestra la velocidades de la descomposicin de algunos
componentes del mantillo.

3.3.8. Degradacin de lpidos


De 1,2 a 6,3% de la materia
orgnica del suelo se encuentra
como grasas, ceras y resinas,
aunque los valores pueden ser
mayores en suelos forestales y
turba. Los fosfolpidos
constituyen el 1-5% de los
compuestos fosforados del suelo
y son de origen microbiano. La
fraccin hidrfoba de las
gramneas es de unos 2% de la
materia seca, pero es ms
abundantes en ciertos
microorganismos que contienen
ms de 10%. Algunos de los
componentes de los lpidos son
fitotxicos, mientras que otros
(vitaminas) estimulan el
crecimiento de las plantas (5).
Por otra parte, ceras y
materiales similares son los
responsables de la condicin
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 13

hidrfuga de ciertas arenas. Numerosos microorganismos telricos, entre ellos


Aspergillus y Penicillium, sintetizan substancias lipdicas que contribuyen a la
estabilidad estructural del suelo (1). Los lodos de aguas residuales digeridas
anaerbicamente, que suelen agregarse al suelo, contienen 19,1-19,8% de grasas, aceites
y ceras (5).
Numerosos microorganismos del suelo producen lipasas, capaces de hidrolizar los
glicridos dando glicerol y cidos grasos, as como fosfolipasas. El catabolismo
posterior de los cidos grasos se lleva a cabo por una serie de -oxidaciones, pero en el
suelo esta degradacin es lenta y limitada. La figura 14 da un esquema de la hidrlisis
de un triacilglicrido.
Muchas levaduras de la filosfera degradan las ceras de la epidermis vegetal, tambin
mohos tales como Penicillium y Mucorales, y algunas bacterias (1).

3.3.9. Degradacin de protenas


Las protenas estn constitudas por
una o varias cadenas polipeptdicas
donde los -aminocidos estn unidos
por enlaces amida. Las protenas
conjugadas tienen adems otros
componentes: nucletidos, lpidos,
glcidos, cationes metlicos o grupo
hemo. Los catalizadores biolgicos
(enzimas) son tambin protenas. Antes
que las protenas puedan incorporarse a
las rutas catablicas deben
experimentar hidrlisis completa hasta
transformarse en aminocidos, ya que
las molculas proteicas intactas y la mayora de los pptidos no pueden atravesar la
membrana citoplasmtica, mientras que los aminocidos libres son absorbidos
fcilmente (6).
Las proteasas excretadas por los microorganismos producen aminocidos y
oligopptidos al hidrolizar de las uniones peptdicas. Los pptidos son hidrolizados
por las exo- y endo-peptidasas. Las exopeptidasas se dividen en dos grupos: las que
comienzan su accin por el enlace peptdico adyacente al grupo amino terminal y las
que lo hacen por el cercano al carboxilo terminal. Las otras hidrolizan los enlaces del
interior de la cadena y son muy especficas, como por ejemplo la accin hidroltica de la
tripsina usada en
la produccin de
peptonas, ocurre
solamente si el
aminocido que
aporta el grupo
carboxilo en la
unin peptdica
es lisina o
arginina (4). La
figura 15 muestra
la hidrlisis de la
unin peptdica.
Las protenas de
los organismos muertos son descompuestas por un gran nmero de hongos y bacterias.
Las bacterias termoflicas producen proteasas termoestables. Algunas proteasas
14 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

extracelulares actan como toxinas, mientras que ciertos polipptidos bacterianos son
antibiticos. La degradacin de protenas en el suelo va seguida de la formacin de
amonio por la posterior descomposicin de los aminocidos (6).

3.3.10. Degradacin de polinucletidos


Los nucletidos estn formados por una base nitrogenada derivada de la purina o la
pirimidina, una pentosa y cido fosfrico. Son los monmeros de los polinucletidos
donde estn unidos por puentes fosfodister, como se muestra en la figura 16. Los
cidos nucleicos son el 0,2-2,5% de los compuestos fosforados del suelo y su hidrlisis
da oligonucletidos y mononucletidos con baja relacin C/N (2). Los mononucletidos
a su vez son convertidos en nuclesidos (N-glicsidos de purinas o pirimidinas). stos
son despus hidrolizados en las bases nitrogenadas y pentosas. Luego en el suelo el
proceso continua con la amonificacin de las purinas y pirimidinas.
Las exonucleasas atacan solamente los extremos de las cadenas polinucleotdicas
mientras que las endonucleasas hidrolizan enlaces de cualquier punto de las mismas.
Las desoxi-ribonucleasas degradan el ADN y las ribonucleasas el ARN, aunque algunas
fosfo -diesterasas hudrolizan uniones de nuclotidos de ambos cidos nucleicos. Entre
los numerosos organismos que excretan nucleasas se encuentran algunos Clostridium
(4).

3.4. Metabolismo productor de energa


Para su crecimiento y multiplicacin, los micro-organismos llevan a cabo diversos
procesos metablicos, destinados a obtener energa y nuevo material celular. Los
microorganismos fotosintticos son capaces de utilizar la energa de la luz para
convertir el CO 2 , junto con el hidrgeno del H 2O (cianobacterias, algas) o el H2 S
(bacterias), en materia orgnica celular. Los autotrficos tambin fijan el CO2 pero con
una fuente qumica de energa. Los microorganismos heterotrficos necesitan
substratos orgnicos para desarrollarse.
Los
microorganismos
pueden dividirse,
de acuerdo con sus
necesidades
ambientales, en
tres grupos. Se
encuadran en el
primero los
aerbicos estrictos,
que nicamente
pueden respirar y
crecer en presencia
de oxgeno
atmosfrico. En el
segundo grupo se
hallan los
anaerbicos
estrictos, que no slo fermentan y crecen en ausencia de oxgeno libre, sino que
requieren su eliminacin, por serles perjudicial. En el tercer grupo estn los organismos
facultativos, capaces de crecer en presencia o en ausencia de oxgeno, que pueden
subdividirse en dos grupos segn puedan cambiar su metabolismo aerbico
(respiracin) en anaerbico (fermentacin) adaptndose al ambiente donde se hallan, o
bien son nicamente fermentadores que toleran el oxgeno (aerotolerantes) (6).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 15

Dentro de los aerbicos estrictos estn muchas


bacterias y casi todos los mohos y las actinobacterias.
Los anaerobios estrictos estn representados por
miembros del gnero bacteriano Clostridium, por
ejemplo C. pasteurianum que es un fijador de
nitrgeno. Las levaduras y las bacterias coliformes,
que pueden respirar o fermentar ciertos substratos,
son organismos facultativos. Las bacterias lcticas
pertenecen al grupo que obtiene su energa
exclusivamente de la fermentacin y no sufren lesin
por parte de una reducida presin parcial de oxgeno.
El metabolismo anaerbico es siempre menos
eficiente que la respiracin, ya que la fermentacin no
aprovecha toda la energa del substrato orgnico (por
ejemplo, un azcar) para la produccin del
combustible universal de la clula (el ATP) ni, por
tanto, para la sntesis de material celular. Las clulas
excretan el producto de degradacin que, a su vez,
podra ser oxidado ulteriormente a CO2 y H2O. Pero,
los productos de la fermentacin, tales como el etanol
liberado por levaduras, no pueden ser metabolizados,
en condiciones anaerbicas, por el organismo que los
produce. El crecimiento aerbico, por otra parte,
capacita a algunos organismos para oxidar
completamente una cierta fraccin del substrato y
extraer as la mxima energa para convertir el resto
del substrato en masa celular. Si el objetivo del cultivo
microbiano es aumentar la biomasa, por ejemplo en la
produccin de levadura de panadera, resulta una
ventaja obvia tener tener un crecimiento aerbico con
utilizacin completa del substrato por respiracin (13).

3.5.Respiracin
3.5.1. Degradacin de hexosas
Hay varias vas para convertir la glucosa a piruvato,
uno de los compuestos intermediarios ms importantes del metabolismo. Una es la va
de la fructosa-1,6-difosfato), esquematizada en la figura 17 . El balance es la formacin
de dos molculas de ATP (energa qumica por fosforilacin a nivel de substrato) y dos
de NADH2 (poder reductor),
por lo que constituye la
secuencia de reacciones ms
importante para los orga nismos
anaerbicos. Otra es la va
oxidativa de la pentosa-fosfato
que se muestra en la figura 18,
la cual adems provee ribosa-
fosfato para la sntesis de
nucletidos. El camino inverso
es la ruta ms importante en la
fijacin autotrfica de CO2 . La
va del ceto-desoxi-fosfo-
16 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

gluconato que se observa en un amplio grupo de bacterias, se detalla en la figura 19. La


oxidacin del piruvato se produce, por caminos distintos segn los organismos dando
acetil-CoA, que en el caso de los aerobios entra en ciclo del cido tricarboxlico (4).

3.5.2. Ciclo del cido tricarboxlico


Este ciclo, cuyo esquema se da en la figura 20, sirve no solamente para la oxidacin
terminal de los nutrientes sino tambin para la generacin de precursores de
biosntesis. Si algunos intermediarios se
derivan por otro camino, cesa de
funcionar este ciclo. Pero, entonces entra
en juego la secuencia de reacciones
anaplerticas para reaprovisionar los
intermediarios faltantes (6). El ciclo del
citrato es tambin la ruta final para la
oxidacin de las cadenas carbonadas de
los aminocidos despus de la
desaminacin (ver figura 14).

3.5.3. Cadena de transporte de


electrones
Es llamada tambin cadena
respiratoria. En los eucariotas las
enzimas de la respiracin estn en unos
orgnulos denominados mitocondrias
mientras que en los organismos
procariticos se encuentran en la
membrana citoplasmtica. Cada
molcula de NADH2 proveniente del
ciclo anterior se reoxida a travs de esta
cadena con la ganancia de 3 molculas
de ATP mientras que cada molcula de
FADH2 genera 2 de ATP.
La figura 21 representa la secuencia
del transporte de electrones en la membrana de algunas bacterias, desde la
flavoprotena hasta el O2 u otro aceptor terminal, mientras que los H + son bombeados
fuera. Cuando el oxgeno se reduce, requiere protones del citoplasma para completar la
reaccin, los que se originan por la disociacin del agua. El resultado neto es la
generacin de un
gradiente de pH y un
potencial
electroqumico a
travs de la
membrana, con la
parte interna cargada
negativamente, y la
externa con carga
positiva. Este estado
energizado de la
membrana se expresa
como fuerza motriz
de protones (6). La
energa puede ser
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 17

usada directamente en el transporte de iones, la rotacin de los flagelos o la produccin


de los enlaces fosfato del ATP a travs del sistema ATPasa (fosforilacin oxidativa)
anclado en la membrana. La respiracin provee 38 molculas de ATP por cada
molcula de glucosa oxidada.

3.6. Fermentaciones
Las rutas bioqumicas de la
fermentacin varan mucho. Por
ejemplo, las levaduras pueden
fermentar una molcula de un
monosacrido de seis carbonos,
como la glucosa o la fructosa,
produciendo dos molculas de etanol
y dos de CO2. Pero, para las
bacterias, se pueden agrupar esas
vas en dos tipos generales:
homofermentativos (un producto
principal) o heterofermentativos (dos
o ms productos). Los productos de
la fermentacin no pueden ser
metabolizados, en condiciones
anaerbicas, por el organismo que
los produce. En las fermentaciones el ATP se produce por fosforilacin a nivel de
substrato, pues se sintetiza durante el catabolismo de un compuesto y en pasos
enzimticos concretos, pero requiere que la fuente genere un intermediario de alta
energa (6).
3.6.1. Fermentaciones lcticas
Las lactobacterias llevan a cabo este tipo de fermentacin en presencia o ausencia de
aire, aunque prefieren concentraciones reducidas de oxgeno. En cambio las
enterobacterias slo producen cido lctico en condiciones anaerbicas. El ambiente
natural de lactobacterias es la leche y los lugares donde es procesada (Lactobacillus
delbrueckii var. bulgaricus, Lactococcus lactis), la superficie
de plantas intactas o podridas (Lactobacillus plantarum,
L. delbrueckii, Leuconostoc mesenteroides), el tracto
intestinal y las mucosas de animales y humanos
(Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecalis). Por tal
motivo suele encontrarse cultivos puros naturales,
como en algunos productos lcteos, material ensilado,
chucrut (14). Las bacterias homofermentativas (por
ejemplo Lactobacillus casei) producen lactato puro o casi
puro, metabolizando la glucosa por va de la fructosa-
difosfato y reduciendo el piruvato a lactato. Segn las
especies se forma D (-), L (+) o DL-lactato. Las bacterias
heterofermentativas (Lactobacillus brevis) degradan la
glucosa al comienzo por la va de las pentosas y luego
transforman el acetil-P en etanol o acetato y el piruvato
en lactato (6). La figura 23 muestra un esquema de la
fermentacin heterolctica.
La fermentacin lctica permite la conservacin de los
forrajes pues las lactobacterias cido-tolerantes
18 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

desarrollan en cultivo prcticamente puro en el


material ensilado, en especial si fu previamente
acidificado. Las lactobacterias son
imprescindibles en la industria lechera como
productores de cido en la coagulacin de la
casena para ciertos quesos, y aroma por la
formacin de diacetilo en algunas especies.
Tambin se emplean lactobacterias en la
produccin de salames pues la acidificacin
contribuye a la conservacin de estos embutidos
(4).

3.6.2. Fermentacin alcohlica


La levadura Saccharomyces cerevisiae y la
bacteria Sarcina ventriculi forman etanol va la
fructosa-difosfato y descarboxilacin del
piruvato. El rendimiento energtico es 2
molculas de ATP por cada molcula de glucosa
fermentada. La bacteria Zymomonas mobilis
metaboliza la glucosa por la ruta del ceto-desoxi-
fosfogluconato y descompone el piruvato en CO 2
y acetaldehdo, que luego es reducido a etanol
(6). Mientras las enzimas de la fermentacin son
constitutivas en la levadura y se encuentran en el citoplasma, los de la respiracin son
inducibles. La fermentacin con Saccharomyces spp. se emplea para la produccin de
bebidas alcohlicas y la produccin industrial de etanol mientras que la fermentacin
con Zymomonas se usa en slo en el ltimo caso (13).

3.6.3. Fermentaciones propinicas


La formacin de propionato, por las especies de Propionibacterium es utilizada en la
maduracin de quesos tipo suizo. El piruvato proveniente de la ruta de la fructosa-
difosfato o el lactato resultante de otras fermentaciones son reducidos mediante la va
de la metilmalonil-CoA (4) que se muestra en la figura 24. La produccin de propionato
debida a Clostridium propionicum y Bacteroides ruminicola ocurre por una ruta ms
simple, donde la lactil-CoA se reduce a propionil-CoA. Estas bacterias habitan el rumen
y el intestino de los rumiantes (6).

3.6.4. Fermentaciones frmicas


La fermentacin cida-mixta es
llevada a cabo por Escherichia coli
(bacteria facultativa del intestino) y
otras proteobacterias patgenas de
humanos y animales (por ejemplo
Salmonella spp.). produciendo
cidos orgnicos y el pH desciende
a 4,2, punto en el que la solucin de
rojo de metilo tiene color rojo
(figura 25). Se investiga la presencia
de los organismos con
caractersticas semejantes a E. coli
(coliformes) como indicadores de la
contaminacin fecal del agua.
La fermentacin butanodilica es
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 19

cumplida por bacterias que se


encuentran en el agua y el suelo (por
ejemplo Enterobacter aerogenes,
Bacillus cereus y Erwinia que es
patgena de plantas) con la
formacin 2,3-butanodiol como
principal producto (14). Un
intermediario es la acetona que da
positiva la reaccin de Voges-
Proskauer, til para detectar
algunos organismos con este tipo de fermentacin.

3.6.5. Fermentacin butrico -butanlica


Los Clostridium son bacterias esporuladas fermentativas pues solo crecen en
condiciones anaerbicas. La fermentacin butrico-butanlica comienza por la
conversin de los azcares en piruvato por la va de la fructosa-difosfato. El piruvato es
descarboxilado dando acetil-CoA y la transformacin de esta ltima da diversos
productos (4) como se observa en la figura 26. En las primeras fases los productos
predominantes son los cidos butrico y actico pero luego, al bajar el pH del medio,
comienzan a acumularse acetona y butanol que son neutros (6).

3.6.6. Fermentaciones acticas


Algunos clostridios (por ejmplo C. thermoaceticum) fermentan la glucosa por la va de
la fructosa-difosfato. Luego generan acetato por descarboxilacin del piruvato y la
conversin del CO2 e hidrgeno, producidos antes, en acetato.
Otras bacterias convierten los monosacridos en acetato como por ejemplo
Ruminococcus albus, y el hidrgeno producido es aprovechado por Vibrio succinogenes en
un cultivo mixto (4), como se presenta en la figura 27.

3.6.7. Fermentacin de aminocidos


Varios clostridios obtienen energa fermentando aminocidos (por ejemplo C.
sporogenes). Algunas cepas fermentan pares de aminocidos, donde uno acta como
dador de electrones y es oxidado, y el otro como aceptor de electrones y es reducido (6).

3.7. Oxidaciones incompletas


No todas las reacciones oxidativas catalizadas por microorganismos aerbicos
estrictos se llevan hasta el ltimo extremo. Por ejemplo la conversin de etanol en cido
actico (vinagre) por Acetobacter spp. Aunque estos suboxidadores obtienen energa en
forma de ATP a partir de las oxidaciones incompletas, generalmente no pueden obtener
molculas para su crecimiento a partir de dichas reacciones y, por consiguiente,
requieren para su desarrollo otros nutrientes suministrados por el medio (6).

3.8. Respiracin anaerbica


Es una variacin de la respiracin en la que los aceptores de electrones utilizados son
diferentes al oxgeno, e incluyen nitrato, in frrico, sulfato, carbonato y ciertos
compuestos orgnicos. La figura 28 muestra los contrates entre la respiracin aerbica y
la anaerbica. Los productos de la respiracin anaerbica son fcilmente detectados: las
burbujas de N2 , NO2 , CH4 (inflamable); el olor de H2 S; la formacin de xido de hierro
diamagntico (2).

3.8.1. Desnitrificacin
20 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

La desnitrificacin transitoria y
localizada en los suelos consiste en
la reduccin anaerbica del nitrato
a compuestos voltiles (N2 , N2 O,
NO). Es producida por bacterias
que respiran y solamente pueden
crecer anaerbicamente en
presencia de nitrato, por ejemplo
Pseudomonas fluorescens, Bacillus
licheniformis, Paracoccus denitrificans
y Thiobacillus denitrificans. Ocurre
con frecuencia en los suelos
anegados, especialmente cuando se
aplicaron juntos fertilizantes
orgnicos y nitrato (1). No se
observa este proceso en mohos ni
actinomicetos (2). La figura 29
expone la velocidad relativa de la
desnitrificacin segn la cantidad
de agua que ocupa los poros del
suelo y la figura 30 muestra un
esquema del ciclo del nitrgeno.
3.8.2. Reduccin a nitritos
Algunas bacterias facultativas
como Enterobacter y Escherichia,
pueden respirar reduciendo el
nitrato a nitrito, que se acumula en
el ambiente, pero no producen N2 .
Luego reducen el nitrito a amonio
por la va asimilatoria, si hay
deficiencia de NH 4 + en el medio (4).
La figura 22 muestra el proceso de
transporte de electrones en
Escherichia coli cuando usa nitrato
como aceptor de electrones.

3.8.3. Sulfatorreduccin
Es la transferencia de hidrgeno
al sulfato aceptor terminal de
electrones en la respiracin
anaerbica, reducindolo a H2 S. Este proceso,
llamado tambin reduccin desasimilatoria de
sulfatos, es cumplido por bacterias anaerbicas
obligadas tales como Desulfovibrio,
Desulfatomaculum. Los donantes de hidrgeno
son lactato, acetato y otros cidos grasos,
metanol, etanol y compuestos aromticos.
Los microorganismos reductores de sulfato son
responsables de la precipitacin de Fe++ y otros
cationes metlicos en aguas polutas, y la
corrosin de metales enterrados. Desulfuromonas
y algunas arqueobacterias termoflicas pueden
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 21

reducir el azufre elemental a H2 S (5). Por otra parte, casi todas las bacterias, as como los
hongos pueden reducir sulfatos para sintetizar aminocidos azufrados por la va de la
reduccin asimilatoria de sulfatos (5). La figura 31 presenta un esquema del ciclo del
azufre.

3.9. Bacterias autotrficas


Usan CO2 como fuente de carbono a travs del ciclo de la ribulosa-difosfato, excepto
las bacterias acetognicas y metanognicas. Obtienen energa y molculas reductoras
usando iones amonio, nitrito, sulfuro, tiosulfato, sulfito, ferroso; as como azufre
elemental, hidrgeno o monxido de carbono. Tienen los componentes del transporte
electrones y la fuerza motriz de protones como los hetertrofos (4). La figura 28 resume
los contrastes del metabolismo autotrfico frente al heterotrfico.

3.9.1. Metanognesis
El ecosistema donde ocurre la
metanognesis comprende
pantanos, arrozales, sedimentos
de lagos, estanques y estuarios,
digestores de aguas residuales y el
rumen. En tales ambientes
anaerbicos los substratos
orgnicos son fermentados a
acetato, CO2 e H2 . Estos productos
son utilizados por las
arqueobacterias formadoras de
metano entre las que se
encuentran Methanobacterium,
Methanococcus, Methanosarcina,
Methanospirillum (15). Como el CO2
es usado como un aceptor de
hidrgeno durante la generacin
de energa, el proceso se suele
llamar respiracin del carbonato. Algunas
bacterias metanognicas tambin pueden
convertir el CO en metano. Por otra parte, estas
arquibacterias son auttrofas y fijan CO2 por la
va acetil-CoA y piruvato, para la sntesis del
material celular (4). Ver 5.3.

3.9.2. Nitrificacin
En el curso de la degradacin de substancias
nitrogenadas se libera amonio. La conversin
del amonio a nitrito es llevada a cabo por las
bacterias nitritantes del suelo: Nitrosolobus,
Nitrosomonas, Nitrosospira. En el ambiente
marino se encuentra Nitrosococcus. No hay
bacterias que conviertan directamente el amonio
en nitrato. El nitrito es oxidado a nitrato por las
bacterias nitratantes Nitrobacter, Nitrococcus (en
el mar) y otras. Ambos pasos constituyen la
llamada nitrificacin del suelo (1). Estas bacterias
autctonas del suelo pueden ser cultivadas en
22 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

solucin mineral con un tiempo de generacin entre 10 y 20 horas. Nitrobacter


winogradskyi puede asimilar acetato (4). La figura 32 muestra las membranas
intracitoplasmicas de una bacteria nitrificante.
Los iones amonio son oxidados
rpidamente en los suelos bien aireados.
La conversin de este catin al anin
nitrito o nitrato, trae aparejado una
acidificacin del suelo con un incremento
en la solubilizacin de minerales (potasio,
calcio, magnesio y fosfatos). Por tal
motivo los microorganismos nitrificantes
fueron vistos como un factor significativo
de la fertilidad del suelo (3). El amonio es
mejor retenido que el nitrato,
especialmente por adsorcin sobre
arcillas y unin ms o menos firme a los
componentes del humus. El nitrato, por
el contrario, es fcilmente eliminado por
el agua (4). El nitrato se acumula en las
capas freticas y puede afectar la salud de
los bebs si la concentracin en el agua
potable supera los 50 mg por litro, pues
las bacterias del intestino delgado lo reducen y el nitrito que pasa a la sangre se une
irreversiblemente a la hemoglobina (16).
El proceso de nitrificacin ocurre entre pH 7 y 8, debido a que el amonio libre (en
suelos alcalinos) y el cido nitroso (en suelos cidos) son txicos para Nitrobacter (1). En
suelos anegados que fueron fertilizados con sales de amonio, Nitrosomonas y
Nitrosovibrio pueden llevar a cabo una desnitrificacin. Otras cualidades de las bacterias
nitrificantes son su capacidad para oxidar metano, metanol, CO, etileno, propileno,
ciclohexano, alcohol benclico y fenol. En cultivo puro la bacteria heterotrfica
Arthrobacter es capaz de formar nitrito a partir de substancias nitrogenadas. Tambin
algunos hongos pueden oxidar el nitrgeno amnico o el amonio hasta nitrato. Esta
nitrificacin hetertrofa no est acoplada al crecimiento y produccin de biomasa, y
slo es de importancia en suelos cidos, por ejemplo bosques de pinos (4).

3.9.3. Sulfooxidacin
Los Thiobacillus son unas bacterias capaces de obtener energa por la oxidacin de
compuestos de azufre (sulfuro, azufre, tiosulfato) hasta sulfatos. La mayora son
auttrofos y dependen de la fijacin de CO 2 como T. thiooxidans, T. denitrificans (1). Entre
los hetertrofos se encuentran por ejemplo T. novellus y Sulfolobus acidocaldarius. ste
ltimo es una arqueobacteria termoflica de las aguas termales azufradas. T. thiooxidans
es un organismo aerobio que produce cido sulfrico y tolera una solucin 1N del
mismo. El agregado de azufre permite neutralizar suelos calizos y reducir la incidencia
de algunos patgenos vegetales debido a la acidificacin provocada por los
sulfooxidantes del suelo. T. denitrificans puede reducir nitratos anaerbicamente pero
no lleva a cabo una reduccin asimilatoria y necesita la presencia de sales de amonio en
el medio (3). Las bacterias filamentosas Beggiatoa y otras pueden oxidar sulfuros a
azufre elemental que se acumula en la clula. Algunas especies de Beggiatoa son
organismos heterotrficos (1).
3.9.4. Ferrooxidacin
Las siderobacterias (por ejemplo Gallionella ferruginea y Leptothrix ochracea) pueden
oxidar los iones ferrosos a frricos, y tambin Thiobacillus ferrooxidans. La vaina de la
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 23

bacteria filamentosa Leptothrix est recubierta de sales frricas. Gallionella excreta un


mucus que se impregna de hidrxido frrico formando una especie de pednculo (1).

3.10. Biosntesis
En el metabolismo normal, todos los compuestos que necesita la clula se sintetizan
en la cantidad justa. Este control se realiza por una serie de reacciones reguladoras
estrictas que detienen la formacin de productos intermedios y finales de una reaccin
metablica, cuando un compuesto dado alcanza una determinada concentracin. Sin
embargo, existen mutantes en los que el mecanismo de regulacin es tan defectuoso
que hay una sobreproduccin de algunos metabolitos y los excretan al medio, lo que es
aprovechado en la produccin industrial (13).

3.10.1. Sntesis de protenas

Casi todos los organismos estn


capacitados para convertir el nitrgeno
inorgnico en protenas y cidos nucleicos.
El N puede asimilarse en forma de iones
amonio y por algunas especies en forma de
iones nitrato. Ningn moho o ni levadura
fijan nitrgeno gaseoso como lo hacen
algunas bacterias, por ejemplo,
Azotobacter que vive libre en el suelo y
Rhizobium que crece como simbionte en los
ndulos de las races de leguminosas (14).
La mayora de los microoorganismos son
capaces de sintetizar todos los aminocidos
requeridos para sntesis de protenas. El
grupo amino es introducido por aminacin
directa o por transaminacin. La
asimilacin del nitrgeno molecular, as
como la de nitrato y nitrito implica una
reduccin a amonio antes de su
incorporacin al compuesto orgnico (4). La
figura 33 muestra las rutas ms
importantes de incorporacin de nitrgeno
para formar los aminocidos y la 34 los
caminos de sntesis de los aminocidos
La informacin contenida en el ADN no es transferida directamente durante la sntesis
de protenas que ocurre en los ribosomas. El intermediario es el ARN mensajero (ARN-
m) monocatenario sintetizado sobre una sola cadena del ADN efectuando la
24 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

transcripcin de la informacin. Los


aminocidos son reunidos en una cadena
polipeptdica segn la secuencia determinada
por el ARN-m dura nte la traduccin que implica
la participacin del ARN de transferencia de los
aminocidos (ARN-t), el ribosoma, varias
enzimas y ATP. La figura 35 muestra un
esquema de la biosntesis de las protenas en
bacterias.

3.10.2. Fijacin de N 2 (ver 2.9)


La expresin de la nitrogenasa en los
bacteroides se modifica por diversos factores
aportados por la planta. Una vez establecida la
simbiosis, la enzima nitrogenasa se inhibe en
presencia de nitrgeno combinado y cesa
cuando comienza el desarrollo de las semillas en
la planta hospedadora (senescencia de los
ndulos). Otros factores que afectan la fijacin
son la presencia de hidrogenasa (que aumenta el
rendimiento de la misma) y circunstancias ambientales como la temperatura (17). En la
figura 36 se muestra un esquema de la actividad metablica en el ndulo. La capacidad
para fijar nitrgeno molecular se observa en muchos organismos procariticos de vida
libre.
La reaccin qumica responsable del proceso de fijacin consiste en la transferencia de
seis electrones al N2 para dar NH4 + con el aporte de energa en forma de ATP. La
reaccin debe estar acoplada a la fermentacin o a la respiracin de azcares u otros
compuestos energticos, o bien a la fotofosforilacin del ADP, para que transcurra
espontneamente. Los electrones son provistos a travs de ferredoxina y flavodoxina.
El sistema nitrogenasa est constitudo por dos enzimas: la dinitrogenasa reductasa o
componente II y la nitrogenasa propiamente dicha o componente I. La dinotrogenasa
reductasa tiene dos subunidades idnticas y el grupo prosttico es un centro
sulfofrrico. El componente I es un tetrmero con dos subunidades alfa y dos beta, que
contienen tomos de hierro y molibdeno (4).

Algunas bacterias no-nodulantes capaces de fijar nitrgeno molecular (6)


aerbicos facultativos anaerbicos fototrficos
Azotobacter Klebsiella Desulfovibrio Chromatium
Azomonas Bacillus polymyxa Desulfotomaculum Rhodospirillum
Alcaligenes Methanobacterium Rhodobacter
Xanthobacter Methanosarcina Heliobacter
Beijerinckia Clostridium Chlorobium
Derxia Cianobacterias
Azospirillum Anabaena
Nostoc

En algunas bacterias fijadoras de vida libre la nitrogenasa contiene vanadio en lugar


de molibdeno. Adems de reducir el nitrgeno molecular, la nitrogenasa puede reducir
los H + a H 2 y tambin otros compuestos como se observa en la figura 37. Casi todas las
bacterias fijadoras tienen, unida a la membrana, una hidrogenasa (con nquel en su
grupo prosttico) como proteccin del sistema nitrogenasa, que transfiere electrones
desde el H2 al O2 difundido hacia adentro de la clula (6). Dada la rpida inactivacin
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 25

de la nitrogenasa en presencia de oxgeno, los microorganismos fijadores has


desarrollado diversas estrategias para evitarla: una alta tasa respiratoria, la formacin
de estructuras protectoras, la compatimentacin celular o un crecimiento en
condiciones anaerbicas o microaeroflicas (17).
Las cianobacterias filamentosas son tolerantes al oxgeno
ambiental debido a que la actividad nitrogenasa se localiza
generalmente en una clula especial, llamada heterocisto.
Los heterocistos poseen una pared poco permeable al
oxgeno y pueden generar ATP por fotofosforilacin cclica
y fosforilacin oxidativa, con lo cual se eliminan las trazas
de O2 . El poder reductor necesario para la fijacin proviene
de las otras clulas que tienen los dos fotosistemas (6). En la
mayora de los microorganismos fijadores de N2 de vida
libre, el amonio producido es asimilado para formar
glutamina (4).

3.10.3. Sntesis de
otros compuestos
Los nucletidos de
purina y pirimidina
son las unidades
para la sntesis de los
cidos nucleicos.
Tambin forman
parte de algunas
coenzimas. La parte
glicosdica deriva de
la ribosa-5-fosfato cuya reduccin a desoxirribosa ocurre a nivel del nucletido (6). La
figura 38 muestra los precursores de purinas y pirimidinas.
Entre los lpidos bacterianos predominan los cidos grasos saturados o
monoinsaturados, los triglicridos y esteroides son raros. Los ms importantes son los
lpidos complejos donde
un grupo OH del glicerol
est esterificado con
fosfato o un azcar. El
grupo fosfato a su vez
est esterificado con
serina, etanolamina o
glicerol. La formacin de
los cidos grasos de
cadena larga implica la
condensacin, en pasos
sucesivos, de los grupos
acetilo al butiril-ACP,
alargando cada vez la
cadena en dos carbonos
(6) como se muestra en la
figura 39.
Cuando las bacterias
crecen sobre lactato,
piruvato, acetato u otro
26 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

compuesto, se desarrollan rutas metablicas


adicionales (reacciones anaplerticas) para
mantener funcionando el ciclo de los cidos
tricarboxlicos (figura 20) y proveer
molculas intermediarias para la sntesis de
los azcares (6). La figura 40 muestra un
esquema de la biosntesis de glcidos.
Muchas bacterias autotrficas y
fototrficas, as como las cianobacterias y
las plantas, fijan CO2 como nica fuente de
carbono a travs del ciclo de la ribulosa-
difosfato (figura 41). Pero las metanognicas
y acetognicas, que tambin son
autotrficas, lo hacen por la va reductora
del acetil-CoA, mientras que las bacterias
verdes del azufre fijan CO 2 por el camino
reductor en el ciclo del citrato (4) como se
muestra en el cuadro de la pgina siguiente.
La actividad de los pigmentos en la
fotosntesis de las eubacterias no libera
oxgeno como ocurre con las cianobacterias
y las plantas. Hay dos tipos de bacterias de
color prpura, rojo o pardo porque contienen carotenoides, uno comprende a las
anaerbicas (por ejemplo Chromatium dependiente del
azufre y Rhodospirillum no dependiente) y otro a las
aerbicas (por ejemplo Erythromonas ). En cuanto a las
verdes, algunas, por ejemplo Chlorobium, utilizan H2 S
como dador de electrones y otras, por ejemplo
Chloroflexus, no. Otras bacterias fototrficas
anaerbicas y esporuladas, frecuentes en suelos
tropicales anegados, estn reunidas en el gnero
Helicobacterium. Cualquiera sea el mecanismo de
captacin de la luz y transporte de electrones, se
genera una fuerza motriz de protones que permite
sintezar ATP (fotofosforilacin) (18). La figura 28
resume los contrastes del metabolismo autotrfico
frente al fototrfico y la figura 42 muestra el transporte
de electrones en algunas bacterias prpura.
Los metabolitos secundarios son compuestos no
requeridos para la biosntesis celular. Estos productos
son sintetizados por algunos microorganismos,
generalmente en las ltimas fases del ciclo de
crecimiento. Los ejemplos ms conocidos son los
antibiticos, otros son las micotoxinas. Los metabolitos
secundarios no desempean un papel directo en el
metabolismo energtico ni en el crecimiento del
organismo, sino que contribuyen a la supervivencia
del organismo al inhibir la accin de competidores que
pudieran ocupar el mismo nicho ecolgico (14). Ver
6.1.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 27

Fijacin autotrfica del CO2 (4)


v Va reductora del acetil-CoA
Bacterias fermentadoras homoacetognicas
Clostridium thermoaceticum
Acetobacter woodii
Sporomusa sp
La mayora de las bacterias reductoras del sulfato
Desulfobacterium autotrophicum
Desulfovibrio baarsii
Bacterias metanognicas
Methanobacterium thermoautotrophicum
Methanosarcina barkeri
v Ciclo reductor del cido tricarboxlico
Bacterias verde del azufre
Chlorobium limicola
Bacterias termoflicasdel hidrgeno
Hydrogenobacter thermphilus
Algunas bacterias reductoras del sulfato
Desulfobacter hydrogenophilus
v Ciclo de la ribulosa difosfato
Bacterias fototrficas anoxignicas
Chromatium vinosum
Rhodospirillum rubrum
Bacterias quimioautotrficas
nitrificantes
oxidantes del azufre
bacterias del hidrgeno y el CO
oxidantes del hierro
Organismos fototrficos oxignicos
Cianobacterias
Algas y plantas
28 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3

Referencias
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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4 1

4. Estructuras de los hongos


4.1. Somticas
Micelio es el conjunto de
filamentos y un trozo del mismo
se denomina hifa. Las hifas
pueden presentar septos y
entonces el micelio est
tabicado. Septos primarios son
los formados cuando hay
divisin nuclear y adventicios
los otros. Si los tabiques estn
ausentes se habla de micelio
continuo. Los mohos son
micromicetos filamentosos.
Cuando el hongo es una clula
aislada se dice unicelular o
levadura . Los cortos filamentos
compuestos por las clulas que
brotan de una levadura
constituyen el pseudomicelio.
Plectnquima es un conjunto
de hifas entrelazadas que se
asemejan a un tejido. Se dice prosnquima si las hifas pueden ser reconocidas y
pseudoparnquima cuando han perdido su individualidad. Esclerocio es un
plectnquima generalmente macroscpico que puede permanecer en vida latente.
Rizomorfa es un cordn grueso donde el conjunto de las hifas fusionadas ha tomado
el aspecto de raz. Rizoides son las hifas de succin, como raicillas, que penetran en el
substrato. Haustorio es la hifa de succin del hongo parsito dentro de la clula del
hospedador. Apresorios son unas hifas
achatadas que se adhieren al substrato o al
hospedador como sostn, especialmente en
el comienzo de la infeccin.

4.2. Reproductoras
Anamorfo es el hongo con multiplicacin
asexuada y teleomorfo es el mismo con
reproduccin sexuada. Se les asigna
distinto gnero y especie. Holomorfo
indica el ciclo de vida total.
Esporas son los elementos de
perpetuacin de la especie. De acuerdo a la
morfologa reciben distinto nombre:
alantospora con forma de banana,
aleuriospora con base plana, dictiospora
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4

con septos longitudinales y


transversales, didimospora con
un tabique, equinulada como
un erizo, escolescospora como
un gusano, estaurospora como
una estrella, feospora de color
obscuro, fragmospora con
tabiques transversales,
fusiforme como un huso,
helicospora como una espiral,
hialospora de color claro y
translcido, planospora mvil,
verrucosa con verrugas,
zoospora con flagelos. Las
balistosporas son proyectados
violentamente una vez
maduras. Las hipnosporas son
aqullas capaces de permanecer con vida latente por largo tiempo.
Las esporas pueden ser de origen asexuado (mitosporas) o sexuado (meiosporas), y
por su ubicacin relativa internas o externas. Las mitosporas se originan en las
estructuras anamrficas y las meiosporas en las teleomrficas.

4..3. Anamrficas
Artrosporas o artroconidios son esporas desarrolladas en una hifa terminal que al
madurar se separan. En algunos hongos se forman artrosporas separadas por una zona
libre de citoplasma (disyuntor) cuya pared se rompe liberando las entosporas o
clamido-artrosporas. Clamidospora o clamidoconidio es una hipnospora o clula de
resistencia, terminal o interh ifal, con pared gruesa y substancias de reserva.
Blastosporas o blastoconidios son las esporas que se originan de una parte de una
clula somtica, una hifa, un conidiforo u otra espora, y se desarrollan antes de la
formacin del septo que lo separa de la
clula de origen.
Conidios o conidiosporas son las esporas
asexuadas externas. Si estn implantadas
directamente sobre la hifa se llaman ssiles.
La parte del micelio que origina y sostiene a
las esporas se denomina esporforo y si se
trata de conidios se dice conidiforo. Filide
es la clula conidigena que desde un
extremo origina por brotacin y sin
aumentar su longitud, los fialoconidios o
fialosporas. La pared de la filide suele
extenderse en el pice formando un collarn.
Anlide es una clula conidigena con el
pice ancho y cicatrices en anillo, que se
alarga con la formacin de cada espora. Los
conidiforos pueden ser simples o
ramificados y a veces estn agrupados en un
conidioma. En Penicillium cada nivel de
ramificaciones recibe distinto nombre, se
llama mtulas a las que sostienen a las
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4 3

filides productoras de esporas.


En Aspergillus las filides o las
mtulas estn implantadas
sobre una vescula o dilatacin
del esporforo.
Los conidios nacen de los
conidiforos aisladamente o
quedan reunidos, ya sea en una
cabezuela mucosa o en cadenas.
stas se forman por sucesin
baspeta cuando todos las
esporas surgen de la clula
conidigena o basfuga si es
por brotacin de la espora
anterior. A veces despus que se
forma un conidio, el conidiforo
se alarga lateralmente y origina
el segundo conidio. El proceso
contina y las esporas quedan
en zig-zag (proliferacin
simpodial). En algunos hongos
surgen, simultneamente o no,
varios conidios en diferentes puntos de la misma clula conidigena (brotacin
mltiple).
Los conidiforos suelen estar reunidos en un haz llamado coremio o sobre un
conjunto de hifas entrelazadas constituyendo un conidioma, ya sea un esporodoquio
(almohadilla de filides con las esporas expuestas) o una acrvula (estructura chata y
cubierta al principio por el tejido del hospedador donde los esporforos estn en
empalizada). Funculo es una cuerda de hifas de las cuales surgen, a intervalos, los
conidiforos. Picnidio es un conidioma globoso o en forma de pera, cuya pared
plectenquimatosa est recubierta internamente por las clulas conidigenas y est
abierto por un ostolo. Las esporas originadas se llaman picnidiosporas. Tambin la
cavidad picnidial puede estar encerrada en una estructura somtica compacta
denominada estroma.
Esporangio es una estructura globosa con una membrana peridial simple,
generalmente en el extremo de un esporangiforo, que contiene innumerables
esporangiosporas. El pice dilatado del esporangiforo se llama columela. Cuando el
esporangio tiene pocas esporas se denomina esporangiolo. Los merosporangios son
cilndricos, contienen pocas esporas y estn reunidos sobre la columela o los extremos
de las ramas del
esporangiforo; si son
monosporados suelen ser
considerados como conidios.
Los zoosporangios de los
hongos acuticos o parsitos
contienen zoosporas mviles.
Conidiosporangio es el
zoosporangio inmaduro
liberado por algunos hongos.
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4

4.4. Teleomrficas
Gametas son las clulas
diferenciadas que se fusionan y
gametangios las estructuras que las
producen. Homotlicos son los
hongos que forman los gametangios
de distinta polaridad en el mismo
micelio. Cuando cada micelio da slo
gametangios de la misma polaridad,
es necesario enfrentar dos micelios
distintos del mismo hongo
heterotlico para originar las esporas sexuadas. En muchos macromicetos se produce la
somatogamia o fusin de clulas no diferenciadas que originan un micelio dicaritico,
a veces con una conexin hifal a manera de puente (fbula) entre cada clula.
Las oosporas son hipnosporas sexuadas originadas por heterogamia. La estructura
femenina u oogonio produce unos elementos grandes inmviles u oosferas que en
algunos hongos se fusionan con los anterozoides (zoosporas) producidos en la
estructura masculina o anteridio, y en otros se ponen en contacto con el anteridio por
medio de los tubos de fertilizacin.
Las zigosporas son hipnosporas sexuados formados por isogamia. La hifa emite un
mameln en el que se diferencian dos partes: suspensor y gametangio. Los
gametangios se fusionan originando la zigospora que suele estar rodeada por hifas
protectoras nacidas de los suspensores.
Ascosporas son las esporas sexuadas internas que se originan en un nmero limitado
(generalmente 4 u 8) dentro de una clula llamada asco. En las levaduras se fusionan
los citoplasmas de dos clulas de polaridad distinta e inmediatamente o mucho
despus de la cariogamia ocurre la meiosis formndose las ascosporas dentro del asco
libre. En los hongos filamentosos se producen gametangios (anteridio y ascogonio), en
general morfolgicamente distintos, y los ncleos pasan a travs del poro formado en
el punto de contacto o de un tubo receptivo llamado tricogino. En algunas especies
heterotlicas los espermacios, microconidios incapaces de germinar, cumplen la
funcin de gametas masculinas. Despus de la fecundacin nacen hifas ascgenas
binucleadas cuyas clulas terminales, en forma de cayado, se convierten en ascos.
Las hifas somticas
vecinas a los elementos
sexuales suelen formar un
plectnquima originando
un ascoma que si est
cerrado y es esfrico se
llama cleistotecio. Cuando
tiene las hifas frtiles
(himenio) estratificadas y
generalmente una forma
de pera, poseyendo en la
madurez un poro u ostolo
por donde salen las
ascosporas, se denomina
peritecio. Si el
plectnquima tiene forma
de copa con el himenio
expuesto se habla de
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4 5

apotecio. El ascostroma es una estructura con


cavidades o lculos que contienen ascos.
Los ascos tienen distinta forma segn las
especies, pueden ser ssiles o pedicelados,
estar organizados en un fascculo comn o
nacer independientemente. Con frecuencia
hay entre los ascos hifas estriles alargadas
llamadas parafises. En el ostolo suele haber
hifas cortas como pelos, las perifises.
Algunos ascomas tienen hifas ornamentales.
La liberacin de los ascos puede ser explosiva
o no. En algunos ascos se abre un oprculo en
el momento de liberar las esporas. Los ascos
bitunicados tienen dos paredes y la externa
se rompe, dejando expandirse la interna,
antes de la descarga de las ascosporas.

Basidiosporas son las esporas sexuadas


externas que se originan en el basidio.
Este es una clula hifal binucleada que
sufre cambios morfolgicos y se llama
probasidio al estado o parte de la misma
donde se produce la cariogamia. Se
denomina metabasidio a la parte o estado
en el cual ocurre la meiosis y forma 4 (a
veces 2) tubos pequeos o esterigmas en
cada uno de los cuales se forma una
basidiospora. Hay dos tipos de
metabasidios. El holobasidio es cilndrico
o con aspecto de clava y en algunos
hongos tiene forma de tenedor. Los
fragmobasidios estn divididos general-
mente en 4 clulas por septos transversales o longitudinales. En muchos hongos las
hifas se agregan para formar un basidioma macroscpico y en aqullos con el himenio
expuesto, las basidiosporas
estn sobre unas laminillas
radiales o tubos o espinas
ubicados generalmente en el
envs.
Algunos basidiomas son
como una sombrilla
extendida (pleo) sostenida
por un pie que a veces tiene
un anillo o resto de una
membrana que una al pleo
con el pie. Otras veces hay en
la base una volva o resto de
un velo que envolva a todo
el basidioma joven. Hay
hongos cuyos basidiomas se
asemejan a un abanico, en otros son cilndricos, esfricos o coralinos. En el basidioma
6 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4

cerrado el peridio envuelve a la


gleba frtil y se rompe cuando las
esporas estn maduras.
En las royas y carbones el
probasidio es una espora de pared
muy gruesa llamada teliospora o
teleutospora, que germina
formando un tubo o metabasidio
que dar origen a las
basidiosporas. En el micelio
uninucleado de algunas royas se
forma el espermogonio o picnio
que da gametas llamadas
espermacios o picnosporas y lleva
las hifas receptivas en la parte
exterior, pero no hay autogamia.
Las clulas binucleadas formadas
como resultado de la
espermatizacin constituyen el
estrato basal del ecidio y
comienzan a dividirse
produciendo cadenas de
ecidiosporas. Por germinacin de
una ecidiospora surge un micelio
binucleado que origina el
uredosoro con las uredosporas
generalmente de largos pedicelos.
stos al germinar dan otra vez un
micelio dicaritico que puede
formar nuevas uredosporas o bien
teleutosporas con clulas
binucleadas y paredes gruesas en
el teliosoro o teleutosoro.
En los carbones el micelio
binucleado se forma por fusin de
dos clulas compatibles de diverso
tipo y constituye un soro de
teleutosporas o ustilosporas. Cada una de stas al germinar se convierte en un
metabasidio sin esterigmas que origina las basidiosporas o esporidios por brotacin.

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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 1

5. Rumen y biogas
La combinacin del reciclado de residuos animales con el cultivo de abonos verdes
pueden proporcionar el nitrgeno necesario para la tierra agrcola. El reciclado puede
hacerse mediante digestin anaerbica, pues el contenido relativo de nitrgeno es
mayor en el estircol digerido que en el fresco. El lodo remanente en el digestor es una
alternativa para mejorar los suelos hortcolas (1). Adems este proceso permite obtener
metano, un combustible gaseoso. La metanognesis ocurre naturalmente en el rumen
de los herbvoros.
El aumento del inters popular para contrarrestar la polucin ambiental hace de la
digestin anaerbica el medio conveniente para tratar tanto los efluentes lquidos como
los desechos slidos, adems de constituir una fuente alternativa de energa.

5.1. Metanognesis
El dixido de carbono es comn en la naturaleza y es un producto importante del
metabolismo energtico de los organismos quimioorganotrficos. Los procariotas
reductores de CO2 ms importantes son los metangenos, un grupo de arqueobacterias
anaerbicas estrictas que emplean generalmente el H2 como donante de electrones (2) .
Hay por lo menos diez substratos que se convierten en metano por la accin de uno u
otro metangeno, todos los cuales liberan energa adecuada para la sntesis de ATP,
incluyendo formiato, acetato, metanol, metilmercaptano y metilamina (3). Se los divide
en tres clases:

Substratos del tipo CO2


4 H2 + CO 2 CH4 + 2 H2 O
4 HCOO- + 4 H + CH4 + 3 CO2 + 2 H 2 O
4 CO + 2 H 2 O CH4 + 3 CO2
Sustratos con grupo metilo
4 CH 3 OH 3CH4 + CO2 + 2 H 2 O
CH3 OH + H 2 CH4 + H2 O
4 CH 3 NH 3 Cl + 2 H2 O 3 CH4 + CO2 +4 NH4 Cl
Substrato de acetotrficas
CH3 COO - + H2 O CH4 + HCO 3 -

La conversin de acetato a metano aparece como un proces o ecolgico muy


importante en digestores de residuos y en medios anxicos de agua dulce, donde no
hay una competencia excesiva por el acetato con otras bacterias. A pesar de que la
produccin de metano est muy extendida, son pocos los compuestos de carbono que
sirven como precursores directos de la metanognesis. Por lo tanto, es un proceso que
depende de la produccin de esos compuestos por otros organismos, a partir de la
materia orgnica compleja (2) .
En muchos ambientes anxicos los precursores inmediatos del metano son el H2 y el
CO2 que se generan por las actividades de los organismos fermentadores. En el proceso
general de produccin de metano a partir de la fermentacin de un polisacrido, como
la celulosa, pueden intervenir hasta cinco grupos fisiolgicos de procariotas (3) . Las
bacterias celulolticas rompen la molcula de celulosa, de peso molecular elevado, en
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5

celobiosa y glucosa libre. Por accin de los fermentadores primarios, la glucosa origina
cidos orgnicos, alcoholes, H2 y CO2 . Todo el hidrgeno producido es consumido
inmediatamente por las bacterias metanognicas, las acetognicas o las reductoras de
sulfato si ste se halla en alta concentracin. Adems el acetato puede ser convertido en
metano por otros metangenos (2) .

Etapas de la digestin anaerbica


Hidrlisis de los polmeros complejos
Acidognesis por fermentacin de los monmeros produciendo acetato,
propionato, butirato, succinato, alcoholes, H2 y CO2
Acetognesis por fermentacin secundaria generando acetato, H2 , CO2
Metanognesis a partir de H2 , CO2 , acetato

Los organismos clave en la conversin de compuestos orgnicos complejos a metano


son los fermentadores secundarios, especialmente las bacterias oxidantes de cidos
grasos o alcoholes que producen H2 ,. pues utilizan estos compuestos como fuente de
energa en cultivos mixtos con un consumidor de H2 a travs de una relacin sintrfica
(sintrofia = comiendo juntos). La energa libre asociada a las conversiones de los cidos
grasos es positiva, pero si la concentracin de H2 se mantiene muy baja debido al
consumo constante por los metangenos pasa a tener signo negativo lo que determina
su factibilidad. En la mayora de los ecosistemas anxicos, la acetognesis limita el
proceso global porque la velocidad de crecimiento de los microorganismos
intervinientes es generalmente muy lenta (3) .
Los metangenos estn muy extendidos en la tierra a pesar de su metabolismo
especializado. Aunque la produccin de metano se produce en gran cantidad en los
ambientes claramente anaerbicos como pantanos, zonas encharcadas o rumen, el
proceso tambin se lleva a cabo en lugares como los suelos de bosques o praderas que
podran ser considerados aerobios, debido a la formacin de microambientes anxicos
en el interior de las partculas de suelo (4).
La magnitud de la produccin de metano por las arqueobacterias es superior a la
obtenida anualmente de los pozos de gas natural. Las principales fuentes son los
eructos de los rumiantes y el gas liberado en las zonas pantanosas. Tambin se lleva a
cabo la metanognesis en el intestino de los vertebrados y de los insectos que comen
madera como las termitas. Se han encontrado metangenos viviendo como
endosimbiontes de amebas y flagelados de vida libre acutica o albergados en el tubo
digestivo de invertebrados (3) .
La metanognesis se observa con ms frecuencia en los ambientes terrestres y las
aguas continentales que en el mar, debido a las proporciones ms bien altas de sulfato
presentes en aguas y sedimentos marinos donde las bacterias reductoras de sulfato
compiten con las poblaciones metanognicas por el acetato y el H2 disponibles (4). En el
ocano los principales precursores de metano son las metilaminas apenas utilizadas por
los reductores de sulfato, como la trimetilamina que es un producto importante de
excrecin en los animales marinos (3) .

5.2. Arqueobacterias metanognicas


Se clasifica a las metanobacterias en siete grupos principales que comprenden un total
de 17 gneros. Hay bacilos cortos y largos, cocos con variada ordenacin, clulas en
forma de placas y metangenos filamentosos. Unos son Gram positivos, otros Gram
negativos (5) .
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 3

Cuando los metangenos crecen de forma autotrfica, el CO2 es la principal fuente de


carbono, sin embargo el crecimiento de casi todos ellos es estimulado por el acetato y
en algunas especies por ciertos aminocidos. En cultivos de laboratorio algunos
metangenos del rumen necesitan de una mezcla de cidos grasos (3) .
Todos los metangenos utilizan NH + como fuente de nitrgeno y algunas especies
fijan N2 (Methanosarcina, Methanococcus). El nquel es un componente de una coenzima
metanognica y est adems presente en las enzimas hidrogenasa y CO-
deshidrogenasa. Estos organismos tambin requieren hierro y cobalto para su
crecimiento. Tienen algunas coenzimas exclusivas que son portadoras de C1 o
intervienen en las reacciones de xido-reduccin como donadores de electrones (2) .
La reduccin del CO 2 por lo general depende del H2 , pero el formiato, el CO e incluso
el Fe sirven como donadores de electrones. El Fe es oxidado a Fe++ y los electrones
liberados se combinan con los protones para formar H 2 , que es el donador inmediato en
la metanognesis. Tambin los alcoholes pueden aportar electrones en unos pocos
casos (2).
En condiciones normales la variacin de energa libre durante la reduccin de CO2 a
metano con H2 es -131 kJ/mol, pero debido a la influencia de la concentracin de los
reactantes en los ambientes naturales baja a cerca de -30 kJ/mol. La concentracin de
H 2 en las zonas meta nognicas no es mayor a 10 mM (3) .
La etapa terminal de la metanognesis es la de conservacin de la energa. La
reduccin est asociada con la extrusin de protones a travs de la membrana, creando
una fuerza motriz de protones. La utilizacin del gradiente de protones mediante una
ATPasa integrada a la membrana, impulsa la sntesis de ATP (2). Las metanobacterias
autotrficas convierten el CO2 en material celular a travs de la va del acetil-CoA
utilizada tambin por las bacterias homoacetognicas y las reductoras de sulfato, pero a
diferencia de estas ltimas los metangenos integran las vas biosinttica y
bioenergtica porque comparten intermediarios comunes. Las reacciones de la va del
acetil-CoA tambin estn estrechamente relacionadas con la produccin de metano a
partir de compuestos de metilo o acetato.
El crecimiento de metanobacterias sobre compuestos de metilo tambin est ligado a
la bomba de protones para la sntesis de ATP, pero en ausencia de H2 la generacin de
los electrones necesarios requiere que alguno de los substratos se oxide. Esto se
produce por una bomba de sodio ligada a la membrana citoplasmtica, que establece
un gradiente de sodio a travs de la misma y conduce a la oxidacin de grupos metilo a
CO2 (3) .

5.3. Rumen
Los rumiantes son mamferos herbvoros que poseen un rgano especial en cuyo
interior se lleva a cabo la digestin de celulosa y otros polisacridos mediante la
actividad microbiana, porque estos animales carecen de las enzimas necesarias para
digerirlos.
El rumen tiene un tamao relativamente grande, con una capacidad de 100 a 150
litros en una vaca o 6 litros en una oveja, y se encuentra a una temperatura y acidez
constantes (39C, pH 6,5). La naturaleza anxica del rumen es un factor significativo
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5

para su funcionamiento (2) . El forraje llega al rumen o panza, mezclado con la saliva
que contiene bicarbonato y all es sometido a un movimiento rotatorio durante el cual
ocurren las fermentaciones. Esta accin peristltica facilita la adherencia microbiana al
material celulsico suspendido (3) .

Figura 5.1. Digestin anaerbica en el rumen (3)

El alimento permanece en el rumen de nueve a doce horas. El fluido ruminal contiene


gran cantidad de clulas, entre ellas 1010 a 1011 bacterias /mL. Las bacterias y los
hongos celulolticos actan produciendo el disacrido celobiosa y glucosa. sta
experimenta una accin bacteriana en la que se forman principalmente los cidos
actico, propinico y butrico, dixido de carbono y metano (figura 1). Los cidos
grasos atraviesan la pared del rumen y pasan a la sangre. Desde all van a los tejidos
donde son utilizados como la principal fuente de energa. Adems los microorganismos
del rumen sintetizan aminocidos y vitaminas esenciales para el animal (3) .
La masa de forraje pasa gradualmente a la redecilla donde se forman unas porciones
llamadas rumias que regresan a la boca y son masticadas otra vez. Cuando esta masa
slida queda bien fragmentada es engullida de nuevo pero pasa directamente al libro y
termina en el cuajar, donde las condiciones son cidas y all se inicia un proceso
digestivo que continua en el intestino. Muchas de las clulas microbianas formadas en
el rumen son digeridas y constituyen la principal fuente de protenas y vitaminas del
animal, dado que la pastura es un alimento deficiente en protenas (3) .
Las reacciones qumicas que ocurren en el rumen requieren la actividad combinada
de una variedad de microorganismos entre los que predominan las bacterias anerobias
estrictas, dado que el potencial de reduccin es de -0,4 V. La concentracin de O2 a ese
potencial es 10-22 M.
Fibrobacter y Ruminococcus son las bacterias celulolticas ms abundantes del rumen,
pero tambin degradan xilano. Fibrobacter posee una celulasa periplsmica (entre la
membrana citoplasmtica y la membrana externa) por lo que debe permanecer
adherido a la fibrilla de celulosa mientras la digiere, en cambio Ruminococcus produce
una celulasa que es secretada. Los Ruminobacter y Succinomonas amilolticos se
encuentran en minora, as como Lachnospira que digiere pectinas. Los productos de
fermentacin de estas y otras bacterias son utilizados por otros microorganismos. El
succinato se convierte en propionato y CO2 , y el lactato es fermentado a acetato y otros
cidos por Megasphera y Selenomonas (3).
El H2 producido en el rumen durante los procesos fermentativos nunca se acumula,
ya que es utilizado rpidamente por los metangenos (Methanobrevibacter,
Methanomicrobium) para reducir CO2 a CH 4 . Otra fuente de H2 y CO2 es el formiato. La
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 5

composicin media de los gases acumulados en el rumen es aproximadamente 65%


CO2 y 35% CH4 , y se expulsan al exterior por los eructos del animal.
El acetato no llega a convertirse en metano dentro del rumen debido a que el tiempo
de retencin es demasiado corto para que puedan desarrollarse los organismos
acetotrficos y adems las bacterias sintrficas degradadoras de cidos grasos no
abundan. Los cidos atraviesan la pared del rumen hacia la sangre del animal (2) .
El contenido ruminal posee aproximadamente 10 6 protozoos /mL, principalmente
ciliados. Muchos son anaerobios obligados, una caracterstica poco frecuente entre los
organismos eucariticos. Los protozoos comen bacterias y ejercen algn control sobre
densidad de las mismas en el rumen.
Tambin hay hongos anaerbicos que alternan una forma flagelada y otra inmvil.
Degradan celulosa, hemicelulosas, pectinas y parcialmente lignina (2) .
Las condiciones ambientales del rumen son constantes para cada tipo de
alimentacin. El cambio brusco de pasturas a cereales conduce a un desequilibrio en la
composicin microbiana que causa enfermedad o an la muerte del animal, por el
crecimiento explosivo de Streptococcus bovis que hidroliza almidn produciendo
abundante cido lctico y acidificando el rumen. Esta acidosis causa la eliminacin de
la microbiota normal (5) .

5.4. Digestores anaerbicos


Para producir biogas se pueden emplearse diversos
materiales orgnicos tales como residuos vegetales,
estircol, basura domstica, camalotes, algas, efluentes
de las industrias de alimentos, bebidas, pulpado y papel,
y qumicas (6) .
Durante la bioconversin de materiales orgnicos a
metano las distintas etapas tienen distinta velocidad: la
degradacin de la celulosa ocurre en semanas, la de las
hemicelulosas y protenas en das y la de las molculas
pequeas, como azcares, cidos grasos y alcoholes, en
horas, pero la lignina no es degradada en la mayora de
los sistemas de digestin anaerbica (7).
El proceso en un digestor difiere de otros tipos de
fermentaciones en que no es necesario utilizar cultivos
puros de microorganismos. Las diversas bacterias
capaces de descomponer las sustancias orgnicas y producir biogs estn ampliamente
distribudas en la naturaleza. Se encuentran, por ejemplo en los excrementos animales y
humanos. Estas bacterias pueden activarse y mantenerse indefinidamente con un
manejo adecuado (8).
El tamao del digestor est
determinado por el contenido de slidos
y el tiempo de retencin del residuo para
un tipo de carga dado. Los materiales
insolubles, tales como papel, paja y otros
lignocelulsicos, pueden requerir un
tratamiento de das (o an aos en
ciertos rellenos sanitarios) mientras que
puede lograrse hasta una reduccin del
95% con una carga diaria de 20 kg / m3
de digestor cuando el residuo es soluble
(5).
6 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5

Hay una amplia variedad de diseos pero los digestores de una sola etapa con
campana fija o flotante (figuras 2 y 3) son los ms usados en ambientes rurales. El
estircol digerido es recuperado como un lodo con 10 a 12% de slidos y un
sobrenadante con 2 a 3% de slidos.
La digestin ruminal est
estratificada en dos sub-fases una
lquida, y otra con alto contenido
en slidos donde es mayor la
actividad metablica y la
concentracin de intermediarios.
Similarmente los digestores de dos
fases tienen un mejor rendimiento
en metano que los de una sola (9) .
El digestor de campana fija cuyo esquema se muestra en la figura 3, tiene la cubierta
inmvil y cuenta con la presin hidrosttica autogenerada para distribuir el biogs.
Como se colecta el gas en el mismo digestor, parte de la suspensin digerida es
desplazada hacia un tanque de almacenamiento cuyo nivel sube con la produccin y
baja con el uso del gas. La ventaja de este modelo consiste la ausencia de partes
mviles corrobles (10) .
En la figura 2 se da el esquema de un digestor con campana colectora de gas flotante,
que puede estar directamente sumergida en la suspensin o bien en el aceite retenido
entre las dos paredes concntricas del tanque para lograr el sellado. La descarga del
lquido se hace por rebalse a travs de un cao y la de slidos por una abertura de
inspeccin. La presin del gas depende
del peso de la campana, por lo que
suele colocarse bolsas de arena sobre la
misma (6) . El digestor tipo bolsa que se
muestra en la figura 4, es til en las
regiones subtropicales y tropicales (11).
Otros tipos de reactores permiten el
manejo de grandes cantidades de
residuos por unidad de volumen
generando biogas a mayor velocidad,
como el de contacto anaerbico (figura
5) (12) .

5.5. Residuos
Los materiales que se pueden usar para la generacin de metano son muy variados,
por ejemplo:
residuos de cosechas: maloja de caa de azcar, malezas, paja, rastrojo de mz y
otros cultivos;
residuos de origen animal: desechos de establos (estircol, orina, paja de camas),
camas de gallinas ponedoras, boigas de cabras y ovejas, desperdicios de matadero
(sangre, vsceras), desperdicios de pesca, restos de lana y cuero;
residuos de origen humano: basura, heces, orina;
residuos agroindustriales: tortas de oleaginosas, bagazo, salvado de arroz, desechos
de tabaco y semillas, desperdicios del procesamiento de hortalizas y frutas, limos
de prensas de ingenios azucareros, residuos de t, polvo de las desmotadoras e
industria textil;
mantillo forestal: ramitas, hojas, cortezas;
plantas acuticas: camalote, algas marinas (14).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 7

La DQO es la cantidad total de oxgeno (en mg) necesaria para oxidar completamente
las substancias orgnicas e inorgnicas contenidas en un litro de suspensin y se
emplea como medida indirecta de la cantidad de substrato transformable. Otra manera
de expresar la cantidad de substrato disponible es mediante los valores de slidos
totales (ST) que es el material remanente despus de evaporar a 103-105C o de slidos
voltiles (SV) que es el material orgnico descompuesto a 550 + 50C (13) .
Otro parmetro de la digestibilidad de los residuos es la demanda biolgica de
oxgeno (DBO) que es el consumo de oxgeno, en mg/L de suspensin, durante la
degradacin por microorganismos durante 5 das a 20C. Tanto la DBO como la DQO
son proporcionales al contenido de materia orgnica en la suspensin a degradar, pero
la primera es ms representativa de la degradabilidad de la misma. Tambin puede
usarse el valor de carbono orgnico total (COT) que se obtiene midiendo el CO 2
formado en la combustin (8) .
En el cuadro siguiente se muestra la digestibilidad de algunos vegetales expresada
como el % de slidos voltiles desaparecidos luego de una incubacin de 48 hs con
lquido ruminal diludo en buffer fosfato-bicarbonato a 39C y otras 48 hs con pepsina-
HCl, a igual temperatura para hidrolizar parcialmente las protenas de los
microorganismos y del sustrato (7).

Digestibilidad de algunos vegetales (7)


Material Slidos voltiles totales Slidos voltiles digeridos
% peso seco % SVT
Gramneas 43,3 - 99,3 15,0 - 87,0
Brassica sp. 54,6 89,8 33,5 93,8
Batatas 69,0 97,7 41,0 98,7
Camalotes 69,7 88,1 12,0 80,1
Algas marinas 19,7 74,5 21,0 83,4

La digestin anaerbica de madera no es tcnicamente factible sin algn tipo de


pretratamiento que aumente su biodegradabilidad (5). En el recuadro siguiente se
muestra la relacin C/N de varios materiales residuales.

Contenido de nitrgeno y relacin C/N en varios residuos (14)


animales C/N %N vegetales C/N %N
Desperdicios Heno 12 4
de pescado 5,1 6,5-10 Amaranto 11 3,6
de matadero 2 7-10 Alfalfa 16-20 2,4-3
Orina 0,8 15-18 Paja 48 1,1
Sangre 3 10-14 Algas marinas 19 1,9
Estircol equino 25 2,3 Restos de lino 58 1,0
Estircol vacuno 18 1,7 Paja de trigo 128 0,3
Estircol de corral 14 2,15 Aserrn 511 0,1
Heces humanas 6-10 5,5-6,5 domsticos
basura 25 2,2
. peladura papas 25 1,5

Una relacin carbono/nitrgeno de 16/1 se considera ptima para una buena


produccin de gas y para una fermentacin estable de los excrementos animales (8),
aunque puede obtenerse biogs a valores mayores no se debe superar la relacin 30/1
(14). A continuacin se indican algunas caractersticas de las deyecciones animales.
8 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5

Caractersticas de excrementos animales (8)


Kg/100kg peso vivo/da
Peso Slidos Slidos N total
hmedo totales voltiles
Bovinos de carne 4,6 0,70 0,65 0,055
Cerdos 5,1 0,69 0,57 0,039
Gallinas ponedoras 6,6 1,67 1,22 0,099
Ovinos 3,6 1,07 0,91 0,043
Vacas lecheras 9,4 0,89 0,72 0,036

Los volmenes de gas producido suelen expresarse como m3 biogas/m3 digestor o


como m3 biogas/kg DQO o DBO y difieren segn el tipo de residuo, la concentracin
de slidos voltiles, la relacin carga/volumen del digestor, el tiempo de retencin de
los residuos dentro del digestor y el diseo del mismo. En general la produccin oscila
entre 1 y 5 m3 biogas/m3 digestor, o dicho de otra manera entre 0,3 y 0,5 m3 /kg SV (6) .

5.6. Caractersticas del biogas


El cuadro siguiente resume la composicin promedio del biogas segn la fuente. El
valor calorfico vara entre 17 y 34 MJ/m3 segn el contenido de metano.

Composicin del biogas derivado de diversas fuentes (6).


Desechos Lodos Desechos Rellenos
Gases agrcolas cloacales industriales sanitarios Propiedades
Metano 50 - 80% 50 - 80% 50 - 70% 45 - 65% combustible
CO2 30 - 50% 20 - 50% 30 - 50% 34 - 55% cido, asfixiante
Vapor agua saturacin saturacin saturacin saturacin corrosivo
Hidrgeno 0 - 2% 0 - 5% 0 - 2% 0 - 1% combustible
H2S 100 - 7000ppm 0 - 1% 0 - 8% 0,5 - 100ppm corrosivo,olor,txico
Amonaco trazas trazas trazas trazas corrosivo
CO 0 - 1% 0 - 1% 0 - 1% trazas txico
Nitrgeno 0 - 1% 0 - 3% 0 - 1% 0 - 20% inerte
Oxgeno 0 - 1% 0 - 1% 0 - 1% 0 - 5% corrosivo
Orgnicos trazas trazas trazas 5ppm corrosivos,olores

La condensacin del vapor es con frecuencia un problema debido a que el biogas


est generalmente ms tibio que las caeras por donde pasa. Es esencial una trampa de
agua y puntos de drenaje en la tubera (14) .
El hidrgeno es un intermediario en el metabolismo anaerbico y algunas bacterias
pueden producir trazas de CO. La presencia de nitrgeno y/u oxgeno puede indicar
una entrada accidental de aire y esto constituye un grave peligro debido al riesgo de
explosiones. El oxgeno es consumido por los microorganismos facultativos dejando el
nitrgeno residual (6) . Tanto el azufre orgnico, presente por ejemplo en algunos
aminocidos, y el inorgnico pueden ser reducidos a H 2 S, un gas muy txico y
altamente reactivo con los metales tales como hierro y cobre, originando la corrosin.
Esta reactividad hace que su contenido sea muy bajo en el gas de los rellenos sanitarios.
Por otra parte el amonio liberado por ejemplo durante la desaminacin de las
protenas, permanece en solucin (14).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 9

5.7. Factores ambientales


Entre los factores ambientales importantes para el funcionamiento de los digestores
figuran: la temperatura, la concentracin de slidos, la concentracin de cidos
voltiles, la formacin de espuma, la concentracin de nutrientes esenciales, las
substancias txicas y el pH (8) .
Las metanobacterias slo pueden multiplicarse cuando est avanzada la fermentacin
de los substratos primarios por accin de las bacterias anaerobias facultativas (por
ejemplo Escherichia, Enterobacter, Klebsiella o Bacillus spp.) y se haya consumido todo el
oxgeno disuelto, de manera que el potencial redox haya alcanzado en un valor menor
que -200 mV. Adems, el pH no debe bajar demasiado, debido a los cidos producidos
por los Clostridium, para no inhibir el crecimiento de los metangenos (15) .
Comnmente la concentracin de cidos grasos voltiles no supera los 2 a 3 g/L,
expresados como cido actico. Si se sobrepasa este nivel, la digestin cesar en dos o
tres das debido a que los metangenos no pueden utilizar los cidos a la misma
velocidad con que se producen (8) . El pH ptimo para la digestin est entre 7,0 y 7,2,
aunque el rango satisfactorio va de 6,6 a 7,6. La digestin comienza a inhibirse a pH 6,5
(14). Una vez que se ha estabilizado un digestor el lodo est bien amortiguado, es decir
la concentracin de protones no vara an cuando se aadan cantidades relativamente
grandes de cido o lcali. Si esta capacidad de amortiguacin se destruye y el pH
disminuye cesa la metanognesis (8).
El CO2 es soluble en agua y reacciona con los iones hidroxilo para formar bicarbonato.
La concentracin de HCO 3 -- es afectada por la temperatura, el pH y la presencia de
otros materiales en la fase lquida. Las condiciones que favorecen la produccin de
bicarbonato aumentarn a su vez el porcentaje de metano en la fase gaseosa (14).
La gama de temperatura para la digestin anaerbica tiene dos zonas ptimas una
mesfila (30 - 40C) y otra termfila (45 - 60C). Casi todos los digestores funcionan
dentro de los lmites de temperaturas mesfilas y la digestin ptima se obtiene a unos
35C. La velocidad de digestin a temperaturas superiores a 45C es mayor que a
temperaturas ms bajas, sin embargo las
bacterias son sumamente sensibles a los cambios
ambientales especialmente una disminucin
repentina de slo unos pocos grados (8).
En la figura 6 se ven las relaciones tpicas que
existen entre la produccin de gas y la
temperatura con diferentes tiemp os de retencin.
Por ejemplo, en un digestor donde los residuos
permanecen 12 das, la produccin de gas por
unidad de slidos voltiles totales aadidos
diariamente, es 20% mayor a 45C que a 35C.
En los climas clidos, donde no existen
temperaturas de congelacin, los digestores
pueden funcionar sin aadir calor pero hay que
aumentar en cambio el tiempo de retencin. La
regulacin de la temperatura puede lograrse
haciendo circular agua caliente a travs del
tanque por medio de termointercambiadores (8) .
Las causas principales de una excesiva
produccin de cidos voltiles son la elevada
velocidad de carga, una baja temperatura y la
formacin de espuma que constituye una zona
favorable para los acetgenos. La sedimentacin
10 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5

de los materiales fibrosos y la espuma se puede evitar mezclando el contenido del


digestor (14) .
Para una digestin ptima, tienen que estar presentes todos los elementos esenciales
en forma fcil de asimilar por las bacterias. Se han logrado resultados satisfactorios con
concentraciones mayores a 15% de slidos, sin embargo en la prctica la gama es de 3 a
10% (8) . Los requerimientos nutritivos de DBO : nitrgeno : fsforo en la digestin
anaerbica estn en la relacin 700 : 5 : 1. Solo los estircoles estn nutricionalmente
balanceadas. Adems para el crecimiento ptimo de los metangenos es necesario la
presencia de cuatro elementos en concentraciones muy bajas: Fe 2nM, Co 10 nM, Ni 100
nM y Mo 10 nM (6).
Los antibiticos empleados en las explotaciones pecuarias llegan a los excrementos
pero, como ocurre tambin con los antihelmnticos, no suelen afectar mayormente la
digestin debido a la dilucin con materiales no txicos. Los metangenos son sensibles
a los antibiticos que afectan la sntesis de protenas o lpidos y a los interfieren con la
funcin de la membrana citoplasmtica.
La concentracin de nitrgeno amoniacal debe ser inferior a 1,5 g/L si es mayor,
como suele ocurrir con la gallinaza, resulta txico. Si bien es un amortiguador, su
aumento puede llegar a impedir el proceso de digestin. Tambin son txicas las sales
de zinc, cobre y nquel, aunque este ltimo es necesario en nfimas cantidades. Las sales
de los elementos alcalinos y alcalino-trreos pueden se estimulantes o inhibitorias
segn la concentracin como se observa en el cuadro siguiente (14).

Efecto de la concentracin de algunos cationes (14)


Concentracin g/L
Catin estimulante inhibitoria muy inhibitoria
Sodio 0,1 0,2 3,5 5,5 8,0
Potasio 0,2 0,4 2,5 4,5 12,0
Calcio 0,1 0,2 2,5 4,5 8,0
Magnesio 0,075 0,15 1,0 1,5 3,0

Los desinfectantes clorados son muy txicos an a bajas concentraciones (<1 mg/L)
pero son rpidamente absorbidos por los slidos e inactivados. La mayora de los
detergentes sintticos son degradados fcilmente pero si la concentracin es mayor que
20 mg/L pueden afectar la digestin. Los compuestos de amonio cuaternario son
persistentes y txicos a bajas concentraciones (1mg/L). Los solventes clorados y
derivados son txicos en concentraciones de 1 mg/L. La toxicidad de los sulfatos se
manifiesta a concentraciones mayores que 1 g/L y la inhibicin total ocurre por sobre
4,5 g/L (6).

5.8. Criterios de diseo y construccin


El principal objetivo del diseo de un digestor es alcanzar un alto contenido de
biomasa dentro del mismo que permita una alta produccin de biogas y una alta
reduccin de la materia orgnica por unidad de volumen del digestor. Antes de
comenzar la construccin de cualquier modelo, se deben tener en cuenta las siguientes
consideraciones:
La instalacin y mantenimiento debe ser socialmente aconsejable, tcnicamente
posible y econmicamente justificable.
El biogas substituir a la lea, el carbn o algn derivado del petrleo y la digestin
contribuir a reducir la polucin, proveyendo adems un biofertilizante.
El modelo elegido debe ser el conveniente para las condiciones climticas locales.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 11

El proyecto debe ser elaborado segn la materia prima disponible y la demanda de


biogas diaria. Tambin hay que tener en cuenta la existencia de otras fuentes
alternativas de energa en la propiedad.
La localizacin ser la apropiada segn la distancia de los puntos de consumo, la
ubicacin de los residuos y la fuente de agua, la topografa del terreno, la textura
del suelo y el nivel fretico (16) .
Las consideraciones dependientes del tamao para el diseo de una planta de biogs
en reas rurales incluyen: la cantidad y el tipo de desperdicios disponibles, las
dimensiones de los trozos o partculas, el requerimiento de calefaccin, la necesidad de
agitacin, la disponibilidad de materiales de construccin (14) .
Bajo condiciones ambientales ptimas para la digestin, la cantidad de gas producido
es proporcional a la cantidad de residuos agregados. Los materiales que pueden ser
degradados fcilmente se estabilizarn ms rpido que los resistentes, necesitando un
tiempo de retencin ms corto y un digestor de menor tamao.
Las partculas pequeas son mejor fermentadas que los trozos gruesos, por lo que se
debe picar bien los materiales tales como paja, virutas, hojas, bagazo antes de
agregarlos, para que la suspensin fluya uniformemente evitando el taponamiento de
las caeras de carga y descarga, y reduciendo la formacin de espuma (8).
Cuando las condiciones climticas lo exigen, se debe calentar el digestor para reducir
el tiempo de retencin y a su vez el tamao del mismo. Pero este paso requiere emplear
parte del gas producido, disminuyendo la cantidad aprovechable para uso domstico, y
aadiendo un costo de instalacin y operacin (14).
El volumen del digestor est dado por el volumen de la suspensin de los
desperdicios agregados multiplicado por el tiempo de retencin conveniente segn el
tipo y el tamao de los desperdicios y la temperatura de operacin.
El volumen de un digestor de campana flotante est dado por la siguiente frmula
(17): V = [C * R (1+D) tF ]/(Y * d)
donde: C es la capacidad deseada en biogas por da,
R es la relacin estircol hmedo/estircol seco, commnente 5,
D es el peso de agua aadida a cada unidad de peso de estircol,
tF es el tiempo de fermentacin en das,
Y es el gas producido por unidad de peso de estircol seco,
d es la densidad de la mezcla estircol-agua.
El volumen del digestor V es proporcional a la relacin tF/Y, por lo que un aumento
en la temperatura de fermentacin, dentro de cierto rango, aumenta el rendimiento del
gas Y , permitiendo reducir el tiempo de retencin tF o disminuir V (11).
Por ejemplo, si C=2,8 m3 /da, R=5, D=1,25; tF=30 das, Y=0,2 m3 /kg, d=1102 kg/m3 ,
el volumen del digestor sera 4,3 m3 . Sin embargo, suele ser sobredimensionado en un
40% (17).
El mezclado influye tanto como el tamao de las partculas, pues expone nuevas
superficies a la accin bacteriana y previene la disminucin de sta por agotamiento
puntual de los nutrientes o acumulacin de metabolitos. Generalmente no es necesario
agitar el contenido de los digestores domsticos cuando el tiempo de digestin es largo
(50-60 das), aunque suele ser conveniente incorporar un agitador (18) .
La provisin de agua para los digestores es otro punto a tener en cuenta, por ejemplo
sobre la base de una relacin estircol hmedo/estircol seco de 5 : 1 y de una relacin
estircol hmedo/agua de 4 : 5, se necesita 62,5 litros de agua diarios cada 10 kg de
estircol seco. Pero, la fraccin lquida podra ser reciclada en aquellos casos en que el
agua es escasa. Por otra parte, la reduccin de la relacin agua/estircol a la mitad
ocasiona una disminucin del 40% en la produccin de gas. Sin embargo, cuando la
12 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5

temperatura de operacin se eleva, por ejemplo de 15 a 27C, aumenta la cantidad de


gas en 100%, por lo que es posible disminuir la cantidad de agua en los climas clidos
permitiendo un rendimiento aceptable del biogs (17) .
Se puede estimar la demanda mxima de biogas suponiendo las necesidades durante
cada hora del da para planificar el tamao de la campana flotante, pero en general se
considera conveniente no sobrepasar el volumen del gas producido diariamente.
La corrosin es un problema serio por la exposicin constante de las partes metlicas
al sulfuro de hidrgeno y los cidos orgnicos, que ya estn en el material o se forman
durante la fermentacin, por lo tanto se deben cubrir con una pintura resistente (15). La
ubicacin de la zona de operacin del digestor debe ser tal que no contamine la napa de
agua, debido a la permeabilidad del suelo.
Las plantas de biogas con alimentacin discontnua se construyen cuando es difcil de
obtener los materiales diariamente, por ejemplo se utilizan para fermentar material
vegetal grueso, tal como tallos de maz o bagazo de caa de azcar. A las dos semanas
de carga comienza la produccin de biogas y contina por unos tres meses. Cuando
cesa, se abre el digestor y se limpia. La suspensin remanente se extiende sobre tierras
de cultivo como fertilizante. En los casos que se usa este sistema suele haber al menos
dos digestores, de modo que al menos uno est en operacin (8) .
En los digestores con excrementos animales es necesario remover peridicamente la
capa de espuma. Por otra parte, en los modelos en que la carga es horizontal (tipo flujo-
tapn) como el de bolsa, suele haber menos problemas de formacin de espuma que
cuando es vertical (9).
Para establecer el potencial en biogas de un pequeo pueblo rural es necesario tener
informacin exacta sobre el nmero de habitantes, la cantidad de ganado, la
produccin diaria de estircol y heces, la eficiencia en la recoleccin de los desechos, la
disponibilidad de agua, el rendimiento terico de gas por unidad de peso de estircol y
heces, la disponibilidad de residuos celulsicos fermentables, etc. (17).
La produccin diaria posible de biogas se calcula mediante la siguiente frmula:
P = NA* XA * YA + NP* XP * YP + P R* Y R
donde: NA es la cantidad de animales,
NP la poblacin humana,
X A y X P el promedio diario de estircol y heces por animal y por persona,
Y A y Y P el rendimiento de gas por unidad de peso de estircol y heces,
P R el peso total diario de otros residuos disponibles,
Y R el rendimiento de gas por unidad de peso de los otros residuos disponibles (17) .
Algunos parmetros en la ecuacin anterior varan drsticamente de una regin a
otra, por ejemplo X A depende del tamao promedio del ganado y PR es siempre
diferente. Estos detalles son vitales para tomar las decisiones econmicas y hacer el
diseo de la planta de biogas.
Se supone un pueblo rural de 500 habitantes con 100 casas y 250 vacunos. Se
considera que el valor promedio de estircol seco es de 3,2 kg por animal por da, por lo
que se espera un rendimiento de 800 kg de estircol seco por da. Es razonable pensar
que el 75% de este material puede ser recogido o sea 600 kg. El rendimiento de biogas a
partir de la fermentacin del estircol es de 0,187 m3 /kg a 15C y 0,374 m3 /kg a 27C,
por lo tanto en el pueblo se puede generar en invierno 112 m3 de biogas por da. Dado
que las casas estn ms o menos alejadas una de otra, conviene que cada una tenga su
propio digestor al que se conecta la letrina. Se producir en total 14 m3 de biogas por
da sobre la base de 0,028 m3 /persona/da. La produccin total de biogas en el pueblo
proveniente de estircol vacuno y heces suma 126 m3 /da, sin contar el que se puede
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 13

obtener de residuos celulsicos, gallinaza, desechos de criaderos de cerdos y conejos,


restos de matadero, etc. (17).

5.9. Operacin

Cantidades de diversos materiales para cargar un digestor (17, 19)


kg/da necesarios para producir
1,0 3,5 m3 biogas/da
pasto seco 1,6 5,6
paja de maz seca 1,2 4,3
cscarillade arroz seca 1,6 5,6
camalote seco 5,3 18,6
camalote hmedo 106 372
estircol de cerdos 13 44
estircol de gallinas 16 56
estircol de vacunos (25C) 28 98
(verano, aire a 30C) 12 41
(invierno, aire a 14C) 31 110

Caractersticas de la suspensin de estircol para cargar el digestor (20)


Estircol de Vacas Lecheras Cerdos
Promedio (rango) Unidades Promedio (mg/L)
Slidos totales 15,4 (12,9 19,8) % estircol 1700
Slidos voltiles 86,1 (76,7 91,8) % slidos totales 1000
DQO total 149 (81 284) g/L 1400
DBO5 total 16,1 (8,6 21,5) g/L 725
DBO5 soluble 9,3 (4,6 14,4) g/L
COT 680
pH 6,2 (5,2 6,8) unidades
Nitrgeno total 2,8 (2,6 2,9) % slidos totales 200
Amonio 100
Nitrato 1
Fsforo soluble 0,25 (0,17 0,32) % slidos totales
Fosfato total 85
Potasio total (0,5 5) % slidos totales

En los recuadros anteriores se indican los requerimientos diarios de algunos residuos


para alimentar al digestor y las caractersticas del estircol diludo de vacas lecheras y
de cerdos.
La carga inicial requiere una gran cantidad de materia prima que conviene reunirla
mientras se es construyendo el digestor. Dado que ya sufre una transformacin antes
de ser introducida se debe controlar el pH, as como asegurar el agregado de estircol
vacuno fresco u otro material que contenga los microorganismos necesarios, por
ejemplo lodo de un diges tor de aguas cloacales. El xito de un digestor depende de la
radicacin y mantenimiento de los organismos acidificantes y metanognicos en forma
equilibrada. Si el digestor acumula cidos voltiles como resultado de una sobrecarga,
la situacin puede corregirse por la resiembra de organismos, la suspensin temporaria
de la alimentacin o el agregado de cal (16) .
La temperatura tiene un significativo efecto sobre la digestin anaerbica de los
materiales orgnicos. Los digestores enterrados aprovechan las propiedades aislantes
del suelo que los rodea. Pero en caso de los construdos sobre el suelo deben estar
14 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5

rodeados de anillos de hojas, aserrn o paja, los que generarn calor durante el
compostaje. Una vez transformados los materiales de estos anillos deben ser cambiados
por residuos frescos. El material compostado an podra contribuir a la mezcla de
alimentacin del digestor (14) . El rendimiento promedio en China, durante el verano,
es de 0,2 m3 de gas por da por m3 del digestor mientras que en Sri Lanka aumenta a 0,5
m3 de biogs diarios por m3 del digestor (19).
El operario que maneje diariamente el digestor deber estar adiestrado en la tarea y
poseer las instrucciones escritas. Entre las actividades diarias estarn las de tomar la
temperatura ambiente y del agua, reunir y homogeneizar el material de la carga,
reciclar el efluente, apreciar el olor y la presencia de insectos, y semanalmente controlar
y corregir el pH. Tambin controlar la seguridad en el uso del biogas. Identificar
prdidas, registrar la presin del gas, examinar los puntos de consumo, drenar el
agua del tubo de gas, verificar el nivel de lquido del manmetro (16) .
Pueden usarse varios mtodos para el mezclado de los diversos materiales que se
usan para cargar un diges tor:
mediante la carga diaria,
por manipulacin de los dispositivos de entrada y salida de manera que las
operaciones de alimentacin y descarga favorezcan el mezclado,
por instalacin de dispositivos de mezclado que puedan ser operados
manualmente,
introduciendo la suspensin como un chorro,
haciendo entrar la suspensin como un chorro tangencial al contenido del
digestor.
Si no se hace agitacin se puede reducir la estratificacin usando un digestor de
desplazamiento horizontal (14) . El efluente se retira con baldes o por drenaje en un
terreno desnivelado. Puede ser usado directamente como fertilizante o bien secado
para tener un abono slido (16) .
La velocidad de la degradacin de un material orgnico refleja la interaccin de la
cantidad de biomasa microbiana activa por unidad de volumen y dicho material
disponible para los microorganismos. La carga diaria para un digestor de estircol
vacuno es de alrededor de 6,5 kg slidos voltiles por m3 (9) .
De la frmula empleada para el clculo del volumen del digestor, puede obtenerse la
velocidad de carga L:
L = d/[R (1+D) tF] = C / (Y * V)
En el ejemplo dado, L=3,25 kg/m3 * da, o sea se agregara en total 14 kg de estircol
seco por da (17) .
Los digestores cargados a razn de 0,2-0,5 kg SVT/m3 por da, generalmente sin
agitacin, corresponden a las pequeas instalaciones para granjas cuyo tamao medio
es de 10 m3 . Cuando la carga es mayor que 0,5 kg SVT/m3 da se requiere un mezclado
al menos intermitente y una supervisin mayor que los anteriores (8).

5.10. Seguridad
Adems de gas, la digestin anaerbica genera un efluente que, segn los slidos
residuales y el contenido en nitrgeno o en agua, puede ser usado como abono o para
riego. Por otra parte juega un papel importante en el control de los olores de los
residuos en las granjas o las tierras de relleno. La digestin mesoflica mata organismos
patgenos tales como Salmonella y ciertos enterovirus durante un tiempo de retencin
de 20-30 das. Sin embargo, algunos parvovirus sobreviven an en el rango termoflico.
Tambin la infectividad de los huevos de Taenia saginata es reducida en gran medida
pero sobreviven los huevos de Ancylostoma sp. y Ascaris suum, aunque stos
desaparecen en el rango termoflico (6) .
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 15

Desaparicin de microorganismos entricos durante la digestin anaerbica (14)


Organismos Temperatura Tiempo de residencia desaparicin
C das %
Salmonella spp. 22 37 6 20 82 96
Salmonella typhi 22 37 6 99
Mycobacterium bovis 30 100
Poliovirus 35 2 98,5
Quistes de protozoos 30 10 100
Ascaris sp. 29 15 90

Independientemente del tamao del digestor, es necesario colocar un manmetro de


agua. Si la presin es negativa por haberse retirado ms efluente que la alimentacin
agregada, no se debe abrir los puntos de consumo de gas para evitar la llegada de aire
al interior. Adems se debe intercalar un arrestallamas en la caera. Como el metano
es explosivo cuando est mezclado con 5-15% v/v de aire, la primera cantidad de gas
producido debe ser venteada pues generalmente est mezclada con aire. Luego slo
habr biogs en la cpula fija o campana mvil del digestor. Por otra parte cuando se
detiene un digestor para retirar los lodos se debe ventilar bien el interior pues el biogs
es asfixiante (18) .
El cierre de agua de la cubierta mvil se puede romper cuando la alimentacin del
digestor es excesiva o la extraccin del gas es demasiado lenta. El vaco se crea cuando
la extraccin del gas es muy rpida. La vlvula de seguridad consta de arandelas de
peso calibrado que debe igualar a la presin proyectada para el digestor. La presin del
gas se establece normalmente entre 15 y 30 cm de columna de agua. El arrestallamas es
una caja de placas de metal corrugado con agujeros. Si se produjera alguna llama en la
tubera del gas, ste se enfriar por debajo del punto de ignicin, pero podra seguir
pasando (13) .
La eliminacin del sulfuro de hidrgeno se hace principalmente para prevenir la
corrosin por los residuos de la combustin. En el ambiente rural se suele usar el
proceso cataltico seco con Fe(OH)3 , y el catalizador se puede regenerar varias veces. El
CO2 puede ser removido en parte con agua fra (14) .

Referencias
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of biogas production. En: Methane from biomass: a systems approach. Smith WH, Frank JR, Abelson
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16 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5

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Political Weekly, special number august 1974, 1347-1364
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Waters. Elliott LF et al., eds. AmericanSociety of Agronomy, Madison, 1977, pp. 46-72
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 6 1

6. Micotoxinas
Los mohos crecen sobre materiales vegetales produciendo el deterioro de los
mismos. Forman metabolitos secundarios que actan como antibiticos
favoreciendo la prevalencia del moho frente a otros microorganismos, muchos
de los cuales son txicos para plantas y/o animales. Estos metabolitos que
enferman o matan a los animales que los consumen se conocen como
micotoxinas, y la afeccin se llama micotoxicosis (1) . Las micotoxinas son
compuestos ubicuos que difieren mucho en sus propiedades qumicas, biolgicas y
toxicolgicas. Una micotoxicosis primaria se produce al consumir vegetales
contaminados, y secundaria al comer carne o leche de animales que ingirieron forrajes
con micotoxinas. La presencia de aflatoxina M1 en la leche es consecuencia de la ingesta
de aflatoxina B1 (2) .
Las caractersticas de una micotoxicosis son:
no es una enfermedad transmisible,
en los brotes observados en el campo, el problema es estacional debido a que las
condiciones climticas afectan al desarrollo del moho,
el brote est comnmente asociado a un alimento o forraje especfico,
el examen del alimento o forraje sospechoso revela signos de actividad fngica (2) .
Los primeros casos de micotoxicosis conocidos fueron debidos al centeno
contaminado con Claviceps purpurea, en la Edad Media. En la Argentina, Quevedo (3)
describi la accin de los metabolitos txicos de un Aspergillus del maz sobre varias
especies animales. Pero la intoxicacin masiva de pavos en Inglaterra llev al estudio
de las aflatoxinas en l960, llamadas as pues son producidas por especies del grupo
Aspergillus flavus (2) .
La presencia de las micotoxinas en los vegetales puede deberse:
a la infeccin de la planta en el campo por el hongo patgeno o la colonizacin de
las hojas por los saprobios,
al crecimiento de los mohos saprobios o patgenos post-cosecha sobre los frutos y
granos almacenados,
al desarrollo fngico saprobio durante el almacenamiento de los materiales ya
procesados (1) .

6.1. Hongos en el campo y el almacenamiento


Los hongos que deterioran los productos vegetales pueden ser adquiridos en
el campo como por ejemplo Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Fusarium y
otros, adems de los fitopatgenos. Las especies difieren segn el vegetal, el
clima y la regin geogrfica (4) . Requieren una humedad relativa ambiente del
90 - 100% y un contenido de agua en las semillas de 22 - 23%, con un amplio
rango de temperatura entre 0 y 30C, aunque algunos pueden crecer a 35C o
ms (5) .
La colonizacin de las partes areas de las plantas por los microorganismos
comienza tan pronto como son expuestas al aire. Las bacterias suelen aparecer
primero, luego las levaduras y finalmente los hongos filamentosos saprobios y
patgenos. Los mohos continan desarrollndose a lo largo de todo el
crecimiento de la planta, y se acenta cuando la planta envejece y las semillas
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 6

maduran. La cosecha perturba el ecosistema y las condiciones relativamente estables


de almacenamiento entraan un profundo cambio en la composicin de la
microbiota (4) . Los hongos abandonados en el campo suelen albergar esclerocios,
como en el caso de Aspergillus flavus, que sern la fuente de contaminacin del
cultivo en la temporada siquiente (8) .
El crecimiento fngico contina en los productos frescos despus de la cosecha y
causa lesiones que desfiguran el aspecto de frutas y hortalizas. En los granos de
cereales los hongos persisten solamente si el grano est suficientemente seco como
para evitar la competencia de otras especies incorporadas posteriormente (5).
Otros hongos presentes en los productos almacenados son especies de Aspergillus,
Penicillium y algunos xerfilos (4) . Los factores que influyen en su desarrollo son
el contenido de agua del producto almacenado, la temperatura, el tiempo, el
grado de invasin fngica antes del almacenamiento, la actividad de insectos y
caros. Requieren menor humedad relativa ambiente (70 - 90%) y contenido de
agua en los granos (15 - 20%), pero el rango de temperatura es ms amplio (0 -
45C) y puede crecer a menor concentracin de oxgeno (5).
La microbiota sobre y dentro de los vegetales afecta la calidad, el
comportamiento durante el estacionamiento y el procesamiento. Las poblaciones
mixtas de microorganismos que se encuentran naturalmente suelen constituir
una desventaja competitiva para la produccin de micotoxinas (1) . Cuando el
contenido de agua aumenta, el crecimiento se vuelve ms vigoroso, conduciendo
a un calentamiento espontneo del substrato y al desarrollo de especies de mohos
termotolerantes, frecuentemente acompaados por actinomicetos termfilos (4) .

6.2. Produccin de micotoxinas


El metabolismo primario de los mohos es similar al de la mayora de organismos
eucariticos. Los metabolitos secundarios son formados a partir de unos pocos
intermediarios del metabolismo primario, bajo condiciones sub-ptimas y estrs (1) .
Durante la biosntesis de estos metabolitos, la cantidad producida depende no slo de
parmetros nutricionales y ambientales, sino tambin de la historia previa del
desarrollo del moho. La formacin de micotoxinas refleja que el moho ha alcanzado
cierto grado de diferenciacin bioqumica, fisiolgica y a veces morfolgica (6). Se
conocen unas 300 toxinas fngicas.
Las micotoxinas son especificas. Cuanto ms compleja es la ruta biosinttica de
estos metabolitos secundarios ms restringido es el nmero de especies de hongos
productores de micotoxinas. Las esporidesminas son producidas solamente por
Pithomyces chartarum (6) . La aflatoxina B1 es producida por tres especies estrechamente
relacionadas Aspergillus parasiticus, Aspergillus nomius y A. flavus (7) . La patulina es
producida por unas once especies de Penicillium, tres de Aspergillus y dos de
Byssochlamys (6) . En el recuadro de la pgina siguiente se dan varias especies de los
hongos que producen micotoxinas agrupados segn la ruta de biosntesis.
La variabilidad en la produccin de metabolitos secundarios por una
especie dada es enorme (8) . Penicillium roqueforti produce algunas micotoxinas
en las condiciones de laboratorio pero no en los quesos madurados. Los
rendimientos de toxina T-2 por cepas de Fusarium sporotrichioides varan
considerablemente cuando crecen en el laboratorio, y no todas las cepas de A.
flavus son aflatoxinognicas (6).
Por otra parte, la temperatura tiene una gran influencia sobre el crecimiento
y la actividad de los mohos. El gnero Aspergillus es ms comn en los
trpicos, Fusarium est asociado con los climas fros y Penicillium predomina
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 6 3

en las zonas templadas. La temperatura a la cual el material amohosado es incubado en


el laboratorio puede influir en la microbiota aislada a continuacin, la incubacin a 12
C puede favorecer el aislamiento de Penicillium verrucosum de un substrato con
ocratoxina A, donde predomina el gnero Aspergillus (5) . Un estrs por sequa, durante
el perodo del crecimiento del man puede conducir a la presencia de aflatoxinas, si la
temperatura de la geocarpsfera se mantuvo entre 20 y 32C durante las seis semanas
anteriores a la cosecha (6) .
Aunque el crecimiento de P. verrucosum ocurre entre 0 y 31C a una aw =
0,95, la produccin de ocratoxina slo se detecta si el rango de temperatura fu
12 - 24C, siendo la mxima a 20C y aw = 0,85 (10) . Alternaria alternata produce la
mxima concentracin de alternariol sobre granos de trigo a 25 C con una aw =
0,98, pero la produccin ptima de cido tenuazoico por Alternaria tenuissima
ocurre a 20C con un contenido de humedad ms elevado. Por otra parte,
Fusarium graminearum produce la mayor cantidad de zearalenona a 25C y de
desoxinivalenol a 28C a una a w = 0,98. Tambin influye el pH del substrato, as la
produccin de patulina en manzanas debida a P enicillium expansum se produce en
un rango de pH 3,23,8, mucho ms estrecho que aquel en que hay un
crecimiento activo (6).

Principales micotoxinas agrupadas segn su origen biosinttico (8, 9)


Origen Micotoxinas Algunas especies productoras
Policetonas cido peniclico Aspergillus ochraceus, Penicillium simplicissimum
cido secalnico D Penicillium oxalicum, Claviceps purpurea
Aflatoxinas Aspergillus flavus, A. nomius, A. parasiticus
Alternariol Alternaria alternata
Citrinina Penicillium citrinum, P. verrucosum
Citroviridina Aspergillus terreus, Penicillium citreonigrum
Esterigmatocistina Aspergillus versicolor,Eurotium amstelodami
Fumonisinas Fusarium nygamai, F. proliferatum, F. verticilloides,
Alternaria arborescens
Luteoskirina Penicillium islandicum
Moniliformina Fusarium nygamai, F. tapsinum, F. proliferatum
Ocratoxinas Aspergillus ochraceus, Penicillium verrucosum
Patulina Penicillium expansum, P. griseofulfum, P. roqueforti
Zearalenona Fusarium equiseti, F. graminearum
Aminocidos cido ciclopiaznico Aspergillus flavus, A. tamarii, Penicillium commune
Alcaloides del ergot Claviceps purpurea
Bovericina Fusarium proliferatum, F.subglutinans, F. verticilloides
Citocalasinas Aspergillus terreus, Phoma medicaginis
Eslaframina Macrophomina phaseolina
Roquefortinas Penicillium roqueforti
Terpenos Fusaproliferina Fusarium proliferatum, F. subglutinans
Paspalinina Claviceps paspali
Penitrem A Penicillium crustosum
Tricotecenos Fusarium graminearum, F. sporotrichoides, F. poae,
Myrothecium roridum, Stachybotrys chartarum
cidos cido tenuazoico Alternaria arborescens, A. tenuissima
tricarboxlicos Rubratoxinas Penicillium purpurogenum

En el campo se observa que una micotoxina particular se produce en gran cantidad


sobre un producto y no sobre otro. As los tricotecenos estn asociados a cereales de
zonas templadas, mientras que las aflatoxinas se encuentran con ms frecuencia en
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 6

oleaginosas y cereales de zonas clidas, pero no suelen aparecer en cantidades


significativas en soja probablemente debido a sustancias inhibitorias del grano (11).
Tambin influyen las prcticas agrcolas (1).
La planta sana que crece activamente tiene muchas barreras a la infeccin, pero stas
suelen ser sobrepasadas por microorganismos muy especializados que conducen a una
interrrelacin planta-hongo muy especfica, tal como el endfito Neotyphodium
coenophialum en Festuca arundinacea, o Neotyphodium lolii en Lolium perenne. Por otra
parte, la eslaframina producida por Macrophomina phaseolina (= Rhizoctonia leguminicola)
est asociada al trbol rojo y otras legumbres forrajeras (6) .
La mayora de las micotoxicosis animales implican el consumo de alimentos que han
sido deteriorados por la actividad de una compleja microbiota saprobia. Se conocen
algunas especies que inhiben la produccin de aflatoxinas, por ejemplo Trichoderma
viride (6) . A su vez A. flavus impide la formacin de toxinas en un cultivo mixto con
Aspergillus ochraceus o Aspergillus versicolor (12) . Tambin A. flavus y A. ochraceus inhiben
la formacin de toxinas de Myrothecium roridum en un cultivo simultneo (13) . Por otra
parte la rubratoxina B, un metabolito de Penicillium purpurogenum, aumenta la
produccin de aflatoxinas por A. parasiticus (6) .

6.3. Hongos toxinognicos y micotoxinas naturales


Las micotoxinas son ingeridas con los alimentos o forrajes contaminados directa o
indirectamente. La contaminacin directa con un moho y la consecuente produccin de
toxina puede ocurrir durante la produccin, el transporte, el estacionamiento o el
procesamiento del alimento o forraje. Mientras que la contaminacin indirecta se debe a
la presencia de un ingrediente previamente contaminado con un moho toxinognico
que ya ha desaparecido cuya micotoxina persiste.
La presencia, y el peligro asociado, de una micotoxina solamente puede ser
determinada despus de la extraccin e identificacin de la misma, porque:
la presencia del hongo no asegura.que exista una micotoxina,
la micotoxina contina en el producto aunque el moho haya desaparecido,
un hongo dado puede producir ms de una micotoxina,
una determinada toxina puede ser formada por ms de una especie de mohos (1).

6.4. Peligros

Las concentraciones de micotoxinas se expresan en g/kg (1/109 ), lo que equivale a la


relacin que existe entre una regla de dibujo y la distancia entre la tierra y la luna. La
accin de estas pequeas cantidades es acumulativa manifestndose la enfermedad, en
algunos casos, al cabo de meses o aos. Esto ocurre principalmente con las toxinas
mutagnicas. La aflatoxina B1 causa cncer heptico y las fumonisinas parecen estar
relacionadas al cncer de esfago (7) .
Entre los factores valorados para establecer unos lmites a la presencia de micotoxinas
en los alimentos se encuentran:
la distribucin de la micotoxina en el producto,
las limitaciones inherentes al mtodo de anlisis,
la evaluacin de los riesgos y el potencial txico,
la disponibilidad de alimentos para la poblacin (14) .
En la pgina siguiente se resumen las afecciones en los animales provocadas por la
ingesta de algunas micotoxinas .
El nivel de aflatoxinas en los vegetales es muy variable, oscilando los valores en
choclo y maz entre 0,1 y 2.000 g/kg. El Comit Mixto de Expertos en Aditivos
Alimentarios (JECFA) de la FAO no ha determinado cual es la ingesta de aflatoxina M1
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 6 5

tolerable y recomend reducir los niveles al mnimo posible. En Argentina se


establecieron lmites de 5 g aflatoxina B1 /kg y 20 g aflatoxinas totales/kg para el
contenido en alimentos de consumo humano, pero las FAO y WHO fijaron 15 g
aflatoxinas totales/kg (15) .

Micotoxinas Trastornos
cido ciclopiaznico desrdenes gastrointestinales y neurolgicos; cambios
degenerativos y necrosis en vsceras (10, 16)
cido peniclico hepatotxico y cancergeno (17)
cido secalnico D teratognico (18)
cido tenuaznico baja eficiencia de la alimentacin, prdida de peso;
congestin y hemorragias de estmago e intestino,
agrandamiento de riones (19, 20)
aflatoxinas dao heptico agudo, cirrosis, induccin de tumores,
eratognesis; excrecin por leche, acumulacin en tejidos
(18, 21, 22,23)
alternariol-metilter mutagnica (18)
beauvericina afecta la contractilidad del msculo liso de mamferos (24)
citocalasinas inhibe la divisin celular, la funcin tiroidea y la secrecin
de amilasa (18)
citrinina toxicidad renal en monogstricos (25)
desoxinivalenol rechazo del alimento, vmitos; inmunosupresin en cerdos
y otros animales (18, 26)
esterigmatocistina cambios patolgicos en hgado, induccin de tumores (18)
fumonisinas leucoencefalomalacia equina; edema pulmonar en cerdos;
cncer heptico en ratas; excrecin por leche (27)
ocratoxina A nefropata en cerdos y aves; acumulacin en rin, hgado
y msculo (28, 29)
rizonina A gastroenteritis, afecta hgado y riones (30)
patulina trastornos gastrointestinales y neurolgicos; induccin de
tumores (10, 18)
tremrgenos (fumitremgeno, dao del sistema nervioso central, temblores (7, 10)
paspalinina, penitrem A,
territrem B y otros)
zearalenona sndrome estrognico en cerdos y ganado de cra; excrecin
por leche junto con y -zearalenol (18, 31, 32)

Los niveles de contaminacin de productos agrcolas


con fumonisinas pueden alcanzar hasta 330 mg/kg,
principalmente en los destinados al consumo animal. El
nivel medio en maz de exportacin es menor que 0,3
g fumonisina B1 /g (33) . La Agencia Internacional para
Investigacin sobre Cncer clasific a estas micotoxinas
como posibles cancergenos en humanos, pero no se ha
establecido lmites aunque se reconocen los efectos
txicos cardiovasculares (15) . En Argentina, la ingesta
media diaria estimada de fumonisinas es 0,2 g/kg
peso corporal y este valor debera aumentarse un 40% si se consideran fumonisinas
totales. La ingesta diaria por persona en Latinoamerica oscila entre 0,2 y 17.000 g (34) .
Por otra parte, los tricotecenos (diacetoxiscirpenol, desoxinivalenol, toxina T-2 y
otros) causan diarrea, hematuria, vmitos, anorexia, leucopenia, necrosis, y en
algunos casos letales hemorragias mltiples. En la ex URSS se haba establecido un
6 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 6

lmite de 0,1 mg/kg para la toxina T-2 (15) . Hay una correlacin
positiva entre el contenido de esta toxina y el cncer de esfago en
zonas de China (14).
Mientras que los psoralenos originan fotodermatitis y los
tremgenos (penitrem A y otros) afectan al sistema nervioso
provocando temblores y convulsiones, la zearalenona es
hiperestrognica (18) . El JECFA estableci como ingesta mxima
tolerable el valor de 0,5 g toxina/kg peso corporal/da (35).
La ocratoxina A tambin fu considerada como posible cancergena
y los valores presentes en granos han llegado hasta un mximo de 5
mg/kg. El JECFA estim tolerable una ingesta semanal mxima de
0,1 g/kg peso corporal. y se establecieron los lmites de 1 a 50
g/kg para el consumo humano y veinte veces mayor para los
animales (15) .
Tambin los tejidos de las plantas suelen acumular substancias
txicas como mecanismo especfico de defensa ante el ataque de
algunos hongos, como es el caso de las batatas invadidas por
Phytophthora infestans (16).

6.5. Prevencin
El manejo correcto de los cultivos y cosechas de granos y hortalizas, y el control de la
calidad de los alimentos para los animales de la granja constituyen los nicos medios
de prevencin. La presencia de cualquier alteracin organolptica de frutas u hortalizas
es causa suficiente para rechazar el producto por la potencial formacin de toxinas,
debida al deterioro fngico, las que se distribuyen con facilidad por todo el substrato
por ejemplo, en los tomates. En cuanto a los productos de granja, es difcil preveer un
problema al adquirir carnes, huevos y quesos caseros, sin conocer cul era el estado de
los animales y la calidad de los alimentos que consuman (1) .

Contenido de agua % seguro para el almacenamiento de granos a una HR ambiente del 70% (39)
Granos 20C 30C Granos 20C 30C Granos 20C 30C
Mijo 16.5 16,0 Avena 14,5 14,0 Arroz 13,5 13,0
Porotos 15,5 15,0 Trigo 14,5 13,5 Soja 12,0 11,5
Caup 15,5 15,0 Sorgo 14,5 13,5 Lino 9,0 8,5
Cebada 15,0 14,5 Maz 14,5 13,5 Girasol 8,0 7,5

Una vez formadas las micotoxinas no se pueden eliminar durante el procesamiento


culinario o industrial, aunque en unos pocos casos se reduce su contenido. La mayor
cantidad de toxina suele estar concentrada en unos pocos granos y si se logra
separarlos, se reduce la proporcin de micotoxina en los subproductos. Las tcnicas de
clasificacin por el color u otras caractersticas visuales se han usado en la seleccin de
manes y la seleccin neumtica con las nueces de Par. El mondado de las manzanas
para remover las zonas alteradas reduce en 9399% el contenido de patulina de la sidra
preparada con las mismas (36).
Las micotoxinas son moderadamente estables a los procedimientos de tostado, as los
manes pierden alrededor del 40% de aflatoxina B1 y los granos de caf verde cerca del
80% de ocratoxina A . El proceso de panificacin reduce 1669% del desoxinivalenol
presente en la harina de trigo (37) . El tratamiento de maz quebrado con NaOH
disminuye significativamente el contenido de aflatoxina, pero la preparacin del grano
entero con CaOH reduce solo un 40% de la misma (38) . La bentonita y otros
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 6 7

slicoaluminatos adsorben las aflatoxinas de los substratos pero no otras micotoxinas


(36), y suelen ser utilizados mezclados con los alimentos para aves.

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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 1

7. Hongos
7.1. Clasificacin
Los hongos son agrupados de acuerdo a diversos criterios que convergen en la
taxonoma o sea el arte de ordenar a los seres segn sus interrelaciones fisiolgicas,
morfolgicas o moleculares. A continuacin se indican algunas caractersticas de los
reinos del dominio Eukarya que contienen a los diversos hongos y en la pgina
siguiente se muestra un esquema de la divisin de los hongos en grandes grupos. Los
mixomicetos y mastigomicetos han sido reubicados en los reinos Protozoa y Chromista
que incluyen a los protozoos y las algas respectivamente (1).

Caractersticas de los reinos del dominio Eukaryota que contienen a los hongos (1)
Fungi Chromista Protozoa
Nutricin Heterotrfica Autotrfica Heterotrfica
(por absorcin (fotosinttica (fagotrfica)
u osmotrfica) o por absorcin) o autotrfica
(fotosinttica)
Pared celular celulosa con quitina ausente en
frecuencia, y -glucanos forma trfica,
sin quitina variable si
ni -glucanos est presente
Crestas mitocondriales tubulares achatadas tubulares
Mastigonemas flagelares tubulares ausentes no tubulares

La caracterstica principal de los hongos mucosos es un estado ameboidal que bajo


condiciones apropiadas se renen y diferencian para formar estructuras reproductivas
semejantes a otros hongos. Algunos miembros del grupo, tal como Dictyostelium
discoideum y Physarum polycephalum fueron estudiados n i tensamente por los bilogos
evolucionistas. Son organismos comunes de vida libre que habitan el mantillo y el
suelo, pero algunas especies son parsitas de plantas superiores, algas marinas y otros
hongos (2) . El parsito asintomtico Polymyxa graminis est asociado a las races de
cereales y suele actuar como vector de enfermedades virales .
Los mastigomicetos son hongos que forman zoosporos. Muchos son saprobios del
suelo que actan como descomponedores importantes. Tambin se encuentran en agua
dulce as como en aguas residuales. Algunas especies son parsitas de plantas, algas,
peces e insectos, por ejemplo Phytophthora infestans causa el tizn de la papa (4) . Los
quitridiomicetos difieren de los oomicetos, entre otras cosas, en el nmero de flagelos
de los esporos y la composicin de la pared celular (3).
Los zigomicetos son saprobios comunes en el suelo. Algunas especies estn asociadas
al estircol y otras, como Entomophthora, son parsitas de insectos. Tambin incluye
hongos asociados simbiticamente con plantas formando micorrizas vesculo-
arbusculares, como Glomus y Acaulospora (2) .
Los ascomicetos abarcan hongos miceliales y levaduras. Entre stas que se encuentra
Saccharomyces empleado en la panificacin y la produccin de cerveza. Las levaduras
estn asociadas a frutas, pero tambin se hallan en agua dulce y ambientes marinos.
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7

Los ascomicetos filamentosos son saprobios comunes del suelo por ejemplo
Chaetomium, o estn asociados con estircol como Ascobolus, o forman micorrizas con
rboles por ejemplo Tuber que es un hongo comestible muy apreciado. Tambin los
hay patgenos de plantas, como Sphaerotheca pannosa que causa el mildi de las rosas
(4).

Clasificacin de los hongos y organismos relacionados (1)

PROTOZOA: fagotrficos, sin pared


Acrasiales: fase asimilativa ameboide libre, esporocarpo ssil
Dictyosteliomycetes: fase asimilativa ameboide, esporocarpo pedicelado
Myxomycetes: fase asimilativa plasmodial, saprobio
Plasmodiophoromycetes: fase fagotrfica intracelular, parsito
CHROMISTA: no fagotrficos, flagelos con mastigonemas, pared con celulosa
Labyrinthulomycota: fase trfica reticular con clulas deslizantes
Hyphochytriomycota : zoosporas con un flagelo anterior, holo o eucrpico
Oomycota: zoosporas con dos flagelos, fase asimilativa diploide unicelular o cenoctica
FUNGI: osmotrficos, pared con quitina
Chytridiomycota: unicelular o micelial, holo o eucrpico, zoosporas con un flagelo posterior
o raramente varios
Zygomycota: micelio en general cenoctico, zigosporas por conjugacin hifal
o Trichomycetes: parsitos de artrpodos, adheridos a la superficie
o Zygomycetes: saprobios en su mayora, si parsitos estn inmersos en el tejido
hospedante, mitosporas por lo comn en esporangios
Ascomycota: meiosporas dentro de ascas, anamorfos conidiales
o Ascomycetes: micelio septado, ascas en ascomas diversos
o Taphrinomycetes: parsito, micelio subcuticular o subepidrmico, ascas desnudas
o Saccharomycetes : levaduras brotantes, ascas libres
o Schizosaccharomycetes : levaduras que se multiplican por fisin, ascas libres
Basidiomycota: meiosporas sobre basidios o estructura equivalente, micelio con septos
doliporo o levaduras
o Basidiomycetes
Agaricomycetidae: basidioma visible carnoso, coriceo o duro; hifas con fbulas;
basidio sin septos primarios sobre laminillas, poros o en gasteroma; saprobios
(epgeos, hipgeos o ligncolas) o ectomicorrzicos, raramente parsitos
Tremellomycetidae: basidioma visible gelatinoso o ceroso; basidio septado; ligncolas
o micoparsitos
o Urediniomycetes: meiosporas en soros, micelio sin fbulas, parsitos obligados de plantas
o insectos
o Ustilaginomycetes: con fase levaduriforme, septo hifal por lo comn sin doliporo
Hongos Anamrficos : no correlacionados con meiosis
o Hyphomycetes: micelio con conidios, conidiforos separados o reunidos en coremios o
esporodoquios
o Coelomycetes: micelio con conidiomas
o Agonomycetes: micelio que solo presenta clamidosporas, bulbillos o esclerocios

Los basidiomicetos incluyen hongos que viven asociados con plantas formando
micorrizas por ejemplo Amanita una seta letal y Boletus comestible, comprenden a la
mayora de los hongos comestibles como Agaricus y Pleurotus, y algunos causan
enfermedades de vegetales como las royas, pero la mayora son saprobios que crecen
sobre mantillo, compost, estircol o suelo. Su tamao es variable, desde levaduriformes
hasta enormes hongos en repisa (2) .
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 3

Los hongos anamrficos contienen ms del 95% de los hongos mitospricos,


saprobios y parsitos, conocidos. Algunos causan el deterioro de alimentos y producen
micotoxinas, por ejemplo Aspergillus, Fusarium y Penicillium (3) .

7.2. Los macromicetos


Cada macromiceto est formado por largas hifas ramificados que se renen en
cordones rizomorfos y cuerpos de reproduccin (ascomas, basidiomas) visibles y
medibles en centmetros. Son organismos saprobios que absorben la materia
orgnica muerta de los residuos donde crecen, o son parsitos de rboles, o
viven en simbiosis con plantas formando ectomicorrizas. Los hay comestibles y
venenosos. Su ciclo de vida es complejo y varia segn las clases de hongos.

7.2.1. Ascomycota
Xylariales
Pocos son los ascomicetos de gran tamao. Entre los Xylariales se encuentran
Xylaria hypoxylon (figura 1) que afecta a las races de los manzanos y X.
polymorpha que aparece en otoo en la base de viejos tocones. Poseen peritecios
embebidos en un estroma (4).
Entre los discomicetos u hongos con apotecios, se hallan los rdenes Pezizales,
que comprende dos gneros de inters Tuber y Morchella, y Cyttariales con el
gnero Cyttaria.
Pezizales
Las trufas (Tuber) son hipgeas o subterrneas, con ascomas cerrados,
ms o menos globosos, cuyo himenio no est expuesto al exterior sino que
recubre una serie de compartimentos internos (figura 2). Tienen una pared
gruesa que no se rompe a la madurez de los esporos (indehiscente) (4).
Cuando se cortan las trufas jvenes se ven casi blancas pero se obscurecen
con el tiempo, ms o menos segn las especies, tomando un aspecto
marmolado. Estos hongos viven en simbiosis con las races de rboles
europeos, por ejemplo T. melanosporum est asociado a especies de Quercus
(roble, encina) (5) . T. aestivum y T. brumale micorrizan con avellanos
(Corylus avellana). T. magnatum, la trufa blanca, crece en suelo calcreo al
pie de robles, sauces o tilos, con los que micorriza (7). Las truferas
comienzan con la siembra de los plantines de los rboles junto al hongo.
Las trufas sern cosechadas bajo tales rboles despus de 7 a 15 aos (8).
Debido a su olor caracterstico los animales entrenados pueden hallar la
ubicacin de los ascomas subterrneos. Suele confundirse con Elaphomyces
granulatus que no es comestible y crece semienterrado en suelos cidos,
especialmente al pie de pinos formando micorrizas (7)
o con Gauteria chilensis que crece en el mantillo de
pinares (9) .

Morchella esculenta (figura 3) es un ascomiceto


comestible europeo cuyo apotecio alveolado, con el
himenio expuesto, tiene un pie. Alcanza entre 5 y
10cm de alto y un ancho de 3 a 5 cm en el extremo
amarillo-verdoso o pardo-amarillento con hoyos y
rebordes como un panal, mientras que el pie es hueco
y de color blanco (5) . Se encuentran en suelo arenoso o
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7

arcilloso-arenoso bajo nogales y viejos manzanos o en suelos hmicos proximo a olmos


y fresnos (11). Puede ser confundida con Gyromitra esculenta o G. antarctica que son
txicas por las giromitrinas (N-formil-N-metil-hidrazonas). stas durante la digestin
liberan mono-metil-hidrazina que afecta al sistema nervioso central (10). Las falsas
morillas tienen un extremo cerebriforme de tono rosa a violeta o castao violceo, y
crece en suelos ricos en detritus vegetales (7) . Tambin hay
otras especies comestibles como M. elata, o M. intermedia que
es una morilla montana con el pleo alveolado cnico a oval
de color ocre grisceo (12).

Cyttariales
Cyttaria (figura 4) es un gnero parsito de Nothofagus, que
posee algunas especies comestibles. Tienen un cuerpo
carnoso de colores claros y casi esfrico, en el cual estn
inmersos los apotecios. Alcanzan un dimetro de 2 a 11 cm
segn las especies. C. hariotti (llao-llao) crece sobre guindo,
ire, lenga, coihue, roble de Chilo, y tiene un color amarillo-
anaranjado intenso. Es la ms extendida geogrficamente.
Otras especies tambin comestibles son C. darwinii (pan de
indio), C. berteroi (pinatra), C. espinosae (lihuee) (9) .

7.2.2. Basidiomycota
Las setas, bejines y otros basidiomas estn constitudos por hifas dicariticas que
suelen presentar fibulas. Este micelio puede crecer durante aos en el suelo o la madera
hasta que bajo la infl uencia de diversas condiciones ambientes forma los basidiomas (4) .

Auriculariales
Auricularia auricula u oreja de palo (figura 5) tiene basidiomas
coriceo-gelatinosos, prpura o pardo obscuro, que se forman en
ramas caidas y tocones de seibo, morera y otros rboles. Miden entre 3
y 10 cm de dimetro. La superficie externa es irregular, tiene un color
ms plido y est recubierta de una vellosidad casi imperceptible.
Llevan el himenio sobre la superficie interna, cncava, lisa, opuesta al
substrato. Luego de la meiosis los basidios se dividen en cuatro clulas
por tabiques transversales, de cada una nace lateralmente un
esterigma que origina un basidiosporo (13) . La especie comestible que
se cultiva es Auricularia polytricha (2) .

Cantharellales
Los cantarelos (Cantharellus) tienen forma de embudo con el
borde ondulado, sinuoso, y el himenio en pliegues
espaciados como laminillas que bajan por el pie,
anastomizadas, es decir que se juntan y ramifican (figura 6).
La especie comestible ms apreciada es C. cibarius de color
amarillo yema en su totalidad. Alcanza de 5 a 10 cm de alto.
Forman micorrizas con conferas y rboles de madera dura
(7) . Se lo puede confundir con la especie txica Omphalotus
olearius (5) .

Agaricales
El champin Agaricus bisporus (figura 7) es la especie que se cultiva comercialmente
en las zonas templadas, pero en las subtropicales se utiliza A. bitorquis. El champion
alcanza de 5 a 10 cm de alto y de 2 - 10 cm de dimetro en la parte superior o pleo.
Cuando el hongo madura, se abre el pleo blanco dejando ver por abajo las laminillas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 5

rosadas que llevan el himenio. Despus todo el hongo se


obscurece y la masa de esporos toma un color pardo
violceo o chocolate (11). Cuando recin surge, el hongo tiene
el margen del pleo unido al pie por una membrana, que
luego se rompe dejando un anillo persistente sobre el pie. A.
bisporus que debe su nombre al hecho de tener la solamente
dos esporos dicariticos sobre la mayora de los basidios,
contiene agaritina un derivado de la fenilhidrazina que se
descompone con el calor (10). En el champinn salvaje (A.
campestris , A. pampeanus) se forman cuatro esporos de los
esterigmas del cada basidio (14). Aparece entre los pastos,
especialmente si hay restos de estircol, despus de las
primeras lluvias estivales. A. arvensis (figura 7) suele
aparecer entre los pastos. El pleo es de color blanco y
alcanza de 7 a 15 cm de dimetro. Las laminillas son
primero
blancas,
luego
rosadas y
al final negruzcas. El anillo es doble
(7) . A. xanthoderma es txico. Se
reconoce porque toma un color
amarillo neto en el lugar donde se lo
toc y tiene olor a iodoformo (15).
Coprinus comatus (figura 8) es
hongo comn en jardines y espacios
abiertos que crece aislado o en
pequeos grupos. Puede alcanzar 5
cm de dimetro y 15 cm de largo. El
pleo es blanco, y est cubierto de
pequeas escamas. No se
expande hasta la madurez, en
que los bordes se enrollan y las
laminillas se disuelven dando
una masa negra (8) . C.
atramentarius es comestible, pero
no debe ser acompaado de
alcohol pues posee coprina
(figura 8) que se hidroliza a
hidrato de ciclopropanona e
inhibe la aldehdo-
deshidrogenasa con la
consiguiente acumulacin de
acetaldehdo txico (10). Este
hongo suele encontrarse sobre
bagazo de caa de azcar en
descomposicin.
Las setas del gnero Amanita
(figura 9) son muy venenosas.
A. phalloides, A. verna y A. virosa
contienen toxinas letales (11) que
destruyen clulas del sistema
6 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7

nervioso central, riones, higado y


musculatura. Las amatoxinas son pptidos
cclicos (10). A. phalloides es esfrica cuando
emerge de la tierra, luego en forma de
sombrilla color verde-aceituna con
laminillas blancas. Como en otras especies,
el pie est ensanchado en la base, con restos
en forma de copa (volva) de la cubierta
general (velo universal) que envolva al
basidioma joven. Adems tiene un anillo,
residuo de la membrana (velo parcial) que
cubra las laminillas inmaduras (4). A. verna
tiene un pleo blanco-amarillento y A. virosa
blanco. El de A. muscaria es amarillento al
comienzo, luego se torna escarlata, cubierto
de verrugas blancas que son restos del velo universal (7) . Posee muscarina, muscimol y
cido ibotnico, que afectan al sistema nervioso central y causan trastornos
gastrointestinales (10). Las Amanita son hongos micorrizantes y A. diemii se asocia con
Nothofagus (9) .
Macrolepiota (figura 10) comprende especies de setas con laminillas y esporos blancos,
anillo grueso o doble, pero que carecen de volva. Crecen entre la hierba, en lugares
soleados (11) . Entre especies comestibles se encuentran las introducidas M. procera y M.
rhacodes, junto con M. bonaerensis. El aspecto macroscpico de esta ltima puede
confundirse fcilmente con un hongo nativo comn en la zona, M. molybdites (figura
10), que crece en grupos unidos por el pie, tiene esporos verde-amarillento y es txico.
Bajo pinares suele crecer M. gracilenta que tiene pleo el primero cnico y luego
aplanado con un gran mameln central, de 12 a 20
cm de dimetro, con el pie ensanchndose hacia la
base. y alcanza los 20 a 30 cm de alto. El anillo
simple y la superficie del pleo permite diferenciarlo
de M. bonaerensis (12) .
Los Lepiota (figura 11) son hongos con
algunas caractersticas similares a los
anteriores, pero ms pequeos y no
comestibles. Algunos producen trastornos
gastrointestinales, tal como L. clypeolaria.
Otros tienen amanitinas letales, como L. josserandi. Tambin hay especies con
amanitinas en los gneros Galerina y Conocybe (16) .
Volvariella volvacea (figura 12) es comestible, pero no debe ser ingerida cruda
pues tiene una toxina termolbil (10) . Junto con V. bombycina crecen en la zona
subtropical sobre restos lignocelulsicos: ramas y troncos muertos, viruta de
madera, bagazo de caa de azcar.. Tienen volva y anillo. Las laminillas son blancas al
comienzo y rosa salmn despus, debido a las esporas (11) .
Lactarius deliciosus (figura 13) es comestible pero la mayora
de las especies de este gnero micorrizante son txicas o
tienen un sabor desagradable. Cuando se lo corta exuda un
ltex . El pleo anaranjado-azafrn, al principio es convexo
con bordes ondulados y luego adquiere forma de embudo.
Las laminillas son decurrentes o sea baja por el pie
anaranjado. Donde exuda ltex se vuelve verde. Es una
especie que micorriza con pinos (16) . Puede ser confundido
con L. torminosus que es txico, pero ste tiene el pleo
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 7

rosado a anaranjado parduzco y velloso (5) .


Clitopilus prunulus (figura 14) es una especie comestible de
color blanco amarillento que puede confundirse fcilmente
con algunos Clitocybe blancos que son txicos pues contienen
muscarina. Tiene el pleo aplanado con laminillas blancas al
principio que se vuelven rosadas y bajan por el pie
(decurrentes) que es central o excntrico. No presenta anillo
ni volva. Micorriza con conferas (11) . Tambin puede ser
confundido con Entoloma lividum que causa gastroenteritis
severa (5).
Tricholoma (figura 15) es otro gnero de hongos que micorriza, fueron
descriptas algunas especies simbiontes de Nothofagus en el sur del pas y
otras de la zona subtropical (9) . Tienen laminillas y esporos blancos, y
carecen de anillo. Entre las especies comestibles que crecen bajo los pinares
se encuentran T. terreum, T. flavovirens y T. matsutake. Algunos son txicos
como T. sejunctum que produce trastornos intestinales (16). T. fusipes
micorriza con varias especies de Nothofagus (9) .
Omphalotus olearius (figura 6) es una especie txica de color amarillo o
anaranjado en su totalidad, con laminillas bien definidas que bajan por el
pie. Crece sobre troncos (5) . Contiene iludina que provoca gastroenteritis severa (10) .
Puede ser confundido con Cantharellus
cibarius.
Todas las especies del gnero Psilocybe
y algunas de Gymnopilus y Panaeolus
(figura 16) poseen las substancia
alucingenas psilocina y psilocibina (10).
G. pampeanus (= G. spectabilis) tiene color
anaranjado y crece en racimos sobre
tocones de eucaliptos (15).

Cortinarius (figura 17) es otro gnero de hongos


micorrizantes, la mayora txicos o sin valor
culinario, pero algunas especies son comestibles
como C. albidoviolaceus (7) y C. magellanicus (9) .
Cuando se rompe la membrana que une al pleo
con el pie, quedan restos en el borde que asemejan
una cortina, generalmente fugaz. C. orellanus y
otros producen dao hepatico y renal pues
contienen orelanina y cortinarinas (10) .
Lentinus edodes (figura 18)
es una especie asitica
comestible (shii-take) que
crece sobre residuos
lignocelulsicos. Las laminillas y los esporos son blancos. Se
cultiva en muchos lugares (8) .
Pleurotus ostreatus (figura 19) crece en racimos sobre los troncos
podridos,. El pleo carnoso tiene 8 a 13 cm de dimetro y es de
color pardo-oliva que se obcurece con el tiempo. Las laminillas y
los esporos son blancos. Las laminillas bajan por el pie
8 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7

(decurrentes), el que es lateral u excntrico (16). P. eryngii y P. laciniato -crenatus son otras
especies comestibles, la ltima es nativa (15) .

Russulales
Russula (figura 20) tambin es un gnero micorrizante. Algunas
especies son comestibles como R. cyanoxantha, pero la mayora de las
especies tienen sabor acre u olor ftido por ejemplo R. foetens o son
txicas, tal como R. emetica que causa gastroenteritis (5). Se han descripto
especies propias de la Patagonia (R.
nothofaginea, R. fuegiana), algunas
relacionadas a Nothofagus (9) .

Boletales
Boletus edulis (figura 21) tiene un pie de 5 - 15 cm de
alto y un pleo carnoso, pardo, de 10 - 15 cm de
dimetro. Por el envs se ven los tubos donde se
encuentran los basidios. El pie est recubierto con una
red de finas venas, blancas al comienzo, que se tornan
amarillo-verdoso con el tiempo. Una especie comestible nativa
es B. loyo que micorriza con Nothofagus (12) . Algunos tienen
sabor amargo y otros son txicos, como por ejemplo B. satanas
que causa trastornos gastrointestinales (16) . Suillus (figura 21) es
tambin micorrizante de conferas, por ejemplo S. luteus y S.
granulatus (17) .

Poriales
Laetiporus sulphureus (figura 22) tiene un basidioma en
repisa, de color amarillo azufre, en el reverso se encuentra el
himenio en el reborde de tbulos o poros. Se presenta en
racimos y provoca la podredumbre parda de muchas maderas
(11). Fistulina antarctica es otro hongo comestible en repisa (9) .

Lycoperdales
Entre los bejines o basidiomas cerrados, Langermania gigantea
es una especie grande (de 8 a 51 cm de dimetro), globosa, de
color blanco-crema, inconfundible. Los esporos nacen en
cavidades internas y una vez maduros el pice se disuelve
dando lugar a la salida de los esporos. Es comestible mientras el
interior est blanco (7) .
Lycoperdon perlatum y L. piriforme (figura 23) son dos especies comestibles de este
gnero que crece sobre restos lignocelulsicos, generalmente en los bosques. Son
comestibles en estado juvenil. Cuando maduran tienen esporos pardos que se libera n
por una abertura del pice (7) .
Sclerodermatales
Entre otros bejines se encuentra Scleroderma (figura 23), un gnero micorrizante, con
un peridio de consistencia coricea, olor desagradable y txico (5) .

7.3. Los hongos micorrizantes


A modo de ejemplo de la diversidad de especies micorrizantes, se da una nmina de
especies de basidiomicetos que micorrizan con Pinus sylvestris y P. strobus, y a
continuacin las plantas que hospedan a especies del zigomiceto Glomus.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 9

Lista de hongos que forman ectomicorrizas con especies de Pinus (20)


P. sylvestris P. strobus
gneros especies gneros especies
Amanita muscaria, pantherina Amanita muscaria
Coenococcum graniforme Boletinus pictus
Clitopilus prunulus Boletus rubellus
Cortinarius glaucopus, mucosus Cantharellus cibarius
Lactarius deliciosus, helvus Cenococcum geophilum
Lyophyllum immundum Gyrodon merulioides
Rhizopogon roseolus, luteolus Gyroporus castaneus
Rhodophyllus rhodopolius Lactarius chrysorrheus,
deliciosus
Russula emetica Russula lepida
Scleroderma aurantium Scleroderma aurantium
Suillus bovinus, flavidus, granulatus, Suillus granulatus, luteus
luteus, variegatus Tuber maculatum, albidum
Tricholoma flavobrunneum, flavovirens, Endogone lactiflua
imbricatum, pessundatum,
saponaceum, vaccinium

Formacin de micorrizas por especies de Glomus (20)


especies hospedantes comprobados por cultivos en macetas
G. mosseae Allium cepa, Fragaria vesca, Sambucus caerulea, Triticum aestivum, Zea
mays
G. monosporus Bellis perennis, Lycopersicum esculentum, Maianthemum dilatatum,
Trillium ovatum, Zea mays
G. microcarpus Fragaria spp., Geum sp., Juniperus communis, Phleum pratense, Rubus
spectabilis, Taxus brevifolius, Thuja plicata, Zea mays
G. fasciculatus Allium cepa, Clintonia uniflora, Crataegus douglasii, Deschampsia
danthioides, Epilobium watsonii, Fragaria vesca, F. chiloensis. Geum sp.,
Hypochaeris radicata, Maianthemum dilatatum, Malus sp., Mentha
arvensis, Plantago lanceolata, Potentilla sp., Rubus spectabilis, R.
ursinus, Sitanion lystrix, Stachys mexicana, Taxus brevifolius, Thuja
plicata, Zea mays
G. macrocarpus var. macrocarpus Allium cepa, Epilobium glandulosum, Fragaria chiloensis,Galium aparine,
Stachys mexicana, Trifolium repens, Triticum aestivum, Zea mays
G. macrocarpus var. geosporus Fragaria sp., Lycopersicum esculentum, Zea mays
G. caledonius Triticum sp., Zea mays

Las ventajas nutricionales que obtiene cada integrante de una asociacin micorrzica
explica, en parte, el xito de tal interrelacin. Algunos hongos micorrzicos pueden
producir auxinas o sea hormonas que estimulan el crecimiento de los vegetales, y otros
producen antibiticos. Esto ayuda a regular el microambiente alrededor de las races y
contribuye a prevenir la infeccin de las plantas. Experimentalmente se demostr que
los hongos micorrzicos proveen proteccin contra Phytophthora infestans (2) .
Pero, a pesar de los beneficios que las asociaciones micorrzicas de ciertos hongos
confieren a determinadas plantas, pueden causar un dao considerable a otros
vegetales. Incluso a veces las asociaciones micorrzicas se establecen an cuando bajo
condiciones diferentes esos mismos hongos pueden actuar como patgenos agresivos.
Esto ilustra la naturaleza compleja de la asociacin biolgica y tambin indica que las
plantas poseen mecanismos para prevenir el dao potencial causado por su socio
fngico (20).
10 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7

Las plantas tienen una variedad de defensas contra la infeccin y sta puede ser
moderada en ejemplares que tienen asociaciones micorrcicas. Los compuestos
fenlicos y ciertas protenas protectoras (quitinasas y peroxidasas) producidas por la
planta pueden tener un efecto antimicrobiano significativo. Pero, aquellos ejemplares
que crecen sin estar asociados a un hongo forman ms de estos compuestos que las
plantas micorrizadas, pues previenen la invasin fngica (2) .
Los hongos que forman asociaciones micorrcicas con rboles en bosques son
tpicamente basidiomicetos superiores. Es poca la especificidad de estas asociaciones ya
que varios rboles pueden formar micorrizas con un hongo dado y viceversa. Ms
raramente los ascomicetos forman micorrizas. En contraste a las micorrizas de los
rboles, estn las formadas por la orqudeas. Cada una de las diferentes especies de
orqudeas tiene una alta especificidad por un hongo particular que generalmente es un
zigomiceto. El grado de interdependencia es tal que en muchos casos ninguno de los
asociados puede ser cultivado sin el otro, pues forman una verdadera simbiosis (20) .
7.3.1. Inoculacin de plantines
En general los hongos ectomicorrcicos deben incorporarse a las plntulas de rboles
y plantas ornamentales, cuando se desarrollan en medios artificiales con vermiculita o
arena. La falta de micorrizacin acarrea problemas en el transplante, excepto en los
casos en que el suelo contenga especies fngicas (21).
Las races se infectan con hongos de las micorrizas vesculo-arbusculares por las hifas
desarrolladas de propgulos presentes en el suelo, los que pueden ser esporos o
estructuras de resistencia presentes en las races muertas (20).
Las primeras tcnicas de inoculacin consistan en el transporte de suelo desde la
zona de origen de la plantacin al vivero, pero se corra el riesgo de llevar tambin
microorganismos patgenos. Para inocular con cultivos puros, el substrato (suelo,
turba) debe ser previamente pasterizado o fumigado con el fin de disminuir la
poblacin fngica nativa que podra competir con el inculo (21) .
Los hongos son incorporados al substrato de siembra con trozos de races
micorrizadas, pedazos de ascoma o basidioma, o micelio
obtenido in vitro. El agregado de micelio ofrece mayores
garantas en el caso de hongos que se desarrollan bien en
cultivo axnico. El primer paso de toda inoculacin
consiste en la seleccin del hongo. La introduccin de
especies de Pisolithus en viveros incrementa la calidad de
las plntulas de pinos, y especialmente se lo usa para
suelos muy erosionados, pobres en materia orgnica y
nutrientes minerales (20).
La figura 24 muestra los pasos de la produccin del
inoculante para micorrizar rboles con hongos
ectomicorrcicos. En cambio para la preparacin del
inculo de micorrizas vesculo-arbusculares se requiere la
separacin de los esporos del suelo por tcnicas de
tamizado hmedo y flotacin, luego se colocan en una
caja, la que se ubica a 2-3 cm ms abajo de las semillas de
Allium cepa en una maceta con suelo y arena (1+2 vol.) a
pH ligeramente cido. A los 3-4 meses se extraen las
races colonizadas, se las secciona y aade al substrato
Figura 7-24. Aislamiento del micelio con esporos, y se homogeneiza. Se mantiene a un 50% de
y produccin de inoculante (21) la capacidad de campo y a temperaturas de 5 -10C (21) .
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 11

7.4. Cultivo del champin


Algunos hongos (Agaricus, Coprinus) crecen sobre substratos que deben
descomponerse en parte para que desaparezcan los azcares solubles favorecedores de
los mohos y bacterias competidores (8) .

7.4.1. Obtencin del micelio


El primer paso lo constituye la obtencin del micelio de la especie a cultivar, lo que
coincide con la tcnica descripta en la figura 24. Una vez logrado el cultivo puro del
hongo, se lo repica en semillas esterilizadas, por ejemplo sorgo o trigo (8) .
Los granos deben cocinarse durante unos veinte minutos (1 kg en 1,5 L agua), se
escurren y mezclan con carbonato de calcio y yeso (3,5 g y 13 g respectivamente, por
cada kg de grano cocido). Luego se llenan los frascos y se esterilizan en autoclave.
Una vez repicado el micelio del hongo en los granos, se incuba a unos 25C hasta que
todo el contenido del frasco haya sido invadido por el mismo. Para mantener los
granos separados se debe agitar con frecuencia los frascos. Luego se los puede
mantener en el refrigerador a menos de 4C, no ms de un mes (8) .

7.4.2. Preparacin del compost


La obtencin de un substrato adecuado es una fase crtica en la produccin de
championes. Tradicionalmente se lo preparaba de paja de trigo y estircol de caballo,
pero se pueden usar otros residuos (23) . Se agrega un suplemento para obtener un 2-
2,5% de nitrgeno. Como la paja de trigo es deficiente en potasio se aade cloruro o
sulfato de potasio. El yeso mejora la textura final del compost y evita la compactacin,
adems de neutralizarlo (22) .
El objetivo del compostado es transformar un subs trato no especfico en uno
altamente selectivo conveniente para la proliferacin de A. bisporus y otros agricos. El
proceso se divide en dos fases. La primera ocurre al aire libre, o bajo un tinglado para
evitar las lluvias, en largas pilas de aproximadamente un metro de alto y dos de ancho.
Durante esta fase que dura entre 7 y 10 das, se produce la termognesis microbiana
alcanzando una temperatura interna de hasta 70 - 80C. Las condiciones aerbicas se
mantienen volteando el compost a intervalos regulares. La importancia de esta primera
fase es lograr que el substrato sea inadecuado para los mohos que podran afectar a la
produccin del champin (22) . La cantidad de agua aadida debe ser tal que humezca
el material en compostaje, pero que no escurra lquido al tomarlo con las manos (24) .
La segunda fase ocurre dentro de un galpn aislado. El compost es colocado en
cajones, en capas de 15 a 20 cm de altura. Estos que se apilan dejando huecos entre ellos
para permitir el pasaje de los gases. Aqu contina la actividad microbiana elevando la
temperatura a 50-60C, con una adecuada ventilacin. Esta fase dura 3 a 7 das. Se
producen nutrientes por la actividad microbiana, especialmente protenas, y se elimina
los restos de amonio o aminas producidos durante la primera fase (22).
Durante el compostado se pasteriza el interior del compost matando esporos
fngicos, caros, insectos y nemtodos. Se suele acelerar el proceso introduciendo
vapor de agua a 60 - 70C. La temperatura del compost en la segunda fase no debe
pasar los 60C (24).
7.4.3. Siembra del inculo.
Se obtiene el inculo haciendo crecer el micelio del champin sobre granos
esterilizados adicionados de tiza (carbonato de calcio) para mantener el pH. Estos
granos invadidos por el hongo se mezclan con el compost (22) .
12 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7

7.4.4. Produccin
Durante el primer perodo o de crecimiento del inculo la temperatura de los locales
est entre 21 y 28C. Cuando el micelio coloniza todo el substrato, unos 10-12 das
despus de la siembra, ste se cubre con una capa delgada de turba sin esterilizar
mezclada con tiza (pH 7 - 8) para evitar la desecacin (22) y la temperatura ambiente se
reduce a 18C. Cuando aparecen los primeros botones de A. bisporus se baja a 15C. A.
bitorquis crece a mayor temperatura (23). La humedad del ambiente se mantiene por
encima del 70% (24) . Las bacterias de la turba liberan iones ferrosos esenciales para el
desarrollo de los basidiomas (22) .
Durante el perodo de crecimiento del micelio se requiere cambiar el aire una o dos
veces al da, pero despus de colocar la cobertura se aumenta la ventilacin haciendo 2
a 3 renovaciones del aire por hora, pues una concentracin de 1% de CO 2 provoca la
deformacin de los championes (24). El aire pasa sobre los cajones a 100 - 250
mm3 /min. El micelio que est creciendo produce metabolitos voltiles tales como
etanol, aldehdo actico, acetato de etilo y dixido de carbono (22). Para mantener la
humedad se riega con frecuencia mediante un rociador de niebla sin empapar la
cobertura.
Los primeros basidiomas se recogen a los 15-25 das despus de colocar la cobertura.
La produccin depende de numerosos factores y oscila de 5 a 8 kg por m2 y la
conversin biolgica es del orden de 50 kg de championes frescos por 100 kg de paja
seca (6). El perodo de cosecha es de unas seis semanas, al final del cual se vacan las
bandejas y el compost usado se aleja del local de produccin para usarlo como abono
(24).
En este proceso complicado hay tres hechos principales: la provisin del substrato
conveniente, la produccin de un inculo adecuado para incorporarlo al compost y la
induccin de la formacin de los basidiomas por la cobertura y la temperatura.
El compost debe contener fuentes de carbono y nitrgeno adecuadas as como de
minerales, vitaminas y acetato. La fuente carbonada es provista por la paja en forma de
celulosa, hemicelulosa y lignina. El compostado remueve a los carbohidratos simples
que podran ser usados por mohos competidores, permitiendo el desarrollo de hongos
celulolticos como los agricos. Tambin A. bisporus necesita acetato para formar
algunas macromolculas esenciales (22) . ste es formado por la actividad microbiana
que adems origina grasas y aceites que constituyen un reservorio de acetato.
A. bisporus requiere protenas como fuente de nitrgeno (22) . Los compuestos simples,
como la urea, presentes en la mezcla inicial son convertidos a protena microbiana. Los
compuestos minerales de potasio, fsforo, magnesio, calcio, hierro y microelementos se
encuentra n en la paja, el estircol y los aditivos o bien son aadidos. Adems requiere
algunas vitaminas, como biotina y tiamina, que son formadas por otros organismos
durante el compostado.
El micelio del hongo produce metabolitos voltiles que estimulan el cr ecimiento de
bacterias en la capa de recubrimiento (Arthrobacter, Bacillus, Rhizobium), particularmente
especies de Pseudomonas como P. putida que parece ser esencial para la produccin de
championes. Adems, la capa de recubrimiento realiza otras funciones como la de
proporcionar un medio pobre en nutrientes donde se desarrollan los cordones
miceliales (4) .

7.5. Cultivo de hongos lignvoros


Volvariella volvacea es un hongo cultivado en China sobre paja de arroz y en el sudeste
asitico sobre otros materiales como hojas de banana, bagazo de caa de azcar y
residuos de algodn (22) . Pleurotus se cultiva con una eficiencia de 63 kg de basidiomas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 13

frescos por 100 kg de substrato seco (6) tanto sobre troncos cortados o tocones, como
sobre paja (8) .

7.5.1. Preparacin del substrato


Se puede aprovechar la paja de cereales, especialmente trigo o centeno, marlos de
maz, aserrn de maderas blandas (8) , tambin hojas de bananero, bagazo de caa de
azcar o de algodn (22). Se pican o muelen y se mezclan con 3-5% de yeso o 1-2% de
carbonato de calcio. Los residuos se mojan hasta que al tomar
un manojo no gotee (70-80% de agua) y luego se agrega el yeso
o el carbonato. El pH conveniente oscila entre 6 y 6,5. El
tratamiento trmico consiste en una pasterizacin anloga a la
empleada para el compost del champin (8) .

7.5.2. Inoculacin y produccin de las setas


Cuando el substrato se ha enfriado hasta a unos 25 -30C y
tiene un 70% de humedad se mezcla con 1-4% del micelio
comercial sobre granos de cereales, y se llenan bolsas plsticas
negras, o no, que se colocan sobre alambres separadas unas de
otras. La siembra debe hacerse de la forma ms limpia posible.
La humedad relativa dentro del local deber ser del 90%.
Una vez que el micelio ha cubierto al substrato, se perforan
las bolsas con agujeros de unos 2 cm de dimetro o bien se las
quita, para permitir el desarrollo de los basidiomas a la luz. La
concentracin de CO2 debe ser menor que 600 ppm y el da
anterior a la cosecha la humedad ambiente debe ser reducida
Figura 7-25. Cultivo de hongos al 70% (6) .
lignvoros (8).

7.5.3. Cultivo sobre troncos


Los troncos ms adecuados son los de madera blanda, por ejemplo lamo y sauce. Se
cortan al final del otono o en invierno y se guardan en un sitio fresco. En primavera se
coloca los troncos en una zanja intercalando una capa de micelio preparado sobre
granos u otro substrato, tal como se muestra en la figura 25. Despus se tapa la zanja
con tabla o chapa y se cubre con tierra. Si la temperatura dentro de la zanja llega a los
25C y la humedad es alta, los troncos sern invadidos por el micelio. Para asegurar la
humedad se suele drenar agua en la zanja. Luego de unos tres meses se sacan los
troncos cubiertos de una costra blanquecina, se entierran en parte protegidos del viento
y a la sombra. Se riegan lo suficiente con una fina lluvia. En otoo empiezan a salir las
setas, hecho que se repite durante dos o tres temporadas (6) .

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