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UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS


ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA

METABOLISMO FERMENTATIVO, ESTUDIO DEL BOMBEO DE PROTONES Y


DE LA CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES EN LEVADURAS

FERMENTATIVE METABOLISM, STUDY OF PROTON PUMP AND


ELECTRON TRANSPORT CHAIN IN YEAST

Correa Fuentes Juanita Del Pilar


Sorac Prez Gina Yasmin

Fecha de entrega del informe: 06-05-2015

Resumen: En esta prctica de laboratorio, se busca conocer y entender los


mecanismos bioqumicos subyacentes a los procesos microbianos de sntesis,
utilizando modelos matemticos que describen el comportamiento microbiano
(fermentacin) como: crecimiento, sntesis y cinticas de inactivacin.

Palabras claves: Fermentacin, levadura, microorganismos.

Abstract: In this lab, we seek to know and understand the underlying biochemical
mechanisms to microbial synthesis processes using mathematical models
describing the microbial behavior (fermentation) as: growth, synthesis and
inactivation kinetics.

Keywords: Fermentation, yeast, microorganisms.

Introduccin
Antes de la revolucin metodolgica La fermentacin es un tipo de
de la biologa molecular, la catabolismo parcial, que se
identificacin de microorganismos caracteriza por ser un proceso de
dependa del anlisis morfolgico y oxidacin incompleta, tpico de los
bioqumico. En la actualidad, estas organismos anaerbicos, pues se
tcnicas se complementan con los realiza sin la intervencin del oxgeno.
avances moleculares y tcnicas El proceso de fermentacin no solo
informticas para permitir un mayor incluye la desasimilacin como la
conocimiento y una mejor formacin de alcohol, etanol-acetona,
identificacin y clasificacin de los cido lctico, etc. Sino tambin la
microrganismos, sin embargo: el produccin industrial de vinagre, cido
anlisis bioqumico es el nico que ctrico, enzimas, penicilina, etc. Todos
permite una aproximacin al estudio estos productos son el resultado de
de su metabolismo, informacin de procesos microbianos y se llaman
gran importancia para determinar productos de fermentacin.
aplicaciones industriales.

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Durante la fermentacin, le energa Se puede ver que la fermentacin


obtenida procede, igual que en la alcohlica es desde el punto de vista
respiracin aerobia, de las reacciones energtico una reaccin exotrmica,
de xido-reduccin habidas durante el se libera una cierta cantidad de
catabolismo de la glucosa (glucolisis), energa.
pero en la fermentacin las coenzimas Un clculo realizado sobre la reaccin
reducidas no ceden sus electrones a qumica muestra que el etanol
una cadena cuyo aceptor final es el resultante es casi un 51% del peso, los
oxgeno, sino que los ceden rendimientos obtenidos en la industria
directamente a un compuesto alcanzan el 7%.
orgnico que se reduce y el e producto
caracterstico de cada fermentacin. (Ver Anexo A)

Inculos de levaduras comerciales Resultados y discusin


son ampliamente usados en la Efecto de la fuente de carbono.
industria de las bebidas alcohlicas,
sin embargo es preferible utilizar
cepas autctonas, las cuales estn
adaptadas a los medios de
fermentacin de cada rea. Aunque se
han encontrado muchos gneros de
levaduras en fermentaciones, la
especie Saccharomycerevisae es la
principal responsable de la
fermentacin alcohlica, as como de La fermentacin alcohlica es un
la produccin de la mayora de los proceso biolgico de fermentacin en
compuestos aromticos. Algunos de plena ausencia de aire (oxgeno - O2),
los criterios de seleccin de las cepas originado por la actividad de algunos
se basan en su capacidad microorganismos que procesan
fermentativa, medida como los hidratos de carbono (por regla
produccin de etanol, acidez y general azcares: como por ejemplo
consumo de azucares. la glucosa, la fructosa, la sacarosa,
sirve con cualquier sustancia que
La fermentacin completa a la tenga la forma emprica de la glucosa,
glicolisis y hace posible producir ATP es decir, que sea una Hexosa.) para
continuamente en la ausencia del obtener como productos finales:
oxgeno. Por la oxidacin del NADH un alcohol en forma de etanol (cuya
producido en la glicolisis, la frmula qumica es: CH3-CH2-OH),
fermentacin regenera el NAD+, el dixido de carbono (CO2) en forma
cual interviene otra vez para producir de gas y unas molculas de ATP que
ms ATP. consumen los propios
microorganismos en su metabolismo
celular energtico anaerbico (2)

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Las concentraciones de azcares


afectan a los procesos de osmosis
dentro de la membrana celular.
Los monosacridos como la dextrosa (Ver anexo B)
y la fructosa son molculas de un solo
anillo. Los disacridos como la Reconocimiento de intermediarios
sacarosa, la maltosa y la lactosa estn metablicos.
formados por dos monosacridos
unidos. Al mezclarse con la levadura,
Reconocimiento del piruvato
la que produce ms fermentacin es
La aparicin de un anillo rosado
glucosa (y por consiguiente ms
indicar la presencia de grupos
dixido de carbono) seguida por la
tilicos.
sacarosa. La fructosa, maltosa y la (Ver anexo C)
lactosa producen una reaccin muy
pequea.
Reconocimiento del etanol.
La aparicin de un anillo rosado
Si bien el proceso completo descrito
indicar la presencia de grupos
simplificado anteriormente explica los
tilicos.
productos resultantes de la
fermentacin etlica de una hexosa,
(Ver anexo D)
cabe destacar que el proceso se
puede detallar en una gliclisis previa Patrn
gobernada por un conjunto de TUBO 1 2 3 4
etanol
enzimas en la que se obtiene Anillo Anillo
rosado rosado
Piruvato
(grupos (grupos
tiol) tiol)
Etanol (-) (+) (-) (-) (+)

Metabolismo del piruvato: El piruvato,


producto final de la glucolisis, se
metaboliza por diferentes vas para
producir etanol, lactato o acetil-
coenzima A, en dependencia de las
necesidades celulares, del tejido, del
organismo, etc. El piruvato se
La concentracin excesiva de hidratos transforma en: etanol + CO2, que son
de carbono en forma de los productos finales de la
monosacridos y disacridos puede fermentacin alcohlica realizada por
frenar la actividad bacteriana. De la algunos organismos (levaduras).
misma forma la baja concentracin
puede frenar el proceso. Las Reaccin global:
concentraciones lmite dependen del
tipo de azcar as como de la levadura Glucosa + 2Pi + 2 ADP + 2 H+ ------>
responsable de la fermentacin. 2 etanol + 2 CO2 + 2 ATP + 2 H2O

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Despus de unas semana de total


reposo, se abri el bote para verificar
si la fermentacin se llev a cabo de
una manera correcta, se observ que
la fermentacin sali bien, debido a
que el olor que despeda era a alcohol,
podra decirse que a sidra, pero de
igual manera al realizar las diferentes
se pruebas se observ que:
- No hubo desprendimiento de gas.
- Al acercar el fosforo al fermentado,
se avivo ms la llama.
- No se formaron los cristales.

Lo anterior se puede explicar, debido


a que el proceso de fermentacin
excedi los das ptimos para su
estudio.
Fermentacin alcohlica.
La fermentacin alcohlica con la Glicolisis anaerobia.
emisin de ciertas cantidades de
etanol se produce de forma
espontnea en la naturaleza siempre
que se encuentre un azcar y una
atmsfera pobre de oxgeno, es por
esta razn que ocurre
espontneamente en el interior de
algunas frutas que se puede decir Volumen CO2 vs Tiempo
sufren un proceso de maduracin 25
anaerbica.
20
tiempo (min)

Se tiene que estar revisando 15


peridicamente, ya que pueden llegar 10
a formarse pequeas bombas, las
cuales se forman debido a que se 5
produce gran cantidad de CO2, el cual 0
pesa ms que el aire, y puede llegar a 0 10 20 30 40
crear bolsas que desplazan el oxgeno volumen CO2 (ml)
de los recipientes donde se produce la
fermentacin. En caso de que as sea, Como podemos ver en la grfica a
se es recomendable abrir unos medida que aumenta el tiempo es
segundos la tapa para que se ventile. mayor el volumen de dixido de
carbono.

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La degradacin de la glucosa por la


va glucoltica produce piruvato. ste
en (1) condiciones anaerbicas puede
seguir una fermentacin y produce:
etanol, lactato, etc y en (2)
condiciones aerobias se producira
una oxidacin completa,
degradndose hasta CO 2 (acetil-
CoA)(3).

DESCARBOXILACION OXIDATIVA
DEL PIRUVATO

En condiciones aerobias u oxidativas


el piruvato se convierte en acetil-CoA
+ CO2; el acetil-CoA se incorporar al
ciclo del cido ctrico o a otras vas
metablicas. La determinacin de los factores que
En eucariotas y procariotas, la limitan la gliclisis fermentativa del
gluclisis ocurre en el citosol de la etanol son complejos debido a la
clula. interrelacin existente y a la
naturaleza de los parmetros
intervinientes durante el proceso de
fermentacin. Algunos de ellos se
deben tener en cuenta, de los ms
importantes como son:
* Concentracin de etanol resultante
* Acidez del substrato
* Concentracin de azcares
* Contacto con el aire
* La temperatura
* Ritmo de crecimiento de las cepas

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El NaF es un potente inhibidor de la La velocidad puede ser medida


actividad enzimtica de la enolasa, el mediante un electrodo de oxgeno.
catalizador para el paso 9 de la
glucolisis.(4) Gran parte del conocimiento de la
funcin mitocondrial ha resultado de
Estudio del bombeo de protones estudios con compuestos txicos.
por levaduras, efecto de los Inhibidores especficos se han usado
inhibidores de la cadena de para distinguir el sistema de transporte
transporte de electrones y de los de electrones del sistema de
desacoplantes. fosforilacin oxidativa, y ha ayudado a
definir la secuencia de los
transportadores redox en la cadena. Si
la cadena se bloquea en un punto,
todos los transportadores anteriores
quedan ms reducidos, y los
posteriores ms oxidados.(5)

Conclusiones

Se debe estar seguros que al


pH vs. Tiempo momento de realizar la
fermentacin, sta no se encuentre
7,00
contaminada, por diversos
6,50 factores, ya que ese pequeo
pH

6,00 detalle, puede llegar a arruinar el


5,50 proceso, ocurriendo una
5,00 putrefaccin en vez de una
pH (antes 0 10 20 30 fermentacin. Adems de tenerla
de
inhibidor)
en continua vigilancia.
Tiempo (mins)
En la reaccin de fuente de
Control Dinitrofenol Ferricianuro de K
carbono se observ que el
carbohidrato que liber ms CO2
fue la glucosa.
El uso de inhibidores de la cadena ha
permitido trazar el paso de los Se observ que en el estudio del
electrones a travs de la cadena y bombeo de protones por
determinar el punto de entrada de levaduras, el efecto de los
diversos sustratos. La velocidad a la inhibidores a medida que
cual el oxgeno es consumido por una aumentaba el tiempo el pH
suspensin de mitocondrias es una disminua.
medida del funcionamiento de la
cadena de transporte de electrones.

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Bibliografa (4) VOET. 2a edicin. Fundamentos


de bioqumica. Pag 313
(1) (5)
ROBERTO MARTINEZ. Quimica MATHEWS C. 1992. Bioqumica.
un proyecto de ACS. Paginas 398-433
(2) ROBERTO MARTINEZ. Quimica
un proyecto de la ACS. Pag 418
(3) ROBERT MORRISON. Quinta
edicin. Quimica Orgnica. Pag
629

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Anexos

Anexo A

Fig1. Proceso de fermentacin.

Anexo B

Anexo C

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Anexo D