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21 Bacterias anaerobias
C. Rivas, M. Mota
Introduccin
La presencia de una atmsfera terrestre rica en oxgeno permiti a los seres vivos evolucionar
desarrollando un metabolismo aerbico, el cual se caracteriza por ser una forma muy eficiente
de obtencin de energa. Las bacterias anaerobias precedieron largamente a las aerbicas y sin
duda, predominaron largamente en un mundo vivo que comenzaba a desarrollarse.
El reconocimiento de la naturaza anaerobia de determinados microorganismos se acredita
a Pasteur, quien en 1863 observ que la motilidad de ciertas bacterias desapareca con la
exposicin al aire.
El conocimiento sobre las bacterias anaerobias es poco y relativamente reciente, ya que
para poder lograr condiciones de anaerobiosis en el laboratorio se necesitaban, hasta los aos
60, equipos costosos y tcnicas bacteriolgicas muy dificultosas. A partir de la introduccin
de sistemas simples para producir anaerobiosis con equipos y reactivos de bajo costo, el co-
nocimiento de los anaerobios se desarrolla intensamente. Aun as, no hay un gran nmero de
microbilogos que se dediquen al tema, la taxonoma est en permanente revisin e infinidad
de aspectos se mantienen oscuros.
Definiciones
Anaerobios son aquellos grmenes que slo pueden desarrollarse en ausencia de cantidades
significativas de oxgeno (O2) y bajo condiciones de potenciales redox (Eh) muy reducidos,
por tanto son estrictos en cuanto a sus exigencias de medio ambiente. Las formas vegetativas
mueren cuando son expuestos al oxgeno molecular libre en la atmsfera, aunque el grado
de resistencia bajo estas condiciones es variable (aerotolerancia). Los esporos bacterianos no
son afectados por tratarse de formas biolgicas metablicamente inertes y con muy escasa
proporcin de agua en su composicin.
Si bien se considera bacteria anaerobia aquel germen que puede crecer slo en ausencia
de oxgeno, la sensibilidad frente al oxgeno vara ampliamente de una especie a otra. As,
distinguimos bacterias microaerfilas, aerotolerantes y anaerobios estrictos u obligados. Las
bacterias microaerfilas resultan daadas por niveles altos de oxgeno como el atmosfrico
(21%) y requieren niveles bajos de O2 para crecer, en el rango de 2 a 10%. Anaerobios aeroto-
lerantes son aquellos microorganismos que toleran exposiciones breves al oxgeno atmosfrico
desarrollando ptimamente en condiciones anaerobias. Los anaerobios estrictos no toleran
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Potencial de xido-reduccin
El potencial de xido-reduccin (Eh) de una pareja redox es la medida en voltios de la ten-
dencia espontnea a donar o recibir electrones por parte de uno de los integrantes de la pareja
(flujo de electrones). Una pareja redox posee una forma reducida (dador de electrones) y una
forma oxidante (receptor de electrones): reductor <---> oxidante + electrones.
En consecuencia cuanto menor sea la cantidad de formas oxidantes menor o ms bajo
ser el potencial redox. Es por esto que el oxgeno debe ser eliminado imprescindiblemente
del microclima de desarrollo de las bacterias anaerobias (O2 atmosfrico y en solucin), ya
sea en los medios de cultivo o en el medio natural. An ms, el descenso del potencial de
xido-reduccin debe afirmarse con la presencia en el medio de sustancias reductoras que
superen en gran nmero a las oxidantes.
Oxgeno sensibilidad
Si bien el oxgeno es potencialmente txico para cualquier forma de vida, los anaerobios
son intolerantes al mismo aunque en diferentes grados. Existe un espectro que va desde los
extremadamente intolerantes (aerointolerantes) hasta los aerotolerantes moderados los cuales
pueden sobrevivir a la presencia de O2 durante breves perodos. Esta diferente relacin con el
oxgeno parece deberse a varios factores. En primer lugar, el oxgeno es un poderoso agente
oxidante, es decir, un vido receptor de electrones, por lo tanto su presencia en solucin es in-
compatible con potenciales redox bajos. En esta situacin el flujo de electrones se ve interferido
por un receptor extrao al usual de los grmenes provocando shunts letales. En segundo lugar,
el oxgeno puede interactuar directamente con enzimas o cofactores, a travs de la oxidacin
de grupos qumicos sensibles (por ej.: sulfhidrilos), causando inactivaciones irreversibles. En
tercer lugar y aparentemente, la causa ms importante de la oxgeno-toxicidad, se atribuye a
la produccin de sustancias txicas derivadas de la reduccin parcial de la molcula de O2.
Estos productos son el radical superxido, perxido de hidrgeno y radical hidroxilo:
Estos productos son extremadamente txicos porque son agentes oxidantes poderosos
y provocan destruccin de constituyentes celulares rpidamente. Los neutrfilos y macr-
fagos utilizan estos productos txicos del O2 para destruir los patgenos invasores. Muchos
microorganismos poseen enzimas que los protegen de estos productos txicos del oxgeno.
Las bacterias aerobias y las facultativas poseen las enzimas superxido dismutasa (SOD) y
catalasa, que catalizan las siguientes reacciones respectivamente:
2O2- + 2H+ superxido
dismutasa
O 2 + H 2 O2
2H2O2 catalasa
2H2O + O2
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 357
Generalidades
BIOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS
Los anaerobios en general poseen un metabolismo de tipo fermentativo, en el cual sustancias
orgnicas son los aceptores finales de electrones, aunque tambin pueden obtener energa a
partir de la respiracin anaerobia. Otras caractersticas comunes a los microorganismos anae-
robios son sus requerimientos nutricionales complejos, su lento crecimiento y su labilidad, lo
cual, sumado a sus requerimientos atmosfricos estrictos (de O2 y CO2) hace que su aislamiento
sea difcil; adems, al ser la mayora de las infecciones mixtas (aerobios y anaerobios) otros
microorganismos menos exigentes y de crecimiento ms rpido pueden crecer e inhibirlos si
no se toman las precauciones necesarias.
Los plsmidos estn ampliamente difundidos entre los anaerobios especialmente a nivel
de especies de Clostridium y Bacteroides. Un muy buen porcentaje de estos elementos no han
demostrado funciones especficas. Entre los plsmidos funcionalmente conocidos encontra-
mos:
Plsmidos que codifican la produccin de bacteriocinas. Similares a las colicinas, son
producidas por especies de Clostridium y Bacteroides.
Plsmidos toxignicos, ampliamente distribuidos entre las especies de Clostridium produc-
toras de exotoxinas (toxignicas). La correlacin fehaciente entre plsmido y produccin
de toxina no se ha podido establecer en muchos casos. El caso con ms evidencia de la
relacin plsmido-toxina es el de Clostridium tetani donde puede afirmarse que la toxina
tetnica est codificada en un plsmido.
Plsmidos que codifican la resistencia a los antibiticos. Existen evidencias de que entre
diferentes especies de Clostridium, Bacteroides y cocos anaerobios existen plsmidos de di-
ferente tamao que codifican la resistencia a macrlidos, tetraciclinas y cloramfenicol.
FACTORES DE VIRULENCIA
Se pueden separar en dos categoras segn su importancia. Por un lado existen las poderosas
toxinas producidas por los clostridios; por otro, una serie de estructuras y sustancias de mucho
menor poder patgeno que se observan en varias especies de microorganismos no esporulados.
Se conocen los lipopolisacridos de superficie de varias especies de Fusobacterium, Veillonella
y Bacteroides. Estas sustancias tienen una actividad endotoxina similar a las de los bacilos
gramnegativos facultativos. Su actividad es algo menos potente pero se ha demostrado su
capacidad (en Bacteroides) de participar en la produccin de abscesos y de causar hipercoagu-
labilidad. El polisacrido capsular de Bacteroides del grupo fragilis es otro factor de virulencia
importante, ya que se comporta en forma similar a las cpsulas de otras bacterias, es decir, le
confiere al germen la lanza y el escudo en cuanto favorece su poder invasivo y dificulta la
accin defensiva de los leucocitos polimorfonucleares. Aun ms, est claramente demostrada
su participacin en la formacin de abscesos.
Diversas enzimas producidas por los microorganismos anaerobios deben considerarse como
358 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
EPIDEMIOLOGA
Las bacterias anaerobias estn diseminadas en la naturaleza. La mayora de las bacterias
anaerobias que causan infecciones en humanos son parte de la flora normal de piel y mucosas,
superando en cantidad a las bacterias facultativas en el intestino por un factor de 1000:1,
mientras que en piel, boca, vas areas superiores y tracto genital inferior femenino la relacin
anaerobios-facultativos es de 5-10:1. Otros patgenos anaerobios como Clostridium botulinum y
Clostridium tetani se encuentran en suelos y no son considerados parte de la flora humana.
Aunque la transmisin persona-persona de C. difficile entre los pacientes hospitalizados
representa un gran problema, la mayora de las infecciones por anaerobios ocurren cuando
microorganismos de la flora normal del paciente acceden a un sitio normalmente estril
como resultado de la ruptura de alguna barrera anatmica. Por esto el conocimiento de esta
flora normal es importante pues nos permite sospechar qu microorganismos pueden estar
involucrados en determinado proceso infeccioso y en consecuencia, establecer una antibio-
ticoterapia emprica racional, as como seleccionar los medios de cultivo apropiados para el
aislamiento e identificacin bacterianos.
La tabla 1 muestra la frecuencia de los microorganismos anaerobios ms comunes como
flora normal humana en diferentes localizaciones.
Tabla 1. Incidencia de las bacterias anaerobias como ora normal humana
PielTracto res- Boca Intestino Genitales Uretra Vagina
piratorio externos
superior
Bacilos grampositivos esporulados
Clostridium 0 0 1 3-4 0 1 1
Bacilos grampositivos no esporulados
Actinomyces 0 2 2 1 0 0 0
Bifidobacterium 0 0 2 1 0 0 2
Eubacterium 1 1 2 3-4 d d 1
Lactobacillus* 0 0 2 2 0 1 3-4
Propionibacterium 3-4 2 1 1 d 0 2
Bacilos gramnegativos
Bacteroides 0 2 3-4 2 2 2 2
Fusobacterium 0 2 3-4 2 2 2 1
Cocos Gram positivos 2 2 3-4 3-4 2 1 2
Cocos Gram negativos 0 2 3-4 2 0 d 2
Tracto respiratorio superior incluye vas nasales, nasofaringe, orofaringe y amgdalas.(*) In-
cluye anaerobios, facultativos y microaerfilos, (d=desconocido) (0=no encontrados o raros)
(1=hallazgo irregular) (2=habitualmente presentes) (3-4=presentes en gran nmero).
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 359
RECOLECCIN DE MUESTRAS
Teniendo en cuenta que los anaerobios estn presentes en gran nmero en prcticamente toda
la superficie cutaneomucosa, es difcil muchas veces evitar la contaminacin de la muestras
con estos microorganismos. Es por esto que las siguientes muestras son inaceptables para
cultivar en anaerobiosis:
Exudado farngeo, nasofarngeo o bucal.
Expectoracin.
Secreciones obtenidas por aspiracin oro o nasotraqueal.
Cepillado o lavado bronquial (salvo el obtenido por catter de doble luz).
Contenido gstrico e intestinal (salvo excepciones).
Materias fecales (salvo para la bsqueda de C. difficile)
Exudado rectal.
Orina obtenida por sonda o espontneamente.
Exudados vaginales y cervicales.
Exudado uretral.
La expectoracin no debe cultivarse en anaerobiosis porque el esputo se contamina con
la flora anaerobia normal de la faringe y la boca en su pasaje al exterior; igualmente pasa con
el esputo obtenido por fibroscopa o los aspirados nasotraqueales ya que el tubo arrastra en
su introduccin flora normal en su extremo distal.
La orina emitida espontneamente o con sonda se contamina por la colonizacin natural de
la porcin distal de la uretra y el meato, o por la colonizacin de la sonda. Si existen catteres
suprapbicos o renales pueden utilizarse para tomar la muestra con resultados aceptables.
Una recoleccin de muestra adecuada debe evitar siempre la ms mnima contamina-
cin con flora normal. Las muestras ms adecuadas para el cultivo de anaerobios son las
siguientes:
Bilis.
Sangre.
Mdula sea.
Lquido cefalorraqudeo.
Otros fluidos de sitios normalmente estriles (por ej: lquido articular).
Lquido de ascitis.
Orina obtenida por puncin suprapbica.
Tejidos obtenidos por biopsia o autopsia.
Lquido pleural obtenido por toracocentesis.
Lavado bronquial obtenido con cepillo protegido.
Aspirado transtraqueal.
Puncin pulmonar transparietal (PPTP).
Aspiracin con aguja de abscesos cerrados.
Contenido uterino colectado con cepillo protegido.
TRANSPORTE DE MUESTRAS
Otro factor crucial para el xito en el aislamiento de anaerobios es el transporte adecuado
de la muestra. Se debe proteger a los microorganismos de los efectos nocivos del oxgeno
atmosfrico durante el tiempo que transcurre entre la extraccin y la siembra anaerbica de la
muestra. La primera y ms efectiva medida es correr ya que en ninguna otra ocasin como
esta el envo inmediato al laboratorio es tan fundamental. Las muestras deben ser colocadas
en un sistema de transporte que asegure la anaerobiosis. Existen tubos, comercialmente dis-
360 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
ponibles en los que se ha sustituido el aire por otro gas, como CO2 o N2, denominados tubos
gaseados y que contienen un indicador de anaerobiosis. Dichos tubos sirven para el transporte
de muestras lquidas que se inyectan a travs de un tapn de goma luego de eliminar todo el
aire de la jeringa y aguja. Un sistema similar sirve para transportar hisopos. Si la muestra es
un tejido o una biopsia, esta puede mantenerse en un tubo o recipiente con suero fisiolgico
y ste a su vez en una bolsa o sobre de anaerobiosis, que describiremos ms adelante. En casos
de extraccin de material con aguja y jeringa, si la demora no supera los 30 minutos puede
enviarse el material en la misma jeringa expulsando el aire residual y obturando la aguja con
un tapn de goma.
Las muestras deben conservarse a temperatura ambiente hasta ser procesadas en el labo-
ratorio ya que la refrigeracin puede oxigenar la muestra.
MTODOS DE CULTIVO
Luego de sembrar la muestra en un medio de cultivo adecuado, la incubacin en anaerobio-
sis se consigue por medio de alguno de los siguientes sistemas: jarras anaerbicas, bolsas de
anaerobiosis y la cmara de anaerobiosis o cmara de guantes. El ltimo mtodo es muy
caro, requiere equipamiento complejo, es lento y se usa para estudios de flora normal y en
laboratorios altamente especializados. Desde el punto de vista prctico las jarras y los sobres
o bolsas son equiparables en rendimiento a los sistemas ms sofisticados y son aceptables
para el aislamiento de bacterias anaerobias en el laboratorio clnico. Con estos sistemas son
posibles los cultivos en medios slidos para la obtencin de aislamientos que permitan la
identificacin bacteriana.
Jarras de anaerobiosis
Es el sistema ms utilizado para generar una atmsfera anaerbica. Consiste en una jarra de
plstico con una tapa que cierra hermticamente. La atmsfera anaerobia puede lograrse por
dos mtodos diferentes. El ms sencillo utiliza un sobre comercial generador de hidrgeno y
CO2 que es activado, ya sea mediante la adicin de agua o por la humedad de las placas de
agar. El H2 se combina con el O2 del aire para formar agua generando la anaerobiosis. Esta
reaccin es catalizada por granallas de zinc recubiertas de paladio que se encuentran deposi-
tadas en una canastilla fija a la tapa de la jarra. El segundo mtodo consiste en la extraccin
del aire contenido en la jarra a travs de la generacin de vaco, sustituyendo el mismo por
otro gas libre de O2 como el nitrgeno. El contenido final de la jarra consiste en una mezcla
de gases conteniendo generalmente 80-90% de nitrgeno, 5-10% de hidrgeno y 5-10% de
CO2. Una tirilla de papel impregnada en azul de metileno (azul en presencia de O2, incoloro
en su ausencia) introducida en la jarra es el indicador de anaerobiosis.
Bolsas de anaerobiosis
Consiste en una bolsa plstica transparente, gas impermeable, un indicador de anaerobiosis
(azul de metileno o resarzurina) y un sobre generador de anaerobiosis igual al utilizado para
las jarras. Una o dos placas de Petri pueden introducirse antes de sellar la bolsa. Este sistema
tiene las ventajas de su economa y practicidad, adems de poder observar directamente si
existe crecimiento en las placas de Petri sin abrir el sistema; tambin se puede utilizar para
los sistemas de identificacin tipo API-20A. Estas bolsas sirven adems para el transporte de
muestras como habamos visto anteriormente.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 361
Tincin de Gram
Una caracterstica general de los microorganismos anaerobios es su tendencia a tornarse
gramnegativos cuando se aplica la coloracin de Gram, sea por la poca estabilidad frente a la
decoloracin lo que los convierte en Gram inestables al examen directo de los materiales, sea
porque existe una variacin tintorial en los cultivos bacteriolgicos. Por esto es que pueden
realizarse las siguientes modificaciones a la tcnica de la tincin de Gram:
efectuar la decoloracin solamente con alcohol etlico prescindiendo de la acetona
prolongar el tiempo de contacto con lugol hasta 1 minuto.
Cultivo
Los medios de cultivo primarios para la siembra de una muestra de anaerobios son varios,
pero en general incluyen un medio no selectivo como el agar sangre y algn medio selectivo.
Adems otra placa de agar sangre, una de agar chocolate y una de agar MacConkey son
inoculadas e incubadas en aerobiosis, ya que la mayora de las infecciones por anaerobios
son polimicrobianas e incluyen bacterias aerobias y facultativas. Un medio de cultivo lquido
habitualmente caldo tioglicolato se utiliza como medio de enriquecimiento cuando la mues-
tra proviene de un sitio estril. Existen varios medios lquidos comercialmente disponibles
para hemocultivos. Algunos contienen (SPS) sodium polyanetol sulfonate, el cual estimula el
desarrollo de los anaerobios, aunque al parecer sera inhibidor para Peptococcus anaerobius.
Se trata de frascos de 100 ml, al vaco, con el agregado de CO2, una base nutritiva (digerido
trptico de soja o peptonas) y un agente reductor (tiol o tioglicolato). El porcentaje de san-
gre a inocular es del 5 al 10 % v/v. Los frascos se examinan diariamente buscando turbidez,
hemlisis o gas; se consideran negativos definitivamente a los 10 das de incubacin previo
subcultivo final.
Las placas inoculadas deben ser inmediatamente incubadas en condiciones anaerobias
a 37 C durante 48 horas, al cabo de las cuales si no hay desarrollo deben ser incubadas al
menos 5 das antes de ser descartadas.
Identificacin
La morfologa colonial as como la presencia de hemlisis, olor, etc. son algunas caractersti-
cas a tener en cuenta como primera aproximacin a la identificacin. Todas los morfotipos
coloniales de la placa de agar sangre incubada en anaerobiosis deben ser examinados con una
tincin de Gram y subcultivadas para determinar su aerotolerancia. Para ello cada colonia debe
ser subcultivada en una nueva placa de agar sangre en anaerobiosis y en una placa de agar
chocolate en CO2. En la placa de agar sangre se colocan los siguientes discos de antibiticos
para una identificacin preliminar de los anaerobios y no con fines de probar la susceptibilidad
antibitica: kanamicina, colistina, vancomicina.
La identificacin completa de los anaerobios es bastante costosa, frecuentemente requiere
varios tests bioqumicos, cromatografa gas-lquido de los productos metablicos derivados
362 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
ACTINOMYCES
Se trata de bacilos grampositivos largos y ramificados, delgados y delicados, bajo ciertas
circunstancias, frotis o cultivos pueden fragmentarse simulando bacilos del tipo difteroides.
En general son facultativos, aunque crecen mejor en anaerobiosis. A. meyeri es el nico
anaerobio estricto. Son capnfilos. Crecen lentamente y en el hospedero suelen producir
infecciones crnicas.
Forman parte de la flora normal de las mucosas del tracto respiratorio superior, tracto
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 363
PROPIONIBACTERIUM
Son bacilos grampositivos pequeos que se disponen en cadenas cortas o en agregados.
Integrantes de la flora normal de piel (en contraposicin a Actinomyces), conjuntiva, odo
externo, orofaringe y aparato genital femenino. Son anaerobios estrictos o aerotolerantes,
inmviles, catalasa positivos y capaces de fermentar hidratos de carbono produciendo como
principal residuo cido propinico (de ah su nombre). Las especies que se aslan con mayor
frecuencia son Propionibacterium acnes, P. granulosum y P. propionicus.
P. acnes es responsable del acn en adolescentes y adultos jvenes as como de infecciones
oportunistas en pacientes con prtesis (valvulares o articulares) o dispositivos intravascula-
res. Las propionibacterias se aslan tambin a partir de hemocultivos, pero suele deberse a
contaminacin con bacterias de la piel en el sitio de venopuncin.
El papel principal de P. acnes en el acn es estimular la respuesta inflamatoria. La produccin
de pptidos de bajo peso molcula por parte de los bacilos que habitan en los folculos sebceos
atrae a los leucocitos. Luego de fagocitar a los bacilos los fagocitos liberan enzimas hidrolticas
que junto a una variedad de toxinas bacterianas como lipasas, proteasas, neuraminidasa e
hialuronidasa estimulan la respuesta inflamatoria lo que lleva a la destruccin del folculo.
Las propionibacterias crecen en la mayora de los medios de cultivo pero puede tardarse
entre 2 y 5 das en evidenciar el crecimiento.
LACTOBACILLUS
Se trata de bacilos grampositivos largos, de bordes paralelos y extremos rectangulares, facul-
tativos, microaerfilos o anaerobios estrictos. No producen la enzima catalasa ni citocromos.
Producen cido lctico como principal producto de fermentacin y tienen requerimientos
nutricionales complejos. Llevan a cabo la fermentacin homolctica a travs de la va de
Embden-Meyerhof o la fermentacin heterolctica a travs de la va de las pentosas fosfato.
Su crecimiento es ptimo en condiciones cidas (pH entre 4.5 a 6.4).
Se encuentran en la superficie de las plantas as como en la carne, el agua, frutas y otros
productos alimenticios. Son indispensables para la industria del alimento donde se utilizan para
la fermentacin de alimentos y bebidas, como pickles, cerveza, vino, jugos, quesos y yogurt.
En el hombre se encuentran formando parte de la flora normal de la boca, estmago,
intestino y tracto genitourinario (constituyen la flora vaginal predominante en mujeres en
edad reproductiva). Son los microorganismos ms frecuentes en la uretra, por lo tanto su
recuperacin en los urocultivos procede invariablemente de la contaminacin de la muestra.
La razn por la cual los lactobacilos rara vez producen infecciones del tracto urinario es su
incapacidad para crecer en la orina.
Generalmente no son patgenos. Por el contrario, su efecto beneficioso ha sido demos-
trado cuando se administran en forma de probiticos (suplemento alimentario que contiene
microorganismos vivos con efectos beneficiosos en el husped al mejorar el balance microbiano
intestinal) en la prevencin y el tratamiento de algunas enfermedades como la diarrea aguda
infantil, diarrea asociada a antibiticos, diarrea del viajero, colitis alrgicas y probablemente
otras como la candidiasis vaginal, etc. De todas maneras pueden invadir el torrente circulatorio
ocasionando bacteriemias transitorias de origen genitourinario (por ej: despus del parto o de
un procedimiento ginecolgico), endocarditis y sepsis en pacientes inmunodeprimidos.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 365
Mobiluncus
Los miembros de este gnero bacteriano son bacilos gramvariables o gramnegativos, a pesar
de tener una pared celular grampositiva, carente de lipopolisacrido, y sensibles a vancomi-
cina, clindamicina, eritromicina y ampicilina, pero resistentes a colistina. Bacilos curvos con
extremos en forma de punta, son anaerobios estrictos. Son exigentes desde el punto de vista
nutricional y crecen lentamente incluso en medios enriquecidos.
En humanos se han identificado dos especies, Mobilunucs mulieris y M. curtisii. Los micro-
organismos colonizan el tracto genital femenino en un nmero bajo, pero son abundantes en
las mujeres con vaginosis bacteriana. Su aspecto microscpico es una marcador til para esta
enfermedad, pero no est claro el papel preciso de estos microorganismos en la patognesis
de la vaginosis bacteriana.
Bifidobacterium y Eubacterium
Los microorganismos pertenecientes a estos dos gneros se encuentran con frecuencia en la
orofaringe, intestino grueso y vagina. Estas bacterias se pueden aislar en las muestras clnicas
pero tienen un potencial de virulencia muy bajo y generalmente se aslan como contaminantes
sin significacin clnica. La confirmacin de su papel etiolgico en una infeccin requiere el
aislamiento repetido del microorganismo a partir de mltiples muestras y la ausencia de otros
microorganismos patgenos.
Cocos grampositivos
PEPTOSTREPTOCOCCUS
A pesar del nombre del gnero la morfologa de estos grmenes incluye formas en pares,
ttradas, racimos, y cadenas. Un estudio microscpico cuidadoso muestra a estos cocos con
tamao irregular y alguna decoloracin parcial, lo que permite diferenciarlos de sus similares
aerobios. Forman parte de la flora de la boca, intestino y genitales. Se encuentran involu-
crados en infecciones pleuropulmonares, abscesos, infecciones ginecolgicas, sinusitis. Casi
constantemente son sensibles a los betalactmicos.
3. Clostridium tetani, agente causal del ttanos, produce la enfermedad por medio de una
potente exotoxina que es elaborada durante la proliferacin limitada en los tejidos.
4. Clostridium botulinum es el agente etiolgico del botulismo, enfermedad que resulta de la
ingestin de una poderosa exotoxina formada previamente por los microorganismos en
alimentos contaminados.
Clostridios histotxicos
Pueden ocasionar una severa infeccin a nivel muscular denominada mionecrosis por clos-
tridios (antes conocida como gangrena gaseosa o miositis por clostridios).
Clostridium perfringens es la especie ms importante responsable del 80-90% de los casos
de mionecrosis. C. novyi, C. septicum, C. histolyticum, C. sordellii, C. fallas tambin ocasionan
estas infecciones. Todos ellos producen una variedad de toxinas con potencias diferentes;
para cada especie las toxinas se designan con letras griegas.
Ninguno de ellos se comporta como un patgeno altamente invasivo, sino que cada uno
juega un papel oportunista que requiere un conjunto de condiciones en los tejidos para que se
inicie la infeccin. Determinan un espectro de compromiso clnico en infecciones de heridas
que va desde la simple contaminacin hasta la mionecrosis. Dada su amplia distribucin en
la naturaleza, la contaminacin de heridas es muy comn (39%). Sin embargo una pequea
proporcin de heridas contaminadas evoluciona a la verdadera mionecrosis. Por lo tanto el
aislamiento de clostridios histotxicos a partir de heridas o material de drenaje no indica por
s mismo la presencia de mionecrosis: el diagnstico de dicha afeccin es clnico.
Clostridium perfringens
Existen cinco tipos diferentes: A, B, C, D y E, que se diferencian por la produccin de cuatro
toxinas letales principales: alfa, beta, epsilon y theta.
C. perfringens tipo A es el principal responsable de enfermedad humana; produce alfa
toxina y otras de menor poder (omega, kappa, micrn); habita suelos e integra la flora normal
del tracto gastrointestinal de hombre y animales.
Los tipos B, C, D y E existen en el tracto gastrointestinal de animales y slo de forma
ocasional en el hombre. Producen una variedad de enfermedades en animales domsticos;
no habitan de forma permanente los suelos como lo hace el tipo A.
Es un bacilo netamente grampositivo, corto y grueso, de bordes redondeados, con formas hasta
cocoides. En los frotis directos de muestras clnicas no se observan esporos y es caracters-
tica la ausencia de clulas eucariotas debido a la intensa citlisis txica; pueden observarse
cpsulas. En los frotis realizados a partir de cultivos pueden observarse esporos medianos o
subterminales que no deforman el soma vegetativo.
Es anaerobio aerotolerante, algunas cepas producen la enzima superxido dismutasa.
Desarrolla a un pH variable (5.5 a 8) y en un rango de temperatura que va de 20 C a 50
C. Es el nico inmvil de los clostridios patgenos. Crece rpido en agar sangre, pudiendo
observarse colonias a las 24-48 hs de incubacin.
ESTRUCTURA ANTIGNICA
los cinco tipos de C. perfringens. Los antgenos menores son enzimas y no son letales: antge-
no K es una colagenasa, antgeno V es una desoxirribonucleasa, antgeno u tiene actividad
hialuronidasa.
La serotipificacin de acuerdo a antgenos somticos ha tenido aplicacin en estudios
epidemiolgicos de brotes de intoxicacin alimentaria, donde existe una correlacin entre los
serotipos de C. perfringens de tipo A aislado en heces de pacientes y los serotipos recuperados
de alimentos contaminados.
FACTORES DE VIRULENCIA
EPIDEMIOLOGA
C. perfringens es un microorganismo ubicuo: el tipo A (principal responsable de enfermedad
en humanos) se encuentra en el tracto gastrointestinal de hombre y animales, y son nume-
rosos en suelos, tanto las formas vegetativas como las esporuladas; tambin estn en aguas
contaminadas con heces.
La infeccin por estos microorganismos puede tener un origen endgeno o exgeno. En
lesiones traumticas la fuente de clostridios en general es la tierra presente en las heridas
(la incidencia de contaminacin e infeccin de heridas depende de la concentracin de C.
perfringens en los suelos, lo que vara segn la localizacin geogrfica).
En las infecciones endgenas la fuente de clostridios es la flora fecal presente en la piel
368 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
o las vestimentas introducidas en las heridas, o clostridios que escapan del intestino cuando
este es perforado, ya sea por enfermedad, lesiones traumticas o intervenciones quirrgicas.
PATOGENIA
Los clostridios son incapaces de iniciar una infeccin en tejidos sanos (Eh normal). Factores
primordiales que predisponen a la mionecrosis son la isquemia y necrosis muscular, que pro-
porcionan una tensin de O2 y un potencial de oxido-reduccin disminuidos, condiciones
necesarias para la proliferacin de estos microorganismos. Esto explica que an con alta in-
cidencia de contaminacin de heridas, la incidencia de mionecrosis contine siendo baja. En
reas con menor tensin de O2 en el msculo, se acumula cido lctico y el pH desciende. La
combinacin de la disminucin del Eh y la cada del pH, puede activar enzimas proteolticas
endgenas y dar como resultado autlisis tisular. Esta liberacin de nutrientes y la disminucin
del potencial de xido-reduccin proporcionan condiciones adecuadas para el desarrollo de
las microorganismos anaerobios.
La proliferacin de los microorganismos se acompaa de produccin de toxinas solubles. En
la mionecrosis estas toxinas difunden desde el sitio inicial, proliferan y atacan msculo y tejidos
circundantes sanos. Estos tejidos son destruidos por las toxinas permitiendo la diseminacin
de la infeccin hacia nuevas reas necrticas. El lquido de edema (producido por accin
de la toxina y enzimas de clostridios sobre los tejidos) y el gas del metabolismo bacteriano,
aumentan la presin del compartimiento muscular agravando la isquemia, disminuyendo an
ms el potencial de xido-reduccin y el pH, proporcionando nuevas reas adecuadas para
la proliferacin de clostridios.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
Tincin de Gram: el examen directo muestra bacilos Gram positivos rectos sin esporas ni
leucocitos
Cultivo: en agar sangre incubado en anaerobiosis a 37 C durante 24-48 h, colonias planas
extendidas, 2-4 mm dimetro
Patrn caracterstico cuando crece en agar sangre: hemlisis doble, compuesta por una
estrecha zona de hemlisis completa producida por la toxina alfa y una zona ms amplia
de hemlisis incompleta producida por la toxina omega.
B-hemlisis sinrgica al sembrarlo junto a S. agalactiae: prueba CAMP inversa
Precipitacin (opalescencia) en medios que contienen lecitina, causada por la toxina alfa
e inhibida de forma especfica por la antitoxina.
Fermentacin tormentosa en medios con leche: la fermentacin de la lactosa produce
gran cantidad de cido, lo que provoca la coagulacin de las protenas (casena); luego el
cogulo es alterado y roto por el gran volumen de gas formado a partir de la fermentacin
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 369
de la lactosa (esta reaccin tambin es producida por otras especies como C. septicum y
otras)
Produccin de gas a partir de glucosa, fermentan lactosa, produccin de cido a partir de
glucosa y lactosa, etc.
SENSIBILIDAD ANTIBITICA
Todos los microorganismos del gnero Clostridium son uniformemente sensibles a penicili-
na.
Clostridios enterotoxignicos
Intoxicacin alimentaria
C. perfringens es la tercera causa de toxiinfeccin alimentaria bacteriana despus de Salmonella
spp. y Staphylococcus aureus. Es causada por C. perfringens, usualmente cepas tipo A, produc-
toras de enterotoxina. Dicha toxina es una protena que se comporta como un superantgeno
promoviendo la liberacin de mediadores de la inflamacin en forma masiva.
EPIDEMIOLOGA
La enfermedad se produce cuando el individuo ingiere alimento contaminado con un elevado
nmero de microorganismos productores de enterotoxina (100 millones). Los alimentos que
pueden estar contaminados son carnes vacuna, suina, pollo, salsas cocinadas y no refrigeradas.
Cuando los alimentos llegan al intestino delgado se produce la esporulacin y la liberacin
de enterotoxinas. No son comunes los brotes familiares pero s los producidos a travs de
alimentos preparados comercialmente destinados a restaurantes o instituciones.
En Uruguay segn datos recogidos por el Sistema de Informacin Regional para la Vigi-
lancia Epidemiolgica de Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA) se han declarado
3 brotes en el perodo 1993-2001, con 37 individuos afectados, no registrndose muertes.
Los alimentos implicados fueron carnes rojas y carnes de aves. Dos ocurrieron en comedores
y uno en una vivienda.
PATOGENIA
Todos los sntomas son atribuibles a la enterotoxina, que en general se sintetiza durante la
esporulacin de los microorganismos en el intestino delgado. La enterotoxina se une a un
receptor de membrana del ribete en cepillo e induce una alteracin de la permeabilidad calcio
dependiente resultando en una prdida de iones y metabolitos. Esta prdida electroltica altera
la funcin metablica intracelular provocando dao morfolgico y eventual lisis.
CLNICA
Entre 7 y 15 horas luego de la ingestin de alimento contaminado los pacientes experimen-
tan dolor abdominal agudo y diarrea; estos sntomas duran 12-18 horas y la recuperacin
suele ser completa, salvo raros casos de muerte en pacientes de edad avanzada y personas
debilitadas.
DIAGNSTICO
Para confirmar el diagnstico debe recuperarse el agente del alimento y del paciente. El diag-
nstico se establece mediante el recuento de ms de 100.000 UFC (unidades formadoras de
colonias) por gramo de alimento o 1.000.000 UFC por gramo de materia fecal en el primer da
de enfermedad. Tambin puede buscarse la presencia de enterotoxina en las heces utilizando
370 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
TRATAMIENTO Y PREVENCIN
Enteritis necrotizante
Es causada por C. perfringens tipo C y es ms severa que la intoxicacin alimentaria causada
por el tipo A. Tiene un perodo de incubacin de menos de 24h luego del cual aparecen dolor
abdominal intenso y diarrea; en algunos pacientes ocurre prdida de la mucosa intestinal
con enterorragia. Puede ser letal con shock u oclusin intestinal y peritonitis. La toxina
beta producida por C. perfringens tipo C es responsable de los sntomas; la administracin de
antitoxina reduce la mortalidad.
Enterocolitis seudomembranosa
Clostridium difficile es el microorganismo responsable de esta entidad. Se trata de una gas-
troenteritis asociada a antibioticoterapia de severidad variable desde diarrea autolimitada a
colitis seudomembranosa grave, potencialmente mortal.
C. difficile es un microorganismo anaerobio obligado, sacaroltico y dbilmente proteoltico,
a travs de la fermentacin cida produce un conjunto de productos detectables por medio
de cromatografa gas-lquida.
Es parte de la flora normal del intestino del hombre y los animales.
FACTORES DE VIRULENCIA
C. difficile produce dos toxinas proteicas principales, antignicamente diferentes, ambas im-
plicadas en la patogenia: la toxina A, una enterotoxina potente y la toxina B citotxica. La
toxina A o enterotoxina es quimiotctica para neutrfilos, produce infiltracin de leucocitos
polimorfonucleares en la lmina propia del leon e induce la liberacin de citoquinas por parte
de macrfagos y polimorfonucleares, potenciando la respuesta inflamatoria a nivel local, con
la resultante hipersecrecin de lquidos y necrosis hemorrgica. La citotoxina o toxina B
depolimeriza la actina ocasionando destruccin del citoesqueleto celular.
Otros factores de virulencia: factor de adherencia o adhesina (in vitro se une especfi-
camente a clulas del colon humano), una hialuronidasa que hidroliza el cido hialurnico
del tejido conjuntivo, favoreciendo la diseminacin; la formacin de endosporas permite la
supervivencia de estos moo en el medio ambiente hospitalario durante meses.
PATOGENIA
El tratamiento antibitico extenso altera la flora entrica normal, permitiendo la proliferacin
de C. difficile relativamente resistentes o la colonizacin exgena (las cepas infecciosas de C.
difficile pueden ser endgenas o exgenas); los antibiticos ms a menudo vinculados a colitis
seudomembranosa son ampicilina, clindamicina y cefalosporinas.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 371
TRATAMIENTO
La interrupcin del antibitico usado suele alcanzar para el caso de enfermedad leve. Los
cuadros graves pueden tratarse con metronidazol o vancomicina va oral. Puede haber recidivas
por esporas resistentes al tratamiento antibitico.
PREVENCIN
Es importante conocer el potencial para generar enfermedad gastrointestinal de la adminis-
tracin de antibiticos. Ante la presencia de diarrea sin otra causa evidente en pacientes que
estn recibiendo antibiticos es aconsejable suspender el tratamiento antibitico o sustituirlo
por otro que se asocie menos con diarrea y colitis.
Clostridium tetani
Agente causal del ttanos, una enfermedad rara hoy en da en pases desarrollados. Sin em-
bargo, en pases pobres, el ttanos neonatal tiene un impacto significativo sobre la mortalidad
global. En el adulto la enfermedad ocurre clsicamente luego de una herida punzante y se
caracteriza por espasmos musculares, el ms tpico de los cuales es el del maxilar inferior, de
ah el trmino de trismus.
La naturaleza anaerobia de C. tetani fue responsable en parte de la demora en su descu-
brimiento y aislamiento, que fue logrado en 1889 por Kitasato. As se lleg al descubrimiento
de la toxina tetnica y a la deteccin poco tiempo despus de la antitoxina especfica.
Estructura antignica
Poseen antgenos flagelares o antgenos H (10 serotipos) y antgeno somtico o antgeno O
(un solo serogrupo). Todas las cepas de C. tetani producen un solo tipo antignico de toxina
y su efecto es neutralizado por una sola antitoxina lo que tiene una enorme importancia
prctica en cuanto a la profilaxis de esta enfermedad.
Factores de virulencia
Toxina tetnica: todos los sntomas del ttanos son atribuibles a una neurotoxina sumamente
txica, la tetanospasmina, toxina intracelular liberada por autlisis celular. El gen estructural
de la toxina se localiza en un plsmido. Es una protena termolbil (inactivada por calen-
tamiento a 60C durante 20 min). Se trata de una toxina tipo A-B. Por analoga con estas
toxinas, se cree que la toxina tetnica es captada por endocitosis mediada por receptores y
que el bajo pH presente en al luz endosmica hace que la toxina se inserte en la bicapa lip-
dica y atraviese la membrana endosmica para llegar al citoplasma. La toxicidad de la toxina
tetnica intacta se asocia con la cadena liviana A. El fragmento B purificado de la cadena
372 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
pesada forma canales en las membranas lipdicas y posee el sitio de unin a los receptores
celulares (sitio fijador de ganglisidos).
La toxina tetnica es una de las sustancias ms txicas que se conocen (slo la toxina
botulnica y la toxina Shiga tienen una toxicidad comparable). El toxoide producido a partir del
tratamiento de la toxina con formaldehdo es til para la inmunizacin contra la enfermedad.
El toxoide no es txico pero conserva los determinantes antignicos de la toxina tetnica
que dan origen a los anticuerpos antitoxina. La molcula de la toxina tetnica contiene 20
determinantes antignicos diferentes como mnimo, y los anticuerpos contra por lo menos 9
de ellos son capaces de neutralizar la toxicidad de la toxina.
La tetanolisina es una hemolisina oxgeno lbil relacionada serolgicamente con hemo-
lisinas de otros clostridios y con la estreptolisina O de S. pyogenes.
Las esporas de C. tetani son capaces de persistir en el medio ambiente (suelo, tracto
gastrointestinal de humanos y animales) durante meses o aos.
Epidemiologa
Si bien la incidencia del ttanos ha disminuido en las regiones del mundo donde se alcanza
un alto porcentaje de inmunizacin de la poblacin, contina siendo una enfermedad comn
y no controlada en algunos pases en desarrollo.
Patogenia
Las esporas de C. tetani son ubicuas: se recuperan en 20-64% de muestras de suelos recolectadas
para cultivos as como del tracto gastrointestinal de humanos y otros animales. Si se efectan
cuidadosos cultivos de material de heridas traumticas la presencia de C. tetani tambin puede
demostrarse con mucha frecuencia. Sin embargo es bastante raro que se desarrolle ttanos a
partir de estas heridas. El aspecto ms significativo de la patogenia del ttanos es el contexto
de la herida donde el potencial de oxido-reduccin debe tener el equilibrio apropiado para
permitir la multiplicacin del microoorganismo y la toxignesis. Clsicamente las heridas
halladas en la prctica son las heridas punzantes producidas por clavos, astillas o espinas,
pero tambin en otros contextos como las fracturas expuestas, el uso drogas intravenosas, las
lceras de decbito y las varicosas, las otitis externas y las extracciones dentales, se dan las
condiciones adecuadas. La forma ms temida de ttanos, el ttanos neonatal es una causa
importante de morbimortalidad en pases en desarrollo y es producida por el corte del cordn
umbilical con instrumentos no estriles o por el cuidado inapropiado del mun umbilical.
Un factor contribuyente importante es la presencia de bacterias aerobias que pueden
proliferar hasta el punto de eliminar el O2 y luego continuar proliferando de forma facultativa
en anaerobiosis. Esta proliferacin puede reducir el Eh hasta el punto en el cual las esporas
tetnicas pueden germinar. Despus de la germinacin de las esporas se elabora la toxina,
que ingresa en el sistema nervioso central. La infeccin por C. tetani permanece localizada
con reacciones mnimas a menos que se encuentren otros microorganismos.
La forma de accin de la toxina involucra la unin a ganglisidos GT1 en las membranas
de las terminaciones nerviosas perifricas a travs la subunidad B, seguida de la internaliza-
cin de la subunidad A y su desplazamiento hacia el sistema nervioso central por transporte
axonal retrgrado. Cuando llega a la regin del ncleo es transportada hacia las interneuronas
inhibidoras, donde inhibe la liberacin de neurotransmisores inhibidores (GABA, glicina)
conduciendo a una actividad sinptica excitadora descontrolada dando lugar a una parlisis
espstica. Esta inhibicin de la liberacin de sustancias inhibitorias permite que prevalezcan
los msculos ms poderosos: espasmos musculares de los maseteros con trismus, flexin de
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 373
Manifestaciones clnicas
Ttanos generalizado: afectacin maseteros o trismo, dando lugar a la risa sardnica, salivacin,
sudoracin, irritabilidad y espasmos persistentes de los msculos de la espalda (opisttonos).
Adems puede haber afectacin del sistema nervioso autnomo dando lugar a arritmias
cardacas, fluctuaciones de la presin arterial, sudoracin intensa y deshidratacin.
Ttanos localizado: afecta la musculatura slo de la zona de infeccin primaria.
Aislamiento e identificacin
Para su aislamiento debe sembrarse de inmediato en medios slidos prerreducidos y medios
de cultivo lquidos para anaerobios. Las colonias son translcidas con borde que avanza fila-
mentoso y delicado, betahemolticas. La prueba final para la identificacin de C. tetani es la
demostracin de la produccin de toxina tetnica in vivo cuando se inyecta en ratones, y la
neutralizacin de su toxicidad en ratones previamente inoculados con antitoxina.
Tratamiento
Se basa en el debridamiento de la herida y la administracin de penicilina (en pacientes
alrgicos se puede administrar tetraciclinas o metronidazol), la inmunizacin pasiva con
inmunoglobulina antitetnica humana (que neutraliza la tetanoespasmina libre) y la inmu-
nizacin activa con toxoide tetnico.
Para los espasmos musculares se utilizan drogas como curare o, en tetanoespasmos leves,
barbitricos y diazepam, adems del soporte de las funciones vitales.
Prevencin
Se realiza a travs de la vacunacin con toxoide tetnico (toxina tratada con formalina); se
administran 3 dosis al principio y luego dosis de refuerzo cada 10 aos.
La inmunizacin de embarazadas en el tercer trimestre del embarazo asegura la inmuniza-
cin pasiva del neonato (mediante el pasaje de anticuerpos maternos a travs de la placenta),
disminuyendo el riesgo de ttanos neonatal. La enfermedad natural no confiere inmunidad
contra infecciones posteriores, por lo tanto los pacientes que se recuperan de la enfermedad
deben ser inmunizados activamente para prevenir la reinfeccin exgena o la recurrencia a
partir de esporas retenidas dentro del organismo.
Clostridium botulinum
C. botulinum produce la exotoxina ms potente que se conoce, que es una neurotoxina causante
del botulismo, una severa enfermedad neuroparaltica caracterizada por comienzo sbito y
evolucin rpida que culmina en un parlisis marcada y un paro respiratorio. La enfermedad
es rara en el ser humano, muy comn en los animales. A diferencia de la toxina tetnica, hay
ocho toxinas botulnicas serolgicamente diferentes, denominadas A, B, C1, C2, D, E, F, G.
La forma mas comn de botulismo es el transmitido por los alimentos, una intoxicacin
causada por la ingestin de la toxina botulnica preformada en los alimentos contaminados. El
empleo del autoclave con temperaturas lo bastante elevadas como para destruir las esporas en
la industria del enlatado ha reducido la importancia relativa de los alimentos comercialmente
enlatados como fuente de la enfermedad, excepto cuando se producen errores en el proce-
374 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
dimiento. Dado que la toxina es destruida por el calor, la coccin de rutina de los alimentos
enlatados en el hogar limita la frecuencia de ste tipo de intoxicacin.
Adems del botulismo transmitido por los alimentos la enfermedad tambin ocurre cuando
la toxina es producida por miembros de la especie C. botulinum que contaminan heridas trau-
mticas (botulismo de las heridas) y cuando se elabora la toxina en el tracto gastrointestinal
de los lactantes (botulismo infantil o de los lactantes).
Estructura antignica
C. botulinum ha sido dividido en ocho tipos serolgicamente diferentes sobre la base del tipo
de toxina producida.
Factores de virulencia
La toxina botulnica es una protena tipo A-B con una subunidad A o cadena ligera A que
posee actividad neurotxica y una o ms subunidades B o cadenas pesadas B no txicas,
responsables de la unin al receptor celular y posterior internalizacin de A; adems protege
a la subunidad A de la inactivacin por el pH gstrico.
Se clasifica como una exotoxina debido a su potencia y antigenicidad elevadas, sin em-
bargo se diferencia de una exotoxina clsica por cuanto no es liberada durante la vida del
microorganismo sino que aparece en el medio solo despus de la muerte y la autlisis de ste.
La toxina es sintetizada como un polipptido de cadena nica; el clivaje o la formacin de
muescas en la molcula por medio de proteasas bacterianas en el curso de su liberacin de
la clula dan como resultado una molcula compuesta por una cadena pesada y una cadena
liviana unida por enlaces no covalente y un puente de disulfuro. La produccin de la toxina
botulnica esta dirigida por bacterifagos especficos.
Patogenia
Los casos de botulismo se clasifican en cuatro categoras:
1. El botulismo transmitido por los alimentos es un intoxicacin alimentara letal que es re-
sultado de la ingestin de la neurotoxina en alimentos procesados de manera incompleta
y contaminados por los microorganismos.
2. El botulismo infantil relacionado con la ingestin por los lactantes de esporas de C. botu-
linum, la multiplicacin de los microorganismos en el tracto gastrointestinal y la posterior
absorcin de la toxina.
3. El botulismo de las heridas, el menos comn, enfermedad neuroparaltica asociada con
las heridas, las cuales muestran pocas evidencias clnicas de infeccin activa.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 375
Epidemiologa
Se encuentran esporas de C. botulinum en suelos y agua de todo el mundo. Existen tres
formas de botulismo: botulismo clsico o transmitido por alimentos, botulismo infantil y de
las heridas.
La toxiinfeccin alimentaria se manifiesta en brotes relacionados con alimentos comercial-
mente preparados como enlatados mal conservados, pero ms frecuentemente por vegetales,
frutas y pescados en preparaciones caseras de tipo mermeladas, pimientos, condimentos para
carnes, etc. En Uruguay en el perodo 1993-2001 se ha declarado un brote de botulismo con
un total de 4 individuos afectados, con 1 fallecimiento.
El botulismo del lactante afecta a nios dentro del primer ao de vida y es causado por
la ingestin de esporas de C. botulinum que germinan en el intestino delgado con produccin
de la toxina in vivo. El alimento involucrado fundamentalmente es la miel.
376 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
Manifestaciones clnicas
Despus de 12 a 36 horas de la ingestin del alimento contaminado (para el caso del botulis-
mo transmitido por alimentos) el paciente presenta nuseas, sequedad de boca, y diarrea. La
enfermedad progresa a debilidad y parlisis flccida descendente y bilateral de los msculos
perifricos, llegando luego a la parlisis respiratoria. Si el paciente no muere la recuperacin
es lenta, pudiendo llevar varios aos el restablecimiento de las terminaciones nerviosas
afectadas.
La tasa de mortalidad depende del tipo de toxina, la distribucin de la toxina en el ali-
mento y del diagnostico y tratamiento precoz con antitoxina (32% para el tipo A, 17% para
el B y 40% para el E).
Diagnstico
El diagnstico de laboratorio se realiza preferentemente en laboratorio de referencia por aisla-
miento y pruebas bioqumicas convencionales. La enfermedad es confirmada por la presencia
de toxina en suero, heces o contenido gstrico del paciente y la presencia de toxinas en el
alimento confirma su participacin como origen del brote.
Tratamiento.
El paciente requiere asistencia respiratoria, eliminacin del germen del tracto gastrointestinal
por lavado gstrico, tratamiento con penicilina y antitoxina botulnica trivalente (antitoxina
A, B y E para neutralizar la toxina en sangre). Este tratamiento logra una considerable dis-
minucin de la mortalidad.
Prevencin
La profilaxis consiste en evitar la germinacin de esporas en los alimentos mantenindolos a
pH cido o a 4 C o menos. El calentamiento de los alimentos a 80 C durante 20 minutos
puede destruir la toxina preformada. En el caso del botulismo del lactante la prevencin est
orientada al no consumo de miel antes del primer ao de vida.
Bacilos gramnegativos
GNERO BACTEROIDES
Los bacteroides son bacilos gramnegativos anaerobios obligados que estn presentes en gran
cantidad en el intestino grueso del ser humano y otros vertebrados. Llegan a 1011 o ms por
gramo de materia fecal y son los moo predominantes, junto con los estreptococos anaerobios
(E. coli est presente en una proporcin 108). El gnero incluye muchas especies de las cuales
B. fragilis y B. thetaiotamicron son los patgenos ms prominentes (otras especies: B. vulgatus,
B. ovatus, B. distasonis, B. ureolyticus y B. gracilis). Entre los bacteroides intestinales B. fragilis
es un componente menor, que en general se halla en concentraciones de 108 o 109 por gramo
de materia fecal, sin embargo es por lejos el moo aislado con ms frecuencia de las infecciones.
Esto puede explicarse por algunos factores de virulencia adicionales que posee esta especie.
Los bacteroides se asocian a infecciones anaerobias subdiafragmticas y genitales (por
su vecindad con la porcin final del aparato digestivo y regin perineal) y sepsis a punto de
partida de estas infecciones.
Todos los miembros del gnero son resistentes a penicilinas (por produccin de betalac-
tamasas) y cefalosporinas, con alguna excepcin.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 377
B. fragilis
BIOLOGA DEL MICROORGANISMO
Cocobacilos pequeos gramnegativos, pleomrficos con vacuolas evidentes. Las colonias son
pequeas, bajas, convexas, de color blanco a gris, semiopacas y brillantes, y algunas pueden
ser hemolticas. B. fragilis aislado de muestras clnicas posee una cpsula polisacrida que
puede perderse o disminuir con los cultivos sucesivos en el laboratorio.
B. fragilis es un microorganismo anaerobio moderado que prolifera de forma mxima
con una presin de oxgeno de menos del 3% pero que es capaz de sobrevivir a exposiciones
prolongadas al O2. El microorganismo produce superxido dismutasa y catalasa (en presencia
de hemina). Proliferan ms rpidamente que la mayor parte de las bacterias anaerobias no
formadoras de esporas, y la proliferacin es estimulada por bilis.
ESTRUCTURA ANTIGNICA
FACTORES DE VIRULENCIA
La cpsula polisacrida de B. fragilis confiere mayor virulencia a esta especie por iguales
mecanismos que en otras bacterias: interferencia en la quimiotaxis, en la fagocitosis y la des-
truccin opsonofagoctica por los neutrfilos y posiblemente tambin en la depuracin de los
microorganismos por la mayor adherencia de los moo encapsulados al mesotelio peritoneal.
Otras especies del gnero Bacteroides tambin presentan cpsula.
El lipopolisacrido de la membrana externa de los bacteroides tiene una estructura qu-
mica alterada en comparacin con las endotoxinas clsicas de las bacterias Gram negativas
aerobias y facultativas, y tiene menos actividad biolgica. An as el lipopolisacrido del B.
fragilis parece promover la formacin de abscesos en animales de experimentacin (aunque
la cpsula es ms activa en este aspecto que el lipopolisacrido). Adems, se ha demostrado
el aumento de la coagulacin (disminucin del tiempo de coagulacin) en los ratones inyec-
tados con lipopolisacrido.
Estos microorganisos producen muchas enzimas periplasmticas, como las lipasas, las
proteasas y una neuraminidasa, aunque su papel en la patogenia todava no ha sido bien
documentado. Las enzimas protectoras contra el oxgeno como la superxido dismutasa, la
peroxidasa y la catalasa pueden considerarse factores de virulencia porque aumentan la su-
pervivencia de los anaerobios en los tejidos ante el establecimiento de una tensin de oxgeno
y un potencial de oxidorreduccin bajos.
El succinato, un cido graso de cadena corta elaborado como producto final metablico,
es producido por todas las especies del gnero Bacteroides. El cido succnico en las concen-
traciones que corresponden a las medidas en los abscesos reduce de manera significativa la
destruccin fagoctica de E. coli por los leucocitos polimorfonucleares humanos y disminuye
su migracin quimiotctica.
Se han descrito cepas de B. fragilis que producen una enterotoxina. Estas cepas entero-
toxignicas se asocian de manera significativa con enfermedades diarreicas en el ser humano
y en el ganado que no presentan otros patgenos entricos conocidos.
378 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
PATOGENIA
La pared del colon puede romperse como resultado de un traumatismo penetrante o no pe-
netrante, la ruptura del intestino o ciruga abdominal. Cualquiera que sea el mecanismo, el
nmero de moo que contaminan la cavidad peritoneal es enorme. Los fagocitos son movilizados
rpidamente en gran cantidad hacia el sitio infectado y pueden eliminar un gran nmero de
bacterias. Los microorganismos que ingresan en la cavidad peritoneal se hallan primero en
una fase liquida que podra, en principio, llevar a su diseminacin en toda la cavidad. Sin
embargo, el epipln mayor y las asas intestinales delgadas se envuelven alrededor de las reas
de inflamacin y sirven para contener la infeccin. Esto lleva tiempo pero los abscesos que se
desarrollan finalmente, en general, estn muy bien localizados. El drenaje linftico y el esfuerzo
de la fuerza de gravedad tambin influyen en la localizacin de los abscesos.
Dada la diversidad del inoculo bacteriano, un gran numero de factores deben estar in-
volucrados en la determinacin de qu especie resulta dominante en la infeccin. Muchas
bacterias intestinales pueden crecer en el lquido peritoneal. Es muy probable que la primera
lnea de defensa sea la movilizacin de las clulas fagocticas que ocurre con rapidez. Por
ende, las bacterias que finalmente sobreviven y crecen deben ser bastante resistentes a la
fagocitosis. De hecho, muchas son encapsuladas. Este puede ser uno de los motivos principales
de la mayor frecuencia de aislamiento del B. fragilis, dado que este moo se encuentra entre
los miembros del gnero Bacteroides que tiene la cpsula ms grande.
Cuando el contenido del colon se derrama la cavidad peritoneal esta bien oxigenada y
los moo anaerobios altamente sensibles al oxigeno son destruidos. Los primeros microorga-
nismos que resultan numricamente dominantes son los anaerobios facultativos, en especial
Escherichia coli. Sin embargo, muchos de los anaerobios estrictos menos sensibles al oxgeno
sobreviven y pueden ser aislados del lquido y de la superficie de las clulas mesoteliales. Por
ultimo el sitio de la infeccin se vuelve cada vez ms anaerobio, en parte porque los moo
anaerobios facultativos metabolizan el oxgeno presente y en parte porque el sitio se torna
cada vez mas avascular. Entonces comienzan a predominar los microorganismos anaerobios
estrictos sobrevivientes. Esta sinergia entre los diversos microorganismos necesaria para la
formacin de abscesos se demuestra claramente en el estudio con animales. La inoculacin
de una sola especie de bacterias intestinales rara vez provoca infeccin, mientras que la
infeccin con una mezcla de moo anaerobios facultativos y estrictos lleva a la inflamacin
aguda y la formacin de abscesos.
Si las defensas peritoneales no son capaces de erradicar el contenido intestinal derramado,
en general se desarrolla un absceso. Las reas de inflamacin se tabican y son rodeadas por
una gruesa capa fibrosa que contiene colgeno. En su interior hay leucocitos, bacterias vivas
y muertas, y restos celulares.
En los abscesos peritoneales B. fragilis, predominante, a menudo est acompaado no
solo por microorganismos anaerobios facultativos, sino tambin por otros microorganismos
anaerobios estrictos, como los miembros del genero Clostridium o los estreptococos anaerobios
(Peptococcus, Peptostreptococcus).
Los abscesos intraabdominales imponen un alto riesgo al husped porque pueden exten-
derse hacia sitios cercanos y adems constituyen reservorios a partir de los cuales los moo
pueden ingresar en el torrente circulatorio. La bacteriemia resultante puede producir un
shock sptico o causar infecciones metastticas en sitios alejados.
Adems de B. fragilis tambin se encuentran otras especies de este gnero en abscesos
del tracto genital femenino, en general debido a contaminacin con la biota vaginal. Aqu
los microorganismos infecciosos ascienden a travs del cuello uterino, el tero y las trompas
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 379
de Falopio hasta llegar a la vecindad de los ovarios. La infeccin resultante se conoce como
enfermedad inflamatoria plvica (EIP). La causa predisponente es la cicatrizacin de las
trompas de Falopio debida a infecciones previas por Chlamydia o gonococos, lo que altera la
accin normal de los cilios de las clulas epiteliales de las trompas. Los abscesos tuboovricos,
que de forma ocasional complican la EIP, a menudo conducen a la infertilidad. El agente
causal ms comn de esta enfermedad no es B. fragilis sino B. bivius, un habitante comn de
la vagina humana.
GNERO FUSOBACTERIUM
Existen seis especies causantes de infecciones en humanos. El ms frecuentemente aislado
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es Fusobacterium nucleatum, flora normal de la boca, tracto respiratorio superior, tracto ge-
nital y gastrointestinal. Es un agente causal de infecciones orales, abscesos de pulmn, otras
infecciones pleuropulmonares e infecciones del lquido amnitico.
Fusobacterium necrophorum es un anaerobio muy virulento que puede causar infeccin
ampliamente diseminadas. Es el agente etiolgico principal de la Angina de Vincent (asociado
a Borrelia), infeccin necrtica de amgdalas y faringe, que presenta un exudado purulento
membranoso, acompaada de mal olor. Adems se halla en una variedad de infecciones
subdiafragmticas. Su hbitat normal es el tracto gastrointestinal.
Tpicamente son bacilos largos con extremos acintados o filamentos delgados. Algunos
como F. necrophorum son ms abultados en su sector medio. Producen alfa y beta hemlisis
en los cultivos en agar sangre, y las colonias son translcidas, de formas varias y a veces
irregulares.
La mayor parte de las fusobacterias son susceptibles a la penicilina G y las cefalosporinas
ms antiguas, adems de los agentes anaerobios ms activos (clindamicina, metronidazol).
Cocos gramnegativos
VEILLONELLA PARVULA
Pequeos cocos gramnegativos en diplococos o cadenas cortas y racimos, miembros de flora
bucal, intestinal y genital, se asla de materiales clnicos, pero es dudoso y desconocido su
poder patgeno.
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