SS Articulo cientifico | Scientific paper TA GRANJA: REVISTA DE vena PRODUCTOS NATURALES ORYA REM " CIENCIAS DE LA VIDA COMPONE! VOLATILES DE LOS FRUTOS DE Vasconcellea pubescens A. DC. Y Passiflora tripartita var. mollissima (KUNTH) USANDO LA METODOLOGIA HS-SPME-GC/MS VOLATILE COMPOUNDS OF THE Vasconcellea pubescens A. DC. AND Passiflora tripartite oar. mollissima (Kunth) FRUITS, USING HS-SPME-GC/MS. METHODOLOGY Paco Noriega’, Diana Calero!, Christian Larenas!, Maria Elena Maldonado! y Paola Vita Finzi? 1 Universidad Politéonica Slesana, Centro de investigacin y Valoracign dela Biodiversided CIVABI, Av. 12 de Octubre N24-22 y Wilson, Quito, Ecuador 2 Universidad de Pavia, Centro Interdipatimentate di Studie Ricerche sul’ Etnobiofarmacia CISTRE, Strada Nuova, 65 Pavia, alia Autor para correspondencia: pnoriega@ups.edu.ee Manuscrito recibido el 10 de noviembre de 2013. Aceptado, tras revisién, el 26 de noviembre de 2013, Resumen El presente trabajo two como resultado el estudio de los componentes volatiles en dos varedadesfrtalesallamenteapreciadas como fuente alimenticiaen Ecuador En la especie Vasonclle pubescns A. DC se logt identifier al 8255% de sus components destacindose ei hexanoato con e 44211 tl butanoato con el 12352 %; -octanol 8 142° y el inlo con el 6329. En Ps tnpartta var. mallisa (Kunth), se identical 98,233 de sus moléculas aromsticas destscsndose: hexilbutanoato 23472 cemeno Z) 19435 % (9):34-dimetl pentanal17,709hy el hex hexanoat 6651 % 1 Palabras claves: Componentes volatiles, Vasconcellea pubescens A. DC, Passfiors tripartite var mollissina, HS-SPME, GC/MS. ‘Abstract ‘This work studied the volatile compounds in two kinds of fruit varieties in Ecuador, both highly-prized food sources. In the VVasconcllea pubescens A. DC species, 92.65% ofits components were identified, to highlight. 44.211 % of elhyl hexanoate; 123527. of ethyl butanoate; 9,142 % of -octanol; and 6529 of inalool. In Passa tripartite var molissima (Kunth), 98.238 % of it aromatic molecules were identified, to highlight. 23,472 of hexyl butanoate; 18 435% of -ocimene (Z); 17709 of (§-3ndimethyl pentanol; and 8651 % of hexyl hexanoste? Keywords: Volatile compounds, Vasconcellea pubescens A. DC, Passiflora tripartite var. mollissima, HS-SPME, GC/MS. Forma sugerida de citar: Noriega, P, D. Calero, C. Larenas, M. Maldonado y P. Vita. 2014. Componentes volitiles de los frutos de Vasconcellea pubescens A. DC. y Passiflora tripartita var. mollissima (Kunth) usando la metodologia HS-SPME-GC/MS. La Granja: Revista de Ciencias de la Vida, Vol. 19(1):5-11. ISSN: 1390-3799, Ta GRANIA: Revista de Ciencias de la Vide 19(1) 2014: 5-11 © 2014, Universidad Politécnica Salesiana, Ecuador.Articulo cientifico / Scientific paper PRODUCTOS NATURALES Paco Noriega, etal 1. Introducci6n Vasconcellea pubescens A. DC. y Passiflora tripartita ‘var. mollissima (Kunth), son dos especies frutales na- tivas del Ecuador (Morales y Duque, 1987; Segura etal,, 2003). Sus frutos son usados en la alimentacion de los pobladores en los paises andinos. En Ecuador a V. pubescens se la conoce con el nombre comtin de chamburo, mientras que a P. tripartita se la denomi- na taxo. En ambas especies se han realizado diversos es- tudios para conocer los componentes organicos pre- sentes en sus frutos. En V. pubescens se han estudia- doa los componentes de naturaleza fenélica, desta- céndose la quercetina, rutina y manghaslina, adicio- nalmente se ha estudiado su actividad antioxidante (Simirgiotis ef al, 2009). Otros estudios se han eje- cutado para conocer a los azticares y Acidos organi cos presentes, encontrandose sucrosa en mayor can- tidad y en pequefas cantidades inositol y sorbitol; los acidos orgénicos presentes son mélico y cftrico Gilva etal, 1985) En lo referente a su composicién aromatica se tienen tres trabajos, el primero que usa la técnica GC/MS, extrayendo del fruto los componentes aro- miticos con diclorometano, y que muestra como componentes mayoritarios al etil butirato, butano, etil acetato, metil butirato y butil acetato (Morales y Duque, 1987). El segundo estudio se encuentran sustancias como: etil 3-mercaptopropanoato, etil 4- hidroxibutanoato, etil 4-acetoxibutanoato, metil (F)- 2-octenoato, metil (F)-3-octenoate, butil, hexil (E)- butenoato, butil 2-furoato y el butil nicotinoato (Ids- tein ef al., 1985), Finalmente un tercer ensayo iden- lifica como compuestos mayoritarios a: etil acctato, metil butanoato y butil acetato, como los mas abun- dantes (Balbontin et al, 2007). En P. tripartita, se han ejecutado estudios para identificar a los flavonoides del fruto entre los que se destacan orientina, vitexina, vicenina y schafto- sido (Simirgiotis et al., 2013); otro estudio desata- ca la identificacién de un flavonoide derivado de la orientina (Ramos ef l., 2010). Las hojas de la planta contienen orientina, isoorientina, vitexina, isovitexi- na, swertisina, y 2-vicenina Zucolotto et al. (2012). Se tienen varios estudios de composicién volatil en tuna especie emparentada, la Passiflora edulis conoci- da mundialmente como la fruta de la pasién o mara- cuyé (Jordan et al,, 2002; Heusinger y Mosand, 1984) Se puede apreciar que en los estudios de com- ponentes volitiles, en ninguna de las frutas se ha experimentado con un proceso de espacio de ca- beza y micro extracciGn en fase s6lida (HS-SPME), como metodologia de extraccién previa al anslisis, GC/MS. La Técnica Headspace solid-phase microextraction- Gas chromatography/mass spectrometry HS-SPME- GC/MS es ampliamente utilizada para la identifica ci6n de los componentes volatiles en diversas matri- ces procesadas 0 no entre las que se destacan: frutos (Mota et al, 2012), alimentos diversos (Balasubra- manian y Panigrahi, 2011), vinos (De la Calle et al., 1998), aceites esenciales (Hashemi et al., 2009), ¢ in- clusive andlisis ambientales de compuestos volatiles como VOCS y pesticidas (Rodrigues M. Reyes, 2005; Dermietzel y Strenge, 1999). La Técnica de micro extraccién en fase sélida (SPME) combinada con la generacién de vapor en espacio de cabeza (HS) es una innovaci6n analitica que facilita la extraccién de componentes volatiles, empleando pequehas fibras absorbentes que captu- ran a las moléculas volatiles en fase de vapor dan- do como resultado tiempos breves de extraccién, no interferencia de otro tipo de moléculas y un casi inexistente uso de solventes, facilitando el proceso extractivo (Pawliszyn, 2002). La extraccién se hace en caliente provocando la evaporacién de los com- ponentes volatiles, luego se pone en contacto al va- por generado con la microfibra por varios minutos. Posteriormente en el inyector del gas cromatégrafo se introduce la microfibra y se deja que se desorban Jas moléculas por algunos minutos a una elevada temperatura, para finalmente inyectar en la colum- na cromatografica (Figura 1). 2. Materiales y métodos 2.1 Material vegetal Los frutos de V. pubescens, fueron recolectados en una propiedad privada del norte de Quito; los de P.tripartita se adquirieron en el mercado central de Ja ciudad de Quito. Ta GRANIA: Revista de Ciencias de la Vida 19(1) 2014: 5-11 (© 2014, Universidad Politécnica Salesiana, Ecuador,Componentes volatiles de los frutos de Vasconcellea pubescens A. DC. y Passiflora tripartita var. mollissima (Kunth) usando la metadologia HS-SPME-GC/MS —+ @ PROCESO DE EXTRACCINN DE LOS COMPONENTES VOLATILES +i — io i i sroceso o vesonadune BRRARRENRT Figura 1. Proceso de Extraccién-Desorcién de compuestos volatiles. 2.2 Extraccién y andlisis HS-SPME- GC/MS Se tomaron 2 gramos del fruto lavado y se coloca- ron en un vial cerrado junto con 10ml. de agua. Para la extraccin de los componentes aromaticos se usa- ron fibras SPME marca Supelco de poly (dimetilsi- Joexano) /divinilbenceno), el sistema se calenté has- ta ebullicién y se puso en contacto la fibra y el vapor generado en espacio de cabeza por 20 minutos. Pa ra la desorcion de los componentes se colocé la fibra enel inyector del GC por 5 minutos a una tempera- tura de 220°C, para posteriormente dar la orden al equipo para iniciar el anslisis. Para la separacién y anélisis de los componen- tes se empled un equipo de cromatografia gaseosa marca Varian modelo 3900 acoplado a un espectrs- metro de masas Varian modelo Saturn 2000 que ope- ra con ionizacién electronica. La columna empleada fue una Varian FactorFour VF-Sms (5 % phenyl, 95% dimethylpolysiloxane, 0,25mm, 30m, 0,10um) Como gas transportador se utiliz6 He a un flujo de ImL/min; se inyects en modalidad split: 70. Las condiciones en la columna fueron: se inicia a 40°C por un tiempo de 2 minutos, se eleva la temperatu- ra hasta 180°C a una velocidad de 5°C/min, para posteriormente alcanzar los 220°C a una velocidad de 10°C/min, dejando finalmente a esa temperatu- 1a GRANIA: Revista de Ciencias de la Vide 19(1) 2014: 5-11 © 2014, Universidad Politécnica Salesiana, Ecuador. ra por tres minutos, el tiempo total de anslisis fue de 38 minutos. Los compuestos fueron identificados por compa- raci6n con la base de datos NIST/02, y verificacién en la mayoria de los compuestos de su indice de re- tencién tedrico (Adams, 2009). 3. Resultados Para Vasconcellea pubescens A. DC, fueron detectados un total de 38 compuestos, se identificaron a 20 de ellos, 1o que equivale al 92,65 % (Tabla 1). Los com- puestos mas abundantes identificados son: el he- xanoic acid, ethylester; butanoic acid, ethylester; 1- octanol y el linalol (Figura 2) Para esta varicdad frutal se encontr6 que los componentes mayoritarios son los ésteres en un 69,432%, seguido de los alcoholes en un 19,186 %, 4cidos en un 2,670%, hidrocarburos en un 0,780 %, cetonas en un 0,319%, y aldehidos en un 0,144 % Para Passiflora tripartita var. mollissima, fueron de- tectados 20 compuestos e identificados 17, que equi- vale al 98,233 % (Tabla 2). Las principales molécu- las identificadas fueron: butanoic acid, hexylester; ocimene Z; 1-pentanol 2,3-dimethyl; hexanoic acid, hexylester (Figura 3)Articulo cientifico / Scientific paper Paco Noriega, etal PRODUCTOS NATURALES Tabla 1, Compuestos volatiles presentes en Vasconcellea pubescens A. DC. Tiempo de retencién N “dere Nombre del compuesto Percentaje indice deretencién Grupo funcional 1 2369 Zbutanona, Shidroxi- ————O8T9 Cetona 2 4925 Eu butanoato 12352 302 ster 3 66 4 2butenoato 4328 ster 4 6739 Nt 0428 5 7374 Fil cclobutano 0.780 hidrocarbure 6 5083 Nt 0156 7 9,726 Nt 0509 8 103962 Benzaldehido ons 982 aldehido 9 11,508 Acido hexanoico 2670 967 sido 0 ny767 6 hexanoato 44am 967 ster n 22817 Nt 0432 2 13,294 Hil 2hoxenoato 0586 1038 ster b 1372 Nt 01406 “ 1439 1-octanol ania 1063 alcohol 6 14599 linall oxido o2n 1087 alcohol 6 143809 p-sopropenil tolueno oa v 1487 El sorbato 62 182 ster 18 14978 NI 054 9 15,089 Linalol 6529 1095 alcohol 20 15,962 3etil hidroxihexanoato (0,562 nat ster 21 W733 Fal benzoato 1,908 1169 ster 2 Fal octanoato 437 1196 ster 28 NI 0229 ster 24 Citronelol 460 1223 cS NI 486 alcoho! 26 roti geranato ons 1322 z NI 0316 ster 28 NI 0.22 Ea Nt oats 30 til decanoato 0430 1395 31 23749 NI 0348 ster 2 239 NI 164 3 24487 NI oss 3 25,108 Nt 164 35 25421 NI 0157 36 25,996 Nt 0128 a 26,201 hidroxytoluenobutilto 2,782 1514 38 29491 NI 1126 alcoho! 1D 52.65% 3 Ta cRwwsA: Revista de Ciencias de a Vi 19{1) 2014 511 (© 2014, Universidad PolComponentes volatiles de los frutos de Vasconcellea pubescens A. DC. y Passiflora tripartita var. mollissima (Kunth) usando la metadologia HS-SPME-GC/MS Purdy ae eo Etil hexanoato: E:il butenoato Linalol Figura 2. Principales moléculas volatiles de Vasconcellea pubescens A. DC. BA mule hexil butanosto L-Pentanol 2,3 dimetil SPs 1 a ee ~~ g a 2 Ocimene (2) hexil hexanoato Figura 3. Principales moléculas volstiles de Passifioratripartita var. Molissima. 1a GRANIA: Revista de Ciencias de la Vide 19(1) 2014: 5-11 © 2014, Universidad Politécnica Salesiana, Ecuador.Articulo cientifico / Scientific paper PRODUCTOS NATURALES Paco Noriega, etal Tabla 2. Compuestos volatiles presentes en Passiffora tripartita var. Mollissima, nv Tempe desstencion Nopspze del compuesto ercentsje !44¢4© —Geypo funcional 7 354 Texans 1809 wo Aldehio 2 4,986 Butil acetato 2,0642 807 Ester 3 69 (8)-4-dimest pentanol 7708 Alcohol 4 11,304 Butil butanoato 0,627 993 Ester 5 11,849 hexil acetato 4,992 1007 Ester 6 a1 -phellandeno sae 1029 Monoterpeno 7 947 -sameno (2) 194351082 Monoterpeno 8 1815 rctano a8 1065 Alohot 9 NI one o 138-pamentaieno ama 1108 Monoterpeno h NI 128 2 exten neo allo 1360 114s monotepeno 3 Bedimett3S7ecweeare gay smonoterpeno 4 1935 alls Pixoneno sam smonoterpeno 1 vasa hex butanoato man hte 16 17485 spine 1199 aleool 7 1887 hexibnevalerato ster 18 16947 hex -E-butanoato 1238 eater » na NI 20 na hel hexanoato 1382 ater D En esta variedad frutal tenemos que los com- ponentes mas abundantes son los ésteres en un 42,084 %, los alcoholes en un 18,654 %, los monoter- penos en tun 32,968 % y los aldehidos en un 0,809 %. 4, Conclusiones Enel caso de las dos variedades frutales en estudio, ha sido posible tener una elucidacién de sus estruc turas en porcentajes mayores al 90%, lo que hace posible interpretar quimicamente el aroma y sabor de los mismos. Por otra parte el uso del sistema de micro extraccién en fase solida facilita la extraccién de aquellos componentes de interés por su aromati- cidad, sin interferencia de otro tipo de compuestos presentes 10 Referencias Adams, R. 2009. Identification of Essential Oil Componentes by Gas Chromatography/Mass Spectrometry. AlluredBooks, Carol Stream, Illi nois, 4 edicién. Balasubramanian, S. y S. Panigrahi. 2011. Solid- phase microextraction (spme) techniques for quality characterization of food products: A re- -w. Food Bioprocess Technology, 4: 1-26. Balbontin, C,, E, Gaete, M. Vergara, R. Herrera y M. Moya. 2007. Treatment with I-mep and the role of ethylene in aroma development of moun- tain papaya fruit. Postharvest Biology and Tech- nology, 43: 67-77. Ta GRANIA: Revista de Ciencias de la Vida 19(1) 2014: 5-11 (© 2014, Universidad Politécnica Salesiana, Ecuador,Componentes volatiles de los frutos de Vasconcellea pubescens A. DC. y Passiflora tripartita var. mollissima (Kunth) usando la metadologia HS-SPME-GC/MS De la Calle, G, R. Manfred, D. Klaus, H. Chris- tian, B. Christine y F. Karl-Heinz, 1998, Use of solid-phase microextraction-capillary- gaschromatography (spme-cgc) for the varictal characterization of wines by means of chemo- metrical methods. Fresenius J Anal Chem, 360: 784-787, Dermietzel, J. y G. Strenge. 1999. Determination of voc contamination in borchole sediments by headspace-spme-ge analysis. Fresenius J Anal Chem, 364: 645-647, Hashemi, P, M. Shamizadeh, A. Badiei, A. R. Ghias- vand y K. Azizi, 2009. Study of the essential oil composition of cumin seeds by an amino ethyl- functionalized nanoporous spme fiber. Chroma- tographia, 70(7/8): 1147-1151 Heusinger, G. y A. Mosand. 1984. Chiral sulphur- containing aromatic substances from the yellow passion fruit (passiflora edulis f, flavicarpa). an account of the enantiomers and absolute confi- guration. Tetrahedron Letters, 25(5): 507-510. Idstein, H,, T. Keller y P. Schreier. 1985. Volati- le constituents of mountain papaya (carica can- damarcensis, syn. c. pubescens lenne et koch) fruit. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 33(4): 663-666. Jordan, M,, K. Goodner y P. Shaw. 2002. Characteri- zation of the aromatic profile in aqueous essence and fruit juice of yellow passion fruit (passiflo- ra edulis sims f. flavicarpa degner) by ge-ms and gc/o. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 50(6): 1523-1528. Morales, A. L. y C. Duque. 1987. Aroma consti- tuents of the fruit of the mountain papaya (Ca- rica pubescens) from Colombia. Journal of Agri- cultural and Food Chemistry, 35(4): 538-540. Morales Astudillo, A. Ry M. N. Morales Palacio. 2006. Interspecific cross breeding in Vasconce- ea. (Special issue: Biodiversity and cultural di- versity in the Andes and Amazon 2: forest con- servation strategies). Lyonia, 10(1): 115-122, Mota, L. M,, A. Aguiar, I. Ferreira y P. Guedes de Pinho. 2012. Volatile profiling of kiwifruits (acti- nidia deliciosa /hayward’) evaluated by hs-spme and gc-it/ms: Influence of ripening, training sys- tem and storage. Food and Bioprocess Techno- logy, 8(5): 3115-3128, 1a GRANIA: Revista de Ciencias de la Vide 19(1) 2014: 5-11 © 2014, Universidad Politécnica Salesiana, Ecuador. NIST/02. Mass spectral library. United States Go- vernment, Pawliszyn, J. 2002. Solid phasemicroextraction. En: Issaq (Ed), A century of separation science, pags. 399-419, Marcel Dekker Inc, New York, Ramos, F, L. Castellanos, C. Lopez, L. Palacios, C. Duque, R. Pacheco y A. Guzman. 2010. An orientin derivate isolate from passiflora tripar- tita var. mollissima. Latin American Journal of Pharmacy, 29(1): 141-143, Rodrigues M. Reyes, S. R, V. Rehder. 2005. An spme-ge-ms method for determination of orga- nochlorine pesticide residues in medicinal plant infusions. Chromatographia, 61(5/6): 291-297. Segura, S, G. C. d’Beckenbrugge, L. Lopez, M. Grum, Guarino y L. Mapping. 2003. The po- tential distribution of five species of passiflora in andean countries. Genetic Resources and Crop Evolution, 50(6): 555-566, Silva, C., F. Fuentes, V. Cienfuegos y L. A. Liza- na, 1985, Sugars and constituent acids and their changes during ripening of mountain pawpaws (Carica candamarcensis Hook f.). Proceedings of the Tropical Region. American Society for Horti- cultural Science, 24: 97-102, Simirgiotis, M., S. H. G., J. Borquez y E. Ken- nelly. 2013. The passiflora tripartita (banana pas- sion) fruit: a source of bioactive flavonoid glycosides isolated by hscce and characterized by hple-dad-esi/ms/ms. Molecules, 18(2): 1672- 1692, Simirgiotis, M., G. Schmeda-Hirschmann, J. Bor- quez y E. Kennelly. 2009. Identification of phe- nolic compounds from the fruits of the moun- tain papaya vasconcellea pubescens a. de. grown in chile by liquid chromatography-uv detection- mass spectrometry. Food Chemistry, 115(2): 775- 784. Zucolotto, S,, s. C, Fagunde, F. Reginatto, F. Ra- ‘mos, L. Castellanos, C. Duque y E. Schenkel. 2012. Analysis of c-glycosil flavonoids from south american passiflora species by hple-dad and hple-ms, Phytochem Analysis, 23: 239-239, ul