1.

- Identificacin y Aislamiento de microorganismos nativos, precursores de la Tan

Acil Hidrolasa (TAH).

En el Campo:

Los frutos maduros de tara, recolectados por los agricultores de la zona, sern
embalados en papel toalla, de primer uso, y colocados dentro de una bolsa plstica
para su traslado al laboratorio. La recoleccin de los frutos en el campo debe realizarse
con cuidado, evitando cualquier dao y el contacto con el suelo.

En el laboratorio

1. Los frutos, trados del campo, son colocados en el interior de una cmara
hmeda.
2. Los tperes de plstico son desinfectados con alcohol al 96%, se aade agua
destilada estril hasta un nivel por debajo de las rejillas de metal que se
colocan dentro de los tperes y en las cuales se colocan los frutos de tara.
3. Los tperes, cerrados y correctamente rotulados, son incubadora 25C
aproximadamente.
4. Luego de 5 a 7 das de incubacin se revisan las muestras y se observa el
crecimiento de micelio sobre la superficie de las vainas.
5. Mediante la ayuda de un asa de siembra estril, se coge una porcin de micelio
y se siembra en Agar Czapeck mezclado con polvo de vainas de tara, como
medio de cultivo. Todo se incuba a 25 C, en un periodo de 3 a 5 das.
6. Los aislamientos son identificados usando clave taxonmica de Barnet y los
aislamientos seleccionados son conservados, a 4 C, en tubos conteniendo APD
en pico de flauta.

2. Preparacin de la harina de vainas de tara

Luego de recolectar los frutos de la tara, se proceder a su almacenamiento en

bodegas expuestas al aire; pero evitando el contacto directo con el suelo y exposicin
a las lluvias. Para impedir la formacin de mohos y la fermentacin, los agricultores
colocan los frutos en un patio para su secado al sol. Luego, se realiza la ruptura de las
vainas con el uso de un palo y se procede a separar las semillas y fibras grandes de
forma manual. Las vainas semi trituradas son molidas manualmente con el fin de
reducir el tamao, hasta obtener partculas de 1 mm de dimetro. Las partculas de
vainas de tara son nuevamente molidas y tamizadas con la ayuda de un molino manual
para granos y un tamiz de 106 um.

3. Seleccin de los hongos con mayor produccin de TANASA

Los hongos que fueron aislados, se siembran en una mezcla lquida conteniendo
Czapeck con harina de vainas de tara y se les somete a agitacin constante de 150rpm
 durante 10 das. Al trmino de la incubacin, la biomasa de los hongos es retirada
mediante proceso de filtracin, cuantificando el cido glico en el extracto final. Esto
se realiza utilizando el mtodo Folin Ciolcateuy realizando la lectura en el
espectrofotmetro UV- visible, calibrado a 750 nm, previa determinacin de la
concentracin mediante la elaboracin de la curva de calibracin.
Los hongos que favorecen la mayor produccin de cido glico, derivado de los taninos
presentes en la harina de las vainas de tara sern utilizados en las etapas posteriores
del trabajo.

4. Identificacin y Estandarizacin de los parmetros fsicos y qumicos, de obtencin

de la enzima Tanasa a nivel de laboratorio.

Alrededor de 10 das y agitacin constate a 150rpm, los microorganismos

seleccionados son cultivados en medio lquido, conteniendo Czapeck y harina de vainas
de tara. Luego, mediante filtracin, se separa la biomasa del hongo presente en el
extracto final que, adems, contiene la enzima y el cido glico.

La enzima presente en el extracto, es purificada utilizando columnas cromatogrficas,

a la que se le determinar sus propiedades fsicas y qumicas; como el pH, la
temperatura, los nutrientes y la aireacin ideal que mejore su actividad; con lo que,
posteriormente, sern estandarizados estos parmetros usando un diseo factorial.
As mismo, se construir la curva de crecimiento de los hongos aislados y se
identificar la fase de mayor produccin de la enzima.

5. Estandarizacin de las caractersticas de la biomasa, nutrientes, pH, temperatura,

humedad y aireacin, necesarios para la produccin de cido glico.

Los resultados obtenidos durante la identificacin y Estandarizacin de los parmetros

fsicos y qumicos, a nivel de laboratorio, sern extrapolados para la produccin de
cido glico a nivel de reactor y aplicacin industrial.

IV. Presupuesto

Precio
N Materiales Cantidad Total
unit
3 Matraz erlenmeyer de vidrio graduado 50 ml boca angosta 10 15.2 152.0
Matraz erlenmeyer de vidrio graduado 250 ml boca
4 10 13.2 132.0
angosta
Matraz erlenmeyer de vidrio graduado 500 ml boca
5 10 10.97 109.7
angosta
Matraz erlenmeyer de vidrio graduado 1000 ml boca
6 5 24.5 122.5
angosta
 7 Placas petri de vidrio de 15 mm x 100 mm 20 4.0 80.0
Potenciometro de mesa, autocalibracin, RES 0.01/0.1
8 1 3572.0 3572.0
Electrodo sure
15 Vaso de precipitacin de vidrio 1 L 10 48.0 480.0
16 Vaso de precipitacin de vidrio 100 ml 10 36.8 368.0
17 Vaso de precipitacin de vidrio 250 ml 10 32.5 325.0
18 Desecadores de Humedad de vidrio 1 150.0 150.0
19 Tapers de plstico con tapa 20 18.0 360.0
20 Czapeck 500 gr 2 215.0 430.0
21 Agar Agar 500 gr 2 612.0 1224.0
22 Algodn hidrfilo rollo x 500 gr 10 14.5 145.0
23 Alcohol etilico 70 C x 1L 10 4.1 41.0
24 Guantes descartables Talla Medium (Caja x 50 pares) 5 11.4 57.0
25 Alcohol etlico 96 C x 1L 15 7.9 118.5
Papel toalla blanco de 22 cm x 20 cm x 60 hojas (Paquete x
26 20 1.5 30.0
3 rollos)
27 Papel Kraft 50 g x 75 cm x 120 cm (x millar) 10 0.2 2.0
28 Folin Phenol Ciolcateu 1 170.2 170.2
29 Carbonato de sodio ACS x 500 gr 1 145.0 145.0
30 D-Glucosa Frasco x 500 gr 1 95.6 95.6
32 Papel filtro Whatman N 40 (x100 unidades) 2 153.0 305.9
Espectofotmetro de luz uv + cubetas 1
Agitador orbital
Incubadora con rango de temperatura de 20 a 50 C
Camara de flujo laminar
Sub total 15295.44
TOTAL 127795.44