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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA Y TEXTIL

AREA ACADMICA DE INGENIERIA QUIMICA

Laboratorio de bioqumica y microbiologa


PI721-A
TEMA: IDENTIFICACION CUALITATIVA DE PROTEINAS Y AMINOACIDOS

PROFESORA:

Dra. Nieto Jessica

ALUMNOS:

o Begazo Ticona Andreyn


o Diaz Justo Pedro
o Falcon Grande Abraham

EQUIPO N3

PERIODO ACADEMICO: 2017-I

REALIZACION DE LA PRCTICA: 12/05/17

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IDENTIFICACION CUALITATIVA DE PROTEINAS Y AMINOACIDOS
1. OBJETIVO
Familiarizar a los estudiantes con el reconocimiento de protenas o residuos
de aminocidos presentes en las protenas mediante pruebas qumicas
cualitativas.
2. FUNDAMENTO TEORICO
Por la estructura peptdica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las
protenas pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose productos
coloreados. Estas reacciones son la base para la determinacin cuantitativa y
cualitativa de las protenas. Por presentarse variaciones en la composicin de los
aminocidos de las diferentes protenas, se manifiestan diferentes colores y grados de
intensidad para una misma reaccin, ntimamente relacionado con la naturaleza de la
protena analizada.
La Reaccin Xantoproteica
Los aminocidos, que contienen un ncleo aromtico forman nitroderivados de color
amarillo cuando se calientan con cido ntrico concentrado. Las sales de estos
derivados son de color naranja intenso en medio alcalino. Si una vez realizada la
prueba se neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro. La fenilalanina, la
tirosina y en cierto grado el Triptfano, as como todas las protenas que los contienen,
dan positiva la prueba.
Prueba de Biureth
es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos
con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida. El
reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa
cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido de Potasio no
participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga
lugar.
Desnaturalizacin por calor y pH extremos
Una prdida de la estructura tridimensional suficiente para causar prdida de la
funcin se llama desnaturalizacin. Se forma un conjunto de cadenas polipeptdicas
con distinto grado de plegamiento. La desnaturalizacin no significa que siempre se
obtenga la cadena polipptidica totalmente desplegada. Los productos de
desnaturalizacin en solucin se agregan fsicamente y segn las condiciones de pH y
fuerza inica, precipitan.
El objetivo de elegir un paso de purificacin desnaturalizante es crear las condiciones
donde la protena de inters no se desnaturalice mientras que los otros componentes
se desnaturalicen y precipiten.

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3. DESARROLLO EXPERIMENTAL
SOLUBILIDAD Y EFECTOS DE PH DE PROTEINAS
Observaciones:
Medio Observaciones Resultado
PH de la solucin = 6
Agua Fra Parcial
Restos solidos blancos
PH de la solucin = 10
NaOH 0.2% Solucin ligeramente amarilla con Ligeramente soluble
pequea cantidad de espuma
PH de la solucin = 11
NaOH 10% Se forma una masa gelatinosa dentro No es soluble
de la solucin
PH de la solucin = 2
HCl 0.2% Solucin amarilla, pero con restos Insoluble
solidos blancos considerables
PH de la solucin = 1
HCl 10 % Insoluble
Solucin blanquecina
PH de la solucin = 10
Na2CO3 0.5 % Soluble
Solucin transparente
Tabla 1: Solubilidad y efectos de ph

Conclusiones:
La albmina no es soluble en cido clorhdrico dado que este lo
desnaturaliza primero.
En medio acuoso, la albmina no resulta soluble dado que estructura no lo
favorece, adems si vemos en tablas el pk resulta ser de 8.5 siendo muy
bajo en agua
Tras ver que en medios bsicos de poca concentracin resulta incrementar
su solubilidad, y al ser grande la concentracin vuelve a ser insoluble
La influencia del ph en una protena es bastante importante para la
estabilidad de esta, y pueda realizar sus funciones sin alguna alteracin.

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DESNATURALIZACION DE UNA PROTENA
Observaciones:

Agente Observaciones
desnaturalizante
Sin agitar existen dos fases una solucion blanquecina y otra amarilla, luego
de agitar toda la solucion o muestra, ahora es blanca con particulas
precipitadas.

1. Alcohol
etilico

Antes de agitar Despues de agitar

Precipitado color blanco con textura o apariencia de clara cocida, la


solucion pierde su color amarillento.

2. Nitrato
de plata

A los 52C empezo a mostrarse solidos (huevo cocido) clara amarilla, en


este punto se detuvo la prueba pues solo se buscaba la evidencia de a que
temperatura empezaba a precipitar la muestra.

3. Calor

Tabla 2: desnaturalizacin de protenas

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Reacciones:

2. albumina con nitrato de plata

Conclusiones:

En general estos 3 agentes logran desnaturalizar la albumina de nuestra


muestra.
Teniendo en cuenta un carcter de velocidad el nitrato de plata fue el mas rpido
en esta experiencia seguido de el etanol (que necesito un poco de esfuerzo
mecnico, agitacin), mientras que el calor fue quien tomo mas tiempo esto
debido a que se debi hacer lento para poder tener un registro casi extracto de
la medida de la temperatura a la cual comenzaba la desnaturalizacin.

Prueba de Biuret

Observaciones

MUESTRA OBSERVACIONES RESULTADO


Tras agregar la solucin de NaOH y de
Agua CuSO4 no se observ cambio qumico -
alguno.
Luego de agregar la solucin de NaOH
la albmina tom una consistencia
gelatinosa, y tras aadir la solucin de
Albmina +
CuSO4 se vio la aparicin de un color
violeta en ciertas partes de la materia
gelatinosa.
Se observa el cambio de coloracin de
Gelatina la solucin inicialmente incolora a un +
color prpura.
La mezcla cambi su coloracin de
Leche +
blanco a un color lila.
No se observ ningn cambio qumico
Urea -
en la solucin.
Tabla 3: Prueba de biuret

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Conclusiones

La prueba de Biuret con la albmina nos da como resultado una solucin de


coloracin violeta, por lo tanto podemos decir que existen enlaces peptdicos que
reaccionan con los iones Cu2+ y por tanto existen protenas.
Igualmente ocurre en la prueba de Biuret con la gelatina y con la leche, en ambas
muestras aparece la coloracin prpura que nos indica que en dichas muestras
existen protenas de dos o ms enlaces peptdicos.
Para el caso de la prueba de Biuret con el agua y la urea, solo se vio la coloracin
azul propia del CuSO4, es decir en estas muestras la prueba nos dio negativo,
con lo cual podemos concluir que en el agua y en la urea no hay presencia de
enlaces peptdicos y por consiguiente no existen protenas.

PRUEBA XANTOPROTEICA
Observaciones
Muestra Observaciones Resultado
Inicio incoloro, con el HNO3 no paso nada,
con NaOH tampoco sucedi algun tipo de
cambio Negativo

1. Agua

Con base
Con cido Calentado

Positivo
Sustancia de color amarillenta traslucida,
agregando HNO3 aparece precipitado
amarillo, al calentarlo la parte de la solucion
2. Albunima que no reacciono se torno de color amarillo
vivo, agreagando el NaOH iba virando a un
color anaranjado

Con base

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Con acido Calentado

Sustancia de color turbia que al agregar el


HNO3 se vuelve color amarillo traslucido, y al
calentarlo no sufre cambio asi como al
Negativo
agregarle el NaOH

3. Gelatina

Con cido Calentado


Con base

Sustancia de color blanca al agregarle el HNO3


se vuelve una solucion amarillenta con
precipitando amaarillo, al calentarlo la
Positivo
solucion se torna amarilla pero turbia con los
solidos flotando en la superficie, y al agregar
el NaOH esta vira a color anranja

4. Leche

Con base
Con acido Calentado
Sustancia incolora, con HNO3 no pasa nada al
calentarlo no hay cambios y cuando se agrega
5. Urea
el NaOH no sufre ningun cambio Negativo

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Con acido Calentado Con base

Tabla 4: identificacin de aminocidos o residuos de aminocidos en la protena

Reacciones:

2. albumina con cido y base

Conclusiones:

Al agregar el cido los nicos que dieron positivos para las pruebas fueron la
albumina y la leche
Los nicos que sufrieron cambios al momento de calentarlos fueron la albumina
y la leche
Los nicos que dieron cambios al agregar el NaOH fueron la albumina (de forma
rpida y persistente en el color) y la leche (no reacciono tan rpido y el color se
perda, ya casi no haba mucho reactivo para seguir agregando)

4. CUESTIONARIO
1. Aplicacin Industrial

Protena Aplicacin Industrial


Se emplea en la elaboracin de productos no
Casena alimentarios: pegamentos y pinturas, cubiertas
protectoras, plsticos. Otros usos tecnolgicos son la

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clarificacin de vinos o como ingrediente en
preparados de biologa molecular y microbiologa.
Siendo parcialmente hidrolizado, colgeno produce
gelatina, que ha sido ampliamente utilizado como un
Colgeno ingrediente en muchos productos alimenticios. La
gelatina tambin se ha aplicado en muchas
aplicaciones farmacuticas, cosmticas y fotogrficas.
Para la preparacin de formulaciones reconstituyentes
de tejido entre otras.
Hemoglobina En preparacin de fertilizantes orgnicos nitrogenados.
Suplementos dietarios para nios, ancianos y
deportistas.
Algunos alelos de la actina son causantes de
patologas, por lo que se han desarrollado tcnicas
para su deteccin. Adems, la actina puede emplearse
Actina como marcador indirecto en patologa quirrgica: es
posible emplear variaciones en pauta de localizacin
en los tejidos como marcadores de invasin de
neoplasias, vasculitis y otros.

2. Para qu sirven las protenas en nuestro cuerpo?

Forman parte de las estructuras corporales, suministran lo necesario para el


crecimiento y la reparacin de tejidos y rganos del cuerpo. Como ejemplo: la
queratina est presente en la piel, las uas y el pelo; el colgeno est presente
en los huesos, los tendones y el cartlago, y la elastina, se localiza
fundamentalmente en los ligamentos.
Transportan grasas, oxgeno y tambin facilitan la entrada a las clulas
(transportadores de membrana) de sustancias como la glucosa o los
aminocidos.
Forman parte del sistema inmunolgico o defensas del organismo.
Cuando el aporte de hidratos de carbono y grasas resulta insuficiente para cubrir
las necesidades energticas, los aminocidos de las protenas se emplean como
combustible energtico.

3. Qu son aminocidos esenciales? Cuntos son? y Cules son los que


requieren nuestro cuerpo?

Los aminocidos esenciales son aquellos que el organismo no puede sintetizar,


y por tanto deben ser aportados por la dieta.
Es importante la presencia de estos componentes en la dieta para poder fabricar
protenas ms complejas, que realizan mltiples funciones en el organismo.

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Los 9 aminocidos esenciales son: histidina, isoleucina, leucina, lisina,
metionina, fenilalanina, treonina, triptfano y valina.
Estos aminocidos requieren ser incorporados al organismo en su cotidiana
alimentacin y, con ms razn, en los momentos en que el organismo ms los
necesita: en la disfuncin o enfermedad. Hay que destacar que, si falta uno solo
de ellos (aminocido esencial) no ser posible sintetizar ninguna de las protenas
en la que sea requerido dicho aminocido. En el caso de la histidina, es un
aminocido esencial en la infancia que pasa a ser no esencial en la etapa adulta.

4. Qu pasara si se come menos o ms protenas de las que necesita nuestro


cuerpo?

Si nuestro cuerpo no recibe diariamente la cantidad que necesita, stas buscan


en sus propios tejidos, provocando una desintegracin de las protenas
corporales y prdida de masa muscular.

Si comemos menos protenas de las que necesita nuestro cuerpo: en nios y


adolescentes, un dficit puede retrasar el crecimiento. En adultos un dficit
puede provocar flojera de los msculos, fatiga y desequilibrio entre las hormonas.

Algunas enfermedades relacionadas con un dficit de protenas son:


inmunodepresin, atrofia muscular, fatiga, debilidad, cansancio y anorexia.

Y por el contrario un consumo excesivo de protenas ocasiona:

Sobrecarga del trabajo al hgado y a los riones.


Intensa formacin de cido en el estmago.
Aumento del calor corporal.}

5. ANEXO
Desnaturalizacin de las protenas

El calor, los cidos y las bases fuertes, los disolventes tales como el alcohol etlico, las
soluciones concentradas de algunas sales, la urea y algunas sustancias fenlicas,
generalmente provocan cambios profundos en las propiedades fisicoqumicas de las
protenas solubles.
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Estos cambios incluyen la prdida de la solubilidad (coagulacin), la formacin de geles
irreversibles, la exposicin de grupos reactivos tales como los sulfhidrilos, una mayor
susceptibilidad frente al hidrlisis enzimtica (y, por tanto, una mejor digestibilidad),
alteracin de los patrones de difraccin de rayos X y rotacin ptica. Los cambios son a
menudo, aunque no siempre, prcticamente irreversibles. Se acostumbra agrupar todos
estos cambios bajo un trmino: desnaturalizacin.

A nivel molecular, se define la desnaturalizacin como toda modificacin en la


conformacin de la protena. La desnaturalizacin, por lo tanto, implica una destruccin
en mayor o menor grado de las uniones de valencia secundarias responsables de la
conformacin propia de la protena original, aunque sin que se produzca rupturas de
uniones covalentes o protelisis.

Muy a menudo, el resultado global de la desnaturalizacin de una protena globular es


el despliegue de la cadena polipeptdica y su transformacin en un polmero plegado al
azar.

Esta transicin explica la formacin de geles, la coagulacin, el aumento de reactividad


y la susceptibilidad a la accin enzimtica. Colvin describe a la desnaturalizacin como
una transicin orden desorden. (El trmino prcticamente irreversible equivale a decir
que el proceso de desnaturalizacin es mucho ms lento que el de desnaturalizacin.)
Karlsow compara la desnaturalizacin de las protenas con la fusin de una sustancia
cristalina.

Al igual que se va deshaciendo la estructura ordenada del cristal durante la fusin, la


protena original va perdiendo el alto grado de orden de su conformacin durante el
curso de la desnaturalizacin.

La desnaturalizacin de las protenas es un proceso de importancia primordial en la


tecnologa de alimentos. La inactivacin trmica de las enzimas, se debe en gran parte
a la desnaturalizacin.

La desnaturalizacin de las protenas puede contribuir tanto a la textura como al sabor


de muchos alimentos. Es as que la exposicin de los grupos -SH contribuye
marcadamente al sabor propio de los alimentos ricos en protenas sometidos a coccin,
tales como los huevos y la leche.

En este proceso se pierden las estructuras secundaria, terciaria y cuaternaria sin que
haya una hidrlisis del enlace peptdico. En el caso de que se rompan los enlaces
disulfuro que estabilizan la estructura terciaria es difcil que regrese a su estado

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natural, aunque como en el caso de algunas enzimas la reactivacin o renaturalizacin
es posible.

Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria. Por este
motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es reversible. El proceso mediante el
cual la protena desnaturalizada recupera su estructura nativa se llama renaturalizacin,
estructura primaria la que contiene la informacin necesaria y suficiente para adoptar
niveles superiores de estructuracin.

Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos de aislamiento y purificacin de


protenas, ya que no todas las protenas reaccionan de igual forma ante un cambio en
el medio donde se encuentra disuelta.

En algunos casos, la desnaturalizacin conduce a la prdida total de la solubilidad, con


lo que la protena precipita. La formacin de agregados fuertemente hidrofbicos
impide su re naturalizacin, y hacen que el proceso sea irreversible

6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

La importancia de las protenas para nuestro organismo


En el texto: (La importancia de las protenas para nuestro organismo, n.d.)
Bibliografa: La importancia de las protenas para nuestro organismo. (n.d.). 1st ed. [ebook]
Available at:
http://www.naturimport.es/sites/naturimport.es/files/ImportanciaProtenias_article_web.pdf
[Accessed 23 May 2017].

Aminocidos: medlineplus enciclopedia mdica


En el texto: (Medlineplus.gov, 2017)
Bibliografa: Medlineplus.gov. (2017). Aminocidos: MedlinePlus enciclopedia mdica. [online]
Available at: https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/002222.htm [Accessed 23 May 2017].

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