Se describe una catlisis conmutable conmutada por un polmero identificado de un

tipo de enzima inteligente. Este polmero impreso nico estaba compuesto por redes
impregnadas con fosfato de p-nitrofenilo que contenan poli (N-isopropilacrilamida)
que exhiban hidrofilia / hidrofobicidad dependiente de la temperatura. A una
temperatura relativamente baja (tal como 20 C), este polmero era capaz de
catlisis vigorosa para la hidrlisis de acetato de p-nitrofenilo debido a sus redes
hidrfilas, lo que permita el acceso a la estructura impresa. Por el contrario, a
temperaturas ms altas (tales como 40C), este polmero demostr una catlisis
deficiente debido a su hidrofobicidad dramticamente aumentada, que inhiba el
acceso a los sitios impresos. A diferencia de los polmeros impresos anteriormente
informados que carecen de redes ajustables, este nuevo polmero impreso emplea
redes de poli (N-isopropilacrilamida) termosensibles, permitiendo as la catlisis
conmutable.

1.Introduccin
El atractivo de desarrollar biomimticos materiales catalticos capaces de reconocer
y catalizar las molculas deseadas est ganando popularidad, debido a su
importancia en una amplia gama de aplicaciones [1 - 3]. Entre los esfuerzos en curso
se destaca la aplicacin de la tcnica de impresin molecular, que proporciona una
ruta sencilla para desarrollar el reconocimiento molecular y materiales catalticos
comparables a los anticuerpos naturales, pero con propiedades mejoradas [4,5].
Conocido como una tecnologa "de la llave a la cerradura", la impresin molecular
es capaz de fijar sitios de unin hechos a la medida para las plantillas deseadas
dentro de polmeros altamente reticulados. Con el fin de fabricar polmeros impresos
molecularmente, primero se deja que la plantilla y los monmeros funcionales
formen una arquitectura autoensamblada en la que los monmeros funcionales
estn posicionados regularmente alrededor de la plantilla. Luego se lleva a cabo la
polimerizacin para fijar esta arquitectura auto-organizada en su lugar, seguido por
la eliminacin de la plantilla impresa de las redes polimricas, lo que deja por ello
sitios de unin estereoquimicos complementarios a la plantilla. De esta manera, la
coincidencia entre la plantilla y los sitios de unin constituye una memoria molecular
inducida, permitiendo as que el polmero preparado reconozca la especie de
impresin (es decir, la plantilla). Para su aplicacin en catlisis de tipo enzimtico,
generalmente se utiliza una plantilla similar al estado de transicin de la reaccin en
curso, es decir, el anlogo del estado de transicin (TSA) [6]. La razn de esto est
relacionada con el fenmeno de que la energa de activacin es usualmente
necesaria para superar la barrera de potencial entre el reactivo y el producto (es
decir, la conversin del estado reactivo al estado de transicin) [7]. Como tal, la
interaccin husped-husped Dentro del sistema de impresin molecular es
generalmente comparable a la de biosistemas naturales, tales como enzima-
sustrato, receptor-ligando y anticuerpo-antgeno. Sin embargo, en comparacin con
estos biosistemas, los polmeros con impresin molecular son polmeros altamente
reticulados, que por lo tanto ofrecen ventajas significativas
Incluyendo resistencia a temperatura y presin elevadas, e inercia a cido, base,
in metlico, disolvente orgnico, etc. Por lo tanto, los polmeros impresos
molecularmente son especialmente adecuados para ser usados como materiales
de reconocimiento molecular y cataltico bajo condiciones speras
Condiciones.

Una frontera emergente en la investigacin qumica es manejar reacciones qumicas

en un modelo ajustable. Los cientficos en este campo han estado trabajando para
hacer frente a este desafo en los ltimos aos [8 - 10]. Entre ellos destacan
Bergbreiter y sus colegas [11,12], que han contribuido en gran medida a este campo
mediante el desarrollo de catalizadores unidos a poli (N-isopropilacrilamida)
(PNIPAm). Utilizando la transicin de fase termosensible nica de PNIPAm, los
catalizadores o sustratos unidos a PNIPAm pueden recuperarse fcilmente usando
calentamiento (agua) o precipitacin con disolvente, lo que conduce as a esta A un
catalizador inteligente capaz de aislar especifican cuantitativamente catalizadores.
Ahora, est claro que estos resultados pueden atribuirse directamente a la
estructura nica de PNIPAm, que comprende cadenas de amida hidrfila e
isopropilo hidrfobo. A una temperatura por debajo de su temperatura de solucin
crtica ms baja (LCST, \ sim 32C), El polmero es soluble en agua debido a las
interacciones de enlace de hidrgeno entre las cadenas de amida y el agua [13]. A
una temperatura por encima de la LCST, el polmero est sujeto a una transicin de
fase trmica inducida por la supresin de las interacciones de unin de hidrgeno,
dando como resultado una hidrofobicidad dramticamente aumentada [14].

Animados por estos trabajos elegantes, [15] y los investigadores relacionados [16,
17] han desarrollado con xito impresos de polmeros molecularmente capaces de
reconocimiento molecular termosensible. A temperaturas bajas relativas, los
polmeros pueden especficamente Reconocer sus plantillas debido a las redes
hidroflicas, que Permiten el acceso de analitos en aguas a los sitios impresos.
Encima La temperatura de transicin, el aumento espectacular de la hidrofobicidad
Encogimiento de las redes impresas, destruyendo las redes Capacidad de
reconocimiento molecular. De esta manera, el reconocimiento molecular Por tales
polmeros impresos inteligentes demostr la relacin temperatura-Dependiente
modelo ajustable.

Inspirados por este mecanismo, aqu informamos el primer ejemplo De

catlisis conmutada por un polmero impreso inteligente y de tipo
enzimtico (Es decir, 'MIP-S'). Como se ilustra en el Esquema 1, por debajo de la
LCST, Las redes hidroflicas impresas permiten el acceso a los reactivos,
Permitiendo as la catlisis. Por el contrario, por encima de la LCST, la Disminucin
dramtica de la hidrofilicidad provoca el encogimiento del, Lo que inhibe la
reactividad de este polmero. As, la catlisis regulada por temperatura por MIP-S
puede ser reconocida Como un proceso 'on / off'-conmutable. Con el fin de probar
Las propiedades catalticas conmutables, la hidrlisis del p-nitrofenil Acetato de etilo
(NPA) como la reaccin modelo, ya que este La reaccin es compatible con el agua
y tiene un TSA bien probado (Es decir, fosfato de p - nitrofenilo, NPP) [18, 19]. Para
el estudio de Especificidad, butirato de p-nitrofenilo (NPB), el anlogo estructural De
NPA, como el control. El objetivo de este Estudio es demostrar que la

catlisis modulada se puede realizar Utilizando un polmero impreso

inteligente y cataltico.
2. Seccin experimental

2.1. Preparacin de polmeros impresos

A menos que se indique lo contrario, los productos qumicos se obtuvieron de

Aldrich (Sigma - Aldrich Company Ltd., Dorset, Reino Unido) y Fisher (Fisher
Scientific UK Ltd., Loughborough, UK) y se utiliza tal como se recibi, excepto 1-

Vinilimidazol (VI) y divinilbenceno (DVB), que se lavaron Con solucin de hidrxido

de sodio al 5% en peso antes de su uso. La preparacin De polmeros impresos
molecularmente, como se ilustra en el Esquema 2, se bas en nuestro diseo
recientemente optimizado [20] y sera discutido ms adelante. Una plantilla de
monmero estequiomtrica Ratio. (0,11 g, 0,5 mmol), DVB (1,42 ml, 8,0 mmol),

1,10 - azobis (ciclohexano - 1 - carbonitrilo) (ABCHCN) (0,60 g; 2,46 mmol), N -

isopropilacrilamida (NIPAm) (0,91 g, 8,0 mmol) Y se disolvi una cierta cantidad de
VI (indicada adicionalmente) En acetonitrilo que contiene 50% de dimetilsulfxido
(totalmente 10 ml) Para formar un sistema homogneo. Despus de ser
desoxigenado con Sonicacin y nitrgeno, el sistema mixto fue irradiado por
ultravioleta Luz (365 nm) durante la noche. Los polmeros resultantes fueron
Triturado y extrado con dimetilsulfxido que contiene 20% de cido actico
Utilizando un aparato Soxhlet durante 24 h. El producto (es decir, MIP-S) se lavaron
profusamente con etanol y se secaron a temperatura ambiente temperatura.

Para la comparacin, tres polmeros de control llamados '' MIP '', '' NIP '' Y "NIP-S"
tambin se prepararon bajo condiciones comparables. El MIP y NIP son los
impresos convencionales y no impresos Polmeros, respectivamente. Ambos no
tienen PNIPAm En sus redes polimricas. El NIP-S es el polmero no impreso

Contiene la misma cantidad de NIPAm que en la MIP-S.

2.2. Desorcin programada por temperatura

La desorcin programada por temperatura (TPD) se utiliz para Evaluar la

interaccin entre los polmeros preparados y el analito [21, 22]. Utilizando un
dispositivo que comprende una cromatografa de gases (TCD) y un sistema de
procesamiento de datos, se colocaron polmeros (10 mg) En un tubo de cuarzo en
forma de U en lnea (4 mm ID). Despus de 10 lL de analito (0,01 ml de \ mu l \ mu
l de acetonitrilo) se adsorbi previamente mediante estos polmeros, El tubo en
forma de U se calent bajo un flujo de nitrgeno (40 ml min \ lambda 1 \ cdot 0,23
MPa) a 10 \ mu C min \ lambda desde la temperatura ambiente A la temperatura en
la que el analito se desorbe. La seal de desorcin Fue registrada por el sistema de
procesamiento de datos.

2.3. Evaluacin de la transicin de fase

Se utiliz la dispersin dinmica de la luz (DLS) para evaluar la fase Transicin en

el agua (que contiene alrededor de 5% de acetonitrilo) [23]. El anlisis de DLS se
llev a cabo con un ngulo de dispersin de 90 \ utilizando Un gonimetro equipado
con una unidad de auto-rotacin y un lser He-Ne (Mastersizer-X) (Malvern, Reino
Unido). Con el fin de permitir alcanzar el equilibrio, Todas las muestras se
mantuvieron a temperaturas especficas durante 10 minutos antes Adquiriendo el
radio hidrodinmico (Rh). Por una comparacin Entre estos polmeros
termosensibles y no termosensibles, El cambio relativo en los radios hidrodinmicos
(Rc) reflej el Contribucin de la transicin de fase trmica:

Aqu Rd es el tamao de partcula de partculas secas. T representa el agente

termosensible Polmeros, y NT indica la correspondiente no termosensible

Polmeros.

2.4. Prueba de catlisis

Se evaluaron las propiedades catalticas de los polmeros preparados En formatos

de lote en PBS (pH 7,0, que contiene aproximadamente 5% de acetonitrilo) [24]. La
concentracin inicial de analito (NPA o NPB) fue 0,01 lmol ml \ Delta 1 (totalmente
10 ml). El contenido en slidos de los polmeros Fue 2,5 mg ml \ Delta 1 en cada
ensayo. El p-nitorofenolato producido Se monitoriz espectrofotomtricamente a
400 nm. El catalizador Actividad de estos polmeros se obtuvo a partir del valor
medio De carreras triples. Al considerar el efecto de la autohidrlisis sobre El
proceso de catlisis, la hidrlisis de analitos sin ningn polmero Tambin se realiz
bajo condiciones comparables, y la Los resultados se dedujeron de la actividad
global de la Polmeros.

2.5. Voltamperometra cclica de desorcin dinmica

El potencial para reducir / oxidar una molcula de unin depende de La constante

de unin. Una alta constante de unin requiere ms energa Para superar la unin,
lo que conduce a un mayor potencial redox. As, la voltamperometra cclica de
desorcin dinmica (DCV) puede Proporcionar informacin valiosa sobre la
interaccin vinculante entre Los polmeros preparados y su plantilla [25, 26]. Usando
un electroqumico Estacin de trabajo equipada con una configuracin de tres
electrodos (Pt-trabajo y contra electrodos, Ag / Ag + -Ref.) (LK9806) (Lanlike,
China), polmeros (10 mg) preabsorbidos aprox. 1 lmol Plantilla se colocaron en una
cubeta rodeada por una capa de difusin Aparato de sonicacin (electrlito de
soporte: 0,01Mmol ml \ cdot 1 KCl; 10 ml). La plantilla transitoriamente desorbida
Escaneado rpidamente por la estacin de trabajo hasta 20 ciclos hasta Se
consigui un voltamograma cclico dinmico (rango de exploracin, ca. 800-200 mV;
Velocidad de escaneado, 25 mV \ delta s).

3. Resultados y discusin

3.1. Interaccin plantilla-monmero y cantidad estequiomtrica de

Monmero Es bien sabido que el autoensamblaje molecular juega un papel

importante Papel en la determinacin previa de la actividad y especificidad de la
Polmero impreso. Una cantidad en exceso de monmero sobre el Plantilla causara
desajuste espacial y estrico debido al excesivo Que se distribuyen aleatoriamente
en todo el polmero. Por el contrario, una cantidad demasiado pequea de
monmero dar lugar a una Polmero con una cantidad insuficiente de sitios de
unin. As, slo el Cantidad estequiomtrica de monmero podra generar la El
reconocimiento molecular y la capacidad cataltica [27]. Con el fin de monitorear
Esta interaccin de autoensamblaje, Fig. 1 muestra el espectro UV como Funcin
de la relacin molar VI / NPP, en la que NPP (7,5 mmol L \ beta 1; 10 lL por titulacin)
se titul en VI (0,5 mmol L \ Delta 1, 2,5 ml). La titulacin caus un cambio en el
espectro UV, y el cambio se Mximo cuando la NPP valorada alcanz una cantidad
crtica (Correspondiente a una relacin VI / NPP de 1,67 mol / mol). Ms all de la
crtica Valor, no se observ ms cambio en el espectro UV excepto Para una mayor
absorbencia. Este resultado sugiere que el autoensamblaje La interaccin fue
saturada por la valoracin estequiomtrica, y Se optimiz la relacin de cantidad de
plantilla a monmero. As, 0,835 mmol VI se utiliz para preparar MIP-S y sus
polmeros de control Donde se adopt 0,5 mmol de NPP.

3.2. Espectros FTIR y morfologa del SEM

Con el fin de determinar el comportamiento de impresin, los espectros FTIR de

MIP - S, NPP y el sistema MIP - S no lavado (es decir, el precursor MIP - S) (Figura
2). Tres picos caractersticos (3200-3700, 2800-3200 y 1650-1750 cm ^ {1}) y una
huella digital amplia (1000-1600 cm ^ {1}) apareci en los espectros de MIP-S Y su
precursor. Estos picos caractersticos pueden asignarse a la Estirando la vibracin
de OAH, CAH y C @ O [28]. La huella dactilar Pueden surgir de los bonos CAN y
CAC y su rotacin. Por Comparacin, tambin se incluyeron los espectros FTIR de
los polmeros de control en la Fig. 2. El precursor de MIP-S, MIP-S y NIP-S demostr
Un pico de absorcin a 1650-1750 cm ^ {1}, pero fall MIP y NIP. Esta El resultado
sugiere que estos polmeros termosensibles PNIPAm en sus redes polimricas [29,
30]. Cabe destacar que El precursor de MIP-S tena los picos caractersticos de NIP-
S y NPP, lo que implica la complicada composicin del precursor de MIP. Despus
del lavado, el espectro del precursor de MIP - S (es decir, MIP - S) se convirti en
Comparable al NIP-S. Este resultado sugiere La impresin molecular de NPP
ocurri durante la preparacin, como esperado. Las imgenes SEM de estos
polmeros preparados se muestran en la Fig. 3. Estos polmeros son esfricos en
morfologa con dimetros similares De \ sim 1,5 - 2 \ mu m. Cuando se compar con
MIP y NIP, MIP-S y El NIP-S pareca estar ligeramente desigual en la superficie.
Esta observacin Probablemente del PNIPAm contenido, que normalmente tiene
Algunos efectos sobre la textura de los polmeros preparados. Por lo tanto, la La
preparacin exitosa de estos polmeros facilita estudios posteriores.

3.3. Interaccin especfica entre los polmeros y el analito

Higo. 4 presenta los perfiles de TPD, con el propsito de verificar La interaccin

entre los polmeros preparados y el analito. Ambos MIP-S y MIP demostrado
capacidad de separacin significativa para NPA y NPB, pero NIP y NIP-S
fracasaron. Este resultado sugiere que La interaccin entre los dos polmeros
impresos (es decir, MIP-S Y MIP) y NPA es altamente especfico y capaz de
separacin de NPA y NPB. En combinacin con la caracterizacin FTIR,
esteResultado refleja nuevamente una consecuencia de la impresin especfica de
NPA. Dado que ambos MIP-S y MIP contena la "impresin" de la plantilla en Sus
redes polimricas, tales capacidades de reconocimiento molecular.

3.4. Hidrofilicidad / hidrofobicidad termosensible

Las curvas DLS de los polmeros preparados se presentan en la Fig. 5. En

comparacin con sus correspondientes polmeros no termosensibles (Es decir, MIP
y NIP), MIP - S y NIP - S demostraron ms Dependencia de la temperatura, como
se esperaba. El Rc de MIP-S y NIP-S disminuy con el aumento de las
temperaturas, lo que indica una disminucin Hidrofilia con el aumento de las
temperaturas. Significativamente La hidrofilicidad disminuida de MIP-S y NIP-S
exhibida a aprox. 27 - 37C. Debajo de la regin de temperatura, tanto MIP-S como
NIP-S Exhibieron una hidrofilicidad relativamente alta; Sin embargo, a temperaturas
ms altas, Su hidrofilicidad disminuy dramticamente. Este resultado, Como se ha
explicado anteriormente, puede atribuirse a las caractersticas trmicas nicas Fase
de transicin de PNIPAm. La mayor hidrofilia a bajas temperaturas Puede ser
debido a las redes PNIPAm hidroflicas, que Permiti que el agua tuviera acceso al
interior del polmero. La disminucin Hidrofilia a altas temperaturas puede atribuirse
a la Las redes PNIPAm hidrofbicas, que inhiban el acceso de Agua a las redes
polimricas.

3.5. Catlisis modulada

Higo. 6 muestra la actividad cataltica de los polmeros preparados. En Con el fin de
rastrear las propiedades catalticas ajustables, dos Temperaturas, es decir, 20C y
40C (inferior o superior) Que la regin termosensible de MIP-S y NIP-S) Para un
estudio contrastivo. Se observ que MIP-S a 20C era Comparable al MIP y capaz
de catlisis vigorosa para la hidrlisis De NPA. Sin embargo, el MIP-S a 40C se
pareca ms a NIP-S y NIP, Que no demostraron catlisis especfica significativa.
MIP-S Aparentemente demostraron las propiedades catalticas termo-conmutables.
Claramente, este resultado se puede atribuir a las caractersticas Sensibilidad de
las redes MIP-S. Las redes hidroflicas MIP-S A la temperatura baja permiti que los
reaccionantes accedieran a las redes polimricas, lo que permiti la catlisis
vigorosa. Por encima de la temperatura de transicin, La hidrofilicidad inhiba el
acceso de agua a las redes polimricas, Inhibiendo as la actividad cataltica.

Higo. 7 ilustra la reproducibilidad cataltica y la estabilidad de MIP-S. La reactividad

de MIP-S no demostr una disminucin significativa Despus de una serie de
catlisis conmutada on / off. Este resultado sugiere Que MIP-S es relativamente
estable y capaz de reproducir La catlisis conmutable. Claramente, la
reproducibilidad cataltica y Estabilidad de MIP-S se puede atribuir a la alta
reticulacin impresa Redes. Los polmeros con impresin molecular, como
anteriormente Explicados, son polmeros altamente reticulados, que ofrecen
Ventajas de estabilizar la conformacin impresa. Por lo tanto, la reproducibilidad
cataltica de MIP-S podra esperarse.

3.6. Comportamiento de enlace conmutable

Como se ha sealado anteriormente, los experimentos de DCV pueden

proporcionar Informacin valiosa sobre el comportamiento vinculante de las
Polmeros con su molde. Teniendo en cuenta el efecto termosensible MIP-S, se
seleccionaron adems 20 y 40 \ mu C para Un estudio contrastivo. Como se muestra
en la Fig. 8, la molcula plantilla (es decir, NPP) unido a MIP-S a 20C exhibi un
pico de reduccin a \ Delta 730,6 mV (figura 8c). En contraste, este pico de
reduccin a 40 C se desplaz a una menor Fig. (Es decir, \ geq 684,5 mV) (figura
8d). MIP-S demostrado Una interaccin ms dbil con su molcula plantilla a 40C
Que a 20C.

Con el fin de aclarar esta interaccin, la Fig. 8a, b, e, f, g y h tambin se incluyen

Los potenciales de reduccin de la molcula molde de Estos polmeros de control.
El potencial de reduccin de la plantilla Unido a MIP-S a 20 C era casi comparable
al de MIP (\ delta 730,6 frente a 735,9 mV). El potencial de reduccin de la plantilla
Unido a MIP - S a 40C se hizo tan bajo como el de NIP S (\ Delta 684,5 frente a
681,7 mV). Los resultados sugieren fuertemente que MIP-S Proporcion una
interaccin termo-conmutable con su plantilla molcula. De nuevo, este resultado
puede atribuirse a la Sensibilidad de las redes MIP-S. El mecanismo termosensible
Por MIP-S regul el acceso de analito a las redes impresas, Lo que permiti la unin
conmutada.

4. Conclusiones

La catlisis "on / off"-conmutable mediante una impresin inteligente Polmero se

informa en este estudio. Este polmero nico fue Compuesto de poli (N-
isopropilacrilamida) -con contenido molecular Impresas que mostraron hidrofilia /
Hidrofobicidad. Al crear una mezcla hidrfila / hidrfoba Transicin dentro de las
redes impresas, el MIP-S preparado Era capaz de un acceso controlado /
desactivado a los reactantes, lo que A catlisis conmutable. A temperaturas
relativamente bajas, este polmero Catlisis vigorosa demostrada. Sin embargo, a
niveles relativamente altos Temperaturas, este polmero mostr una mala
reactividad. Los resultados Demuestran que la catlisis conmutable por el
inteligente y cataltico Se puede realizar mediante el uso de este nuevo diseo. Por
Aprovechando las ventajas de la excelente estabilidad, rentabilidad, facilidad De
preparacin y reutilizacin de la tecnologa de impresin molecular, El sistema
resultante podra ofrecer aplicaciones tentadoras hacia Catlisis sustancial y
autocontrol.