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Rev. Fac. Ing. Univ. Antioquia N. 43.pp. 33-41.

Marzo,
Implementacin 2008
de un bus articulado con motor dedicado a gas natural ...

Determinacin de la velocidad especfica de


consumo de oxgeno en microorganismos
incluyendo el tiempo de respuesta del electrodo
de oxgeno

Determination of the specific oxygen uptake


rate in microorganisms including electrode time
response

Ana Mara Torres Lpez a*, Juan Carlos Quintero Daz b,


Luca Atehorta Garcs c
Programa de Bioingeniera. Calle 67 N 53108, Universidad de Antioquia,
a

A.A. 1226, Medelln, Colombia


b
Grupo de Bioprocesos, Departamento de Ingeniera Qumica. Calle 67 N
53108 Universidad de Antioquia, A.A. 1226, Medelln, Colombia
Grupo de Biotecnologa Vegetal. Instituto de Biologa. Calle 67 N 53108
c

Universidad de Antioquia, A.A. 1226, Medelln, Colombia

(Recibido el 6 de agosto de 2007. Aceptado el 9 de noviembre de 2007)

Resumen
La transferencia de oxgeno es un parmetro importante en los procesos de
fermentacin aerobios. Conocer el consumo de oxgeno real del organismo
de inters, permite determinar los requerimientos energticos y de proceso en
aireacin y agitacin. En este trabajo se presenta un tratamiento matemtico y
metodolgico para la determinacin de la velocidad especfica de consumo de
oxgeno (QO2) considerando el tiempo de respuesta del electrodo de oxgeno.
Dicha metodologa se aplic en la determinacin del QO2 del hongo medici-
nal Ganoderma lucidum, durante su cultivo en un reactor de tanque agitado
a escala de laboratorio. Se obtuvo un valor promedio de QO2 de 0,345 mmol
O2 (g biomasa.h)-1 0,0171 sin incluir el tiempo de respuesta del electrodo y
de 0,383 mmol O2(g biomasa.h)-1 0,025 al incluir dicho parmetro. A mayor
tiempo de respuesta del electrodo de oxgeno, mayor ser la diferencia entre
los valores de QO2.

* Autor de correspondencia: telfono: + 57 + 4 + 219 55 08, fax: + 57 + 4 + 211 90 28, correo electrnico: atorres@udea.edu.co
(A. Torres)

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---------- Palabras clave: demanda especfica de consumo de oxge-


no, electrodo de oxgeno disuelto, tiempo de respuesta, Ganoderma
lucidum.

Abstract
The oxygen transfer rate is an important parameter for the aerobic fermentative
process. By establishing the real oxygen uptake rate of the target organism
we can determine the energetic and process requirements for aeration and
agitation. We report in this paper the mathematical and methodological
procedure for the determination of the specific oxygen uptake rate (QO2), taking
the oxygen electrode response into account. This methodology was applied
to the QO2 determination for the Ganoderma lucidum medicinal mushroom
while it was being cultured in a stirred reactor in the laboratory. The average
value for QO2 was 0.345 mmol O2 (g biomass.h)-1 0.0171 without taking
the electrode time response into account and 0.383 mmol O2 (g biomass.h)-1
0.025 taking the electrode time response into account. Higher response times
of the oxygen electrode resulted in a greater differences between the two QO2
values obtained.
---------- Keywords: specific oxygen transfer rate, oxygen electrode,
time response, Ganoderma lucidum.

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Determinacin de la velocidad especfica de consumo de oxgeno

Introduccin electrodos estn constituidos por una carcasa me-


tlica que contiene un ctodo de Pt y un nodo de
En los procesos de fermentacin aerbicos es ne- Ag, inmersos en una solucin electroltica. Esta
cesario un suministro adecuado de oxgeno que celda est separada del medio por una membrana
satisfaga los requerimientos metablicos de los permeable al oxgeno. Las reacciones que tienen
organismos empleados. La oxidacin de la fuente lugar en el electrodo son:
de carbono y su transformacin en clulas, pro-
ductos y CO2 establece una demanda de oxgeno Reaccin nodo: 4Ag + 4Cl- 4AgCl + 4e-
que es esencial satisfacer a travs de la aireacin
Reaccin Ctodo: O2 + 2 H2O + 4 e- 4 OH-
y mezclado del cultivo, el oxgeno es el receptor
final de los electrones producidos en las reaccio-
nes de oxidacin, fenmeno conocido como res-
piracin aerobia [1, 2].
Comnmente el oxgeno se introduce en el caldo
de cultivo por la inyeccin de aire, las molculas
de oxgeno deben superar una serie de resisten-
cias al transporte antes de que sean utilizadas por
las clulas. En la figura 1 se muestran de forma
esquemtica las resistencias involucradas en el
transporte de oxgeno desde el interior de las bur-
bujas de gas hasta el lugar de reaccin en el inte-
rior de las clulas [3].
La velocidad a la que las clulas consumen oxg-
eno en los biorreactores determina la velocidad Figura 1 Representacin de las resistencias a
a la que se requiere transferir. Muchos factores la transferencia de oxgeno desde las burbujas
influyen en la demanda de oxgeno, siendo los de aire hasta el interior de la clula en clulas
ms importantes la especie celular utilizada, la libres y agregados celulares. (i) Difusin desde
fase de crecimiento del cultivo y la naturaleza de la fase gaseosa de la burbuja hasta la interfa-
la fuente de carbono en el medio. se, (ii) Disolucin del oxgeno a travs de la in-
terfase gas-lquido, (iii) Difusin a travs de una
En cultivos discontinuos, la velocidad de consu- pelcula lquida estancada que rodea la burbuja,
mo de oxgeno vara con el tiempo, debido a que (iv) Transporte convectivo del oxgeno a travs
la concentracin de clulas aumenta durante el del seno del fluido, (v) Difusin a travs de una
cultivo y a los cambios fisiolgicos en las dife- pelcula lquida estancada que rodea la clula o
rentes fases de crecimiento. De otro lado, cuando los agregados, (vi) Difusin libre a travs de la
la concentracin de oxgeno disuelto en el lquido interfase lquido-clula o lquido-agregado, (vii)
(CL), se site por debajo de un cierto nivel crti- Difusin a travs del agregado hasta cada clula
co (Ccrt.), la velocidad especfica de consumo de individual y (viii) Difusin libre a travs del cito-
oxgeno depender tambin de CL. Para eliminar plasma al interior de la clula
las limitaciones en el crecimiento por falta de
oxgeno, CL en cada punto del biorreactor debe
ser superior a Ccrt.. Estas reacciones qumicas producen una corrien-
te elctrica que es proporcional a CL. Puesto que
La CL en biorreactores se mide generalmente em- no existe movimiento del fluido en la solucin
pleando un electrodo de oxgeno disuelto. Existen electroltica y escaso movimiento en la pelcula
dos tipos de electrodos que son de uso comn: los lquida que rodea la membrana, se considera que
electrodos galvnicos y los polarogrficos. Los el oxgeno se transfiere desde el medio hacia el

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electrodo por difusin molecular y como con- valorar el valor del QO2 y en consecuencia operar
secuencia, existe un retraso en la respuesta del el biorreactor bajo unas condiciones de aireacin
electrodo con respecto al valor real en el medio. y/o agitacin no adecuadas para el crecimiento
El tiempo de respuesta se define como el tiempo del microorganismo.
que tarda el electrodo en alcanzar el 63% del va- En la tabla 1 se presentan datos de QO2 reportados
lor final de la medida, cuando se lo expone a un en la literatura. En algunos de estos reportes biblio-
cambio de concentracin [3]. En caso de que no grficos no se especifica si los datos de concentra-
se tuviera en cuenta la correccin por el retraso cin de oxgeno, necesarios para la determinacin
en la respuesta del electrodo de oxgeno, sobre de dicho parmetro, fueron corregidos consideran-
los valores de OD suministrados, se podra sub- do el tiempo de respuesta del electrodo.

Tabla 1 Velocidad especfica de consumo de oxgeno (QO2) para diferentes microorganismos

QO2
Organismo Ref.
(mmol O2 . g clulas-1.h-1)

5,13 (sin corregir)


Bacillus thuringiensis [4]
0,79 (corregido)
Cephalosporium acremonium 1,06 [5]
Pseudomonas putida 18,00 (sin corregir) [6]
Candida lipolytica 0,81 [7]

La informacin respecto a la metodologa para


la determinacin del QO2 teniendo en cuenta el (1)
tiempo de respuesta del electrodo es escasa [2,
8]. Por tanto, el objetivo principal de este trabajo Donde
es presentar en forma detallada el procedimiento
KLa: coeficiente volumtrico de transferencia de
matemtico para la determinacin de la velocidad
oxgeno (h-1)
especfica de consumo de oxgeno QO2 conside-
rando el tiempo de respuesta del electrodo de ox- C*: solubilidad del oxgeno en el medio (gL-1)
geno; adicionalmente se presenta la aplicacin de
CL: concentracin de oxgeno disuelto en el
dicho procedimiento en la determinacin del QO2
medio (gL-1)
para el hongo medicinal Ganoderma lucidum cul-
tivado en un biorreactor de tanque agitado. QO2: velocidad especfica de consumo de oxge-
no (mmol O2 .g clulas secas-1. h-1)
Modelo matemtico
X: concentracin de clulas secas en el medio
A continuacin se presenta el modelo para el cl- (g.L-1)
culo del QO2 considerando el tiempo de respuesta
Al dividir ambos lados de la ecuacin (1) por C*,
del electrodo de oxgeno.
se tiene:
La ecuacin (1) describe el balance de oxgeno du-
rante la transferencia desde una burbuja de aire ha- (2)
cia el medio de cultivo y el consumo por la clula:

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Determinacin de la velocidad especfica de consumo de oxgeno

Q
O 2X C
Donde R = De la ecuacin (4), si se define que E ' (t ) = L
C* C*,
entonces:
Durante la medicin del QO2 se suspende la ai-
reacin, por tanto la ecuacin (4) se simplifica ,y
as: E ' (t T ) = U + V (t T ) (6)
Multiplicando la ecuacin (5) y (6) por k e igua-
(3) lando ambas ecuaciones, resulta:

La ecuacin (3) puede integrarse con la condicin (7)


inicial CL(0)=Cb. Donde Cb es la concentracin
de oxgeno disuelto en condicin de estado es- La ecuacin (7) es una ecuacin diferencial lineal
table, al iniciarse la medicin de QO2 (figura 2). de primer orden y su solucin es de la forma:
Considerando que el valor de QO2 es constante,
dado que el tiempo en el que se hace la medicin , t T (8)
es corto,
Dado que E(T)=E(0)=U, entonces
(4)
(9)
Donde

V = R
Por consiguiente, durante la etapa de medicin
del QO2, el descenso en la concentracin de ox-
geno disuelto es lineal con respecto al tiempo (fi-
gura 2).
Para incluir el efecto de la respuesta del electrodo
en las mediciones experimentales, Yang et al. [9]
presentaron una expresin (ver ecuacin 5) que
muestra la relacin entre la seal con retraso del Figura 2 Variacin de la concentracin de
electrodo E(t) y la seal sin retraso E(t-T), que oxgeno disuelto para medidas de QO2
incluye el tiempo muerto del electrodo (T), por la
introduccin de una funcin de transferencia. Por consiguiente, la respuesta dinmica del elec-
trodo de oxgeno durante el tiempo de medicin
del QO2 es:
t T (5)
(10)
Donde:
Para elementos de medicin sin tiempo muerto
T : tiempo muerto del electrodo (T=0), esta ecuacin se simplifica a:
1
k: inverso del tiempo de respuesta, k =
(11)

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Como el electrodo empleado no presenta tiempo Determinacin de la concentracin de


muerto, se emple la ecuacin (11) en la deter- oxgeno disuelto
minacin de la velocidad especfica de consumo
La concentracin de oxgeno disuelto se determi-
de oxgeno (QO2), considerando el tiempo de res-
n a partir de la lectura del porcentaje de oxgeno
puesta del electrodo. Luego, a partir de la grfica
disuelto obtenida con un electrodo polarogrfico
Ingold. Para convertir la respuesta del electrodo
de E(t) vs. se encontr el valor
dada en % de OD a su correspondiente valor en
de V, del cual se deriv el valor del QO2. gL-1, se emple el valor de la solubilidad del oxge-
no en el medio de cultivo, la cual se midi experi-
mentalmente, calibrando el sensor de oxgeno con
Experimentacin agua destilada y realizando la lectura de porcentaje
de OD para el medio de cultivo saturado con aire.
Microorganismo y cultivos de activacin El porcentaje de saturacin de oxgeno en el me-
dio fue de 93,8%. Como la solubilidad del aire en
La cepa de Ganoderma lucidum se conserv a agua a 30C y 1 atm de presin es de 8,05x10-3gL-1
4C en cajas Petri conteniendo agar enriquecido [3], entonces la concentracin de O2 en el medio se
con cereales. El preinculo de 100 mL, se prepa- calcul a partir de la siguiente ecuacin:
r en erlenmeyers de 250 mL, a partir del micelio
de un cultivo semilla proveniente de caja Petri.
La composicin del medio fue: 30 gL-1 de gluco-
sa, 8,95 gL-1 de peptona, 1 gL-1 de KH2PO4, 0,5
gL-1 de MgSO4.7H2O y 0,05 gL-1 de tiamina. El
tiempo de incubacin fue de 10 das. El cultivo se Determinacin del tiempo de respuesta
homogeniz en un blender durante 15 s. El in- del electrodo
culo se prepar transfiriendo alcuotas de 5 mL
del preinculo a un erlenmeyer de 250 mL que El electrodo de oxgeno calibrado, se sumergi en
contena 45 mL del medio de un medio de culti- agua exenta de oxgeno (a 30C y 1 atm, previo
vo compuesto de 38,95 gL-1 de harina de cereal burbujeo de gas nitrgeno) para obtener un valor
y 4,77 gL-1 de extracto de levadura. Los cultivos de 0% en la lectura. Posteriormente, se transfiri a
del inculo se incubaron durante 7 das. Tanto el un recipiente con agua destilada saturada (previo
preinculo como el inculo tuvieron un pH ini- burbujeo de aire). Cada 10 segundos, se registr el
cial de 5,6 y se incubaron a 30C y 120 rpm. valor del porcentaje de OD hasta que dicho valor
se mantuvo relativamente constante en varias lec-
Cultivos en Reactor turas sucesivas. A partir de la grfica de OD (%)
vs. tiempo (s), se determin el tiempo de respuesta
Los cultivos en reactor tuvieron como objetivo del electrodo como el necesario para obtener un
determinar el coeficiente volumtrico de trans- 63% del cambio total en la medida [3].
ferencia de oxgeno del hongo Ganoderma lu-
cidum. Se emple un reactor de tanque agitado Determinacin de la velocidad especfica
Biostat B. Braun de 2 L de capacidad total, que de consumo de oxgeno (QO2)
dispone de un agitador mecnico de paletas pla-
nas inclinadas. Los cultivos se llevaron a cabo Para la determinacin del QO2 del hongo Gano-
empleando el mismo medio de cultivo del in- derma lucidum en el reactor de tanque agitado
culo, a una temperatura de 30 C, 300 rpm. y una (ver figura 3), se increment la agitacin y la ai-
aireacin de 1,6 vvm. reacin del cultivo con el propsito de aumentar
el nivel de oxgeno disuelto (OD) en el medio,
hasta alcanzar un 80% de saturacin. Posterior-

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Determinacin de la velocidad especfica de consumo de oxgeno

mente, se suspendi la aireacin y se registr el cin de OD vs. tiempo se ajustaron a una lnea
descenso en la concentracin de OD en el tiem- recta y la pendiente obtenida es el valor del QO2X
po. En esta etapa la velocidad de descenso en la sin corregir. Para determinar el QO2 teniendo en
concentracin de OD es igual a la velocidad de cuenta el tiempo de respuesta del electrodo, las
consumo de oxgeno por las clulas del hongo, de concentraciones de OD medidas se corrigieron
modo que la ecuacin (1) se simplific a: empleando la ecuacin (11). A partir de la grfica

de E(t) vs. se encontr el parme-


(12)
tro V que corresponde a la pendiente de la lnea y
Los ensayos y la medicin de la biomasa se rea-
lizaron por triplicado. Los valores de concentra- a partir de la cual se calcul el valor de QO2.

Figura 3 Variacin de la concentracin de OD en un cultivo de Ganoderma lucidum durante la


determinacin del QO2

Resultados y Discusin
Tiempo de respuesta del electrodo

La figura 4 muestra la respuesta del electrodo


de OD al transferirse desde una solucin exen-
ta de oxgeno a una saturada. El tiempo de res-
puesta se determin como el tiempo necesario
para alcanzar el 63% del valor final de la medi-
da [3], que correspondi a 18,8 0,03 s. Este
valor servir para realizar la correccin de los
valores de QO2 por retraso en la respuesta del
electrodo determinado de acuerdo con la ecua-
cin (11).
Figura 4 Curva de tiempo de respuesta del
electrodo de oxgeno cuando es sumergido en
agua destilada saturada con aire a 30 C

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Rev. Fac. Ing. Univ. Antioquia N. 43. Marzo, 2008

Velocidad especfica de consumo de tran los valores corregidos por tiempo de respues-
oxgeno (QO2) ta del electrodo.
En la figura 5 se presentan los valores de OD en La siguiente es una muestra del clculo del QO2, a
funcin del tiempo obtenidos para uno de los tres partir de la pendiente de las lneas de la figura 3,
ensayos realizados en la determinacin del QO2 sin considerar el tiempo de respuesta del electro-
en el reactor de tanque agitado. Tambin se mues- do e incluyendo dicho parmetro.

QO2 sin considerar el tiempo de respuesta del electrodo

QO2 considerando el tiempo de respuesta del electrodo

,entonces

El promedio de los 3 valores de QO2 obtenidos


sin considerar el tiempo de respuesta del electro-
do y considerando este parmetro fue de 0,345
mmol O2(g biomasa.h)-1 0,0171 y 0,383 mmol
O2(g biomasa.h)-1 0,025 respectivamente. Estos
resultados muestran una diferencia de un 9,9%
entre los valores de QO2. Al realizar la prueba t-
student tomando como hiptesis de partida que
no hay diferencia entre medias para una proba-
bilidad del 95%, se obtuvo un valor de P=0,5501
(P>0,05), que indica que la hiptesis es vlida.
Por tanto, no hay diferencia estadstica significa-
tiva entre el valor de QO2 determinado conside-
rando tiempo de respuesta del electrodo de oxge-
Figura 5 Variacin de la concentracin de OD
Figura 5 Variacin de la concentracin de OD en un cultivonodey G.
el lucidum
obtenidocuando se
sin considerar dicho parmetro.
en un cultivo de Ganoderma lucidum cuando se
Asumiendo un tiempo de respuesta del electrodo
suspende
suspende el suministro
el suministro de oxgeno.
de oxgeno. (n) Valores
() Valores de OD experimentales,
superior al () Valores
valor de
determinado experimentalmen-
de OD experimentales, () Valores de OD
te, se encontr que para un tiempo de respuesta
corregidos por tiempo de respuesta del electrodo 1 kt
OD corregidos por tiempo -kt
de respuesta del electrodo donde t = t (1()
del electrodo e de . La s existir una diferen-
) 112,8
donde t = t - 1/k (1 - e ). La concentracin de k
cia significativa entre los valores de QO2 con un
biomasa seca en el momento de la medicin fue
concentracin
de 8,93 g.L-1de biomasa seca en el momento de la medicinvalor
0,57. fue dede8,93
P=0,0396 (P<0,05), esto quiere decir que
g.L-1 0,57.
para electrodos con un elevado, se requerir
considerarlo en la determinacin del QO2.

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Determinacin de la velocidad especfica de consumo de oxgeno

Conclusiones 4. L. F. Muoz, J. C. Quintero. Determinacin del


coeficiente de transferencia de oxgeno en la
fermentacin con Bacillus thuringiensis. Tesis de
La metodologa derivada para la determinacin
pregrado. Ingeniera Qumica. Universidad Nacional
del QO2 considerando el tiempo de respuesta del de Colombia, Bogot. 1993. pp. 103.
electrodo de oxgeno se aplic a la determinacin
del QO2 para el cultivo del hongo Ganoderma lu- 5. M. L. Araujo, R. P. Oliveira, R. C. Giordano and C.
O. Hokka. Comparative studies on Cephalosporin C
cidum. Los valores de QO2 obtenidos al incluir el production process with free and immobilized cells of
tiempo de respuesta del electrodo de oxgeno no Cephalosporium acremonium ATCC 48272. Chem.
fueron estadsticamente diferentes, debido al bajo Eng. Science, 14th ISCRE. Vol. 51. 1996. pp. 2835-
tiempo de respuesta del electrodo. Por tanto, para 2840.
el caso ilustrado empleando un electrodo con un 6. E. Gmez, V. E. Santos, A. Alcon, A. B. Martn, F.
de 18,8 s, no se requiere incluir este parmetro G. Ochoa. Oxygen-Uptake and Mass-Transfer Rates
en la determinacin del QO2. on the Growth of Pseudomonas putida CECT5279:
Influence on Biodesulfurization (BDS) capability
Se encontr que si el electrodo de OD tuviera un Pseudomonas putida. Energy & Fuels. Vol. 20.
seis veces superior al real, se requerira incluir- 2006. pp. 1565-1571.
lo en la determinacin del QO2. 7. K. D. Rane, K. A. Sims. Oxygen uptake and citric acid
production by Candida lipolytica Y 1095. Biotechnology
Referencias and Bioengineering. Vol. 43. 1994.pp.131-137.

1. R. Scriban. Biotecnologa. Mxico. 2.a ed. El Manual 8. A. C. Badino Jr., M. C. R Facciotti, W. Schmidell.
moderno. 1985. pp. 170-183. Improving KLa determination in fungal fermentation,
taking into account electrode response time. Journal
2. R. Quintero. Ingeniera bioqumica: Teora y Chemical Technology and Biotechnology. Vol. 75.
aplicaciones. 1.a ed. Mxico. Ed. Alhambra Mexicana, 2000. pp. 469-474.
S.A. Vol. 1981. pp. 288-291.
9. X.Yang, Z. Mao, S. Yang. An improved method
3. P. M. Doran. Principios de Ingeniera de los for determination of the volumetric oxygen transfer
Bioprocesos. 1.a ed. Zaragoza (Espaa). Ed. Acribia. coefficient in fermentation process. Biotechnology
1995. pp. 207. and Bioengineering. Vol. 31. 1988. pp. 1006-1009.

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